CN114269739A - 作为组蛋白脱乙酰酶抑制剂的1,3,4-二唑衍生物 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及适合作为HDAC6抑制剂的式(I)
二唑化合物。还公开了其制备方法以及其在治疗HDAC6相关疾病或病症中的医学用途。
Description
技术领域
本发明涉及药物化学领域，并且更具体地涉及组蛋白脱乙酰酶(histonedeacetylase，HDAC)领域。本文公开了适合作为HDAC抑制剂的小有机化合物、及其合成方法以及其用于治疗HDAC相关疾病或病症的用途。
背景技术
组蛋白脱乙酰酶(HDAC)是调节染色质结构和基因表达的表观遗传调节物，并且也越来越多地与非表观遗传生物学途径的控制相关。当这些金属酶的活性水平改变时，例如当其过表达时，可发生自然基因表达和生物过程的调节异常，最终导致发病。事实上，众所周知，HDAC在不同疾病和病症(例如神经障碍或癌症)中发挥着重要作用。因此，控制HDAC活性(特别是通过抑制其)代表了过去几十年的目标治疗策略。不同药物类别的HDAC抑制剂要么已经在市场上出售-例如用于治疗淋巴瘤的伏立诺他(Vorinostat)或作为抗癫痫药的丙戊酸-要么正处于开发或临床前和临床试验中，用于多种其他病症例如神经退行性病症等。
HDAC可根据其精确的作用模式分为I至IV类。I、II和IV类由锌依赖性机制定义，而III类HDAC需要NAD+作为辅因子。II类HDAC还可细分为IIa类(HDAC4、-5、-7、-9)和IIb类(HDAC6、-10)。尽管可能会出现一些功能重叠，但这些同种型通常各自参与不同的生物学途径。
所谓的泛谱或广谱HDAC抑制剂，例如上面提到的伏立诺他，几乎不谨慎地靶向不同的HDAC。不出所料，使用这些抑制剂会产生相当大的毒性。近年来，选择性靶向HDAC同种型并且导致较少的脱靶副作用的HDAC抑制剂受到了更多的关注。所述选择性抑制剂包括HDAC6抑制剂。HDAC6调节异常与多种病理状况相关，并且已经报道了这种同种型的抑制可用于靶向癌症、自身免疫性和神经退行性病症、炎症以及多种其他疾病(Seidel et al.，Epigenomics，2015，7(1)：103-118)。欧洲专利EP2483242B1公开了一系列用于治疗癌症的HDAC6选择性抑制剂；而国际专利申请WO2018/087082报道了其在治疗自身免疫病方面的有用性。国际专利申请WO 2017/018805、WO 2017/018803和WO 2017/023133以及欧洲专利申请EP 3330259还公开了基于
二唑部分的HDAC6抑制剂。
鉴于这种巨大的治疗潜力，一直存在开发强效且具有选择性的HDAC6抑制剂的需要，理想情况下，这些抑制剂还应具有良好的药动学特性。此外，从工业角度来看，所述化合物的直接合成是期望的。
发明概述
本发明人令人惊讶地发现了一系列满足上述标准的化合物。
因此，在第一方面中，本发明涉及式(I)化合物或其盐、溶剂合物、立体异构体或前药，
其中
W、X、Y或Z中的一个或两个是N，并且W、X、Y和Z中的其余项各自是CH；或者W、X、Y和Z中的每一个是CH；
R1是H；未经取代或经取代的烷基；或卤素；以及
R2是未经取代或经取代的芳族或非芳族杂环，其中所述环包含1至4个氮原子，并且其中是R2基团的这些环氮原子之一与式(I)的其余部分形成了键合。
本发明人还开发了可以容易地合成本发明化合物的方法。因此，在第二方面中，本发明提供了制备本发明第一方面的化合物的方法。
本发明另一方面涉及药物组合物，其包含本发明第一方面的化合物或其盐、溶剂合物、立体异构体或前药，以及至少一种可药用赋形剂。
本发明的另一方面涉及通式(I)化合物或其盐、溶剂合物、立体异构体或前药，其用作药物。该药物优选用于预防或治疗HDAC6相关疾病或病症。
发明详述
本发明的第一方面涉及式(I)化合物或其盐、溶剂合物、立体异构体或前药，
其中
W、X、Y或Z中的一个或两个是N，并且W、X、Y和Z中的其余项各自是CH；或者W、X、Y和Z中的每一个是CH；
R1是H；未经取代或经取代的烷基；或卤素；以及
R2是未经取代或经取代的芳族或非芳族杂环，其中所述环包含1至4个氮原子，并且其中是R2基团的这些环氮原子之一与式(I)的其余部分形成了键合。
技术人员理解，当陈述W、X、Y或Z是CH时，是所述CH基团的碳原子而不是氢原子是包含所述W、X、Y或Z的六元环的环成员之一。
在一个实施方案中，W、X、Y或Z的两个是N，并且W、X、Y和Z中的其余项各自是CH，换言之，包含所述W、X、Y和Z的六元环是二嗪，并且特别是哒嗪、嘧啶或吡嗪。优选二嗪是嘧啶，并且更优选是其中X和Y是N并且Z和W是CH的嘧啶。
在一个优选实施方案中，W、X、Y或Z之一是N，并且W、X、Y和Z中的其余项各自是CH，换言之，包含所述W、X、Y和Z的六元环是吡啶。在一个具体实施方案中，其是其中Z或W是N并且W、X、Y和Z中的其余项各自是CH的吡啶。在一个更优选的具体实施方案中，其是其中X或Y是N并且W、X、Y和Z中的其余项各自是CH的吡啶。
在另一个优选实施方案中，W、X、Y和Z都是CH。
R1是H；未经取代或经取代的烷基；或卤素。
在本发明的上下文中，术语“烷基”是指由碳和氢原子组成的直链、支链或环状烃链，其不含不饱和现象，具有1至6个碳原子(C1-C6烷基)，优选1至3个碳原子(C1-C3烷基)，并且通过单键连接到分子的其余部分。烷基的一些非限制性实例是甲基、乙基、正丙基、异丙基、环丙基、正丁基、叔丁基、正戊基或环己基。优选的具体烷基是甲基或乙基。特别优选甲基。
本文中对取代的提及表示指定的基团可以在一个或更多个可用位置被一个或更多个取代基取代。
当R1是经取代烷基时，取代基可以是卤素。优选的卤素是Cl或F。在一个具体实施方案中，卤素是Cl。在另一个具体实施方案中，卤素是F。
当R1是卤素时，优选卤素是Cl或F。在一个具体实施方案中，卤素是Cl。在另一个具体实施方案中，卤素是F。
本公开内容通篇使用的术语“卤素”是指溴、氯、碘或氟。
在一个优选的实施方案中，R1是H。
在一个实施方案中，上述R1实施方案中的任一个与上述W、X、Y或Z实施方案中的任一个组合。
在一个优选的具体实施方案中，包含W、X、Y和Z的六元环是吡啶，其中X或Y是N，并且W、X、Y和Z中的其余项各自是CH；并且R1是H。
在另一个优选的具体实施方案中，W、X、Y和Z全部是CH；并且R1是H。
R2是未经取代或经取代的芳族或非芳族杂环，其中该环包含1至4个氮原子，并且其中是R2基团的这些环氮原子之一与式(I)的其余部分形成了键合。
在本发明的上下文中，术语“杂环(heterocycle)”和“杂环(heterocyclic ring)”互换使用，并且是指包含碳和氮原子或由碳和氮原子构成的3至14元环，优选5至10元环。杂环可以是芳族的(在本文中也称为杂芳基环或杂芳基)；或非芳族的，包括饱和或部分不饱和的环以及包含至少一个芳族环和至少另一个非芳族环的多环二者。杂环可以是单环或多环，例如单环、二环或三环，或优选单环或二环。多环在本领域中也称为多环体系。在一个实施方案中，多环是稠合的、螺环的或桥接的，或呈现这些类型的环连接中的多于一种。在一个实施方案中，多环是稠合或桥接的多环，并且更优选地其是稠合的多环。二环优选为稠合二环。
在一个优选的实施方案中，杂环是杂芳基环。
在一个优选的实施方案中，杂芳基环是5元单环杂芳基环，例如吡咯基；二唑基，例如咪唑基或吡唑基；三唑基，例如1，2，3-三唑基或1，2，4-三唑基；或四唑基。更优选地，杂芳基环为咪唑基或1，2，3-三唑基环，并且更优选其是1，2，3-三唑基环。
在一个优选的具体实施方案中，包含W、X、Y和Z的六元环是吡啶，其中X或Y是N，并且W、X、Y和Z中的其余项各自是CH；R1是H；并且R2是咪唑基。
在另一个优选的具体实施方案中，W、X、Y和Z全部是CH；R1是H；并且R2是咪唑基。
在一个优选的具体实施方案中，包含W、X、Y和Z的六元环是吡啶，其中X或Y是N，并且W、X、Y和Z中的其余项各自是CH；R1是H；并且R2是1，2，3-三唑基。
在另一个优选的具体实施方案中，W、X、Y和Z全部是CH；R1是H；并且R2是1，2，3-三唑基。
优选的1，2，3-三唑基是1H-1，2，3-三唑基。
在一个实施方案中，杂芳基环是6元单环杂芳基环，例如吡啶基、二嗪基、三嗪基或四嗪基。
在一个具体实施方案中，包含W、X、Y和Z的六元环是吡啶，其中X或Y是N，并且W、X、Y和Z中的其余项各自是CH；R1是H；并且R2是6元单环杂芳基环。
在一个具体的实施方案中，W、X、Y和Z全部是CH；R1是H；并且R2是6元单环杂芳基环。
在一个优选的实施方案中，杂芳基环是9元二环杂芳基环。优选地，9元二环杂芳基环由6元环与5元环稠合形成。更优选地，是5元环的氮原子与式(I)的其余部分形成了键合。
在一个优选的实施方案中，在稠合环中，稠合键不包含氮原子，即其是碳-碳键。这意味着，当是5元环的氮原子与式(I)的其余部分形成了键合时，6元环可以包含零至三个氮原子(在其环结构中，即不包含由该环的任何取代基含有的任何氮原子)。
在一个优选的实施方案中，6元环不包含氮原子(包括稠合键)，并且因此R2的1至4个氮环原子必须为1至3个氮环原子且必须全部包含在5元环中，(不包括稠合键)。这样的杂芳基环的一些实例是吲哚基、苯并咪唑基、吲唑基和苯并三唑基环。最优选地，杂芳基环是苯并咪唑基或苯并三唑基环。
在这些实施方案的任一个中，5元环是咪唑基或1，2，3-三唑基环，并且其更优选是1，2，3-三唑基环。
在一个优选的具体实施方案中，包含W、X、Y和Z的六元环是吡啶，其中X或Y是N，并且W、X、Y和Z中的其余项各自是CH；R1是H；并且R2是苯并咪唑基或苯并三唑基环。
在一个具体的实施方案中，W、X、Y和Z全部是CH；R1是H；并且R2是苯并咪唑基或苯并三唑基环。
在一个实施方案中，杂芳基环是10元二环杂芳基环。优选地，该10元二环杂芳基环由6元环与6元环稠合形成，并且更优选地6元环之一不包含氮环原子(包括稠合键)。
在一个具体实施方案中，包含W、X、Y和Z的六元环是吡啶，其中X或Y是N，并且W、X、Y和Z中的其余项各自是CH；R1是H；并且R2是如以上定义的10元二环杂芳基环。
在一个具体的实施方案中，W、X、Y和Z全部是CH；R1是H；并且R2是如以上定义的10元二环杂芳基环。
在任何上述实施方案中，R2杂环可以是未经取代的，或者其可以在一个或更多个可用位置被取代基取代，或者，如果适用的话，被多于一个取代基取代。
合适的R2取代基包括：
-烷基、烷氧基、硫代烷氧基、和其卤化衍生物；
-卤素；
-苯基和经烷基、烷氧基、硫代烷氧基、或其卤化衍生物、或卤素取代的苯基；
-＝O、-C(＝O)Ra或-C(＝O)ORa，其中Ra是如以上定义的烷基，或其卤化衍生物；以及
-吡啶基和经烷基、烷氧基、硫代烷氧基、或其卤化衍生物、或卤素取代的吡啶基；
-噻吩基、呋喃或吡咯和经烷基、烷氧基、硫代烷氧基、或其卤化衍生物、或卤素取代的噻吩基、呋喃或吡咯。
R2取代基优选是相对非极性基团。因此，在一个实施方案中，R2取代基选自：
-烷基、烷氧基、硫代烷氧基、和其卤化衍生物；
-卤素；
-苯基和经烷基、烷氧基、硫代烷氧基、或其卤化衍生物、或卤素取代的苯基；
术语“烷基”具有以上定义的含义。优选烷基是乙基或甲基，并且甚至更优选是甲基。
在本发明的上下文中，术语“烷氧基”是指式-ORa的基团，其中Ra是如以上定义的烷基。优选的烷氧基是乙氧基或甲氧基，并且甚至更优选是甲氧基。在不同的实施方案中，烷氧基是指其中烷基链的非末端烃单元之一被氧原子替代的烷基。
在本发明的上下文中，术语“硫代烷氧基”是指式-SRa的基团，其中Ra是如以上定义的烷基。优选的硫代烷氧基是硫代乙氧基(-SEt)或硫代甲氧基(-SMe)，并且甚至更优选是硫代甲氧基。在一个不同的实施方案中，硫代烷氧基是指其中烷基链的非末端烃单元之一被硫原子替代的烷基。
在本发明的上下文中，术语“卤化的”是指卤素取代，换言之，上述烷基、烷氧基、硫代烷氧基中的任一个可以被卤素原子完全或部分取代。优选地，卤素原子是F或Cl，并且更优选地是F。优选的具体经卤化取代基是三氟甲基(-CF3)基团。
术语“卤素”具有以上进一步定义的含义。在以下两种情况下，优选的卤素是Cl和F：当卤素是R2取代基时，以及当苯基或吡啶基是R2取代基时卤素是苯基或吡啶基的取代基时。在一个实施方案中，R2基团、或当其是R2取代基时的苯基或吡啶基，是单卤化的、二卤化的或三卤化的，例如单氯化的、二氯化的或三氯化的或单氟化的、二氟化的或三氟化的。
在一个特别优选的实施方案中，R2取代基是如以上定义的卤素或经卤素取代的苯基。
