CN114236017A - 一种棕榈酸抗坏血酸酯及其杂质的检测方法 - Google Patents

Abstract

本申请属于药物检测技术领域，尤其涉及一种棕榈酸抗坏血酸酯及其杂质的检测方法。本申请提供的检测方法，包括：采用高效液相色谱法对棕榈酸抗坏血酸酯及其杂质进行检测；高效液相色谱法检测过程中的流动相为流动相A和流动相B；流动相A为高氯酸水溶液或三氟乙酸水溶液，流动相B为乙腈；高效液相色谱检测过程中采用等度洗脱的方式使流动相通过色谱柱；高效液相色谱检测过程中的色谱柱填充剂为亲水键合硅胶或十八烷基‑五氟苯基；高效液相色谱检测过程中，供试品采用稀释剂稀释后进行检测，稀释剂选自甲醇或亚硫酸钠溶液。本申请可有效检出棕榈酸抗坏血酸酯及其7种杂质，具有一定的耐用性、灵敏度高，专属性良好。

Description

一种棕榈酸抗坏血酸酯及其杂质的检测方法

技术领域

本申请属于药物检测技术领域，尤其涉及一种棕榈酸抗坏血酸酯及其杂质的检测方法。

背景技术

棕榈酸抗坏血酸酯为一种高效无毒的脂溶性营养型抗氧剂，难溶于水和植物油，也是营养强化剂。目前在国内市场上销售的棕榈酸抗坏血酸酯绝大部分都依靠进口，国内棕榈酸抗坏血酸酯的生产尚处于起步阶段。同时，棕榈酸抗坏血酸酯也是一种药用辅料，它的质量对于药品的生产及开发具有重大意义，而目前并没有相关的技术方法用于同时检测棕榈酸抗坏血酸酯及其杂质。为了填补现有技术的空白，本申请目的在于建立棕榈酸抗坏血酸酯及其杂质的高效液相检测分析方法。

发明内容

本申请要解决的技术问题是提供棕榈酸抗坏血酸酯及其杂质的高效液相分析方法，具体来说，本方法可有效检出棕榈酸抗坏血酸酯及其7种杂质，本申请的检测方法具有一定的耐用性、灵敏度高，专属性良好。

本申请第一方面提供了一种棕榈酸抗坏血酸酯及其杂质的检测方法，包括：

采用高效液相色谱法对棕榈酸抗坏血酸酯及其杂质进行检测；

高效液相色谱法检测过程中的流动相为流动相A和流动相B；所述流动相A为高氯酸水溶液或三氟乙酸水溶液，所述流动相B为乙腈；

所述高效液相色谱检测过程中采用等度洗脱的方式使流动相通过色谱柱；所述高效液相色谱检测过程中的色谱柱填充剂为亲水键合硅胶或十八烷基-五氟苯基硅胶；

所述高效液相色谱检测过程中，供试品采用稀释剂稀释后再进行检测，所述稀释剂选自甲醇或亚硫酸钠甲醇溶液。

具体的，流动相B为纯乙腈（HPLC）。

具体的，供试品采用稀释剂稀释后再进行高效液相色谱，供试品采用稀释剂稀释5至15倍。

另一实施例中，所述高效液相色谱检测过程中的色谱柱填充剂为粒径为3.0~5.0μm十八烷基-五氟苯基硅胶；所述流动相A为0.01~0.05mmol/L的高氯酸水溶液。

具体的，所述高效液相色谱检测过程中的色谱柱为ACE EXCEL 5 C18-PFP 250×4.6mmid，批号：V18-2053，系列编号：A222204。

另一实施例中，所述等度洗脱中，所述流动相A在流动相中的体积分数为10%~30%，所述流动相B在流动相中的体积分数为70%~90%，所述等度洗脱的时间为20~30 min。

具体的，所述流动相A在流动相中的体积分数为20%，所述流动相B在流动相中的体积分数为80%，所述等度洗脱的时间为25min。

具体的，所述高效液相色谱检测过程中的色谱柱填充剂为粒径为3.0~5.0μm十八烷基-五氟苯基硅胶；所述流动相A为0.01~0.05mmol/L的高氯酸水溶液时可对棕榈酸抗坏血酸酯及其杂质进行高效液相色谱检测，所述棕榈酸抗坏血酸酯中的杂质包括式1所述杂质、式2所述杂质、式3所述杂质和式4所述杂质；

式1；

式2；

式3；

式4。

另一实施例中，所述高效液相色谱检测过程中的色谱柱填充剂为粒径为3.0~5.0μm的亲水键合硅胶；所述流动相A为体积分数为0.1%-0.2%的三氟乙酸水溶液。

另一实施例中，所述等度洗脱中，所述流动相A在流动相中的体积分数为5%~30%，所述流动相B在流动相中的体积分数为70%~95%，所述等度洗脱的时间为15~25 min。

具体的，所述流动相A在流动相中的体积分数为5%，所述流动相B在流动相中的体积分数为95%，所述等度洗脱的时间为20min。

具体的，所述高效液相色谱检测过程中的色谱柱填充剂为粒径为3.0~5.0μm的亲水键合硅胶；所述流动相A为体积分数为0.1%-0.2%的三氟乙酸水溶液时可对棕榈酸抗坏血酸酯及其杂质进行高效液相色谱检测，所述棕榈酸抗坏血酸酯中的杂质包括式5所述杂质、式6所述杂质和式7所述杂质；

式5；

式6；

式7。

另一实施例中，所述高效液相色谱检测过程中的流动相流速为0.5~1.5mL/min；所述色谱柱的柱温为20~30℃。

另一实施例中，所述高效液相色谱检测过程中的检测波长为240nm~250nm。

另一实施例中，所述亚硫酸钠甲醇溶液包括亚硫酸钠水溶液和甲醇，所述亚硫酸钠水溶液的质量百分数为0.05%~0.15%；

所述亚硫酸钠甲醇溶液中，所述亚硫酸钠水溶液的体积百分数为15%~25%，所述甲醇的体积百分数为75%~85%。

具体的，所述亚硫酸钠甲醇溶液包括亚硫酸钠水溶液和甲醇，所述亚硫酸钠水溶液的质量百分数为0.1%；

所述亚硫酸钠甲醇溶液中，所述亚硫酸钠水溶液的体积百分数为20%，所述甲醇的体积百分数为80%。

本申请的检测方法（1）选用十八烷基-五氟苯基硅胶为填充剂的色谱柱；采用流动相等度洗脱，流动相的A相为高氯酸水溶液，B相为乙腈；对供试品采用稀释剂稀释后在进行高效液相色谱法可同时检测式1~式4的杂质以及棕榈酸抗坏血酸酯；（2）选用亲水键合硅胶为填充剂的色谱柱；采用流动相等度洗脱，流动相的A相为三氟乙酸水溶液，B相为乙腈；对供试品采用稀释剂稀释后在进行高效液相色谱法可同时检测式5~式7的杂质以及棕榈酸抗坏血酸酯。该方法可有效地检测出7种杂质以及棕榈酸抗坏血酸酯，本申请检测两种杂质（第一种是式1~式4的杂质，第二种是式5~式7的杂质）以及棕榈酸抗坏血酸酯的方法的系统适用性、专属性、检测限、定量限、线性、准确度、重复性、重现性、耐用性均能满足实验要求，符合规定。表明本申请的检测方法适用于棕榈酸抗坏血酸酯及其杂质的检测。

附图说明

为了更清楚地说明本申请实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。

图1为本申请实施例1提供的系统适用性溶液的高效液相色谱图；

图2为本申请实施例2提供的系统适用性溶液的高效液相色谱图；

图3为本申请实施例3提供的系统适用性溶液的高效液相色谱图；

图4为本申请实施例4提供的系统适用性溶液的高效液相色谱图；

图5为本申请实施例5提供的系统适用性溶液的高效液相色谱图；

图6为本申请实施例6提供的系统适用性溶液的高效液相色谱图；

图7为本申请实施例7提供的系统适用性溶液的高效液相色谱图。

具体实施方式

本申请提供了一种棕榈酸抗坏血酸酯及其杂质的检测方法，用于解决现有技术中尚没有能同时检测棕榈酸抗坏血酸酯及其杂质方法的技术缺陷。

下面将对本申请实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本申请一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本申请中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本申请保护的范围。

其中，以下实施例所用原料或试剂均为市售或自制。

以下实施例的检测方法参照并符合《中国药典》2020版第二部附录高效液相色谱法的规定。

以下实施例1所用的稀释剂为甲醇。

以下实施例2、实施例3和实施例4所用的稀释剂[0.1%亚硫酸钠：甲醇（1:4）]包括亚硫酸钠水溶液和甲醇，亚硫酸钠水溶液的质量百分数为0.1%；亚硫酸钠甲醇溶液中，亚硫酸钠水溶液的体积百分数为20%，所甲醇的体积百分数为80%。

以下实施例5、实施例6和实施例7所用的稀释液包括0.1%的三氟乙酸水溶液和乙腈，0.1%的三氟乙酸水溶液与乙腈的体积比为30:70。

以下实施例中棕榈酸抗坏血酸酯的杂质包括杂质1~杂质7，对应的化学结构式如下：

表1

表2

实施例1

本申请实施例提供了棕榈酸抗坏血酸酯及其杂质（杂质1~杂质4）的检测，具体方法包括：

（1）使用高效液相色谱仪检测棕榈酸抗坏血酸酯及其杂质，参数为：紫外检测器波长为245nm，选用粒径为3.5μm的十八烷基-五氟苯基为填充剂的色谱柱。流动相A是0.01mmol/L的高氯酸水溶液，流动相B是乙腈，选用流动相A和流动相B的体积比为20：80。

（2）样品的配制

系统适用性溶液配制：取棕榈酸抗坏血酸酯对照品10mg于容量瓶中。另取杂质1对照品、杂质2对照品和杂质4对照品加入容量瓶中，加稀释剂（甲醇）溶解并稀释上述对照品至容量瓶的刻度，制成每1mL含棕榈酸抗坏血酸酯对照品2mg、杂质1对照品10μg、杂质2对照品2μg、杂质4对照品2μg的系统适用性溶液。其中，由于杂质3是高温降解杂质，不易精确获得，无法添加，所以以棕榈酸抗坏血酸酯对照品稀释后溶液作为“未知杂质”，该棕榈酸抗坏血酸酯对照品有可能含有少量的杂质1、杂质2、杂质3和杂质4，不影响加标的系统适用性分离度。下面未知杂质都是棕榈酸抗坏血酸酯对照品稀释后溶液（药典主成分自身对照法控制策略）。

（3）取系统适用性溶液进行测试，进样量为50μL，流速为1.0ml/min，柱温是25℃，检测时长为25min。棕榈酸抗坏血酸酯及其杂质的系统适用性溶液的检测图谱见图1。从图1可知，本实施例可同时对棕榈酸抗坏血酸酯及其杂质1、杂质2和杂质4进行检测。

实施例2

本申请实施例提供了棕榈酸抗坏血酸酯及其杂质（杂质1~杂质4）的检测，具体方法包括：

（1）使用高效液相色谱仪检测棕榈酸抗坏血酸酯及其杂质，参数为：紫外检测器波长为245nm，选用粒径为3.5μm的十八烷基-五氟苯基为填充剂的色谱柱。流动相A是0.01mmol/L的高氯酸水溶液，流动相B是乙腈，选用流动相A和流动相B的体积比为20：80。

（2）样品的配制

系统适用性溶液配制：取棕榈酸抗坏血酸酯对照品10mg于容量瓶中。另取杂质1对照品、杂质2对照品和杂质4对照品加入容量瓶中，加稀释剂[0.1%亚硫酸钠：甲醇（1:4）]溶解并稀释上述对照品至容量瓶刻度，制成每1mL含棕榈酸抗坏血酸酯对照品2mg、杂质1对照品10μg、杂质2对照品2μg和杂质4对照品2μg的系统适用性溶液。其中，由于杂质3是高温降解杂质，不易精确获得，无法添加，所以以棕榈酸抗坏血酸酯对照品稀释后溶液作为“未知杂质”，该棕榈酸抗坏血酸酯对照品有可能含有少量的杂质1、杂质2、杂质3和杂质4，不影响加标的系统适用性分离度。下面未知杂质都是棕榈酸抗坏血酸酯对照品稀释后溶液（药典主成分自身对照法控制策略）。

（3）取系统适用性溶液进行测试，进样量为50μL，流速为1.0ml/min，柱温是23℃，检测时长为25min。棕榈酸抗坏血酸酯及其杂质的系统适用性溶液的检测图谱见图2。从图2可知，本实施例可同时对棕榈酸抗坏血酸酯及其杂质1、杂质2和杂质4进行检测。此外，从图1和图2结果可知，当稀释剂选择亚硫酸钠和甲醇混合液时，检测结果中不含有其他杂峰，检测效果更优。

实施例3

本申请实施例提供了棕榈酸抗坏血酸酯及其杂质（杂质1~杂质4）的检测，具体方法包括：

（1）使用高效液相色谱仪检测棕榈酸抗坏血酸酯及其杂质，参数为：紫外检测器波长为245nm，选用粒径为3.5μm的十八烷基-五氟苯基为填充剂的色谱柱。流动相A是0.01mmol/L的高氯酸水溶液，流动相B是乙腈，选用流动相A和B的体积比为18：82。

（2）样品的配制

系统适用性溶液配制：取棕榈酸抗坏血酸酯对照品10mg于容量瓶中。另取杂质1对照品、杂质2对照品和杂质4对照品加入容量瓶中，加稀释剂[0.1%亚硫酸钠：甲醇（1:4）]溶解并稀释上述对照品至容量瓶的刻度，制成每1mL含棕榈酸抗坏血酸酯对照品2mg、杂质1对照品10μg、杂质2对照品2μg和杂质4对照品2μg的系统适用性溶液。其中，由于杂质3是高温降解杂质，不易精确获得，无法添加，所以以棕榈酸抗坏血酸酯对照品稀释后溶液作为“未知杂质”，该棕榈酸抗坏血酸酯对照品有可能含有少量的杂质1、杂质2、杂质3和杂质4，不影响加标的系统适用性分离度。下面未知杂质都是棕榈酸抗坏血酸酯对照品稀释后溶液（药典主成分自身对照法控制策略）。

（3）取系统适用性溶液进行测试，进样量为50μL，流速为1.0ml/min，柱温是25℃，检测时长为25min。棕榈酸抗坏血酸酯及其杂质的系统适用性溶液的检测图谱见图3。从图3可知，本实施例可同时对棕榈酸抗坏血酸酯及其杂质1、杂质2和杂质4进行检测。此外，从图1和图3结果可知，当稀释剂选择亚硫酸钠和甲醇混合液时，检测结果中不含有其他杂峰，检测效果更优。

实施例4

本申请实施例提供了对棕榈酸抗坏血酸酯及其杂质的检测方法进行方法学验证，验证对象包括定量限及检测限、线性、专属性、准确度、精密度（包括重复性及中间精密度）、溶液稳定性和耐用性，具体方法包括：

（1）对本申请中高效液相色谱仪检测棕榈酸抗坏血酸酯有关物质的方法进行方法学验证。紫外检测器波长为245nm，选用粒径为3.5μm的十八烷基-五氟苯基为填充剂的色谱柱。流动相A是0.01mmol/L的高氯酸水溶液，流动相B是乙腈，选用流动相A和B的体积比为20：80。进样量为50μL，流速为1.0ml/min，柱温为25℃，检测时长为25min。

（2）溶液的配制

a、系统适用性溶液的配制：

取棕榈酸抗坏血酸酯对照品、杂质1对照品、杂质2对照品、杂质4对照品加入容量瓶中，加稀释剂[0.1%亚硫酸钠：甲醇（1:4）]溶解并稀释上述对照品至容量瓶的刻度，制成每1mL含棕榈酸抗坏血酸酯对照品2mg、杂质1对照品10μg、杂质2对照品2μg、杂质4对照品2μg的系统适用性溶液。

b、供试品溶液的配制：

取供试品约20mg，精密称定，置10ml容量瓶中，加入稀释剂溶解并稀释至容量瓶的刻度，摇匀。本实施例所用的供试品均为棕榈酸抗坏血酸酯。

c、对照溶液的配制：

精密量取步骤b的供试品溶液1ml，置于100ml容量瓶中，加入稀释剂溶解并稀释至容量瓶的刻度，摇匀。其中，本实施例采用1%主成分自身对照法检测有关物质，因此对步骤b的供试品溶液稀释100倍。

d、程序控制溶液的配制：

同步骤c的对照溶液。

e、各杂质储备液的配制：

分别精密称量杂质1、杂质2、杂质4、棕榈酸抗坏血酸酯对照品10mg，并分别置于50ml量瓶中，加稀释剂溶解中并稀释至刻度，摇匀得到杂质1储备液、杂质2储备液、杂质4储备液、未知杂质储备液。其中，由于杂质3是高温降解杂质，不易精确获得，无法添加，所以以棕榈酸抗坏血酸酯对照品作为“未知杂质”，该棕榈酸抗坏血酸酯对照品有可能含有少量的杂质1、杂质2、杂质3和杂质4，不影响加标的系统适用性分离度。用棕榈酸抗坏血酸酯对照品，来控制杂质3，按照未知单杂来控制，下面未知杂质都是棕榈酸抗坏血酸酯对照品（药典主成分自身对照法控制策略）。

f、各杂质LOQ溶液配制：

精密量取杂质1储备液10ml，置于20ml容量瓶中，加稀释剂稀释至20ml容量瓶的刻度，摇匀，在精密量取上述溶液1.0ml，置于100ml容量瓶中，加稀释剂稀释至100ml容量瓶的刻度，摇匀得到杂质1的LOQ溶液；

精密量取杂质2储备液5.0ml，置于50ml容量瓶中，加稀释剂稀释至50ml容量瓶的刻度，摇匀，在精密量取上述溶液5.0ml，置于100ml容量瓶中，加稀释剂稀释至100ml容量瓶的刻度，摇匀得到杂质2的LOQ溶液；

精密量取杂质4储备液5.0ml，置于50ml容量瓶中，加稀释剂稀释至50ml容量瓶的刻度，摇匀，在精密量取上述溶液5.0ml，置于100ml容量瓶中，加稀释剂稀释至100ml容量瓶的刻度，摇匀得到杂质4的LOQ溶液；

精密量取未知杂质储备液5.0ml，置于50ml容量瓶中，加稀释剂稀释至50ml容量瓶的刻度，摇匀，在精密量取上述溶液5.0ml，置于100ml容量瓶中，加稀释剂稀释至100ml容量瓶的刻度，摇匀得到未知杂质的LOQ溶液；

g、各杂质LOD溶液配制：

精密量取杂质1的LOQ溶液3.0ml，置于10ml容量瓶中，加稀释剂稀释至10ml容量瓶的刻度，摇匀得到杂质1的LOD溶液；

精密量取杂质2的LOQ溶液3.0ml，置于10ml容量瓶中，加稀释剂稀释至10ml容量瓶的刻度，摇匀得到杂质2的LOD溶液；

精密量取杂质4的LOQ溶液3.0ml，置于10ml容量瓶中，加稀释剂稀释至10ml容量瓶的刻度，摇匀得到杂质4的LOD溶液；

精密量取未知杂质的LOQ溶液3.0ml，置于10ml容量瓶中，加稀释剂稀释至10ml容量瓶的刻度，摇匀得到未知杂质的LOD溶液；

h、线性溶液的配制：

线性溶液1即时各杂质的LOQ溶液；精密量取杂质1储备液、杂质2储备液、杂质4储备液、未知杂质储备液各0.6ml，置于10ml容量瓶中，加稀释剂稀释至10ml容量瓶的刻度，摇匀得到线性溶液2；精密量取杂质1储备液、杂质2储备液、杂质4储备液、未知杂质储备液各0.8ml，置于10ml量瓶中，加稀释剂稀释至10ml容量瓶的刻度，摇匀得到线性溶液3；精密量取杂质1储备液、杂质2储备液、杂质4储备液、未知杂质储备液各1.0ml，置于10ml量瓶中，加稀释剂稀释至10ml容量瓶的刻度，摇匀得到线性溶液4；精密量取杂质1储备液、杂质2储备液、杂质4储备液、未知杂质储备液各1.2ml，置于10ml量瓶中，加稀释剂稀释至10ml容量瓶的刻度，摇匀得到线性溶液5；精密量取杂质1储备液、杂质2储备液、杂质4储备液、未知杂质储备液各2.0ml，置于10ml量瓶中，加稀释剂稀释至10ml容量瓶的刻度，摇匀得到线性溶液6；精密量取杂质1储备液、杂质2储备液、杂质4储备液、未知杂质储备液各3.0ml，置于10ml量瓶中，加稀释剂稀释至10ml容量瓶的刻度，摇匀得到线性溶液7。

i、各杂质定位溶液的配制：

分别精密称取杂质1、杂质2、杂质3、杂质4、杂质5、杂质6、杂质7、棕榈酸抗坏血酸酯对照品10mg，分别置于50ml容量瓶中，加稀释剂稀释至50ml容量瓶的刻度，摇匀得到各杂质的定位溶液。

j、破坏性试验溶液的配制：

精密量取步骤b的供试品溶液2.0ml，置于10ml容量瓶中，加稀释剂稀释至10ml容量瓶的刻度，摇匀得到低浓度的供试品溶液；

精密量取1.0ml 30%的H₂O₂溶液，置于10ml容量瓶中，加稀释剂稀释至10ml容量瓶的刻度，摇匀得到氧化破坏空白溶液；

取供试品约20mg置于10ml容量瓶中，加稀释剂稀释至10ml容量瓶的刻度，摇匀，后精密量取2.0ml，置于10ml容量瓶中，加入1.0ml 30%的H₂O₂溶液后加稀释剂稀释至10ml容量瓶的刻度，摇匀得到氧化破坏低浓度溶液；

取供试品约20mg置于10ml容量瓶中，加入1.0ml 30%的H₂O₂溶液后加稀释剂稀释至10ml容量瓶的刻度，摇匀得到氧化破坏高浓度溶液；

精密量取1.0ml 0.01mol/L的氢氧化钠溶液于10ml容量瓶中，后加入1.0ml0.01mol/L盐酸溶液中和，加稀释剂稀释至10ml容量瓶的刻度，摇匀得到酸碱破坏空白溶液；

取供试品约20mg置于10ml容量瓶中，加稀释剂稀释至10ml容量瓶的刻度，摇匀，后精密量取2.0ml，置于10ml容量瓶中，加入1.0ml 0.01mol/L的氢氧化钠溶液，后加入1.0ml0.01mol/L盐酸溶液中和，再加稀释剂稀释至10ml容量瓶刻度，摇匀得到碱破坏低浓度溶液；

取供试品约20mg置于10ml容量瓶中，加入1.0ml 0.01mol/L的氢氧化钠溶液，后加入1.0ml 0.01mol/L盐酸溶液中和，再加稀释剂稀释至10ml容量瓶的刻度，摇匀得到碱破坏高浓度溶液；

取供试品约20mg置于10ml容量瓶中，加稀释剂稀释至刻度，摇匀，后精密量取2.0ml, 置于10ml容量瓶中，加入1.0ml 0.01mol/L盐酸溶液，后加入1.0ml 0.01mol/L的氢氧化钠溶液中和，再加稀释剂稀释至10ml容量瓶的刻度，摇匀得到酸破坏低浓度溶液；

取供试品约20mg置于10ml容量瓶中，加入1.0ml 0.01mol/L盐酸溶液，后加入1.0ml 0.01mol/L的氢氧化钠溶液中和，再加稀释剂稀释至10ml容量瓶的刻度，摇匀得到酸破坏高浓度溶液；

取高温60℃破坏10天供试品约20mg置于10ml容量瓶中，加稀释剂稀释至10ml容量瓶的刻度，摇匀得到高温60℃破坏10天高浓度溶液；

取高温60℃破坏10天高浓度溶液2.0ml置于10ml容量瓶中，加稀释剂稀释至10ml容量瓶的刻度，摇匀得到高温60℃破坏10天低浓度溶液；

取高温105℃破坏12h供试品约20mg置于10ml容量瓶中，加稀释剂稀释至刻度，摇匀得到高温105℃破坏12h高浓度溶液；

取高温105℃破坏12h高浓度溶液2.0ml置于10ml容量瓶中，加稀释剂稀释至10ml容量瓶的刻度，摇匀得到高温105℃破坏12h低浓度溶液；

取于光照箱（照度为4500LX）放置10天供试品约20mg，置于20ml容量瓶中，加稀释剂稀释至20ml容量瓶的刻度，摇匀得到光照破坏10天高浓度溶液；

取光照破坏10天高浓度溶液2.0ml，置于10ml容量瓶中，加稀释剂稀释至10ml容量瓶的刻度，摇匀得到光照破坏10天低浓度溶液；

取于（湿度为92.5%）放置10天供试品约20mg，置于20ml容量瓶中，加稀释剂稀释至20ml容量瓶的刻度，摇匀得到高湿破坏10天高浓度溶液；

取高湿破坏10天高浓度溶液2.0ml，置于10ml容量瓶中，加稀释剂稀释至10ml容量瓶的刻度，摇匀得到高湿破坏10天低浓度溶液。

k、杂质对照溶液的配制：

精密量取杂质1储备液、杂质2储备液、杂质4储备液1.0ml，置于10ml容量瓶中，加稀释剂稀释至刻度，摇匀。

l、准确度溶液的配制：

取供试品约20mg置于10ml容量瓶中，精密量取杂质1储备液、杂质2储备液、杂质4储备液0.8ml加入其中，加稀释剂稀释至10ml容量瓶的刻度，摇匀得到80%准确度溶液。平行制备3份；

取供试品约20mg置于10ml容量瓶中，精密量取杂质1储备液、杂质2储备液、杂质4储备液1.0ml加入其中，加稀释剂稀释至10ml容量瓶的刻度，摇匀得到100%准确度溶液。平行制备3份；

取供试品约20mg置于10ml容量瓶中，精密量取杂质1储备液、杂质2储备液、杂质4储备液1.2ml加入其中，加稀释剂稀释至10ml容量瓶的刻度，摇匀得到120%准确度溶液。平行制备3份。

精密量取未知杂质的储备液0.8ml加入10ml容量瓶中，加稀释剂稀释至刻度，摇匀得到未知杂质80%准确度溶液。平行制备3份；

精密量取未知杂质的储备液1.0ml加入10ml容量瓶中，加稀释剂稀释至刻度，摇匀得到未知杂质100%准确度溶液。平行制备3份；

精密量取未知杂质的储备液1.2ml加入10ml容量瓶中，加稀释剂稀释至刻度，摇匀得到未知杂质120%准确度溶液。平行制备3份；

m、1%自身对照溶液的配制：

精密量取步骤b的供试品溶液1.0 ml置于100ml容量瓶中，加稀释剂稀释至100ml容量瓶的刻度，摇匀。

按上述的色谱参数对建立的棕榈酸抗坏血酸酯及其杂质（杂质1、杂质2、杂质3、杂质4、未知杂质）的高效液相色谱分析方法进行方法学验证。验证项目包括定量限及检测限、线性、专属性、准确度、精密度（包括重复性及中间精密度）、溶液稳定性和耐用性。方法学验证结果如下：

1、棕榈酸抗坏血酸酯及其杂质的定量限及检测限：杂质1的定量限为相当于供试品浓度的0.05%，检测限为相当于供试品浓度0.01%；杂质2的定量限为相当于供试品浓度的0.05%，检测限为相当于供试品浓度0.02%；杂质4的定量限为相当于供试品浓度的0.05%，检测限为相当于供试品浓度0.01%；未知杂质的定量限为相当于供试品浓度的0.05%，检测限为相当于供试品浓0.02%。

2、棕榈酸抗坏血酸酯及其杂质的线性方程：①杂质1线性溶液结果线性方程为y=58.845x-13.212，r值为0.99995，截距与最低限度杂质限度时Y轴响应值绝对值百分比为2.3%；②杂质2线性溶液结果线性方程为y=55.592x-9.8182，r值为0.99865，截距与最低限度杂质限度时Y轴响应值绝对值百分比为7.9%；③杂质4线性溶液结果线性方程为y=56.647x-3.6063，r值为0.99940，截距与最低限度杂质限度时Y轴响应值绝对值百分比为3.4%；④未知杂质线性溶液结果线性方程为y=66.542x-1.9593，r值为0.99805，截距与最低限度杂质限度时Y轴响应值绝对值百分比为1.4%。

3、棕榈酸抗坏血酸酯及其杂质的专属性结果如表3所示。供试品溶液（杂质1）、供试品溶液（杂质2）、供试品溶液（杂质3）、供试品溶液（杂质4）和供试品溶液（主峰）分别为步骤b的供试品溶液中杂质1、杂质2、杂质3、杂质4和主峰棕榈酸抗坏血酸酯的保留时间和分离度，从表3结果可知，把棕榈酸抗坏血酸酯供试品里面可能含有的杂质都单独进样，说明各杂质出峰保留时间对棕榈酸抗坏血酸酯主峰没有干扰，专属性良好。

表3

4、棕榈酸抗坏血酸酯及其杂质的破坏性结果：在各破坏条件下，供试品在2mg/ml和0.4mg/ml时，高低浓度检测出的杂质个数一致；低浓度供试品经强光照射、酸碱降解、高温、高湿降解、氧化降解试验，主峰与相邻峰分离度在4.85~7.96之间，其降解杂质与主峰均能有效分离；在各降解条件下主峰的纯度因子均大于0.99，各降解条件下物料平衡在91.1%-105.2%之间，说明在有关物质检测方法下相关杂质或降解杂质均能检出。

5、棕榈酸抗坏血酸酯及其杂质的准确度结果：杂质1的加样回收中，单个回收率在97.8%-100.1%之间，平均回收率为99.0%，平均回收率RSD为0.8%；杂质2的加样回收中，单个回收率在100.8-107.4%之间，平均回收率为104.0%，平均回收率RSD为2.3%；杂质4的加样回收中，单个回收率在96.2%-102.4%之间，平均回收率为98.7%，平均回收率RSD为2.0%；未知杂质的加样回收中，单个回收率在104.1%-112.2%之间，平均回收率为108.7%，平均回收率RSD为2.4%。

6、棕榈酸抗坏血酸酯及其杂质的精密度结果：1）、重复性：6次测定结果的各杂质峰数一致，杂质之和的极差为0.0392%；2）、中间精密度：12次测定结果的各杂质峰数一致，杂质之和的极差为0.0129%。

7、棕榈酸抗坏血酸酯及其杂质的溶液稳定性结果：在4℃样品盘中放置14小时，步骤b溶液和0小时相比，各杂质峰个数一致，杂质1的变化率为0.05%，杂质2、杂质3和杂质4的变化率在0.001%-0.01%之间，杂质之和的变化率为0.05%。因此棕榈酸抗坏血酸酯供试品品溶液保存在4℃中放置14小时是稳定的。

8、棕榈酸抗坏血酸酯及其杂质的耐用性结果：在所有色谱条件发生变化中，对照溶液峰面积RSD在0.8%-1.9%之间；系统适应性溶液峰面积RSD在0.9%-2.8%之间；系统适用性主峰与杂质4分离度在5.55-6.23之间；供试品溶液杂质个数和正常条件下一致，杂质总和极差值在0.0043%-0.1250%之间，说明本方法耐用性良好。

实施例5

本申请实施例提供了棕榈酸抗坏血酸酯及其杂质（杂质5~杂质7）的检测，具体方法包括：

（1）使用高效液相色谱仪检测棕榈酸抗坏血酸酯及其杂质，参数为：紫外检测器波长为245nm，选用粒径为3.5μm的亲水键合硅胶为填充剂的色谱柱。流动相A是0.1%的三氟乙酸水溶液，流动相B是乙腈，选用流动相A和B的体积比为5：95。

（2）样品的配制

系统适用性溶液配制：取棕榈酸抗坏血酸酯对照品、杂质5对照品、杂质7对照品，加稀释剂（流动相A：流动相B=30：70）溶解并稀释上述对照品至容量瓶刻度，摇匀，制成每1mL含1mg棕榈酸抗坏血酸酯对照品、杂质5对照品10μg、杂质7对照品10μg的系统适用性溶液。其中，本实施例所用的稀释液包括0.1%的三氟乙酸水溶液和乙腈，0.1%的三氟乙酸水溶液与乙腈的体积比为30:70；以棕榈酸抗坏血酸酯对照品稀释后溶液作为“未知杂质”，该棕榈酸抗坏血酸酯对照品有可能含有少量的杂质5、杂质6和杂质7，不影响加标的系统适用性分离度。考察是否有其他未知杂质的限度，杂质6按照未知单杂控制，下面未知杂质都是棕榈酸抗坏血酸酯对照品稀释后溶液（药典主成分自身对照法控制策略）。

（3）取系统适用性溶液进行测试，进样量为10μL，流速为1.0ml/min，柱温是32℃，检测时长为20min。棕榈酸抗坏血酸酯及其杂质的系统适用性溶液的检测图谱见图5。从图5可知，本实施例可同时对棕榈酸抗坏血酸酯及其杂质5和杂质7进行检测。

实施例6

本申请实施例提供了棕榈酸抗坏血酸酯及其杂质（杂质5~杂质7）的检测，具体方法包括：

（1）使用高效液相色谱仪检测棕榈酸抗坏血酸酯有关物质杂质，参数为：紫外检测器波长为245nm，选用粒径为3.5μm的亲水键合硅胶为填充剂的色谱柱。流动相A是0.1%的三氟乙酸水溶液，流动相B是乙腈，选用流动相A和B的体积比为10：90。

（2）样品的配制

系统适用性溶液配制：取棕榈酸抗坏血酸酯对照品、、杂质5对照品、杂质7对照品，加稀释剂（流动相A：流动相B=30：70）溶解并稀释上述对照品至容量瓶刻度，摇匀，制成每1mL含1mg棕榈酸抗坏血酸酯对照品、杂质5对照品10μg、杂质7对照品10μg的系统适用性溶液。其中，本实施例所用的稀释液包括0.1%的三氟乙酸水溶液和乙腈，0.1%的三氟乙酸水溶液与乙腈的体积比为30:70；以棕榈酸抗坏血酸酯对照品稀释后溶液作为“未知杂质”，该棕榈酸抗坏血酸酯对照品有可能含有少量的杂质5、杂质6和杂质7，不影响加标的系统适用性分离度。考察是否有其他未知杂质的限度，杂质6按照未知单杂控制，下面未知杂质都是棕榈酸抗坏血酸酯对照品稀释后溶液（药典主成分自身对照法控制策略）。

（3）取系统适用性溶液进行测试，进样量为10μL，流速为0.9ml/min，柱温是25℃，检测时长为20min。棕榈酸抗坏血酸酯及其杂质的系统适用性溶液的检测图谱见图6。从图6可知，本实施例可同时对棕榈酸抗坏血酸酯及其杂质5和杂质7进行检测。

实施例7

本申请实施例提供了对棕榈酸抗坏血酸酯及其杂质的检测方法进行方法学验证，验证对象包括定量限及检测限、线性、专属性、准确度、精密度（包括重复性及中间精密度）、溶液稳定性和耐用性，具体方法包括：

（1）对本申请中高效液相色谱仪检测棕榈酸抗坏血酸酯及其杂质的方法进行方法学验证。紫外检测器波长为245nm，选用粒径为3.5μm的亲水键合硅胶为填充剂的色谱柱。流动相A是0.1%的三氟乙酸水溶液，流动相B是乙腈，选用流动相A和B的体积比为5：95。进样量为10μL，流速为1.0ml/min，柱温为25℃，检测时长为20min。

（2）溶液的配制

a、供试品溶液的配制：

取供试品约10mg置于10ml容量瓶中，加稀释剂（流动相A：流动相B=30：70）溶解并稀释至10ml容量瓶的刻度，摇匀。本实施例所用的供试品均为棕榈酸抗坏血酸酯。

本实施例所用的稀释液包括0.1%的三氟乙酸水溶液和乙腈，0.1%的三氟乙酸水溶液与乙腈的体积比为30:70。

b、1%自身对照溶液的配制：

精密量取1ml供试品溶液置于100ml容量瓶中，加稀释剂（流动相A：流动相B=30：70）稀释至100ml容量瓶的刻度，摇匀。本实施例采用1%主成分自身对照法检测有关物质，因此对步骤b的供试品溶液稀释100倍。

c、对照溶液的配制：

精密量取杂质5约10mg置于10ml容量瓶中，加稀释剂（流动相A：流动相B=30：70）稀释至10ml容量瓶的刻度，摇匀，再精密量取1ml至100ml容量瓶中，加入稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀。

d、系统适用性溶液的配制：

取棕榈酸抗坏血酸酯对照品、杂质5、杂质7对照品，加稀释剂（流动相A：流动相B=30：70）溶解并稀释至容量瓶的刻度，摇匀，制成每1mL含1mg棕榈酸抗坏血酸酯对照品、杂质5对照品10μg、杂质7对照品10μg的溶液。

e、各杂质线性储备液的配制：

分别精密称量棕榈酸抗坏血酸酯对照品、杂质5、杂质7约10mg，并分别置于10ml容量瓶中，加稀释剂溶解中并稀释至刻度，摇匀，精密移去1ml至100ml容量瓶中，加稀释剂溶解中并稀释至100ml容量瓶的刻度，摇匀得到未知杂质储备液、杂质5储备液、杂质7储备液。以棕榈酸抗坏血酸酯对照品作为“未知杂质”，该棕榈酸抗坏血酸酯对照品有可能含有少量的杂质5、杂质6和杂质7，不影响加标的系统适用性分离度。用棕榈酸抗坏血酸酯对照品来控制杂质6，按照未知单杂来控制，下面未知杂质都是棕榈酸抗坏血酸酯对照品（药典主成分自身对照法控制策略）。

f、各杂质线性溶液的配制：

分别精密量取未知杂质、杂质5、杂质7的储备溶液3.0ml，置于20ml容量瓶中，加稀释剂稀释至容量瓶的刻度，摇匀，得到各杂质线性溶液-1；分别精密量取未知杂质、杂质5、杂质7的储备溶液4.0ml，置于20ml容量瓶中，加稀释剂稀释至容量瓶的刻度，摇匀，得到各杂质线性溶液-2；分别精密量取未知杂质、杂质5、杂质7的储备溶液5.0ml，置于20ml容量瓶中，加稀释剂稀释至容量瓶的刻度，摇匀，得到各杂质线性溶液-3；分别精密量取未知杂质、杂质5、杂质7的储备溶液6.0ml，置于20ml容量瓶中，加稀释剂稀释至容量瓶的刻度，摇匀，得到各杂质线性溶液-4；分别精密量取杂质5、杂质7的储备溶液8.0ml，置于20ml容量瓶中，加稀释剂稀释至容量瓶的刻度，摇匀，得到杂质5和杂质7的线性溶液-5，精密量取未知杂质的储备溶液7.0ml，置于20ml容量瓶中，加稀释剂稀释至容量瓶的刻度，摇匀，得到未知杂质的线性溶液-5。

g、专属性考察项目溶液的配制：

量取1ml 1M氢氧化钠和1ml 1M盐酸至10ml容量瓶中，加稀释剂溶解并稀释至容量瓶的刻度，摇匀即得酸碱空白溶液；

量取1ml 30%双氧水至10ml容量瓶中，加稀释剂稀释至容量瓶的刻度，摇匀即得氧化空白溶液；

取棕榈酸抗坏血酸酯供试品约10mg置于10ml容量瓶中，加稀释剂稀释至容量瓶的刻度，摇匀得到步骤a的供试品溶液；

分别取棕榈酸抗坏血酸酯、杂质1、杂质2、杂质4对照品约10mg置于50ml容量瓶中，加甲醇（棕榈酸抗坏血酸酯对照品除外，使用稀释剂稀释）稀释至容量瓶的刻度，摇匀分别得到棕榈酸抗坏血酸酯、杂质1、杂质2、杂质4的定位溶液；取杂质7对照品约10mg置于200ml容量瓶中，加流动相稀释至容量瓶的刻度，摇匀得到杂质7的定位溶液；杂质5对照品约10mg置于10ml容量瓶中，加稀释剂稀释至容量瓶的刻度，后精密移取1ml至100ml容量瓶中，加稀释剂稀释至容量瓶的刻度，摇匀得到杂质5的定位溶液；分别取杂质6对照品约10mg、杂质7对照品约2mg分别置于20ml容量瓶中，加稀释剂稀释至容量瓶的刻度，摇匀分别得到杂质6、杂质7的定位溶液；

取棕榈酸抗坏血酸酯供试品约50mg置于50ml容量瓶中，再精密加入杂质1、杂质2、杂质4、杂质7、杂质5、杂质6、杂质7 5ml至容量瓶中，加稀释剂稀释至容量瓶的刻度，摇匀得到选择性溶液；

取棕榈酸抗坏血酸酯供试品约10mg置于10ml容量瓶中，加1ml 1M盐酸破坏2h后，用1ml 1M氢氧化钠中和后加乙腈溶解并稀释至容量瓶的刻度，摇匀得到酸破坏溶液；

取棕榈酸抗坏血酸酯供试品约10mg置于10ml容量瓶中，加1ml 10mM氢氧化钠后，立即用1ml 10mM盐酸中和后加乙腈溶解并稀释至容量瓶的刻度，摇匀得到碱破坏溶液；

取棕榈酸抗坏血酸酯供试品约10mg置于10ml容量瓶中，加30ml双氧水破坏1h后，立即用稀释剂超声溶解并稀释至容量瓶的刻度，摇匀得到氧化破坏溶液；

取在光照强度4500LX条件下破坏10天的棕榈酸抗坏血酸酯供试品约10mg置于10ml容量瓶中，加稀释剂稀释至容量瓶的刻度，摇匀得到光照破坏溶液；

取在高湿92.5%条件下破坏10天的棕榈酸抗坏血酸酯供试品约10mg置于10ml容量瓶中，加稀释剂稀释至容量瓶的刻度，摇匀得到高湿破坏溶液；

取在高湿60条件下破坏10天的棕榈酸抗坏血酸酯供试品约10mg置于10ml容量瓶中，加稀释剂稀释至容量瓶的刻度，摇匀得到高温破坏溶液1；

取在高湿105条件下破坏12h的棕榈酸抗坏血酸酯供试品约20mg置于20ml容量瓶中，加稀释剂稀释至容量瓶的刻度，摇匀得到高温破坏溶液2。

h、定量限检测限溶液的配制：

分别取未知杂质、杂质5、杂质7的线性储备液2.0ml置于20ml容量瓶中，加稀释剂稀释至容量瓶的刻度线，摇匀获得未知杂质、杂质5、杂质7的LOQ溶液；分别取未知杂质、杂质5、杂质7的线性储备液1.0ml置于100ml容量瓶中，加稀释剂稀释至容量瓶的刻度线，摇匀获得未知杂质、杂质5、杂质7的LOD溶液。

ii、i、稳定性考察项目溶液的配制：

分别取杂质5、杂质7对照品10mg置于10ml容量瓶中，加稀释剂稀释至容量瓶的刻度线，摇匀分别获得杂质5和杂质7的储备溶液；

取供试品约100mg，置于100ml容量瓶中，再精密移取杂质5和杂质7的储备溶液1ml至容量瓶中，加稀释剂稀释至容量瓶的刻度线，摇匀得到测试溶液。

j、准确度考察项目溶液的配制：

分别取棕榈酸抗坏血酸酯、杂质5、杂质7约10mg，分别置于10ml容量瓶中，加稀释剂稀释至容量瓶的刻度线，摇匀分别获得未知杂质、杂质5、杂质7的储备液；

分别取未知杂质、杂质5、杂质7的储备液1ml至100ml容量瓶中，加稀释剂稀释至容量瓶的刻度线，摇匀分别获得未知杂质、杂质5、杂质7的准确度储备溶液（各平行制备3份）；

取供试品约10mg置于10ml容量瓶中，再分别移取未知杂质、杂质5、杂质7的准确度储备溶液1ml至10ml容量瓶中，加稀释剂稀释至容量瓶的刻度线，摇匀分别获得未知杂质、杂质5、杂质7的100%准确度溶液（各平行制备3份）；取供试品约10mg置于10ml容量瓶中，再分别移取未知杂质、杂质5、杂质7的准确度储备溶液1.5ml至10ml容量瓶中，加稀释剂稀释至容量瓶的刻度线，摇匀分别获得未知杂质、杂质5、杂质7的150%准确度溶液（各平行制备3份）；取供试品约10mg置于10ml容量瓶中，再分别移取未知杂质、杂质5、杂质7的准确度储备溶液2ml至10ml容量瓶中，加稀释剂稀释至容量瓶的刻度线，摇匀分别获得未知杂质、杂质5、杂质7的200%准确度溶液（各平行制备3份）；分别取未知杂质、杂质5、杂质7的准确度储备液2ml至10ml容量瓶中加稀释剂稀释至容量瓶的刻度线，摇匀分别获得知杂质、杂质5、杂质7的对照溶液。

按上述的色谱参数对建立的棕榈酸抗坏血酸酯及其有关物质（杂质5、杂质6、杂质7、未知杂质）的高效液相色谱分析方法进行方法学验证。验证项目包括定量限及检测限、线性、专属性、准确度、精密度（包括重复性及中间精密度）、溶液稳定性和耐用性。方法学验证结果如下：

1、棕榈酸抗坏血酸酯及其杂质的定量限及检测限：未知杂质的定量限为相当于供试品浓度的0.1%，检测限为相当于供试品浓度0.05%；杂质5的定量限为相当于供试品浓度的0.1%，检测限为相当于供试品浓度0.05%；杂质7的定量限为相当于供试品浓度的0.1%，检测限为相当于供试品浓度0.05%。

2、棕榈酸抗坏血酸酯及其杂质的线性方程：①杂质7的线性溶液结果线性方程为y=22.165x-3.9192，r值为0.9993；②杂质5的线性溶液结果线性方程为y=6.7767x-1.7724，r值为0.9951；③未知杂质的线性溶液结果线性方程为y=10.787x-2.3，r值为0.9988。

3、棕榈酸抗坏血酸酯及其杂质的专属性结果如表4所示。

表4

4、棕榈酸抗坏血酸酯及其杂质的破坏性结果：在1M酸降解条件下，供试品降解出杂质5，其它破坏条件下均未降解出杂质5及杂质7。各破坏条件下主峰纯度因子均大于990，主峰为纯峰；物料平衡在90.0%-110.0%之间，符合验证要求。

5、棕榈酸抗坏血酸酯及其杂质的准确度结果：未知杂质的单个回收率在80.8%-105.3%之间，平均回收率为94.5%，平均回收率RSD为9.1%；杂质5的单个回收率在81.3-105.2%之间，平均回收率为92.8%，平均回收率RSD为8.0%；杂质7的单个回收率在102.3%-107.0%之间，平均回收率为105.1%，平均回收率RSD为1.5%。

6、棕榈酸抗坏血酸酯及其杂质的精密度结果：1）、重复性：6次测定结果中杂质5含量的最大绝对差值为0，杂质7含量的最大绝对差值为0，均小于质量标准规定限度的20%；2）、中间精密度：12次测定结果中杂质5含量的最大绝对差值为0，杂质7含量的最大绝对差值为0，均小于质量标准规定限度的20%。

7、棕榈酸抗坏血酸酯及其杂质的溶液稳定性结果：被测试的供试品溶液中杂质5与0h比峰面积逐渐减小，杂质7在3h内峰面积与0h比在90.0%-110.0%范围内，因此供试品溶液应现配现用。

8、棕榈酸抗坏血酸酯及其杂质的耐用性结果：微小变动色谱参数，杂质5含量、杂质7含量与正常条件相比的绝对差值均不超过质量标准规定限度的20%，符合验证要求。

综上所述，本申请通过采用有关物质方法1（杂质1、杂质2、杂质4、未知单杂）和有关物质方法2（杂质5、杂质7、未知单杂）联合检测，以达到控制棕榈酸抗坏血酸酯有关物质的目的，分别对两个方法的系统适用性、专属性、检测限、定量限、线性、准确度、重复性、重现性、耐用性均能满足实验要求，符合规定。由此表明本方法能适用于棕榈酸抗坏血酸酯的检测。

以上所述仅是本申请的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本申请原理的前提下，还可以作出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本申请的保护范围。

Claims (10)

1.一种棕榈酸抗坏血酸酯及其杂质的检测方法，其特征在于，包括：

采用高效液相色谱对棕榈酸抗坏血酸酯及其杂质进行检测；

高效液相色谱法检测过程中的流动相为流动相A和流动相B；所述流动相A为高氯酸水溶液或三氟乙酸水溶液，所述流动相B为乙腈；

所述高效液相色谱检测过程中采用等度洗脱的方式使流动相通过色谱柱；所述高效液相色谱检测过程中的色谱柱填充剂为亲水键合硅胶或十八烷基-五氟苯基硅胶；

所述高效液相色谱检测过程中，供试品采用稀释剂稀释后再进行检测，所述稀释剂选自甲醇或亚硫酸钠甲醇溶液。

2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述高效液相色谱检测过程中的色谱柱填充剂为粒径为3.0~5.0μm十八烷基-五氟苯基硅胶；所述流动相A为0.01~0.05mmol/L的高氯酸水溶液。

3.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于，所述等度洗脱中，所述流动相A在流动相中的体积分数为10%~30%，所述流动相B在流动相中的体积分数为70%~90%，所述等度洗脱的时间为20~30 min。

4.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于，所述棕榈酸抗坏血酸酯中的杂质包括式1所述杂质、式2所述杂质、式3所述杂质和式4所述杂质；

式1；

式2；

式3；

式4。

5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述高效液相色谱检测过程中的色谱柱填充剂为粒径为3.0~5.0μm的亲水键合硅胶；所述流动相A为体积分数为0.1%-0.2%的三氟乙酸水溶液。

6.根据权利要求5所述的检测方法，其特征在于，所述等度洗脱中，所述流动相A在流动相中的体积分数为5%~30%，所述流动相B在流动相中的体积分数为70%~95%，所述等度洗脱的时间为15~25 min。

7.根据权利要求5所述的检测方法，其特征在于，所述棕榈酸抗坏血酸酯中的杂质包括式5所述杂质、式6所述杂质和式7所述杂质；

式5；

式6；

式7。

8.根据权利要求1~7任意一项所述的检测方法，其特征在于，所述高效液相色谱检测过程中的流动相流速为0.5~1.5mL/min；所述色谱柱的柱温为20~30℃。

9.根据权利要求1~7任意一项所述的检测方法，其特征在于，所述高效液相色谱检测过程中的检测波长为240nm~250nm。

10.根据权利要求1~7任意一项所述的检测方法，其特征在于，所述亚硫酸钠甲醇溶液包括亚硫酸钠水溶液和甲醇，所述亚硫酸钠水溶液的质量百分数为0.05%~0.15%；

所述亚硫酸钠甲醇溶液中，所述亚硫酸钠水溶液的体积百分数为15%~25%，所述甲醇的体积百分数为75%~85%。

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