CN114231455A - 一种生物小球、固定化微球及其制备方法和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种生物小球、固定化微球及其制备方法和应用，属于污水处理技术领域。本发明提供了一种生物小球，所述生物小球由海藻酸钠包埋复合菌群得到；所述复合菌群包括Enterobacteriaceae、Alcaligenes、Terrisporobacter、Pararaclostridium和Shewanella。本发明所述生物小球不需要外加碳源即可对亚硒酸钠进行吸附还原，反应后得到的固定化微球表面生成的生物硒纳米颗粒(Se(0)、CdSe)能够继续对镉进行去除，对污染水体中硒的去除率达到97％以上，对镉的去除率达到99％以上，具有良好的应用前景。

Description

一种生物小球、固定化微球及其制备方法和应用
技术领域
本发明涉及污水处理技术领域，特别是涉及一种生物小球、固定化微球及其制备方法和应用。
背景技术
硒是一种天然的微量元素，近年来在高科技产品中获得极大关注，硒化合物主要用于玻璃、半导体材料生产；而硒纳米颗粒具有良好的导电和催化性能，且生物毒性比硒化合物更低，在电子、光学和医学领域中应用广泛。但自然界中硒常存为氧化态，具有溶解度和毒性高的特点，浓度稍微升高对人体健康和生态环境就会造成威胁。随着采矿、冶炼和农业灌溉等人类活动发展，局部水体硒污染问题日益严重。
通常水体中硒浓度超标范围较小，且与其他重金属共存，这让传统物理、化学法处理含硒废水过程复杂化且耗能较大。生物法不但能将氧化态硒还原成生物毒性低的生物硒纳米颗粒，而且具有环境友好、成本低等特点。目前，多种微生物如微杆菌、假单胞菌和芽孢杆菌等已被证实具有较高的除硒能力。但生物处理工艺在除硒效率受温度、碳源、pH值等因素影响，且微生物容易从反应器中流失，且需要外加碳源维持微生物生长，从而限制了生物处理工艺在重金属去除中的应用。
发明内容
本发明的目的在于提供一种生物小球，能够在无外加碳源的条件下进行有效除硒，之后能够继续对镉进行去除，生成纳米硒化镉颗粒，从而实现有效除硒、镉的效果。
为解决上述技术问题，本发明提供了以下技术方案：
本发明提供了一种生物小球，所述生物小球由海藻酸钠包埋复合菌群得到；所述复合菌群包括Enterobacteriaceae、Alcaligenes、Terrisporobacter、Pararaclostridium和Shewanella。
本发明提供了上述的生物小球在去除硒、镉污染水体中的应用。
本发明提供了一种固定化微球，所述固定化微球为在上述生物小球表面附着有生物硒纳米颗粒。
优选的，所述固定化微球由上述的生物小球与亚硒酸钠溶液混合反应即得。
优选的，所述生物小球与亚硒酸钠溶液反应的pH为4-7。
优选的，所述生物小球与亚硒酸钠溶液的质量体积比为(0.25-6.0)g：1L。
优选的，所述亚硒酸钠溶液的浓度为3.95-39.50mg/L。
本发明还提供了上述的固定化微球或上述的制备方法在去除镉污染水体中的应用。
本发明还提供了一种去除污染水体中硒、镉的方法，所述方法包括如下步骤：
将所述生物小球与所述污染水体混合吸附其中的硒，得到固定化微球；所述固定化微球继续与水体中的镉反应，从而达到去除水体中硒、镉的目的。
优选的，所述去除污染水体中硒、镉的全程不添加额外碳源。
本发明提供了一种生物小球，由海藻酸钠包埋从矿区土壤中富集得到的复合菌群得到，不需要外加碳源即可对亚硒酸钠进行吸附还原，反应后得到固定化微球。固定化微球表面生成的生物硒纳米颗粒(Se(0)、CdSe)能够对镉进行去除，实现除镉的效果。经实验证实，本发明所述的生物小球对含污染水体中硒的去除率达到97％以上，对镉的去除率达到99％以上，对于去除污染水体中的硒和镉具有良好的应用前景。
附图说明
图1为本发明去除污染水体中硒、镉的流程。
