CN114271188A

CN114271188A - 空气凤梨肥猴组培快繁的方法及培养基

Info

Publication number: CN114271188A
Application number: CN202111011106.8A
Authority: CN
Inventors: 侯静; 翟惠; 尹佟明; 刘晓; 陈震宵; 胡正东
Original assignee: Nanjing Forestry University
Current assignee: Nanjing Forestry University
Priority date: 2021-08-31
Filing date: 2021-08-31
Publication date: 2022-04-05

Abstract

本发明公开了一种空气凤梨肥猴组培快繁的方法及培养基，方法包括：1)选种：选取空气凤梨种子作为外植体；2)种子消毒：对成熟荚果内的种子进行消毒；3)播种：将消毒好的种子置于吸水纸上，使种子表面的水分充分吸干，用消毒好的镊子夹起种子放入准备好的所述培养基中；4)组培：在此培养基中生长1个月后进行转接，转接的培养基仍用上述培养基，依照此法每1个月转接一次，直至幼苗出瓶。培养基的配方为：MS+2%蔗糖+0.3%琼脂（Phytagel）+0.4mg/L IAA，pH5.8。本发明解决了肥猴种子消毒及种子繁殖率低的问题，采用本发明建立了肥猴组培快繁技术体系。

Description

空气凤梨肥猴组培快繁的方法及培养基

技术领域

本发明属于植物栽培技术领域，具体涉及空气凤梨肥猴组培快繁的方法及培养基。

背景技术

空气凤梨（Tillandsia）属凤梨科（Bromeliaceae）铁兰属（Tillandsia）多年生草本植物，包括近550个品种和103个变种，品种繁多、形态各异，是地球上唯一完全生于空气中的植物，既可作为室内装饰美化环境，又能净化室内空气，已成为室内装饰的新宠，市场需求量逐年增加。而空气凤梨属于景天酸代谢植物，主要依靠种子繁殖和分株繁殖，繁殖速度较为缓慢，限制了空气凤梨的推广应用，加快空气凤梨繁殖速率是解决这一问题的关键。

空气凤梨肥猴的繁殖主要靠种子繁殖和分株繁殖，肥猴通过人工授粉技术可结5-10粒果荚，一个荚果含种子约15粒，一次播种可得5-10个幼苗。种子一般2-3周才能发芽，发芽率低，而且发芽后生长速度极其缓慢。自然状态下从发芽长至2片真叶需5-6个月，长至3~4片真叶需10-12个月，长至成苗需5-8年时间，且幼苗常因管理不当而干枯、死亡。因此，现有技术中的常规种子繁殖速度极慢。

组培快繁技术可以加快植物的繁殖速度，为此，本发明以市场上的名贵品种肥猴（Tillandsia duratii）为材料，通过研究种子消毒、诱导种子萌发、促进叶芽生长的最适体系，建立肥猴的种子培养基及消毒播种的方法，提高空气凤梨的繁殖系数。

发明内容

为了克服现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种加快种子繁殖速率的空气凤梨组织培养基及组培快繁空气凤梨的方法。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案如下：

一种空气凤梨肥猴种子培养基，所述培养基的配方如下：MS+2%蔗糖+0.3%琼脂（Phytagel）+0.4mg/L IAA，pH 5.8。

一种利用空气凤梨肥猴种子培养基组培快繁空气凤梨的方法，所述方法包括如下步骤：

1)选种：选取空气凤梨种子作为外植体；

2)种子消毒：对成熟荚果内的种子进行消毒；

3)播种：将消毒好的种子置于吸水纸上，使种子表面的水分充分吸干，用消毒好的镊子夹起种子放入准备好的所述培养基中；

4)组培：在此培养基中生长1个月后进行转接，转接的培养基仍用上述培养基，依照此法每1个月转接一次，直至幼苗出瓶。

进一步的，1）选种中，种子采自于成熟荚果。

进一步的，2）种子消毒中，种子消毒方法：将荚果剥开，用镊子将种子上的种皮毛拔除，置于培养皿中，移至超净工作台；用70%的酒精消毒30秒，用无菌水冲洗6次，然后用2%的次氯酸钠消毒10分钟，无菌水冲洗10次。对外植体进行消毒的原则是既要杀死材料上附着的微生物，同时又不能伤及实验材料。所以，消毒时采用的消毒剂及其浓度、处理时间等，均应根据材料的情况及对消毒剂的敏感性来定。本发明的种子消毒方法，完全根据空气凤梨种子的敏感性选择的，消毒效果佳，对空气凤梨几乎零损伤。采用酒精快速消毒，然后无菌水冲洗，洗去残留，然后再用次氯酸钠消毒，无菌水冲洗，两种消毒的合理搭配，最终实现消毒、无害、无损伤。