在一个优选的实施方案中，R2是如以上任何实施方案中所定义的5元单环杂芳基环，并且其被至少一个如以上任何实施方案中定义的相对非极性基团取代，优选被苯基或经烷基、烷氧基、硫代烷氧基、或其卤化衍生物取代的苯基取代。在一个非常优选的实施方案中，R2是如以上任何实施方案中所定义的5元单环杂芳基环，并且其被至少一个苯基取代，例如一个或两个苯基，其中这些苯基中的每一个可以被卤化，例如单卤化、二卤化或三卤化，例如单氯化、二氯化或三氯化，或单氟化、二氟化或三氟化。任选地，在该非常优选的实施方案中，5元单环杂芳基环也被如以上任何实施方案中所定义的卤素取代。
在一个优选的实施方案中，R2是如以上任何实施方案中所定义的9元二环杂芳基环，并且其被至少一个选自如以上任何实施方案中所定义的烷基、烷氧基、硫代烷氧基、和其卤化衍生物、和卤素的相对非极性基团取代。在一个非常优选的实施方案中，R2是如以上任何实施方案中定义的9元单环杂芳基环，并且其被卤素取代，例如单卤化、二卤化或三卤化，例如单氯化、二氯化或三氯化，或单氟化、二氟化或三氟化。
在一个优选的实施方案中，式(I)化合物是式(Ia)化合物
其中
R1、W、X、Y和Z如以上任何实施方案中所定义；以及
R3和R4各自独立地选自如以上任何实施方案中定义的相对非极性基团，或R3和R4与三唑4和5位一起形成如以上任何实施方案中所定义的6元环。在一个特别优选的实施方案中，R4是H。相对非极性基团优选是苯基或经烷基、烷氧基、硫代烷氧基、或其卤化衍生物、或卤素取代的苯基，最优选经卤素取代的苯基。
在一个优选的具体实施方案中，式(I)化合物是式(Ia1)化合物
其中
R1、W、X、Y和Z如以上任何实施方案中所定义；
R3选自如以上任何实施方案中所定义的相对非极性基团，并且优选为苯基或经烷基、烷氧基、硫代烷氧基、或其卤化衍生物、或卤素取代的苯基，最优选经卤素取代的苯基；以及
Hal是如以上任何实施方案中所定义的卤素。
在一个实施方案中，式(I)化合物选自以下列表：
式(I)化合物可以是盐、溶剂合物、立体异构体或前药的形式。
术语“盐”必须理解为根据本发明的式(I)化合物的任何形式，其中所述化合物为离子形式，或为离子形式并与反荷离子(阳离子或阴离子)偶联。优选地，该盐是可药用盐，即生理上可耐受的盐，意指当以适当的方式(即以合理的医学剂量)使用以用于根据本发明的治疗时其无毒性，特别是作为反荷离子的结果。
盐的制备可以通过本领域已知的方法完成。通常，通过使本发明化合物的游离碱形式与合适的碱或酸在水中或在有机溶剂中或在二者的混合物中反应来制备这样的盐。通常，优选非水性介质，例如醚、乙酸乙酯、乙醇、异丙醇或乙腈。
根据本发明的术语“溶剂合物”应理解为意指根据本发明的任何式(I)化合物，其中所述化合物通过非共价键与另一分子(通常为极性溶剂)键合，尤其是包括水合物和醇化物，例如甲醇化物。优选的溶剂合物是水合物。优选地，溶剂合物是可药用溶剂合物，即生理上可耐受的溶剂合物，意指当以适当的方式(即以合理的医学剂量)使用以用于根据本发明的治疗时其无毒性，特别是作为溶剂化分子的结果。
如本文所用，术语“立体异构体”是指根据本发明的式(I)化合物的对映异构体、非对映异构体或其混合物，例如外消旋物。同样，该术语也涵盖关于式(I)化合物中存在的任何双键的几何异构体，即(E)-异构体和(Z)-异构体(反式和顺式异构体)。此外，该术语还包括式(I)化合物的旋转异构体。
根据本发明的任何式(I)化合物可以以不同的互变异构形式存在。具体而言，术语“互变异构体”是指平衡存在的式(I)化合物的两种或更多种结构异构体中的一种，并且容易从一种异构体形式转化为另一种异构体形式。常见的互变异构对是胺-亚胺、酰胺-亚胺酸或酮-烯醇。
术语“前药”是指在体内转化为式(I)化合物(例如通过酶水解)的式(I)化合物的衍生物。
本发明的另一方面涉及用于制备如上定义的式(I)化合物的不同方法。对W、X、Y、Z、R1、R2、R3、R4、Hal和任何其他可变位置的所有提及均如上文针对本发明的化合物一样进行定义。
本发明的方法包括在存在二氟乙酸酐(difluoroacetic anhydride，DFAA)的情况下将式(II)的四唑转化为式(I)的
二唑。该反应代表一锅法(one-pot)酰化和热分解，同时失去N2。DFAA相对于四唑摩尔过量地添加，例如5至30倍摩尔过量。
该反应通常在40至120℃的温度范围内进行。在一个实施方案中，当W、X、Y或Z中的一个或两个是N，并且W、X、Y和Z中的其余项各自是CH时，温度范围位于该范围的较低端，例如40至80℃。在另一个实施方案中，当W、X、Y和Z各自是CH时，温度范围位于该范围的较高端，例如80至120℃。
适合于该反应的溶剂的一些实例是芳族烃，例如苯、甲苯或二甲苯；氯化烃，例如二氯乙烷或氯仿；或丙酮。然而，在一个优选的实施方案中，反应在没有这些溶剂的情况下进行，因为DFAA既用作溶剂又用作酰化剂。一旦反应完成，通过本领域的标准方法例如有机萃取和硅胶柱色谱法分离式(I)的
二唑。
DFAA很容易商购获得，例如从Fluorochem Ltd.获得(#034690)。
式(II)的四唑可以以多种方式获得。
在一个实施方案中，式(II)的四唑如以上方案I(本文也称为方法A)中所述获得。这包括在氨或胺的酸加成盐存在下使腈(III)与叠氮化物离子反应。
叠氮化物离子的代表性来源是金属叠氮化物，尤其是碱金属叠氮化物，例如叠氮化钠，或在每个烷基中具有一至四个碳原子的三烷基甲硅烷基叠氮化物，例如三甲基甲硅烷基叠氮化物和三乙基甲硅烷基叠氮化物。特别优选叠氮化钠。叠氮化物与式(III)的腈的摩尔比通常保持在约1∶1至约6∶1的范围内。
适合的酸加成盐的一些实例是与无机酸(尤其是盐酸)和与有机酸(例如烷烃磺酸(例如甲烷和乙烷磺酸、对甲苯磺酸或苯磺酸))的盐。用于形成酸加成盐的适合的胺的一些实例是叔胺，例如三甲胺、N，N-二甲基苯胺、N-甲基哌啶或N-甲基-吗啉。特别优选氯化铵。该盐与式(III)腈的摩尔比通常保持在约1∶1至约6∶1的范围内，并且通常至少与叠氮化物等摩尔。
金属路易斯酸(Lewis acid)可用作反应催化剂。金属使腈和叠氮化物基团配位并降低叠氮化物进行亲核攻击的障碍(barrier)。本领域中已经报道了多种催化剂并且包括锂或铜的卤化物盐(例如氯化锂)或碘化铜或锌的氧化物。催化剂优选为氯化锂。催化剂与式(III)的腈的摩尔比通常保持在约1∶2至约2∶1的范围内。
该反应通常在反应惰性溶剂中进行。适合于该方法的反应惰性溶剂的一些实例是N，N-二甲基甲酰胺(dimethyl formamide，DMF)、卤化烃例如二氯甲烷(DMC)或氯仿；醚例如二氧六环、四氢呋喃(THF)；苯或吡啶。DMF是特别优选的。
该反应通常在50至120℃的温度范围内进行。
氨或胺的酸加成盐，以及叠氮化物和金属催化剂很容易商购获得，例如从Sigma-Aldrich获得(氯化铵，#254134；叠氮化钠，#S2002；氯化锂，#L4408)。
在一个实施方案中，通过在碱的存在下使式(V)的卤代烷与式(IV)的杂环胺反应获得式(III)的腈。
这种烷基化可以使用不同的碱，例如碱金属氢化物，例如NaH；碱金属六甲基二硅氮烷(hexamethyldisilazane，HMDS)，例如LiHMDS；锂二异丙基胺(Lithiumdiisopropylamide，LDA)；或碱金属碳酸盐，例如Na2CO3。优选的碱是NaH和Na2CO3。通常使用1至3摩尔当量的碱。
该反应优选地在非质子溶剂例如THF、二氧六环、DMF或二甲基亚砜(Dimethylsulfoxide，DMSO)中进行。优选的溶剂是DMF。
优选地，首先用碱处理式(IV)的杂环胺以使杂环胺去质子化，并且随后添加式(V)的卤化物。
反应可在-78℃至所用溶剂的回流温度的温度范围内进行。一旦反应完成，通过本领域的标准方法例如有机萃取和硅胶柱色谱法分离式(III)的腈。
式(V)的卤化物通常为溴化物、碘化物或氯化物，并且更优选为溴化物。
式(V)的卤化物是可商购获得的，例如从Sigma Aldrich获得(4-(溴甲基)苄腈；#144061)或Matrix Scientific(6-溴甲基-烟腈(nicotinonitrile)；#058787)。
式(IV)的杂环胺也可以很容易地在市场上购买，例如从Sigma Aldrich获得(咪唑，#56750；四唑，#88185；吲哚，#I3408)。
碱也很容易商购获得，例如从Sigma Aldrich获得(氢化钠；#223441)。
然而，在一个实施方案中，式(V)的卤化物可以通过式(VI)的相应烷基化合物的卤化来制备，即式(VI)的烷基化合物与卤化剂的反应。
卤化剂可以是任何常规的卤化剂。这样的卤化剂的一些实例是溴化剂，例如溴、溴化氢、N-溴代琥珀酰亚胺(N-bromosuccinimide，NBS)、溴化铜、三溴化四甲基铵、三氟乙酰基次溴酸盐、二溴异氰脲酸；碘化剂，例如碘、氯化碘、三氟乙酰基次碘酸盐、和N-碘代琥珀酰亚胺等；或氯化剂，例如氯、亚硫酰氯、N-氯代琥珀酰亚胺或氯化铜。其中，优选N-溴代琥珀酰亚胺、N-碘代琥珀酰亚胺和N-氯代琥珀酰亚胺。卤化剂的量优选为相对于式(VI)的烷基化合物1至4摩尔当量。
可用于卤化反应的溶剂的一些实例包括烃，例如庚烷、己烷、环己烷、戊烷、甲苯和二甲苯；醚，例如乙醚、THF或二氧六烷；卤化烃，例如氯仿或DCM；DMF、乙酸乙酯、DMSO或MeCN。溶剂优选为DMF。
上述卤化反应优选在自由基引发剂的存在下进行。自由基引发剂的一些实例包括2，2′-偶氮二异丁腈(azobisisobutyronitrile，AIBN)、1，1′-偶氮二(环己烷-1-腈)(V-40)、过氧化苯甲酰或(PhCOO)2。优选的自由基引发剂是AIBN。自由基引发剂的量优选为相对于式(VI)的烷基化合物0.01至0.5摩尔当量。
该反应通常在0至100℃的温度下进行。一旦反应完成，通过本领域的标准方法如有机萃取和硅胶柱色谱法分离式(V)的卤化物。
式(VI)的烷基化合物可容易地商购获得，例如从Sigma Aldrich获得(对甲苯腈；#132330)或从Acros Organics获得(5-氰基-2-甲基吡啶；#15259816)；卤化剂和自由基引发剂也是如此，例如从Sigma-Aldrich获得(N-氯代琥珀酰亚胺，#109681；AIBN，#441090)。
在一个不同的实施方案中，式(II)的四唑如以下方案II(本文也称为方法B)中所述获得。
方法B特别适用于上述式(Ia)化合物。
式(IIa)的四唑可以以与上述将腈(III)转化为四唑(II)相同的方式从腈(IIIa)获得。
腈(IIIa)可从叠氮化合物(IVa)通过将叠氮化合物(IVa)与式(X)的炔烃反应制备。该反应代表叠氮化物和炔烃官能团之间的1，3-环加成。
该反应通常使用铜(I)催化剂。可以直接使用Cu(I)催化剂例如碘化铜、氯化铜或溴化铜，优选碘化铜，或者也可以使用Cu(II)物质，例如硫酸铜或醋酸铜，连同还原剂例如抗坏血酸盐，例如抗坏血酸钠，并且这两种物质会发生反应以原位产生Cu(I)催化物质。当直接使用铜(I)物质时，通常采用超声处理和/或碱以提高反应速率。合适的碱的一些实例是胺碱，例如三甲胺、1，8-二氮杂二环[5.4.0]十一碳-7-烯(DBU)或N，N-二异丙基乙胺(Diisopropylethylamine，DIPEA)。优选引发剂是DIPEA。
环加成可以在多种溶剂中进行，例如质子溶剂(例如醇或水)；或非质子溶剂(例如THF、DMSO、DMF、甲苯或丙酮)。溶剂优选为DMF。
该反应通常用等摩尔量的叠氮化物(IVa)和炔烃(X)进行，并且当使用铜催化剂时，其通常以催化的量添加。当使用碱时，其通常以摩尔过量使用。
环加成可以在温和条件下进行，例如在室温(20至25℃)下进行，但也可以在较高温度或微波辐射下进行。一旦反应完成，可以通过本领域的标准方法如有机萃取和硅胶柱色谱法分离式(IIIa)的腈。
铜催化剂和碱在市场上很容易得到，例如从Celtic Chemicals获得(碘化铜，#P400)或从Sigma-Aldrich获得(DIPEA，#387649)。
式(IVa)的叠氮化合物可以通过使式(V)的卤化物与叠氮化物反应来制备。谨慎地选择条件使得叠氮化物和式(IVa)的叠氮化合物的腈基之间不发生环加成。这是通过在类似于用于将(V)转化为(VIIa)的体系的体系中进行转化来实现的，只是使用了温和得多的条件。具体而言，反应在室温下进行并且不使用氨或胺的酸加成盐或催化剂。
式(V)的卤化物和式(VI)的烷基化合物可以如上述制备。
在根据方法B的替代途径中，式(IIa)的四唑是从式(VIIa)的叠氮化合物和式(X)的炔烃、使用与上述将式(IVa)的叠氮化合物转化为式(IIIa)的腈相同的反应制备的。
