CN114288301A - Dtq在制备急性心肌梗死治疗药物中的用途及相关产品 - Google Patents

Abstract

本发明的提供DTQ在制备急性心肌梗死治疗产品中的用途，其中，DTQ的结构式如式(I)所示：

Description

DTQ在制备急性心肌梗死治疗药物中的用途及相关产品

技术领域

本发明属于生物医药研究领域，具体涉及DTQ在制备急性心肌梗死治疗药物中的用途及相关产品。

背景技术

急性心肌梗死是指心脏冠状动脉严重狭窄或者梗阻后血流供应不足，使得心肌细胞持续性缺血缺氧而发生坏死，是临床上常见的急危重症，以发病突然，常并发心律失常、心力衰竭等症，严重危及生命。据2018年《中国心血管病报告2018》报道：我国心血管病患病率处于不断上升阶段，死亡率居首位，且逐年呈上升趋势，防控形势十分严峻。我国每年约数百万患者死于急性心肌梗死，被视为“人类健康的第一杀手”，严重危害人类健康。

近年来，随着心脏介入手术、溶栓治疗等广泛开展，有效地挽救了大量急性心肌梗死患者，但仍有许多患者由于多种原因未能及时进行血运重建，使得心肌细胞发生不可逆的坏死，心脏室壁厚度、形状和心肌结构改变等心室重构的发生，最终导致血流动力学异常，左室收缩功能降低，并最终导致心力衰竭。因此，寻找更加安全、有效的防治急性心肌梗死的策略具有重要意义。

急性心肌梗死发生率高、死亡率高，严重危害人类健康，DTQ对急性心肌梗死等心血管疾病的影响及机制尚未见相关报道。

发明内容

为此，本发明在筛选大量化合物对急性心肌梗死的研究过程中，发现化合物DTQ可显著缓解急性心肌梗死等作用。

为了克服现有技术中所存在的问题，本发明的目的在于提供DTQ在制备急性心肌梗死治疗药物中的用途及相关产品。

为了实现上述目的以及其他相关目的，本发明采用如下技术方案：

本发明的第一方面提供DTQ在制备急性心肌梗死治疗产品中的用途，其中，DTQ的结构式如式(I)所示：

本发明第二方面提供DTQ在制备具有以下一项或多项症状治疗产品中的用途：

(1)心脏指数升高；

(2)心肌细胞凋亡；

(3)心脏组织损伤；

(4)急性心肌梗死所致的心脏功能降低；

其中，DTQ的结构式如式(I)所示：

本发明第三方面提供一种药物，所述药物中包括DTQ；所述药物具有以下一项或多项治疗功能：

(1)急性心肌梗死；

(2)心脏指数升高；

(3)心肌细胞凋亡；

(4)心脏组织损伤；

(5)急性心肌梗死所致的心脏功能降低；

其中，DTQ的结构式如式(I)所示：

与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：

本发明首次发现DTQ可以应用在制备治疗急性心肌梗死或急性心肌梗死引起的心脏病变的药物中，治疗效果良好，为治疗急性心肌梗死或急性心肌梗死相关疾病提供了新的治疗途径。

附图说明

图1A DTQ干预对急性心肌梗死小鼠心脏功能的影响的超声图(箭头：左室舒张/收缩末期内径)

图1B DTQ干预对急性心肌梗死小鼠心脏功能的影响的统计分析图(LVEF％)

图1C DTQ干预对急性心肌梗死小鼠心脏功能的影响的统计分析图(LVFS％)

图2A DTQ干预对急性心肌梗死小鼠心脏形态的影响

图2B DTQ干预对急性心肌梗死小鼠心脏指数的影响

图3DTQ干预对急性心肌梗死小鼠心脏病理形态的影响

图4A DTQ干预对急性心肌梗死小鼠心肌细胞凋亡的影响

图4B DTQ干预对急性心肌梗死小鼠心肌细胞凋亡的影响的统计分析图

具体实施方式

在进一步描述本发明具体实施方式之前，应理解，本发明的保护范围不局限于下述特定的具体实施方案；还应当理解，本发明实施例中使用的术语是为了描述特定的具体实施方案，而不是为了限制本发明的保护范围。下列实施例中未注明具体条件的试验方法，通常按照常规条件，或者按照各制造商所建议的条件。

