CN114173811A - P2x7受体靶向治疗 - Google Patents

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罗曼·拉拉
克里斯·奥利芬特
西蒙·吉尔伯特
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Biosceptre Ausi Pty Ltd
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Abstract

本发明涉及治疗癌症，特别是对化学治疗剂产生抗性的癌症的方法。特别地，本发明涉及在不响应于或不再响应于化学治疗的个体中治疗癌症的方法，所述方法包括以下从而在个体中治疗癌症：提供不响应于或不再响应于化学治疗剂的个体；在个体中提供完整抗体或其包含用于与该个体表达的P2X7受体结合的可变结构域的片段；其中所述P2X7受体对ATP的响应受损，使得其在正常生理条件下不能形成凋亡孔。

Description

P2X7受体靶向治疗
技术领域
本发明涉及治疗癌症，特别是对化学治疗剂产生抗性的癌症的方法。
早期申请的交叉引用
本申请要求来自澳大利亚临时申请no.2019902672的优先权，其全部内容通过引用整体并入。
背景技术
尽管用于治疗癌症的治疗有所改进，但全世界的癌症死亡率仍然很高，并且仍然需要预防癌症复发的策略。目前针对癌症的治疗策略经常导致治疗失败，这通常是由于多种恶性肿瘤的发展和/或对化学治疗和放射治疗的抗性。
化学抗性的发展是化学治疗期间的一个长期问题。例如，急性髓性白血病(acutemyeloid leukemia，AML)的常规治疗包括组合施用阿糖胞苷(cytarabine)和蒽环素(anthracycline)，例如柔红霉素(daunorubicin)。5年总存活率在年轻成年人中为40％，而对于老年患者为约10％。响应率随着年龄的增长而显著变化，从年长于60岁患者中的40％至55％到年长于70岁患者中的24％至33％。这些数据强调了需要新方法来降低治疗化学敏感肿瘤的抗肿瘤药剂的剂量方案以及绕过化学抗性肿瘤对抗肿瘤药剂的抗性。
已经提出了多种假设来解释化学抗性现象。假设包括改变药物跨质膜的转运、遗传响应、增强的DNA修复、靶分子的改变、进入靶细胞、代谢效应和生长因子。最近，已经确定了癌细胞表面上的主动地将化学治疗药物从细胞内部移动至外部的小泵。目前正在进行对p-糖蛋白和其他这样的化学治疗外排泵的研究。已经探索了抑制p-糖蛋白功能的药物以增强化学治疗的效力。然而，这种方法在临床评价期间未成功。然而，人们越来越认识到，化学抗性和复发的原因存在于少数细胞中，所述细胞经历了进一步的突变，作为作用于癌症的转化过程的一部分。
最近在了解克隆进化在肿瘤发生中的作用方面的复兴阐明了获得性抗性的难题，并产生了两种主要的肿瘤发生模型——癌症干细胞和克隆进化模型。这些不一定是相互排斥的，而是可以是互补的。二者都表明，持久治愈的主要障碍是癌症异质性。然而，现有的抗癌治疗在很大程度上无法解释这任一模型。靶向治疗的最新进展是有前景的，但由于癌症异质性和进化存在多个移动靶标，因此抗性的产生很常见。遗憾的是，在靶向导致复发的化学抗性细胞方面进展甚微。
需要新的和/或改进的癌症治疗方案，并且特别是克服癌细胞的化学抗性或提高癌细胞对非靶向治疗例如化学治疗和/或放射治疗的敏感性的治疗。
在说明书中对任何现有技术的引用并不是承认或表明该现有技术构成任何管辖权内的一般常识的一部分或者该现有技术可被合理地预期被本领域技术人员理解、认为与其他现有技术相关和/或与其组合。
发明内容
在一个方面中，本发明提供了在不响应于或不再响应于化学治疗和/或放射治疗的个体中治疗癌症的方法，所述方法包括以下从而在个体中治疗癌症：
-提供不响应于或不再响应于化学治疗剂和/或放射治疗的个体；
-向个体施用P2X7受体靶向治疗；
其中P2X7受体对ATP的响应受损，使得其在正常生理条件下不能形成凋亡孔。
在本发明的任何方面中，个体不再响应于选自以下的一种或更多种化学治疗剂：氧氮磷杂环己烷(oxazaphosphorine)、拓扑异构酶I抑制剂、拓扑异构酶II抑制剂、胸苷酸合酶抑制剂、蛋白酶体抑制剂、抗叶酸剂、氮芥、乙烯亚胺衍生物、烷基磺酸盐、亚硝基脲、三氮烯、叶酸类似物、蒽环素、紫杉烷、COX-2抑制剂、嘧啶类似物、嘌呤类似物、嘌呤拮抗剂、抗代谢物、抗生素、表鬼臼毒素、基于铂的药剂、核糖核苷酸还原酶抑制剂、长春花生物碱、取代脲、肼衍生物、肾上腺皮质抑制剂、内皮抑素、喜树碱、奥沙利铂(oxaliplatin)、多柔比星(doxorubicin)和多柔比星类似物、抗生素、L-天冬酰胺酶、酪氨酸激酶抑制剂、或其衍生物或变体。
优选地，一种或更多种化学治疗剂选自多柔比星、顺铂、长春新碱(vincristine)、达卡巴嗪(dacarbazine)(DTIC)、环磷酰胺、CPT-11、奥沙利铂、吉西他滨(gemcitabine)和5-氟尿嘧啶/亚叶酸。
或者，一种或更多种化学治疗剂选自5FU、亚叶酸、博来霉素(Bleomycin)、依托泊苷(Etoposide)、顺铂(Cisplatin)、卡培他滨(Capecitabin)、奥沙利铂、达卡巴嗪、环磷酰胺、长春新碱、多柔比星、伊立替康(Irinotecan)、吉西他滨、丝裂霉素-C、吉西他滨、卡铂(Carboplatin)、紫杉醇(Paclitaxel)、培美曲塞(pemetrexed)、羟乙基-氯乙基亚硝基脲(hydroxyethyl-chloroethyl nitrosourea，HeCNU)、他莫昔芬(Tamoxifen)、甲氨蝶呤、表柔比星(Epirubicin)、长春地辛(Vindesine)、埃罗替尼(Erlotinib)、贝伐单抗(Bevacizumab)、西妥昔单抗(Cetuximab)。
在本发明的任何方面中，个体患有如本文中所述的任何癌症。优选地，癌症选自结直肠癌、睾丸癌、肉瘤、黑色瘤、膀胱癌、胰腺癌、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、卵巢癌和乳腺癌。
在本发明的任何方面中，个体患有结肠癌。
在本发明的任何方面中，个体患有卵巢癌。
在任何方面中，P2X7受体靶向治疗导致表达P2X7受体的癌细胞的生存力降低，所述P2X7受体对ATP的响应受损，使得其在正常生理条件下不能形成凋亡孔。P2X7受体靶向治疗可以是P2X7受体活性或表达水平的直接或间接抑制剂，其中P2X7受体对ATP的响应受损，使得其在正常生理条件下不能形成凋亡孔。例如，抑制剂可以是能够在癌细胞中降低P2X7受体水平的干扰RNA。
P2X7受体抑制剂可选自小分子、抗体、肽或干扰RNA。
在任何方面中，P2X7受体抑制剂可以是在个体中诱导针对由个体表达的P2X7受体，优选在癌细胞上表达的P2X7受体的免疫应答的分子。
在另一个方面中，本发明提供了在不响应于或不再响应于化学治疗和/或放射治疗的个体中治疗癌症的方法，所述方法包括以下从而在个体中治疗癌症：
-提供不响应于或不再响应于化学治疗剂和/或放射治疗的个体；
-在个体中提供完整抗体或其包含用于与个体表达的P2X7受体结合的可变结构域的片段；
其中P2X7受体对ATP的响应受损，使得其在正常生理条件下不能形成凋亡孔。
在任何方面中，向个体施用P2X7受体靶向治疗包括在个体中提供完整抗体或其包含用于与个体表达的P2X7受体结合的可变结构域的片段，其中P2X7受体对ATP的响应受损，使得其在正常生理条件下不能形成凋亡孔。
在本发明的任何方面中，抗体片段选自dAb、Fab、Fd、Fv、F(ab’)2、scFv或本文中所述的任何其他抗体片段形式。
在本发明的任何方面中，抗体或其片段不与功能性P2X7受体(即，对ATP的响应没有受损并因此能够在正常生理条件下形成凋亡孔的P2X7受体)结合。优选地，所述抗体或其片段与如SEQ ID NO：1至11，更优选SEQ ID NO：2至5中任一项所示的氨基酸序列结合。
在本发明的任何方面中，抗体或其片段包含以下中所述的任意抗体的氨基酸序列：PCT/AU2002/000061或PCT/AU2002/001204(或在相应的美国专利US 7,326,415、US 7,888,473、US 7,531,171、US 8,080,635、US 8,399,617、US 8,709,425、US 9,663,584或US10,450,380中的任一个中)，PCT/AU2007/001540(或在相应的美国专利US 8,067,550中)、PCT/AU2007/001541(或在相应的美国公开US 2010-0036101中)、PCT/AU2008/001364(或在相应的美国专利US 8,440,186、US 9,181,320、US 9,944,701或US 10,597,451中的任一个中)、PCT/AU2008/001365(或在相应的美国专利US 8,293,491或US 8,658,385中的任一个中)、PCT/AU2009/000869(或在相应的美国专利US 8,597,643、US 9,328,155或US 10,238,716中的任一个中)和PCT/AU2010/001070(或在相应的美国专利US 9,127,059、US 9,688,771或US 10,053,508中的任一个中)，其全部内容通过引用并入于此。优选地，该抗体包含以下的CDR氨基酸序列：PCT/AU2010/001070(或在相应的美国专利US 9,127,059、US 9,688,771或US 10,053,508中的任一个中)中所述的2-2-1，或者PCT/AU2007/001541(或在相应的美国公开US 2010-0036101)中所述并且由以登录no.06080101保藏在欧洲培养物保藏中心(European Collection of Cultures，ECACC)的杂交瘤AB253产生的BPM09。
在另一个方面中，本发明提供了在不响应于或不再响应于化学治疗和/或放射治疗的个体中治疗癌症的方法，所述方法包括以下从而在个体中治疗癌症：
-提供不响应于或不再响应于化学治疗剂和/或放射治疗的个体；
-在个体中提供靶向P2X7受体表达癌细胞的基于细胞的治疗；
-其中P2X7受体对ATP的响应受损，使得其在正常生理条件下不能形成凋亡孔。
在任何方面中，靶向P2X7受体表达癌细胞的基于细胞的治疗可以是具有与P2X7受体表达癌细胞结合的能力的细胞毒性细胞，例如CAR-T细胞。
在这方面，细胞毒性细胞，优选CAR-T细胞，表达包含抗原识别结构域和信号传导结构域的嵌合抗原受体，其中抗原识别结构域识别功能失调或无功能P2X7受体(即P2X7受体对ATP的响应受损，使得其在正常生理条件下不能形成凋亡孔)。通常来说，与野生型(功能性)P2X7受体的ATP结合能力相比，功能失调或无功能P2X7受体结合ATP的能力降低。功能失调或无功能P2X7受体可能具有使受体功能失调或无功能的构象变化。