与通过中间体(IVa)和(IIIa)进行的途径(根据其进行三个独立的反应，即引入N3基团的亲核取代，以及腈和炔环加成)相反，通过中间体(VIIa)进行的途径提供了一步N3亲核取代和腈环加成。这种一步双转化可以通过使用与上述将式(IIIa)的腈转化为式(IIa)的四唑相同的反应、仅确保使用相对于式(V)的卤化物至少两摩尔当量的叠氮化物来实现。令人惊讶地发现，通过中间体(IVa)和(IIIa)进行的途径特别适合于其中W、X、Y或Z中的一个或两个是N并且W、X、Y和Z中的其余项各自是CH的化合物，因为与通过中间体(VIIa)进行时相比获得更好的总产率。
在一个不同的实施方案中，式(II)的四唑如以下方案III(本文也称为方法C)中所述获得。
方法C特别适合于上述式(Ia1)的化合物。
式(IIa1)的卤化四唑可以以与上述将腈(IIIa)转化成四唑(IIa)相同的方式从卤化腈(IIIa1)获得。
式(IIIa1)的卤化腈可由式(VIII)的乙炔亚铜通过在卤化剂存在下使式(VIII)的乙炔亚铜与式(IVa)的叠氮化合物反应制备。
卤化剂可以是例如上述用于将式(VI)的烷基化合物转化为式(V)的卤化物的那些，然而卤化剂优选为N-卤代琥珀酰亚胺。
可以将叠氮化合物、乙炔亚铜和卤化剂同时添加至反应混合物中，但是以下情况下获得了式(IIIa1)卤化腈的更好产率：如果先将叠氮化合物与乙炔亚铜反应，从而形成中间体1，2，3-三唑亚铜中间体，并且随后添加卤化剂。
可以以等摩尔量使用叠氮化合物、乙炔亚铜和卤化剂，然而叠氮化合物和卤化剂通常以非常轻微过量使用，例如关于叠氮化合物，为1.1至2倍摩尔量。
通常用于转化的溶剂是氯化烃，例如DCM、二氯乙烷或氯仿。
反应可以在室温或更高温度下进行，例如从20℃至溶剂的回流温度。如果不期望其他位置的卤化，例如R1位置的卤化，则可以调整条件以避免这种情况，例如通过采用温和的反应条件，例如通过在室温下而不是回流温度下进行反应，或通过减少反应时间。
一旦反应完成，可以通过本领域的标准方法例如有机萃取和硅胶柱色谱法分离式(IIIa1)的卤化腈。
式(VIII)的乙炔亚铜可以通过使式(IX)的相应炔烃与铜(I)物质反应来获得。
代表性的Cu(I)物质是卤化铜(I)，例如碘化铜或氯化铜。或者也可以使用Cu(II)物质(例如硫酸铜)连同还原剂(例如氯化羟铵)。Cu(I)物质优选为CuI。
该反应通常通过将卤化铜溶解在酸性比炔烃弱的溶剂中来进行，所述溶剂例如醚溶剂，例如乙醚、THF；氯化和非氯化烃，例如二氯甲烷或甲苯；或三甲胺、氨水或氢氧化铵。优选地，反应在氢氧化铵中进行。
式(IX)或(X)的炔烃可容易地商购获得，例如从SigmaAldrich获得(苯乙炔，#117706；乙炔基甲苯，#206504；或氯-4-乙炔基苯#206474)。
适合于上述反应的铜(I)或铜(II)物质也可以从例如Sigma Aldrich购买(氯化铜(I)，#651745；硫酸铜(II)，#451657)。
在根据方法C的替代途径中，式(IIal)的四唑直接从式(VIIa)的叠氮化合物和式(VIII)的乙炔亚铜、使用与上述(IVa)的叠氮化合物与式(VIII)的乙炔亚铜产生式(IIIa1)的卤化腈的反应相同的反应来制备。出乎意料地发现，通过中间体(IVa)和(IIIa1)进行的途径特别适合于其中W、X、Y或Z中的一个或两个是N并且W、X、Y和Z中的其余项各自是CH的化合物，因为比通过中间体(VIIa)进行时获得更好的总产率。
可以使用本领域技术人员公知常识范围内的上述合成方法的变体来获得本发明涉及的不同的式(I)化合物。
例如，当R1是卤素时，任何上述式(I)的
二唑可以使用如上文所述的卤化条件简单地卤化。
本发明的另一方面涉及药物组合物，其包含至少一种式(I)化合物或其盐、溶剂合物、立体异构体或前药，以及至少一种可药用赋形剂。术语“赋形剂”是指药物化合物中除活性成分之外的组分(如欧洲药品管理局(European Medicines Agency)-EMA所定义)。其优选地包括“载体、辅料和/或载剂”。载体是将物质并入其中以改善药物的递送和有效性的形式。药用载体用于药物递送系统(例如控制释放技术)以延长体内药物作用、减少药物代谢或降低药物毒性。载体还用于提高药物递送至药理作用靶标位点的有效性。辅料是添加至药品制剂中的物质，其以可预测的方式影响活性成分的作用。载剂是用作提供大量药物施用的介质的赋形剂或物质，优选无治疗作用(Stedman′s Medical
2006Lippincott Williams&Wilkins)。这样的药用载体、辅料或载剂可以是无菌液体，例如水和油，包括石油、动物、植物或合成来源的那些，例如花生油、大豆油、矿物油、芝麻油等。合适的药用载体在E.W.Martin的“Remington′s Pharmaceutical Sciences”中有描述。这些赋形剂的选择和使用量将取决于药物组合物的应用形式。根据本发明的药物组合物可以是用于其在人和/或动物，优选人(包括婴儿、儿童和成人)中应用的任何合适的形式，并且可以通过本领域技术人员已知的常规方法，例如在西班牙和美国药典和类似参考文本中描述或提及的那些产生。
本发明的药物组合物可以是适合于药物施用的任何形式，例如腹膜内、肌内、关节内、静脉内、动脉内、膀胱内、骨内、海绵窦内、经肺、经颊、舌下、经眼、玻璃体内、鼻内、经皮、经直肠、经阴道、经口、硬膜外、鞘内、心室内、脑内、脑室内、脑池内、椎管内、椎管周围、颅内或表面施用。适合经口施用的药物形式可以是片剂和胶囊剂，并且可以含有本领域已知的常规赋形剂，例如黏合剂，例如糖浆、阿拉伯胶、明胶、山梨糖醇、黄蓍胶或聚乙烯吡咯烷酮；填充剂，例如乳糖、糖、玉米淀粉、磷酸钙、山梨糖醇或甘氨酸；用于制备片剂的润滑剂，例如硬脂酸镁；崩解剂，例如淀粉、聚乙烯吡咯烷酮、羟基乙酸淀粉钠或微晶纤维素；或可药用润湿剂，例如十二烷基硫酸钠。适合于胃肠外施用的药物形式可以是无菌溶液剂、混悬剂或冻干产品。可以使用合适的赋形剂，例如填充剂、缓冲剂或表面活性剂。
本发明的另一方面涉及用作药物的式(I)化合物或其盐、溶剂合物、立体异构体或前药。在一个优选的实施方案中，药物用于预防或治疗HDAC6相关疾病或病症。
类似地，本发明还涉及在有此需要的对象中预防或治疗HDAC6相关疾病或病症的方法，该方法包括向对象施用式(I)化合物或其可药用盐、溶剂合物、立体异构体或前药。
类似地，本发明还涉及式(I)化合物或其可药用盐、溶剂合物、立体异构体或前药在制备用于预防或治疗HDAC6相关疾病或病症的药物中的用途。
类似地，本发明还涉及式(I)化合物或其可药用盐、溶剂合物、立体异构体或前药用于预防或治疗HDAC6相关疾病或病症的用途。
如本文所用，HDAC6相关疾病或病症是指(至少部分地)由HDAC6介导的疾病或病症。这样的疾病或病症的一些实例在以下有概述：Van Helleputte et.al，2014，Researchand Reports in Biology，5：1-13；Seidel et al.，Epigenomics，2015，7(1)：103-118；Keet al.，Mol Med，2018，24：33；Jian et al.，Neuroscience Letters，2017，658：114-120。
在一个实施方案中，HDAC6相关疾病或病症选自：癌症，例如前列腺癌、多发性骨髓瘤或多形性胶质母细胞瘤；炎症；神经退行性病症，例如阿尔茨海默病、帕金森病、亨廷顿病(Huntington’s disease)、肌萎缩侧索硬化、脊髓性肌萎缩或夏科-马里-图思病(Charcot-Marie-Tooth disease)；自身免疫病，例如多发性硬化、类风湿性关节炎或自身免疫性肝炎；周围神经病，例如化学治疗诱导的神经病变或糖尿病神经病变；重度抑郁症(majordepression disorder)；肾疾病，例如常染色体显性遗传多囊肾病、狼疮性肾炎或急性肾损伤；或移植排斥。
除了其选择性靶向HDAC6的能力之外，令人惊讶地发现本发明的化合物还具有良好的脑屏障通透性。因此，本发明的一个优选实施方案涉及用于治疗或预防中枢神经系统HDAC6相关疾病或病症(例如上述神经退行性疾病或病症、多发性硬化或抑郁)的式(I)化合物。
在本发明的上下文中，术语“治疗”或其语法变形是指疾病或病症的改善或消除。
在本发明的上下文中，术语“预防”或其语法变形是指降低或消除疾病或病症恶化、出现或复发的风险。
本发明的化合物可以与至少另一种药物一起使用以提供组合治疗。该另外的一种或更多种药物可以是同一组合物的一部分，或者可以作为单独的组合物提供并且可以同时或在不同时间施用。在一个实施方案中，多于一种本发明的化合物可以彼此组合使用，例如本文所述的实施例12、57或58的情况。在这样的组合中，例如在实施例12、57或58的情况下，本发明的不同化合物可以相对于彼此以不同的量存在。
还出乎意料地发现，本发明的化合物具有良好的溶解度谱以及经改善的遗传毒性，这是HDAC6抑制剂通常缺乏的特性。
通常，本发明的化合物以治疗有效量使用。构成任何给定的本发明化合物的治疗有效量的事项可由医学专家基于多种因素，例如所选化合物的相对效力、所治疗病症的严重程度或患者的体重或年龄确定。
提供以下举例说明性的、非限制性的实施例以帮助理解本发明。
本发明化合物的合成
除非另有说明，否则试剂和底物购自商业供应商(Cymit Quimica S.L和Sigma-Aldrich)。薄层色谱法(Thin layer chromatography，TLC)分析在硅胶60F254上使用铝板进行并且用UV灯可视化。快速色谱法在硅胶60(230至400目)柱上进行。MS分析使用电喷雾电离(electrospray ionization，ESI)模式在30eV下进行。对于1H NMR，使用CDCl3或二甲基亚砜(DMSO)作为溶剂在400或500MHz下记录1H NMR谱。纯度通过HPLC使用反向固定相测量。
A)根据本发明的方法A合成的一些实施例
通过应用以下合成方案合成式(I)化合物：
向相应的烷芳基化合物衍生物(15.6mmol)在乙腈中的溶液添加N-溴代琥珀酰亚胺(15.6mmol，2.37g)和偶氮二异丁腈(AIBN)(1.56mmol，0.256g)。将反应混合物回流2小时并且添加偶氮二异丁腈(0.78mmol，0.128g)。回流一小时之后，将混合物在室温下搅拌16小时。然后，减压蒸发溶剂，并且将由此获得的粗制品通过快速色谱法(硅胶，乙酸乙酯/己烷)纯化，得到所期望的溴化物化合物。
在0℃下，向相应的溴化物化合物(1mmol)在N，N-二甲基甲酰胺(DMF)中的溶液中添加NaH(60％，在矿物油中，1.6mmol，0.062g)或Na2CO3(2.3mmol，0.244g)。30分钟之后，添加相应的杂环胺。反应通过薄层色谱法(TLC)监测。反应完成之后，添加NH4Cl(饱和水溶液)，并且将产物用乙酸乙酯萃取。将合并的有机层用Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过快速色谱法(硅胶、乙酸乙酯/己烷或MeOH/CH2Cl2)纯化。
随后在室温下向相应腈化合物(1.0mmol)在N，N-二甲基甲酰胺中的溶液中添加NaN3(4.7mmol，0.305g)、NH4Cl(4.7mmol，0.251g)和LiCl(1.7mmol，0.071g)。将反应混合物在100℃下搅拌并通过TLC监测直至反应完成。将粗制反应混合物直接用于下一步。
在室温下向上一步获得的粗制反应物中添加二氟乙酸酐(DFAA)(20.0mmol，2.5ml)。将反应混合物在60℃下(当W、X、Y或Z中的一个或两个是N)或100℃下(当W、X、Y和Z各自是CH)搅拌。通过HPLC-MS监测反应进程。反应完成之后，添加水并用乙酸乙酯萃取该溶液。将合并的有机级分用水和盐水洗涤，用Na2SO4干燥并且减压蒸发。将由此获得的粗制品通过快速色谱法(硅胶，乙酸乙酯/己烷)纯化，得到具有高纯度(＞90％)的所期望产物。
使用该方案制备的一些代表性实施例是：
实施例1：2-(4-((1H-吲哚-1-基)甲基)苯基)-5-(二氟甲基)-1，3，4-
二唑
橙色固体；1H NMR(δppm，400MHz，DMSO-d6)8.02(d，J＝8.3Hz，1H)，7.81-7.77(m，1H)，7.61-7.53(m，3H)，7.45-7.39(m，2H)，7.31(d，J＝8.1Hz，1H)，7.13-7.08(m，1H)，7.03(t，J＝7.4Hz，1H)，6.55-6.52(m，1H)，5.57(app d，J＝8.6Hz，2H)；MS(ESI，m/z)：326.28[M+1]+.