当实施例给出数值范围时，应理解，除非本发明另有说明，每个数值范围的两个端点以及两个端点之间任何一个数值均可选用。除非另外定义，本发明中使用的所有技术和科学术语与本技术领域技术人员通常理解的意义相同。除实施例中使用的具体方法、设备、材料外，根据本技术领域的技术人员对现有技术的掌握及本发明的记载，还可以使用与本发明实施例中所述的方法、设备、材料相似或等同的现有技术的任何方法、设备和材料来实现本发明。

除非另外说明，本发明中所公开的实验方法、检测方法、制备方法均采用本技术领域常规的分子生物学、生物化学、染色质结构和分析、分析化学、细胞培养、重组DNA技术及相关领域的常规技术。

本发明一实施例提供DTQ在制备急性心肌梗死治疗产品中的用途，其中，

DTQ的结构式如式(I)所示：

其中，DTQ为产品的唯一有效成分或有效成分之一。

在一种实施方式中，所述急性心肌梗死治疗产品为急性心肌梗死治疗药物。

可选的，所述急性心肌梗死治疗药物还包括药学上可接受的载体或辅料。

可选的，所述药物为注射用药物或口服药物。

本发明一实施例提供DTQ在制备具有以下一项或多项症状治疗产品中的用途：

(1)心脏指数升高；

(2)心肌细胞凋亡；

(3)心脏组织损伤；

(4)急性心肌梗死所致的心脏功能降低。

治疗心脏指数升高是指使作用对象的心脏指数接近或达到健康心脏的速度。例如，以健康心脏为基准，所述产品可以使作用对象的心脏指数降低；不超过健康心脏的130％，120％，110％，100％。

治疗心肌细胞凋亡是指使作用对象心肌细胞的凋亡数量降低到健康心肌细胞的水平。例如，以健康心肌细胞为基准，所述产品可以使作用对象的心肌细胞的凋亡数量降低；不超过健康心肌细胞凋亡数量的120％，110％，100％。

治疗心脏组织损伤是指使作用对象的心脏组织形态接近或达到健康心脏水平。所述心脏组织形态包括心脏细胞排列紊乱度，心肌间隙宽度，心脏组织中炎性细胞浸润数量。例如，以健康心脏组织为基准，所述产品可以使作用对象的心脏细胞排列紊乱度、心肌间隙宽度、心脏组织中炎性细胞浸润数量降低；不超过健康心脏组织的130％，120％，110％，100％。

治疗急性心肌梗死所致的心脏功能降低是指提高心脏射血分数和左室缩短分数，所述提高心脏射血分数和左室缩短分数是指将作用对象的急性心肌梗死所致的降低的心脏射血分数和左室缩短分数提到到接近或达到健康心脏的分数。例如，以健康心脏为基准，所述产品可以使作用对象的心脏的心脏射血分数和左室缩短分数恢复到健康心脏的至少70％，80％，90％或100％。

