CN114270190A - 用于评估心力衰竭的测定 - Google Patents
用于评估心力衰竭的测定 Download PDFInfo
- Publication number
- CN114270190A CN114270190A CN202080041154.9A CN202080041154A CN114270190A CN 114270190 A CN114270190 A CN 114270190A CN 202080041154 A CN202080041154 A CN 202080041154A CN 114270190 A CN114270190 A CN 114270190A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- monoclonal antibody
- patient
- terminal
- collagen
- amino acid
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 206010019280 Heart failures Diseases 0.000 title claims description 37
- 238000003556 assay Methods 0.000 title claims description 24
- 208000024172 Cardiovascular disease Diseases 0.000 claims abstract description 42
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 claims abstract description 36
- 102000001187 Collagen Type III Human genes 0.000 claims abstract description 20
- 108010069502 Collagen Type III Proteins 0.000 claims abstract description 20
- 108010043741 Collagen Type VI Proteins 0.000 claims abstract description 19
- 102000002734 Collagen Type VI Human genes 0.000 claims abstract description 19
- 239000013060 biological fluid Substances 0.000 claims abstract description 19
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 claims abstract description 17
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 claims abstract description 8
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 59
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 43
- 208000038003 heart failure with preserved ejection fraction Diseases 0.000 claims description 33
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 claims description 30
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 26
- 125000001433 C-terminal amino-acid group Chemical group 0.000 claims description 25
- 230000034994 death Effects 0.000 claims description 22
- 231100000517 death Toxicity 0.000 claims description 22
- 229940083712 aldosterone antagonist Drugs 0.000 claims description 21
- 239000002170 aldosterone antagonist Substances 0.000 claims description 19
- 229960002256 spironolactone Drugs 0.000 claims description 19
- LXMSZDCAJNLERA-ZHYRCANASA-N spironolactone Chemical group C([C@@H]1[C@]2(C)CC[C@@H]3[C@@]4(C)CCC(=O)C=C4C[C@H]([C@@H]13)SC(=O)C)C[C@@]21CCC(=O)O1 LXMSZDCAJNLERA-ZHYRCANASA-N 0.000 claims description 19
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims description 17
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 10
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 10
- 230000002411 adverse Effects 0.000 claims description 7
- 230000007211 cardiovascular event Effects 0.000 claims description 4
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 claims description 4
- 239000000090 biomarker Substances 0.000 description 47
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 30
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 30
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 description 30
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 30
- 108010028780 Complement C3 Proteins 0.000 description 17
- 102000016918 Complement C3 Human genes 0.000 description 17
- 108010034596 procollagen Type III-N-terminal peptide Proteins 0.000 description 17
- 206010016654 Fibrosis Diseases 0.000 description 15
- 230000004761 fibrosis Effects 0.000 description 15
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 14
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 13
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 12
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 12
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 11
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 11
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 11
- 102000010834 Extracellular Matrix Proteins Human genes 0.000 description 10
- 108010037362 Extracellular Matrix Proteins Proteins 0.000 description 10
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 10
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 10
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 9
- 210000002744 extracellular matrix Anatomy 0.000 description 9
- 108010008064 pro-brain natriuretic peptide (1-76) Proteins 0.000 description 9
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 8
- 102400001263 NT-proBNP Human genes 0.000 description 8
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 8
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 8
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 7
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 description 7
- 210000002469 basement membrane Anatomy 0.000 description 7
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 7
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 7
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 7
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 7
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 7
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 7
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 7
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 7
- 206010028594 Myocardial fibrosis Diseases 0.000 description 6
- 125000001429 N-terminal alpha-amino-acid group Chemical group 0.000 description 6
- 102100024952 Protein CBFA2T1 Human genes 0.000 description 6
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 6
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 6
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 6
- 208000010125 myocardial infarction Diseases 0.000 description 6
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 6
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 6
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 6
- 101800000407 Brain natriuretic peptide 32 Proteins 0.000 description 5
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 5
- 230000011382 collagen catabolic process Effects 0.000 description 5
- 230000003176 fibrotic effect Effects 0.000 description 5
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 5
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 5
- 230000035488 systolic blood pressure Effects 0.000 description 5
- 230000007306 turnover Effects 0.000 description 5
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 5
- 108010028778 Complement C4 Proteins 0.000 description 4
- 108010000684 Matrix Metalloproteinases Proteins 0.000 description 4
- 102000002274 Matrix Metalloproteinases Human genes 0.000 description 4
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 4
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 4
- 210000004381 amniotic fluid Anatomy 0.000 description 4
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 4
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 4
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 4
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 4
- 239000002131 composite material Substances 0.000 description 4
- 230000024924 glomerular filtration Effects 0.000 description 4
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 4
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 4
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 4
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 4
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 4
- 230000004044 response Effects 0.000 description 4
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 4
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 4
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000001228 trophic effect Effects 0.000 description 4
- 102000012422 Collagen Type I Human genes 0.000 description 3
