CN114214114B - 一种含甾醇酯的山茶油制备方法及该方法制备的山茶油 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种含甾醇酯的山茶油制备方法及该方法制备的山茶油。本发明所述方法包括如下步骤：对山茶油乳化、发酵、离心，加入植物甾醇，分散均匀后加入促进甾醇转化为甾醇酯的脂肪酶，分次进行酶合成反应，得到含甾醇酯的山茶油。本方法解决了现有技术在制备含甾醇酯山茶油的方法中，外源添加甾醇酯可引入无用甚至有害的有机溶剂及副产物，且功效较低的问题；本方法制备的山茶油甾醇酯含量高、酸价符合食品酸价的规定，油脂品质高。本发明所述方法制备得到的山茶油与外源添加甾醇酯的山茶油相比，更有效地降低甘油三酯、总胆固醇和低密度脂蛋白含量，提高高密度脂蛋白胆固醇含量，调节血脂处于较为健康水平，同时提高皮肤损伤修复效果和速率。

Description

一种含甾醇酯的山茶油制备方法及该方法制备的山茶油

技术领域

本发明属于食品加工技术领域，更具体地，涉及一种含甾醇酯的山茶油制备方法及该方法制备的山茶油。

背景技术

植物甾醇属于三萜烯家族化合物，近年来其生理活性功能已成为国内外研究热点，其在降低血清胆固醇水平、抗高血脂症、预防心血管疾病、抗癌、皮肤抗炎修复和免疫调节等方面具有良好的效果。

山茶(籽)油又称为茶树油、东方橄榄油、茶油、茶籽油等，是从山茶科(Theaceae)山茶属(Camellia)中的物种油茶(Camellia oleifera Abel.)的种子中提取的脂肪油。山茶油作为油茶籽中提取的优质保健植物脂肪，是一种天然的植物油，有着“长寿油”，“油中之王”等等的美誉。现代据中医科学论述，茶油性平，能降低人体中的胆固醇、血浆纤蛋白、血糖度，经常食用对高血压、心血管、脑血管、肥胖症等疾病有明显的食疗作用，且山茶油涂抹在皮肤能有一定的美容护肤的作用。然而山茶油在精炼过程中甾醇大量存在于脱臭馏出物中，导致精炼山茶油中甾醇含量偏低。

目前国内高甾醇食用油已被视为一种高端食用油，因此生产一种富含甾醇的山茶油将会有很大市场。但是植物甾醇熔点较高，常温下为结晶形式，在水和油脂中的溶解度非常低，难以应用于食品工业，而植物甾醇的衍生物植物甾醇酯,具有和植物甾醇相同甚至更优的生理活性功能，其熔点更低，在食用油和脂肪中溶解度高达35％～40％，能够解决植物甾醇在食品应用中的限制问题。目前较多的高甾醇食用油生产方式为直接添加新食品资源-甾醇酯(中国专利CN 106605720 A)，但是甾醇酯在酯化合成途径中使用了较多有机溶剂，可能对健康存在不利，直接添加甾醇会由于溶解性问题，难以达到高甾醇含量和生物活性的要求(中国专利CN 107177417 A)，有必要开发一种更安全的含甾醇酯的食用油。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种含甾醇酯的山茶油制备方法。这种含甾醇酯的山茶油中的甾醇酯通过酶法原位合成，相较于直接添加化学合成的甾醇酯更为安全。

本发明的另一目的是提供上述方法制备的山茶油。

本发明为了实现上述目的，采用了以下技术方案：

一种含甾醇酯的山茶油制备方法，该方法包括如下步骤：

S1.山茶油中加入水，乳化，得到山茶油乳液；

S2.向所得乳液中加入产脂肪酶的菌种进行接种发酵，使得山茶油中的脂肪降解为游离脂肪酸，发酵完成后，油水分离；

S3.向分离得到的油中加入植物甾醇，分散均匀，得到山茶油甾醇分散液；

S4.先取A体积山茶油甾醇分散液加入促进甾醇转化为甾醇酯的脂肪酶，进行第一次酶合成反应，再流加2～5倍A体积的山茶油甾醇分散液，进行二次酶合成反应，流加时间控制在0.5～1h，使得山茶油中甾醇转化为甾醇酯；