其中，DTQ为产品的唯一有效成分或有效成分之一。

在一种实施方式中，所述产品为急性心肌梗死治疗药物。

可选的，所述急性心肌梗死治疗药物还包括药学上可接受的载体或辅料。

可选的，所述药物为注射用药物或口服药物。

本发明一实施例提供一种药物，其特征在于，所述药物中包括DTQ；

所述药物具有以下一项或多项治疗功能：

(1)急性心肌梗死；

(2)心脏指数升高；

(3)心肌细胞凋亡；

(4)心脏组织损伤；

(5)急性心肌梗死所致的心脏功能降低。

DTQ为药物的唯一有效成分或有效成分之一。

可选的，所述心脏指数升高、心肌细胞凋亡、心脏组织损伤是由急性心肌梗死所致。

可选的，所述药物还包括药学上可接受的载体或辅料。

可选的，所述药物为注射用药物或口服药物。

“药学上可接受的”是指当分子本体和组合物适当地给予动物或人时，它们不会产生不利的、过敏的或其它不良反应。

“药学上可接受的载体或辅料”应当与所述有效成分相容，即能与其共混而不会在通常情况下大幅度降低药物的效果。可作为药学上可接受的载体或辅料的一些物质的具体例子是糖类，如乳糖、葡萄糖和蔗糖；淀粉，如玉米淀粉和土豆淀粉；纤维素及其衍生物，如甲基纤维素钠、乙基纤维素和甲基纤维素；西黄蓍胶粉末；麦芽；明胶；滑石；固体润滑剂，如硬脂酸和硬脂酸镁；硫酸钙；植物油，如花生油、棉籽油、芝麻油、橄榄油、玉米油和可可油；多元醇，如丙二醇、甘油、山梨糖醇、甘露糖醇和聚乙二醇；海藻酸；乳化剂，如Tween；润湿剂，如月桂基硫酸钠；着色剂；调味剂；压片剂、稳定剂；抗氧化剂；防腐剂；无热原水；等渗盐溶液；和磷酸盐缓冲液等。这些物质根据需要用于帮助配方的稳定性或有助于提高活性或它的生物有效性或在口服的情况下产生可接受的口感或气味。

本发明中，除非特别说明，药物剂型并无特别限定，可以被制成针剂、口服液、片剂、胶囊、滴丸、喷剂等剂型，可通过常规方法进行制备。药物剂型的选择应与给药方式相匹配。

进一步的，所述药物用于治疗对象体内急性心肌梗死时，需要将有效剂量的所述的药物施用于对象中。采用该方法，所述急性心肌梗死被抑制。

对象可以为哺乳动物。所述哺乳动物优选为啮齿目动物、偶蹄目动物、奇蹄目动物、兔形目动物、灵长目动物等。所述灵长目动物优选为猴、猿或人。

实施例1

1材料

1.1实验动物

选用SPF级雄性C57BL/6小鼠采购于上海斯莱克实验动物有限公司，许可证号：SCKY(沪)2017-0005。实验动物饲养于福建中医药大学实验动物中心SPF级实验室，给予小鼠自由饮水、进食，室温23±1℃，相对湿度50-60％左右，12h光照/黑暗循环，小鼠在适应性喂养5-7天后用于实验。所有动物实验在最新《实验动物治疗指南》指导下进行。

1.2实验药物及主要试剂

DTQ(Targetmol，F477-2035)；伊红染色液(北京索莱宝科技有限公司，g1100)；苏木素染色液(北京索莱宝科技有限公司，g1140)；异氟烷(深圳市瑞沃德生命科技有限公司，970-00026-00)；多聚甲醛(福州飞净生物科技有限公司LA0427)，无水乙醇(西陇科学股份有限公司，1280340101602)，二甲苯(西陇科学股份有限公司，1430030101600),TUNEL(博士德生物，MK1025)等化学试剂。

1.3实验主要仪器

移液器(美国瑞宁公司)；电子天平秤(上海奥豪斯仪器有限公司)；小动物超声成像系统Vevo2100(富士胶片投资有限公司)；吸入式小动物麻醉机(深圳市瑞沃德生命科技有限公司)；病理切片机(德国莱卡公司)；石蜡包埋机(湖北孝感亚光医用电子技术有限公司)。

2实验方法

2.1药物配制

称取适量DTQ粉末，根据小鼠平均体重按照按照10mg/kg/d的剂量溶解于相应体积的蒸馏水，配制后置于超声仪保持低温超声1h左右，储存于4℃冰箱备用。

2.2动物分组及模型构建

将雄性C57BL/6小鼠，按体重随机分为三组：Sham组(n＝6)，AMI组(n＝6)，AMI+DTQ组(n＝6)。手术前一天用脱毛膏给实验小鼠胸部脱毛。手术当天，用异氟烷将小鼠麻醉后，将小鼠采取仰卧位，碘伏消毒小鼠胸部3次。采用灭菌手术刀在小鼠胸骨左侧旁纵切约2cm，在左侧第三、四肋骨间钝性分开肌肉，止血钳撑开第三、四肋骨，迅速挤出心脏后，6-0带线缝合针结扎冠状动脉左前降支，结扎位置为左心耳下1mm，进针深度0.5mm为准，术中以结扎部位以下心梗区心尖部位变为苍白色，判断是否结扎成功。缝合伤口后用碘伏在皮肤切口处消毒3次。最后将小鼠置于37℃取暖灯下，待小鼠苏醒后放入分组好的饲养笼中。Sham组小鼠实施开胸手术，用缝合针穿过小鼠冠状动脉左前降支但不结扎。术后第二天给予AMI+DTQ组10mg/kg/d的DTQ灌胃，Sham组和AMI组给予等体积的蒸馏水灌胃，每天一次，连续干预14天。