- 108010022452 Collagen Type I Proteins 0.000 description 3
- 102000004266 Collagen Type IV Human genes 0.000 description 3
- 108010042086 Collagen Type IV Proteins 0.000 description 3
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 3
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 3
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 208000020832 chronic kidney disease Diseases 0.000 description 3
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 3
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 3
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 3
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 3
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 3
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 3
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 3
- 210000004988 splenocyte Anatomy 0.000 description 3
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 3
- 239000012089 stop solution Substances 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 3
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 description 3
- YRNWIFYIFSBPAU-UHFFFAOYSA-N 4-[4-(dimethylamino)phenyl]-n,n-dimethylaniline Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC=C1C1=CC=C(N(C)C)C=C1 YRNWIFYIFSBPAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000010496 Heart Arrest Diseases 0.000 description 2
- 239000007836 KH2PO4 Substances 0.000 description 2
- 102100027998 Macrophage metalloelastase Human genes 0.000 description 2
- 102000000380 Matrix Metalloproteinase 1 Human genes 0.000 description 2
- 108010016113 Matrix Metalloproteinase 1 Proteins 0.000 description 2
- 102000002151 Microfilament Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010040897 Microfilament Proteins Proteins 0.000 description 2
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 2
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 2
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 2
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 2
- 239000012131 assay buffer Substances 0.000 description 2
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 2
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 2
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 2
- 229960005057 canrenone Drugs 0.000 description 2
- UJVLDDZCTMKXJK-WNHSNXHDSA-N canrenone Chemical compound C([C@H]1[C@H]2[C@@H]([C@]3(CCC(=O)C=C3C=C2)C)CC[C@@]11C)C[C@@]11CCC(=O)O1 UJVLDDZCTMKXJK-WNHSNXHDSA-N 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 208000019425 cirrhosis of liver Diseases 0.000 description 2
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 2
- 210000002808 connective tissue Anatomy 0.000 description 2
- 230000000875 corresponding effect Effects 0.000 description 2
- DDRJAANPRJIHGJ-UHFFFAOYSA-N creatinine Chemical compound CN1CC(=O)NC1=N DDRJAANPRJIHGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 230000002526 effect on cardiovascular system Effects 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 229960001208 eplerenone Drugs 0.000 description 2
- JUKPWJGBANNWMW-VWBFHTRKSA-N eplerenone Chemical compound C([C@@H]1[C@]2(C)C[C@H]3O[C@]33[C@@]4(C)CCC(=O)C=C4C[C@H]([C@@H]13)C(=O)OC)C[C@@]21CCC(=O)O1 JUKPWJGBANNWMW-VWBFHTRKSA-N 0.000 description 2
- 210000000585 glomerular basement membrane Anatomy 0.000 description 2
- 230000036541 health Effects 0.000 description 2
- 210000002216 heart Anatomy 0.000 description 2
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 2
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 2
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 2
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 208000019423 liver disease Diseases 0.000 description 2
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 2
- ADZYJDJNIBFOQE-RGKMBJPFSA-N mexrenone Chemical compound C([C@@H]1[C@]2(C)CC[C@@H]3[C@@]4(C)CCC(=O)C=C4C[C@H]([C@@H]13)C(=O)OC)C[C@@]21CCC(=O)O1 ADZYJDJNIBFOQE-RGKMBJPFSA-N 0.000 description 2
- 210000001724 microfibril Anatomy 0.000 description 2
- 210000003632 microfilament Anatomy 0.000 description 2
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- 229940068196 placebo Drugs 0.000 description 2
- 239000000902 placebo Substances 0.000 description 2
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 2
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 2
- 239000000092 prognostic biomarker Substances 0.000 description 2
- 201000001474 proteinuria Diseases 0.000 description 2
- 238000007634 remodeling Methods 0.000 description 2
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 2
- 239000004576 sand Substances 0.000 description 2
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 2
- 238000013517 stratification Methods 0.000 description 2
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 2
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 230000002861 ventricular Effects 0.000 description 2
- BTBHLEZXCOBLCY-QGZVFWFLSA-N (4s)-4-(4-cyano-2-methoxyphenyl)-5-ethoxy-2,8-dimethyl-1,4-dihydro-1,6-naphthyridine-3-carboxamide Chemical compound C1([C@@H]2C(=C(C)NC=3C(C)=CN=C(C2=3)OCC)C(N)=O)=CC=C(C#N)C=C1OC BTBHLEZXCOBLCY-QGZVFWFLSA-N 0.000 description 1
- WBODDOZXDKQEFS-UHFFFAOYSA-N 1,2,3,4-tetramethyl-5-phenylbenzene Chemical group CC1=C(C)C(C)=CC(C=2C=CC=CC=2)=C1C WBODDOZXDKQEFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IQMTVJBLQXREOP-UHFFFAOYSA-N 2h-phenanthren-1-one Chemical compound C1=CC2=CC=CC=C2C2=C1C(=O)CC=C2 IQMTVJBLQXREOP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710100366 A disintegrin and metalloproteinase with thrombospondin motifs 2 Proteins 0.000 description 1
- 102100027400 A disintegrin and metalloproteinase with thrombospondin motifs 4 Human genes 0.000 description 1
- 239000005541 ACE inhibitor Substances 0.000 description 1
- 102000014777 Adipokines Human genes 0.000 description 1
- 108010078606 Adipokines Proteins 0.000 description 1
- 206010003658 Atrial Fibrillation Diseases 0.000 description 1
- 108090001138 Biglycan Proteins 0.000 description 1
- 102000004954 Biglycan Human genes 0.000 description 1
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 101800001415 Bri23 peptide Proteins 0.000 description 1
- 102400000107 C-terminal peptide Human genes 0.000 description 1
- 101800000655 C-terminal peptide Proteins 0.000 description 1
- 208000000419 Chronic Hepatitis B Diseases 0.000 description 1
- 208000006545 Chronic Obstructive Pulmonary Disease Diseases 0.000 description 1
- 206010009244 Claustrophobia Diseases 0.000 description 1
- 102100031519 Collagen alpha-1(VI) chain Human genes 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- 206010052337 Diastolic dysfunction Diseases 0.000 description 1
- 206010061818 Disease progression Diseases 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108060006698 EGF receptor Proteins 0.000 description 1
- 238000000729 Fisher's exact test Methods 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 108060003393 Granulin Proteins 0.000 description 1
- 101000941581 Homo sapiens Collagen alpha-1(VI) chain Proteins 0.000 description 1
- 101000577881 Homo sapiens Macrophage metalloelastase Proteins 0.000 description 1
- 101000990902 Homo sapiens Matrix metalloproteinase-9 Proteins 0.000 description 1
- 208000002682 Hyperkalemia Diseases 0.000 description 1
- 206010020772 Hypertension Diseases 0.000 description 1
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010067060 Immunoglobulin Variable Region Proteins 0.000 description 1
- 102000017727 Immunoglobulin Variable Region Human genes 0.000 description 1
- 238000012313 Kruskal-Wallis test Methods 0.000 description 1
