CN114190478A - 一种用于诱导肥胖和非酒精性脂肪肝模型的高脂饲料及其生产工艺 - Google Patents

一种用于诱导肥胖和非酒精性脂肪肝模型的高脂饲料及其生产工艺 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种用于诱导肥胖和非酒精性脂肪肝模型的高脂饲料及其生产工艺，所述高脂饲料由猪油，酪蛋白，麦芽糊精，蔗糖，果糖，纤维素，L‑胱氨酸，蛋氨酸，大豆油，柠檬酸钾，磷酸氢钙，碳酸钙，酒石酸胆碱，维生素混合物，矿物质混合物组成；该饲料接近于人类的饮食模式，诱导的肥胖动物模型重复率高，肥胖及脂肪肝表征显著，并且其生产工艺成熟，成本低，可以大规模推广。

Description

一种用于诱导肥胖和非酒精性脂肪肝模型的高脂饲料及其生 产工艺
技术领域
本发明属于动物实验功能饲料领域，具体涉及一种用于诱导肥胖和非酒精性脂肪肝模型的高脂饲料及其生产工艺。
背景技术
随着经济和生产力的快速发展和提高，人民的生活水平也不断提高。日常饮食由早期以碳水化合物为主转变为高脂肪高蛋白为主。而工业化程度的加深也进一步减少了体力劳动。过高的脂肪摄入和体力劳动的减少造成现今社会中肥胖的高发现象。《中国居民营养与慢性疾病状况报告(2020年)》显示：我国成年居民超重肥胖超过50％，6至17岁儿童青少年近20％，6岁以下的儿童达10％。
肥胖对对人类健康构成了不可忽视的威胁，肥胖与冠心病、高血压、2型糖尿病、癌症等多种疾病的进展密切相关。建立肥胖动物模型对研究肥胖生理机制、相关疾病的发病机制、开发减肥药物有着重要意义。目前常见的动物肥胖模型主要有:下丘脑型(谷氨酸钠或金硫葡萄糖)、内分泌型(去卵巢、注射胰岛素)、遗传型和药源型(奥氮平)。以上模型虽能有效建立肥胖表征，但不能很好模拟实际肥胖发生状况。饮食中高脂高能量是肥胖流行的根源，目前还缺乏用于诱导肥胖和非酒精性脂肪肝模型的高脂饲料。
发明内容
针对上述情况，本发明公开了一种用于诱导肥胖和非酒精性脂肪肝模型的高脂饲料及其生产工艺，该饲料接近于人类的饮食模式，诱导的肥胖动物模型重复率高，肥胖及脂肪肝表征显著，并且其生产工艺成熟，成本低，可以大规模推广。
本发明的技术方案如下：
一种用于诱导肥胖和非酒精性脂肪肝模型的高脂饲料，由以下原料组成：
猪油，酪蛋白，麦芽糊精，蔗糖，果糖，纤维素，L-胱氨酸，蛋氨酸，大豆油，柠檬酸钾，磷酸氢钙，碳酸钙，酒石酸胆碱，维生素混合物，矿物质混合物。
进一步的，上述一种用于诱导肥胖和非酒精性脂肪肝模型的高脂饲料，由以下重量份的原料组成：
猪油25-35份，酪蛋白20-30份，麦芽糊精10-20份，蔗糖8-12份，果糖1-3份，纤维素5-9份，L-胱氨酸2-6份，蛋氨酸0.2-0.4份，大豆油2-5份，柠檬酸钾1-3份，磷酸氢钙1-2份，碳酸钙0.5-1份，酒石酸胆碱0,1-0.4份，维生素混合物1-1.5份，矿物质混合物1-1.5份。
进一步的，上述一种用于诱导肥胖和非酒精性脂肪肝模型的高脂饲料，由以下重量份的原料组成：
猪油31.66份，酪蛋白24.55份，麦芽糊精15.15份，蔗糖8.89份，果糖2份，纤维素6.46份，L-胱氨酸3.9份，蛋氨酸0.3份，大豆油3.23份，柠檬酸钾2.13份，磷酸氢钙1.68份，碳酸钙0.71份，酒石酸胆碱0.26份，维生素混合物1.29份，矿物质混合物1.29份。
进一步的，上述一种用于诱导肥胖和非酒精性脂肪肝模型的高脂饲料，所述维生素混合物由以下重量份原料组成：