图2为生物小球还原亚硒酸钠影响因素探究；其中，(a)为反应时间对生物小球还原Se(IV)的影响，(b)为投加量对生物小球还原Se(IV)的影响，(c)为初始Se(IV)浓度对生物小球还原Se(Ⅳ)的影响，(d)为pH对生物小球还原Se(IV)的影响。
图3为固定化微球除镉效果；其中，(a)为反应时间对其除Cd(II)特性影响，(b)为不同Se(IV)浓度对其除Cd(II)特性影响。
图4为固定化微球除硒降镉循环实验。
图5为反应前后生物小球宏观、微观结构；其中，(a)和(b)为反应前生物小球宏观和微观结果，(d)和(e)为生物小球暴露在浓度为7.9mg/L Se(IV)中168h后的宏观和微观结果，(g)和(h)为固定化微球继续暴露在浓度为11.2mg/L Cd(II)中10h后的宏观和微观结果，(h)中的箭头代表颗粒物质。
图6反应前后生物小球形态和元素组成；其中，(c)为反应前生物小球形态和元素组成，(f)为生物小球暴露在浓度为7.9mg/L Se(IV)中168h后的形态和元素组成，(i)为固定化微球继续暴露在浓度为11.2mg/L Cd(II)中10h后的形态和元素组成。
图7为除硒后生成颗粒粒径和继续除镉生产颗粒粒径；其中(a)为除硒后生成颗粒粒径；(b)为除硒后继续除镉生成颗粒粒径。
图8为反应前后生物小球FTIR光谱。
图9为生物小球在去除Se(IV)和Cd(II)前后元素价态情况；其中，(a)为XPS全谱，(b)为Se 3d的精细谱，(c)为Cd 3d的精细。
具体实施方式
本发明提供了一种生物小球，所述生物小球由海藻酸钠包埋复合菌群得到；所述复合菌群包括Enterobacteriaceae、Alcaligenes、Terrisporobacter、Pararaclostridium和Shewanella。
本发明中，所述复合菌群包括Enterobacteriaceae、Alcaligenes、Terrisporobacter、Pararaclostridium和Shewanella；其中，所述Enterobacteriaceae的丰度占比优选为40-66％，所述Alcaligenes的丰度占比优选为20-36％，所述Terrisporobacter的丰度占比优选为1-8％，所述Pararaclostridium的丰度占比优选为1-4％，所述Shewanella的丰度占比优选为1-3％。本发明中，所述复合菌群优选的由铅锌矿区附近土壤中筛选得到，在本发明的具体实施例中，所述复合菌群更优选的从湖南省某典型铅锌矿区附近土壤中筛选得到。本发明对所述筛选的方法并没有特殊限定，在本发明的具体实施例中，所述复合菌群的筛选优选包括如下步骤：将土壤与无菌水混合振荡24h，然后采用平板划线法分离获得复合菌群。所述平板划线所用培养基优选包括：5-8g/L牛肉膏、8-12g/L蛋白胨、15-20g/L琼脂，所述培养基的pH优选为7.0-7.2。
本发明中，所述生物小球由海藻酸钠包埋复合菌群得到。本发明对所述包埋的步骤并没有特殊限定，在本发明的具体实施例中，所述包埋优选的包括如下步骤：将与无菌水混合的海藻酸钠混合机械搅拌，加入复合菌群的菌体，然后将均匀的“复合菌群-海藻酸钠”混合物逐滴加入2％CaCl2溶液中，在室温下交联、过滤、清洗后即得所述生物小球。本发明对所述机械搅拌以及过滤的方式并没有特殊限定，采用本领域常规的机械搅拌或过滤方式即可。
本发明提供了上述的生物小球在去除硒、镉污染水体中的应用。所述生物小球对Se(IV)有吸附作用且吸附后被还原，同时可直接吸附溶液中Cd(II)，对镉有去除能力且能生成纳米硒、纳米硒化镉。
本发明中，所述固定化微球由上述生物小球与亚硒酸钠溶液混合反应得到，所述的固定化微球表面附着有生物硒纳米颗粒。本发明中，所述生物小球与亚硒酸钠溶液的质量体积比优选为(0.25-6.0)g：1L，更优选为(2-5)g/L。所述亚硒酸钠溶液的浓度优选为3.95-39.50mg/L，更优选为7.9mg/L。本发明中，所述生物小球与亚硒酸钠反应的时间优选为1-168h，更优选为72-144h；所述反应的pH优选为4-7，更优选为5-6。