2.3*+,-./0*12345

通过Vevo 2100小动物超声系统(VisualSonics)检测小鼠的心脏功能。提前将小鼠胸部毛发用脱毛膏脱毛处理，用流量为1.5％的异氟烷麻醉小鼠后，将小鼠仰卧放置生理信息监测台上，期间小鼠保持恒定流速的异氟烷吸入，并保持小鼠心率在450-650bp之间。将耦合剂涂抹于小鼠上胸部，分别在B-Mode和M-Mode模式下记录小鼠的心脏功能，再取左室短轴切面，同样在B-Mode和M-Mode模式下分别记录小鼠的心脏功能。之后采用VevoStrain Software(Vevo LAB 1.7.1)按照软件说明书计算各组小鼠左心室射血分数(Ejection fraction，EF)和左心室短轴收缩率(Fractional shortening，FS)值。

2.4HE染色

小鼠通过异氟烷麻醉后迅速脱颈处死，取出心脏沿梗死区域将心脏分成两部分，梗死区置于4％多聚甲醛中固定48h后，将心脏放在包埋盒中按照浓度梯度的乙醇脱水，经二甲苯透明后浸入石蜡中蜡化，最后在包埋机上将心脏组织包埋成蜡块。将心脏组织切成0.4μm的薄片，置于60℃烤箱中烤片1h。烤片结束后，将载玻片依次通过二甲苯和浓度梯度乙醇脱蜡，切片经苏木素溶液染色后再在伊红溶液中染色。样本晾干后用中性树胶封片，在显微镜下观察心脏组织的病理变化。

2.5 TUNEL染色

取小鼠心脏组织，置于4％多聚甲醛中固定24h后，采用梯度乙醇进行脱水处理，再将组织块置于二甲苯中透明，经浸腊之后对组织进行石蜡包埋。将心脏组织切成0.4μm的薄片，置于60℃烤箱中烤片1h。烤片结束后，将载玻片依次通过二甲苯和浓度梯度乙醇脱蜡后，用无尘纸吸净水，滴加3％H₂O₂，室温处理10min，用蒸馏水清洗2min，共3次。滴加0.01MTBS配置的Proteinase K(1:200)在37℃消化5-10min，TBS清洗2min，共3次。滴加20μl标记缓冲液(含1μl TdT和1μl DIG-d-UTP)，置于湿盒上放入37℃标记2h。用0.01M TBS清洗2min，共3次。滴加30μl封闭液，室温封闭30min。按照1:100稀释生物素化抗地高辛抗体，混匀后滴加50μl稀释后的抗体，置于湿盒上，放入37℃反应30min，结束后用0.01M TBS清洗2min，共3次。按照1:100的比例稀释SABC，混匀后滴加50μl稀释后的抗体，置于湿盒上，放入37℃反应30min，结束后用0.01M TBS清洗5min，共4次。向1ml蒸馏水中滴加DAB试剂盒中A、B、C试剂各一滴，混匀后滴加至标本上，显色10-30min，水洗。显色后用苏木素轻度复染，用0.01M TBS清洗后，用蒸馏水清洗，随后进行脱水封片，采用Image J对梗死心肌细胞凋亡数量进行统计分析。

2.6统计学分析

实验中所有的数据分析均在SPSS 26中进行，首先采用Shapiro-Wilk检验对各组数据进行正态性检测，对正态分布且方差齐性的数据，采用ANOVA多组比较，对非正态分布或者方差不齐的数据采用Kruskal-Wallis检验，所有分析均以P<0.05被认为有统计学差异。