维生素A醋酸酯0.08份，维生素D30.15份，维生素E醋酸酯1.2份，亚硫酸氢钠甲萘醌0.008份，生物素0.2份，氰钴胺0.1份，叶酸0.02份，烟酸0.3份，泛酸钙0.16份，盐酸吡哆醇0.07份，核黄素0.06份，盐酸硫胺素0.06份，蔗糖97.59份。
进一步的，上述一种用于诱导肥胖和非酒精性脂肪肝模型的高脂饲料，所述矿物混合物由以下重量份原料组成：
氯化钠24.9份，重氧化镁3.99份，七水硫酸镁24.56份，四水合钼酸铵0.03份，硫酸铬钾0.19份，碳酸铜0.1份，柠檬酸铁2.1份，碳酸锰水合物1.22份，碘酸钾0.0035份，氟化钠0.02份，亚硒酸钠0.0035份，碳酸锌0.56份，蔗糖37.91份。
进一步的，上述一种用于诱导肥胖和非酒精性脂肪肝模型的高脂饲料的生产工艺，包括以下步骤：
(1)根据配方依次添加相应原料于混合机内混合；
(2)将混合好的饲料转移至高速粉碎机内粉碎；
(3)将粉碎后饲料用模具压制成形；
(4)将制备颗粒料于-20℃冷冻12h。
进一步的，上述一种用于诱导肥胖和非酒精性脂肪肝模型的高脂饲料的生产工艺，所述步骤(2)中，粉碎转速需达到30000r/min以上，粉碎时间3分钟以上。
进一步的，上述一种用于诱导肥胖和非酒精性脂肪肝模型的高脂饲料的生产工艺，配方中猪油和大豆油称重后应加热至180℃，随后冷却至80℃后添加于步骤(1)中。
从上述技术方案可以得出，本发明公开的一种用于诱导肥胖和非酒精性脂肪肝模型的高脂饲料及其生产工艺具有如下有益效果:
1、该饲料成分明确，原料易得，成本低，接近于人类的饮食模式，诱导的肥胖动物模型重复率高，肥胖及脂肪肝表征显著。
2、用本发明所涉及的高脂饲料诱导的肥胖小鼠模型能呈现明显的肥胖和脂肪肝表征，体重、腹脂率极显著高于低脂组，且出现明显高血脂症症状，肝脏出现明显脂肪沉积及变性。
附图说明
附图1高脂饲料诱导的肥胖小鼠与对照组小鼠的肝脏病理学切片对比；
附图2高脂饲料诱导的肥胖小鼠与对照组小鼠的腹脂切片HE染色对比。
具体实施方式
下面对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本发明保护的范围。
本发明实施例中使用的试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规试剂产品。
实施例1
制备例
一种用于诱导肥胖和非酒精性脂肪肝模型的高脂饲料，由以下重量份的原料组成：
猪油31.66份，酪蛋白24.55份，麦芽糊精15.15份，蔗糖8.89份，果糖2份，纤维素6.46份，L-胱氨酸3.9份，蛋氨酸0.3份，大豆油3.23份，柠檬酸钾2.13份，磷酸氢钙1.68份，碳酸钙0.71份，酒石酸胆碱0.26份，维生素混合物1.29份，矿物质混合物1.29份；
所述维生素混合物由以下重量份原料组成：
维生素A醋酸酯0.08份，维生素D30.15份，维生素E醋酸酯1.2份，亚硫酸氢钠甲萘醌0.008份，生物素0.2份，氰钴胺0.1份，叶酸0.02份，烟酸0.3份，泛酸钙0.16份，盐酸吡哆醇0.07份，核黄素0.06份，盐酸硫胺素0.06份，蔗糖97.59份；
所述矿物混合物由以下重量份原料组成：
氯化钠24.9份，重氧化镁3.99份，七水硫酸镁24.56份，四水合钼酸铵0.03份，硫酸铬钾0.19份，碳酸铜0.1份，柠檬酸铁2.1份，碳酸锰水合物1.22份，碘酸钾0.0035份，氟化钠0.02份，亚硒酸钠0.0035份，碳酸锌0.56份，蔗糖37.91份。
其生产工艺包括以下步骤：
(1)根据配方依次添加相应原料于混合机内混合；
(2)将混合好的饲料转移至高速粉碎机内粉碎；
(3)将粉碎后饲料用模具压制成形；
(4)将制备颗粒料于-20℃冷冻12h。
其中：所述步骤(2)中，粉碎转速需达到30000r/min以上，粉碎时间3分钟以上；
其中：配方中猪油和大豆油称重后应加热至180℃，随后冷却至80℃后添加于步骤(1)中。
实施例2
实验例
采用本发明所涉及高脂饲料诱导小鼠肥胖及脂肪肝的验证试验数据如下：
(1)试验设计
选取6周龄左右的C57BL/6J小鼠32只，预饲7日后将小鼠随机分为2组，每组16个重复，保证组间体重没有显著差异(ANOVA分析)。对照组饲喂低脂饲料、诱导组饲喂实施例1中制备的高脂饲料，饲养试验期为12周，试验期间保证自由采食与饮水，保持室温恒温(23℃)，单笼饲养。试验期间，每3天称重一次、更换垫料一次、更换饮用水一次，每天记录小鼠的采食量。
(对照低脂饲料配方：玉米淀粉47.68份，酪蛋白18.96份，麦芽糊精11.85份，蔗糖6.02份，果糖0.5份，纤维素4.74份，大豆油2.37份，猪油1.9份，柠檬酸钾1.56份，磷酸氢钙1.23份，L-胱氨酸0.28份，蛋氨酸0.3份，碳酸钙0.52份，酒石酸胆碱0.19份，维生素混合物0.95份，矿物混合物0.95份。
其中，维生素混合物配方如下：维生素A醋酸酯0.08份，维生素D30.15份，维生素E醋酸酯1.2份，亚硫酸氢钠甲萘醌0.008份，生物素0.2份，氰钴胺0.1份，叶酸0.02份，烟酸0.3份，泛酸钙0.16份，盐酸吡哆醇0.07份，核黄素0.06份，盐酸硫胺素0.06份，蔗糖97.59份。
其中，矿物混合物配方如下：氯化钠24.9份，重氧化镁3.99份，七水硫酸镁24.56份，四水合钼酸铵0.03份，硫酸铬钾0.19份，碳酸铜0.1份，柠檬酸铁2.1份，碳酸锰水合物1.22份，碘酸钾0.0035份，氟化钠0.02份，亚硒酸钠0.0035份，碳酸锌0.56份，蔗糖37.91份。)
(2)样本采集与检测
试验结束时将小鼠饥饿过夜，记录小鼠空腹体重，麻醉后用1.5ml离心管收集小鼠血液，于室温静置30分钟后离心(3000g)取血清，利用全自动生化仪检测血清中总胆固醇、总甘油三酯、高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、谷丙转氨酶等与肥胖和脂肪肝相关的指标。此外，取小鼠肝脏进行切片，HE染色和油红O染色判定小鼠脂肪肝情况。
(3)试验结果
饲喂12周后各组小鼠的体重如表1所示，采用高脂饲料饲喂12周后，小鼠体重极显著高于低脂饲料饲喂的小鼠体重(P<0.01)，腹脂率极显著高于低脂饲料饲喂小鼠体重(P<0.01)。
表1高脂诱导的肥胖小鼠体重腹脂率
Figure BDA0003406649630000051
与肥胖和脂肪肝相关的小鼠血清生化指标如表2所示，采用高脂饲料饲喂12周后，小鼠血清甘油三脂，总胆固醇极显著高于低脂饲料组小鼠(P<0.01)；谷丙转氨酶，谷草转氨酶极显著高于低脂饲料组小鼠(P<0.01)；低密度脂蛋白极显著高于低脂饲料组小鼠(P<0.01)。
表2高脂诱导的肥胖小鼠血清生化指标
Figure BDA0003406649630000061
各组小鼠的肝脏病理学切片和腹部脂肪切片结果分别如附图1和附图2所示。由附图1可得，高脂饲料饲喂12周的小鼠与低脂饲料组小鼠相比，肝脏明显表现出脂肪变性，特别是肝叶周围；油红O染色结果表明与低脂饲料组小鼠相比，高脂饲料饲喂小鼠肝脏出现明显的脂肪沉积和脂肪泡，表现出典型的脂肪肝特征。
由附图2可得，采用高脂饲料饲喂12周后小鼠与低脂饲料组小鼠相比，腹部脂肪细胞明显肥大，表现出典型的肥胖特征。
以上结果表明，采用本发明所涉及的高脂饲料诱导的肥胖小鼠模型能呈现明显的肥胖和脂肪肝表征，体重、腹脂率极显著高于低脂组，且出现明显高血脂症症状，肝脏出现明显脂肪沉积及变性。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。

Claims (8)

1.一种用于诱导肥胖和非酒精性脂肪肝模型的高脂饲料，其特征在于，由以下原料组成：
猪油，酪蛋白，麦芽糊精，蔗糖，果糖，纤维素，L-胱氨酸，蛋氨酸，大豆油，柠檬酸钾，磷酸氢钙，碳酸钙，酒石酸胆碱，维生素混合物，矿物质混合物。
2.根据权利要求1所述的一种用于诱导肥胖和非酒精性脂肪肝模型的高脂饲料，其特征在于，由以下重量份的原料组成：
猪油25-35份，酪蛋白20-30份，麦芽糊精10-20份，蔗糖8-12份，果糖1-3份，纤维素5-9份，L-胱氨酸2-6份，蛋氨酸0.2-0.4份，大豆油2-5份，柠檬酸钾1-3份，磷酸氢钙1-2份，碳酸钙0.5-1份，酒石酸胆碱0,1-0.4份，维生素混合物1-1.5份，矿物质混合物1-1.5份。
3.根据权利要求1所述的一种用于诱导肥胖和非酒精性脂肪肝模型的高脂饲料，其特征在于，由以下重量份的原料组成：
猪油31.66份，酪蛋白24.55份，麦芽糊精15.15份，蔗糖8.89份，果糖2份，纤维素6.46份，L-胱氨酸3.9份，蛋氨酸0.3份，大豆油3.23份，柠檬酸钾2.13份，磷酸氢钙1.68份，碳酸钙0.71份，酒石酸胆碱0.26份，维生素混合物1.29份，矿物质混合物1.29份。
4.根据权利要求1所述的一种用于诱导肥胖和非酒精性脂肪肝模型的高脂饲料，其特征在于，所述维生素混合物由以下重量份原料组成：
维生素A醋酸酯0.08份，维生素D30.15份，维生素E醋酸酯1.2份，亚硫酸氢钠甲萘醌0.008份，生物素0.2份，氰钴胺0.1份，叶酸0.02份，烟酸0.3份，泛酸钙0.16份，盐酸吡哆醇0.07份，核黄素0.06份，盐酸硫胺素0.06份，蔗糖97.59份。
5.根据权利要求1所述的一种用于诱导肥胖和非酒精性脂肪肝模型的高脂饲料，其特征在于，所述矿物混合物由以下重量份原料组成：
氯化钠24.9份，重氧化镁3.99份，七水硫酸镁24.56份，四水合钼酸铵0.03份，硫酸铬钾0.19份，碳酸铜0.1份，柠檬酸铁2.1份，碳酸锰水合物1.22份，碘酸钾0.0035份，氟化钠0.02份，亚硒酸钠0.0035份，碳酸锌0.56份，蔗糖37.91份。
6.如权利要求1-5任一项所述的用于诱导肥胖和非酒精性脂肪肝模型的高脂饲料的生产工艺，其特征在于，包括以下步骤：
(1)根据配方依次添加相应原料于混合机内混合；
(2)将混合好的饲料转移至高速粉碎机内粉碎；
(3)将粉碎后饲料用模具压制成形；
(4)将制备颗粒料于-20℃冷冻12h。
7.根据权利要求6所述的于诱导肥胖和非酒精性脂肪肝模型的高脂饲料的生产工艺，其特征在于，所述步骤(2)中，粉碎转速需达到30000r/min以上，粉碎时间3分钟以上。
8.根据权利要求6所述的于诱导肥胖和非酒精性脂肪肝模型的高脂饲料的生产工艺，其特征在于，配方中猪油和大豆油称重后应加热至180℃，随后冷却至80℃后添加于步骤(1)中。
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