本发明还提供了上述的固定化微球或上述的制备方法在去除镉污染水体中的应用。
本发明还提供了一种去除污染水体中硒、镉的方法，所述方法包括如下步骤：将所述生物小球与所述污染水体混合去吸附中的硒，得到固定化微球；所述固定化微球继续与水体中的镉反应，从而达到去除水体中硒、镉的目的。具体流程如图1所示。
本发明中，所述去除污染水体中硒、镉的全程不添加额外碳源。所述固定化微球与水体中的镉反应时间优选为1-144h，更优选为10h。
本发明中，LB培养基组成为：5g/L牛肉膏，10g/L胰蛋白胨，10g/L氯化钠，pH为7.0-7.2，121℃下高压灭菌20min。
本发明中，所用原料、试剂与设备均为已知产品，采用常规市售产品即可。
本发明中，“0”、“II”以及“IV”代表相应元素的化合价。
为了进一步说明本发明，下面结合实施例对本发明提供的技术方案进行详细地描述，但不能将它们理解为对本发明保护范围的限定。
实施例1
复合菌群的获得
从湖南省某典型铅锌矿区附近土壤中用平板划线法分离混合菌。
筛选方法为：
1.将1g土壤放置在50mL无菌水中振荡摇晃24h。
2.融化培养基：6g/L牛肉膏，10g/L蛋白胨，18g/L琼脂，培养基放入水浴中加热至融化。
3.倒平板：待培养基冷却至50℃，在超净台按无菌操作法倒2只平板，平置，待凝固。
4.挑取含菌样品：选用平整、圆滑的接种环，按无菌操作法挑取少量菌种。
5.平板倒置于煤气灯旁，左手拿出皿底并尽量使平板垂直于桌面，有培养基一面向着煤气灯(这时皿盖朝上，仍留在煤气灯旁)，右手拿接种环先画4条连续的平行线。划完后应立即烧掉环上的残菌，以免因菌过多而影响后的分离效果。
6.恒温培养：将划线平板倒置，于37℃(或28℃)培养，24h后观察，得到优势菌群包括Enterobacteriaceae、Alcaligenes、Terrisporobacter、Pararaclostridium、Shewanella，保存于-4℃。
实施例2
生物小球的获得
将实施例1获取保存的菌群接种至LB培养基中，在30℃恒温振荡器中振荡培养48h，振荡速度150rpm/min。在高速冷冻离心机(ESCO Versari T1000R，新加坡)中以8000rpm/min离心10min，倒掉上清液，菌体沉淀用无菌水清洗三遍，以去除残留的培养基，保存至-4℃下，待用。
在50mL无菌水中加入1g海藻酸钠，机械搅拌15min，加入保存好的菌体1.5g，继续机械搅拌15min，随后将均匀的“复合菌群-海藻酸钠”混合物逐滴加入2％CaCl2溶液中，在室温下交联24h，过滤后用无菌水清洗三遍，制备成固定化生物小球，在4℃下保存于生理盐水中备用。同时，以相同工艺制备不含复合菌群的对照小球。
实施例3
固定化微球的获得
将5g实施例2制备得到的生物小球与7.9mg/L的亚硒酸钠溶液混合，在pH为4的条件下，在150rpm/min的恒温振荡培养箱上培养144h即得所述固定化微球。
实施例4
一、批量实验
为了分析不同因素对生物小球去除Se(Ⅳ)特性，以反应时间、生物小球投加量、pH和初始Se(Ⅳ)浓度为研究对象，进行批量试验。为深入分析生物小球除Se(Ⅳ)特性与机理，用滤纸吸干小球周围Se(Ⅳ)溶液，继续将生物小球处理含Cd(Ⅱ)溶液，反应一定时间后，用0.22μm滤膜过滤，分别测定溶液中Se(Ⅳ)和Cd(Ⅱ)剩余浓度。所有实验重复三次，并以不含复合菌群的小球作为对照组进行对照试验。
具体步骤：
(1)反应时间：在50mL锥形瓶中加入20mL Se(Ⅳ)浓度为7.9mg/L的溶液，生物小球投加量为5g/L，pH为4的情况下，在150rpm/min的恒温振荡培养箱上培养，测定反应0-168h后，溶液中剩余Se(Ⅳ)浓度。
(2)投加量：得到最适吸附时间后，在50mL锥形瓶中加入20mL Se(Ⅳ)浓度为7.9mg/L的溶液，pH为4的情况下，改变生物小球投加量，在150rpm/min的恒温振荡培养箱上培养，6天后测定溶液中剩余Se(Ⅳ)浓度。