实施例2：2-(4-((1H-吡咯并[3，2-b]吡啶-1-基)甲基)苯基)-5-(二氟甲基)-1，3，4-
二唑
白色固体；1H NMR(δppm，400MHz，DMSO-d6)8.35(dd，J＝4.7，1.3Hz，1H)，8.03(d，J＝8.3Hz，2H)，7.91-7.86(m，2H)，7.54(t，J＝51.4Hz，1H)，7.43(d，J＝8.2Hz，2H)，7.12(dd，J＝8.3，4.6Hz，1H)，6.66(d，J＝3.3Hz，1H)，5.62(s，2H)；MS(ESI，m/z)：327.08[M+1]+.
实施例3：2-(4-((1H-吡咯并[3，2-c]吡啶-1-基)甲基)苯基)-5-(二氟甲基)-1，3，4-
二唑
白色固体；1H NMR(δppm，400MHz，DMSO-d6)8.99(s，1H)，8.28(d，J＝6.0Hz，1H)，8.04(d，J＝8.3Hz，2H)，7.79(d，J＝3.3Hz，1H)，7.71(d，J＝6.0Hz，1H)，7.55(t，J＝51.3Hz，1H)，7.45(d，J＝8.1Hz，2H)，6.83(d，J＝3.2Hz，1H)，5.68(s，2H)；MS(ESI，m/z)：327.08[M+1]+.
中间体：
4-((1H-吡咯并[3，2-c]吡啶-1-基)甲基)苄腈
MS(ESI，m/z)：234.00[M+1]+.
1-(4-(1H-四唑-5-基)苄基)-1H-吡咯并[3，2-c]吡啶
MS(ESI，m/z)：277.20[M+1]+.
实施例4：2-(4-((1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-1-基)甲基)苯基)-5-(二氟甲基)-1，3，4-
二唑
白色固体；1H NMR(δppm，400MHz，DMSO-d6)1H NMR(δppm，400MHz，DMSO-d6)8.27(dd，J＝4.6，1.6Hz，1H)，8.04-7.99(m，3H)，7.70(d，J＝3.5Hz，1H)，7.54(t，J＝51.4Hz，1H)，7.44(d，J＝8.3Hz，2H)，7.13(dd，J＝7.8，4.7Hz，1H)，6.57(d，J＝3.5Hz，1H)，5.62(s，2H)；MS(ESI，m/z)：327.26[M+1]+.
实施例5：1-(1-(4-(5-(二氟甲基)-1，3，4-
二唑-2-基)苄基)-1H-吲哚-3-基)-2，2-二氟乙酮
白色固体；1H NMR(δppm，400MHz，CDCl3-d)8.50-8.45(m，1H)，8.21-8.09(m，3H)，7.39(d，J＝7.0Hz，1H)，7.38-7.32(m，3H)，7.29(d，J＝2.7Hz，1H)，6.93(t，J＝51.7Hz，1H)，6.15(t，J＝54.2Hz，1H)，5.54(s，2H).MS(ESI，m/z)：402.25[M-1]-.
实施例6：2-(4-((1H-吲唑-1-基)甲基)苯基)-5-(二氟甲基)-1，3，4-
二唑
橙色固体；1H NMR(δppm，400MHz，DMSO-d6)8.18(s，1H)，8.02(d，J＝8.1Hz，2H)，7.81(dd，J＝8.3，3.5Hz，1H)，7.74(d，J＝8.8Hz，1H)，7.54(t，J＝51.4Hz，1H)，7.44-7.38(m，3H)，7.20-7.15(m，1H)，5.82(s，2H)，
区域化学(regiochemistry)通过nOe确定；MS(ESI，m/z)：327.26[M+1]+。
实施例7：2-(4-((2H-吲唑-2-基)甲基)苯基)-5-(二氟甲基)-1，3，4-
二唑
白色固体；1H NMR(δppm，400MHz，DMSO-d6)8.58(d，J＝0.9Hz，1H)，8.06(d，J＝8.2Hz，2H)，7.75(d，J＝8.4Hz，1H)，7.55(t，J＝51.4Hz，1H)，7.61(d，J＝8.7Hz，1H)，7.53(d，J＝8.2Hz，2H)，7.28-7.23(m，1H)，7.11-7.02(m，1H)，5.80(s，2H)，
区域化学通过nOe确定；MS(ESI，m/z)：327.05[M+1]+。
实施例8：2-(4-((1H-苯并[d]咪唑-1-基)甲基)苯基)-5-(二氟甲基)-1，3，4-
二唑
白色固体；1H NMR(δppm，400MHz，DMSO-d6)8.58(d，J＝0.9Hz，1H)，8.06(d，J＝8.2Hz，2H)，7.75(d，J＝8.4Hz，1H)，7.55(t，J＝51.4Hz，1H)，7.61(d，J＝8.7Hz，1H)，7.53(d，J＝8.2Hz，2H)，7.28-7.23(m，1H)，7.11-7.02(m，1H)，5.80(s，2H)；MS(ESI，m/z)：327.03[M+1]+.
实施例9：1-(5，6-二氯-1-(4-(5-(二氟甲基)-1，3，4-
二唑-2-基)苄基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-2，2-二氟乙酮
黄色固体；1H NMR(δppm，400MHz，DMSO-d6)8.38(s，1H)，8.35(s，1H)，8.03(d，J＝8.3Hz，2H)，7.55(t，J＝51.4Hz，1H)，7.42(d，J＝8.3Hz，2H)，7.20(t，J＝53.2Hz，1H)，6.01(s，2H)；MS(ESI，m/z)：471.09和473.12[M+1].
实施例10：2-(4-((5，6-二氯-1H-苯并[d]咪唑-1-基)甲基)苯基)-5-(二氟甲基)-1，3，4-
二唑
白色固体；1H NMR(δppm，400MHz，DMSO-d6)8.61(s，1H)，8.06(d，J＝8.1Hz，2H)，8.00(s，1H)，7.97(s，1H)，7.55(t，J＝51.4Hz，1H)，7.54(d，J＝8.7Hz，2H)，5.68(s，2H)；MS(ESI，m/z)：395.21和397.20[M+1]+
实施例11：2-(4-((1H-苯并[d][1，2，3]三唑-1-基)甲基)苯基)-5-(二氟甲基)-1，3，4-
二唑
臼色固体；1H NMR(δppm，400MHz，DMSO-d6)8.10(d，J＝8.4Hz，1H)，8.08-8.04(m，2H)，7.89(d，J＝8.4Hz，1H)，7.54(t，J＝51.4Hz，1H)，7.59-7.53(m，3H)，7.46-7.42(m，1H)，6.15(s，2H)；MS(ESI，m/z)：328.24[M+1]+.
实施例12：实施例12作为其三种三唑区域异构体，即2-(二氟甲基)-5-(4-((5-甲基-1H-苯并[d][1，2，3]三唑-1-基)甲基)苯基)-1，3，4-
二唑、2-(二氟甲基)-5-(4-((6-甲基-1H-苯并[d][1，2，3]三唑-1-基)甲基)苯基)-1，3，4-
二唑、2-(二氟甲基)-5-(4-((5-甲基-2H-苯并[d][1，2，3]三唑-2-基)甲基)苯基)-1，3，4-
二唑的混合物在生物测定中进行测试。虽然这三种区域异构体可以通过本领域的标准方法分离，例如通过硅胶柱色谱法分离，但其在本文中作为混合物呈现，因为这是其在下文提及的生物测定中进行测试的方式。
白色固体；作为三种区域异构体的混合物(分布1∶1∶1)；MS(ESI，m/z)：342.25[M+1]+。
实施例13：2-(4-((6-氯-1H-苯并[d][1，2，3]三唑-1-基)甲基)苯基)-5-(二氟甲基)-1，3，4-
二唑
白色固体；1H NMR(δppm，400MHz，DMSO-d6)8.17(d，J＝1.8Hz，1H)，8.14(d，J＝8.8Hz，1H)，8.09-8.05(m，2H)，7.59-7.55(m，2H)，7.54(t，J＝51.4Hz，1H)，7.47(dd，J＝8.8，1.9Hz，1H)，6.12(s，2H)，
区域化学通过6.12ppm处的质子和8.17ppm处的质子之间的nOe增强确定；MS(ESI，m/Z)：362.18和364.21[M+1]+。
实施例14：1-(4-(5-(二氟甲基)-1，3，4-
二唑-2-基)苄基)萘-2(1H)-酮
白色固体；1H NMR(δppm，400MHz，DMSO-d6)8.05(d，J＝10，1Hz，1H)，8.03(d，J＝8.7Hz，2H)，7.79(dd，J＝7.8，1.5Hz，1H)，7.54(t，J＝51.4Hz，1H)，7.53-7.50(m，1H)，7.45(d，J＝8.2Hz，2H)，7.39(d，J＝8.6Hz，1H)，7.27(t，J＝7.4Hz，1H)，6.77(d，J＝9.5Hz，1H)，5.65(s，2H).；MS(ESI，m/z)：354.30[M+1]+.
实施例15：1-(4-(5-(二氟甲基)-1，3，4-
二唑-2-基)苄基)-3，3-二甲基吲哚啉-2-酮
白色固体；1H NMR(δppm，400MHz，DMSO-d6)8.03(d，J＝8.3Hz，2H)，7.53(t，J＝536Hz，1H)，7.52(d，J＝8.3Hz，2H)，7.39(dd，J＝7.6，1.5Hz，1H)，7.18(td，J＝7.7，1.3Hz，1H)，7.04(td，J＝7.5，1.0Hz，1H)，6.91(d，J＝7.8Hz，1H)，5.02(s，2H)，1.35(s，6H)；MS(ESI，m/z)：370.27[M+1]+.
实施例16：2-(4-(5-(二氟甲基)-1，3，4-
二唑-2-基)苄基)异吲哚啉-1，3-二酮
白色固体；1H NMR(δppm，400MHz，DMSO-d6)8.04(d，J＝8.3Hz，2H)，7.97-7.92(m，2H)，7.92-7.87(m，2H)，7.58(d，J＝8.1Hz，2H)，7.55(t，J＝51.4Hz，1H)，4.90(s，2H)；MS(ESI，m/z)：356.26[M+1]+.
