CN1142852A - 利用改性α-淀粉酶来改善脱浆及漂白综合法中的氧化稳定性 - Google Patents

利用改性α-淀粉酶来改善脱浆及漂白综合法中的氧化稳定性 Download PDF

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Abstract

一种同时脱浆和漂白含淀粉或淀粉衍生物的有浆织物的方法，该方法包括用漂白组合物和氧化稳定性α-淀粉酶来处理织物。

Description

利用改性α——淀粉酶来改善脱浆及漂白综合法中的氧化稳定性
                      发明领域
本发明涉及对含有淀粉或淀粉衍生物的织物同时进行脱浆和漂白处理的方法，以及氧化稳定性α——淀粉酶在所述方法中的应用。
                      发明背景
在纺织加工工业中，α——淀粉酶传统地被用作脱浆方法中的辅助剂，以促进作为纺织过程中纺线上的保护层的含淀粉浆糊的去除。
彻底去除纺织后的浆糊涂层对于确保后续工艺中的最佳结果是重要的，在后续工艺中织物通常被酸洗、漂白和染色。优选进行酶促淀粉分解，因为其对纤维材料没有任何有害作用。
为了降低加工成本和增加工厂产量，有时脱浆加工处理也结合着酸洗和漂白步骤。在这样的情况下，一般用非酶促辅助剂(如碱或氧化剂)来分解淀粉，因为传统的α——淀粉酶与高pH值水平及漂白剂并不非常相容。另外，过量的α——淀粉酶(选择性地为保护形式)不得不用于这种综合方法。对淀粉浆糊的非酶促分解不会造成某些纤维的损害，因为使用了更为有效的化学试剂。
因此，极需要使用在高pH下对氧化(漂白)剂具有改良抗性或相容性的α——淀粉酶，以便能在省时和不污染环境的同时脱浆和漂白方法中保持酶促浆糊分解的优点。
美国专利4,643,736披露了在单一操作中实施的脱浆和漂白处理方法，其中亚氯酸钠与强碱、表面活化剂、活化剂和淀粉分解酶合用。不过，从环境的角度看，使用亚氯酸钠是不可取的。
EP119,920披露了同时脱浆和漂白处理的方法，其中，在含有过氧化氢、螯合剂、淀粉酶和表面活性剂的浴中，用四硼酸钠+水合物作为缓冲剂。
在上面专利公开中所述的两种方法中都使用了相对大量的α——淀粉酶，或许是为了补偿所用的α——淀粉酶的低氧化稳定性。
PCT/DK93/00230披露了具有改善氧化稳定性的α——淀粉酶突变体。该突变体可用于脱浆处理，但其在脱浆和漂白综合法中的应用却未曾提到过。
                      本发明简述
本发明简述氧化稳定性α——淀粉酶的首次利用使得对含淀粉强物进行脱浆和漂白综合酶处理成为可能。因此，本发明的第一方面涉及一种对含淀粉或淀粉衍生物的有浆织物同时脱浆和漂白的方法，该方法包括用漂白组合物和氧化稳定性α——淀粉酶处理织物。
在上述方法中使用氧化稳定性α——淀粉酶构成了一种对环境无害的，替代目前用于脱浆和漂白的非酶促碱或氧化剂的替代物。另外，氧化稳定性α——淀粉酶的用量可与目前脱浆方法中α——淀粉酶的用量相应。
在本文中，术语“氧化稳定性”意指在本发明的综合方法的普遍条件下，氧化稳定性α——淀粉酶作用要胜于可从申请人那里商购的地衣形芽孢杆菌α——淀粉酶，其商品名为Termamyl的供应商。Termamyl目前被认为对脱浆是极为有用的，但由于对通常用于漂白处理的漂白剂的相对低的耐受性，它不太适合于综合法。例如，较好的效能可按下文中题为“氧化稳定性的确定”一节中所述的方法测定。
可按常规方式来理解术语“脱浆”，即从织物中去除浆糊；术语“酸洗”即去除非纤维素物质，如油脂、蜡、蛋白质、半纤维素物质、果胶、灰分、污物和油；术语“漂白”即漂白织物纤维中的染色杂质。
术语“同时”意指以单一操作进行脱浆和漂白处理。其具有明显的优点，即冲洗和在分别实施的脱浆和漂白步骤之间正常进行的其它处理已不再需要。因而，对每种方法所需要的水和能量以及所需要的不同设备大量减少了。另外，根据所处理的织物类型以及织物上所存在的杂质的性质，可在本发明的方法实施期间获得酸洗效果。因此，在这样的情况下，不必进行额外的酸洗处理。
术语“含淀粉或淀粉衍生物的织物”意指含淀粉或淀粉衍生物的织物的任何类型的织物，特别是由含纤维素物质纺制的织物。这种织物通常是由棉花、粘胶、亚麻等制成。织物上所存在的淀粉或淀粉衍生物的织物的主要部分通常是浆糊，纱线(通常为经纱)在纺织前已用浆糊涂覆。在本文中，术语“织物”亦意指包括衣物和其它类型的加工织物。
本发明的第二方面涉及同时脱浆和漂白方法中使用的组合物，该组合物包括氧化稳定性α——淀粉酶，并结合选自润湿剂、分散剂、螯合剂和乳化剂的至少一种另外的组分。
本发明的最后一个方面涉及氧化稳定性α——淀粉酶在同时脱浆和漂白方法中的应用。
                      本发明详述氧化稳定性α——淀粉酶
本发明方法中所使用的α——淀粉酶一个优选实例为这样一种，其可以通过以不同于Cys或Met的任何氨基酸残基来取代母体α——淀粉酶中一个或多个甲硫氨酸而从母体α——淀粉酶中制备出。因此，依据本发明，取代甲硫氨酸残基的氨基酸残基如下：Ala、Arg、Asn、Asp、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr和Val。
人们惊奇地发现，如上所述制备的突变型α——淀粉酶比现有的突变型淀粉酶在氧化剂的存在下表现出更强的活性水平和更好的稳定性。
本发明方法中使用的氧化稳定性α——淀粉酶优选为微生物来源的。特别优选的α——淀粉酶可衍生于芽孢杆菌属菌株。这样，芽孢杆菌属α——淀粉酶本身就表明出高热稳定性，经过上述突变，该突变体可表现出更佳的稳定性，特别是在氧化剂的存在下。