(3)初始浓度：得到最适吸附时间和投加量后，在50mL锥形瓶中加入不同Se(Ⅳ)浓度20mL，pH为4，投加量为5g/L的情况下，在150rpm/min的恒温振荡培养箱上培养，6天后测定溶液中剩余Se(Ⅳ)浓度。
(4)pH：得到最适吸附时间、投加量和初始浓度后，在50mL锥形瓶中加入20mL Se(Ⅳ)浓度为7.9mg/L的溶液，改变溶液pH，在150rpm/min的恒温振荡培养箱上培养，72h和144h后测定溶液中剩余Se(Ⅳ)浓度。
二、实验结果
1.生物小球还原亚硒酸钠的批量实验
1.1反应时间影响
在Se(Ⅳ)浓度为7.9mg/L，投加量为5g/L，pH为4的情况下，探究反应时间对生物小球还原Se(Ⅳ)的影响，结果如图2(a)所示。
可以看出，反应时间对生物小球还原Se(Ⅳ)影响较大，在反应前24h内，生物小球对Se(Ⅳ)吸附速率较快，去除率最高为57.94％，并在48h时去除率也没有明显增加，从72h开始去除率开始呈上升趋势，最高可达98.79％，在168h时Se(Ⅳ)出水浓度为0.095mg/L。从动力学角度看，反应初期时生物小球对Se(Ⅳ)可能为物理吸附，效率不高，但能快速吸附Se(Ⅳ)；随着反应时间的增加，生物小球内菌群逐渐适应环境，开始生物还原Se(Ⅳ)，并在微球内部进行缓慢扩散，逐渐变成红色，证明Se(Ⅳ)被还原。
1.2投加量的影响
在Se(Ⅳ)浓度为7.9mg/L，pH为4的情况下反应6天，探究生物小球投加量(0.25-6.0g/L)对还原Se(Ⅳ)的影响，结果如图2(b)所示。
由图可知，在投加量为0.25-1.0g/L时，投加量对生物小球还原Se(Ⅳ)影响较大，但当微球投加量保持在2.0-6.0g/L时，投加量影响较小，去除率均在90％以上；因此2g/L的投加量即可以保持足够高的去除率。
1.3初始浓度的影响
在Se(Ⅳ)浓度为3.95-39.50mg/L，pH为4，投加量为5g/L的情况下反应6天，探究生物小球还原不同Se(Ⅳ)浓度特性，结果如图2(c)所示。
可以看出，微生物小球对Se(Ⅳ)浓度在7.9mg/L以下时去除率在97％以上，属于大部分含硒废水浓度范围，这表明微生物小球具有较好的应用潜力。
1.4pH对生物小球还原亚硒酸钠效率的影响
在Se(Ⅳ)浓度为7.9mg/L，投加量为5g/L的情况下分别反应72h和144h，探究pH(4-7)对生物小球还原Se(Ⅳ)的影响，结果如图2(d)所示。
可以看出，pH越低溶液中H+浓度越高，H+与氧阴离子吸附结合效率越大。反应3天时，pH对生物小球还原Se(Ⅳ)影响不显著，这表明生物小球并不是通过静电吸附去除Se(Ⅳ)；反应6天后，去除率均能保持在80％以上，且pH值变化对Se(Ⅳ)的去除有一定影响，当pH为5时，去除率最大为92.36％。可见，本发明的生物小球在酸性范围内(pH为4-6)对Se(Ⅳ)效果较稳定，表明所述生物小球可以用于酸性含硒废水处理。
2.固定化微球除镉效果
2.1时间对其除镉影响
将生物小球在Se(Ⅳ)浓度为7.9mg/L，pH为5的情况下反应144h后取出，以5g/L投加量继续处理11.2mg/L Cd(Ⅱ)，探究反应时间对其除Cd(Ⅱ)特性影响，结果如图3(a)所示。
由图可知，与Se(Ⅳ)反应后的固定化微球除Cd(Ⅱ)时，随着时间增加，除Cd(Ⅱ)效率越高，在吸附10h后，Cd(Ⅱ)去除率可达99.15％，表明固定化微球具有良好的除Cd(Ⅱ)效果。
2.2不同硒浓度对其除镉影响
将生物小球分别在Se(Ⅳ)浓度为3.95-39.50mg/L，pH为5的情况下反应144h后取出，以5g/L投加量，处理11.2mg/L含Cd(Ⅱ)废水10h，探究不同Se(Ⅳ)浓度对其除Cd(Ⅱ)特性影响，结果如图3(b)所示。