S5.合成结束后，去除不溶解的甾醇，即得含甾醇酯的山茶油；

步骤S2所述发酵条件为：接种量为0.1～10g/100ml，发酵温度为25～40℃，发酵时间为0.5～2h；所述油水分离采用离心方式进行，离心速度不低于5000rpm。

本发明先通过脂肪酶将山茶油中的脂肪降解为脂肪酸，然后以脂肪酸为促进甾醇转化为甾醇酯的脂肪酶的营养物质，使得外加的植物甾醇能够在脂肪酶的作用下尽可能地转化为甾醇酯。植物甾醇其来源于植物，基本不含有机溶剂或人工合成的副产物，因此克服现有的外源甾醇酯的缺陷。

本发明中，甾醇在山茶油中的溶解度不高，因此，步骤S4中，需要采用两次酶合成反应的方式来促进甾醇转化成甾醇酯。在第一次酶合成时，控制促进甾醇转化为甾醇酯的脂肪酶的添加量足以使A体积山茶油甾醇分散液中的甾醇充分转化为甾醇酯，然后利用流加的加量方式，控制形成适宜的漏槽条件(即使得甾醇溶出浓度远小于其饱和浓度)，促使溶解在山茶油中的甾醇有效转化为甾醇酯，从而促使甾醇不断溶解在山茶油中，提高甾醇的转化率。

因此，在本发明的方法中，流加速度太低和太高都会导致甾醇酯含量偏低。本发明中控制流加所用时间及流加的山茶油甾醇的体积，来调节流加的速度。

另外，步骤S1中乳化可以将产脂肪酶的菌种存活在水性环境里，进行发酵，而如果不加入水进行乳化，在步骤S2.中加入的可产脂肪酶在纯油环境里菌种不易存活，在步骤S2油水分离时，菌种也相应被去除。可以通过步骤S2.的发酵条件的控制，控制脂肪降解为游离脂肪酸的程度。

发明人意外地发现，本发明方法制备的含甾醇酯山茶油，相较于外源甾醇酯山茶油，能更有效地降低甘油三酯、总胆固醇和低密度脂蛋白水平，还能显著提高高密度脂蛋白胆固醇水平，调节血脂处于较为健康水平；同时本发明方法所制备的甾醇酯茶油显著提高了皮肤损伤修复效果和速率。

进一步地，步骤S1所述山茶油与水的体积比为1:5～5:1。

进一步地，步骤S1所述乳化方式为剪切乳化，剪切速度不低于100rpm。

进一步地，步骤S2所述可产生脂肪酶的菌种为黑曲霉菌、荧光假单胞菌、白地霉无根根霉菌、毛霉圆柱假丝酵母菌的一种或任意组合。

进一步的，步骤S2所用菌种为对数生长期的菌种。

进一步地，步骤S3所述甾醇添加量为油体积的0.1％～10％。

进一步地，步骤S3所述的分散，其方式为超声分散。

进一步地，步骤S4所述促进甾醇转化为甾醇酯的脂肪酶相对于山茶油甾醇分散液体积的添加量为0.1～10g/ml。

进一步地，步骤S4所述酶合成反应条件为：温度为30～100℃，搅拌速度为50～600rpm。

进一步地，第一次酶合成的时间为0.5～3h。

进一步地，步骤S4所述促进甾醇转化为甾醇酯的脂肪酶为具备催化酯合成、酯交换的固体形态的脂肪酶，形态为常规喷雾干燥粉、冻干粉、树脂包埋。

进一步地，所述促进甾醇转化为甾醇酯的脂肪酶是具有催化酯键合成功能的任意一种酶或多种酶组合。

更进一步的，所述的促进甾醇转化为甾醇酯的脂肪酶为lipozyme435或/和novozym435。

进一步地，步骤S5所述去除不溶解的甾醇，其去除方式可以为常规离心或过滤。

一种由上述制备方法制备得到的山茶油。

与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：

本发明结合了微生物发酵、酶法原位合成等工艺制备了含甾醇酯的山茶油，解决了外源添加甾醇酯可能引入无作用甚至有害的有机溶剂和副产物，山茶油结合外源甾醇酯功效较低的问题。本发明方法获得的山茶油，甾醇酯含量高，甾醇酯约600mg/100g，无需外源添加甾醇酯，酸价符合国家对食品酸价的规定，油脂品质高；同时本发明方法制备的山茶油较直接添加的甾醇酯茶油能更有效地降低甘油三酯、总胆固醇和低密度脂蛋白水平，还能显著提高高密度脂蛋白胆固醇水平，调节血脂处于较为健康水平；并能显著提高皮肤损伤修复效果和速率。