- 208000019693 Lung disease Diseases 0.000 description 1
- 101710187853 Macrophage metalloelastase Proteins 0.000 description 1
- 102100030412 Matrix metalloproteinase-9 Human genes 0.000 description 1
- 208000021642 Muscular disease Diseases 0.000 description 1
- 201000009623 Myopathy Diseases 0.000 description 1
- 108020001621 Natriuretic Peptide Proteins 0.000 description 1
- 102000004571 Natriuretic peptide Human genes 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 206010034487 Pericarditis constrictive Diseases 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010050808 Procollagen Proteins 0.000 description 1
- 102000016611 Proteoglycans Human genes 0.000 description 1
- 108010067787 Proteoglycans Proteins 0.000 description 1
- 206010062237 Renal impairment Diseases 0.000 description 1
- 208000034189 Sclerosis Diseases 0.000 description 1
- 208000006011 Stroke Diseases 0.000 description 1
- 101710120037 Toxin CcdB Proteins 0.000 description 1
- 201000006814 Ullrich congenital muscular dystrophy Diseases 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 239000000478 adipokine Substances 0.000 description 1
- 210000000577 adipose tissue Anatomy 0.000 description 1
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 238000004873 anchoring Methods 0.000 description 1
- 230000033115 angiogenesis Effects 0.000 description 1
- 239000002333 angiotensin II receptor antagonist Substances 0.000 description 1
- 229940125364 angiotensin receptor blocker Drugs 0.000 description 1
- 229940044094 angiotensin-converting-enzyme inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 230000003510 anti-fibrotic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001327 anti-mineralocorticoid effect Effects 0.000 description 1
- 239000003472 antidiabetic agent Substances 0.000 description 1
- 239000002220 antihypertensive agent Substances 0.000 description 1
- 206010003119 arrhythmia Diseases 0.000 description 1
- 230000006793 arrhythmia Effects 0.000 description 1
- 238000011948 assay development Methods 0.000 description 1
- 238000011888 autopsy Methods 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000000975 bioactive effect Effects 0.000 description 1
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 1
- 230000031018 biological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 1
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 1
- 238000001649 capillary isotachophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000013184 cardiac magnetic resonance imaging Methods 0.000 description 1
- 210000000748 cardiovascular system Anatomy 0.000 description 1
- 230000007910 cell fusion Effects 0.000 description 1
- 239000004568 cement Substances 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 238000013329 compounding Methods 0.000 description 1
- 208000000839 constrictive pericarditis Diseases 0.000 description 1
- 210000004351 coronary vessel Anatomy 0.000 description 1
- 229940109239 creatinine Drugs 0.000 description 1
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 1
- 230000009260 cross reactivity Effects 0.000 description 1
- 238000012136 culture method Methods 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 230000000593 degrading effect Effects 0.000 description 1
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 230000008021 deposition Effects 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 239000000104 diagnostic biomarker Substances 0.000 description 1
- 230000005750 disease progression Effects 0.000 description 1
- 238000006073 displacement reaction Methods 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 239000002934 diuretic Substances 0.000 description 1
- 229940030606 diuretics Drugs 0.000 description 1
- 238000009513 drug distribution Methods 0.000 description 1
- 208000028208 end stage renal disease Diseases 0.000 description 1
- 201000000523 end stage renal failure Diseases 0.000 description 1
- 108010075894 endotrophin Proteins 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 230000002169 extracardiac Effects 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 1
- 229940125753 fibrate Drugs 0.000 description 1
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 1
- 229950004408 finerenone Drugs 0.000 description 1
- 208000038002 heart failure with reduced ejection fraction Diseases 0.000 description 1
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 description 1
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 description 1
- 208000002672 hepatitis B Diseases 0.000 description 1
- 206010020871 hypertrophic cardiomyopathy Diseases 0.000 description 1
- 229940126904 hypoglycaemic agent Drugs 0.000 description 1
- 230000002218 hypoglycaemic effect Effects 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 description 1
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 230000005977 kidney dysfunction Effects 0.000 description 1
- 210000005240 left ventricle Anatomy 0.000 description 1
- 230000005976 liver dysfunction Effects 0.000 description 1
- 238000001325 log-rank test Methods 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 238000010801 machine learning Methods 0.000 description 1
- 238000002595 magnetic resonance imaging Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000008774 maternal effect Effects 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002394 mineralocorticoid antagonist Substances 0.000 description 1
- 210000004115 mitral valve Anatomy 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 238000007837 multiplex assay Methods 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 230000002107 myocardial effect Effects 0.000 description 1
- 210000001087 myotubule Anatomy 0.000 description 1
- 210000004897 n-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 239000000692 natriuretic peptide Substances 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 230000035778 pathophysiological process Effects 0.000 description 1
- 230000007310 pathophysiology Effects 0.000 description 1
- 238000013146 percutaneous coronary intervention Methods 0.000 description 1
- 208000030613 peripheral artery disease Diseases 0.000 description 1
- 208000019899 phobic disease Diseases 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 1
- 238000010837 poor prognosis Methods 0.000 description 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 1
- 230000002206 pro-fibrotic effect Effects 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 230000000770 proinflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000007115 recruitment Effects 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 1
- 210000000518 sarcolemma Anatomy 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 1
- 230000009131 signaling function Effects 0.000 description 1
- 210000002027 skeletal muscle Anatomy 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 238000011269 treatment regimen Methods 0.000 description 1
- 231100000588 tumorigenic Toxicity 0.000 description 1
- 230000000381 tumorigenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011870 unpaired t-test Methods 0.000 description 1
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 1
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
- G01N33/6893—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids related to diseases not provided for elsewhere
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/78—Connective tissue peptides, e.g. collagen, elastin, laminin, fibronectin, vitronectin or cold insoluble globulin [CIG]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/33—Crossreactivity, e.g. for species or epitope, or lack of said crossreactivity