进一步的，3）播种中，培养条件：温度25℃，湿度65%，光照/黑暗：16/8。

与现有技术相比，本发明的优点是：1、本发明的培养基能加快种子繁殖速率，适用于播种和组培全阶段；2、本发明的方法，能加快种子繁殖速率；采用本发明培养基培养后，空气凤梨种子组培后在培养室内培养约9个月，即可出瓶进行栽培；组培播种，幼苗长至2片真叶需1个月，长至6~8片真叶需3个月，生长速度比自然状态下提高400%以上；3、种子消毒是根据空气凤梨种子的敏感度确定的，不仅无残留，对环境无害，同时消毒效果显著；4、本发明的培养基及培育方法，能适用于空气凤梨肥猴，肥猴品种名贵，市场价值高，因此本发明的培养基及培育方法能快速繁育肥猴，带来巨大的经济效益。

具体实施方式

根据下述实施例，可以更好地理解本发明。然而，本领域的技术人员容易理解，实施例所描述的具体的内容仅用于说明本发明，而不应当也不会限制权利要求书中所详细描述的本发明。

实施例1:一种空气凤梨肥猴种子培养基，所述培养基的配方如下：MS+2% 蔗糖+0.3% 琼脂（Phytagel）+0.4mg/L IAA，pH 5.8。其中，1L培养基中加入20g蔗糖；1L培养基中加入琼脂粉（Phytagel）3g。

实施例2

利用上述空气凤梨种子培养基组培快繁空气凤梨的方法，该方法包括如下步骤：

1) 选种：选取空气凤梨种子作为外植体；种子采自于成熟荚果；

2) 种子消毒：对种子进行消毒；种子消毒方法：将荚果剥开，用镊子将种子上的种皮毛拔除，置于培养皿中，移至超净工作台；用70%的酒精消毒30秒，用无菌水冲洗6次，然后用2%的次氯酸钠消毒10分钟，无菌水冲洗10次；

3)播种：将消毒好的种子置于吸水纸上，使种子表面的水分充分吸干，用消毒好的镊子夹起种子放入准备好的所述培养基中，培养条件：温度25℃，湿度65%，光照/黑暗：16/8；

实施例3

下面通过试验对本发明的有益效果作进一步的详细说明。

1.材料与试验

1.1供试材料

供试材料为肥猴，选取成熟荚果内的种子作为外植体，成熟标准为：当果荚变为灰白色，用手指捏有疏松感时可进行采摘。

1.2方法

1.2.1外植体消毒

种子消毒方法：将荚果剥开，用镊子将种子上的种皮毛拔除，置于培养皿中，移至超净工作台；用70%的酒精消毒30秒，用无菌水冲洗6次，然后用2%的次氯酸钠消毒10分钟，无菌水冲洗10次，待用。

1.2.2播种

将消毒好的种子置于吸水纸上，使种子表面的水分充分吸干，用灭菌后的镊子夹起种子放入准备好的培养基中，每种培养基接种3个培养皿，每皿接种30粒种子。

1.2.3培养基配方

设置了8个培养基配方，见表1。琼脂为Phytagel（GEUAM GUM）。

表1空气凤梨种子培养的配方

序号	培养基配方
		1	MS+20g蔗糖+3g琼脂
2	1/2MS+30g蔗糖+3g琼脂
		3	MS+20g蔗糖+3g琼脂+0.4mg/L NAA
4	MS+20g蔗糖+3g琼脂+0.4mg/L IAA
		5	MS+20g蔗糖+3g琼脂+0.4mg/L IBA
6	1/2MS+30g蔗糖+3g琼脂+0.4mg/L NAA
		7	1/2MS+30g蔗糖+3g琼脂+0.4mg/L IAA
8	1/2MS+30g蔗糖+3g琼脂+0.4mg/L IBA

1.2.4培养条件及记录

蔗糖20g，琼脂（Phytagel）3g，pH5.8，温度25℃，每日光照16h，湿度65%。7d、15d、30d、60d进行定期观察记录。

2结果分析

表2不同的种子培养基配方对空气凤梨种子生长的影响

序号	7D种子色泽	15D种子发芽率	30D种子成活率	60D种子成活率/色泽/健壮度
					1	25%种子发黑	75%	58%	25% /* /＋
2	16%种子发黑	83%	66%	16% /** /＋＋
					3	无种子发黑	98%	91%	75% /*** / ＋＋＋
4	无种子发黑	100%	98%	98% /*** /＋＋＋
					5	16%种子发黑	90%	41%	16% /** /＋＋
6	无种子发黑	96%	91%	75% /*** /＋＋＋
					7	8%种子发黑	93%	69%	50% /** /＋＋
8	8%种子发黑	92%	69%	41% /** /＋＋

