CN110243817A - 一种β-葡萄糖醛酸酶干化学试纸及检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种β‑葡萄糖醛酸酶干化学试纸及检测方法,属于体外诊断试剂技术领域。该试纸包括基板,及均匀设置在基板上的若干个试纸块,所述的试纸块是将滤纸放入浸液浸润干燥后得到的;所述的浸液是将底物溶解于带缓冲能力的浸液中得到的;所述的底物为葡萄糖醛酸苷钠盐及其衍生物。本发明直接在浸液中添加底物,工艺简化,产品性能稳定,与类似产品相比操作简单,适宜普及。
Description
技术领域
本发明属于体外诊断试剂技术领域,具体涉及一种β-葡萄糖醛酸酶干化学试纸及其制备方法。
背景技术
女性下生殖道感染是妇科门诊的常见病和多发病,常见的下生殖道感染主要有外阴阴道假丝酵母菌病(VVC)、细菌性阴道病(BV)及滴虫性阴道炎(TV)。需氧菌性阴道炎(AV)是比利时著名妇产科专家Donders于2002年正式报道的一种下生殖道感染。AV患者的临床症状体征和TV患者极为相似,易造成误诊,但因两者致病菌的抗生素敏感性不同,可以通过临床菌群的培养进行区分,但对菌群的培养需要消耗大量的时间和金钱,因此采用一种简便快捷的诊断方式成为研发的主要课题。
需氧菌性阴道炎(AV)常见病原体为链球菌、葡萄球菌以及大肠埃希菌。而正常阴道是以乳酸杆菌为优势菌的正常微生物群,阴道PH<4.5,当患有需氧菌性阴道炎时,阴道乳酸杆菌减少而需氧菌繁殖导致阴道壁粘膜具有充血、水肿、脓性分泌物的炎性特征。细菌预成酶是细菌在生长繁殖过程中合成的一系列与生长代谢有关的酶类,这些酶类能分解多种底物,并且在有氧环境中较长时间的保留其活性。不同种属的细菌,其预成酶的种类不同。AV的主要致病菌为金黄色葡萄球菌、粪肠球菌、大肠埃希氏菌,B族链球菌和大肠埃希菌代谢可产生β-葡萄糖醛酸酶。
国内外用于AV诊断的一些临床及实验室诊断方法多为镜检法和β-葡萄糖醛酸酶+凝固酶检测技术对其阴道分泌物进行检测,β-葡萄糖醛酸酶+凝固酶对需氧菌阴道炎的诊断具有很高的敏感度和特异性,且与临床上常用的Donders湿片镜检法有很高的符合率,临床符合率高达90.8%,敏感度为91.2%,可全面诊断AV,为妇产科医生提供明确的诊断依据。但由于凝固酶法为两步法且需要外加终止液,不利于自动化检测。
目前市场上在售的检测β-葡萄糖醛酸酶的干化学试纸只有北京中生金玉一家,检测原理为底物自缩合显色,检测方式为卡式,育温时间长,反应显色弱不易观察。
发明内容
本发明的目的是解决现有的β-葡萄糖醛酸酶干化学试纸育温时间长、反应显色弱不易观察的问题,而提供一种β-葡萄糖醛酸酶干化学试纸及检测方法。
本发明首先提供一种β-葡萄糖醛酸酶干化学试纸,包括基板,及均匀设置在基板上的若干个试纸块,所述的试纸块是将滤纸放入浸液浸润干燥后得到的;
所述的浸液是将底物溶解于带缓冲能力的浸液中得到的;
所述的底物为葡萄糖醛酸苷钠盐及其衍生物。
优选的是,所述的底物为4-硝基苯-β-D-葡萄糖苷。
优选的是,所述的底物浓度为4-8mg/mL。
优选的是,所述的带缓冲能力的浸液为乙酸钠缓冲液、磷酸盐缓冲液或柠檬酸缓冲液,浸液的浓度为0.05-0.2M。
优选的是,所述的带缓冲能力的浸液的pH范围为3.0-5.0。
优选的是,所述的干燥温度为50-80℃,干燥时间为20~25min。
优选的是,所述的滤纸类型为7218型滤纸、31ET型滤纸或526型滤纸。
本发明还提供一种β-葡萄糖醛酸酶干化学试纸条的检测方法,该方法包括:
取稀释的样本,滴加一滴在试纸块上,于37℃温浴8-10min后外加显色剂1滴,观察β-葡萄糖醛酸酶试纸块的颜色变化,试纸块由无色变成黄色,即判定为β-葡萄糖醛酸酶阳性。
优选的是,所述的显色剂为pH>10的碱性溶液。
优选的是,所述的碱性溶液为0.1M氢氧化钠溶液。
本发明的有益效果