在本文中，术语“可衍生的”不仅意指探讨中的微生物菌株产生的α——淀粉酶，而且指由分离自该菌株的DNA序列编码的并在用所述DNA序列转化的宿主生物体中产生的α——淀粉酶。另外，该术语还指由合成和/或CDNA来源的DNA序列编码的α——淀粉酶，该淀粉酶具有探讨中的α——淀粉酶的鉴别特点。
适用于本目的的母体芽孢杆菌属α——淀粉酶的实例为可衍生于地衣形芽孢杆菌菌株、解淀粉芽孢杆菌菌株或嗜热脂肪芽孢杆菌菌株的α——淀粉酶。
适用于本目的的地衣形芽孢杆菌的氨基酸序列从SEQ ID NO.2明显可见(相应的DNA序列如SEO ID NO.1所示)。G.L.Gray等人，J.Bacteriol.166，635-643，1986，FR2665178和EP410498披露了所述α——淀粉酶的变体。地衣形芽孢杆菌α——淀粉酶的甲硫氨酸编号为：8，15，197，256，304，366和438。
适用于本目的的解淀粉芽孢杆菌的氨基酸序列从SEQ ID No.4明显可见(相应的DNA序列如SEQ ID No.3所示。
Tekkinen等人，J.Biol.Chem.258，1007-1013，1983披露了所述α——淀粉酶的变体。这些解淀粉芽孢杆菌α——淀粉酶的甲硫氨酸编号为：b，197，256，304，366和438。
用于本目的的嗜热脂肪芽孢杆菌α——淀粉酶的氨基酸序列从SEQ ID NO.6明显可见(对应的DNA序列如SEQ ID No.5所示。G.L.GRAY等人，J.Bacferiol.166，635-643，1986披露了所述α——淀粉酶的变体。这些嗜热脂肪芽孢杆菌α——淀粉酶的甲硫氨酸编号为：8，9，97，200，206，284，307，311，316和437。
另外，也可以使用真菌来源的母体α——淀粉酶如可衍生于真菌曲霉属菌株的α——淀粉酶。例如，母体α——淀粉酶可衍生于真菌米曲霉或黑曲霉的菌株。这些α——淀粉酶都得到充分的定性分析，并对其整个氨基酸序列做过描述。
米曲霉α——淀粉酶(商业上以FUNGAMYL，销售由NovoNordisk A/S生产)的氨基酸序列如SEQ ID No.7所示。黑曲霉α——淀粉酶的氨基酸序列如DK 512 6/87所示。
在优选的实施方案中，α——淀粉酶选自地衣形芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、嗜热脂肪芽孢杆菌、米曲霉和黑曲霉α——淀粉酶，或者为任何所述母体α——淀粉酶的功能类似物，其，
i)包含与母体α——淀粉酶氨基酸序列至少60％同源的氨基酸序列，
ii)与抗母体α——淀粉酶的抗体反应，和/或，
iii)由可与相同于编码母体α——淀粉酶的DNA序列的探针杂交的DNA序列编码。
类似物的特性i)意指表明从第二序列推导出第一序列的类似物与母体α——淀粉酶之间的同一性程度。特别是，如果各个氨基酸序列的比较揭示出同一性大于60％(如高于70％、80％、85％、90％或甚至95％)，就可以认为多肽是与母体α——淀粉酶同源的。序列比较可通过已知的规则系统实施，如Lipman和Pearson(1985)所描述过的。
同源的α——淀粉酶可以是基因工程α——淀粉酶，例如为了改善一种或多种特性(如热稳定性、酸/碱稳定性、温度或pH最佳值等)所制备的。
母体α——淀粉酶类似物的附加特性ii)和iii)可如下确定：
可利用抗或与母体α——淀粉酶的至少一个抗原决定基反应的抗体来测定特性ii)，即免疫交叉反应性。抗体既可以是单克隆的也可以是多克隆的，可用本领域中人们熟知的方法产生，例如，用Hud-son等人(1989)所述的方法。可用本领域熟知的检测法确定免疫交叉反应性，其实例有Western Blottinp或经向免疫扩散检测法，如Hudson等人所述(1989)。在这方面，分别具有氨基酸序列SEQ IDNOs.2，4和6的地衣形芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌和嗜热脂肪芽孢杆菌α——淀粉酶之间的免疫交叉反应性已被发现。
用于表征符合如上定义的特性iii)的类似物的寡核苷酸探针，可根据母体α——淀粉酶的全部或部分核苷酸或氨基酸序列适当地制备。可在能使DNA序列杂交的任何适宜条件下进行杂交事应。例如，这类条件是在特定条件下的杂交，如涉及在5XSSC中预浸渍，然后在20％的甲酰胺、5X Denhardt溶液，50mM的磷酸钠(pH6.8)，和50Mg的变性声处理牛胸腺DNA溶液中进行1小时的预杂交，温度为大约40℃，随后在同样溶液中进行杂交，并补充100μM ATP，时间18小时，温度为大约40℃，或者采用如Sambrook等人(1989)描述的其它方法。
含SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列的地衣形芽孢杆菌α——淀粉酶类似物的具体实例为Termamyl(可得自Novo Nordisk A/S)、Optitherm和Takatherm(可得自Solvay)、Maxamyl(可得自Gist-Brocades)、Spezym AA(可得自(Genencor)和Keistase(可得自Daiwa)。
含SEQ ID NO.4所示氨基酸序列的解淀粉芽孢杆菌类似物的具体实例为BAN(可得自Novo Nordisk A/S)、Optiamyl(可得自Solvay)、Dexlo和Rapidase(可得自Gist-Brocades)、Kazuzase(一种可得自Showa Denko的α——淀粉酶和蛋白酶混合产物)。
含SEQ ID NO.6所示氨基酸序列的嗜热脂肪芽孢杆菌α——淀粉酶类似物的具体实例为Liqnozyme 280 L(可得自NovoNordisk A/S)和G-zyme995(可得自Enzyme Biosystems)。