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/34—Identification of a linear epitope shorter than 20 amino acid residues or of a conformational epitope defined by amino acid residues
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
- G01N2333/78—Connective tissue peptides, e.g. collagen, elastin, laminin, fibronectin, vitronectin, cold insoluble globulin [CIG]
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
- G01N2800/32—Cardiovascular disorders
- G01N2800/325—Heart failure or cardiac arrest, e.g. cardiomyopathy, congestive heart failure
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
- G01N2800/52—Predicting or monitoring the response to treatment, e.g. for selection of therapy based on assay results in personalised medicine; Prognosis
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Hematology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明提供一种用于检测和/或监测患者的心血管疾病和/或评估患者的心血管疾病的可能性或严重程度的免疫测定方法,包括将来自患者的生物流体样品与特异性结合VI型胶原蛋白α3链的C5结构域的C末端表位接触,和/或将来自患者的生物流体样品与特异性结合III型胶原蛋白的N末端前肽的C末端新表位的单克隆抗体接触。
Description
技术领域
本发明涉及用于检测和/或监测患者的心血管疾病和/或评估患者的心血管疾病的可能性或严重程度的免疫测定。心血管疾病尤其可以是心力衰竭,并且尤其可以是射血分数保留的心力衰竭。免疫测定可用于评估心血管疾病的不良结果的可能性。患者可以是接受心血管疾病治疗的患者,例如接受醛固酮拮抗剂治疗的患者。本发明还涉及用于鉴定适合用醛固酮拮抗剂治疗的患者的免疫测定。
背景技术
心力衰竭(HF)的负担在过去几年中急剧增加1,2。大约一半的HF继发于射血分数保留的HF(HFpEF),随着人口老龄化,预计这将占HF总负担的甚至更大的比例3。尽管在过去的几十年中进行了多项III期随机对照试验,但被证明可以为该患者群体提供明显益处的药物干预仍有待确定。
HFpEF综合征的异质性已被确定为证明候选药物干预有效性的重要障碍。鉴于HFpEF的异质性,来自各种病理生理过程的不同程度的贡献可对临床试验中测试的药物治疗的平均反应产生不利影响。因此,能够容易地识别相关潜在特定的由药物干预靶向的生物过程的简单、非侵入性生物标志物的可用性代表了一种增强我们对HFpEF的临床和治疗方法的有前途的方法4。
HFpEF的异质性对于个体患者的不同预后也具有重要意义。非常需要更有效地对HFpEF患者进行风险分层(risk-stratify)的能力。新的风险分层标志物不仅可以提高我们在临床实践中预测HFpEF患者的能力,而且对于告知未来试验中高风险个体的招募具有重要价值。
心肌纤维化被认为在HFpEF的病理生理学中起作用5,6。纤维化增加是由相对于胶原蛋白的降解形成过多引起的,最终导致间质中的间质胶原蛋白沉积增加。HFpEF的尸检标本和体内研究已证明心肌细胞外基质沉积增加6-8并且在该病症中已显示与LV被动硬化和舒张功能障碍相关5,8。心肌纤维化也可导致冠状动脉血流储备减少6,9、心室非同步化和心律失常倾向10,11。鉴于心肌纤维化在HFpEF中的作用,反映纤维化进展或纤维化消退的潜在动态过程的简单纤维化生物标志物将非常有价值10。
据报道,细胞外体积分数(ECVF)是一种通过心脏磁共振成像测量的心肌纤维化指数,可预测HFpEF患者12,13或处于HFpEF风险14中的患者的不良结果。尽管MRI可能在临床前研究、人类早期研究和某些临床环境中评估心肌纤维化方面发挥重要作用,但其成本和可用性可能会限制或排除其在全球III期试验和临床实践中的使用。此外,由于幽闭恐惧症或晚期肾病,许多HFpEF患者不适合进行ECVF测量。因此,寻找组织纤维化的循环生物标志物仍然是一个非常有吸引力的领域。
然而,由于“纤维化不仅仅是纤维化”的概念,以及不同隔室和胶原蛋白类型的ECM重塑可能具有不同的生物学和预后意义,寻找HFpEF的合适生物标志物变得复杂15。例如,已经报道了慢性乙型肝炎与丙型肝炎中胶原蛋白新表位片段和肝纤维化的差异关联。此外,尽管心肌纤维化被认为在HFpEF中很重要,但心外纤维化也起重要作用。例如,在HFpEF16中已经报道了骨骼肌的纤维脂肪浸润16。同样,纤维化也可能发生在动脉壁、肾和肝功能障碍中,所有这些都可导致该人群出现不良后果。
还需要能够鉴定受益于醛固酮拮抗剂如螺内酯的个体的胶原蛋白转换(collagenturnover)的生物标志物。尽管这一概念已在其他人群(射血分数降低的心力衰竭和/或心肌梗塞后)17的之前研究中评估,迄今为止只有一项研究在HFpEF中进行了检查18。在之前的这项研究中,I型胶原蛋白的血清羧基末端的端肽与血清基质金属蛋白酶-1(CITP:MMP-1)的比率似乎可以识别出在用螺内酯治疗12周后表现出超声心动图二尖瓣流入与瓣环组织速度之比(左心室充盈压的标志物)降低的患者18。然而,这项研究没有检查临床事件。
III型胶原蛋白在除骨骼外的大部分含I型胶原蛋白的组织中均有表达,是结缔组织、肌肉组织和皮肤的重要组成部分。III型胶原蛋白对于心血管系统和其他器官中的I型胶原蛋白的纤维生成至关重要。在纤维组装(ibrillar assembly)过程中,III型前胶原蛋白的N末端前肽(由三个相同的α链组成,总分子量为42kDa)在成熟胶原蛋白掺入细胞外基质(ECM)之前被特异性N-蛋白酶切割。切割的前肽可以保留在ECM中或释放到循环中。然而,前肽的切割有时是不完全的,使前肽附着在分子上。这导致形成具有异常交联的细原纤维,进而导致异常分子易于快速代谢转换。PIIINP是III型胶原蛋白的N末端前肽,在成熟的III型胶原蛋白合成过程中被去除。因此,合适样品中III型胶原蛋白(PIIINP)的N-末端前肽的水平可以是III型胶原蛋白形成和/或降解的标志物。
PRO-C3是III型胶原蛋白形成的生物标志物,包含III型胶原蛋白N-末端前肽的C-末端新表位(即PIIINP的C-末端新表位),其中新表位在通过ADAMTS-2从前胶原蛋白中切割前肽后形成。PRO-C3生物标志物和PRO-C3测定(具体地,PRO-C3 ELISA)在WO2014/170312中描述。该测定利用特异性结合PIIINP的C末端10个氨基酸序列的单克隆抗体,因此靶向切割后形成的N末端前肽的游离C末端。PRO-C3是一种经过充分研究的肝纤维化生物标志物,与肝脏中的纤维化负荷以及不同肝脏适应症患者的纤维化进展和不良结果相关20-26。
VI型胶原蛋白是一种独特的细胞外胶原蛋白,可在细胞基底膜中形成独立的微纤维网络。它可以与包括胶原蛋白、双聚糖和蛋白聚糖的其他基质蛋白相互作用。在肌肉中,VI型胶原蛋白是肌膜的一部分并且参与将肌肉纤维锚定到肌内细胞外基质中,因此参与力传递。此外,VI型胶原蛋白的突变可导致贝特莱姆(Bethlem)肌病和乌尔里奇(Ullrich)先天性肌营养不良。据报道,VI型胶原蛋白α3链的C末端氨基酸序列在分泌后从成熟的VI型微原纤维上切割下来。然而,VI型胶原蛋白不仅仅与肌肉和肌肉损失有关。
微丝状间质VI型胶原蛋白,一种由成分链α1(VI)、α2(VI)和α3(VI)组成的三螺旋分子,在大多数结缔组织中表达,并在脂肪组织中显著表达,在脂肪组织微丝状间质VI型胶原蛋白通过其与其他ECM蛋白的互连锚定细胞。在微丝形成过程中,VI型胶原蛋白的三螺旋核心从前肽中蛋白水解释放,α3(VI)链的C末端前肽切割产生内源性营养因子,一种脂肪因子。
PRO-C6是VI型胶原蛋白形成和内源性营养因子释放的生物标志物,包含VI型胶原蛋白α3链的C5结构域的C末端表位,当新的VI型胶原蛋白分子组装到细胞外基质时该C末端表位被切割下来,并且该C-末端表位也是生物活性片段内源性营养因子(endotrophin)的C-末端表位。PRO-C6生物标志物和PRO-C6测定(具体地,PRO-C6 ELISA)在WO2016/156526中描述。该测定利用特异性结合VI型胶原蛋白α3链的C5结构域的C末端10个氨基酸序列的单克隆抗体。已在乳腺癌和肝纤维化的临床前模型中观察到内源性营养因子作为促纤维化分子、促炎性分子和促肿瘤发生分子的作用27-31。PRO-C6已被确定为慢性肾病和糖尿病性肾病患者死亡率和疾病进展的预后生物标志物32-34以及作为糖尿病患者对降糖治疗反应的预测标志物35。
胶原蛋白IV是一种主要在血管基底层发现的一类胶原蛋白类型。血管壁由两种主要类型的细胞外基质组成:基底膜和间质基质。基底膜由2个独立的聚合物网络组成:一个由IV型胶原蛋白制成,由层粘连蛋白制成,此外还有蛋白聚糖36,37和各种其他糖蛋白制成。基底膜中的胶原蛋白IV网络高度交联,并被认为可以保持机械稳定性。基底膜还含有基质金属蛋白酶(MMP),这是一大类广谱蛋白酶家族,在基底膜的降解和重塑中起作用。通过降解基底膜支架,MMP可以释放具有信号传导功能的隐蔽片段。例如,MMP9对胶原蛋白IV的切割暴露了涉及血管生成的隐蔽位点37。
C4M是MMP介导的IV型胶原蛋白降解的生物标志物,包含通过MMP12切割α1(IV)链形成的IV型胶原蛋白片段的N末端新表位。C4M生物标志物和C4M测定(具体地,C4M ELISA)之前已经进行描述38。该测定利用特异性结合所述N-末端新表位的单克隆抗体
发明内容
本发明人现在已经探索了PRO-C6和PRO-C3作为心血管疾病的生物标志物的潜力。检查了射血分数保留的心力衰竭(HFpEF)患者队列的循环中PRO-C6和PRO-C3的水平。分析基线PRO-C3和PRO-C6水平,并研究了生物标志物与结果之间的关系,发现PRO-C3和PRO-C6二者都是心力衰竭的有效诊断和预后生物标志物。
此外,本发明人还探索了C4M作为可对醛固酮拮抗剂治疗有响应的心血管疾病患者的生物标志物的潜力。检查HFpEF患者的C4M水平,发现C4M可以识别出对醛固酮拮抗剂螺内酯治疗更有可能表现出良好响应的患者。
因此,在第一方面,本发明提供一种用于检测和/或监测患者的心血管疾病和/或评估患者的心血管疾病的可能性或严重程度的免疫测定方法,其中所述方法包括:
(i)将来自患者的生物流体样品与特异性结合VI型胶原蛋白α3链的C5结构域的C末端表位的单克隆抗体接触,和/或将来自患者的生物流体样品与特异性结合III型胶原蛋白N末端前肽的C末端新表位的单克隆抗体接触,
(ii)检测和确定步骤(i)中使用的各单克隆抗体与一种或多种样品中的肽之间的结合量,和
(iii)将在步骤(ii)中确定的各单克隆抗体的所述结合量和与正常健康受试者相关的值和/或与已知疾病严重程度相关的值和/或在先前时间点从所述患者获得的值和/或预定的截止值相关联。
免疫测定可以是但不限于竞争测定或夹心测定。例如,免疫测定可以是放射免疫测定或酶联免疫吸附测定(ELISA)。这种测定是本领域技术人员已知的技术。
在某些实施方式中,心血管疾病可以是心力衰竭。特别地,心血管疾病可以是射血分数保留的心力衰竭(HFpEF)。
在某些实施方式中,该方法可以是用于评估患者心血管疾病的严重程度的方法,包括评估患者因心血管疾病和/或不良心血管事件的复合而死亡和/或住院治疗的可能性。
例如,患者可以是正在接受心血管疾病治疗的患者。
患者生物流体样品可以是但不限于血液、血清、血浆、尿液或羊水。优选地,生物流体是血清或血浆。
如本文所用,术语“单克隆抗体”是指完整抗体及保留完整抗体的结合特异性的其片段,例如Fab片段、F(ab')2片段、单链Fv片段,或本领域技术人员已知的其他此类片段。众所周知,完整抗体通常具有两对相同多肽链的“Y形”结构,每对由一条“轻”链和一条“重”链组成。每条轻链和重链的N末端区域包含可变区,而每条重链和轻链的C末端部分构成恒定区。可变区包含三个互补决定区(CDR),主要负责抗原识别。恒定区允许抗体募集免疫系统的细胞和分子。保留结合特异性的抗体片段至少包含CDR和剩余可变区的足以保留所述结合特异性的部分。
在本发明的方法中,可以使用包含本领域已知的任何恒定区的单克隆抗体。人恒定轻链分为κ轻链和λ轻链。恒定重链分为μ、δ、γ、α或ε,并将抗体的同种型分别定义为IgM、IgD、IgG、IgA和IgE。IgG同种型具有若干亚类,包括但不限于IgG1、IgG2、IgG3和IgG4。单克隆抗体可以优选地是IgG同种型,包括IgG1、IgG2、IgG3或IgG4中的任何一种。
可以使用本领域已知的方法例如Kabat等人描述的方法来确定抗体的CDR。如实施例中所述,可以从B细胞克隆产生抗体。抗体的同种型可以通过对人IgM、IgG或IgA同种型或人IgG1、IgG2、IgG3或IgG4亚类特异的ELISA确定。产生的抗体的氨基酸序列可以使用标准技术确定。例如,可以从细胞中分离RNA,并用于通过逆转录产生cDNA。然后使用扩增抗体重链和轻链的引物对cDNA进行PCR。例如,对所有VH(可变重链)序列的前导序列特异的引物可以与结合位于先前已确定的同种型恒定区中的序列的引物一起使用。轻链可以使用结合κ或λ链的3'末端的引物以及与Vκ或λ前导序列退火的引物一起扩增。可以生成全长重链和轻链并对所述全长重链和轻链测序。
在根据本发明第一方面的方法的一些实施方式中,生物流体样品与以下单克隆抗体接触,该单克隆抗体特异性结合VI型胶原蛋白α3链的C5结构域的C末端表位。优选地,所述单克隆抗体特异性结合C末端氨基酸序列KPGVISVMGT(SEQ ID No:1)(本文也称为“PRO-C6序列”,或简称为“PRO-C6”)。优选地,所述单克隆抗体不识别或特异性结合所述C末端氨基酸序列的延长形式KPGVISVMGTA(SEQ ID No:2),或所述C末端氨基酸序列的截短形式KPGVISVMG(SEQ ID No:3)。
优选地,所述抗体对C末端氨基酸序列KPGVISVMGT(SEQ ID No:1)的亲和力与所述抗体对延长的C末端氨基酸序列KPGVISVMGTA(SEQ ID No:2)和/或对截短的C末端氨基酸序列KPGVISVMG(SEQ ID No:3)的亲和力的比例为至少10:1,更优选地为至少50:1、至少100:1、至少500:1、至少1,000:1、至少10,000:1、至少100,000:1或至少1,000,000:1。
如本文所用,术语“C-末端”是指在多肽的末端,即在多肽的C-末端一端的C-末端肽序列,并且不应被解释为在其一般方向上的含义。
特异性结合PRO-C6序列的单克隆抗体可以优选地包含一个或多个选自以下的互补决定区(CDR):
优选地,该抗体包含至少2、3、4、5或6个的以上列出的CDR序列。
优选地,单克隆抗体轻链可变区包含CDR序列
优选地,单克隆抗体轻链在CDR之间包含框架序列,其中所述框架序列与以下轻链序列中CDR之间的框架序列基本相同或基本相似(其中CDR以粗体和下划线显示,框架序列以斜体显示)
优选地,单克隆抗体重链可变区包含CDR序列
优选地,单克隆抗体重链包含在CDR之间的框架序列,其中所述框架序列与以下重链序列中CDR之间的框架序列基本相同或基本相似(其中CDR以粗体和下划线显示,并且框架序列以斜体显示)
如本文所用,如果一个抗体的CDR之间的框架氨基酸序列与另一个抗体的CDR之间的框架氨基酸序列具有至少70%、80%、90%或至少95%的相似性或同一性,则上述抗体的CDR之间的框架氨基酸序列与另一个抗体的CDR之间的框架氨基酸序列基本相同或基本相似。相似或相同的氨基酸可以是连续的或不连续的。
框架序列可以包含一种或多种氨基酸取代、插入和/或缺失。氨基酸取代可以是保守的,这意味着取代的氨基酸具有与原始氨基酸相似的化学性质。技术人员会理解哪些氨基酸具有相似的化学性质。例如,以下氨基酸组具有例如相似的大小、电荷和极性等化学性质:组1:Ala、Ser、Thr、Pro、Gly;组2:Asp、Asn、Glu、Gln;组3:His、Arg、Lys;组4:Met、Leu、IIe、Val、Cys;组5:Phe、Thy、Trp。
可以使用诸如CLUSTAL程序的程序来比较氨基酸序列。该程序通过在任一序列中适当插入空位(space)来比较氨基酸序列并找到最佳比对。可以计算氨基酸同一性或相似性(同一性加上氨基酸类型的保守性)以获得最佳比对。像BLASTx这样的程序将比对最长的一段相似序列并为拟合分配一个值。因此,可以进行比较,其中发现了相似的几个区域,每个区域都有不同的分数。在本发明中考虑了两种类型的分析。优选地在框架序列的整个长度上计算同一性或相似性。