由图2(c)和图3(b)可知，当Se(Ⅳ)浓度由3.95mg/L增加至23.79mg/L时，体系中被生物还原的Se(Ⅳ)含量增加，生成物中SeNPs含量增加，提高了Cd(Ⅱ)吸附效率；Se(Ⅳ)浓度继续增加时，Cd(Ⅱ)去除率保持在99％以上，Cd(Ⅱ)基本完全去除。因此，固定化微球还原Se(Ⅳ)之后，还可以增强对Cd(Ⅱ)的吸附去除。
2.3除硒降镉重复性实验
将生物小球在Se(Ⅳ)浓度为7.9mg/L，pH为5的情况下反应144h后取出，以5g/L投加量处理含7.9mg/L Se(Ⅳ)和11.2mg/L Cd(Ⅱ)水溶液，以24h为一个周期，重复进行7个周期，探究生物小球重复利用性，结果如图4所示。
综合图4和图2(a)可知，24h内生物小球对Se(Ⅳ)可能仅为表面物理吸附，48h后才开始生物吸附还原作用。在前两个周期内Cd(Ⅱ)去除率均达到97％以上，然后随着周期增加，Cd(Ⅱ)去除率逐渐下降，这是因为前期生成的SeNPs的吸附容量已经饱和，且后续周期中微生物没有持续还原Se(Ⅳ)产出SeNPs。因此，延长周期Se(Ⅳ)和Cd(Ⅱ)均会保持较好去除效果。
实施例5
1、SEM-EDS和纳米粒度
SEM-EDS方法：将反应前后的生物小球在-60℃下冷冻8h，随后放在冷冻干燥机内，冷冻干燥至粉末状，之后进行喷金处理。最后在3.00kV下，用Zeiss Sigma300观察制备的样品形貌和元素变化，得到反应前后生物小球宏、微观形态和元素组成如图5和图6所示。
纳米粒度获取方法：取生物小球与亚硒酸钠和氯化镉两个反应阶段后的液体样品5-10mL，用乙醇作为分散剂，用纳米粒度仪(Malvern ZetasizerNano ZS90)测定生成物粒径大小，结果如图7所示。
由图5-7可以看出，反应前生物小球表面较为光滑，呈淡黄色，大小均一；当暴露在浓度为7.9mg/L Se(Ⅳ)中168h后，生物小球表面呈红色且周围有许多红色颗粒生成，微观形态表面没有显著变化；继续暴露在浓度为11.2mg/L Cd(Ⅱ)中10h后，生物小球红色变淡，微观表面层次分明，褶皱均匀规整，且有颗粒物质生成。结合EDS结果发现，反应前生物小球中不含Se元素，C、O和P等有机元素含量较高，暴露于Se(Ⅳ)后，Se元素含量为0.03％，证明生物小球对Se(Ⅳ)有吸附作用但可能吸附后被还原，导致表面Se元素含量不高。继续暴露于Cd(Ⅱ)后，Se和Cd两种元素含量分别为1.43％和1.60％。证明了固定化微球对硒、镉有去除能力且能生成纳米硒、纳米硒化镉，它们平均粒径为344nm和479nm。
2、FTIR
利用傅氏转换红外线光谱分析仪在4000-400cm-1范围内观察反应前后生物小球的FTIR光谱，得到结果如图8所示。
从FTIR结果中可以看出，生物小球还原硒耦合吸附镉的主要机理是-OH、脂肪族、酰胺基、硝基等官能团的配位络合作用。
3、XPS
通过XPS分析生物小球在去除Se(Ⅳ)和Cd(Ⅱ)前后元素价态情况，结果如图9所示。
可以看出，在生物小球还原Se(Ⅳ)后，在结合能57.08eV处出现Se 3d峰；继续反应除Cd(Ⅱ)后，在结合能411.99eV处出现Cd 3d峰，进一步证明生物小球可还原Se(Ⅳ)和吸附Cd(Ⅱ)生成纳米颗粒。
同时可知，还原Se(Ⅳ)后，Se 3d的精细谱分峰拟合出Se(-Ⅱ)和Se(0)两种峰。结合能为54.66eV和55.26eV处的峰值对应于Se(-Ⅱ)，说明生物小球可将Se(Ⅳ)还原为Se(-Ⅱ)，从而为后续除Cd(Ⅱ)形成CdSe纳米颗粒提供了可能。结合能为55.60eV和56.20eV处的峰值被认为是元素硒Se(0)。此外，结果未出现Se(Ⅳ)对应峰值，说明生物小球反应初期吸附于表面的Se(Ⅳ)已经被微生物完全转化为胞内或胞外化合物。继续除Cd(Ⅱ)反应后，对应Se(-Ⅱ)和Se(0)峰值结合能变化，XPS半定量分析发现Se(-Ⅱ)含量由31.97％减少至21.61％，Se(0)含量由68.03％增加至78.39％，说明当Cd(Ⅱ)加入后促进生物小球中微生物将Se(Ⅳ)还原为Se(0)，少部分被还原为Se(-Ⅱ)。最后，Cd 3d的精细结合能在412.20eV和405.42eV处对应的峰为CdSe，说明生物小球确实能够合成纳米颗粒CdSe。405.67eV和412.17eV的峰归因于Cd(Ⅱ)，表明生物小球可直接吸附溶液中Cd(Ⅱ)。