本发明提供一种β-葡萄糖醛酸酶干化学试纸及检测方法,试纸,包括基板,及均匀设置在基板上的若干个试纸块,所述的试纸块是将滤纸放入浸液浸润干燥后得到的;所述的浸液是将底物溶解于带缓冲能力的浸液中得到的;所述的底物为葡萄糖醛酸苷钠盐及其衍生物。经大量实验证明,需氧性阴道炎(AV)的主要致病菌为金黄色葡萄球菌、粪肠球菌、大肠埃希氏菌、B族链球菌和大肠埃希菌,代谢可产生β-葡萄糖醛酸酶。AV检测试纸选取阴道分泌物的β-葡萄糖醛酸酶作为检测指标,阴道分泌物中的β-葡萄糖醛酸酶活性与AV之间存在一定的量的关系。本发明依据此原理研制成检测β-葡萄糖醛酸酶的干化学试纸条及其测定方法,将底物浸润到试纸块上,检测时样品与试纸块接触,37℃温浴8-10min后外加显色剂1滴,试纸块由无色变成黄色,即判定为β-葡萄糖醛酸酶阳性。本发明直接在浸液中添加底物,工艺简化,产品性能稳定,与类似产品相比操作简单,适宜普及。
附图说明
图1为本发明一种β-葡萄糖醛酸酶干化学试纸的结构示意图。
图2为本发明的试纸在浸渍干燥机中干燥的结构示意图。
图中,1、试剂块,2、胶带,3、基板。
具体实施方式
本发明首先提供一种β-葡萄糖醛酸酶干化学试纸,如图1所示,包括基板3,及均匀设置在基板3上的若干个试纸块1,所述的试纸块1优先通过胶带2固定在基板3上,所述的试纸块1是将滤纸放入浸液浸润干燥后经过裁剪得到的;所述的浸液是将底物溶解于带缓冲能力的浸液中得到的;所述的底物为葡萄糖醛酸苷钠盐及其衍生物,优选为4-硝基苯-β-D-葡萄糖苷。所述的底物浓度优选为4-8mg/mL,更优选为5-6mg/mL。
按照本发明,所述的带缓冲能力的浸液优选为乙酸钠缓冲液、磷酸盐缓冲液或柠檬酸缓冲液,浸液的浓度优选为0.05-0.2M,pH范围优选为3.0-5.0,更优选为3.5-4.5。
按照本发明,所述的滤纸没有特殊要求,采用本领域常规的滤纸即可,优选类型为7218型滤纸、31ET型滤纸或526型滤纸。
按照本发明,所述的干燥是将滤纸在浸液中浸润均匀后,优选在50-80℃高温干燥烘箱中干燥20~25min,烘干后室温密封保存。
按照本发明,所述的干燥也可以采用浸渍干燥机自动化干燥方法,如图2所示,具体为,
(1)浸渍干燥机温度设定:
开机后将设备温度主加热设定80℃,副加热设定60℃,待主机加热温度达到80℃,各干燥室温度≥60℃左右时开始浸液;
本发明对主加热和副加热同时设定,可控制设备出现温度过高或过低带来的不利影响,当干燥室温度低于设定值,主加热和副加热同时加热可快速达到设定温度;当干燥室温度高于设定温度,主加热和副加热同时降温可快速达到设定温度。
(2)浸渍干燥机走速设定:7.0-11.0Hz
本发明的走速调节随干燥室的温度来设定,来保证试纸干燥程度的一致性,当试纸干燥过快,将走速调快,当试纸干燥过慢,将走速调慢。
本发明还提供一种β-葡萄糖醛酸酶干化学试纸条的检测方法,该方法包括:
取稀释的样本,滴加一滴在试纸块上,于37℃温浴8-10min后外加显色剂1滴,观察β-葡萄糖醛酸酶试纸块的颜色变化,试纸块由无色变成黄色,即判定为β-葡萄糖醛酸酶阳性。所述的显色剂为pH>10的碱性溶液,更优选为0.1M氢氧化钠溶液。
实施例1:β-葡萄糖醛酸酶检测试纸的制备
浸液:0.05M的乙酸钠缓冲液pH4.5、6mg/mL的4-硝基苯-β-D-葡萄糖苷。
显色剂:0.1M氢氧化钠水溶液。
β-葡萄糖醛酸酶检测试纸由下方法烘干:
取31ET滤纸,用浸液浸湿均匀,在60℃高温干燥烘箱中干燥20~25min,烘干后密封保存;
实施例2:β-葡萄糖醛酸酶检测试纸的制备
浸液:0.1M的柠檬酸pH4.5、5mg/mL的4-硝基苯-β-D-葡萄糖苷。
显色剂:0.1M氢氧化钠水溶液。
β-葡萄糖醛酸酶检测试纸由下方法烘干:
取31ET滤纸,用浸液浸湿均匀,在60℃高温干燥烘箱中干燥20~25min,烘干后密封保存;
实施例3:β-葡萄糖醛酸酶检测试纸的制备
浸液:0.1M的磷酸缓冲液pH5.0、8mg/mL的4-硝基苯-β-D-葡萄糖苷。
显色剂:0.1M氢氧化钠水溶液。
β-葡萄糖醛酸酶检测试纸由下方法烘干:
取31ET滤纸,用浸液浸湿均匀,在60℃高温干燥烘箱中干燥20~25min,烘干后密封保存;
实施例4:β-葡萄糖醛酸酶检测试纸的制备