在某些优选的实施方式中,特异性结合PRO-C6序列的单克隆抗体可以包含轻链可变区序列:
和/或重链可变区序列:
(CDR以粗体和下划线显示;框架序列以斜体显示)
在根据本发明第一方面的方法的一些实施方式中,将生物流体样品与以下单克隆抗体接触,该单克隆抗体接触特异性结合III型胶原蛋白N末端前肽的C末端新表位。优选地,所述单克隆抗体特异性结合C-末端氨基酸序列CPTGPQNYSP(SEQ ID No:14)(本文也称为“PRO-C3序列”,或简称为“PRO-C3”)。更优选地,单克隆抗体不识别或特异性结合所述C末端氨基酸序列的延长形式CPTGPQNYSPQ(SEQ ID No:15),或所述C末端氨基酸序列的截短形式CPTGPQNYS(SEQ ID No:16)。
优选地,所述抗体对C-末端氨基酸序列CPTGPQNYSP(SEQ ID No:14)的亲和力与所述抗体对延长的C-末端氨基酸序列CPTGPQNYSPQ(SEQ ID No:15)和/或截短的C末端氨基酸序列CPTGPQNYS(SEQ ID No:16)的亲和力的比例为至少10:1、更优选为至少50:1、至少100:1、至少500:1、至少1,000:1、至少10,000:1、至少100,000:1或至少1,000,000:1。
特异性结合PRO-C3序列的单克隆抗体可优选包含一个或多个选自以下的互补决定区(CDR):
优选地,该抗体包含至少2、3、4、5或6个的以上列出的CDR序列。
优选地,单克隆抗体轻链可变区包含以下CDR序列
优选地,单克隆抗体轻链包含在CDR之间的框架序列,其中所述框架序列与以下轻链序列中CDR之间的框架序列基本相同或基本相似(其中CDR以粗体和下划线显示,框架序列以斜体显示)
优选地,单克隆抗体重链可变区包含以下CDR序列
优选地,单克隆抗体重链包含在CDR之间的框架序列,其中所述框架序列与以下重链序列中CDR之间的框架序列基本相同或基本相似(其中CDR以粗体和下划线显示,框架序列以斜体显示)
在某些优选的实施方式中,特异性结合PRO-C3序列的单克隆抗体可以包含以下轻链可变区序列:
和/或重链可变区序列:
(CDR以粗体和下划线显示;框架序列以斜体显示)
在根据本发明第一方面的方法的一些实施方式中,对VI型胶原蛋白α3链的C5结构域的C末端表位具有特异性的单克隆抗体的结合量,和/或对III型胶原蛋白(PIIINP)的N末端前肽的C末端新表位具有特异性的单克隆抗体的结合量是和与正常健康受试者相关的值和/或与已知疾病严重程度相关的值和/或与在先前时间点从患者获得的值相关联。
如本文所用,术语“与正常健康受试者相关的值和/或与已知疾病严重程度相关的值”是指通过上述方法确定的被认为是健康即没有心血管疾病的受试者的标准化量,和/或通过上述方法确定的对于已知患有已知严重程度的心血管疾病的受试者的标准化量。
在根据第一方面的方法的一些实施方式中,将对VI型胶原蛋白α3链的C5结构域的C末端表位具有特异性的单克隆抗体的结合量,和/或对III型胶原蛋白N末端前肽(PIIINP)的C末端新表位具有特异性的单克隆抗体的结合量,用一个或多个预定的截止值进行比较。
如本文所用,“截止值”是指经统计学确定以指示患者的心血管疾病或特定严重程度水平的心血管疾病的高可能性,其中患者样品中结合的生物标志物的测量值等于或高于以下统计截止值,该统计截止值对应于心血管疾病或该疾病的特定严重程度水平的存在或可能性的至少70%的概率、优选至少80%的概率、优选至少85%的概率、更优选至少90%的概率、最优选至少95%的概率。
对VI型胶原蛋白α3链的C5结构域的C末端表位具有特异性的单克隆抗体的结合量的预定截止值优选为至少11.0ng/mL,更优选为至少16.0ng/mL。对PIIINP的C末端新表位具有特异性的单克隆抗体的结合量的预定截止值优选为至少10.0ng/mL,更优选至少为14.0ng/mL。在这方面,通过各种统计分析的组合使用,已经发现对VI型胶原蛋白α3链的C5结构域的C末端表位具有特异性的单克隆抗体的测量的结合量至少为11ng/mL以上,特别地至少为16.0ng/mL以上,可以是心血管疾病和/或住院治疗或死亡风险增加的决定因素。通过具有至少11.0ng/mL、更优选至少16.0ng/mL的统计截止值,可以利用本发明的方法以高置信度给出心血管疾病和/或住院治疗或死亡风险增加的预后。同样地,已经发现,对PIIINP的C末端新表位具有特异性的单克隆抗体的测量的结合量至少为10ng/mL以上,特别地至少为14.0ng/mL以上,可以是心血管疾病和/或住院治疗或死亡风险增加的决定因素,并且通过具有至少10.0ng/mL PRO-C3、更优选至少14.0ng/mL的统计截止值,可以利用本发明的方法以高置信度给出心血管疾病和/或住院治疗或死亡风险增加的预后。应用这样的统计截止值特别有利,因为它引起独立的诊断测定;即它消除了与健康个体和/或具有已知疾病严重程度的患者进行任何直接比较以得出诊断结论的需要。当利用该测定来评估已经具有通常指示心血管疾病的医学体征或症状的患者(例如,通过体格检查和/或咨询医学专家确定)时,这也可能是特别有利的,因为它可以作为用于证实初始预后的快速和确定性工具,从而可能消除对更具侵入性程序的需求,并加快开始合适的治疗方案。它还可以避免长时间住院治疗的需要。在心血管疾病的特殊情况下,快速的结论性诊断可引起疾病在早期被检测到,这反过来提高总体生存机会,和/或降低住院治疗风险。
在第二个方面,本发明提供了一种在接受醛固酮拮抗剂治疗的患者中监测心血管疾病和/或评估心血管疾病严重程度的方法,其中所述方法包括:
(i)将来自接受醛固酮拮抗剂治疗的患者的生物流体样品与特异性结合VI型胶原蛋白α3链的C5结构域的C末端表位的单克隆抗体接触,和/或将来自患者的生物流体样品与特异性结合III型胶原蛋白N末端前肽的C末端新表位的单克隆抗体接触,
(ii)检测和确定步骤(i)中使用的各单克隆抗体与一种或多种样品中的肽之间的结合量,和
(iii)将在步骤(ii)中确定的各单克隆抗体的所述结合量和与正常健康受试者相关的值和/或与已知疾病严重程度相关的值和/或在先前时间点从所述患者获得的值和/或预定的截止值相关联。
这样的方法能够识别和监测对醛固酮拮抗剂治疗有最佳响应的患者。醛固酮拮抗剂(也称为抗盐皮质激素)包括螺内酯、依普利酮(Eplerenone)、坎利酮(Canrenone)、菲沙酮(Finerenone)和美西酮(Mexrenone)。优选地,醛固酮拮抗剂是螺内酯。
本发明第二方面的优选实施方式如上文关于第一方面所述。
在第三个方面,本发明提供了一种鉴定患有心血管疾病的患者的方法,该患者更可能对醛固酮拮抗剂的治疗产生有利的响应,其中所述方法包括:
(i)将来自患者的生物流体样品与特异性结合N末端氨基酸序列ILGHVPGMLL(SEQID No:27)(本文也称为“C4M序列”,或简称为“C4M序列”,或简称为“C4M”)的单克隆抗体接触,
(ii)检测和确定步骤(i)中使用的单克隆抗体与一种或多种样品中的肽之间的结合量,和
iii)将在步骤(ii)中确定的单克隆抗体的所述结合量和与可能对醛固酮拮抗剂治疗产生有利响应的患者相关的值相关联和/或和与不可能对醛固酮拮抗剂治疗产生有利响应的患者相关的值相关联和/或和预定的截止值相关联。
优选地,醛固酮拮抗剂是螺内酯。
免疫测定可以是但不限于竞争测定或夹心测定。例如,免疫测定可以是放射免疫测定或酶联免疫吸附测定(ELISA)。
在某些实施方式中,心血管疾病可以是心力衰竭。特别地,心血管疾病可以是射血分数保留的心力衰竭(HFpEF)。
患者生物流体样品可以是但不限于血液、血清、血浆、尿液或羊水。优选地,生物流体是血清或血浆。
优选地,单克隆抗体不识别或特异性结合所述N-末端氨基酸序列的延长形式EILGHVPGMLL(SEQ ID No:28),或不识别或特异性结合所述N-末端氨基酸序列的截短形式LGHVPGMLL(SEQ ID No:29)。
优选地,所述抗体对N-末端氨基酸序列ILGHVPGMLL(SEQ ID No:27)的亲和力与所述抗体对延长的N-末端氨基酸序列EILGHVPGMLL(SEQ ID No:28)和/或对截短的N末端氨基酸序列LGHVPGMLL(SEQ ID No:29)的亲和力的比例为至少10:1、更优选为至少50:1、至少100:1、至少500:1、至少1,000:1、至少10,000:1、至少100,000:1或至少1,000,000:1。
如本文所用,术语“N-末端”是指在多肽的末端,即在多肽的N-末端一端的N-末端肽序列,并且不应被解释为在其一般方向上的含义。
附图说明
图1A:未调整分析中纤维化生物标志物的每个标准差变化的主要终点的风险比(每个生物标志物一个模型)。
图1B:未调整分析中纤维化生物标志物的每标准差变化的死亡或心力衰竭入院的复合终点的危险比(每个生物标志物一个模型)。
图2:按Pro-C6(左)和Pro-C3(右)的三分位数分层的受试者中主要终点的Kaplan-Meier生存曲线。
图3:按Pro-C6(左)和Pro-C3(右)的三分位数分层的受试者中,死亡或心力衰竭入院的复合终点的Kaplan-Meier生存曲线。
具体实施方式
实施例1-Pro-C6的抗体开发
如WO 2016/156526(Nordic Bioscience,通过引用并入本文)中所述,使用VI型胶原蛋白α3链的最后10个氨基酸(即C-末端序列3168’KPGVISVMGT’3177(SEQ ID No:1))作为免疫原性肽,开发了对Pro-C6具有特异性的单克隆抗体。简而言之,用含有60μg免疫原性肽的200μl乳化抗原对4-6周龄的Balb/C小鼠进行皮下免疫。在弗氏不完全佐剂中以2周的间隔进行连续免疫,直至达到稳定的血清滴度水平,并且从第二次免疫开始对小鼠进行放血。在每次放血时,检测血清滴度并选择具有最高抗血清滴度和最佳天然反应性的小鼠进行融合。选择的小鼠休息1个月,然后在分离脾脏以进行细胞融合前3天用在100μL 0.9%氯化钠溶液中的50μg免疫原性肽静脉加强。
小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤融合伴侣细胞融合。在96孔板中培养融合细胞并在CO2培养箱中孵育。这里使用标准有限稀释来促进单克隆生长。细胞系对选择肽具有特异性且与被选择和亚克隆的延长肽(KPGVISVMGTA(SEQ ID No:2),中国肽公司,中国)或截短肽(KPGVISVMG(SEQ ID No:3),美国肽公司,美国)不具有交叉反应性。最后使用IgG柱纯化抗体。
对产生的抗体进行测序并确定CDR。
链的序列如下(CDR以下划线和粗体显示):
重链序列(小鼠lqG1同种型)
轻链序列(小鼠κ同种型)
实施例2-Pro-C3的抗体开发
如WO 2014/170312(Nordic Bioscience,通过引用并入本文)中所述,使用α1链PIIINP的序列145’-CPTGPQNYSP-’153(SEQ ID No:14)作为免疫原性肽,开发了对Pro-C3特异的单克隆抗体。简而言之,单克隆抗体的产生是通过用200μl乳化抗原和50μg PIIINP新表位C末端序列(OVA-CGG-CPTGPQNYSP(SEQ ID No:32))使用弗氏不完全佐剂皮下免疫4-5周龄的Balb/C小鼠而开始的。每2周重复免疫一次,直到达到稳定的血清滴度水平。脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合以产生杂交瘤,采用半培养基法克隆到培养皿中。使用链霉亲和素包被的板在间接ELISA中筛选上清液对校准肽和天然物质的反应性。生物素-CGG-CPTGPQNYSP(SEQ ID No:33)用作筛选肽,而游离肽CPTGPQNYSP(SEQ ID No:14)用作校准物以测试克隆的进一步特异性。
在使用链霉亲和素包被的微量滴定板上的2ng/ml生物素化肽以及来自生长的单克隆杂交瘤细胞的上清液进行的初步ELISA中使用不同的生物材料,例如来自人和大鼠的尿液、血清和羊水(AF)来评估抗体的天然反应性和亲和力。在初步测定中使用取消选择和延长的肽(即分别为具有十个氨基酸取代的校准肽和在切割位点具有一个额外氨基酸的校准肽)测试抗体特异性。使用克隆分型系统-HRP试剂盒,目录号5300-05(SouthernBiotech,Birmingham,AL,USA)确定单克隆抗体的同种型。该亚型被确定为IgG2亚型。
对产生的抗体进行测序并确定CDR。
链的序列如下(CDR以下划线和粗体显示):
重链序列(小鼠lgG2A同种型)
轻链序列(小鼠κ同种型)
实施例3-C4M的抗体开发
如先前Sand等人38(通过引用并入本文)所述,使用通过MMP-12切割VI型胶原蛋白α1链的氨基酸161至162产生的N-末端新表位序列162’-ILGHVPGMLL-’171(SEQ ID No:27)作为免疫原性肽开发了对C4M特异的单克隆抗体。简而言之,单克隆抗体的产生是通过用200μl乳化抗原和50μg免疫原性肽(ILGHVPGMLL-GGC-KLH(SEQ ID No:36))使用弗氏不完全佐剂皮下免疫4-6周龄的Balb/C小鼠而开始的。每两周进行一次免疫,直到达到稳定的血清滴度水平。选择具有最高血清滴度的小鼠进行融合。小鼠休息1个月,然后在分离脾脏进行细胞融合前3天用在100μL 0.9%氯化钠溶液中的50μg免疫原性肽静脉加强。小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤融合伴侣细胞融合。使用半固体培养基方法克隆得到的杂交瘤细胞,转移到96孔微量滴定板中用于进一步生长并在CO2培养箱中孵育。使用标准有限稀释来促进单克隆生长。
在使用链霉亲和素包被的微量滴定板上的生物素化肽(ILGHVPGMLL-K-生物素(SEQ ID No:37))和来自生长的单克隆杂交瘤的上清液进行的初步ELISA中通过置换天然样品(人、大鼠和小鼠血清、血浆和尿液)来评估单克隆抗体的天然反应性和肽亲和力。测试了克隆对游离肽(ILGHVPGMLL(SEQ ID No:27))、无义肽和延长肽(EILGHVPGMLL(SEQ IDNo:28))的特异性。使用SBA克隆分型系统-HRP试剂盒进行单克隆抗体的同种型分型。根据制造商的说明,使用HiTrap蛋白G柱从收集的所选克隆的上清液中纯化单克隆抗体,然后使用Lightning link HRP标记试剂盒用辣根过氧化物酶(HRP)标记。
从小鼠脾细胞和骨髓瘤细胞之间融合后产生的抗体产生克隆中选择具有最佳天然反应性、肽亲和力和稳定性的单克隆抗体。选择的克隆属于IgG1亚型,并且抗体对健康人、大鼠和小鼠血清以及人血浆EDTA显示出反应性,而对延长的肽或无义肽没有显示出反应性。
实施例4-PRO-C3免疫测定
PRO-C3使用在由Nordic Bioscience开发的酶联免疫吸附测定(ELISA)测量,如WO2014/170312中所述,并且也在其他出版物中详述19。简而言之,这些程序如下:
将来自Roche,目录号11940279的96孔链霉亲和素包被的ELISA板用溶解在包被缓冲液(50mM PBS-BTE+10%山梨糖醇,pH7.4)中的生物素化肽生物素-CGG-CPTGPQNYSP(SEQID No:33)包被,在20℃下避光孵育30分钟,随后在洗涤缓冲液(20mM Tris,50mM NaCl,pH7.2)中洗涤。此后,将20μL肽校准品或样品加入适当的孔中,然后将100μL HRP-缀合的单克隆抗体NB61N-62溶解在孵育缓冲液(50mM PBS-BTB+10%液体II(Roche),pH7.4)中,并将板在4℃孵育20小时并洗涤。最后,加入100μL四甲基联苯胺(tetramethylbenzinidine)(TMB)(Kem-En-Tec目录号:438OH),将板在20℃下避光孵育15分钟,为了终止反应,加入100μL终止液(1%H2SO4),并在ELISA读数器中在450nm处分析板,以650nm作为参考(MolecularDevices,SpectraMax M,CA,USA)。使用4-参数数学拟合模型绘制校准曲线。
实施例5-PRO-C6免疫测定
PRO-C6使用在Nordic Bioscience开发的酶联免疫吸附测定(ELISA)测量,如WO2016/156526中所述,以及也在其他出版物39中详细描述。简而言之,这些程序如下:
用于测定开发的ELISA板是来自Roche的链霉亲和素(目录号:11940279)包被的。使用来自Molecular Devices,SpectraMax M,(CA,USA)的ELISA读数器分析所有的ELISA板。我们根据制造商(Innovabioscience,Babraham,Cambridge,UK)的说明,使用Lightninglink HRP标记试剂盒,用辣根过氧化物酶(HRP)标记选择的单克隆抗体。用溶解在包被缓冲液(40mM Na2HPO4,7mM KH2PO4,137mM NaCl,2.7mM KCl,0.1%吐温20,1%BSA,pH7.4)中的生物素化合成肽生物素-KPGVISVMGT(SEQ ID No:38)(中国肽公司,中国)包被96孔链霉亲和素板,并在20℃下孵育30分钟。将在孵育缓冲液(40mM Na2HPO4,7mM KH2PO4,137mM NaCl,2.7mM KCl,0.1%吐温20,1%BSA,5%液体II,pH7.4)中稀释的20μL标准肽或样品添加到合适的孔中,然后加入100μL HRP缀合的单克隆抗体10A3,并在4℃下孵育21小时。最后,加入100μL四甲基联苯胺(TMB)(Kem-En-Tec目录号.4380H),并将板在20℃下避光孵育15分钟。所有上述孵育步骤都包括以300rpm振荡。在各孵育步骤之后,将板在洗涤缓冲液(20mMTris,50mM NaCl)中洗涤五次。通过添加100μL终止溶液(1%H2SO4)终止TMB反应,并在450nm处测量,以650nm作为参考。