实施例17：2-(二氟甲基)-5-(4-((5-苯基-1H-四唑-1-基)甲基)苯基)-1，3，4-
二唑
白色固体；MS(ESI，m/z)：355.28[M+1]+。
实施例18：1-(4-(5-(二氟甲基)-1，3，4-
二唑-2-基)苄基)-4-苯基-1H-1，2，4-三唑-5(4H)-酮
白色固体；1H NMR(δppm，400MHz，DMSO-d6)8.58(s，1H)，8.10-8.06(m，2H)，7.76-7.72(m，2H)，7.60-7.52(m，4H)，7.54(t，J＝58.9Hz，1H)，7.45-7.38(m，1H)，5.12(s，2H)；MS(ESI，m/z)：370.24[M+1]+.
实施例19：1′-(4-(5-(二氟甲基)-1，3，4-
二唑-2-基)苄基)螺[环己烷-1，3′-吲哚啉]-2′-酮
白色固体；1H NMR(δppm，400MHz，DMSO-d6)8.07-8.01(m，2H)，7.60(dd，J＝7.5，1.2Hz，1H)，7.55(t，J＝51.8Hz，1H)，7.54(d，J＝8.5Hz，2H)，7.23(td，J＝7.7，1.2Hz，1H)，7.07(td，J＝7.5，1，0Hz，1H)，6.93(d，J＝7.8Hz，1H)，5.04(s，2H)，4，11(ddd，J＝11.7，7.6，4.2Hz，2H)，3.87(dt，J＝11，6，4.9Hz，2H)，1.84(dt，J＝9.3，4.6Hz，4H).MS(ESI，m/z)：412.33[M+1]+.
实施例20：2-(4-(1-(1H-苯并[d]咪唑-1-基)乙基)苯基)-5-(二氟甲基)-1，3，4-
二唑
白色固体；1H NMR(400MHz，氯仿-d)8.19(s，1H)，8.12(d，J＝8.4Hz，2H)，7.87(d，J＝8.1Hz，1H)，7.38(d，J＝8.3Hz，2H)，7.33-7.30(m，1H)，7.23(t，J＝7.5Hz，1H)，7.15(d，J＝8.2Hz，1H)，6.93(t，J＝51，7Hz，1H)，5.74(q，J＝7.1Hz，1H)，2.10(d，J＝7.1Hz，3H)；MS(ESI，m/z)：341.27[M+1]+.
实施例21：2-(6-((1H-苯并[d][1，2，3]三唑-1-基)甲基)吡啶-3-基)-5-(二氟甲基)-1，3，4-
二唑
黄色油状物；1H NMR(δppm，400MHz，DMSO-d6)9.13(d，J＝2.2Hz，1H)，8.47(dd，J＝8.2，2.3Hz，1H)，8.10(d，J＝8.4Hz，1H)，7.84(d，J＝8.3Hz，1H)，7.60-7.54(m，2H)，7.56(t，J＝58.2Hz，1H)，7.47-7.42(m，1H)，6.27(s，2H)；MS(ESI，m/z)：329.43[M+1]+.
实施例22：2-(6-((5，6-二氯-1H-苯并[d]咪唑-1-基)甲基)吡啶-3-基)-5-(二氟甲基)-1，3，4-
二唑
白色固体；1H NMR(δppm，400MHz，DMSO-d6)9.16-9.13(m，1H)，8.54(s，1H)，8.46(dd，J＝8.2，2.3Hz，1H)，8.00(s，1H)，7.97(s，1H)，7.58(d，J＝7.7Hz，1H)，7.51(t，J＝51.0Hz，1H)，5.80(s，2H)；MS(ESI，m/z)：396.22和398.22[M+1]+.
实施例23：2-(6-((3H-[1，2，3]三唑并[4，5-b]吡啶-3-基)甲基)吡啶-3-基)-5-(二氟甲基)-1，3，4-
二唑
白色固体；1H NMR(δppm，400MHz，DMSO-d6)9.09(d，J＝2.2Hz，1H)，8.76(dd，J＝4.5，1.4Hz，1H)，8.65(dd，J＝8.3，1.4Hz，1H)，8.47(dd，J＝8.2，2.3Hz，1H)，7.65(d，J＝8.2Hz，1H)，7.57-7.53(m，1H)，7.57(t，J＝51.1Hz，1H)，6.25(s，2H)，
区域化学通过在仅6.25ppm处和7.65ppm处质子之间的nOe增强确定；MS(ESI，m/Z)：330.20[M+1]+。
实施例24：2-(6-((5，6-二氯-1H-苯并[d][1，2，3]三唑-1-基)甲基)吡啶-3-基)-5-(二氟甲基)-1，3，4-
二唑
白色固体；1H NMR(δppm，400MHz，DMSO-d6)9.11(d，J＝2.2Hz，1H)，8.55(s，1H)，8.48(dd，J＝8.2，2.3Hz，1H)，8.40(s，1H)，7.65(d，J＝8.2Hz，1H)，7.58(t，J＝51.2Hz，1H)，6.29(s，2H)，
区域化学通过在6.29ppm处的质子和8.40ppm处的质子之间的nOe增强确定；MS(ESI，m/z)：397.20和399.16[M+1]+。
实施例25：2-(6-((5，6-二氯-2H-苯并[d][1，2，3]三唑-2-基)甲基)吡啶-3-基)-5-(二氟甲基)-1，3，4-
二唑
白色固体；1H NMR(δppm，400MHz，DMSO-d6)9.16(d，J＝2.2Hz，1H)，8.50(dd，J＝8.1，2.3Hz，1H)，845(s，2H)，7.65(d，J＝8.3Hz，1H)，7.59(t，J＝51.2Hz，1H)，6.30(s，2H)，
区域化学通过在仅6.30ppm处的质子和7.65ppm处的质子之间的nOe增强确定；MS(ESI，m/z)：397.22和399.20[M+1]+。
实施例26：2-(二氟甲基)-5-(6-((4-苯基-1H-咪唑-1-基)甲基)吡啶-3-基)-1，3，4-
二唑
白色固体；1H NMR(δppm，400MHz，CDCl3-d)9.35(d，J＝2.2Hz，1H)，8.40(dd，J＝8.2，2.3Hz，1H)，7.84-7.78(m，2H)，7.75(s，1H)，7.40(t，J＝7.6Hz，2H)，7.30-7.27(m，1H)，7.33(s，1H)，7.23(d，J＝8.2Hz，1H)，6.96(t，J＝51.6Hz，1H)，5.41(s，2H)，
区域化学通过5.41ppm处的质子与7.23ppm、7.33ppm和7.75ppm处的质子之间的nOe增强确定；MS(ESI，m/z)：354.26[M+1]+。
实施例58：2-(6-((5，6-二氯-2-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-1-基)甲基)吡啶-3-基)-5-(二氟甲基)-1，3，4-
二唑
白色固体；1H NMR(δppm，400MHz，CDCl3-d)9.05-9.03(m，1H)，8.48(dd，J＝8.2，2.2Hz，1H)，8.30(s，1H)，8.27(s，1H)，7.67(d，J＝8.3Hz，1H)，7.57(t，J＝51.2Hz，1H)，6.01(s，2H)；MS(ESI，m/z)：464.19和466.19[M+1]+.
实施例59：2-(二氟甲基)-5-(6-((5，6-二甲基-1H-苯并[d][1，2，3]三唑-1-基)甲基)吡啶-3-基)-1，3，4-
二唑
白色固体；1H NMR(δppm，400MHz，CDCl3-d)9.14(d，J＝2.3Hz，1H)，845(dd，J＝8.2，2.3Hz，1H)，7.84(s，1H)，7.59(s，1H)，7.57(t，J＝51.3Hz，1H)，7.46(d，J＝8.4Hz，1H)，6.18(s，2H)，2.37(d，J＝4.3Hz，6H)；MS(ESI，m/z)：357.24[M+1]+.
实施例60：2-(6-((5，6-二氯-2-甲基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)甲基)吡啶-3-基)-5-(二氟甲基)-1，3，4-
二唑
黄色油状物；1H NMR(δppm，400MHz，CDCl3-d)9.34(dd，J＝2.2，0.8Hz，1H)，8.38(dd，J＝8.2，2.2Hz，1H)，7.84(s，1H)，7.36(s，1H)，7.09-7.05(m，1H)，6.96(t，J＝51.6Hz，1H)，5.50(s，2H)，2.67(s，3H)；MS(ESI，m/z)：410.23和412.23[M+1]+.
实施例61：2-(二氟甲基)-5-(6-((5，6-二甲基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)甲基)吡啶-3-基)-1，3，4-
二唑
褐色固体；1H NMR(δppm，400MHz，CDCl3-d)9.36(d，J＝2.1Hz，1H)，8.32(dd，J＝8.2，2.2Hz，1H)，8.07(s，1H)，7.65(s，1H)，7.09-7.05(m，2H)，6.96(t，J＝51.6Hz，1H)，5.59(s，2H)，2.40(s，3H)，2.36(s，3H)；MS(ESI，m/z)：356.26[M+1]+.
实施例62 2-(6-((6-溴-1H-苯并[d]咪唑-1-基)甲基)吡啶-3-基)-5-(二氟甲基)-1，3，4-
二唑和实施例63：2-(6-((5-溴-1H-苯并[d]咪唑-1-基)甲基)吡啶-3-基)-5-(二氟甲基)-1，3，4-
二唑
获得了两种经富集的级分。级分1：黄色油状物；两种区域异构体的混合物(分布，第一经洗脱的化合物∶第二经洗脱的化合物为37∶63)；MS(ESI，m/z)：406.17和408.17[M+1]+，第一经洗脱的化合物，和406.17和408.17[M+1]+，第二经洗脱的化合物。
级分2：黄色油状物；两种区域异构体的混合物(分布，第一经洗脱的化合物∶第二经洗脱的化合物为62∶38)；MS(ESI，m/z)：406.17和408.17[M+1]+，第一经洗脱的化合物，和406.17和408.17[M+1]+，第二经洗脱的化合物。
实施例57和58可以通过本领域的标准方法分离，例如通过硅胶柱色谱法分离，然而，其在本文中作为其经富集的混合物呈现，因为这是其在下文提及的生物测定中进行测试的方式。
实施例64：2-(6-((5-溴-1H-苯并[d][1，2，3]三唑-1-基)甲基)吡啶-3-基)-5-(二氟甲基)-1，3，4-
二唑
黄色油状物；1H NMR(δppm，400MHz，CDCl3-d)9.33(d，J＝2.0Hz，1H)，8.38(dd，J＝8.2，2.2Hz，1H)，8.28(dd，J＝1.7，0.7Hz，1H)，7.60(dd，J＝8.8，1.6Hz，1H)，7.49(dd，J＝8.7，0.7Hz，1H)，7.33(d，J＝8.2Hz，1H)，6.95(t，J＝51.6Hz，1H)，6.07(s，2H)，
区域化学通过6.07ppm处的质子与7.33ppm和7.49ppm处的质子之间的nOe增强确定；MS(ESI，m/z)：407.18和409.18[M+1]+。
实施例65：2-(6-((6-溴-1H-苯并[d][1，2，3]三唑-1-基)甲基)吡啶-3-基)-5-(二氟甲基)-1，3，4-
二唑
蓖色油状物；1H NMR(δppm，400MHz，CDCl3-d)9.35(s，1H)，8.39(dd，J＝8.2，2，1Hz，1H)，7.99(d，J＝8.8Hz，1H)，7.79(d，J＝1，8Hz，1H)，7.52(dd，J＝8.8，1.6Hz，1H)，7.34(d，J＝8.2Hz，1H)，6.95(t，J＝51.6Hz，1H)，6.05(s，2H)，
区域化学通过6.05ppm处的质子与7.34ppm和7.79ppm处的质子之间的nOe增强确定；MS(ESI，m/z)：407.18和409.18[M+1]+。
实施例66：2-(6-((5-溴-2H-苯并[d][1，2，3]三唑-2-基)甲基)吡啶-3-基)-5-(二氟甲基)-1，3，4-
二唑
黄色油状物；1H NMR(δppm，400MHz，CDCl3-d)9.34(d，J＝2.1Hz，1H)，8.40(dd，J＝8.2，2.2Hz，1H)，8.11(d，J＝1.7Hz，1H)，7.81(dd，J＝9.0，0.8Hz，1H)，7.53(dd，J＝9.1，1.7Hz，1H)，7.31(d，J＝8.2Hz，1H)，6.95(t，J＝51.7Hz，1H)，6.15(s，2H)，
区域化学通过在仅6.15ppm和7.31ppm处的质子之间的nOe增强确定；MS(ESI，m/z)：407.18和409.18[M+1]+。
B)根据本发明的方法B合成的一些实施例
通过应用以下合成方案合成式(I)化合物：
向相应的烷芳基化合物(15.6mmol)在乙腈中的溶液中添加N-溴代琥珀酰亚胺(NBS)(15.6mmol，2.37g)和偶氮二异丁腈(AIBN)(1.56mmol，0.256g)。将反应混合物回流2小时并且再次添加偶氮二异丁腈(0.78mmol，0.128g)。回流一小时之后，将混合物在室温下搅拌16小时。然后，减压蒸发溶剂，并且将由此获得的粗制品通过快速色谱法(硅胶，乙酸乙酯/己烷)纯化，得到溴化物化合物。
在W、X、Y和Z均为CH的情况下
随后在室温下向相应的溴化物化合物(1.0mmol)在N，N-二甲基甲酰胺(DMF)中的溶液中添加NaN3(4.7mmol，0.305g)、NH4Cl(4.7mmol，0.251g)和LiCl(1.7mmol，0.071g)。将反应混合物在100℃下搅拌并通过TLC监测直至反应完成。然后添加乙酸乙酯，并且将有机层用水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并减压蒸发。由此获得的粗制品无需进一步纯化即可使用。
在室温下向相应的炔烃(0.5mmol)、叠氮化合物(0.5mmol)和CuI(0.22mmol，0.041g)在N，N-二甲基甲酰胺中的溶液添加N，N-二异丙基乙胺(DIPEA)(2.8mmol，0.5ml)。将反应混合物搅拌并且通过HPLC-MS监测。反应完成之后，添加乙酸乙酯。然后，将有机层用NH3/H2O(×2)和盐水洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并且减压蒸发。将由此获得的粗制品通过快速色谱法(硅胶，乙酸乙酯/己烷)纯化，得到所期望产物。
在W、X、Y或Z中的一个或两个是N的情况下(以吡啶为例)
向相应的溴化物化合物(1.0mmol)在N，N-二甲基甲酰胺中的溶液中添加NaN3。将反应混合物在室温下搅拌5小时。然后，添加乙酸乙酯，并且将有机层用水和盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并且减压蒸发。由此获得的粗制品无需进一步纯化即可使用。
在室温下向相应的炔烃(0.5mmol)、叠氮化合物(0.5mmol)和CuI(0.22mmol，0.041g)在N，N-二甲基甲酰胺中的溶液中添加N，N-二异丙基乙胺(DIPEA)(2.8mmol，0.5ml)。将反应混合物搅拌并且通过HPLC-MS监测。反应完成之后，添加乙酸乙酯。然后，将有机层用NH3/H2O(×2)和盐水洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并且减压蒸发。将由此获得的粗制品通过快速色谱法(硅胶，乙酸乙酯/己烷)纯化，得到所期望产物。
随后在室温下向相应的腈化合物(1.0mmol)在N，N-二甲基甲酰胺中的溶液中添加NaN3(4.7mmol，0.305g)、NH4Cl(4.7mmol，0.251g)和LiCl(1.7mmol，0.071g)。将反应混合物在100℃下搅拌并且通过TLC监测直至反应完成。由此获得的粗制品无需进一步纯化即可使用。
在室温下向上一步获得的粗制反应物中添加二氟乙酸酐(DFAA)(20.0mmol，2.5ml)。将反应混合物在60℃下(当W、X、Y或Z中的一个或两个为N)或100℃下(当W、X、Y和Z各自为CH)搅拌。通过HPLC-MS监测反应进程。反应完成之后，添加水并且用乙酸乙酯萃取该溶液。将合并的有机级分用水和盐水洗涤，用Na2SO4干燥并且减压蒸发。将由此获得的粗制品通过快速色谱法(硅胶，乙酸乙酯/己烷)纯化，得到具有高纯度(＞90％)的所期望产物。
使用该方案制备的一些代表性实施例是：
实施例27：2-(二氟甲基)-5-(4-((4-苯基-1H-1，2，3-三唑-1-基)甲基)苯基)-1，3，4-
二唑
白色固体；1H NMR(δppm，400MHz，DMSO-d6)872(s，1H)，8.10(d，J＝8.3Hz，2H)，7.87(d，J＝7.1Hz，2H)，7.58(d，J＝8.2Hz，2H)，7.56(t，J＝51.3Hz，1H)，7.46(dd，J＝8.3，7.0Hz，2H)，7.38-7.33(m，1H)，5.82(s，2H)；MS(ESI，m/z)：354.30[M+1]+.