浸液:0.2M的乙酸钠缓冲液pH3.5、8mg/mL的4-硝基苯-β-D-吡喃葡萄糖苷。
显色剂:0.1M氢氧化钠水溶液。
β-葡萄糖醛酸酶检测试纸由下方法烘干:
取7218滤纸,用浸液浸湿均匀,在70℃高温干燥烘箱中干燥20~25min,烘干后密封保存;
实施例5:β-葡萄糖醛酸酶检测试纸的制备
浸液:0.1M的磷酸缓冲液pH4.5、5mg/mL的4-硝基苯-β-D-氨基葡萄糖苷。
显色剂:0.1M氢氧化钠水溶液。
β-葡萄糖醛酸酶检测试纸由下方法烘干:
取31ET滤纸,用浸液浸湿均匀,浸渍干燥机主温度设置80℃,副温度设置60℃,走速7Hz,烘干后密封保存;
采用实施例1-5的β-葡萄糖醛酸酶检测干化学试纸检测培养大肠埃希菌。检测方法和过程:将实施例1-5的β-葡萄糖醛酸酶检测干化学试纸从2℃-8℃取出,平衡至室温(18℃-25℃);用无菌植绒拭子采集阴道分泌物样本,放入软试管中,每个样本加1.2mL细胞保存液,反复涮洗拭子,使拭子上的样本充分洗脱;将样本分别滴加实施例1-5的β-葡萄糖醛酸酶检测干化学试纸上,在37±1℃温育8分钟后,外加1滴显色剂,在1分钟内与色标对比判读结果。检测结果:共试验500份阴道分泌物,分离出55株大肠埃希菌,结果为:
实施例1:阳性预测值90.9%、阴性预测值99.7%;
实施例2:阳性预测值87.3%、阴性预测值99.5%;
实施例3:阳性预测值92.7%、阴性预测值100%;
实施例4:阳性预测值89.1%、阴性预测值98.9%;
实施例5:阳性预测值90.9%、阴性预测值99.5%。
以上结果说明本发明操作简单,准确率高,适宜普及。
对所公开的实施例的上述说明,使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的,本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下,在其它实施例中实现。因此,本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例,而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。
Claims (10)
1.一种β-葡萄糖醛酸酶干化学试纸,包括基板,及均匀设置在基板上的若干个试纸块,其特征在于,所述的试纸块是将滤纸放入浸液浸润干燥后得到的;
所述的浸液是将底物溶解于带缓冲能力的浸液中得到的;
所述的底物为葡萄糖醛酸苷钠盐及其衍生物。
2.根据权利要求1所述的一种β-葡萄糖醛酸酶干化学试纸,其特征在于,所述的底物为4-硝基苯-β-D-葡萄糖苷。
3.根据权利要求2所述的一种β-葡萄糖醛酸酶干化学试纸,其特征在于,所述的底物浓度为4-8mg/mL。
4.根据权利要求1所述的一种β-葡萄糖醛酸酶干化学试纸,其特征在于,所述的带缓冲能力的浸液为乙酸钠缓冲液、磷酸盐缓冲液或柠檬酸缓冲液,浸液的浓度为0.05-0.2M。
5.根据权利要求1所述的一种β-葡萄糖醛酸酶干化学试纸,其特征在于,所述的带缓冲能力的浸液的pH范围为3.0-5.0。
6.根据权利要求1所述的一种β-葡萄糖醛酸酶干化学试纸,其特征在于,所述的干燥温度为50-80℃,干燥时间为20~25min。
7.根据权利要求1所述的一种β-葡萄糖醛酸酶干化学试纸,其特征在于,所述的滤纸类型为7218型滤纸、31ET型滤纸或526型滤纸。
8.权利要求1所述的一种β-葡萄糖醛酸酶干化学试纸条的检测方法,其特征在于,该方法包括:
取稀释的样本,滴加一滴在试纸块上,于37℃温浴8-10min后外加显色剂1滴,观察β-葡萄糖醛酸酶试纸块的颜色变化,试纸块由无色变成黄色,即判定为β-葡萄糖醛酸酶阳性。
9.根据权利要求8所述的一种β-葡萄糖醛酸酶干化学试纸条的检测方法,其特征在于,所述的显色剂为pH>10的碱性溶液。
10.根据权利要求9所述的一种β-葡萄糖醛酸酶干化学试纸条的检测方法,其特征在于,所述的碱性溶液为0.1M氢氧化钠溶液。
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