实施例6-C4M免疫测定
如Sand等人38所述,使用在Nordic Bioscience开发的酶联免疫吸附测定(ELISA)测量C4M。简而言之,这些程序如下:
用100μL溶解在包被缓冲液(50mM Tris,含有1%牛血清白蛋白、0.1%吐温20和0.4%溴菌灵(BTB),pH8.0)中的生物素化肽(ILGHVPGMLL-K-生物素(SEQ ID No:37))包被96孔链霉亲和素包被的微量滴定板(目录号11940279,Roche Diagn ostics,Hvidovre,Denmark),并在20℃下孵育30分钟。将溶解在测定缓冲液(50mM Tris-BTB,pH8.0)中的20μL标准肽或样品加入适当的孔中,然后加入100μL在测定缓冲液中稀释的缀合的单克隆抗体,并在20℃下孵育1小时。最后,加入100μL四甲基联苯胺(TMB)(目录号4380H,Kem-En-Tec,Taastrup,Denmark)并将板在20℃下孵育15分钟。通过添加100μL终止溶液(1%H2SO4)终止TMB反应。所有孵育步骤均在避光下以300rpm振荡进行,然后在洗涤缓冲液(20mM Tris,50mM NaCl,pH7.2)中洗涤五次。使用ELISA酶标仪(VersaMax,Molecular Devices,Sunnyvale,CA,USA)以650nm作为参考在450nm处采用分光光度法分析结果。通过标准肽的连续稀释来绘制标准曲线,并使用4-参数数学拟合模型绘制。
实施例7-TOPCAT样品中的生物标志物分析
在该研究中,对参加TOPCAT试验的HFpEF受试者进行III、IV和VI型胶原蛋白形成(分别为Pro-C3、Pro-C4和Pro-C6)和降解(分别为C3M、C4M和C6M)的新表位生物标志物与受试者结果之间的关系进行评估。
方法
研究人群
该研究使用了从美国国家心脏、肺和血液研究所(National Heart,Lung,andBlood Institute)获得的TOPCAT试验的数据和生物样品。其他研究人员可通过美国国立卫生研究院Biolincc网站(National Institutes of Health Biolincc website)获得母体试验数据。
TOPCAT试验的设计和研究人群的一般特征已在之前的出版物40-42中进行了描述。简而言之,TOPCAT是一项多中心、国际、随机、双盲、安慰剂对照的螺内酯试验,招募了3445名患有HFpEF的成人在2006年8月至2012年1月期间在6个国家的>270个临床中心进行。该试验的主要结果先前已发表42。所有研究参与者都提供了书面知情同意书。
TOPCAT的纳入标准如下:年龄>50岁;基于研究筛选时至少1种HF症状和筛选前的12个月内至少1种HF体征;左心室EF>45%(根据当地读数);研究筛选前12个月内至少1次HF住院治疗或BNP(B型利钠肽)>100pg/mL或在筛选前60天内NT-proBNP(N末端pro-BNP)>360pg/mL(在没有利钠肽水平升高的替代解释的情况下);和随机化40,42前血清钾<5.0mmol/L。
先前已经详细公布了排除标准40,但包括预期寿命<3年的重度全身性疾病、显著的慢性肺部疾病、浸润性或肥厚性心肌病、缩窄性心包炎、既往心脏移植或左室辅助装置、已知的慢性肝病、重度慢性肾脏疾病(定义为估计肾小球滤过率[eGFR]<30mL/min/1.73m2或血清肌酐>2.5mg/dL)、重度高钾血症病史、已知对醛固酮拮抗剂不耐受,以及近期心肌梗塞、冠状动脉旁路移植术或经皮冠状动脉介入治疗。
该试验的主要目标是确定螺内酯是否与心血管死亡率、流产性心脏骤停或心力衰竭住院治疗的复合结果的降低有关。如前所述,所有HF住院治疗均由布里格姆妇女医院(Brigham and Women’s Hospital)的临床终点委员会根据预先指定的标准进行裁决,该委员会对研究药物分配不知情40。在本次分析中,我们检查了生物标志物与组织纤维化之间的关系以及:(1)主要终点,如上所定义;(2)死亡或心力衰竭住院治疗的复合终点,越来越多地用于HFpEF研究43。
鉴于试验人群的显著区域差异6,本研究中的分析仅限于在美洲登记的受试者。
生物标志物测定
从在美洲登记的所有参与者,从Biolincc获得储存的血浆样品,这些参与者已经储存了来自基线检查的血浆(n=206)。
使用酶联免疫吸附测定(ELISA)测量胶原蛋白形成(Pro-C3、Pro-C4和Pro-C6)和降解(C3M、C4M和C6M)的特定生物标志物。Pro-C3、Pro-C6和C4M ELISA如上文所述进行(分别参见实施例4、5和6)。Pro-C4是IV型胶原蛋白形成的已知生物标志物,Pro-C4 ELISA以Leeming等人44描述的方式进行。C3M和C6M分别是III型胶原蛋白降解和VI型胶原蛋白降解的已知生物标志物,C3M和C6M ELISA分别以Barascuk等人45和Juhl等人46描述的方式进行。
统计分析
使用正态分布变量的平均值(SD)和非正态分布连续变量的中位数(四分位距)总结参与者特征。分类变量表示为计数(百分比)。对在美洲登记的具有可用于测量感兴趣的生物标志物的样品的受试者与没有样品的受试者进行了比较。使用正态分布变量的非配对t检验、非正态分布变量的Kruskal-Wallis检验和分类变量的卡方检验或Fisher精确检验(视情况而定)。
使用Cox回归评估生物标志物与主要结果(心血管死亡、流产性心脏骤停或心力衰竭住院治疗)之间的关系,以及HF住院治疗或全因死亡的复合。构建各个生物标志物的三分位数的Kaplan-Meier生存曲线,并使用对数秩检验进行比较。适当建立调整的Cox模型,以评估未调整的关联是否独立于混杂因素,包括:(1)MAGGIC风险评分,其中包含多个人口统计学、临床和实验室变量(模型1)47;(2)MAGGIC风险评分加NT-proBNP水平(模型2);(3)先验选择的重要个体临床协变量,包括年龄、性别、糖尿病状态、估计的肾小球滤过率、收缩压(SBP),以及III/IV级NYHA和心肌梗塞病史(模型3)。所有生物标志物的危险比均标准化(按标准差增加或z分数增加1点表示),以提供生物标志物之间的直观比较。
最后,测试了各生物标志物的随机化前水平与螺内酯随机化治疗之间的相互作用,作为上述终点的预测因子。当发现相互作用时,根据生物标志物的中值进行分层生存分析,其中评估螺内酯治疗的效果。
统计显著性被定义为2尾P值<0.05。呈现的所有概率值都是2尾的。使用Matlab统计和机器学习工具箱(Matlab 2016b,Mathworks;Natwick,MA)和SPSS for Mac v22(SPSSInc.,Chicago,IL)进行统计分析。
结果
在美洲登记的具有可用于生物标志物测量的冷冻生物样品的试验参与者与没有可用于生物标志物测量的冷冻生物样品的试验参与者的比较显示在表1中。在年龄或性别的亚组之间没有显著差异。具有可用样品的受试者表现出白人参与者比例略高(85.44对比77.36%)和黑人参与者比例略低(12.62对比17.7%)。III-IV级NYHA、心肌梗塞病史、中风、外周动脉疾病或糖尿病的患病率在亚组之间没有差异,而COPD的患病率较低,而高血压和心房颤动的患病率在有可用样品的参与者中较高。降压药、利尿剂、降糖药和ACE抑制剂/ARB的使用在各组之间没有延迟。有可用样品的受试者更常接受污渍。
表1.有与没有可用血浆样品的研究参与者的一般特征。数字代表平均值(SD)、中位数(IQR)或计数(%)
组织纤维化的基线生物标志物与结果之间的关系
图1A显示未调整分析中主要终点的所有检查的纤维化生物标志物的标准化风险比(每个生物标志物一个模型)。图1B显示死亡或心力衰竭入院的相应标准化风险比。在这些分析中,pro-C6(HR=1.90;95%CI=1.54-2.34;P<0.0001)和pro-C3(HR=1.57;95%CI=1.28-1.94;P<0.0001)强烈预测试验主要终点。类似地,pro-C6(HR=1.94;95%CI=1.60-2.35;P<0.0001)和pro-C3(HR=1.56;95%CI=1.29-1.89;P<0.0001)预测死亡或心力衰竭入院的复合终点。
图2显示分别对应于Pro-C6(左)和Pro-C3(右)的三分位数的主要终点的Kaplan-Meier存活曲线。Pro-C6在广泛的绝对风险范围内对受试者进行分层。从Pro-C6的最低三分位(Pro-C6<11.0ng/ml)到最高三分位(Pro-C6>16.0ng/ml),无事件的存活率分级显著降低。对于Pro-C3,只有最高的三分位数(Pro-C3>14.0ng/ml)表现出显著降低的无事件的存活率。在死亡或心力衰竭入院时发现了类似的模式,如图3所示。
在包括Pro-C6和Pro-C3的模型中,pro-C6独立预测主要终点(HR=1.84;95%CI=1.36-2.47;P<0.0001)和死亡/HF入院(HR=1.92;95%CI=1.46-2.53;P<0.0001)。相比之下,在这些模型中,Pro-C3与主要终点并不是显著相关(HR=1.06;95%CI=0.76-1.46;P=0.74)或死亡/HF入院(HR=1.01;95%CI=0.75-1.37;P=0.93)。类似地,在包含pro-C6(作为连续变量)和pro-C3水平>14ng/ml(分布的最高三分位数,表示为二元变量)的模型中,pro-C6状态,而不是pro-C3状态独立预测主要终点和死亡/心衰入院。
仅对pro-C6进行后续调整分析(表2)。在调整了MAGGIC风险评分的模型中,ProC6强烈预测主要终点(HR=1.88;95%CI=1.52-2.33;P<0.0001)和死亡/HF入院(HR=1.91;95%CI=1.57-2.33;P<0.0001)。当对NT-proBNP进行额外调整时,Pro-C6的风险比非常相似(经调整的模型2,表2)。当针对Pro-C6进行调整时,NT-ProBNP仅对结果具有微弱的预测,而MAGGIC风险评分变得无法预测主要终点或死亡/HF入院。
同样,在针对年龄、性别、糖尿病状态、估计的肾小球滤过率、SBP、III/IV级NYHA和心肌梗死病史调整的模型(经调整的模型3,表2)中,ProC6强烈预测主要终点(HR=1.81;95%CI=1.44-2.27;P<0.0001)和死亡或HF入院的终点(HR=1.84;95%CI=1.49-2.26;P<0.0001)。
如表2所示,对于主要终点,仅包含pro-C6(0.705)的模型的Harrel C统计量比包含MAGGIC风险评分(0.552)、MAGGIC风险评分加BNP(0.582)或包含在调整模型3中的临床变量的组合(0.64)的模型的Harrel C统计量大得多。类似地,对于死亡/心力衰竭相关的住院治疗,仅包含pro-C6(0.707)的模型的Harrel C统计量比包含MAGGIC风险评分(调整的模型1:0.0.571)、MAGGIC风险评分加BNP(调整的模型2:0.602)或临床变量的组合(调整的模型3:0.623)的模型的Harrel C统计量大得多。因此,将pro-C6添加到已经包含MAGGIC风险评分、MAGGIC风险评分加BNP或临床变量的组合的模型中,导致Harrel C统计量显著改善(表2)。
表2.各种模型中pro-C6水平与主要终点发生率和死亡或HF入院率之间的关系。
*括号中的数字代表估计的标准误差。
调整的模型1:针对MAGGIC风险评分进行调整。
调整的模型2:针对MAGGIC风险评分和NT-proBNP水平进行调整。
调整的模型3:针对年龄、性别、糖尿病、估计的肾小球滤过率、收缩压(SBP)、III/IV级NYHA和心肌梗塞病史进行调整。
与随机组的相互作用
发现C4M基线水平和随机治疗组之间的显著相互作用是主要终点(C4M治疗组相互作用的P=0.0061)和死亡/HF入院(C4M治疗组相互作用的P=0.0063)的预测因子,表明基线C4M水平较低的参与者对治疗的响应更有利。对于其他检查的纤维化生物标志物,未发现与治疗组的相互作用。
讨论
研究了在参加TOPCAT试验的参与者中在基线时测量的ECM转换的生物标志物之间的关系。结果证实了,pro-C6和pro-C3,分别为通过VI型和III型胶原蛋白形成评估的纤维化生物标志物,预测了该人群中发生心血管事件的风险,以及全因死亡/心衰相关住院治疗的复合风险。特别地,Pro-C6是这些结果的强有力的独立预测因子,并且在广泛的绝对风险范围内对受试者进行分层。与MAGGIC风险评分、NT-ProBNP或临床变量的组合相比,单独的Pro-C6作为结果的预测因子表现更好。将pro-C6添加到MAGGIC风险评分中,无论是否对NT-proBNP水平进行额外调整,都会导致Harrel C统计量显著增加,这是一种模型拟合和辨别的度量,类似于接收者-操作者特征曲线。此外,发现一种IV型胶原蛋白降解的生物标志物C4M(主要存在于血管基底膜)的水平和与随机化至螺内酯与安慰剂相关的风险降低之间的相互作用。在这些事后分析中,C4M水平较高的受试者似乎从随机分配至螺内酯中获益更大。这些发现支持组织纤维化在HFpEF中的重要作用,并确定易于测量的ECM转换(turnover)的生物标志物,并可在该人群的各种风险分层环境中实施。
在本研究中,高水平的pro-C6强烈预测结果。重要的是要注意这种生物标志物的显著预后能力,其大大超过了MAGGIC风险评分、MAGGIC风险评分加NT-proBNP水平和关键临床变量的组合的预后能力。此外,pro-C6显著提高了对已经包含这些预后因素的模型的区分度;相比之下,向已经包含pro-C6的模型添加标准预测因子导致模型拟合的改进最小。因此,pro-C6似乎是HFpEF结果的一个特别强大和稳健的独立预测因子。Pro-C6因此可用于诊断HFpEF,用于鉴定抗纤维化疗法的良好候选者,和/或用于监测和表征此类疗法的功效。
本研究的一个特别有趣的发现是C4M和与螺内酯随机治疗相关的风险改变之间存在高度显著的相互作用。这些发现支持这样的观点,即胶原蛋白转换的生物标志物可以识别从螺内酯中受益的个体。本研究首次报道了胶原蛋白转换的生物标志物和与螺内酯治疗相关的临床事件的风险降低之间的相互作用。发现较低的C4M水平和与螺内酯随机化相关的风险的更大降低相关。C4M是胶原蛋白降解的标志物;因此,较低的水平表明降解减少,从而增加胶原蛋白积累,这是螺内酯的治疗目标。
除了血管,胶原蛋白IV还存在于肾小球基底膜中,可防止血浆蛋白渗漏到尿液中。然而,有趣的是,C4M与本队列中的蛋白尿无关。类似地,与C4M变化和螺内酯之间的显著相互作用相反,在最近对TOPCAT试验的分析中未发现蛋白尿和螺内酯治疗之间存在相互作用48。因此,C4M和螺内酯效应之间的相互作用不太可能由肾小球基底膜降解介导。
总之,由Pro-C6评估的纤维化强烈且独立地预测HFpEF的不良预后。相比之下,低水平的C4M似乎可以识别出对醛固酮拮抗剂(盐皮质激素受体拮抗剂)表现出特别有利反应的HFpEF患者。
在本说明书中,除非另有明确说明,否则在满足任一或两个所述条件时返回真值的运算符的意义上使用词语“或”,而不是运算符“排他的或”这要求仅满足其中一个条件。“包含”这个词是在“包括”的意义上使用的,而不是用来表示“由……组成”。全部上面承认的先前教导在此通过引用并入。对本文中任何先前出版的文件的承认不应被视为承认或表示其教导是澳大利亚或其他地方在本文发布之日的公知常识。
参考文献
1.Lam CS,Donal E,Kraigher-Krainer E,Vasan RS,射血分数保留的心力衰竭的流行病学和临床病程(Epidemiology and clinical course of heart failure withpreserved ejection fraction),Eur J Heart Fail 2011;13:18-28。
2.Lloyd-Jones DM,Hong Y,Labarthe D等,定义和设定促进心血管健康和减少疾病的国家目标:美国心脏协会到2020年及以后的战略影响目标(Defining and settingnational goals for cardiovascular health promotion and disease reduction:theAmerican Heart Association's strategic Impact Goal through 2020and beyond),Circulation 2010;121:586-613。
3.Lam CS,Donal E,Kraigher-Krainer E,Vasan RS,射血分数保留的心力衰竭的流行病学和临床病程(Epidemiology and clinical course of heart failure withpreserved ejection fraction),Eur J Heart Fail 2011;13:18-28。
4.Chirinos JA,HFpEF全身动脉血流动力学的深层表型分析(第2部分):临床和治疗考虑(Deep Phenotyping of Systemic Arterial Hemodynamics in HFpEF(Part 2):Clinical and Therapeutic Considerations),J Cardiovasc Transl Res 2017;10:261-274。