注：发芽率是在100%健康种子下测得的发芽率，成活率是在100%发芽种子下测得的成活率。

健壮度：+++健壮，++较健壮，+生长一般；色泽：***深绿色，**淡绿色，*黄绿色。

2.1同一植物生长调节剂种类和浓度、不同的基础培养基对空气凤梨组培快繁的影响在0.4mg/L IAA下，发现不同的基础培养基对空气凤梨组培快繁的影响是不同的(表2)，MS最好，出芽早，发芽率达100%，成活率达98%，且健壮，叶色深绿；其次是1/2 MS，发芽率为93%，成活率为69%，略低于MS。在0.4mg/L IAA、0.4mg/L NAA 和0.4mg/L IBA下，不同的基础培养基对空气凤梨种子快繁的影响均表现出相同的趋势，即MS最好，其次是1/2 MS。

2.2同一基础培养基下、不同的植物生长调节剂种类、浓度对空气凤梨种子快繁的影响根据2.1的分析发现，使用MS基础培养基最好，因此此处仅就MS基础培养基下比较不同的植物生长调节剂种类、浓度对空气凤梨组培快繁的影响。这里将表2中序号为3、4、5的数据进行比较分析。 2.2.1同一基础培养基、同一植物生长调节剂浓度、不同的植物生长调节剂种类对空气凤梨种子快繁的影响当植物生长调节剂浓度为0.4mg/L IAA，发芽率最高达100%，成活率达98%，且叶色深绿，长势最快，最为健壮且子叶最先萌发；当植物生长调节剂浓度为0.4mg/L NAA，发芽率次之为98%，成活率为91%，叶色较绿，植株健壮；当植物生长调节剂浓度为0.4mg/L IBA，幼苗长势差，子叶萌发最慢。 3结论与讨论基础培养基浓度过低均不利于空气凤梨种子的组培，发芽率和成活率低，不利于幼苗的生长。适宜的基础培养基为MS培养基。不同的植物生长调节剂种类对空气凤梨种子组培的影响也不同，IAA比NAA、IBA效果好，幼苗的成活率高、长势健壮、色泽深绿、子叶最先萌发，因此选择正确的植物生长调节剂种类尤其重要。适宜的IAA浓度可明显促进空气凤梨种子组培，加快幼苗的生长速率，研究发现，IAA在0.4mg/L时最利于空气凤梨种子的组培，发芽率和幼苗成活率高，幼苗生长健壮，色泽浓绿。IAA浓度低时对其生长无促进作用，浓度过高则会对植物出现明显的抑制作用。通过比较8种培养基配方对空气凤梨种子组培的影响，同时综合基础培养基、植物生长调节剂种类、植物生长调节剂浓度等因素，筛选出空气凤梨种子组培的最佳培养基配方为MS+2%蔗糖+0.3%琼脂（Phytagel）+0.4mg/L IAA。幼苗在此培养基中生长1个月后进行转接，转接的培养基仍用此培养基，依照此法每1个月转接一次，直至幼苗出瓶。

本发明的培养基及方法，能加快种子繁殖速率；采用本发明培养基培养后，空气凤梨种子组培后在培养室内培养约9个月，即可出瓶进行栽培；组培播种，幼苗长至2片真叶需1个月，长至6~8片真叶需3个月，生长速度比自然状态下提高400%以上；能适用于空气凤梨肥猴，肥猴品种名贵，市场价值高，因此本发明的培养基及培育方法能快速繁育肥猴，带来巨大的经济效益。

Claims

1.一种空气凤梨肥猴种子培养基，其特征在于，所述培养基的配方如下：MS+2%蔗糖+0.3%琼脂+0.4mg/L IAA，pH 5.8。

2.利用权利要求1所述的空气凤梨肥猴种子培养基空气凤梨快繁的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

1)选种：选取空气凤梨种子作为外植体；

2)种子消毒：对成熟荚果内的种子进行消毒；

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，1）选种中，种子为成熟荚果产生的种子。

4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，2）种子消毒中，种子消毒方法：将荚果剥开，用镊子将种子上的种皮毛拔除，置于培养皿中，移至超净工作台；用70%的酒精消毒30秒，用无菌水冲洗6次，然后用2%的次氯酸钠消毒10分钟，无菌水冲洗10次。

5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，3）播种中，培养条件：温度25℃，湿度65%，光照/黑暗：16/8。