3实验结果

3.1 DTQ干预对急性心肌梗死小鼠心脏功能的影响

本研究采用小动物心脏超声检测各组小鼠心脏功能改变。结果表明，对小鼠冠状动脉左前降支进行结扎14天后，与Sham组相比，AMI组小鼠EF和FS显著降低(图1A-C，P<0.05)。DTQ干预14天后，与AMI组相比，AMI+DTQ组小鼠EF和FS显著升高(图1A-C，P<0.05)，提示DTQ干预可改善急性心肌梗死小鼠心脏功能的降低。

3.2 DTQ干预对急性心肌梗死小鼠心脏指数的影响

观察各组小鼠心脏形态发现与Sham组相比，AMI组小鼠的心脏体积增大、质地变硬，心脏指数显著升高(图2A-B)。而在DTQ连续灌胃干预14天后，与AMI组相比，AMI+DTQ组小鼠的心脏体积减小，质地相对较软，心脏指数显著下降(图2A-B，P<0.05)，表明DTQ干预能够降低急性心肌梗死小鼠心脏指数。

3.3 DTQ干预对急性心肌梗死小鼠心脏组织形态学的影响

进一步采用HE染色观察各组小鼠心脏形态学改变，实验结果如图3显示，与Sham组相比，AMI组小鼠心肌细胞排列紊乱，心肌间隙增宽，心脏组织中炎性细胞浸润增多，提示冠状动脉左前降支结扎导致小鼠心脏组织形态学改变。DTQ干预14天后，与AMI组相比，AMI+DTQ组心肌细胞排列紊乱和心肌间隙增宽均有明显改善，心脏组织中炎性细胞浸润减少，表明DTQ干预可显著改善急性心肌梗死小鼠组织形态学的损伤。

3.4 DTQ干预对急性心肌梗死小鼠心肌细胞凋亡的影响

为进一步探讨DTQ干预是否能够缓解急性心肌梗死小鼠心肌细胞凋亡，改善心脏功能。本研究采用TUNEL染色检测各组小鼠心肌细胞凋亡情况。结果表明，与Sham组相比，AMI组小鼠心肌细胞凋亡显著增多(图4A)，TUNEL分析结果如图4B所示，AMI组中小鼠心脏组织的凋亡细胞数目百分比显著升高而DTQ干预后心脏组织中的凋亡细胞数量明显降低(P<0.05)。表明DTQ干预显著降低急性心肌梗死诱导的心肌细胞凋亡。

结论：

DTQ干预能显著缓解急性心肌梗死小鼠的心脏功能降低、心肌组织病理改变及心肌细胞凋亡。

Claims (9)

1.DTQ在制备急性心肌梗死治疗产品中的用途，其中，DTQ的结构式如式(I)所示：

2.如权利要求1所述的用途，其特征在于，DTQ为产品的唯一有效成分或有效成分之一。

3.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述急性心肌梗死治疗产品为急性心肌梗死治疗药物。

4.如权利要求3所述的用途，其特征在于，所述急性心肌梗死治疗药物还包括药学上可接受的载体或辅料。

5.如权利要求3所述的用途，其特征在于，所述药物为注射用药物或口服药物。

6.DTQ在制备具有以下一项或多项症状治疗产品中的用途：

(1)心脏指数升高；

(2)心肌细胞凋亡；

(3)心脏组织损伤；

(4)急性心肌梗死所致的心脏功能降低；

其中，DTQ的结构式如式(I)所示：

7.如权利要求6所述的用途，其特征在于，所述心脏指数升高、心肌细胞凋亡和心脏组织损伤是由急性心肌梗死所致。

8.一种药物，其特征在于，所述药物中包括DTQ；所述药物具有以下一项或多项治疗功能：

(1)急性心肌梗死；

(2)心脏指数升高；

(3)心肌细胞凋亡；

(4)心脏组织损伤；

(5)急性心肌梗死所致的心脏功能降低；

其中，DTQ的结构式如式(I)所示：

9.如权利要求8所述的药物，其特征在于，还包括以下特征中的一项或多项：

1)DTQ为药物的唯一有效成分或有效成分之一；

2)所述心脏指数升高，心肌细胞凋亡和心脏组织损伤是由急性心肌梗死所致；

3)所述药物还包括药学上可接受的载体或辅料；

4)所述药物为注射用药物或口服药物。

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