5.Rommel KP,von Roeder M,Latuscynski K等,用于表征心力衰竭患者的细胞外容积分数和射血保留分数(Extracellular Volume Fraction for Characterization ofPatients With Heart Failure and Preserved Ejection Fraction),J Am CollCardiol 2016;67:1815-25。
6.Mohammed SF,Hussain S,Mirzoyev SA,Edwards WD,Maleszewski J J,Redfield MM,射血分数保留的心力衰竭患者冠状动脉微血管稀疏和心肌纤维化(Coronarymicrovascular rarefaction and myocardial fibrosis in heart failure withpreserved ejection fraction),Circulation 2015;131:550-9。
7.Chirinos JA,Akers SR,Trieu L等,心力衰竭、左心室重构和循环一氧化氮代谢物(Heart Failure,Left Ventricular Remodeling,and Circulating Nitric OxideMetabolites),J Am Heart Assoc 2016;5。
8.Su MY,Lin LY,Tseng YH等,CMR验证的弥漫性心肌纤维化与HFpEF的舒张功能障碍有关(CMR-verified diffuse myocardial fibrosis is associated withdiastolic dysfunction in HFpEF),JACC Cardiovasc Imaging 2014;7:991-7。
9.Mohammed SF,Majure DT,Redfield MM,放大射血分数保留的心力衰竭微血管系统(Zooming in on the Microvasculature in Heart Failure With PreservedEjection Fraction),Circ Heart Fail 2016;9。
10.Richards AM,心脏纤维化的循环生物标志物:我们有没有,它们有什么用?(Circulating Biomarkers of Cardiac Fibrosis:Do We Have Any and What Use AreThey?),Circ Heart Fail 2017;10。
11.Lin LY,Wu CK,Juang JM等,心肌区域间质纤维化与心力衰竭患者的左心室内不同步相关:一项心血管磁共振研究(Myocardial Regional Interstitial Fibrosis isAssociated With Left Intra-Ventricular Dyssynchrony in Patients With HeartFailure:A Cardiovascular Magnetic Resonance Study),Sci Rep 2016;6:20711。
12.Duca F,Kammerlander AA,Zotter-Tufaro C等,射血分数保留的心力衰竭的间质纤维化、功能状态和结果:前瞻性心脏磁共振成像研究的见解(InterstitialFibrosis,Functional Status,and Outcomes in Heart Failure With PreservedEjection Fraction:Insights From a Prospective Cardiac Magnetic ResonanceImaging Study),Circ Cardiovasc Imaging 2016;9。
13.Roy C,Slimani A,de Meester C等,心血管磁共振检测弥漫性心肌纤维化与射血分数保留的心力衰竭的相关性和预后意义(Associations and prognosticsignificance of diffuse myocardial fibrosis by cardiovascular magneticresonance in heart failure with preserved ejection fraction),J CardiovascMagn Reson 2018;20:55。
14.Schelbert EB,Fridman Y,Wong TC等,射血分数保留的心肌纤维化和心力衰竭之间的时间关系:与基线疾病严重程度和随后的结果的关联(Temporal RelationBetween Myocardial Fibrosis and Heart Failure With Preserved EjectionFraction:Association With Baseline Disease Severity and Subsequent Outcome),JAMA Cardiol 2017。
15.Nielsen MJ,Karsdal MA,Kazankov K等,纤维化不仅仅是纤维化-乙型肝炎和丙型肝炎引起的损伤之间的基底膜建模和胶原蛋白代谢不同(Fibrosis is not justfibrosis-basement membrane modelling and collagen metabolism differs betweenhepatitis B-and C-induced injury),Aliment Pharmacol Ther 2016;44:1242-1252。
16.Haykowsky MJ,Kouba EJ,Brubaker PH,Nicklas BJ,Eggebeen J,KitzmanDW,射血分数保留的老年心力衰竭患者的骨骼肌组成及其与运动不耐受的关系(Skeletalmuscle composition and its relation to exercise intolerance in older patientswith heart failure and preserved ejection fraction),Am J Cardiol 2014;1 13:121 1-6。
17.Rossignol P,Ferreira JP,Zannad F,在心力衰竭中使用生物标志物确定纤维化机制表型和抗纤维化反应:一个单一的生物标志物不适合所有设置(Fibrosismechanistic phenotyping and antifibrotic response determination withbiomarkers in heart failure:one single biomarker may not fit all settings),Eur J Heart Fail 2018;20:1300-1302。
18.Ravassa S,Trippel T,Bach D等,基于生物标志物的心肌纤维化表型鉴定射血分数保留的心力衰竭患者对螺内酯的有益作用有抵抗力:来自Aldo-DHF试验的结果(Biomarker-based phenotyping of myocardial fibrosis identifies patients withheart failure with preserved ejection fraction resistant to the beneficialeffects of spironolactone:results from the Aldo-DHF trial),Eur J Heart Fail2018;20:1290-1299。
19.Nielsen MJ,Nedergaard AF,Sun S等,新表位特异性PRO-C3 ELISA测量与肝脏和肌肉参数相关的III型胶原蛋白的真实形成(The neo-epitope specific PRO-C3ELISA measures true formation of type III collagen associated with liver andmuscle parameters),Am.J.Transl.Res.2013;5:303-315。
20.Nielsen MJ,Veidal SS,Karsdal MA等,血浆Pro-C3(N末端III型胶原蛋白前肽)可预测慢性丙型肝炎患者的纤维化进展(Plasma Pro-C3(N-terminal type II Icollagen propeptide)predicts fibrosis progression in patients with chronichepatitis C),Liver Int.2015;35:429—437。
21.Daniels SJ,Leeming DJ,Eslam M等,ADAPT:包含PRO-C3的算法可准确识别NAFLD和晚期纤维化患者(ADAPT:An algorithm incorporating PRO-C3 accuratelyidentifies patients with NAFLD and advanced fibrosis),Hepatology 2018。
22.Leeming DJ,Karsdal MA,Byrjalsen I等,用于检测门静脉高压症的细胞外基质蛋白的新型血清新表位标志物(Novel serological neo-epitope markers ofextracellular matrix proteins for the detection of portal hypertension),Aliment.Pharmacol.Ther.2013;38:1086-96。
23.Jansen C,Leeming DJ,Mandorfer M等,HIV/HCV共感染患者的PRO-C3水平反映了纤维化阶段和门静脉高压程度(PRO-C3-Levels in Patients with HIV/HCV-Co-Infection Reflect Fibrosis Stage and Degree of Portal Hypertension),Avila MA,ed.PLoS One 2014;9:e108544。
24.Karsdal MA,Hjuler ST,Luo Y等,通过血清胶原蛋白转换谱评估肝纤维化进展和消退(Assessment of liver fibrosis progression and regression by aserological collagen turnover profile),Am.J.Physiol.Gastrointest.LiverPhysiol.2019;316:G25-G31。
25.Nielsen SH,Mygind ND,Michelsen MM等,无阻塞性冠状动脉疾病的心绞痛女性加速胶原蛋白转换:一项iPOWER子研究(Accelerated collagen turnover in womenwith angina pectoris without obstructive coronary artery disease:An iPOWERsubstudy),Eur.J.Prev.Cardiol.2018;25:719-727。
26.Hansen JF,Juul Nielsen M,Nystrom K等,PRO-C3:一种新的更精确的慢性丙型肝炎患者肝纤维化胶原蛋白标志物(PRO-C3:a new and more precise collagenmarker for liver fibrosis in patients with chronic hepatitis C),Scand.J.Gastroenterol.2018;53:83-87。
27.Park J,Scherer PE,Calle E等,脂肪细胞来源的内营养因子促进恶性肿瘤进展(Adipocyte-derived endotrophin promotes malignant tumor progression),J.Clin.Invest.2012;122:4243-4256。
28.Lee C,Kim M,Lee JH等,COL6A3衍生的内营养因子在慢性肝病病理中连接肝细胞之间的相互作用(COL6A3-derived endotrophin links reciprocal interactionsamong hepatic cells in the pathology of chronic liver disease),J.Pathol.2018。
29.Sun K,Park J,Gupta OT等,内营养因子引发脂肪组织纤维化和代谢功能障碍(Endotrophin triggers adipose tissue fibrosis and metabolic dysfunction),Nat.Commun.2014;5:3485。
30.Park J,Morley TS,Scherer PE,抑制内养蛋白,一种胶原蛋白VI的裂解产物,赋予顺铂对肿瘤的敏感性(Inhibition of endotrophin,a cleavage product ofcollagen VI,confers cisplatin sensitivity to tumours),EMBO Mol.Med.2013;5:935-48。
31.Bu D,Crewe C,Kusminski CM等,人类内营养因子作为恶性肿瘤生长的驱动力(Human endotrophin as a driver of malignant tumor growth),JCI Insight 2019。
32.Rasmussen DGK,Hansen TW,von Scholten BJ等,较高的胶原蛋VI形成与2型糖尿病和微量白蛋白尿患者的全因死亡率相关(Higher Collagen VI Formation IsAssociated With All-Cause Mortality in Patients With Type 2Diabetes andMicroalbuminuria),Diabetes Care 2018:dc172392。
33.Fenton A,Jesky MD,Ferro CJ等,血清内营养蛋白是一种VI型胶原蛋白裂解产物,与慢性肾病死亡率增加有关(Serum endotrophin,a type VI collagen cleavageproduct,is associated with increased mortality in chronic kidney disease),Aguilera Al,编辑,PLoS One 2017;12:e0175200。
34.Rasmussen DGK,Fenton A,Jesky M等,尿内营养蛋白可预测慢性肾病患者的疾病进展(Urinary endotrophin predicts disease progression in patients withchronic kidney disease),Sci.Rep.2017;7:17328。
35.Karsdal MA,Henriksen K,Genovese F等,血清内营养蛋白确定2型糖尿病患者对PPARγ激动剂的最佳反应(Serum endotrophin identifies optimal responders toPPARy agonists in type 2diabetes),Diabetologia 2017;60。
36.Timpl R,基底膜的大分子组织(Macromolecular organization of basementmembranes),Curr Opin Cell Biol 1996;8:618-24。
37.Jayadev R,Sherwood DR,基底膜(Basement membranes),Curr Biol 2017;27:R207-R211。
38.Sand JM,Larsen L,Hogaboam C等,MMP介导的IV型胶原蛋α1和α3链的降解反映了两种新型生物标志物测定的实验和临床纤维化验证中的基底膜重塑(MMP mediateddegradation of type IV collagen alpha 1and alpha 3chains reflects basementmembrane remodeling in experimental and clinical fibrosis-validation of twonovel biomarker assays),PLoS One 2013;8:e84934。
39.Sun S,Henriksen K,Karsdal MA等,响应长期固定的III型和VI型胶原蛋白转换率(Collagen Type III and VI Turnover in Response to Long-TermImmobilization),PLoS One 2015;10:e0144525。
40.Desai AS,Lewis EF,Li R等,用醛固酮拮抗剂试验治疗保留的心功能性心力衰竭的原理和设计:螺内酯治疗有症状的射血分数保留的心力衰竭患者的随机对照研究(Rationale and design of the Treatment of Preserved Cardiac Function HeartFailure with an Aldosterone Antagonist Trial:A randomized,controlled study ofspironolactone in patients with symptomatic heart failure and preservedejection fraction),Am.Heart J.2011;162:966-972.e10。