在本发明方法的优选实施方案中，氧化稳定性α——淀粉酶是通过用Leu、Thr、Ala、Gly、Ser、Ile、Asn或Asp氨基酸残基，优选Leu、Thr、Ala或Gly氨基酸残基来取代一个或多个甲硫氨酸残基而从母体α——淀粉酶中制备出来的。
在本文中，特别感兴趣的突变体α——淀粉酶是这样一种淀粉酶，其中，地衣形芽孢杆菌α——淀粉酶中197位的甲硫氨酸残基或其它α——淀粉酶中同源位置上的甲硫氨酸残基发出了交换。α——淀粉酶同源位置或序列同源性的概念已有人解释过，如Naka-jima，R等人，1986，Appl，Microbiol.Biotechnol，23，355-360，以及Liisa Holm等人，1990，Protein Engineering3，181-191。地衣形芽孢杆菌、嗜热脂肪芽孢杆菌和解淀粉芽孢杆菌中芽孢杆菌属α——淀粉酶的序列同源性约为60％。这使得使序列对齐以便比较序列中同源位置的残基成为可能。通过对α——淀粉酶序列的这种对比，可以发现每个α——淀粉酶序列中同源残基的数目。从三维结构上看，同源位置在空间上可能处于相同位置(Greer，J.，1981，J.Mol.Biol.153，1027-1042)，因此对探讨中的酶的特异性功能具有类似作用。关于地衣形芽孢杆菌α——淀粉酶中197位，嗜热脂肪芽孢杆菌的同源位置为200和206位，而解淀粉芽孢杆菌α——淀粉酶的同源位置为197位。从实验上可以发现，这些突变体在氧化剂的存在下表现出活性水平和稳定性二者的改善。
因此，为了本发明的目的所感兴趣的另一类氧化稳定性α——淀粉酶是这样一种氧化稳定性α——淀粉酶，它是通过用上述其它氨基酸残基置换母体嗜热脂肪芽孢杆菌α——淀粉酶200及206位上的一个或两个甲硫氨酸残基或其它α——淀粉酶同源位置上的甲硫氨酸残基而制备出来的。
上述披露的突变体α——淀粉酶可依据已确立的方法进行构建，例如通过利用位点特异性诱变作用。操作条件
应该明确的是，本发明的综合方法可依据本领域已知的适当的脱浆或漂白方法来进行，例如，如Olson，E.S.”Textile wet processes，Vol.I，Noyes Publication，Park Ridge，New Jersey，USA(1983)，M.Peter und H.K Rouette，Grundlagen der Texilveredlung，DeutscheFachverlag GmbH，Frankfurt am Main，Germany(1988)所述。因此，可以选择实施本发明所使用的操作条件以适合于需要使用的特定的装置和特定类型的方法。与本发明相关联的所用方法类型的优选实例包括Jigger/winch，Pad-Roll和Pad-Steam类型。以下将详细论述这些类型。
本发明的综合方法可利用蒸汽或冷漂白原则以分批，半连续或连续方法进行。该方法的实例可包括下列步骤：
(a)在含有(最低量的)氧化稳定性α——淀粉酶和漂白剂的脱浆和漂白浴中浸渍织物，而后挤出过量的液体以维持进行反应所必需的液量(通常为干织物重的60％至120％)。
(b)对浸渍的织物进行蒸汽加工，使织物达到所需的反应温度，一般为20℃至120℃，及
(c)将织物卷起或打褶在J-Box、U-Box，地毯机器等中存放足够的时间(通常为几分钟至数小时)，以使脱浆和漂白作用发生。
如上所述，酸洗可能是实施本发明综合方法时所得到的一个固定结果。不过，对于某些类型的织物而言，对织物进行酸洗处理以获得所需质量的终产物，可能是有益的和/或必不可少的。在这样的情况下，本文公开的氧化稳定性α——淀粉酶可以在脱浆和酸洗综合方法中使用，特别是在高pH值下足够稳定的，氧化稳定性α——淀粉酶，酸洗通常在高pH值下进行。典型的是，使用足够量的氧化稳定性α——淀粉酶和强碱(如NaoH)来进行脱浆和酸洗综合方法，条件为脱浆和酸洗领域中所熟知的条件。然后，经脱浆和酸洗综合处理的织物可进行漂白处理。
一般来说，在进行综合法的装置中分别加入氧化稳定性α——淀粉酶和漂白组合物。然而，也可在综合处理实施之前，将氧化稳定性α——淀粉酶与漂白组合物迅速混合。
虽然在本发明方法中可使用任何类型的漂白剂(如亚氯酸钠、次氯酸钠和过氧化氢)，但优选使用过氧化氢类的漂白组合物，过氧化氢构成了当今可利用的最温和且对环境无害的漂白剂。通常所使用的过氧化氢为35％溶液形式，用量为每升漂白浴液1-50克，如根据所使用的方法类型用量可为5-40克/升，5-30克/升，10-30克/升或30-40克/升。
本方法实施中所需要的另外的组分一般分别加入。这类组分的实例包括稳定剂和润湿剂。稳定剂可以是稳定过氧化氢的试剂(如硅酸钠(Na2O∶SIO2)和锰盐)以控制过氧化氢的反应性。
润湿剂用来改善纤维的润湿性，以此可达到快速而均匀的脱浆和漂白效果。润湿剂优选为氧化稳定性类型的。
在本发明方法的优选实施方案中，所使用的氧化稳定性α——淀粉酶的量超过1克/升。优选量为1-20克/升，如1-10克/升，1-5克/升或1-3克/升。可以理解，所使用的α——淀粉酶量要根据探讨中的α——淀粉酶产物的配方而定。
不管用于本发明脱浆和漂白综合法的具体类型如何，综合法通常在30-100℃，如50-100℃、80-100℃、90-100℃或90-95℃和pH值为6.5-11，如9-10.8或10.0-10.8条件下进行。然而，真正的操作条件可在这些范围内有很大变化，详情见下文。
与本发明相关联的所用操作条件的优选实例包括：
一批量类型方法，例如Jigger/Winch类型方法，使用
1-5克/升氧化稳定性α——淀粉酶，
6-25克/升过氧化氢(35％)，
7-14克/升稳定剂，如硅酸钠，
0.25-5克/升润湿剂，如可得自德国Grünan的Arbyl R.