实施例28：1-(4-(5-(二氟甲基)-1，3，4-
二唑-2-基)苄基)-1H-1，2，3-三唑-4-羧酸甲酯
白色固体；1H NMR(δppm，400MHz，DMSO-d6)8.96(s，1H)，788(d，J＝8.3Hz，2H)，7.56(t，J＝52.6Hz，1H)，7.50(d，J＝8.3Hz，2H)，5.80(s，2H)，3.84(s，3H)；MS(ESI，m/z)：336.26[M+1]+.
实施例29：2-(4-((4-(4-氯苯基)-1H-1，2，3-三唑-1-基)甲基)苯基)-5-(二氟甲基)-1，3，4-
二唑
白色固体；1H NMR(δppm，400MHz，DMSO-d6)8.77(s，1H)，8.10(d，J＝8.3Hz，2H)，790(d，J＝8.6Hz，2H)，758(d，J＝8.2Hz，2H)，7.56(t，J＝51.3Hz，1H)，7.53(d，d＝8.6Hz，2H)，5.82(s，2H)；MS(ESI，m/z)：388.24和390.27[M+1]+.
实施例30：2-(二氟甲基)-5-(4-((4-(4-(三氟甲基)苯基)-1H-1，2，3-三唑-1-基)甲基)苯基)-1，3，4-
二唑
白色固体；1H NMR(δppm，400MHz，DMSO-d6)8.90(s，1H)，8.12-8.09(m，4H)，7.83(d，J＝8.2Hz，2H)，7.60(d，J＝83Hz，2H)，7.56(t，J＝51.3Hz，1H)，5.85(s，2H)；MS(ESI，m/z)：422.31[M+1]+.
实施例31：2-(4-((4-(叔丁基)-1H-1，2，3-三唑-1-基)甲基)苯基)-5-(二氟甲基)-1，3，4-
二唑
白色固体；1H NMR(δppm，400MHz，DMSO-d6)8.09(d，J＝8.3Hz，2H)，7.99(s，1H)，7.56(t，J＝51.4Hz，1H)，7.54(d，J＝8.3Hz，2H)，5.68(s，2H)，1.28(s，9H)；MS(ESI，m/z)：334.02[M+1]+.
实施例32：2-(4-((4-环己基-1H-1，2，3-三唑-1-基)甲基)苯基)-5-(二氟甲基)-1，3，4-
二唑
白色固体；1H NMR(δppm，400MHz，DMSO-d6)8.08(d，J＝8.3Hz，2H)，7.97(s，1H)，7.56(t，J＝51.4Hz，1H)，7.51(d，J＝8.3Hz，2H)，5.68(s，2H)，2.72-2.63(m，1H)，2.01-1.89(m，2H)，1.76-1.72(m，2H)，1.75-1.66(m，1H)，1.43-1.30(m，4H)，1.27-1.16(m，1H)；MS(ESI，m/z)：360.57[M+1]+.
实施例33：2-(二氟甲基)-5-(4-((4-(吡啶-4-基)-1H-1，2，3-三唑-1-基)甲基)苯基)-1，3，4-
二唑
白色固体；1H NMR(δppm，400MHz，DMSO-d6)8.95(s，1H)，8.65(d，J＝5.8Hz，2H)，8.11(d，J＝8.3Hz，2H)，7.84(d，J＝6.1Hz，2H)，7.59(d，J＝8.2Hz，2H)，7.56(t，J＝51.3Hz，1H)，5.86(s，2H)；MS(ESI，m/z)：355.00[M+1]+.
实施例34：2-(二氟甲基)-5-(4-((4-(吡啶-3-基)-1H-1，2，3-三唑-1-基)甲基)苯基)-1，3，4-
二唑
黄色固体；1H NMR(δppm，400MHz，DMSO-d6)9.08(s，1H)，8.85(s，1H)，8.56(d，J＝4.8Hz，1H)，8.24(dt，J＝7.9，2.0Hz，1H)，8.11(d，J＝8.3Hz，2H)，7.59(d，J＝8.3Hz，2H)，7.56(t，J＝51.3Hz，1H)，7.50(dd，J＝8.0，4.8Hz，1H)，5.85(s，2H)；MS(ESI，m/z)：355.25[M+1]+.
实施例35：2-(二氟甲基)-5-(4-((4-(噻吩-3-基)-1H-1，2，3-三唑-1-基)甲基)苯基)-1，3，4-
二唑
白色固体；1H NMR(δppm，400MHz，DMSO-d6)8.56(s，1H)，8.10(d，J＝8.3Hz，2H)，7.88(dd，J＝2.9，1.2Hz，1H)，7.66(dd，J＝5，0，2.9Hz，1H)，7.56(t，J＝51.4Hz，1H)，7.55(d，J＝8.3Hz，2H)，7.53(dd，J＝5.1，1.3Hz，1H)，5.80(s，2H)；MS(ESI，m/z)：360.22[M+1]+.
实施例36：2-(二氟甲基)-5-(4-((4-(噻吩-2-基)-1H-1，2，3-三唑-1-基)甲基)苯基)-1，3，4-
二唑
白色固体；1H NMR(δppm，400MHz，DMSO-d6)8.63(s，1H)，8.10(d，J＝8.3Hz，2H)，7.58-7.54(m，3H)，7.56(t，J＝51.5Hz，1H)，7.55(d，J＝1.2Hz，1H)，7.46(dd，J＝3.6，1.1Hz，1H)，5.80(s，2H)；MS(ESI，m/z)：360.22[M+1]+.
实施例37：2-(二氟甲基)-5-(4-(1-(4-苯基-1H-1，2，3-三唑-1-基)乙基)苯基)-1，3，4-
二唑
白色固体；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.84(s，1H)，8.09(d，J＝8.4Hz，2H)，7.88(d，J＝7.1Hz，2H)，7.60(d，J＝8.4Hz，2H)，7.56(t，J＝51.4Hz，1H)，7.46(t，J＝7.6Hz，2H)，7.38-7.33(m，1H)，6.16(q，J＝7.1Hz，1H)，1.99(d，J＝7.1Hz，3H)；MS(ESI，m/z)：368.29[M+1]+.
实施例38：2-(二氟甲基)-5-(4-((4，5-二苯基-1H-1，2，3-三唑-1-基)甲基)苯基)-1，3，4-
二唑
白色固体；1H NMR(δppm，400MHz，CDCl3-d)8.08-8.01(m，2H)，7.62-7.57(m，2H)，7.56-7.50(m，2H)，7.49-7.43(m，2H)，7.33-7.27(m，2H)，7.23(d，J＝8.2Hz，2H)，7.20-7.16(m，2H)，6.93(t，J＝51.7Hz，1H)，5.53(s，2H)；MS(ESI，m/z)：430.33[M+1]+.
实施例39：2-(二氟甲基)-5-(4-((5-甲基-4-苯基-1H-1，2，3-三唑-1-基)甲基)苯基)-1，3，4-
二唑
白色固体；1H NMR(δppm，400MHz，CDCl3-d)8.18-8.12(m，2H)，7.75-7.72(m，2H)，7.51-7.46(m，2H)，7.41-7.37(m，3H)，6.94(t，J＝51.7Hz，1H)，5.68(s，2H)，2.40(s，3H)，
区域化学通过5.68ppm处的质子与2.40ppm和7.41ppm处的质子之间的nOe增强确定；MS(ESI，m/z)：368.27[M+1]+。
实施例40：2-(二氟甲基)-5-(4-((4-甲基-5-苯基-1H-1，2，3-三唑-1-基)甲基)苯基)-1，3，4-
二唑
白色固体；1H NMR(δppm，400MHz，CDCl3-d)806-8.02(m，2H)，7.49-7.45(m，3H)，7.22(d，J＝8.2Hz，2H)，7.16(dd，J＝7.4，2.2Hz，2H)，6.93(t，J＝51.7Hz，1H)，5.55(s，2H)，2.35(s，3H)；MS(ESI，m/z)：368.27[M+1]+.
实施例41：2-(二氟甲基)-5-(6-((4-苯基-1H-1，2，3-三唑-1-基)甲基)吡啶-3-基)-1，3，4-
二唑
白色固体；1H NMR(δppm，400MHz，DMSO-d6)9.21(d，J＝2.2Hz，1H)，8.74(s，1H)，8.50(dd，J＝8.2，2.3Hz，1H)，7.89(dd，J＝8.3，1.3Hz，1H)，7.59(t，J＝51.4Hz，1H)，7.58(d，J＝8.5Hz，2H)，7.47(t，J＝7.6Hz，2H)，7.36(t，J＝7.4Hz，1H)，5.94(s，2H)；MS(ESI，m/z)：355.25[M+1]+.
中间体：
6-(溴甲基)烟腈
MS(ESI，m/z)：196.99[M+1]+.
6-(叠氮甲基)烟腈
MS(ESI，m/z)：160.02[M+1]+.
6-((4-苯基-1H-1，2，3-三唑-1-基)甲基)烟腈，具有以下结构：
MS(ESI，m/z)：262.20[M+1]+。
2-((4-苯基-1H-1，2，3-三唑-1-基)甲基)-5-(1H-四唑-5-基)吡啶
MS(ESI，m/z)：305.23[M+1]+.
实施例42：2-(二氟甲基)-5-(5-((4-苯基-1H-1，2，3-三唑-1-基)甲基)吡啶-2-基)-1，3，4-
二唑
黄色油状物；1H NMR(δppm，400MHz，DMSO-d6)8.90(d，J＝2.1Hz，1H)，8.75(s，1H)，8.30(d，J＝8.1Hz，1H)，8.02(dd，J＝8.2，2.2Hz，1H)，7.88-7.85(m，2H)，7.60(t，J＝51.3Hz，1H)，7.49-7.44(m，2H)，7.38-7.33(m，1H)，5.88(s，2H)；MS(ESI，m/z)：355.25[M+1]+.
实施例43：2-(6-((4-(4-氯苯基)-1H-1，2，3-三唑-1-基)甲基)吡啶-3-基)-5-(二氟甲基)-1，3，4-
二唑
黄色固体；1H NMR(δppm，400MHz，DMSO-d6)9.20(d，J＝2.2Hz，1H)，8.78(s，1H)，8.50(dd，J＝8.2，2.3Hz，1H)，7.92(d，J＝8.5Hz，2H)，7.59(t，J＝51.3Hz，1H)，7.58(d，J＝8.1Hz，1H)，7.54(d，J＝8.5Hz，2H)，5.95(s，2H)；MS(ESI，m/z)：389.25和391.21[M+1]+.
实施例44：2-(6-((4-(2-氯苯基)-1H-1，2，3-三唑-1-基)甲基)吡啶-3-基)-5-(二氟甲基)-1，3，4-
二唑
黄色固体；1H NMR(δppm，400MHz，DMSO-d6)9.21(s，1H)，8.87(s，1H)，8.50(dd，J＝8.3，2.3Hz，1H)，8.14(d，J＝7.8Hz，1H)，7.66-7.54(m，3H)，7.52-7.38(m，2H)，6.00(s，2H)；MS(ESI，m/z)：389.25和391.25[M+1]+.
实施例45：2-(6-((4-(3-氯苯基)-1H-1，2，3-三唑-1-基)甲基)吡啶-3-基)-5-(二氟甲基)-1，3，4-
二唑
黄色固体；1H NMR(δppm，400MHz，DMSO-d6)9.21(d，J＝2.2Hz，1H)，8.83(s，1H)，8.51(dd，J＝8.2，2.3Hz，1H)，7.95(t，J＝1.9Hz，1H)，7.89-7.85(m，1H)，7.61(d，J＝8.7Hz，1H)，7.59(t，J＝51.1Hz，1H)，7.53-7.40(m，2H)，5.95(s，2H)；MS(ESI，m/z)：389.22和391.25[M+1]+.
实施例46：2-(6-((4-(3，4-二氯苯基)-1H-1，2，3-三唑-1-基)甲基)吡啶-3-基)-5-(二氟甲基)-1，3，4-
二唑
黄色固体；1H NMR(δppm，400MHz，DMSO-d6)9.20(d，J＝2.2Hz，1H)，8.87(s，1H)，8.51(dd，J＝8.2，2.3Hz，1H)，8.15(d，J＝2.0Hz，1H)，7.90(dd，J＝8.4，2.0Hz，1H)，7.75(d，J＝8.4Hz，1H)，7.62(d，J＝8.2Hz，1H)，7.59(t，J＝51.2Hz，1H)，5.96(s，2H)；MS(ESI，m/z)：423.22和425.22[M+1]+.
实施例47：2-(6-((4-(3，5-二氯苯基)-1H-1，2，3-三唑-1-基)甲基)吡啶-3-基)-5-(二氟甲基)-1，3，4-
二唑
白色固体；1H NMR(δppm，400MHz，DMSO-d6)9.21(dd，J＝2.3，0.8Hz，1H)，8.91(s，1H)，8.51(dd，J＝8.2，2.3Hz，1H)，7.96(d，J＝2.0Hz，2H)，7.64(dd，J＝8.2，0.9Hz，1H)，7.61(t，J＝1.9Hz，1H)，7.59(t，J＝51.2Hz，1H)，5.96(s，2H).MS(ESI，m/z)：423.26和425.28[M+1]+.
实施例48：2-(二氟甲基)-5-(6-((4-(2-氟苯基)-1H-1，2，3-三唑-1-基)甲基)吡啶-3-基)-1，3，4-
二唑
黄色固体；1H NMR(δppm，400MHz，DMSO-d6)9.20(dd，J＝2.3，0.8Hz，1H)，8.64(d，J＝3.8Hz，1H)，8.49(dd，J＝8.2，2.3Hz，1H)，8.18(td，J＝7.6，1.7Hz，1H)，7.65(t，J＝51.3Hz，1H)，7.56(d，J＝8.2Hz，1H)，7.45-7.33(m，3H)，5.99(s，2H)；MS(ESI，m/z)：373.21[M+1]+.
实施例49：2-(二氟甲基)-5-(6-((4-(2，6-二氟苯基)-1H-1，2，3-三唑-1-基)甲基)吡啶-3-基)-1，3，4-
二唑
褐色固体；1H NMR(δppm，400MHz，DMSO-d6)9.21(d，J＝2.2Hz，1H)，8.66(t，J＝1.5Hz，1H)，8.51(dd，J＝8.2，2.3Hz，1H)，7.59(d，J＝8.2Hz，1H)，)，7.59(t，J＝51.2Hz，1H)，7.52(tt，J＝8.5，6.4Hz，1H)，7.28(t，J＝8.4Hz，2H)，6.00(s，2H)；MS(ESI，m/z)：391.28[M+1]+.
实施例50：2-(6-((4-(3-氯苯基)-1H-1，2，3-三唑-1-基)甲基)吡啶-3-基)-5-(二氟甲基)-1，3，4-
二唑
白色固体；1H NMR(δppm，400MHz，DMSO-d6)9.21(d，J＝2.2Hz，1H)，8.75(s，1H)，8.50(dd，J＝8.2，2.3Hz，1H)，7.59(t，J＝51.4Hz，1H)，7.58(d，J＝9.0Hz，1H)，7.48(t，J＝1.3Hz，1H)，7.46(dt，J＝3.4，1.8Hz，1H)，7.38(t，J＝7.9Hz，1H)，6.93(ddd，J＝8.2，2.6，1.1Hz，1H)，5.94(s，2H)，3.82(s，3H)；MS(ESI，m/z)：385.33[M+1]+.
实施例56：2-(二氟甲基)-5-(6-((4-(3，5-二氟苯基)-1H-1，2，3-三唑-1-基)甲基)吡啶-3-基)-1，3，4-
二唑
白色固体；1H NMR(δppm，400MHz，CDCl3-d)9.20(d，J＝2.3Hz，1H)，8.86(s，1H)，8.51(dd，J＝8.2，2.3Hz，1H)，7.65-7.61(m，3H)，7.59(t，J＝51.3Hz，1H)，7.30-7.20(m，1H)，5.97(s，2H)；MS(ESI，m/z)：391.25[M+1]+.
实施例57：2-(二氟甲基)-5-(6-((4-(3，4，5-三氟苯基)-1H-1，2，3-三唑-1-基)甲基)吡啶-3-基)-1，3，4-
二唑
白色固体；1H NMR(δppm，400MHz，CDCl3-d)9.20(d，J＝2.1Hz，1H)，8.82(s，1H)，8.51(dd，J＝8.2，2.3Hz，1H)，7.85(dd，J＝9.0，6.7Hz，2H)，7.63(d，J＝8.2Hz，1H)，7.59(t，J＝51.2Hz，1H)，5.97(s，2H)；MS(ESI，m/z)：409.25[M+1]+.
C)根据本发明的方法C合成的一些实施例
通过应用以下合成方案合成式(I)化合物：
将CuI(2.5mmol，0.500g)溶解在氢氧化铵中。在搅拌的同时，逐滴添加相应的芳基乙炔。15分钟之后，将形成的黄色沉淀物过滤并用水、EtOH和Et2O洗涤。
在W、X、Y和Z均为CH的情况下
向相应的铜(I)芳基炔化物(0.5mmol)和相应的叠氮化合物(如方法B所述合成；0.6mmol)在CH2Cl2(1ml)中的溶液中添加N-氯代琥珀酰亚胺(0.6mmol，0.080g)。将混合物在室温下搅拌并且通过HPLC-MS监测。反应完成之后，减压蒸发二氯甲烷，并且将由此获得的粗制品通过快速色谱法(硅胶，乙酸乙酯/己烷)纯化，得到所期望产物。
在W、X、Y或Z中的一个或两个是N的情况下(以吡啶为例)
向相应的亚铜(I)芳基炔化物(0.5mmol)和相应的叠氮化物衍生物(如方法B所述合成；0.6mmol)在CH2Cl2(1ml)中的溶液中添加N-氯代琥珀酰亚胺(0.6mmol，0.080g)。将混合物在室温下搅拌并且通过HPLC-MS监测。反应完成之后，减压蒸发二氯甲烷，并且将由此获得的粗制品通过快速色谱法(硅胶，乙酸乙酯/己烷)纯化，得到所期望产物。
随后在室温下向相应的腈衍生物(1.0mmol)在N，N-二甲基甲酰胺中的溶液中添加NaN3(4.7mmol，0.305g)、NH4Cl(4.7mmol，0.251g)和LiCl(1.7mmol，0.071g)。将反应混合物在100℃下搅拌并且通过TLC监测直至反应完成。由此获得的粗制品无需进一步纯化即可使用。
在室温下向上一步获得的粗制反应物中添加DFAA(20.0mmol，2.5ml)。将反应混合物在60℃下(当W＝N时)或100℃下(当W＝C时)搅拌。通过HPLC-MS监测反应进程。反应完成之后，添加水并且用乙酸乙酯萃取该溶液。将合并的有机级分用水和盐水洗涤，用Na2SO4干燥并且减压蒸发。将由此获得的粗制品通过快速色谱法(硅胶，乙酸乙酯/己烷)纯化，得到高纯度(＞90％)的所期望产物。
使用该方案制备的一些代表性实施例是：
实施例51：2-(4-((5-氯-4-苯基-1H-1，2，3-三唑-1-基)甲基)苯基)-5-(二氟甲基)-1，3，4-
二唑
白色固体；1H NMR(δppm，400MHz，DMSO-d6)1H NMR(400MHz，DMSO-d6)8.11(d，J＝8.3Hz，2H)，7.95-7.91(m，2H)，7.56(t，J＝51.4Hz，1H)，7.56-7.52(m，4H)，7.48-7.44(m，1H)，5.88(s，2H)；MS(ESI，m/z)：388.20和390.20[M+1]+.
中间体：
(苯基乙炔基)铜
MS(ESI，m/z)：388.20[M+1]+.
(5-(4-(叠氮甲基)苯基)-1H-四唑
MS(ESI，m/z)：202.20[M+1]+.
5-(4-((5-氯-4-苯基-1H-1，2，3-三唑-1-基)甲基)苯基)-1H-四唑
MS(ESI，m/z)：338.19和340.18[M+1]+.
实施例52：2-(6-((5-氯-4-苯基-1H-1，2，3-三唑-1-基)甲基)吡啶-3-基)-5-(二氟甲基)-1，3，4-
二唑，具有以下结构式：
白色固体；1H NMR(δppm，400MHz，DMSO-d6)1H NMR(400MHz，DMSO-d6)9.18(d，J＝2.3Hz，1H)，8.52(dd，J＝8.2，2.3Hz，1H)，7.99-7.92(m，2H)，7.68(d，J＝8.3Hz，1H)，7.59(d，J＝51.3Hz，1H)，7.55(t，J＝7.7Hz，2H)，7.48-7.44(m，1H)，6.02(s，2H)；MS(ESI，m/z)：389.22和391.21[M+1]+.
实施例53：2-(6-((5-氯-4-(2-氯苯基)-1H-1，2，3-三唑-1-基)甲基)吡啶-3-基)-5-(二氟甲基)-1，3，4-
二唑
黄色油状物；1H NMR(δppm，400MHz，CDCl3-d)9.37(d，J＝2.1Hz，1H)，8.46(dd，J＝8.3，2.2Hz，1H)，7.58-7.54(m，2H)，7.45-7.41(m，2H，7.32(d，J＝8.5Hz，1H)，6.97(t，J＝51.6Hz，1H)，5.89(s，2H)；MS(ESI，m/z)：423.19和425.18[M+1]+.
实施例54：2-(6-((5-氯-4-(3-氯苯基)-1H-1，2，3-三唑-1-基)甲基)吡啶-3-基)-5-(二氟甲基)-1，3，4-
二唑
黄色油状物；1H NMR(δppm，400MHz，CDCla-d)9.35(d，J＝2.2Hz，1H)，8.45(dd，J＝8.2，2.2Hz，1H)，8.05(t，J＝1.9Hz，1H)，7.94(dt，J＝7.5，1.6Hz，1H)，7.49-7.39(m，2H)，7.34(d，J＝8.2Hz，1H)，6.97(t，J＝51.6Hz，1H)，5.87(s，2H)；MS(ESI，m/z)：423.19和425.22[M+1]+.
实施例67：制备2-(6-((5-氯-4-(2-氟苯基)-1H-1，2，3-三唑-1-基)甲基)吡啶-3-基)-5-(二氟甲基)-1，3，4-
二唑，结构式如下：
该化合物按照方法C中所述方法制备。黄色油状物；
1H NMR(δppm，400MHz，CDCl3-d)9.37(s，1H)，8.46(d，J＝8.1Hz，1H)，7.76(td，J＝7.5，1.8Hz，1H)，7.47(tdd，J＝7.3，6.1，1.6Hz，1H)，7.33-7.27(m，2H)，7.23(ddd，J＝9.7，8.3，1.1Hz，1H)，6.97(t，J＝51.6Hz，1H)，5.88(s，2H)；MS(ESI，m/z)：407.22和409.22[M+1]+
通过任何以上方法获得的化合物可以进一步转化为本发明的其他化合物。一个代表性的实施例如下所示。
实施例55：2-(6-(氯(4-苯基-1H-1，2，3-三唑-1-基)甲基)吡啶-3-基)-5-(二氟甲基)-1，3，4-
二唑
向实施例39(0.05mmol)在N，N-二甲基甲酰胺(0.3ml)的溶液中添加N-氯代琥珀酰亚胺(0.08mmol，0.015g)。将所得混合物回流16小时。然后，将粗制反应溶液在减压下蒸发至干燥并且通过快速色谱法(硅胶，乙酸乙酯/己烷)纯化，得到所期望产物。
黄色油状物；1H NMR(δppm，400MHz，CDCl3-d)9.43(d，J＝2.2Hz，1H)，8.58(dd，J＝8.2，2.2Hz，1H)，8.42(s，1H)，7.94-7.88(m，3H)，7.69(s，1H)，7.48(dd，J＝8.2，6.7Hz，2H)，7.44-7.37(m，1H)，6.99(t，J＝51.6Hz，1H)；MS(ESI，m/z)：389.25和391.25[M+1]+.
本发明化合物的生物活性
所有酶促反应均在含有HDAC测定缓冲液(50mM Tris-HCl，pH 7.4，137mM NaCl，2.7mM KCl，0.05％吐温20，5μg BSA)、HDAC底物、HDAC酶和受试化合物的50μL混合物中在室温下一式两份地进行17小时。用100％DMSO制备化合物稀释液，其比化合物的最终浓度高100倍，并且通过回声声波分液器(Echo acoustic dispenser)将300nL稀释液添加至30μL反应物中，使得所有反应中的DMSO的最终浓度为1％。在酶促反应之后，通过添加5μl 10μM已知抑制剂溶液使反应停止。底物和产物的荧光信号通过微流控移动测定(microfluidicsmobility assay)在EZ Reader II设备中测量。底物转化为产物的百分比由设备软件基于峰面积计算。
转化数据的百分比使用计算机软件Graphpad Prism分析。在不存在化合物的情况下，将每个数据集中的转化(Ct)定义为100％活性。在不存在HDAC的情况下，将每个数据集中的转化(Cb)定义为0％活性。在每种化合物存在的情况下的百分比活性根据以下等式计算：％抑制＝(Ct-C)/(Ct-Cb)，其中C＝在化合物存在的情况下的转化百分比。
然后使用由等式Y＝B+(T-B)/l+10((LogEC50-X)xHill斜率)产生的S形剂量-响应曲线的非线性回归分析绘制％抑制相对于一系列化合物浓度的值，其中Y＝百分比抑制，B＝最小百分比抑制，T＝最大百分比抑制，X＝化合物的对数，并且Hill斜率＝斜率因子或Hill系数。IC50值由引起半最大百分比活性的浓度确定。
hHDAC1抑制方案：
抑制hHDAC1测定中使用的缓冲液测定是：Hepes 50mM、KCl 100mM、吐温200.001％、BSA 0.01％；pH＝7.4。向384孔微板(Geriner 784209)中添加研究化合物和HDAC1(BPS Bioscience 50010)酶5nM，并且在室温下孵育3小时。然后添加乙酰化肽A(PerkinElmer CLS960006)2μM并且在室温下孵育1小时。最后，添加1.4μM LBH589(ReactionBiology Corp EPI009B)以使反应停止。反应在Caliper EzReader LabChip 3000(Caliper，Hopkinton，MA)读取器中测量。用于验证测定的参考化合物的文献IC50值：hHDAC1，LBH-589(Reaction Biology Corp EPl009B)IC50 1nM，J Med Chem 2016，59，1455-1470。
hHDAC2抑制方案：
抑制hHDAC2测定中使用的缓冲液测定是：Hepes 50mM、KC1 100mM、吐温200.001％、BSA 0.01％；pH＝7.4。向384孔微板(Geriner 784209)中添加研究化合物和HDAC2(BPS Bioscience 50002)酶12nM，并且在室温下孵育3小时。然后添加乙酰化肽A(PerkinElmer CLS960006)1μM并且在室温下孵育1小时。最后，添加LBH589(Reaction BiologyCorp EPI009B)1.4μM以使反应停止。反应在Caliper EzReader LabChip 3000(Caliper，Hopkinton，MA)读取器中测量。hHDAC2、LBH-589(Reaction Biology Corp EPI009B)IC50＜3nM，Gale et al，Application note Perkin Elmer。
hHDAC3抑制方案：
抑制hHDAC3测定中使用的缓冲液测定是：Hepes 50mM、KCl 100mM、吐温200.001％、BSA 0.01％；pH＝7.4。向384孔微板(Gerinet 784209)中添加研究化合物和HDAC3(BPS Bioscience 50003)酶5nM，并且在室温下孵育3小时。然后添加乙酰化肽A(PerkinElmer CLS960006)2μM并且在室温下孵育1小时。最后，添加LBH589(Reaction BiologyCorp EPI009B)1.4μM以使反应停止。反应在Caliper EzReader LabChip 3000(Caliper，Hopkinton，MA)读取器中测量。用于验证测定的参考化合物的文献IC50值：hHDAC3、LBH-589(Reaction Biology Corp EPI009B)IC50 2nM，Cancer Lett 2009；280：233-241。
hHDAC4抑制方案：
抑制hHDAC4测定中使用的缓冲液测定是：Hepes 50mM、KCl 100mM、吐温200.001％、BSA 0.01％；pH＝7.4。向384孔微板(Geriner 784209)中添加研究化合物和HDAC4(BPS Bioscience 50004)酶0.5nM，并且在室温下孵育5分钟。然后添加乙酰化肽B(PerkinElmer CLS960007)1μM并且在室温下孵育1小时。最后，添加LBH589(Reaction BiologyCorp EPI009B)1.4μM以使反应停止。反应在Caliper EzReader LabChip 3000(Caliper，Hopkinton，MA)读取器中测量。用于验证测定的参考化合物的文献IC50值：hHDAC4、LBH-589(Reaction Biology Corp EPl009B)，IC50 65nM，Gale et al.，Apphcatlon note PerkinElmer。
hHDAC5抑制方案：
抑制hHDAC5测定中使用的缓冲液测定是：Hepes 50mM、KCl 100mM、吐温200.001％、BSA 0.01％；pH＝7.4。向384孔微板(Geriner 784209)中添加研究化合物和HDAC5(BPS Bioscience 50005)酶0.75nM，并且在室温下孵育5分钟。然后添加乙酰化肽B(PerkinElmer CLS960007)2μM并且在室温下孵育1小时。最后，添加LBH589(Reaction BiologyCorp EPI009B)1.4μM以使反应停止。反应在Caliper EzReader LabChip 3000(Caliper，Hopkinton，MA)读取器中测量。用于验证测定的参考化合物的文献IC50值：hHDAC5，LBH-589(Reaction Biology Corp EPI009B)，IC50 160nM，Nat.Chem.Biol.6，238-243(2010)。
HDAC6抑制方案：
抑制hHDAC6测定中使用的缓冲液测定是：Hepes 50mM、KCl 100mM、吐温200.001％、BSA 0.01％；pH＝7.4。向384孔微板(Greiner 784209)中添加研究化合物和hHDAC6(BPS Bioscience 50006)酶1.20nM，并且在室温下孵育5分钟。然后添加乙酰化肽A(Perkin Elmer CLS960006)2μM并且在室温下孵育1小时。最后，添加LBH589(ReactionBiology Corp EPI009B)1.4μM以使反应停止。反应在Caliper EzReader LabChip 3000(Caliper，Hopkinton，MA)读取器中测量。用于验证测定的参考化合物的文献IC50值：hHDAC6、LBH589(Reaction Biology Corp EPI009B)，IC50 2.0nM，Gale et al.，PerkinElmer Application note。
hHDAC7抑制方案：
抑制hHDAC7测定中使用的缓冲液测定是：Hepes 50mM、KCl 100mM、吐温200.001％、BSA 0.01％；pH＝7.4。向384孔微板(Geriner 784209)中添加研究化合物和HDAC7(BPS Bioscience 50007)酶5nM，并且在室温下孵育5分钟。然后添加乙酰化肽B(PerkinElmer CLS960007)2μM并且在室温下孵育1小时。最后，添加LBH589(Reaction BiologyCorp EPI009B)1.4μM以使反应停止。反应在Caliper EzReader LabChip 3000(Caliper，Hopkinton，MA)读取器中测量。用于验证测定的参考化合物的文献IC50值：用于验证测定的参考化合物的文献IC50值：hHDAC7、LBH-589(Reaction Biology Corp EPl009B)，IC50760nM，Gale et al，Application note Perkin Elmer。
hHDAC8抑制方案：
抑制hHDAC8测定中使用的缓冲液测定是：Hepes 50mM、KC1 100mM、吐温200.001％、BSA 0.01％；pH＝7.4。向384孔微板(Geriner 784209)中添加研究化合物和HDAC8(BPS Bioscience 50008)酶1nM，并且在室温下孵育5分钟。然后添加乙酰化肽B(PerkinElmer CLS960007)2μM并且在室温下孵育1小时。最后，添加LBH589(Reaction BiologyCorp EPI009B)1.4μM以使反应停止。反应在Caliper EzReader LabChip 3000(Caliper，Hopkinton，MA)读取器中测量。用于验证测定的参考化合物的文献IC50值：hHDAC8、曲古抑菌素A(Trichostatin A)(Reaction Biology Corp.EPI009F)，IC5090nM，Bradner，J.E.etal.Nat.Chem.Biol.6，238-243(2010)。
hHDAC9抑制方案：
抑制hHDAC9测定中使用的缓冲液测定是：Hepes 50mM、KCl 100mM、吐温200.001％、BSA 0.01％；pH＝7.4。向384孔微板(Geriner 784209)中添加研究化合物和HDAC9(BPS Bioscience 50009)酶2nM，并且在室温下孵育5分钟。然后添加乙酰化肽B(PerkinElmer CLS960007)2μM并且在室温下孵育1小时。最后，添加LBH589(Reaction BiologyCorpEPI009B)1.4μM以使反应停止。反应在Caliper EzReader LabChip 3000(Caliper，Hopkinton，MA)读取器中测量。用于验证测定的参考化合物的文献IC50值：用于验证测定的参考化合物的文献IC50值：hHDAC9、LBH-589(Reaction Biology Corp EPI009B)，IC50390nM，Gale et al.，Application note Perkin Elmer。
HDAC10抑制方案：
抑制hHDAC10测定中使用的缓冲液测定是：Hepes 50mM、KCl 100mM、吐温200.001％、BSA 0.01％；pH＝7.4。向384孔微板(Geriner 784209)中添加研究化合物和hHDAC10(BPS Bioscience 50010)酶10nM，并且在室温下孵育60分钟。然后添加乙酰化肽A(Perkin Elmer CLS960006)6μM并且在室温下孵育24小时。最后，添加LBH589(ReactionBiology Corp EPI009B)1.4μM以使反应停止。反应在Caliper EzReader LabChip3000(Caliper，Hopkinton，MA)读取器中测量。用于验证测定的参考化合物的文献IC50值：hHDAC10、SAHA(由Quimatryx提供)，IC50456nM，Hanessian et al.，ACSMed.Chem.Lett.2010，1，2，70-74。
对实施例1至67观察到以下HDAC6抑制活性
此外，实施例(Ex.)1至67显示出相对于其他HDAC1-10酶的高度选择性。一些代表性的选择性如下表所示。
Claims (15)
1.式(I)化合物或其盐、溶剂合物、立体异构体或前药，
其中
W、X、Y或Z中的一个或两个是N，并且W、X、Y和Z中的其余项各自是CH；或者W、X、Y和Z中的每一个是CH；
R1是H；未经取代或经取代的烷基；或卤素；以及
R2是未经取代或经取代的芳族或非芳族杂环，其中所述环包含1至4个氮原子，并且其中是R2基团的这些环氮原子之一与式(I)的其余部分形成了键合。
2.根据权利要求1所述的化合物，其中X是N并且W、X、Y和Z中的其余项各自是CH。
3.根据权利要求1所述的化合物，其中W、X、Y和Z中的每一个是CH。
4.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中R1是H。
5.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中R2是芳族的。
6.根据权利要求5所述的化合物，其中R2是5元单环杂芳基环。
7.根据权利要求6所述的化合物，其中R2是三唑基或咪唑基环。
8.根据权利要求5所述的化合物，其中R2是9元二环杂芳基环。
9.根据权利要求9所述的化合物，其中R2是苯并三唑基或苯并咪唑基环。
10.根据权利要求1所述的化合物，其选自：
或其盐、溶剂合物、立体异构体或前药。
11.用于制备如前述权利要求中任一项所限定的式(I)化合物的方法，其包括使式(II)四唑与二氟乙酸酐反应
其中W、X、Y、Z、R1、R2如权利要求1至10中任一项所限定。
12.药物组合物，其包含如权利要求1至10中任一项所限定的式(I)化合物或其盐、溶剂合物、立体异构体或前药，以及至少一种可药用赋形剂。
13.权利要求1至10中任一项所限定的式(I)化合物或其盐、溶剂合物、立体异构体或前药，其用作药物。
14.根据权利要求13所述应用的化合物，其用于治疗或预防HDAC6相关疾病或病症。
15.根据权利要求14所述应用的化合物，其中所述HDAC6相关疾病或病症是中枢神经系统HDAC6相关疾病或病症。
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