41.Pfeffer MA,Claggett B,Assmann SF等,使用醛固酮拮抗剂(TOPCAT)试验治疗保留的心功能性心力衰竭患者和结果的区域差异(Regional variation in patientsand outcomes in the Treatment of Preserved Cardiac Function Heart FailureWith an Aldosterone Antagonist(TOPCAT)trial),Circulation 2015;131:34-42。
42.Pitt B,Pfeffer MA,Assmann SF等人,螺内酯治疗射血分数保留的心力衰竭(Spironolactone for heart failure with preserved ejection fraction),N Engl JMed 2014;370:1383-92。
43.Lam CSP,Gamble GD,Ling LH等,一项前瞻性国际多种族队列研究中射血分数保留与降低的心力衰竭相关的死亡率(Mortality associated with heart failure withpreserved vs.reduced ejection fraction in a prospective international multi-ethnic cohort study),Eur Heart J 2018;39:1770-1780。
44.Leeming DJ,Nielsen MJ,Dai Y等,特异性针对IV型胶原蛋白(P4NP 7S)7S结构域的酶联免疫吸附血清测定:与肝纤维化过程中细胞外基质重塑相关的标志物(Enzyme-linked immunosorbent serum assay specific for the 7S domain of Collagen TypeIV(P4NP 7S):A marker related to the extracellular matrix remodeling duringliver fibrogenesis),Hepatol Res 2012;42:482-93。
45.Barascuk N,Veidal SS,Larsen L等,一种与肝纤维化相关的细胞外基质重塑的新测定:MMP-9蛋白水解揭示的III型胶原蛋白新表位的酶联免疫吸附测定(ELISA)(Anovel assay for extracellular matrix remodeling associated with liverfibrosis:An enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA)for a MMP-9proteolytically revealed neo-epitope of type III collagen),Clin Biochem 2010;43:899-904。
46.Juhl P,Bay-Jensen AC,Karsdal M,Siebuhr AS,Franchimont N,Chavez J,胶原蛋白转换的血清生物标志物作为弥漫性系统性硬化症的潜在诊断工具:一项横断面研究(Serum biomarkers of collagen turnover as potential diagnostic tools indiffuse systemic sclerosis:A cross-sectional study),PLoS One 2018;13:e0207324。
47.Pocock SJ,Ariti CA,McMurray JJ等,预测心力衰竭的存活率:基于30项研究的39372名患者的风险评分(Predicting survival in heart failure:a risk scorebased on 39 372patients from 30studies),Eur Heart J 2013;34:1404-13。
48.Selvaraj S,Claggett B,Shah SJ等,白蛋白尿的预后价值和螺内酯对射血分数保留的心力衰竭的影响(Prognostic Value of Albuminuria and Influence ofSpironolactone in Heart Failure With Preserved Ejection Fraction),Circ HeartFail 2018;1 1:e005288。
Claims (28)
1.一种用于检测和/或监测患者的心血管疾病和/或评估患者的心血管疾病的可能性或严重程度的免疫测定方法,其中,所述方法包括:
(i)将来自患者的生物流体样品与特异性结合VI型胶原蛋白α3链的C5结构域的C末端表位的单克隆抗体接触,和/或将来自患者的生物流体样品与特异性结合III型胶原蛋白N末端前肽的C末端新表位的单克隆抗体接触,
(ii)检测和确定步骤(i)中使用的各单克隆抗体与一种或多种样品中的肽之间的结合量,和
(iii)将在步骤(ii)中确定的各单克隆抗体的所述结合量和与正常健康受试者相关的值和/或与已知疾病严重程度相关的值和/或在先前时间点从所述患者获得的值和/或预定的截止值相关联。
2.根据权利要求1所述的方法,其中,所述心血管疾病是心力衰竭。
3.根据权利要求2所述的方法,其中,所述心血管疾病是射血分数保留的心力衰竭(HFpEF)。
4.根据权利要求1所述的方法,其中,所述方法是用于评估患者的心血管疾病严重程度的方法,包括评估患者因心血管疾病和/或不良心血管事件的复合而死亡和/或住院治疗的可能性。
5.根据权利要求1所述的方法,其中,所述患者是正在接受心血管疾病治疗的患者。
6.根据权利要求1所述的方法,其中,步骤(i)包括将来自患者的生物流体样品与特异性结合VI型胶原蛋白α3链的C5结构域的C末端表位的单克隆抗体接触。
7.根据权利要求6所述的方法,其中,所述单克隆抗体特异性结合C-末端氨基酸序列KPGVISVMGT(SEQ ID No:1)。
8.根据权利要求7所述的方法,其中,所述单克隆抗体不识别或特异性结合所述C末端氨基酸序列的延长形式KPGVISVMGTA(SEQ ID No:2),或所述C末端氨基酸序列的截短形式KPGVISVMG(SEQ ID No:3)。
9.根据权利要求1所述的方法,其中,步骤(i)包括将来自所述患者的生物流体样品与特异性结合III型胶原蛋白N-末端前肽的C末端新表位的单克隆抗体接触。
10.根据权利要求9所述的方法,其中,所述单克隆抗体特异性结合C末端氨基酸序列CPTGPQNYSP(SEQ ID No:14)。
11.根据权利要求10所述的方法,其中,所述单克隆抗体不识别或特异性结合所述C末端氨基酸序列的延长形式CPTGPQNYSPQ(SEQ ID No:15),或所述C末端氨基酸序列的截短形式CPTGPQNYS(SEQ ID No:16)。
12.根据权利要求1所述的方法,其中,所述生物流体是血清或血浆。
13.根据权利要求1所述的方法,其中,所述免疫测定是竞争测定或夹心测定。
14.根据权利要求1所述的方法,其中,所述免疫测定是放射免疫测定或酶联免疫吸附测定。
15.一种在接受醛固酮拮抗剂治疗的患者中监测心血管疾病和/或评估心血管疾病的严重程度的方法,其中,所述方法包括:
(i)将来自接受醛固酮拮抗剂治疗的患者的生物流体样品与特异性结合VI型胶原蛋白α3链的C5结构域的C末端表位的单克隆抗体接触,和/或将来自患者的生物流体样品与特异性结合III型胶原蛋白N末端前肽的C末端新表位的单克隆抗体接触,
(ii)检测和确定步骤(i)中使用的各单克隆抗体与一种或多种样品中的肽之间的结合量,和
(iii)将在步骤(ii)中确定的各单克隆抗体的所述结合量和与正常健康受试者相关的值和/或与已知疾病严重程度相关的值和/或在先前时间点从所述患者获得的值和/或预定的截止值相关联。
16.根据权利要求15所述的方法,其中,所述醛固酮拮抗剂是螺内酯。
17.根据权利要求15所述的方法,其中,所述心血管疾病是心力衰竭。
18.根据权利要求17所述的方法,其中,所述心血管疾病是射血分数保留的心力衰竭(HFpEF)。
19.根据权利要求15所述的方法,其中,所述方法是用于评估患者的心血管疾病严重程度的方法,包括评估患者因心血管疾病和/或不良心血管事件的复合而死亡和/或住院治疗的可能性。
20.根据权利要求15的方法,其中,步骤(i)包括将来自患者的生物流体样品与特异性结合VI型胶原蛋白α3链的C5结构域的C末端表位的单克隆抗体接触。
21.根据权利要求20所述的方法,其中,所述单克隆抗体特异性结合C末端氨基酸序列KPGVISVMGT(SEQ ID No:1)。
22.根据权利要求21所述的方法,其中,所述单克隆抗体不识别或特异性结合所述C末端氨基酸序列的延长形式KPGVISVMGTA(SEQ ID No:2),或所述C末端氨基酸序列的截短形式KPGVISVMG(SEQ ID No:3)。
23.根据权利要求15所述的方法,其中,步骤(i)包括将来自所述患者的生物流体样品与特异性结合III型胶原蛋白N-末端前肽的C末端新表位的单克隆抗体接触。
24.根据权利要求23所述的方法,其中,所述单克隆抗体特异性结合C-末端氨基酸序列CPTGPQNYSP(SEQ ID No:14)。
25.根据权利要求24所述的方法,其中,所述单克隆抗体不识别或特异性结合所述C末端氨基酸序列的延长形式CPTGPQNYSPQ(SEQ ID No:15),或所述C末端氨基酸序列的截短形式CPTGPQNYS(SEQ ID No:16)。
26.根据权利要求15所述的方法,其中,所述生物流体是血清或血浆。
27.权利要求15所述的方法,其中,所述免疫测定是竞争测定或夹心测定。
28.权利要求15所述的方法,其中,所述免疫测定是放射免疫测定或酶联免疫吸附测定。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US201962857362P | 2019-06-05 | 2019-06-05 | |
US62/857,362 | 2019-06-05 | ||
PCT/EP2020/065698 WO2020245404A1 (en) | 2019-06-05 | 2020-06-05 | Assay for assessing heart failure |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN114270190A true CN114270190A (zh) | 2022-04-01 |
Family
ID=71016555
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN202080041154.9A Pending CN114270190A (zh) | 2019-06-05 | 2020-06-05 | 用于评估心力衰竭的测定 |
Country Status (6)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US20220317133A1 (zh) |
EP (1) | EP3980785A1 (zh) |
JP (1) | JP2022535513A (zh) |
KR (1) | KR20220038663A (zh) |
CN (1) | CN114270190A (zh) |
WO (1) | WO2020245404A1 (zh) |
Families Citing this family (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20240003906A1 (en) * | 2020-04-16 | 2024-01-04 | Nordic Bioscience A/S | Biomarker of Fibrosis |
GB202102277D0 (en) * | 2021-02-18 | 2021-04-07 | Nordic Bioscience As | Immunoassay for detecting Eosinophilic Esophagitis |
Family Cites Families (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP2800972A1 (en) * | 2012-01-02 | 2014-11-12 | Institut National de la Sante et de la Recherche Medicale (INSERM) | Methods for the detection and the treatment of diastolic dysfunction |
GB201306792D0 (en) | 2013-04-15 | 2013-05-29 | Nordic Bioscience As | PIIINP Neo-epitope assay |
GB201505654D0 (en) | 2015-04-01 | 2015-05-13 | Nordic Bioscience As | Immunoassay for collagen type VI sequence |
-
2020
- 2020-06-05 EP EP20731073.1A patent/EP3980785A1/en active Pending
- 2020-06-05 JP JP2021571375A patent/JP2022535513A/ja active Pending
- 2020-06-05 KR KR1020227000165A patent/KR20220038663A/ko unknown
- 2020-06-05 CN CN202080041154.9A patent/CN114270190A/zh active Pending
- 2020-06-05 WO PCT/EP2020/065698 patent/WO2020245404A1/en unknown
- 2020-06-05 US US17/616,296 patent/US20220317133A1/en active Pending
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
EP3980785A1 (en) | 2022-04-13 |
WO2020245404A1 (en) | 2020-12-10 |
JP2022535513A (ja) | 2022-08-09 |
US20220317133A1 (en) | 2022-10-06 |
KR20220038663A (ko) | 2022-03-29 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP6408051B2 (ja) | 病理学バイオマーカーアッセイ | |
JP4733704B2 (ja) | ナトリウム利尿ペプチドを測定するための方法および組成物並びにその使用 | |
US20070161041A1 (en) | Identification of feline or canine probnp | |
JP7191813B2 (ja) | 急性心不全に罹患している対象におけるうっ血を評価するためのアドレノメデュリン | |
JP5717178B2 (ja) | 特発性間質性肺炎の検出方法 | |
KR20110000548A (ko) | 신장암의 진단 또는 검출을 위한 조성물 및 방법 | |
JP2023109755A (ja) | Vi型コラーゲン配列に関するイムノアッセイ | |
CN114270190A (zh) | 用于评估心力衰竭的测定 | |
KR20120064072A (ko) | 콜라겐 네오에피토프 항체 | |
WO2021165465A1 (en) | Detection method of circulating bmp10 (bone morphogenetic protein 10) | |
JP2023516615A (ja) | ショックを患っている患者におけるnt-adm抗体治療法ガイダンス、モニタリング、及び層別化のためのdpp3 | |
KR20220057546A (ko) | 심부전을 평가하기 위한 분석법 | |
CN115427442A (zh) | 纤维化的生物标记物 | |
JP2020514368A (ja) | Xviii型コラーゲンアッセイ | |
US20240125802A1 (en) | Immunoassay for Detecting Eosinophilic Esophagitis | |
CN111602056B (zh) | Xvi型胶原蛋白测定 | |
RU2776811C2 (ru) | Мониторинг терапии при лечении связывающим веществом против адреномедуллина (adm) | |
JP2007332122A (ja) | 抗nc1モノクローナル抗体反応性ペプチド |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination |