CN114235789A - β-葡萄糖醛酸酶检测试纸的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种β‑葡萄糖醛酸酶检测试纸的制备方法，按照先后顺序包括以下步骤：制备磷酸盐缓冲液：称取磷酸二氢钾与磷酸氢二钾加入纯化水中，调节pH至6.0‑7.0；制备β‑葡萄糖醛酸酶试纸处理液：量取步骤(1)制备的磷酸盐缓冲液依次加入稳定剂、聚乙烯吡咯烷酮、5‑溴‑6‑氯‑3‑吲哚‑β‑葡萄糖醛酸盐，搅拌至完全溶解；浸干操作：用滤纸浸制放入烘箱中烘干，试纸烘干以后取出；产品组装：将烘干后的试纸裁切成一定尺寸的小块，粘贴在塑料基片上，放入密封的塑料瓶或者铝箔袋中即可。本发明提供的β‑葡萄糖醛酸酶检测试纸的制备方法制备的检测试纸选用了适合的底物和缓冲体系及稳定剂，实现了干燥一遍就可以得到质优稳定的产品。
Description
技术领域
本发明属于体外诊断试纸技术领域，具体涉及一种β-葡萄糖醛酸酶检测试纸的制备方法。
背景技术
女性下生殖道感染是妇科门诊的常见病和多发病，常见的下生殖道感染主要有外阴阴道假丝酵母菌病(VVC)、细菌性阴道病(BV)及滴虫性阴道炎(TV)。需氧菌性阴道炎(AV)是比利时著名妇产科专家Donders于2002年正式报道的一种下生殖道感染。AV患者的临床症状体征和TV患者极为相似，易造成误诊，但因两者致病菌的抗生素敏感性不同，可以通过临床菌群的培养进行区分，但对菌群的培养需要消耗大量的时间和金钱，因此采用一种简便快捷的诊断方式成为研发的主要课题。
需氧菌性阴道炎(AV)常见病原体为链球菌、葡萄球菌以及大肠埃希菌。而正常阴道是以乳酸杆菌为优势菌的正常微生物群，阴道PH<；4.5，当患有需氧菌性阴道炎时，阴道乳酸杆菌减少而需氧菌繁殖导致阴道壁粘膜具有充血、水肿、脓性分泌物的炎性特征。细菌预成酶是细菌在生长繁殖过程中合成的一系列与生长代谢有关的酶类，这些酶类能分解多种底物，并且在有氧环境中较长时间的保留其活性。不同种属的细菌，其预成酶的种类不同。AV的主要致病菌为金黄色葡萄球菌、粪肠球菌、大肠埃希氏菌、B族链球菌和大肠埃希菌，代谢可产生β-葡萄糖醛酸酶。
国内外用于AV诊断的一些临床及实验室诊断方法多为镜检法和β-葡萄糖醛酸酶+凝固酶检测技术对其阴道分泌物进行检测，β-葡萄糖醛酸酶+凝固酶对AV的诊断具有很高的敏感度和特异性，且与临床上常用的Donders湿片镜检法有很高的符合率(临床符合率高达90.8％，敏感度为91.2％)，可全面诊断AV，为妇产科医生提供明确的诊断依据。但凝固酶法为两步法且需要外加终止液，不利于自动化检测。
而现有的此类-葡萄糖醛酸酶检测试纸均选用A、B两遍液制作，过程繁琐，人工成本增高而且多一遍制作过程，会导致产品出现误差的几率加大。
发明内容
为解决现有技术中存在的问题，本发明提供一种β-葡萄糖醛酸酶检测试纸的制备方法，按照先后顺序包括以下步骤：
(1)制备磷酸盐缓冲液：称取磷酸二氢钾与磷酸氢二钾加入纯化水中，调节pH至6.0-7.0；
(2)制备β-葡萄糖醛酸酶试纸处理液：量取步骤(1)制备的磷酸盐缓冲液依次加入稳定剂、聚乙烯吡咯烷酮、5-溴-6-氯-3-吲哚-β-葡萄糖醛酸盐，搅拌至完全溶解；
(3)浸干操作：用滤纸浸制放入烘箱中烘干，试纸烘干以后取出；
(4)产品组装：将烘干后的试纸裁切成一定尺寸的小块，粘贴在塑料基片上，放入密封的塑料瓶或者铝箔袋中即可。
在上述任一方案中优选的是所述稳定剂为：七水合氯化镁、氯化钙与氯化钠的混合溶液，并且三者的比例为1:1:1。
在上述任一方案中优选的是，5-溴-6-氯-3-吲哚-β-葡萄糖醛酸盐的加入量为0.1-2g/L。
在上述任一方案中优选的是，磷酸盐缓冲液的浓度为0.1M-1M，PH范围为6.0-7.0。
在上述任一方案中优选的是，所述稳定剂的浓度为：2mM-50mM。
在上述任一方案中优选的是，步骤(3)中，选用的滤纸为GE公司3mm滤纸，干燥的条件为：烘箱中60℃-80℃烘干10分钟-20分钟。
在上述任一方案中优选的是，本发明选用的稳定剂为：聚乙烯马来酸酐共聚物，通过酸酐基团进行相应的化学键合使共混试剂增容，达到一遍液干燥得到质优稳定的产品。
本发明的有益效果为：
本发明提供的β-葡萄糖醛酸酶检测试纸的制备方法制备的检测试纸选用了适合的底物和缓冲体系及稳定剂，实现了干燥一遍就可以得到质优稳定的产品。
具体实施方式
为了更进一步了解本发明的发明内容，下面将结合具体实施例详细阐述本发明。
实施例一
操作步骤：
1.制备磷酸盐缓冲液：按照相应的浓度称取磷酸二氢钾与磷酸氢二钾加入纯化水中，互调PH至6.0-7.0。
2.制备β-葡萄糖醛酸酶试纸处理液：准确量取磷酸盐缓冲液按顺序加入7水合氯化镁、氯化钙、氯化钠、聚乙烯吡咯烷酮、5-溴-6-氯-3-吲哚-β-葡萄糖醛酸盐等，搅拌至完全溶解。
3.浸干操作：用GE公司3mm滤纸浸制放入烘箱中60℃-80℃烘干10分钟-20分钟，试纸烘干以后取出。
4.产品组装：将烘干后的试纸裁切成一定尺寸的小块，粘贴在塑料基片上。放入密封的塑料瓶或者铝箔袋中，用13X型分子筛做为干燥剂，室温可存放有效期18个月。
实施例二
操作步骤：
1.制备磷酸盐缓冲液：按照相应的浓度称取磷酸二氢钾与磷酸氢二钾加入纯化水中，互调PH至6.0-7.0。
2.制备β-葡萄糖醛酸酶试纸处理液：准确量取磷酸盐缓冲液按顺序加入7水合氯化镁、氯化钙、氯化钠、聚乙烯吡咯烷酮、5-溴-6-氯-3-吲哚-β-葡萄糖醛酸盐等，搅拌至完全溶解。
3.浸干操作：用GE公司3mm滤纸浸制放入烘箱中60℃-80℃烘干10分钟-20分钟，试纸烘干以后取出。
4.产品组装：将烘干后的试纸裁切成一定尺寸的小块，粘贴在塑料基片上。放入密封的塑料瓶或者铝箔袋中，用13X型分子筛做为干燥剂，室温可存放有效期18个月。
实施例三
操作步骤：
1.制备磷酸盐缓冲液：按照相应的浓度称取磷酸二氢钾与磷酸氢二钾加入纯化水中，互调PH至6.0-7.0。
2.制备β-葡萄糖醛酸酶试纸处理液：准确量取磷酸盐缓冲液按顺序加入7水合氯化镁、氯化钙、氯化钠、聚乙烯吡咯烷酮、5-溴-6-氯-3-吲哚-β-葡萄糖醛酸盐等，搅拌至完全溶解。
3.浸干操作：用GE公司3mm滤纸浸制放入烘箱中60℃-80℃烘干10分钟-20分钟，试纸烘干以后取出。
4.产品组装：将烘干后的试纸裁切成一定尺寸的小块，粘贴在塑料基片上。放入密封的塑料瓶或者铝箔袋中，用13X型分子筛做为干燥剂，室温可存放有效期18个月。
临界值判定：β-葡萄糖醛酸酶的活性检出临界值为1U/mL，呈色深度与β-葡萄糖醛酸酶活性成正比。
本领域技术人员不难理解，本发明的β-葡萄糖醛酸酶检测试纸的制备方法包括上述本发明说明书的发明内容和具体实施方式部分所示出的各部分的任意组合，限于篇幅并为使说明书简明而没有将这些组合构成的各方案一一描述。凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (6)
1.一种β-葡萄糖醛酸酶检测试纸的制备方法，按照先后顺序包括以下步骤：
(1)制备磷酸盐缓冲液：称取磷酸二氢钾与磷酸氢二钾加入纯化水中，调节pH至6.0-7.0；
(2)制备β-葡萄糖醛酸酶试纸处理液：量取步骤(1)制备的磷酸盐缓冲液依次加入稳定剂、聚乙烯吡咯烷酮、5-溴-6-氯-3-吲哚-β-葡萄糖醛酸盐，搅拌至完全溶解；
(3)浸干操作：用滤纸浸制放入烘箱中烘干，试纸烘干以后取出；
(4)产品组装：将烘干后的试纸裁切成一定尺寸的小块，粘贴在塑料基片上，放入密封的塑料瓶或者铝箔袋中即可。
2.根据权利要求1所述的β-葡萄糖醛酸酶检测试纸的制备方法，其特征在于，所述稳定剂为：七水合氯化镁、氯化钙与氯化钠的混合溶液，并且三者的比例为1:1:1。
3.根据权利要求1所述的β-葡萄糖醛酸酶检测试纸的制备方法，其特征在于，5-溴-6-氯-3-吲哚-β-葡萄糖醛酸盐的加入量为0.1-2g/L。
4.根据权利要求1所述的β-葡萄糖醛酸酶检测试纸的制备方法，其特征在于，磷酸盐缓冲液的浓度为0.1M-1M，PH范围为6.0-7.0。
5.根据权利要求2所述的β-葡萄糖醛酸酶检测试纸的制备方法，其特征在于，所述稳定剂的浓度为：2mM-50mM。
6.根据权利要求1所述的β-葡萄糖醛酸酶检测试纸的制备方法，其特征在于，步骤(3)中，选用的滤纸为GE公司3mm滤纸，干燥的条件为：烘箱中60℃-80℃烘干10分钟-20分钟。
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