实施例6
复合菌群分析
实验步骤：
取生物小球、固定化微球、与氯化镉反应后的固定化微球三个阶段分别进行均匀混合，利用E.Z.N.A Soil DNAKit试剂盒提取基因组DNA，采用通用引物515FomodF/806RmodR对细菌进行PCR扩增，通过Illumina MiSeq PE平台进行高通量测序，经过质量控制后，对获得的序列进行质量控制，并以97％的序列相似性阈值划分为操作分类单元(OTUs)。采用RDP Classifier软件(2.6版)进行分类，在门水平和属水平上评价细菌组成和丰度，得到结果如表1所示。
表1门水平丰度
Figure BDA0003424021180000111
可以看出，生物小球和固定化微球内微生物一直是以变形菌门和厚壁菌门为主，整个过程中变形菌门的丰度虽有受到轻微影响，但一直处于占比较大。属水平上生物小球中微生物主要组成为Enterobacteriaceae40-66％、Alcaligenes(20-36％)、Terrisporobacter(1-8％)、Paraclostridium(1-4％)和Shewanella(1-3％)5种菌属。
由以上实施例可以看出，本发明所述复合菌群具有良好的耐硒、镉性能，得到的生物小球和固定化微球在去除硒和镉的全程不需要外加碳源，能够同时去除污染水体中的硒和镉，对硒的去除率达到97％以上，对镉的去除率达到99％以上，具有良好的应用前景。
以上所述仅为本发明的实施例，并非因此限制本发明的专利范围，凡是利用本发明说明书内容所作的等效结构或等效流程变换，或直接或间接运用在其他相关的技术领域，均同理包括在本发明的专利保护范围内。

Claims (10)

1.一种生物小球，其特征在于，所述生物小球由海藻酸钠包埋复合菌群得到；所述复合菌群包括Enterobacteriaceae、Alcaligenes、Terrisporobacter、Pararaclostridium和Shewanella。
2.权利要求1所述的生物小球在去除硒、镉污染水体中的应用。
3.一种固定化微球，其特征在于，所述固定化微球为在权利要求1所述生物小球的表面附着有生物硒纳米颗粒。
4.权利要求3所述固定化微球的制备方法，其特征在于，所述固定化微球由权利要求1所述的生物小球与亚硒酸钠溶液混合反应即得。
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述生物小球与亚硒酸钠溶液反应的pH为4-7。
6.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述生物小球与亚硒酸钠溶液的质量体积比为(0.25-6.0)g：1L。
7.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述亚硒酸钠溶液的浓度为3.95-39.50mg/L。
8.权利要求3所述的固定化微球或权利要求4-7任意一项所述的制备方法在去除镉污染水体中的应用。
9.一种去除污染水体中硒、镉的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：
将权利要求1所述生物小球与所述污染水体混合吸附其中的硒，得到固定化微球；所述固定化微球继续与水体中的镉反应，从而达到去除水体中硒、镉的目的。
10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述去除污染水体中硒、镉的全程不添加额外碳源。
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