进行该方法的pH值范围为10-11(由加入NaoH得到)，温度范围为90-95℃(由蒸气加热得到)，一般为1-2小时。
半连续方法，如Pad-Roll类型方法，使用
1-5克/升氧化稳定性α——淀粉酶，
30-40克/升过氧化氢(35％)，
12-30克/升稳定剂，如硅酸钠，
0.25-5克/升润湿剂，如Arbyl R，
进行该方法的pH范围为10-11(由加入NaoH而得到)，温度范围为20-40℃，一般为12-24小时。
连续方法，如Pad-steam类型方法，使用
1-5克/升氧化稳定性α——淀粉酶，
8-25克/升过氧化氢(35％)，
5-20克/升稳定剂，如硅酸钠，
0.25-5克/升润湿剂，如Arbyl R，
进行该方法的pH值范围为10-11(由加入NaoH而得到)，温度范围为98-140℃(蒸汽加热)，优选只维持115以上温度几秒钟，操作时间一般为0.5-3分钟。
可以理解，综合方法可以在对操作条件具有充分耐受性的装置中进行。
另外，显然，除了本发明方法中所用的α——淀粉酶的氧化稳定性外，该淀粉酶应优选活性范围在pH6.5以上，如9.0以上的淀粉酶。氧化稳定性α——淀粉酶优选在pH10-10.8范围内具有高活性。本发明的组合物
尽管可加入氧化稳定性α——淀粉酶本身，但优选将其配成适当的组合物。这样，可以使用的氧化稳定性α——淀粉酶形态有颗粒，优选为无尘颗粒，液体，特别是稳定化液体，浆液，或者被保护形式。可生产出无尘颗粒，例如，如US4,106,991和US4,661,452所公开的为Novo Nordisk A/S的产品)并可选择性以本领域已知的方法进行涂覆。
比如，可按照已建立的方法通过加入多羟基化合物，如丙二醇、糖或糖醇或乙酸来稳定液体酶制剂。其它酶稳定剂也是本领域熟知的。可根据EP238,216所公开的方法制备被保护的酶。
原则上，含有氧化稳定性α——淀粉酶的组合物可包含本发明综合方法中所用的其它试剂。然而，该组合物最好不含漂白剂和其它高度氧化剂。
本发明的组合物含有至少一种选自下述基因的一种成分，润湿剂、分散剂、螯合剂和乳化剂另外的组分。适宜的润湿剂实例如上所述。乳化剂起着乳化织物上疏水性杂质的作用。分散剂起着防止被提取的杂质重新沉积在织物上的作用。螯合剂的作用是去除离子(如Ca，Mg和Fe)，该螯合剂对该方法可能具有不良作用，其优选实例包括苛性苏打(氢氧化钠)和纯碱(碳酸钠)。氧化稳定性的确定
在50MM的Britton-Robinson缓冲液中，在pH6-10下，将淀粉酶制剂稀释至100NU/ml淀粉酶活性(NU(或KNU，即1000UN)淀粉酶活性检测如AF207/1中所限定，经请求可得自Novo NordiskA/S，其单位定义如下：1KNU为每小时在标准条件下糊精化5.26克淀粉干物质Merch Amylum Solubile.cat.no.1253所需的酶量)，在40-90℃下保温。而后加入H2O2(35％)使浓度达到1-50克/升，将pH值重新调至所需值。15秒、5、15和30分钟后对该活性进行测度，活性如AF207/1中所述确定，但在所选择的pH值和温度下(而非pH7.3和37℃下)绘制标准曲线。将结果与在相同条件下对Termamyl制剂(可得自丹麦Novo Nordisk A/S)的测试结果进行比较。
以下非限制性实施例可说明本发明。实施例1  氧化稳定性α——淀粉酶与常规淀粉酶的pH分布型的比较材料和方法：织物：
100％纯棉，未漂白过的，5cm×5cm布样。酶：
A：地衣形芽孢杆菌氧化稳定性α——淀粉酶(用亮氨酸取代甲硫氨酸197，活性6.2KUNp/g，由申请人制备，批号A943043K)。
B：地衣形芽孢杆菌α——淀粉酶(Termamyl 120L，活性142KUNp/g，可从申请人那里商购，批号AXR 4025 94-3)。剂量：30KUNp酶/100ml缓冲液缓冲液：Britton-Robinson，pH7-11剂量：100ml缓冲液/摇瓶
将100ml缓冲液加入摇瓶中，置于85℃的热水浴中。当缓冲液达到85℃温度时，将酶制剂(分别为A或B)及一块布样加入。将布样在摇动水浴中进行处理，时间20分钟，温度85℃。
经酶处理之后，将布样在含2g Kieralon CD/升(一种表面活性剂)的100ml(水中洗涤，温度为95℃，而后漂选4次，每次均用100ml的冷去离子水。然后，将布样干燥10分钟，温度为105℃。干燥之后，利用常规TEGEWA法对布样进行测试(方法及标准尺度得自Verband TEGEWA，Karlstrasse 21，Frankfurt a.M.，Germany)。TEGEWA法：
将脱浆织物样品在饱和碘溶液(5ml/100ml水)中浸渍，用冷水漂洗，用滤纸擦试，再以TEGEWA紫外标准尺度来比较(蓝色)颜色强度。
TEGEWA标准尺度范围为1-9，其中1为有浆织物，而9为完全脱浆的织物。6以上的评价通常相当于可接受的脱浆。
pH实验的结果见下表1。
                      表1
pH 参照     酶B(常规)     酶A(氧化稳定性)
    7     1     6     7
    8     1     5     7
    9     1     4     7
    10     1     2     5
结果表明，氧化稳定性α——淀粉酶比常规α——淀粉酶(Ter-mamyl)更具pH稳定性。实施例2
对氧化稳定性α——淀粉酶进行测试，用脱浆/漂白综合法与常规淀粉酶(Termamyl)进行比较。材料和方法：
如实施例1所述，进而：
H2O2浓度：分别为4，6，8，10，24g/l，
NaoH浓度：分别为0.5，1.0g/l
稳定剂：2g/l(来自丹麦kastanievej 7，1878 Fib.C，Harald Pedersen公司，产品号1136)
操作温度：分别80℃，85℃，95℃
操作时间：60分钟(85℃及95℃时为20分钟。)
将脱浆/漂白溶液在摇瓶中预热至80℃(85℃，95℃)，将布样加入溶液中，将摇瓶置于摇动水浴中1小时。在使用前立即通过滴定监测溶液中的H2O2浓度。所处理的布样的冲洗/漂洗及评估见实施例1。
脱浆/漂白，实验的结果如下表2所示。
                         表2
   H2O2g/l    温度℃     NaOHg/l pH 参照评分 酶B评分 酶A评分
    4     80     0.5     10.1     2     5     7
    6     80     0.5     9.9     1     3     6
    6     80     1.0     10.1     2     3     5
    8     80     1.0     10.2     2     3     5
    10     85     0.5     9.6     2     4     5
    10     95     0.5     5     3     5     6
    24     85     0.5     9.1     3     4     6
    24     95     0.5     8.7     4     5     7
    10     95     1.0     10.0     3     4     5
结果表明，在pH高及H2O2浓度高时氧化稳定性α——淀粉酶比常规淀粉酶(Termamyl)更稳定。
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序列目录
在下列SEQ ID NOs.1，3，5中，对相关α——淀粉酶基因的5′序列编码序列和3′序列做了描述。5′序列为序列的第一个独立的部分，用小写字母表述；编码序列为序列的中间部分，其中信号序列以小写字母表述，而编码成熟α——淀粉酶的序列则用大写字母表述；3′序列为序列的第3个独立的部分，用小写字母表述。SEQ ID No.1cggaagattggaagtacaaaaataagcaaaagattgtcaatcatgtcatgagccatgcgggagacggaaaaatcgtctta at   cgatattt-atgcaacgttcgcagatgctgctgaagagattattaaaaagctgaaa-gcaaaaggctatcaattggt aactgtatctcagcttgaagaagtgaagaag-cagagaggctattgaataaatgagtagaagcgccatatcggcgcttttc tttt-ggaagaaaatatagggaaaatggtacttgttaaaaattcggaatatttatac-aacatcatatgt-tcacattgaaa ggggaggagaatcatg.aacaacaaaaacggctttacgcccgattgctgacgctgttatttgcgctcatcttcttgctgc ctcattctgcagcagcggcgGCAAATCTTAATGGGACG-CTGATGCAGTATTTTGAATGGTACATGCCCAATGACGGCCAA CAT-TGGAGGCGTTTGCAAAACGACTCGGCATATTTGGCTGAACACGGTAT-TACTGCCGTCTGGATTCCCCCGGCATATAA GGGAACGAG-CCAAGCGGATGTGGGCTACGGTGCTTACGACCTTTATGATTTAGGGGAGTTTCATCAAAAAGGGACGGTTCGGACAAAGTACGGCACAAAAGGAGAGCTGCAATCTGCGATCAAAAGT-CTTCATTCCCGCGACATTAACGTTTACGGGGATGTGGTCATCAACCACAAAGGCGGCGC-TGATGCGACCGAAGATGTAACCGCGGTTGAAGTCGATCCCGCTGACCGCAACCGCGTAATTTCAGGAGAACACCTAATTAAAGCCTGGACACATTT-TCATTTTCCGGGGCGCGGCAGCACATACAGCGATTTTA AATGGCAT-TGGTACCATTTTGACGGAACCGATTGGGACGAGTCCCGAAAGCTGAAC-CGCATCTATAAGTTTCAAGGAAAG GCTTGGGATTGGGAAGTTTCCAATGAA-AACGGCAACTATGATTATTTGATGTATGCCGACATCGATTATGACCATCCTGATGTCGCAGCAGAAATTAAGAGATGGGGCACTTGGTATGCCAATGAACTGCAAT-TGGACGGTTTCCGTCTTGATGCTGTCAAACACATTAAATTTTCTTTTTTGCGGGATTGGGTTAATC-ATGTCAGGGAAAAAACGGGGAAGGAAATGTTTACGGTAGCT GAATATTGGCAGAAT-GACTTGGGCGCGCTGGAAAACTATTTGAACAAAACAAATTTTAATCATTCAGTGTTTGACGTGCC GCTTCATTATCAGTTCCATGCTGCATCGACACAG-GGAGGCGGCTATGATATGAGGAAATTGCTGAACGGTACGGTCGTTT CCAAG-CATCCGTTGAAATCGGTTACATTTGTCGATAACCATGATACACAGCCGGGGCAA-TCGCTTGAGTCGACTGTCCAA ACATGGTTTAAGCCGCTTGCTTACGCTTTTAT-TCTCACAAGGGAATCTGGATACCCTCAGGTTTTCTACGGGGATATGTA CGGGA-CGAAAGGAGACTCCCAGCGCGAAATTCCTGCCTTGAAACACAAAATTGAACCGA-TCTTAAAAGCGAGAAAACAGT ATGCGTACGGAGCACAGCATGATTATTTCGAC-CACCATGACATTGTCGGCTGGACAAGGGAAGGCGACAGCTCGGTTGCA AATTCAGG-TTTGGCGGCATTAATAACAGACGGACCCGGTGGGGCAAAGCGAATGTATGTCGGCCGGCAAAACGCCGGTGA GACATGGCATGAC-ATTACCGGAAACCGTTCGGAGCCGGTTGTCATCAATTCGGAAG-GCTGGGGAGAGTTTCACGTAAACG GCGGGTCGGTTTCAATTTATGTTCAAAGATAGaagagcagagaggacggatttcctgaaggaaatccgtttttttattttSEQ ID No.2ANLNGTLMQYFEWYMPNDGQHWRRLQNDSAYLAEHGITAVWIPPAYKGTSQADVGYGAYDLYDLGEFHQKGTVRTKYGTKGELQSAIKSLHSRDINVYGDVVINHKGGADATEDVTAVEVDPADRNRVISGEHLIKAWTHFHFPGRGSTYSDFKWHWYHFDGTDWDESRKLNRIYKFQGKAWDWEVSNENGNYDYLMYADIDYDHPDVAAEIKRWGTWYANELQLDGFRLDAVKHIKFSFLRDWVNHVREKTGKEMFTVAEYWQNDLGALENYLNKTNFNHSVFDVPLHYQFHAASTQGGGYDMRKLLNGTVVSKHPLKSVTFVDNHDTQPGQSLESTVQTWFKPLAYAFILTRESGYPQVFYGDMYGTKGDSQREIPALKHKIEPILKARKQYAYGAQHDYFDHHDIVGWTREGDSSVANSGLAALITDGPGGAKRMYVGRQNAGETWHDITGNRSEPVVINSEGWGEFHVNGGSVSIYVQRSEQ ID No.3gccccgcacatacgaaaagactggctgaaaacattgagcctttgatga-ctgatgatttggctgaagaagtggatcgattg tttgagaaaagaaga-agaccataaaaataccttgtctgtcatcagacagggtattttttatgctgtcca-gactgtccgct gtgtaaaaataaggaataaaggggggttgttattattttact-gatatgtaaaatataatttgtataagaaaatgagaggg agaggaaacatgattcaaaaacgaaagcggacagtttcgttcagacttgtgcttatgtgcacg-ctgttatttgtcagttt gccgattacaaaaacatcagccGTAAATGGCACGC-TGATGCAGTATTTTGAATGGTATACGCCGAACGACGGCCAGCATT GGAAAC-GATTGCAGAATGATGCGGAACATTTATCGGATATCGGAATCACTGCCGTCTGGA-TTCCTCCCGCATACAAAGGA TTGAGCCAATCCGATAACGGATACGGACCTTAT-GATTTGTATGATTTAGGAGAATTCCAGCAAAAAGGGACGGTCAGAAC GAAATA-CGGCACAAAATCAGAGCTTCAAGATGCGAT   CTCACTGCATTCCCGGAACGT-CCAAGTATACGGAGATGTGG TTTTGAATCATAAGGCTGGTGCTGATGCAACAG-AAGATGTAACTGCCGTCGAAGTCAATCCGGCCAATAGAAATCAGGAA ACTTCG-GAGGAATATCAAATCAAAGCGTGGACGGATTTTCGTTTTCCGGGCCGTGGAAAC-ACGTACAGTGATTTTAAATG GCATTGGTATCATTTCGACGGAGCGGACTGGGA-TGAATCCCGGAAGATCAGCCGCATCTTTAAGTTTCGTGGGGAAGGAA AAGCGT-GGGATTGGGAAGTATCAAGTGAAAACGGCAACTATGACTATTTAATGTATGCTG-ATGTTGACTACGACCACCCT GATGTCGTGGCAGAGACAAAAAAATGGGGTATC-TGGTATGCGAATGAACTGTCATTAGACGGCTTCCGTATTGATGCCGC CAAACA-TATTAAATTTTCATTTCTGCGTGATTGGGTTCAGGCGGTCAGACAGGCGACGGG-AAAAGAAATGTTTACGGTTG CGGAGTATTGGCAGAATAATGCCGGGAAACTCG-AAAACTACTTGAATAAAACAAGCTTTAATCAATCCGTGTTTGATGTT CCGCTT-CATTTCAATTTACAGGCGGCTTCCTCACAAGGAGGCGGATATGATATGAGGCGT-TTGCTGGACGGTACCGTTGT GTCCAGGCATCCGGAAAAGGCGGTTACATTTGT-TGAAAATCATGACACACAGCCGGGACAGTCATTGGAATCGACAGTCC AAACTTGGT-TTAAACCGCTTGCATACGCCTTTATTTTGACAAGAGAATCCGGTTATCCTC-AGGTGTTCTATGGGGATATG TACGGGACAAAAGGGACATCGCCAAAGGAAATT-CCCTCACTGAAAGATAATATAGAGCCGATTTTAAAAGCGCGTAAGGA GTACGC-ATACGGGCCCCAGCACGATTATATTGACCACCCGGATGTGATCGGATGGACGAG-GGAAGGTGACAGCTCCGCCG CCAAATCAGGTTTGGCCGCTTTAATCACGGACGGAC-CCGGCGGATCAAAGCGGATGTATGCCGGCCTGAAAAATGCCGGC GAGACATGG-TATGACATAACGGGCAACCGTTCAGATACTGTAAAAATCGGATCTGACGGCTGG-GGAGAGTTTCATGTAAA CGATGGGTCCGTCTCCATTTATGTTCAGAAATAAggtaataaaaaaacacctccaagctgagtgcgggtatcagcttgga ggtgcgtt-tattttttcagccgtatgacaaggtcggcatcaggtgtgacaaatacggtatgc-tggctgtcataggtgaca aatccgggttttgcgccgtttggctttttcacatg-tctgatttttgtataatcaacaggcacggagccggaatctttcgc cttggaaa-aataagcggcgatcgtagctgcttccaatatggattgttcatcgggatcgctgc-ttttaatcacaacgtggg atccSEQ ID No.4VNGTLMQYFEWYTPNDGQHWKRLQNDAEHLSDIGITAVWIPPAYKGLSQSDNGYGPYDLYDLGEFQQKGTVRTKYGTKSELQDAIGSLHSRNVQVYGDVVLNHKAGADATEDVTAVEVNPANRNQETSEEYQIKAWTDFRFPGRGNTYSDFKWHWYHFDGADWDESRKISRIFKFRGEGKAWDWEVSSENGNYDYLMYADVDYDHPDVVAETKKWGIWYANELSLDGFRIDAAKHIKFSFLRDWVQAVRQATGKEMFTVAEYWQNNAGKLENYLNKTSFNQSVFDVPLHFNLQAASSQGGGYDMRRLLDGTVVSRHPEKAVTFVENHDTQPGQSLESTVQTWFKPLAYAFILTRESGYPQVFYGDMYGTKGTSPKEIPSLKDNIEPILKARKEYAYGPQHDYIDHPDVIGWIREGDSSAAKSGLAALITDGPGGSKRMYAGLKNAGETWYDITGNRSDTVKIGSDGWGEFHVNDGSVSIYSEQ ID No.5aaattcgatattgaaaacgattacaaataaaaattataataga-cgtaaacgttcgagggtttgctccctttttactcttt ttatgcaatcgtttcc-cttaattttttggaagccaaaccgtcgaatgtaacatttgattaagggggaag-ggcattgtgct aacgtttcaccgcatcattcgaaaaggatggatgttcctgctcgcgtt-tttgctcactgtctcgctgttctgcccaacag gacagcccgccaaggctGCCG-CACCGTTTAACGGCACCATGATGCAGTATTTTGAATGGTACTTGCCGGATGATG-GCACG TTATGGACCAAAGTGGCCAATGAAGCCAACAACTTATCCAG-CCTTGGCATCACCGCTCTTTGGCTGCCGCCCGCTTACAA AGGAACAAGCCGCA-GCGACGTAGGGTACGGAGTATACGACTTGTATGACCTCGGCGAATTCAATCAAA-AAGGGACCGTCC GCACAAAATACGGAACAAAAGCTCAATATCTTCAAGCCAT-TCAAGCCGCCCACGCCGCTGGAATGCAAGTGTACGCCGAT GTCGTGTTCGAC-CATAAAGGCGGCGCTGACGGCACGGAATGGGTGGACGCCGTCGAAGTCAATCCG-TCCGACCGCAACCA AGAAATCTCGGGCACCTATCAAATCCAAGCATGGACGAAATT-TGATTTTCCCGGGCGGGGCAACACCTACTCCAGCTTTA AGTGGCGCTGGTACCAT-TTTGACGGCGTTGATTGGGACGAAAGCCGAAAATTGAGCCGCATTTACAAAT-TCCGCGGCATC GGCAAAGCGTGGGATTGGGAAGTAGACACGGAAAACGGAAAC-TATGACTACTTAATGTATGCCGACCTTGATATGGATCA TCCCGAAGTCGTGAC-CGAGCTGAAAAACTGGGGGAAATGGTATGTCAACACAACGAACATTGATGGGTT-CCGGCTTGATG CCGTCAAGCATATTAAGTTCAGTTTTTTTCCTGATTGGTTGT-CGTATGTGCGTTCTCAGACTGGCAAGCCGCTATTTACC GTCGGGGAATATTGG-AGCTATGACATCAACAAGTTGCACAATTACATTACGAAAACAGACGGAACGATG-TCTTTGTTTGA TGCCCCGTTACACAACAAATTTTATACCGCTTCCAAATCAGG-GGGCGCATTTGATATGCGCACGTTAATGACCAATACTC TCATGAAAGATCAAC-CGACATTGGCCGTCACCTTCGTTGATAATCATGACACCGAACCCGGCCAAGCGC-TGCAGTCATGG GTCGACCCATGGTTCAAACCGTTGGCTTACGCCTTTATTCTA-ACTCGGCAGGAAGGATACCCGTGCGTCTTTTATGGTGA CTATTATGGCATTCC-ACAATATAACATTCCTTCGCTGAAAAGCAAAATCGATCCGCTCCTCATCGCGCG-CAGGGATTATG CTTACGGAACGCAACATGATTATCTTGATCACTCCGACATCA-TCGGGTGGACAAGGGAAGGGGGCACTGAAAAACCAGGA TCCGGACTGGCCGCA-CTGATCACCGATGGGCCGGGAGGAAGCAAATGGATGTACGTTGGCAAACAACAC-GCTGGAAAAGT GTTCTATGACCTTACCGGCAACCGGAGTGACACCGTCACCAT-CAACAGTGATGGATGGGGGGAATTCAAAGTCAATGGCG GTTCGGTTTCGGTTT-GGGTTCCTAGAAAAACGACCGTTTCTACCATCGCTCGGCCGATCACAACCCGAC-CGTGGACTGGT GAATTCGTCCGTTGGACCGAACCACGGTTGGTGGCATGGCCTTGAtgcctgcgaSEQ ID