附图说明

图1为通过本方法制备的含甾醇酯山茶油成品图。

具体实施方式

以下结合说明书附图和具体实施例来进一步说明本发明，但实施例并不对本发明做任何形式的限定。除非特别说明，本发明采用的试剂、方法和设备为本技术领域常规试剂、方法和设备。

本实施例所用的植物甾醇购于陕西柏科生物科技有限公司；所用的脂肪酶为Lipozyme435、Novozym435固定化脂肪酶，且均为市购。

实施例1

按照如下方法制备含甾醇酯的山茶油，包括如下顺序的步骤：

S1.将2L山茶油中加入2L水，体积比为1:1，对混合物进行剪切乳化，剪切速度为500rpm，得到山茶油乳液；

S2.向所得乳液中加入对数期毛霉圆柱假丝酵母菌，接种量为1g/100ml，在30℃温度下进行发酵，发酵时间为1h。发酵完成后离心油水分离，离心速度6000rpm；离心速度过低容易油水分离不彻底，影响后续的酶合成反应，难以达到预期甾醇酯及酸价目标。

S3.向油中加入甾醇，甾醇添加量为油体积的0.1％，超声分散均匀，得到山茶油甾醇分散液；

S4.先取200ml山茶油甾醇分散液加入1g形态为干燥粉Lipozyme435固定化脂肪酶。在温度30℃，搅拌速度为300rpm条件下，时间为2h，进行第一次酶合成反应，再流加2倍体积(400ml)的山茶油甾醇分散液，进行第二次酶合成反应，二次酶合成条件相同，流加时间控制在1h；

S5.合成结束后，离心去除不溶解的甾醇，即得含甾醇酯的山茶油。

得到的山茶油澄清透亮，如图1。

实施例2

按照如下方法制备含甾醇酯的山茶油，包括如下顺序的步骤：

S1.将2L山茶油中加入6L水，体积比为1:3，对混合物进行剪切乳化，剪切速度为100rpm，得到山茶油乳液；

S2.向所得乳液中加入黑曲霉菌，接种量为0.2g/100ml，在25℃温度下进行，发酵时间为0.5h。发酵完成后离心油水分离，离心速度8000rpm；

S3.向油中加入甾醇，甾醇添加量为油体积的5％，超声分散均匀，得到山茶油甾醇分散液；

S4.先取500ml山茶油甾醇分散液加入0.5g形态为冷冻干燥形态Novozym435脂肪酶。在温度50℃，搅拌速度为50rpm条件下，时间为0.5h，进行第一次酶合成反应，再流加3倍体积(1500ml)的山茶油甾醇分散液，进行第二次酶合成反应，二次酶合成条件相同，流加时间控制在0.5h；

S5.合成结束后，过滤去除不溶解的甾醇，即得含甾醇酯的山茶油。

实施例3

按照如下方法制备含甾醇酯的山茶油，包括如下顺序的步骤：

S1.将3L山茶油中加入600ml水，体积比为5:1，对混合物进行剪切乳化，剪切速度为1000rpm，得到山茶油乳液；

S2.向所得乳液中加入对数期的荧光假单胞菌，接种量为8g/100ml，在40℃温度下进行发酵，发酵时间为2h。发酵完成后离心油水分离，离心速度10000rpm；

S3.向油中加入甾醇，甾醇添加量为油体积的10％，超声分散均匀，得到山茶油甾醇分散液；

S4.先取500ml山茶油甾醇分散液加入50g体积的形态为树脂包埋的Lipozyme435固定化脂肪酶。在温度80℃，搅拌速度为600rpm条件下，时间为3h，进行第一次酶合成反应，再流加5倍体积(2500ml)的山茶油甾醇分散液，进行第二次酶合成反应，二次酶合成条件相同，流加时间控制在45min；

S5.合成结束后，过滤去除不溶解的甾醇，即得含甾醇酯的山茶油。

实施例4加入较大量脂肪酶

按照如下方法制备含甾醇酯的山茶油，包括如下顺序的步骤：

S1.将2L山茶油中加入2L水，体积比为1:1，对混合物进行剪切乳化，剪切速度为500rpm，得到山茶油乳液；

S2.向所得乳液中按照1：1加入毛霉圆柱假丝酵母菌和白地霉无根根霉菌，接种量为1g/100ml，在30℃温度下进行发酵，发酵时间为1h。发酵完成后离心油水分离，离心速度6000rpm；

S3.向油中加入甾醇，甾醇添加量为油体积的0.1％，超声分散均匀，得到山茶油甾醇分散液；

S4.先取200ml山茶油甾醇分散液加入30g的Lipozyme435和Novozym435干燥粉固定化脂肪酶，质量比为1：1。在温度30℃，搅拌速度为300rpm条件下，时间为2h，进行第一次酶合成反应，再流加2倍体积(400ml)的山茶油甾醇分散液，进行第二次酶合成反应，二次酶合成条件相同，流加时间控制在1h；

S5.合成结束后，离心去除不溶解的甾醇，即得含甾醇酯的山茶油。

对比例1

将实施例1步骤S1中剪切乳化省去，其余步骤保持与实施例1相同。

对比例2

将实施例1步骤S2中发酵温度30℃改为20℃，其余步骤保持与实施例1相同。

对比例3

将实施例1步骤的S2中发酵温度30℃改为50℃，其余步骤保持与实施例1相同。

对比例4

将实施例1步骤的S2中发酵时间0.5h改为0.2h，其余步骤保持与实施例1相同。

对比例5

将实施例1步骤的S2中发酵时间0.5h改为4h，其余步骤保持与实施例1相同。

对比例6

将实施例1步骤的S2中离心速度6000rpm改为4000rpm，其余步骤保持与实施例1相同。

对比例7

将实施例1步骤S3中超声分散均匀省去，其余步骤保持与实施例1相同。

对比例8

将实施例1步骤S4中酶合成温度30℃改为120℃，其余步骤保持与实施例1相同。

对比例9

将实施例1步骤S4中一次酶合成时间2h改为24h，其余步骤保持与实施例1相同。

对比例10

将实施例1步骤S4中流加体积2倍改为8倍，流加体积为1600ml，其余步骤保持与实施例1相同。

对比例11

按照实施例1测定的甾醇酯含量，以外添加甾醇酯的方式制备甾醇酯茶油，按照600mg/100g的添加量添加至茶油中，混匀溶解，甾醇酯为植物甾醇酯，购于陕西柏科生物科技有限公司。

实施例5测定实施例1～4、对比例1～11甾醇酯和酸价

实验材料：原山茶油购于贵州山茶产业综合开发有限公司；其他山茶油来自实施例1～4和对比例1～11。

实验方法：

1.酸价测定

国标法检测产品中酸价，并判别是否合格。具体操作按照食品安全国家标准食品中酸价的测定执行(GB 5009.229-2016)，其中酸价主要反映食品中的油脂酸败的程度，是评价油脂品质的重要指标，酸价不合格，可以说明油脂品质下降，油脂陈旧。

2.甾醇酯总含量的测定(分光光度法)

将甾醇溶解于乙酸酐中，65℃加热完全溶解，配制成140ug/ml的溶液并吸取0、1.5、2、3、4ml分别置于10ml试管内，在各管内加入乙酸酐使总体积均达到4ml；加入2滴浓硫酸，15min待稳定后，在660nm波长处比色；以甾醇质量浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，得出标准曲线。将制取的植物甾醇酯油5滴，约0.1g置于25ml试管内，准确记录其质量m0(单位mg)，加入4ml无水乙醇、0.5ml质量分数50％的氢氧化钾乙醇溶液，在90℃恒温水浴中皂化1.5h；皂化时每隔20～30min振摇一次使其皂化完全(使甾醇酯水解成甾醇和脂肪酸)；皂化完毕，取出试管，冷却。加入3ml质量分数5％的氯化钠溶液，10ml石油醚，盖紧玻塞，在电动振荡器上振摇2min，静置分层；取上层石油醚液1ml，置于10ml试管内，在65℃水浴中用氮气吹干，加入4ml乙酸酐，65℃加热溶解，2滴浓硫酸，混匀，静置15min后在660nm波长处比色，测得吸光度，在标准曲线上查出相应的植物甾醇含量m(单位mg)；根据公式M＝m×10/m0×100计算出每100g油脂中甾醇酯总含量M(单位mg)。

实验结果：测定结果如表1，根据本发明方法制备的山茶油，如实施例1～4，甾醇酯的含量可达606.2±5.1mg/100g，远高于相关文献报道的甾醇酯含量85.67mg/100g(王腾宇,等.响应面法优化生物酶法合成植物甾醇酯[J].食品科学,2011,32(4):5.)，为原山茶油的7-8倍，该工艺甾醇酯含量较低的原因是方案仅探讨了脂肪酶酶合成甾醇酯的条件优化，是对一次酶合成中因素(时间、酶用量、反应温度、底物添加量)考察与优化，是酶合成工艺的常规实验方案，并未对如何对工艺进行更深入研究来提高甾醇酯的含量。步骤S1中乳化、步骤S2中发酵温度和时长及离心步骤、步骤S3分散不均匀、步骤S4中流加体积非本工艺要求(对比例1～7、对比例10)，会引起甾醇酯的含量稍高于原山茶油，但与本发明所述的方法制备的甾醇酯山茶油相比甾醇酯含量显著较低；步骤S2中发酵温度过高和发酵时长较长及离心不充分、步骤S4中酶合成温度过高、酶合成时间过长均会导致山茶油酸价的不合格，油品质下降(对比例3、对比例5～6、对比例8～9)；步骤S4中酶的用量一定增多虽然能使山茶油甾醇酯含量达标和酸价的合格，但考虑经济效益，过高增加酶含量，经济效益不足(实施例4)。外源添加甾醇虽然也可以使甾醇酯和酸价合格，但其功效与本发明方法原位合成制备的山茶油相比效用不同(具体见实施例6～7)。

表1样品甾醇酯平均含量及酸价判定

名称	甾醇酯平均含量mg/100g	酸价
			原山茶油	84.2±3.5	合格
实施例1	606.2±5.1	合格
			实施例2	598.1±3.4	合格
实施例3	600.1±2.1	合格
			实施例4	605.9±2.6	合格
对比例1	102.3±4.3	合格
			对比例2	92.2±3.0	合格
对比例3	110.0±6.2	不合格
			对比例4	92.7±5.4	合格
对比例5	115.3±4.2	不合格
			对比例6	116.6±5.0	不合格
对比例7	92.0±1.3	合格
			对比例8	606.2±5.3	不合格
对比例9	603.1±1.5	不合格
			对比例10	92.4±6.2	合格
对比例11	600.7±5.2	合格

实施例6高血脂抑制实验

实验材料：昆明小鼠(18±2g，雄性，6周，购于上海斯莱克实验动物有限责任公司)

实验方法：32只小鼠在干燥、清洁、通风良好的环境中适应性饲养一周后，随机分成4组，每组8只，各组小鼠分笼饲养，体重无显著差异。空白对照组喂普通饲料，其他组喂高脂饲料，预饲1周后，空白组饲喂普通饲料并灌胃生理盐水，高脂模型组饲喂高脂饲料并灌胃生理盐水，实验组一饲喂高脂饲料并给予实施例1做的茶油，每天每千克体重饲喂量为2.7克(2.7g/kgBW d)，实验组二饲喂高脂饲料并给予对比例11所得茶油(2.7g/kgBW d)，每天上午8～10点灌胃一次，实验期间各组小鼠自由饮水和进食，持续饲养并灌胃30d，末次灌胃禁食12h，实验结束时，眼球采血，离心取血清，采用全自动生化分析仪检测血清中总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇和高密度蛋白胆固醇含量。

实验结果：血清中甘油三酯、胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇增高与动脉粥样硬化性心血管疾病风险密切相关，数值越高，风险也越高。高密度脂蛋白胆固醇是一种“好”胆固醇，是一种抗动脉粥样硬化的胆固醇，因为其可减少患冠状动脉心脏病的危险。检测结果如表2所示，与模型组和实验组二相比，实验组一的甘油三酯、总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇含量较低，高密度脂蛋白胆固醇较高，且接近空白组水平(健康小鼠)。因此本发明方法制备的山茶油较于直接添加的甾醇酯茶油能更有效地降低甘油三酯、总胆固醇和低密度脂蛋白水平，还能显著提高高密度脂蛋白胆固醇水平，调节血脂处于较为健康水平。

表2不同组高血脂指标测定结果

实施例7皮肤皲裂修复实验

实验材料：成年SD(Sprague-Dawley)大鼠，雄性，180g～200g、购于上海斯莱克实验动物责任有限公司。

实验方法：取大鼠27只为实验对象，适应性饲养一周后，随机选取3只作为空白组，对大鼠背部脊椎两侧对称脱毛作为对照，不做任何处理；其余24只大鼠进行建模，即分别对大鼠背部脊椎两侧对称脱毛，然后用饱和碳酸氢钠擦拭背部裸露皮肤，用冷风吹10min，每天5次，连续一周后直至皲裂出现，固定选取每只大鼠皮肤皲裂面积1cm2(长宽各1cm正方形区域)作为实验区域，建模成功。建模成功后后将大鼠随机分成三组，每组8只，三组分别为模型组、实验组一和实验组二，模型组大鼠皲裂皮肤擦拭生理盐水，实验组一大鼠皲裂皮肤擦拭实施例1所得的茶油，实验组二大鼠皲裂皮肤擦拭对比例11所得的茶油，连续擦拭，每天上午8:00和下午5:00各擦拭1次，持续用药直至完全恢复，并统计恢复所需时间。

实验结果：本实施例对比了实施例1和对比例11(直接添加甾醇酯制得的甾醇酯山茶油)的保湿护肤功效，由表3数据显示使用实施例1所得的茶油皮肤皲裂大约需要7.3天即能恢复，恢复时间明显短于实验组二和模型组，说明本专利获得的茶油相较于外源添加甾醇酯的茶油具有更好的促皮肤皲裂修复的效果。

表3不同组皮肤皲裂恢复所需时间结果

分组	皮肤皲裂恢复时间(天)
		实验组一	7.3±0.9
实验组二	11.4±1.3
		模型组	25.4±5.3

上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

Claims (6)

1.一种含甾醇酯的山茶油制备方法，该方法包括如下步骤：

S1.山茶油中加入水，乳化，得到山茶油乳液；

S2.向所得乳液中加入可产脂肪酶的菌种进行接种发酵，使得山茶油中脂肪降解为游离脂肪酸，发酵完成后，油水分离；

S3.向S2.分离得到的油中加入植物甾醇，分散均匀，得到山茶油甾醇分散液；

S4.先取200 ml山茶油甾醇分散液加入促进甾醇转化为甾醇酯的脂肪酶，进行第一次酶合成反应，再流加400 ml的山茶油甾醇分散液，进行第二次酶合成反应，流加时间控制在0.5~1 h，使得山茶油中甾醇转化为甾醇酯；

S5.合成结束后，去除不溶解的甾醇，即得含甾醇酯的山茶油；

步骤S2中，所述发酵条件为：菌种接种量为0.1~10 g/100ml ，发酵温度为25~40℃，发酵时间为0.5~2h；所述油水分离采用离心方式进行，离心速度不低于5000rpm

步骤S2中，所述可产脂肪酶的菌种为黑曲霉菌、荧光假单胞菌、白地霉无根根霉菌、毛霉圆柱假丝酵母菌的一种或任意组合；

步骤S4中，所述促进甾醇转化为甾醇酯的脂肪酶相对于山茶油甾醇分散液体积的添加量为0.1~10 g/100ml；

步骤S4中，所述酶合成反应条件为：温度为30~100℃，搅拌速度为50~600rpm；

步骤S4中，所述第一次酶合成的时间为0.5~3h。

2.根据权利要求1所述的含甾醇酯的山茶油制备方法，其特征在于，步骤S1中，所述山茶油与水的体积比为1:5~5:1。

3.根据权利要求1所述的含甾醇酯的山茶油制备方法，其特征在于，步骤S1中，所述乳化方式为剪切乳化，剪切速度不低于100 rpm。

4.根据权利要求1所述的含甾醇酯的山茶油制备方法，其特征在于，步骤S3中，所述植物甾醇的添加量为S2.分离得到的油的体积的0.1%~10%。

5.根据权利要求1所述的含甾醇酯的山茶油制备方法，其特征在于，步骤S3中，所述分散为超声分散。

6.根据权利要求1-5任一项所述制备方法制备得到的山茶油。