No.6AAPFNGTMMQYFEWYLPDDGTLWTKVANEANNLSSLGITALWLPPAYKGTSRSDVGYGVYDLYDLGEFNQKGTVRTKYGTKAQYLQAIQAAHAAGMQVYADVVFDHKGGADGTEWVDAVEVNPSDRNQEISGTYQIQAWTKFDFPGRGNTYSSFKWRWYHFDGVDWDESRKLSRIYKFRGIGKAWDWEVDTENGNYDYLMYADLDMDHPEVVTELKNWGKWYVNTTNIDGFRLDAVKHIKFSFFPDWLSYVRSQTGKPLFTVGEYWSYDINKLHNYITKTDGTMSLFDAPLHNKFYTASKSGGAFDMRTLMTNTLMKDQPTLAVTFVDNHDTEPGQALQSWVDPWFKPLAYAFILTRQEGYPCVFYGDYYGIPQYNIPSLKSKIDPLLIARRDYAYGTQHDYLDHSDIIGWTREGGTEKPGSGLAALITDGPGGSKWMYVGKQHAGKVFYDLTGNRSDTVTINSDGWGEFKVNGGSVSVWVPRKTTVSTIARPITTRPWTGEFVRWTEPRLVAWSEQ ID No.71 ATPADWRSQS IYFLLTDRFA RTDGSTTATC31 NTADQKYCGG TWQGIIDKLD YIQGMGFTAI 61 WITPVTAQLP QTTAYGDAYH GYWQQDIYSL91 NENYGTADDL KALSSALHER GMYLMVDVVA121 NHMGYDGAGS SVDYSVFKPF SSQDYFHPFC151 FIQNYEDQTQ VEDCWLGDNT VSLPDLDTTK181 DVVKNEWYDW VGSLVSNYSI DGLRIDTVKH211 VQKDFWPGYN KAAGVYCIGE VLDGDPAYTC241 PYQNVMDGVL NYPIYYPLLN AFKSTSGSMD271 DLYNMINTVK SDCPDSTLLG TFVENHDNPR301 FASYTNDIAL AKNVAAFIIL NDGIPIIYAG331 QEQHYAGGND PANREATWLS GYPTDSELYK361 LIASANAIRN YAISKDTGFV TYKNWPIYKD391 DITIAMRKGT DGSQIVTILS NKGASGDSYT421 LSLSGAGYTA GQQLTEVIGC TTVTVGSDGN451 VPVPMAGGLP RVLYPTEKLA GSKICSSS

Claims (22)

1.一种同时脱浆和漂白含淀粉或淀粉衍生物的有浆织物的方法，该方法包括用漂白组合物和氧化稳定性α——淀粉酶来处理织物。
2.依据权利要求1的方法，其中，通过以任何不同于Cys或Met的氨基酸残基来置换母体α——淀粉酶的一个或多个甲硫氨酸残基，而从母体α——淀粉酶中制备出氧化稳定性α——淀粉酶。
3.依据权利要求1或2的方法，其中氧化稳定性α——淀粉酶为微生物来源的。
4.依据权利要求3的方法，其中母体α——淀粉酶衍生自芽孢杆菌属菌种的菌株。
5.依据权利要求4的方法，其中母体α——淀粉酶衍生自地衣形芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌或嗜热脂肪芽孢杆菌菌株。
6.依据权利要求5的方法，其中母体α——淀粉酶含有如SEQID NO.2所示的地衣形芽孢杆菌α——淀粉酶的氨基酸序列或所述α——淀粉酶类似物的氨基酸序列，其
i)与SEQ ID NO.2中所示序列至少具有60％的同源性，
ii)与抗所述α——淀粉酶的抗体反应，和/或
iii)由一段DNA序列编码，该序列可与相同于编码所述α——淀粉酶的DNA序列的探针杂交。
7.依据权利要求5的方法，其中母体α——淀粉酶含有SEQ IDNO.4中所示的嗜热脂肪芽孢杆菌α——淀粉酶的氨基酸序列或所述α——淀粉酶类似物的氨基酸序列，其
i)与SEQ ID NO.4中所示的序列至少具60％的同源性，
ii)与抗所述α——淀粉酶的抗体反应，和/或
iii)由可与相同于编码所述α——淀粉酶的DNA淀粉酶的探针杂交的DNA序列编码。
8.依据权利要求5的方法，其中母体α——淀粉酶含有如SEQID NO.6所示的解淀粉芽孢杆菌α——淀粉酶的氨基酸序列或所述α——淀粉酶类似物的氨基酸序列，其
i)与SEQ ID NO.6中所示的序列至少具有60％的同源性，
ii)与抗所述α——淀粉酶的抗体反应，和/或
iii)由可与相同于编码所述α——淀粉酶的DNA序列的探针杂交的DNA序列编码。
9.依据权利要求3的方法，其中母体α——淀粉酶衍生自曲霉属菌种的菌株如米曲霉或黑曲霉。
10.依据上述权利要求任意一项和方法，其中母体α——淀粉酶的一个或多个甲硫氨酸残基被Leu、Thr、Ala、Gly、Ser、Ile或Asp所置换。
11.依据权利要求6的方法，其中母体α——淀粉酶的197位甲硫氨酸残基被不同于Cys或Met的另一种氨基酸残基所取代。
12.依据权利要求7的方法，其中200和/或206位的甲硫氨酸残基被不同于Cys或Met的另一个氨基酸残基所取代。
13.依据上述权利要求任意一项的方法，其中另加入稳定剂和/或润湿剂。
14.依据权利要求1的方法，其中漂白剂为过氧化氢。
15.依据权利要求13或14的方法，其中氧化稳定性α——淀粉酶的用量为1-10克/升，过氧化氢的用量为1-50克/升。
16.依据上述权利要求中任意一项的方法，其中实施脱浆和漂白综合处理的温度范围为30-100℃，pH范围为6.5-11。
17.依据上述权利要求任意一项的方法，其中氧化稳定性α——淀粉酶的用量为1-5克/升，优选为1-3克/升。
18.一种用于同时脱浆和漂白方法的组合物，含有氧化稳定性α——淀粉酶并与至少一种另外的组分相结合，该组分选自润湿剂、分散剂、螯合剂和乳化剂。
19.依据权利要求18任意一项的组合物，其中氧化稳定性α——淀粉酶的定义同权利要求2-12中任意一项。
20.氧化稳定性α——淀粉酶在含淀粉或淀粉衍生物的织物进行同时脱浆和漂白处理中的应用。
21.氧化稳定性α——淀粉酶在含淀粉或淀粉衍生物的织物的织物进行同时脱浆和酸洗处理中的应用。
22.依据权利要求20或21的应用，其中氧化稳定性α——淀粉酶的定义同权利要求2-12中任意一项。
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