在这方面，抗原识别结构域可识别包含P2X7受体的第210位氨基酸处的脯氨酸的表位。
在这方面，抗原识别结构域可识别包含从功能失调P2X7受体的第200位氨基酸甘氨酸跨至第216位氨基酸半胱氨酸的一个或更多个氨基酸残基的表位。
在这方面，抗原识别结构域可以与和功能失调或无功能P2X7受体结合的抗体或其片段(包括本文中所述的任何抗体或其片段)具有氨基酸序列同源性。
在这方面，抗原识别结构域可以与和功能失调或无功能P2X7受体结合的抗体的片段抗原结合(fragment-antigen binding，Fab)部分、单链可变片段(single-chainvariable fragment，scFv)或单抗体结构域(dAb)具有氨基酸序列同源性。
在这方面，抗原识别结构域可以与和功能失调或无功能P2X7受体结合的多价单链可变片段(scFv)具有氨基酸序列同源性。多价单链可变片段(scFv)可以是二价或三价scFv。
在这方面，信号传导结构域可包含来源于激活受体的部分。通常来说，激活受体是CD3共受体复合物的成员。优选地，来源于CD3共受体复合物的部分是CD3-ζ。或者，激活受体是Fc受体，并随后优选地来源于Fc受体的部分是FcεRI或FcγRI。
在这方面，信号传导结构域可包含来源于共刺激受体的部分。
在这方面，信号传导结构域可包含来源于激活受体的部分和来源于共刺激受体的部分。
在这方面，共刺激受体可选自CD27、CD28、CD30、CD40、DAP10、OX40、4-1BB(CD137)和ICOS。
在这方面，细胞毒性细胞是任何以下细胞：
·白细胞，
·外周血单个核细胞(Peripheral Blood Mononuclear Cell，PBMC)，
·淋巴细胞，
·T细胞，
·CD4+T细胞，
·CD8+T细胞，
·自然杀伤细胞，或
·自然杀伤T细胞。
在另一个方面中，本发明还提供了在不响应于或不再响应于化学治疗和/或放射治疗的个体中治疗癌症的方法，所述方法包括以下从而在个体中治疗癌症：
-提供不响应于或不再响应于化学治疗和/或放射治疗的个体；
-在个体中形成针对由个体表达的P2X7受体的免疫应答；
其中P2X7受体对ATP的响应受损，使得其在正常生理条件下不能形成凋亡孔。
在本发明的任何方面中，免疫应答通过在个体中提供免疫原来形成，所述免疫原形式为P2X7受体，或能够在个体中诱导针对P2X7受体的免疫应答的P2X7受体片段，其中P2X7受体对ATP的响应受损，使得其在正常生理条件下不能形成凋亡孔。优选地，P2X7受体片段具有选自SEQ ID NO：1至11的氨基酸序列。更优选地，SEQ ID NO：2至5。
免疫原可包含能够呈递在主要组织相容性复合体II类分子上和/或能够与T或B细胞受体或B细胞膜结合免疫球蛋白相互作用的至少一个序列。
根据本发明，个体是人，在这种情况下，免疫原以人P2X7受体或其能够诱导针对P2X7受体的免疫应答的片段的形式提供。
通常来说，在个体中形成的免疫应答对P2X7受体具有特异性，该P2X7受体对ATP的响应受损，使得其在正常生理条件下不能形成凋亡孔。在这种情况下，与非功能性P2X7受体(即与不能结合ATP的一个或更多个位点)反应但不与功能性P2X7受体(即ATP结合受体)反应的抗体或细胞组分在个体中形成。
在本发明的任何方面中，免疫原在对所述个体的初始施用中提供，从而在个体中形成包括IgM产生的应答。
在本发明的任何方面中，免疫原在对所述个体的初始施用中提供，从而形成包括IgM产生的应答，并且在随后的时间，在初始施用之外的进一步施用中提供，从而形成包括IgG产生的应答。
免疫应答可以是体液和/或细胞应答。
体液应答可包括B细胞转化成浆细胞，浆细胞分泌抗体、Th2激活和细胞因子产生、生发中心形成和同种型转换、B细胞亲和力成熟和/或记忆细胞产生。
细胞应答可包括活化抗原特异性细胞毒性T淋巴细胞、活化巨噬细胞和自然杀伤细胞和/或刺激细胞以分泌细胞因子。
在个体中形成的体液和/或细胞应答可在个体中治疗或减轻癌症，或在个体中使癌症进展最小化。
在另一个方面中，本发明还提供了在个体中治疗癌症的方法，所述方法包括以下从而在个体中治疗癌症：
-向待治疗癌症的个体施用化学治疗剂和/或放射治疗；以及
-向个体施用完整抗体或其包含用于与个体表达的P2X7受体结合的可变结构域的片段；
其中P2X7受体对ATP的响应受损，使得其在正常生理条件下不能形成凋亡孔。
在另一个方面中，本发明还提供了在个体中治疗癌症的方法，所述方法包括以下从而在个体中治疗癌症：
-提供响应于化学治疗和/或放射治疗的个体；以及
-向个体施用完整抗体或其包含用于与个体表达的P2X7受体结合的可变结构域的片段；
其中P2X7受体对ATP的响应受损，使得其在正常生理条件下不能形成凋亡孔。
在本方面中，化学治疗剂和/或放射治疗可以与抗体或其片段同时施用。在一个实施方案中，化学治疗与抗体或其片段同时施用。在另一个实施方案中，放射治疗与抗体或其片段同时施用。
在本方面中，化学治疗剂和/或放射治疗可以与抗体或其片段顺序施用。
在本方面中，化学治疗剂可以在抗体或其片段之前施用。
在本方面中，化学治疗剂可以是本文中所述的任一种。优选地，化学治疗剂选自氧氮磷杂环己烷、拓扑异构酶I抑制剂、拓扑异构酶II抑制剂、胸苷酸合酶抑制剂、蛋白酶体抑制剂、抗叶酸剂、氮芥、乙烯亚胺衍生物、烷基磺酸盐、亚硝基脲、三氮烯、叶酸类似物、蒽环素、紫杉烷、COX-2抑制剂、嘧啶类似物、嘌呤类似物、嘌呤拮抗剂、抗代谢物、抗生素、表鬼臼毒素、基于铂的药剂、核糖核苷酸还原酶抑制剂、长春花生物碱、取代脲、肼衍生物、肾上腺皮质抑制剂、内皮抑素、喜树碱、奥沙利铂、多柔比星和多柔比星类似物、抗生素、L-天冬酰胺酶、酪氨酸激酶抑制剂、或其衍生物或变体。
优选地，化学治疗剂选自多柔比星、顺铂、长春新碱、达卡巴嗪(DTIC)、环磷酰胺、CPT-11、奥沙利铂、吉西他滨和5-氟尿嘧啶/亚叶酸。
或者，化学治疗剂选自5FU、亚叶酸、博来霉素、依托泊苷、顺铂、卡培他滨、奥沙利铂、达卡巴嗪、环磷酰胺、长春新碱、多柔比星、伊立替康、吉西他滨、丝裂霉素-C、吉西他滨、卡铂、紫杉醇、培美曲塞、羟乙基-氯乙基亚硝基脲(HeCNU)、他莫昔芬、甲氨蝶呤、表柔比星、长春地辛、埃罗替尼、贝伐单抗、西妥昔单抗。
在另一个方面中，本发明还提供了在个体中治疗癌症的方法，所述方法包括以下从而在个体中治疗癌症：
-向待治疗癌症的个体施用化学治疗剂和/或放射治疗；以及
-在个体中形成针对由个体表达的P2X7受体的免疫应答；
其中P2X7受体对ATP的响应受损，使得其在正常生理条件下不能形成凋亡孔。
在另一个方面中，本发明还提供了在个体中治疗癌症的方法，所述方法包括以下从而在个体中治疗癌症：
-提供响应于化学治疗和/或放射治疗的个体；以及
-在个体中形成针对由个体表达的P2X7受体的免疫应答；
其中P2X7受体对ATP的响应受损，使得其在正常生理条件下不能形成凋亡孔。
在本发明的任何方面中，免疫应答通过在个体中提供免疫原来形成，所述免疫原的形式为P2X7受体，或能够在个体中诱导针对P2X7受体的免疫应答的P2X7受体片段，其中P2X7受体对ATP的响应受损，使得其在正常生理条件下不能形成凋亡孔。优选地，P2X7受体片段具有选自SEQ ID NO：1至11，更优选SEQ ID NO：2至5的氨基酸序列。
在本方面中，化学治疗剂和免疫原可同时施用。
在本方面中，化学治疗剂和免疫原可顺序施用。
在本方面中，化学治疗剂可以在免疫原之前施用。
在本方面中，化学治疗剂可以是本文中所述的任一种。优选地，化学治疗剂选自氮芥、乙烯亚胺衍生物、烷基磺酸盐、亚硝基脲、三氮烯、叶酸类似物、蒽环素、紫杉烷、COX-2抑制剂、嘧啶类似物、嘌呤类似物、抗代谢物、抗生素、表鬼臼毒素、铂配位复合物、长春花生物碱、取代脲、甲基肼衍生物、肾上腺皮质抑制剂、内皮抑素、紫杉醇、喜树碱、奥沙利铂、多柔比星和多柔比星类似物。优选地，化学治疗剂选自多柔比星、顺铂、长春新碱、达卡巴嗪(DTIC)、环磷酰胺、CPT-11、奥沙利铂、吉西他滨和5-氟尿嘧啶/亚叶酸。
在任何方面中，癌症可以是血源性癌症(blood born cancer)或实体瘤。
在任何方面中，癌症可以是本文中所述的任一种，包括选自以下的癌症：脑癌、食管癌、口腔癌、舌癌、甲状腺癌、肺癌、胃癌、胰腺癌、肾癌、结肠癌、直肠癌、前列腺癌、膀胱癌、宫颈癌、上皮细胞癌、皮肤癌、神经母细胞瘤、白血病、淋巴瘤、骨髓瘤、乳腺癌、卵巢癌、子宫内膜癌和睾丸癌。
除非上下文另有要求，否则本文中使用的术语“包含/包括”及该术语的变化形式不旨在排除另外的添加剂、组分、整体或步骤。
从通过实例并参照附图所给出的以下描述中，本发明的另一些方面以及在前面段落中描述的方面的另一些实施方案将变得明显。
附图说明
图1：骨髓瘤RPMI-8226和神经母细胞瘤Kelly细胞系中的化学治疗处理。A)在骨髓瘤RPMI-8226和神经母细胞瘤Kelly细胞系中响应于0.5mM BzATP刺激的归一化的乙锭(Ethidium)流入。示出了三个独立实验的平均值。B)使用CellTitre-Blue(CTB)测定测量的递增剂量的多柔比星对RPMI-8226细胞生存力的作用。C)使用CTB测定测量的递增剂量的多柔比星对Kelly细胞生存力的作用。D)使用CTB测定测量的递增剂量的5Fu对Kelly细胞生存力的作用。
图2：功能性骨髓瘤RPMI-8226和非功能性神经母细胞瘤Kelly细胞系中的化学治疗处理和如通过BPM09检出的nfP2X7的诱导。A)通过流式细胞术测量的递增量的多柔比星(0.0625μM至0.25μM)对nfP2X7抗体(在此为BPM09)与活RPMI-8226细胞结合的作用。B)通过流式细胞术测量的递增量的多柔比星(0.0625μM至0.25μM)对nfP2X7抗体(在此为BPM09)与活Kelly细胞结合的作用。C)通过流式细胞术测量的递增量的5Fu(1μM至8μM)对nfP2X7抗体与活Kelly细胞结合的作用。
图3：nfP2X7抗体(在此为BPM09)与活卵巢A2780亲本细胞和A2780细胞结合的变化，所述细胞已获得对多柔比星和顺铂的抗性。
图4：在200名患者来源异种移植模型组中进行免疫组织化学之后评分的BPM09膜，所述模型先前用或未用化学治疗或放射治疗进行处理。在结直肠数据集(37个样品)中进行了类似的分析。
图5：5Fu对nfP2X7抗体(在此为多克隆小鼠抗体)介导的对Kelly细胞的补体依赖性细胞毒性的作用。
图6：A)示出了HMGB1可驱动nfP2X7提高的数据。B)P2X7抑制剂未阻断响应于来自经多柔比星处理的细胞的条件培养基的nfP2X7诱导。来自用多柔比星处理的RPMI-8226的条件培养基不通过ATP发挥作用。
具体实施方式
现在将详细参照本发明的某些实施方案。虽然将结合实施方案描述本发明，但应理解的是，目的不是将本发明限制于那些实施方案。相反，本发明旨在涵盖可包括在由权利要求书所限定的本发明的范围内的所有替代物、修改和等同物。
本领域技术人员将认识到许多与本文中所述的那些类似的或等同的方法和材料，其可用于本发明的实践中。本发明决不限于所述的方法和材料。
应当理解的是，在本说明书中公开和限定的本发明延伸至正文或附图中提及的或明显的两个或更多个单独特征的所有替代组合。所有这些不同的组合构成了本发明的多个替代方面。
除非上下文另有要求，否则本文中使用的术语“包含/包括”及该术语的变化形式不旨在排除另外的添加剂、组分、整体或步骤。
本文中提及的所有专利和出版物均通过引用整体并入。
出于解释本说明书的目的，通常将应用以下定义，并且在适当时，没有数量词修饰的名词将表示一个/种或更多个/种。如果所述的任何定义与通过引用并入本文的任何文件相冲突，则应以以下所述定义为准。
本发明人出乎意料地确定了化学治疗或放射治疗提高了在活细胞上不能形成凋亡孔的P2X7受体的水平。此外，本发明人确定了在对化学治疗产生完全或部分抗性的细胞上不能形成凋亡孔的P2X7受体水平提高。这些发现与化学治疗的类型无关，因为具有不同作用机制的不同结构类别的化学治疗均导致不能形成凋亡孔的P2X7受体水平提高。此外，所述发现适用于广泛多种癌症，而无论其组织来源如何(例如血源性或实体性)。最后，本发明人已经表明，这种由化学治疗驱动的提高的水平在细胞系和来源于患者样品的原代细胞二者中均发生。
本发明人还表明，用化学治疗预处理因此具有提高的不能形成凋亡孔的P2X7受体水平的癌细胞对靶向P2X7受体的多种干预敏感。
不受任何理论或作用方式的束缚，出乎意料地显示，非靶向治疗例如化学治疗或放射治疗提高在细胞上不能形成凋亡孔的P2X7受体水平的机制不是通过ATP介导的。相反，显示DAMP例如HMGB1可介导这种作用。
定义
“嘌呤受体”通常是指使用嘌呤(例如ATP)作为配体的受体。
“P2X7受体”通常是指由三个蛋白质亚基或单体形成的嘌呤能受体，其中至少一个，优选所有3个单体具有基本上如SEQ ID NO：1中所示的氨基酸序列。就P2X7受体由三个单体形成的方面而言，其是“三聚体”或“三聚体的”。“P2X7受体”可以是如下所述的功能性或非功能性受体。“P2X7受体”涵盖天然存在的P2X7受体的变体，例如，其中P2X7单体是剪接变体、等位基因变体和同种型，包括形成P2X7受体的单体的天然存在的截短或分泌形式(例如，由其胞外结构域序列或截短形式组成的形式)、天然存在的变体形式(例如，选择性剪接形式)和天然存在的等位基因变体。在本发明的某些实施方案中，本文中公开的天然序列P2X7单体多肽是成熟或全长天然序列多肽，其包含SEQ ID NO：1中所示的全长氨基酸序列。在某些实施方案中，P2X7受体可具有经修饰的氨基酸序列，例如SEQ ID NO：1中所示序列中的多种氨基酸可被替换、缺失，或者可插入残基。
“功能性P2X7受体”通常是指具有用于与ATP结合的结合位点或裂隙(cleft)的P2X7受体的形式。当与ATP结合时，受体形成非选择性阳离子通道，其转化为孔状结构，使得实现了钙离子以及高至1000Da的分子进入到胞质溶胶中的流入提高，其一个结果可以是程序性细胞死亡。在正常的稳态中，功能性P2X7受体的表达通常限于经历程序性细胞死亡的细胞，例如胸腺细胞、树突细胞、淋巴细胞、巨噬细胞和单核细胞。在红细胞和其他细胞类型上也可能存在一些功能性P2X7受体的表达。
“非功能性P2X7受体”或“nfP2X7”通常是指这样的P2X7受体形式，其具有其中受体不能形成凋亡孔，但其仍然能够作为非选择性通道而发挥作用的构象。异构化可来自导致单体错误折叠的任何分子事件，包括例如单体一级序列的突变或异常的翻译后加工。异构化的一个结果是受体不能使通道的开口延伸。在这些情况下，受体不能形成孔，并且这限制了钙离子和高至1000Da的分子可进入胞质溶胶的程度。非功能性P2X7受体在广泛范围的上皮癌症和造血系统癌症上表达。
“癌症相关P2X7受体”通常是在癌细胞(包括肿瘤前(pre-neoplastic)细胞、肿瘤细胞、恶性细胞、良性细胞或转移细胞)上存在但不在非癌或正常细胞上存在的P2X7受体。
“E200表位”通常是指暴露在非功能性P2X7受体上的表位。在人中，序列是GHNYTTRNILPGLNITC(SEQ ID NO：5)。
“E300表位”通常是指暴露在非功能性P2X7受体上的表位。在人中，序列是KYYKENNVEKRTLIKVF(SEQ ID NO：8)。
“复合表位”通常是指由E200和E300表位或这些表位的一部分并置(juxtaposition)形成的表位。
本文中使用的“P2X7受体靶向治疗”是直接或间接导致表达P2X7受体的癌细胞生存力降低的任何治疗，所述P2X7受体对ATP的响应受损，使得其在正常生理条件下不能形成凋亡孔。通常来说，治疗包括施用这样的分子，其与P2X7受体结合、诱导针对P2X7受体的免疫应答或降低P2X7受体水平，所述P2X7受体对ATP的响应受损，使得其在正常生理条件下不能形成凋亡孔。优选地，与P2X7受体结合的分子是抗体或基于细胞的治疗。优选地，诱导针对P2X7受体的免疫应答的分子是在个体中的免疫原，其形式为P2X7受体，或能够在个体中诱导针对P2X7受体的免疫应答的P2X7受体片段，其中所述P2X7受体对ATP的响应受损，使得其在正常生理条件下不能形成凋亡孔。优选地，降低P2X7受体水平的分子是干扰RNA。对ATP响应受损的P2X7受体的抑制还可以包括在细胞，优选癌细胞中的P2X7受体蛋白、RNA或DNA的水平或量的降低。该分子可对P2X7受体具有特异性，并且对其他P2X受体仅具有一些低水平的抑制活性。
“抗体”或“免疫球蛋白”或“Ig”是在脊椎动物的血液或其他体液中存在的γ球蛋白，其在免疫系统中发挥作用以结合抗原，因此识别和/或中和外来物。
抗体通常是由两条相同的轻(L)链和两条相同的重(H)链构成的异四聚体糖蛋白。每条L链通过一个共价二硫键与H链连接。根据H链同种型，两条H链通过一个或更多个二硫键彼此连接。每条H和L链还具有规则间隔的链内二硫键。
H链和L链限定特异性Ig结构域。更具体地，每条H链在N端具有可变结构域(variable domain，VH)，其后是三个恒定结构域(constantdomain，CH)(对于α和γ链中的每一个)和四个CH结构域(对于μ和ε同种型)。每条L链在N端具有可变结构域(VL)，随后在其另一端具有恒定结构域(CL)。VL与VH对齐，且CL与重链的第一恒定结构域(CH1)对齐。
抗体可分配成不同的类别或同种型。存在五类免疫球蛋白：IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，分别具有定名为α、δ、ε、γ和μ的重链。基于CH序列和功能中的相对小的差异，将γ和α类进一步分为亚类，例如，人表达以下亚类：IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2。来自任何脊椎动物物种的L链可基于其恒定结构域的氨基酸序列分配成两种明显不同的类型(称为κ和λ)之一。
恒定结构域包含Fc部分，其包含通过二硫化物保持在一起的两条H链的羧基端部分。抗体的效应功能(例如ADCC)由Fc区中的序列决定，该区域也是由在某些类型的细胞上存在的Fc受体(FcR)识别的部分。
VH和VL的配对一起形成“可变区”或“可变结构域”，包括抗体重链或轻链的氨基端结构域。重链的可变结构域可称为“VH”。轻链的可变结构域可称为“VL”。V结构域包含“抗原结合位点”，其影响抗原结合并限定特定抗体对其特定抗原的特异性。V区跨越约110个氨基酸残基，并且由相对不变的段(stretch)组成，所述段被称为框架区(framework region，FR)(通常约4个)，具有15至30个氨基酸，其通过被称为“高变区”的极端变异的较短区域(通常有约3个，每个通常9至12个氨基酸长)隔开。FR主要采用β-片层构型，并且高变区形成连接β-片层结构的环，并且在一些情况下形成β-片层结构的一部分。
“高变区”是指抗体可变结构域的区域，其在序列中是高变的和/或形成结构上限定的环。通常来说，抗体包含六个高变区；三个在VH中(Hl、H2、H3)，且三个在VL中(L1、L2、L3)。
“框架”或“FR”残基是除本文中限定的高变区残基之外的那些可变结构域残基。
“抗原结合位点”通常是指至少包括赋予V结构域以抗原结合功能所需的高变区和构架区的分子。在本文中所述的方法中，抗原结合位点可以是抗体或抗体片段(例如dAb、Fab、Fd、Fv、F(ab’)2或scFv)的形式。
“完好(intact)”或“完整(whole)”抗体是包含抗原结合位点以及CI和至少重链恒定结构域CH1、CH2和CH3的抗体。恒定结构域可以是天然序列恒定结构域(例如人天然序列恒定结构域)或其氨基酸序列变体。
“包括可变结构域的完整抗体片段”包括Fab、Fab’、F(ab’)2和Fv片段；双抗体(diabody)；线性抗体、单链抗体分子；以及由抗体片段形成的多特异性抗体。
“Fab片段”由整条L链以及H链的可变区结构域(VH)和一条重链的第一恒定结构域(CH1)组成。每个Fab片段就抗原结合而言是单价的，即它具有单个抗原结合位点。
“Fab’片段”与Fab片段的不同之处在于，其在CH1结构域的羧基端具有另外的数个残基，包括来自抗体铰链区的一个或更多个半胱氨酸。Fab’-SH是本文中对Fab’的命名，其中恒定结构域的半胱氨酸残基带有游离的巯基。
“F(ab’)2片段”大致对应于两个二硫化物连接的Fab片段，其具有二价抗原结合活性并且仍然能够交联抗原。
“Fv”是包含完全抗原识别和结合位点的最小抗体片段。该片段由紧密的非共价缔合的一个重链可变区结构域和一个轻链可变区结构域的二聚体组成。
在单链Fv(scFv)种类中，一个重链可变结构域和一个轻链可变结构域可通过柔性肽接头共价连接，使得轻链和重链可以以类似于双链Fv种类中结构的“二聚体”结构缔合。从这两个结构域的折叠中发出六个高变环(来自H链和L链各3个环)，其为抗原结合贡献氨基酸残基并赋予抗体以抗原结合特异性。
“单链Fv”也缩写为“sFv”或“scFv”，其是包含连接以形成单个多肽链的VH和VL抗体结构域的抗体片段。优选地，scFv多肽还包含VH与VL结构域之间的多肽接头，其使得scFv能够形成抗原结合所期望的结构。
“单个可变结构域”是Fv的一半(仅包含对抗原具有特异性的三个CDR)，其具有识别和结合抗原的能力，尽管其亲和力低于整个结合位点。
“双抗体”是指具有两个抗原结合位点的抗体片段，该片段包含与同一多肽链中的轻链可变结构域(VL)连接的重链可变结构域(VH)(VH-VL)。通过构建在VH与VL结构域之间具有短接头(约5至10个残基)的sFv片段(参见前段)使得实现V结构域的链间而不是链内配对，来制备小抗体片段，产生二价片段，即具有两个抗原结合位点的片段。
双抗体可以是二价的或双特异性的。双特异性双抗体是两个“交叉”sFv片段的异二聚体，其中两个抗体的VH和VL结构域存在于不同的多肽链上。三抗体(triabody)和四抗体(tetrabody)也是本领域中公知的。
“分离的抗体”是已经鉴定并与其预先存在的环境的组分分离和/或从其中回收的抗体。污染组分是会干扰抗体的治疗用途的物质，并且可包括酶、激素和其他蛋白质或非蛋白质溶质。
“人抗体”是指具有与由人产生的抗体的氨基酸序列相对应的氨基酸序列的抗体。可使用本领域中已知的多种技术制备人抗体，包括噬菌体展示文库。可通过向转基因动物施用抗原来制备人抗体，所述转基因动物已被修饰以响应于抗原攻击而产生此类抗体，但其内源基因座已失效(disabled)。
非人(例如，啮齿动物)抗体的“人源化”形式是嵌合抗体，其包含源自非人抗体的最小序列。大多数情况下，人源化抗体是人免疫球蛋白(接纳体抗体)，其中来自接纳体的高变区的残基被来自非人物种(供体抗体)的高变区的残基替代，所述非人物种例如具有所期望抗体特异性、亲和力和能力的小鼠、大鼠、兔或非人灵长类。在某些情况下，人免疫球蛋白的框架区(FR)残基被相应的非人残基替代。此外，人源化抗体可包含在接纳体抗体或供体抗体中不存在的残基。进行这些修饰以进一步改善抗体性能。通常来说，人源化抗体将包含至少一个(通常是两个)可变结构域的基本上全部，其中高变环的全部或基本上全部对应于非人免疫球蛋白的高变环，并且FR的全部或基本上全部是人免疫球蛋白序列的FR。人源化抗体任选还包含免疫球蛋白恒定区(Fc)(通常为人免疫球蛋白恒定区)的至少一部分。
“单克隆抗体”是指从基本上同质的抗体群体获得的抗体，即除了可少量存在的可能天然发生的突变外，构成群体的单个抗体是相同的。单克隆抗体是高度特异性的，针对抗原上的单个抗原位点或决定簇。除了它们的特异性之外，单克隆抗体的优点还在于它们可在不被其他抗体污染地情况下合成。可通过杂交瘤方法制备单克隆抗体。“单克隆抗体”还可使用技术从噬菌体抗体文库中分离。
术语“抗P2X7受体抗体”或“与P2X7受体结合的抗体”是指能够以足够的亲和力结合P2X7受体的抗体，使得该抗体可在靶向P2X7受体(通常是非功能性P2X7受体)中用作诊断剂和/或治疗剂。优选地，P2X7受体抗体与不相关蛋白的结合程度小于抗体与P2X7受体之结合的约10％，如通过例如放射免疫测定(radioimmunoassay，RIA)、酶联免疫吸附测定(Enzyme-linked ImmunosorbentAssay，ELISA)、Biacore或流式细胞术所测定的。在某些实施方案中，与P2X7受体结合的抗体的解离常数(Kd)为＜1μM、＜100nM、＜10nM、＜1nM或＜0.1nM。抗非功能性P2X7受体抗体是通常具有一些或全部这些血清学特征并且与非功能性P2X7受体结合但不与功能性P2X7受体结合的抗体。
“亲和力成熟的”抗体是这样的抗体：在其一个或更多个高变区中具有一个或更多个改变，与不具有这些改变的亲本抗体相比，其引起抗体对抗原之亲和力的改善。优选的亲和力成熟的抗体将对靶抗原具有纳摩或甚至皮摩的亲和力。亲和力成熟的抗体通过本领域中已知的方法产生。
“阻断抗体”或“拮抗剂”抗体是抑制或降低其结合的抗原的生物活性的抗体。优选的阻断抗体或拮抗剂抗体基本上或完全抑制抗原的生物活性。
本文中使用的“激动剂抗体”是模拟目的多肽的至少一种功能活性的抗体。
“结合亲和力”通常是指分子(例如抗体)的单个结合位点与其结合配偶体(例如抗原)之间非共价相互作用的总和的强度。除非另有说明，否则本文中使用的“结合亲和力”是指内在结合亲和力，其反映结合对的成员(例如，抗体和抗原)之间的1∶1相互作用。分子X对其配偶体Y的亲和力通常可由解离常数(Kd)表示。亲和力可通过本领域中已知的常用方法(包括本文中所述的那些)测量。低亲和力抗体通常缓慢地结合抗原并且易于解离，而高亲和力抗体通常更快地结合抗原并且倾向于保持结合更长时间。测量结合亲和力的多种方法是本领域中已知的，其中任何方法都可用于本发明的目的。
“表位”通常是指通过抗体的抗原结合位点来结合的抗原部分。就形成抗原结合位点的抗体CDR的高变环与氨基酸序列结合而言，表位可以是“线性的”，如在一级蛋白质结构中那样。在某些实施方案中，表位是“构象表位”，即其中CDR的高变环与残基结合的表位，如同它们在三级或四级蛋白质结构中呈现的那样。
“治疗”通常是指治疗性治疗和预防或防范措施二者。
需要治疗的对象包括已经患有良性肿瘤、癌前肿瘤或非转移性肿瘤的对象以及其中要预防癌症发生或复发的对象。
治疗的目的或结局可以是降低癌细胞的数目；降低原发肿瘤尺寸；抑制(即，在一定程度上减缓并且优选地中止)癌细胞浸润到外周器官中；抑制(即，在一定程度上减缓并且优选地中止)肿瘤转移；在一定程度上抑制肿瘤生长；和/或在一定程度上缓解与病症相关的一种或更多种症状。
治疗的效力可通过评估存活持续时间、疾病进展时间、响应率(response rate，RR)、响应持续时间和/或生活质量来测量。
在一个实施方案中，该方法特别可用于延缓疾病进展。
在一个实施方案中，该方法特别可用于延长人存活，包括总存活以及无进展存活。
在一个实施方案中，该方法特别可用于提供对治疗的完全响应，由此响应于治疗的所有癌症体征均消失。这并不总是意味着癌症已经治愈。
在一个实施方案中，该方法特别可用于提供对治疗的部分响应，由此响应于治疗，一个或更多个肿瘤或病变的尺寸或体内癌症的程度已经减小。
“癌前”或“肿瘤前”通常是指通常在癌症之前或发展成癌症之前的病症或生长。“癌前”生长可具有以异常细胞周期调节、增殖或分化为特征的细胞，其可通过细胞周期的标志物来确定。
在一个实施方案中，癌症是癌前的或肿瘤前的。
在一个实施方案中，癌症是继发性癌症或转移癌。继发性癌症可位于任何器官或组织，并且特别是具有相对较高血流动力学压力的那些器官或组织，例如肺、肝、肾、胰腺、肠和脑。
癌症的另一些实例包括母细胞瘤(包括髓母细胞瘤和视网膜母细胞瘤)、肉瘤(包括脂肪肉瘤和滑膜细胞肉瘤)、神经内分泌肿瘤(包括类癌肿瘤、胃泌素瘤和胰岛细胞癌)、间皮瘤、神经鞘瘤(schwannoma)(包括听神经瘤)、脑膜瘤、腺癌、黑素瘤、白血病或淋巴恶性肿瘤(lymphoidmalignancy)、肺癌(包括小细胞肺癌(small-cell lung cancer，SCLC)、非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer，NSCLC)、肺腺癌和肺鳞状细胞癌)、腹膜癌、肝细胞癌、胃癌(gastric or stomach cancer)(包括胃肠癌)、胰腺癌、胶质母细胞瘤、宫颈癌、卵巢癌、肝癌、膀胱癌、肝肿瘤(hepatoma)、乳腺癌(包括转移性乳腺癌)、结肠癌、直肠癌、结直肠癌、子宫内膜癌或子宫癌、唾液腺癌、肾癌(kidney orrenal cancer)、前列腺癌、外阴癌、甲状腺癌、肝癌、肛门癌、阴茎癌、睾丸癌、食管癌、胆道肿瘤、以及头颈癌。
“[与癌症]相关的病症或症状”可以是由于癌症而出现的、在癌症之前出现的或在癌症之后出现的任何病理状况。例如，在癌症是皮肤癌的情况下，病症或相关症状可以是微生物感染。在癌症是继发性肿瘤的情况下，病症或症状可涉及具有肿瘤转移的相关器官的器官功能障碍。在一个实施方案中，本文中所述的治疗方法是用于在个体中使个体中的与癌症相关的病症或症状最小化或治疗所述病症或症状。
“非自体”分子，例如“非自体”抗原结合位点或“非自体”抗体，通常是指在身体外部产生或对身体是外源性的分子，在该身体中提供该分子例如用于治疗。作为一个实例，合成或重组分子是“非自体的”。此外，在一个个体中产生并施用于另一个个体用于治疗的分子是“非自体的”。“非自体”抗原结合位点和抗体可根据本发明用于免疫的过继转移，例如，如在抗体输注中所发生的。相比之下，在待用分子治疗的个体内部产生的该分子通常是“自体”或“内源性”分子。“自体”分子的一个实例是从对免疫原的适应性免疫应答中产生或引起的抗原结合位点或抗体。
个体中的“循环中非自体抗原结合位点的水平”通常是指在体液，优选外周血中的抗原结合位点的浓度。
“基本上检测不到的循环中非自体抗原结合位点的水平”通常是指外源性抗原结合位点(即已通过过继转移施用的那些)的浓度，其为在施用抗原结合位点时循环中该抗原结合位点浓度的至少一半，优选为所述浓度的25％、或10％、或5％或1％，或者另外小于0.001mg/kg个体。该短语也可指其中根本无法检测到出于癌症免疫治疗目的而给予的抗原结合位点的情况。
“基本上未检测到”的癌症通常是指其中治疗已耗竭了癌症的尺寸、体积或其他物理量度，使得作为治疗的结果，使用相关标准检测技术(例如体内成像)未清楚地检测到癌症。该短语还指其中根本无法检测到癌症的情况。
“形成免疫应答”通常是指通过适应性免疫系统引发或诱导抗原特异性免疫。如本领域一般通常理解的，抗原特异性免疫的诱导不同于免疫的过继转移，通过施用外源性或非自体抗体的标准癌症免疫治疗是后者的一个实例。
选择的用于治疗的个体
在一个方面中，根据上述方法选择的用于治疗的个体是已接受或继续接受用于治疗癌症的化学治疗的那些。例如，个体可以已接受了本文中所述的化学治疗的任何一种或更多种，其包括氧氮磷杂环己烷、拓扑异构酶I抑制剂、拓扑异构酶II抑制剂、蛋白酶体抑制剂、抗叶酸剂、氮芥、乙烯亚胺衍生物、烷基磺酸盐、亚硝基脲、三氮烯、叶酸类似物、蒽环素、紫杉烷、COX-2抑制剂、嘧啶类似物、嘌呤类似物、嘌呤拮抗剂、抗代谢物、抗生素、表鬼臼毒素、基于铂的药剂、核糖核苷酸还原酶抑制剂、长春花生物碱、取代脲、肼衍生物、肾上腺皮质抑制剂、内皮抑素、喜树碱、奥沙利铂、多柔比星和多柔比星类似物、抗生素、L-天冬酰胺酶、酪氨酸激酶抑制剂、或其衍生物或变体。
在一个实施方案中，个体可以已接受了导致肿瘤团块减小但仍可在临床上或生物化学上检测到的化学治疗。例如，在施加P2X7靶向治疗时，作为化学治疗的结果，癌症可在尺寸、质量或其他物理量度方面显著降低。
此外，根据上述方法选择的用于治疗的个体在治疗时可具有或可不具有可检测到的癌症。
在另一个方面中，选择的用于治疗的个体是不响应于或不再响应于化学治疗的个体。
根据上述方法的治疗的目的是至少使癌症的进展最小化。一种治疗方法是通过在个体中诱导或形成针对非功能性P2X7受体的免疫应答。因此，选择的用于这种治疗形式的个体必须能够产生足以满足该目的的免疫应答。通常来说，所期望的免疫应答包括当个体被癌症攻击时如在癌症复发时产生循环IgM和IgG之一或二者的能力。
抗原结合位点和施用
针对P2X7受体靶向治疗的一种方法是施用与P2X7受体结合的抗原结合位点或抗体，所述P2X7受体对ATP响应受损，使得其在正常生理条件下不能形成凋亡孔。
通常，抗原结合位点是这样的位点，其区分功能性和非功能性P2X7受体，以便与非功能性受体结合，而不与功能性受体结合。这些抗原结合位点的一些实例是与E200表位、E300表位或复合表位结合的那些，如例如在PCT/AU2002/000061和PCT/AU2002/001204(或在相应的美国专利US 7,326,415、US 7,888,473、US 7,531,171、US 8,080,635、US 8,399,617、US 8,709,425、US 9,663,584或US 10,450,380中的任一项)中，在PCT/AU2007/001540(或在相应的美国专利US 8,067,550)、PCT/AU2007/001541(或在相应的美国公开US 2010-0036101)、PCT/AU2008/001364(或在相应的美国专利US 8,440,186、US 9,181,320、US 9,944,701或US 10,597,451中的任一项)、PCT/AU2008/001365(或在相应的美国专利US 8,293,491或US 8,658,385中的任一项)、PCT/AU2009/000869(或在相应的美国专利US 8,597,643、US 9,328,155或US 10,238,716中的任一项)和PCT/AU2010/001070(或在相应的美国专利US 9,127,059、US 9,688,771或US 10,053,508中的任一项)中的那些，所有这些均在此通过引用并入。
在某些实施方案中，抗原结合位点包含以下的CDR氨基酸序列：PCT/AU2010/001070(或在相应的美国专利US 9,127,059、US 9,688,771或US 10,053,508中的任一项)中所述的2-2-1，或者PCT/AU2007/001541(或在相应的美国公开US 2010-0036101)中所述并且由以登录no.06080101保藏在欧洲培养物保藏中心(ECACC)的杂交瘤AB253产生的BPM09。
无论特异性(即P2X7受体特异性或其他)如何，抗原结合位点可采用完整抗体、或者完整抗体片段例如Fab、Fab’、F(ab’)2、和Fv、单链Fv或单个可变结构域的形式。
抗原结合位点可以是同基因的、同种异体的或异种的。
通常，抗原结合位点是非自体的或外源的，意味着其已在根据本发明的方法治疗的个体之外被发现或分离。
抗原结合位点可以是亲和力成熟的。
抗原结合位点可具有多重特异性或多价。
可调整抗原结合位点以便适合于通过所选方法进行施用。
抗体可以是任何同种型的完整抗体。抗体可以是从单克隆或多克隆抗血清中获得的抗体。抗体可通过杂交瘤或通过重组表达产生，或者可从血清中获得，例如可从哺乳动物(特别是人或小鼠)中获得。抗体也可从禽类中获得。
抗体可以是嵌合的，即包含人可变结构域和非人恒定结构域的抗体。替代地，其可以是人源化的，即通过将非人CDR移植到人抗体框架中形成的抗体。更进一步地，抗体可以是完全人的。
抗体可相对于效应功能进行修饰，以便增强例如抗体在治疗癌症中的有效性。
当抗体是抗体片段时，抗体片段选自dAb、Fab、Fd、Fv、F(ab’)2、scFv和CDR。
剂量量、给药频率、施用途径等在以下详细描述。
制备抗体并向有此需要的对象施用抗体的方法是本领域技术人员公知或容易确定的。施用途径可以是例如经口、肠胃外(例如静脉内、动脉内、腹膜内、肌内、皮下、皮内、经直肠或经阴道)、通过吸入或表面。一种施用形式是用于注射，特别是用于静脉内或动脉内注射或滴注的溶液，其包含缓冲剂(例如乙酸盐、磷酸盐或柠檬酸盐缓冲剂)、表面活性剂(例如聚山梨酯)、任选的稳定剂(例如人白蛋白)。在另一些方法中，可将抗体直接递送至疾病部位，从而提高患病细胞或组织对抗体的暴露。
用于肠胃外施用的制剂包括无菌水性(水性载体包括水、醇/水溶液、乳剂或混悬剂，包括盐水和缓冲介质)或非水性(非水性溶剂是丙二醇、聚乙二醇、植物油(例如橄榄油)、以及可注射的有机酯(例如油酸乙酯))溶液剂、混悬剂和乳剂。可药用载体包括0.01至0.1M、优选0.05M磷酸盐缓冲液或0.9％盐水。其他常见的肠胃外载剂包括磷酸钠溶液、林格右旋糖(Ringer’s dextrose)、右旋糖和氯化钠、乳酸林格液(lactated Ringer’s)或固定油(fixed oil)。静脉内载剂包括流体和营养补充剂、电解质补充剂，例如基于林格右旋糖的那些，等。还可存在防腐剂和其他添加剂，例如如抗微生物剂、抗氧化剂、螯合剂和惰性气体等。
更具体地，适合于注射使用的药物组合物包括无菌水溶液(在水溶的情况下)或分散体和用于临时制备无菌可注射溶液或分散体的无菌粉末，在这样的情况下，该组合物必须是无菌的并且其流动性达到易于注射的程度。其应在制造和储存条件下稳定，并且将优选在防止微生物(例如细菌和真菌)的污染作用的条件下保存。载体可以是溶剂或分散介质，其包含例如水、乙醇、多元醇(例如，甘油、丙二醇和液体聚乙二醇等)及其合适的混合物。例如，可通过使用涂层(例如卵磷脂)、通过在分散体的情况下保持所需要的粒径和通过使用表面活性剂来保持适当的流动性。用于本文中公开的治疗方法的合适制剂描述于Remington′s Pharmaceutical Sciences，Mack PublishingCo.，第16版.(1980)中。
通过多种抗细菌剂和抗真菌剂(例如对羟基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、抗坏血酸、硫柳汞等)，可实现防止微生物的作用。在许多情况下，将优选在组合物中包含等张剂，例如糖、多元醇(例如甘露醇、山梨醇)或氯化钠。可通过在组合物中包含延迟吸收的物质(例如单硬脂酸铝和明胶)来实现可注射组合物的延长吸收。
在任何情况下，无菌可注射溶液可通过根据需要在适当的溶剂中与本文中列举的成分中的一种或组合一起以所需量并入活性化合物(例如，抗原结合位点)，然后过滤灭菌来制备。通常来说，通过将活性化合物并入到无菌载剂中来制备分散体，所述分散体含有基础分散介质和来自上面列举的那些的所需其他成分。在用于制备无菌可注射溶液的无菌粉末的情况下，优选的制备方法是真空干燥、冷冻干燥和喷雾干燥，其产生活性成分加上来自其先前无菌过滤溶液的任何其他期望成分的粉末。对用于注射的制剂进行处理，将其填充到容器(例如安瓿、袋、瓶、注射器或小瓶)中，并根据本领域中已知的方法在无菌条件下密封。此外，制剂可以以药盒的形式包装和销售。这样的制品将优选具有标签或包装插页(packageinsert)，表明相关组合物可用于治疗患有或易患病症的对象。
如本文中所述，用于治疗病症的本发明组合物的有效剂量根据许多不同因素而变化，所述因素包括施用方式、靶位点、患者的生理状态、患者是人还是动物、施用的其他药物、以及治疗是预防性还是治疗性的。可使用本领域技术人员已知的常规方法对治疗剂量进行滴定(titrate)以优化安全性和效力。
对于用抗体治疗某些病症，剂量可以是例如约0.0001至100mg/kg，并且更通常是0.01至5mg/kg(例如0.02mg/kg、0.25mg/kg、0.5mg/kg、0.75mg/kg、1mg/kg、2mg/kg等)宿主体重。例如剂量可以是1mg/kg体重或10mg/kg体重或在1至10mg/kg范围内，优选至少1mg/kg。在上述范围中的剂量中间值也旨在落入本发明的范围内。可每天、每隔一天、每周或根据实验分析确定的任何其他时间表将这样的剂量施用于对象。示例性治疗需要以多个剂量在经延长的时段(例如至少六个月的时段)施用。另外的示例性治疗方案需要每两周一次、或每月一次或每3至6个月一次进行施用。示例性剂量时间表包括连续数天1至10mg/kg或15mg/kg、按每隔一天30mg/kg、或每周60mg/kg。在一些方法中，同时施用具有不同结合特异性的两种或更多种抗原结合位点，在这种情况下，所施用的每种抗原结合位点的剂量落在所示范围内。
用于与细胞上表达的非功能性P2X7受体结合的抗体可多次施用。单次剂量之间的间隔可以是以周计、以月计或以年计。如通过测量患者中靶多肽或靶分子的血液水平所指示的，间隔也可以是不规则的。在一些方法中，调节剂量以达到1至1000ug/mL的血浆多肽浓度，并且在一些方法中为25至300ug/mL。或者，抗体可作为持续释放制剂施用，在这种情况下需要较低频率的施用。剂量和频率的变化取决于抗体在患者中的半衰期。抗体的半衰期也可通过与稳定的多肽或部分(例如白蛋白或PEG)融合来延长。一般而言，人源化抗体显示出最长的半衰期，其次是嵌合抗体和非人抗体。在一个实施方案中，抗体可以以非缀合形式施用。在另一个实施方案中，抗体可以以缀合形式多次施用。在某些治疗性应用中，有时需要以相对短的间隔使用相对高的剂量(例如，例如每个剂量高至400mg/kg的抗P2X7结合分子例如抗体)直至疾病的进展降低或终止，并且优选地直至患者显示出疾病症状的部分或完全改善。在抗体与放射性同位素或细胞毒性药物缀合的情况下，该量可低数个对数(即低2至3个对数)。
治疗剂可通过肠胃外、表面、静脉内、经口、皮下、动脉内、颅内、腹膜内、鼻内或肌内的方式进行施用以用于预防性和/或治疗性治疗，在一些方法中，将药剂直接注射到其中非功能性P2X7受体细胞已积累的特定组织中，例如颅内注射。肌内注射或静脉内输注优选用于抗体的施用。
抗体可任选地与有效治疗需要治疗(例如，预防性或治疗性治疗)的障碍或病症的其他药剂组合施用。一些实例是肿瘤学中常用于化学治疗或放射治疗的药剂。另外或替代地，抗体或药剂可在用于切除或去除肿瘤或组织的手术干预之前、期间或之后施用。
免疫原和形成免疫应答
另一种P2X7受体靶向治疗是在待治疗的个体中形成针对P2X7受体，尤其是非功能性P2X7受体的免疫应答。通常，用于此目的的免疫原是引发针对非功能性P2X7但不针对功能性P2X7受体的免疫应答的免疫原。
免疫原可包含含有P2X7受体的序列的肽或由含有P2X7受体的序列的肽组成。该肽可包含能够呈递在主要组织相容性复合体II类分子上或能够与B细胞受体或B细胞膜结合免疫球蛋白相互作用的至少一个序列。通常，该肽包含人P2X7受体或其片段的序列。
一系列肽免疫原是已知的并在以下中讨论：PCT/AU2002/000061或PCT/AU2002/001204(或相应的美国专利US 7,326,415、US 7,888,473、US 7,531,171、US 8,080,635、US8,399,617、US 8,709,425、US 9,663,584或US 10,450,380中的任一项)、PCT/AU2008/001364(或相应的美国专利US 8,440,186、US 9,181,320、US 9,944,701或US 10,597,451中的任一项)和PCT/AU2009/000869(或相应的美国专利US 8,597,643、US 9,328,155或US10,238,716中的任一项)，其内容整体并入。
下文描述了这些说明书内的示例性肽免疫原，其包含用于产生针对非功能性P2X7受体的免疫应答的表位。
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应当理解，这些仅仅是根据本文中所述的本发明的方法可用于形成免疫应答的可能免疫原的一些实例。此外，本发明包括可用于形成针对非功能性P2X7受体的免疫应答的如这些申请中所述的其他肽的用途。
通常，免疫接种方案涉及2次或更多次免疫接种。在第一次免疫接种中，目标可以产生对免疫接种的IgM应答。第二次免疫接种可以产生IgG应答。如下文进一步讨论的，另外的免疫接种可加强IgG应答。
在免疫原是肽的情况下，肽可以以每次施用约0.1至2mg，优选约0.25至1mg，优选约0.5mg的量提供。
可施加约0.25至1mg肽的另外的施用作为加强。
在一个实施方案中，当已被施用用于抗体免疫治疗的抗原结合位点的循环水平基本上未检测到时进行第一次免疫接种。换言之，在外周血中无法检测到针对相关癌症生物标志物的循环抗体。随后在接下来的数周内监测IgM产生的水平。在第一次免疫接种之后约4至5周，IgM抗体水平可能已降低至可忽略不计的循环水平。此时，随后进行第二次免疫接种并在接下来的数周内监测IgG产生的水平。
在加强之后，产生的抗体水平可以是0.1至25mg/kg，例如0.1至10mg/kg，优选5mg/kg，或10至25mg/kg，优选15mg/kg和多于10mg/kg。是否在循环中检测到该量将取决于是否存在肿瘤团块。在存在能够与由体液应答形成的抗体结合的肿瘤团块的情况下，在循环中检测到的抗体水平可处于该范围的较低端，或者实际上超出该范围的较低端(即小于0.1mg/kg)，或以其他方式基本上未检测到。在无可检测到的肿瘤团块的情况下，由体液应答形成的抗体水平可处于该范围的较高端，尽管在某些实施方案中，在这些情况下，约5mg/kg抗体的量可以是足够的。可在接下来的数月/数年内进行另外的免疫测试，并可根据需要提供加强免疫接种。
加强的程度或数量可取决于患者的状态和响应。在扫描或缺乏游离循环抗体表明存在肿瘤负荷的情况下，随后可每月进行加强，理想地以确保免疫系统的足够反应。在血清中游离抗体水平升高的情况下，随后可减少加强，并且可能每6至12个月施加1次以进行临床观察。
如上所讨论，免疫应答可靶向与由抗体免疫治疗靶向的生物标志物不同的生物标志物。例如，抗CD20抗体可用于抗体免疫治疗，并且非功能性P2X7免疫原用于产生免疫应答。
在另一个实施方案中，单一生物标志物被抗体免疫治疗和免疫接种靶向。例如，针对P2X7受体上的一个表位(例如E300表位)的单克隆抗体可用于抗体免疫治疗，并且用于形成靶向P2X7上不同表位(例如E200表位)的免疫应答的免疫原可用于免疫接种。
用于本文中本发明的方法的肽免疫原的长度可以是6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25或26个残基。
在一个实施方案中，根据本发明的方法用于形成免疫应答的免疫原是具有P2X7受体的序列的肽，该P2X7受体可具有或不具有顺式构象的Pro210。
免疫原可以是P2X7胞外结构域或者任何一种或更多种P2X7同种型的形式。免疫原可以以可溶形式或与固相例如细胞膜、珠或其他表面缔合来提供以用于施用。
根据本文中本发明的方法的用于筛选可用作免疫原以形成免疫应答的肽的方法在本文中公开。一个实例包括在玫瑰花结测定中使用红细胞。在该测定中，与功能性受体结合的抗体用作观察玫瑰花结中的阳性对照。如果测试抗体不能形成玫瑰花结，则确定其不与功能性受体结合。如果观察到测试抗体与非功能性受体表达细胞系(包括本文中讨论的那些)结合，则确定其与非功能性受体结合。
本发明的肽可通过本领域已知的许多技术，包括固相合成和重组DNA技术来制备。
如本领域已知的，载体是可与肽表位缀合从而增强免疫原性的物质。一些载体通过与多种肽结合以便为其中待产生免疫应答的宿主提供分子量提高的抗原来做到这一点。
优选的载体包括细菌毒素或类毒素。另一些合适的载体包括脑膜炎奈瑟菌(N.meningitides)外膜蛋白、白蛋白例如牛血清白蛋白、合成肽、热休克蛋白、KLH、百日咳蛋白、来自流感嗜血杆菌(H.influenza)的蛋白D和来自艰难梭菌(C.difficile)的毒素A、B或C。
当载体是细菌毒素或类毒素时，优选白喉或破伤风类毒素。
优选地，载体包含可与本发明的肽反应的官能团，或者可被修饰以能够与肽反应。
免疫原可皮下、皮内和/或肌内施用。
佐剂
在优选的形式中，用于形成针对用于在本文中所述的本发明的方法中使用的P2X7受体的免疫应答的组合物包含用于增强免疫应答的佐剂或化合物。
大量的佐剂是已知的；还参见Allison(1998，Dev.Biol.Stand.，92：3-11；通过引用并入本文)、Unkeless et al.(1998，Annu.Rev.Immunol.，6∶251-281)、以及Phillips etal.(1992，Vaccine，10：151-158)。可根据本发明使用的一些示例性佐剂包括但不限于以下：细胞因子、铝盐(例如，氢氧化铝、磷酸铝等；Baylor et al.，Vaccine，20：S18，2002)、凝胶型佐剂(例如，磷酸钙等)；微生物佐剂(例如，包含CpG基序的免疫调节DNA序列；内毒素，例如单磷酰脂质A(Ribi et al.，1986，Immunology and Immunopharmacology ofbacterial endotoxins，Plenum Publ.Corp.，NY，p407，1986)；外毒素，例如霍乱毒素、大肠杆菌(E.coli)不耐热毒素和百日咳毒素；胞壁酰二肽，等)；油乳剂和基于乳化剂的佐剂(例如，弗氏佐剂、MF59[Novartis]、SAF等)；颗粒佐剂(例如，脂质体、生物可降解的微球等)；合成佐剂(例如，非离子嵌段共聚物、胞壁酰肽类似物、聚磷腈、合成的多核苷酸等)；和/或其组合。另一些示例性佐剂包括一些聚合物(例如，聚磷腈；描述于美国专利5,500,161)、Q57、皂苷(例如，QS21，Ghochikyan et al.，Vaccine，24：2275，2006)、角鲨烯、四氯十氧化物、CPG 7909(Cooper et al.，Vaccine，22：3136，2004)、聚[二(羧基苯氧基)磷腈](PCCP；Payne et al.，Vaccine，16：92，1998)、干扰素-γ(Cao et al.，Vaccine，10：238，1992)、嵌段共聚物P1205(CRL1005；Katz et al.，Vaccine,.18∶2177，2000)、白介素-2(IL-2；Mbwuike et al.，Vaccine，8：347，1990)、聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA；Kreuter et al.，J.Pharm.ScL，70：367，1981)等。
在一个实施方案中，根据本文中所述的本发明的方法，在用于个体免疫接种的噬菌体表面上提供包含P2X7受体的序列的肽免疫原。
基于细胞的治疗
另一种P2X7受体靶向治疗包括基于细胞的治疗。具体地，本发明提供了在不响应于或不再响应于化学治疗的个体中治疗癌症的方法，该方法包括以下从而在个体中治疗癌症：
-提供不响应于或不再响应于化学治疗剂的个体；
-在个体中提供靶向P2X7受体表达癌细胞的基于细胞的治疗；
-其中P2X7受体对ATP的响应受损，使得其在正常生理条件下不能形成凋亡孔。
在任何方面中，靶向P2X7受体表达癌细胞的基于细胞的治疗可以是具有与P2X7受体表达癌细胞结合的能力的CAR-T细胞或其他细胞毒性细胞。
嵌合抗原受体T细胞(CAR-T细胞)是经遗传改造以产生人工T细胞受体(嵌合抗原受体)的T细胞。可用于本发明的嵌合抗原受体包含抗原识别结构域和信号传导结构域，其中抗原识别结构域识别P2X7受体，所述P2X7受体对ATP的响应受损，使得其在正常生理条件下不能形成凋亡孔。
嵌合抗原受体(chimeric antigen receptor，CAR)包含胞外和胞内结构域。胞外结构域包含靶标特异性结合元件，其还被称为抗原结合部分。胞内结构域或在其他情况下胞质结构域包含共刺激信号传导区和ζ链部分。共刺激信号传导区是指CAR的一部分，其包含共刺激分子的胞内结构域。共刺激分子是淋巴细胞对抗原的有效响应所需的除了抗原受体或其配体之外的细胞表面分子。
在CAR的胞外结构域与跨膜结构域之间，或在CAR的胞质结构域与跨膜结构域之间，可并入间隔区结构域。本文中使用的术语“间隔区结构域”通常意指发挥将多肽链中的跨膜结构域与胞外结构域或胞质结构域连接的功能的任何寡肽或多肽。间隔区结构域可包含多至600个氨基酸，优选10至100个氨基酸，并且最优选25至50个氨基酸。间隔区结构域可由完整的抗体Fc结构域组成并且另外具有可分离一个或更多个结合结构域的合适的接头。
抗原识别结构域
可用于本发明的CAR包含靶标特异性结合元件，其还被称为与P2X7受体结合的抗原识别结构域或抗原结合部分。优选地，P2X7受体对ATP的响应受损，使得其在距常生理条件下不能形成凋亡孔。
合适的抗原识别结构域或抗原结合部分在本文中描述，并且包括本文中所述的任何抗原结合位点或抗原结合结构域，这些抗原结合位点或抗原结合结构域出于构象优化的目的而以单一或多种形式适当地分离。
跨膜结构域
关于跨膜结构域，CAR可设计成包含与CAR的胞外结构域融合的跨膜结构域。在一个实施方案中，使用与CAR中的结构域之一天然缔合的跨膜结构域。在一些情况下，可对跨膜结构域进行选择或通过氨基酸替换进行修饰，以避免这样的结构域与相同或不同表面膜蛋白的跨膜结构域结合，从而使与受体复合物的其他成员的相互作用最小化。
跨膜结构域可来源于天然来源或合成来源。在来源是天然的情况下，该结构域可来源于任何膜结合蛋白或跨膜蛋白。特别用于本发明中的跨膜区可来源于以下(即至少包含以下的跨膜区)：T细胞受体的α、β或ζ链、CD28、CD3ε、CD45、CD4、CD5、CDS、CD9、CD16、CD22、CD33、CD37、CD64、CD80、CD86、CD 134、CD137、CD 154。或者，跨膜结构域可以是合成的，在这种情况下，其将主要包含疏水残基，例如亮氨酸和缬氨酸。优选地，苯丙氨酸、色氨酸和缬氨酸的三联体将存在于合成跨膜结构域的每个末端。
任选地，短的寡肽接头或多肽接头(优选地长度为2至10个氨基酸)可在CAR的跨膜结构域与胞质信号传导结构域之间形成连接。甘氨酸-丝氨酸二联体提供了特别合适的接头。
优选地，本发明的CAR中的跨膜结构域是CD8跨膜结构域。
在一些情况下，本发明的CAR的跨膜结构域包含CD8a铰链结构域。
胞质结构域
本发明的CAR的胞质结构域或另外的胞内信号传导结构域负责活化其中已放置CAR的免疫细胞的至少一种正常效应功能。术语“效应功能”是指细胞的特化功能。例如，T细胞的效应功能可以是细胞裂解活性或辅助活性，包括分泌细胞因子。因此，术语“胞内信号传导结构域”是指转导效应功能信号并指导细胞进行特化功能的蛋白质部分。虽然通常可使用整个胞内信号传导结构域，但在许多情况下不需要使用整个链。就使用胞内信号传导结构域的截短部分而言，这样的截短部分可用于代替完整链，只要其转导效应功能信号即可。术语胞内信号传导结构域因此意味着包括胞内信号传导结构域的足以转导效应功能信号的任何截短部分。
用于本发明的CAR的胞内信号传导结构域的优选实例包括T细胞受体(T cellreceptor，TCR)和协同作用以在抗原受体接合之后开始信号转导的共受体的胞质序列，以及具有相同功能能力的这些序列的任何衍生物或变体和任何合成序列。
已知仅通过TCR产生的信号不足以完全活化T细胞并且还需要次级信号或共刺激信号。可以说T细胞活化是由两种不同种类的胞质信号传导序列介导的：通过TCR引发抗原依赖性初级活化的那些(初级胞质信号传导序列)和以抗原非依赖性方式发挥作用以提供次级信号或共刺激信号的那些(次级胞质信号传导序列)。
初级胞质信号传导序列以刺激性方式或以抑制性方式调节TCR复合物的初级活化。以刺激性方式发挥作用的初级胞质信号传导序列可包含被称为基于免疫受体酪氨酸的活化基序或ITAM的信号传导基序。
特别用于本发明中的包含初级胞质信号传导序列的ITAM的一些实例包括来源于TCRζ、FcRγ、FcRβ、CD3γ、CD3δ、CD3ε、CDS、CD22、CD79a、CD79b和CD66d的那些。特别优选的本发明的CAR中的胞质信号传导分子包含来源于CD3ζ的胞质信号传导序列。
在一个优选的实施方案中，CAR的胞质结构域可被设计成包含单独或与任何其他可用于本发明的CAR背景的期望胞质结构域组合的CD3-ζ信号传导结构域。例如，CAR的胞质结构域可包含CD3ζ链部分和共刺激信号传导区。共刺激信号传导区是指CAR的一部分，其包含共刺激分子的胞内结构域。共刺激分子是淋巴细胞对抗原的有效响应所需的除抗原受体或其配体之外的细胞表面分子。这样的分子的一些实例包括CD27、CD28、4-IBB(CD 137)、0X40、CD30、CD40、PD-1、ICOS、淋巴细胞功能相关抗原-1(LFA-1)、CD2、CD7、LIGHT、NKG2C、B7-H3、和与CD83特异性结合的配体等。因此，尽管本发明主要用4-1BB作为共刺激信号传导元件来举例说明，但其他共刺激元件也在本发明的范围内。
本发明的CAR的胞质信号传导部分内的胞质信号传导序列可以以随机或特定的顺序彼此连接。任选地，短的寡肽接头或多肽接头，优选长度为2至10个氨基酸，可形成连接。甘氨酸-丝氨酸二联体提供了特别合适的接头。
在一个实施方案中，胞质结构域被设计成包含CD3-ζ的信号传导结构域和CD28的信号传导结构域。在另一个实施方案中，胞质结构域被设计成包含CD3-ζ的信号传导结构域和4-IBB的信号传导结构域。在又一个实施方案中，胞质结构域被设计成包含CD3-ζ的信号传导结构域以及CD28和4-1BB的信号传导结构域。在一个实施方案中，本发明的CAR中的胞质结构域被设计成包含4-1BB的信号传导结构域和CD3-ζ的信号传导结构域。
可用于本发明的CAR-T细胞包括在PCT/AU2016/050851(或在相应的美国公开2019-0365805)中描述的那些，其全部内容通过引用整体并入。
干扰RNA和施用
一种治疗方法是施用降低癌细胞表面上的P2X7受体水平的干扰RNA。干扰RNA本身不需要对P2X7受体具有特异性，该P2X7受体对ATP的响应受损，使得其在正常生理条件下不能形成凋亡孔。相反，干扰RNA可降低细胞中的总P2X7受体水平并靶向表达P2X7受体的细胞，该P2X7受体对ATP的响应受损，使得其在正常生理条件下不能形成凋亡孔。换言之，可使用本领域已知的任何方法将干扰RNA靶向至癌细胞。
一些示例性干扰RNA分子在Gilbert et al.Oncogene.2019 Jan；38(2)：194-208中描述，其全部内容通过引用并入。
一些示例性siRNA靶序列包括siRNA
Figure BDA0003487530760000321
Figure BDA0003487530760000322
癌症和与其相关的病症
瘤前疾病、瘤性疾病和转移性疾病是可施加本发明方法的具体实例。广泛的一些实例包括乳腺肿瘤、结直肠肿瘤、腺癌、间皮瘤、膀胱肿瘤、前列腺肿瘤、生殖细胞肿瘤、肝肿瘤/cholongio、癌、神经内分泌肿瘤、垂体肿瘤、小圆细胞肿瘤、鳞状细胞癌、黑素瘤、非典型纤维黄瘤、精原细胞瘤、非精原细胞瘤(nonseminomas)、基质睾丸间质细胞瘤(stromalleydig cell tumour)、睾丸支持细胞肿瘤(Sertoli cell tumour)、皮肤肿瘤、肾肿瘤、睾丸肿瘤、脑肿瘤、卵巢肿瘤、胃肿瘤、口腔肿瘤、膀胱肿瘤、骨肿瘤、宫颈肿瘤、食管肿瘤、喉肿瘤、肝肿瘤、肺肿瘤、阴道肿瘤和肾母细胞瘤。
特定癌症的一些实例包括但不限于腺癌、腺瘤、腺纤维瘤、腺淋巴瘤、adontoma、AIDS相关癌症、听神经瘤、急性淋巴细胞白血病、急性髓性白血病、腺样囊性癌、肾上腺皮质癌、原因不明的髓样化生、脱发、腺泡状软组织肉瘤、成釉细胞瘤、血管角化瘤、伴嗜酸性粒细胞增多的血管淋巴样增生、硬化性血管瘤、血管瘤病、胺前体摄取及脱羧细胞肿瘤(apudoma)、肛门癌、血管肉瘤、再生障碍性贫血、星形细胞瘤、共济失调毛细血管扩张症、基底细胞癌(皮肤)、膀胱癌、骨癌、肠癌、脑干胶质瘤、脑和CNS肿瘤、乳腺癌、鳃原瘤、CNS肿瘤、类癌瘤、宫颈癌、儿童脑肿瘤、儿童癌症、儿童白血病、儿童软组织肉瘤、软骨肉瘤、绒毛膜癌、慢性淋巴细胞白血病、慢性髓性白血病、结直肠癌、皮肤T细胞淋巴瘤、癌(例如Walker癌、基底细胞癌、基底鳞状癌、Brown-Pearce癌、导管癌、Ehrlich肿瘤癌、Krebs 2癌、梅克尔细胞(Merkel cell)癌、黏液癌、非小细胞肺癌、燕麦细胞癌、乳头状癌、硬癌、细支气管癌、支气管癌、鳞状细胞癌和移行细胞癌)、癌肉瘤、宫颈发育异常、囊肉瘤叶状体(cystosarcoma phyllodies)、牙骨质瘤、脊索瘤、迷离瘤、软骨肉瘤、软骨母细胞瘤、颅咽管瘤、胆管瘤、胆脂瘤、圆柱瘤、囊腺癌、囊腺瘤、隆凸性皮肤纤维肉瘤、结缔组织增生性小圆细胞肿瘤、导管癌、无性细胞瘤、内分泌癌、子宫内膜癌、室管膜瘤、食管癌、尤因肉瘤(Ewing′ssarcoma)、肝外胆管癌、眼癌、眼：黑素瘤、视网膜母细胞瘤、输卵管癌、范科尼贫血(fanconianaemia)、纤维瘤、纤维肉瘤、胆囊癌、胃癌、胃肠癌、胃肠类癌瘤、泌尿生殖系统癌症、生殖细胞肿瘤、妊娠滋养细胞疾病、胶质瘤、妇科癌症、巨细胞肿瘤、节细胞神经瘤、胶质瘤、血管球瘤、颗粒细胞肿瘤、性腺母细胞瘤、恶性血液病、毛细胞白血病、头颈癌、肝细胞癌、遗传性乳腺癌、组织细胞增生症、霍奇金病(Hodgkin′s disease)、人乳头瘤病毒、水泡状胎块、高钙血症、下咽癌、错构瘤、血管内皮瘤、血管瘤、血管外皮细胞瘤、血管肉瘤、血管肉瘤、组织细胞病症、恶性组织细胞增生症、组织细胞瘤、肝肿瘤、汗腺瘤、hondrosarcoma、免疫增殖性小瘤、opoma、眼内黑素瘤(ontraocular melanoma)、胰岛细胞癌、卡波西肉瘤(Kaposi′ssarcoma)、肾癌、朗格汉斯细胞组织细胞增生症、喉癌、平滑肌肉瘤、白血病、利-弗综合征(Li-Fraumeni syndrome)、唇癌、脂肪肉瘤、肝癌、肺癌、淋巴水肿、淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、leigomyosarcoma、白血病(例如b细胞、混合细胞、空细胞、t细胞、t细胞慢性、htlv-ii相关、淋巴管肉瘤、淋巴细胞急性、淋巴细胞慢性、肥大细胞和髓性)、白血病肉瘤、睾丸间质细胞瘤、脂肪肉瘤、平滑肌瘤、平滑肌肉瘤、淋巴管瘤、淋巴管细胞瘤(lymphangiocytoma)、淋巴管瘤、淋巴管肌瘤(lymphagiomyoma)、淋巴管肉瘤、男性乳腺癌、恶性肾横纹肌样瘤、髓母细胞瘤、黑素瘤、梅克尔细胞癌、间皮瘤、转移癌、口癌、多发性内分泌肿瘤、蕈样肉芽肿病、骨髓增生异常综合征、骨髓瘤、骨髓增生性疾病、恶性类癌综合征类癌心脏病、髓母细胞瘤、脑膜瘤、黑素瘤、间质瘤、中肾瘤、间皮瘤、成肌细胞瘤、肌瘤、肌肉瘤、粘液瘤、粘液肉瘤、鼻癌、鼻咽癌、肾母细胞瘤、神经母细胞瘤、神经纤维瘤病、奈梅亨断裂综合征(Nijmegen breakage syndrome)、非黑素瘤皮肤癌、非小细胞肺癌-(nsclc)、神经鞘瘤、神经母细胞瘤、神经上皮瘤、神经纤维瘤病、神经纤维瘤、神经瘤、肿瘤(例如骨、乳腺、消化系统、结直肠、肝)、眼癌、食管癌、口腔癌、口咽癌、骨肉瘤、卵巢造口癌(ostomyovarian cancer)、胰腺癌、鼻旁癌(paranasal cancer)、甲状旁腺癌、腮腺癌、阴茎癌、周围神经外胚层瘤(peripheral-neuroectodermal-tumour)、垂体癌、真性红细胞增多症、前列腺癌、骨瘤、骨肉瘤、卵巢癌、乳头状瘤、副神经节瘤、非嗜铬性副神经节瘤、松果体瘤、浆细胞瘤、原癌基因、罕见癌症和相关病症、肾细胞癌、视网膜母细胞瘤、横纹肌肉瘤、Rothmund-Thomson综合征、网状内皮组织增殖病、横纹肌瘤、唾液腺癌、肉瘤、神经鞘瘤、塞扎里综合征(Sezary syndrome)、皮肤癌、小细胞肺癌(small cell lung cancer，sclc)、小肠癌、软组织肉瘤、脊髓肿瘤、鳞状细胞癌-(皮肤)、胃癌、滑膜肉瘤、肉瘤(例如尤因实验性肉瘤、卡波西肉瘤和肥大细胞肉瘤)、支持细胞肿瘤、滑膜瘤、睾丸癌、胸腺癌、甲状腺癌、移行细胞癌-(膀胱)、移行细胞癌-(肾盂-/-输尿管)、滋养细胞癌、畸胎瘤、膜细胞肿瘤、胸腺瘤、滋养细胞肿瘤、尿道癌、泌尿系统癌、尿路斑块蛋白、子宫肉瘤、子宫癌、阴道癌、外阴癌、瓦氏巨球蛋白血症(Waldenstrom′s-macroglobulinemia)和肾母细胞瘤。
癌症可以是选自以下的癌症：脑癌、食管癌、口癌、舌癌、甲状腺癌、肺癌、胃癌、胰腺癌、肾癌、结肠癌、直肠癌、前列腺癌、膀胱癌、宫颈癌、上皮细胞癌、皮肤癌、白血病、淋巴瘤、骨髓瘤、乳腺癌、卵巢癌、子宫内膜癌和睾丸癌。
癌症可以是选自以下的癌症：肺癌、食管癌、胃癌、结肠癌、前列腺癌、膀胱癌、宫颈癌、阴道癌、上皮细胞癌、皮肤癌、血液相关癌症、乳腺癌、子宫内膜癌、子宫癌、宫颈癌和睾丸癌。
癌症可以是转移性的。
癌症可以是III期癌症。
癌症可以是IV期癌症。
药盒
在另一个实施方案中，提供了制造的药盒或制品，其包含：
-与P2X7受体，优选非功能性P2X7受体反应的免疫球蛋白可变结构域、抗体、dAb、Fab、Fd、Fv、F(ab’)2、scFv或CDR形式的抗原结合位点；
-用于针对非功能性P2X7受体产生免疫应答的免疫原；以及
-具有用于本文中所述方法的使用说明的标签或包装插页。
氨基酸序列
如本文中所述的示例性氨基酸序列在以下列出：
Figure BDA0003487530760000351
Figure BDA0003487530760000361
应当理解，在本说明书中公开和限定的本发明延伸至正文或附图中提及的或明显的两个或更多个单独特征的所有替代组合。所有这些不同的组合构成了本发明的多个替代方面。
实施例
以下所述的实验数据已确定化学治疗或放射治疗提高了在活细胞上不能形成凋亡孔的P2X7受体的水平。此外，数据显示在对化学治疗产生完全或部分抗性的细胞上不能形成凋亡孔的P2X7受体的水平提高。这些发现与化学治疗的类型无关，因为具有不同作用机制的不同结构分类的化学治疗均导致不能形成凋亡孔的P2X7受体的水平提高。此外，这些发现适用于广泛多种癌症，无论其组织来源(例如血源性或实体性)如何。最后，实验数据显示，这种由化学治疗驱动的水平提高发生在细胞系和来源于患者样品的原代细胞二者中。用化学治疗预处理而因此具有提高的不能形成凋亡孔的P2X7受体的水平的癌细胞对靶向P2X7受体的多种干预敏感。
实施例1
骨髓瘤RPMI-8226和神经母细胞瘤Kelly细胞系中的化学治疗处理。
材料和方法
将4,000个细胞接种在96孔板中并允许其贴壁过夜。随后将细胞用提高量的化学治疗或载剂对照处理72小时以诱导不同量的细胞杀伤。随后使用来自Promega的CellTiter-Blue细胞生存力测定按照制造商的说明来测量细胞生存力。
在骨髓瘤RPMI-8226和神经母细胞瘤Kelly细胞系中响应于0.5mM BzATP刺激的归一化的乙锭流入。示出了三个独立实验的平均值。
结果
图1A示出了骨髓瘤细胞系RPMI-8226能够响应于0.5mM BzATP来打开P2X7孔，而神经母细胞瘤细胞系Kelly则不能。选择RPMI-8226和Kelly细胞系作为血源性癌症(骨髓瘤)和实体瘤(神经母细胞瘤)的代表性模型。图1B、C和D示出了使用CellTitre-Blue(CTB)测定测量的递增剂量的化学治疗(多柔比星和5Fu)对RPMI-8226和Kelly细胞的作用。这些数据用于选择图2中使用的化学治疗的浓度。
多柔比星也称为阿霉素(Adriamycin)，其属于蒽环类家族。其作用机制是通过阻断拓扑异构酶2来介导的，这导致抑制DNA复制、细胞增殖并最终导致细胞死亡，如图1B和C中观察到的。5Fu(也称为氟尿嘧啶)是一种化学治疗，其作用机制主要是由以下来介导的：抑制胸苷酸合酶，这转而阻断作为DNA复制所必需的核苷的嘧啶胸苷的合成。这导致抑制细胞增殖并最终导致细胞死亡，如图1D中观察到的。选择多柔比星和5Fu化学治疗是因为其不同的作用模式。
实施例2
功能性骨髓瘤RPMI-8226和非功能性神经母细胞瘤Kelly细胞系中的化学治疗处理和如通过BPM09检出的nfP2X7的诱导。
材料和方法
将500,000个细胞接种在6孔板中并允许其贴壁过夜。随后将细胞用提高量的化学治疗或载剂对照处理72小时以诱导不同量的细胞杀伤。剩余的活细胞在基于PBS的无酶解离缓冲液中解离，洗涤并在染色缓冲液(PBS，2％FCS)中重悬。随后将细胞用针对非功能性P2X7产生的一抗(在此为2-2-1hFc)染色1小时，在染色缓冲液中洗涤3次，随后用荧光偶联的二抗和7AAD孵育1小时。使用BD Accuri流式细胞仪获得活细胞上的荧光染色，并用FlowJo-流式细胞术分析软件进行分析。使用7AAD活死染色分析活细胞群的中值荧光强度。
结果
图2A至C示出了RPMI-8226和Kelly细胞上递增量的化学治疗(多柔比星和5Fu)导致nfPX7抗体结合(在此为2-2-1hFc)以剂量依赖性方式提高。这表明具有功能性P2X7(RPMI-8226)或非功能性P2X7(Kelly)的癌细胞系显示出响应于多种化学治疗处理(多柔比星、5Fu、顺铂等)的提高的nfP2X7抗体结合。这些数据支持了用于使用化学治疗和nfP2X7靶向治疗的组合治疗的基本原理。
实施例3
对化学治疗具有获得性抗性的细胞系具有提高的nfP2X7的表达
材料和方法
培养的A2780亲本细胞、对多柔比星具有获得性抗性的A2780细胞和对顺铂具有获得性抗性的A2780细胞是从ECACC储存库获得的(参考文献：Proc AmerAssoc Cancer Res1984；25：336；Semin Oncol 1984；11：285；Cancer Res 1987；47：414；Cancer Res 1988；48：5713)。
将500,000个A2780、具有多柔比星抗性的A2780和具有顺铂抗性的A2780细胞接种在6孔板中并允许其贴壁过夜。细胞在基于PBS的无酶解离缓冲液中解离，洗涤并在染色缓冲液(PBS，2％FCS)中重悬。随后将细胞用针对非功能性P2X7产生的一抗(在此为BPM09)染色1小时，在染色缓冲液中洗涤3次，随后用荧光偶联的二抗和7AAD孵育1小时。使用BDAccuri流式细胞仪获得活细胞上的荧光染色，并用FlowJo-流式细胞术分析软件进行分析。使用7AAD活死染色分析活细胞群的中值荧光强度。
结果
进行实验以确定与nfP2X7特异性结合的抗体在活卵巢A2780亲本细胞和对多柔比星或顺铂具有获得性抗性的A2780细胞上的结合程度。
图3示出了nfP2X7抗体(在此为BPM09)与活卵巢A2780亲本细胞以及对多柔比星和顺铂具有获得性抗性的A2780细胞结合的变化。数据显示，与亲本A2780细胞相比，对多柔比星和顺铂具有获得性化学抗性的卵巢癌细胞具有提高的nfP2X7抗体结合。
这些数据表明，化学治疗诱导的nfP2X7提高是持久的。数据还显示，具有获得性化学抗性的细胞具有提高的nfP2X7暴露，这可通过nfP2X7定向治疗来靶向。
实施例4
先前用化学治疗和/或放射治疗处理的患者来源的异种移植物具有提高的nfP2X7表达
材料和方法
免疫组织化学如由Gilbert et al.Br J Dermatol.2017先前描述的进行。从福尔马林固定石蜡包埋组织中切割出5微米厚的切片，该切片来自包含一式两份的患者来源的异种移植物(patient derived xenograft，PDX)模型的核心活检的TMA载片。进行热诱导表位修复，随后用终浓度为1μg/ml至25μg/ml的初级小鼠单克隆抗E200抗体(BPM09)染色60分钟，并且随后是Mach 4小鼠探针(Biocare，USA)15分钟和Mach 4通用聚合物HRP 25分钟。通过将组织在Tris缓冲盐水中冲洗5分钟来分隔每个步骤。Dako液体DAB用作生色原(chromagen)(5分钟)且苏木精(5秒)用作复染剂。使用20×物镜检查载片。病理学家对膜染色的强度进行评分。
结果
BPM09膜染色在患者来源的异种移植物(PDX)模型组中进行免疫组织化学之后评分，所述模型先前用或未用化学治疗或放射治疗进行处理。研究中包含的经处理的PDX模型是结直肠癌(16个样品)、睾丸癌(2个样品)、肉瘤(4个样品)、黑素瘤癌(3个样品)、膀胱癌(1个样品)、胰腺癌(2个样品)、小细胞肺癌(1个样品)、非小细胞肺癌(2个样品)、卵巢癌(1个样品)、子宫颈癌(2个样品)和乳腺癌(6个样品)。使用的多种化学治疗方案包括以下化学治疗作为单一治疗或组合：5FU、亚叶酸、博来霉素、依托泊苷、顺铂、卡培他滨、奥沙利铂、达卡巴嗪、环磷酰胺、长春新碱、多柔比星、伊立替康、吉西他滨、丝裂霉素-C、吉西他滨、卡铂、紫杉醇、培美曲塞、羟乙基氯乙基亚硝基脲(HeCNU)、他莫昔芬、甲氨蝶呤、表柔比星、长春地辛、埃罗替尼、贝伐单抗、西妥昔单抗和放射治疗。
图4示出，先前用化学治疗和/或放射治疗处理的患者来源的异种移植物(该分析中合并了多种化学治疗方案和其他处理例如放射治疗)具有提高的nfP2X7抗体结合(在此为BPM09)。这些数据表明，包括化学治疗和放射治疗在内的多种非靶向治疗方案导致肿瘤细胞表面的nfP2X7暴露提高，并且支持在先前用这样的非靶向治疗来治疗的患者中使用nfP2X7靶向治疗。
实施例5
用化学治疗预处理的癌细胞对靶向nfP2X7敏感
材料和方法
将未经处理或用4uM 5-FU处理72小时的Kelly细胞以每孔50,000个细胞接种在黑色透明底的96孔板中并允许其贴壁过夜。随后在预热的培养基中将细胞用6.6ug/ml钙黄绿素加载30分钟。在加载之后，将细胞用无血清RPMI 1640洗涤3次，并且随后将来自用PBS或BIL06v免疫接种的小鼠的5ul小鼠血清添加至每孔50ul无血清RPMI 1640中(每个孔中血清来自4只PBS免疫接种小鼠和16只小鼠BIL06v免疫接种小鼠)。将细胞在冰上孵育30分钟。将在预热的无血清RPMI1640中的50ul的80％兔幼崽补体(Cedar Lane-c13441-s50)添加至每个孔。将板在37℃下孵育2小时。在2小时之后，将培养基转移至V底板并在2000g下离心5分钟以沉淀任何细胞。将每孔80ul上清液转移至透明底黑色96孔板。在495nm/515nm处测量钙黄绿素荧光。显示的数据是来自在未处理或5-FU预处理细胞上包含来自BIL06v免疫接种小鼠的血清的孔的钙黄绿素荧光，其相对于来自在具有相同预处理的细胞上包含来自PBS免疫接种小鼠的血清的孔的平均钙黄绿素荧光归一化。
结果
5Fu对nfP2X7抗体(在此为多克隆小鼠抗体)介导的对Kelly细胞的补体依赖性细胞毒性的作用。
数据表明，化学治疗与nfP2X7靶向治疗的组合治疗可用于促进抗肿瘤作用，如通过提高的针对用化学治疗处理的Kelly细胞的补体依赖性细胞毒性nfP2X7靶向抗体来证明的(图5)。总体而言，数据显示了在多种化学治疗处理(多柔比星、5Fu、顺铂等)和癌症模型(骨髓瘤、神经母细胞瘤、卵巢癌、结直肠癌)中，化学治疗处理导致癌细胞表面的nfP2X7水平提高，这可用作用于具有nfP2X7靶向抗体的组合治疗的基本原理。
实施例6
图6a中示出的数据表明，DAMP例如HMGB1可能介导该作用。化学治疗和放射治疗二者均驱动了DAMP例如HMGB1的释放，其中HMGB1本身驱动了nfP2X7的提高。
图6b描述了以下数据：其显示P2X7抑制剂(A 740003-N-[1-[[(氰基氨基)(5-喹啉基氨基)亚甲基]氨基]-2，2-二甲基丙基]-3，4-二甲氧基苯乙酰胺，目录No.3701，Tocris)未阻断条件培养基诱导的nfP2X7诱导。这显示出乎意料的是，ATP介导的P2X7受体活化并未介导化学治疗作用。
序列表
<110> Biosceptre (UK) Limited
<120> 治疗的方法
<130> P67635WO
<150> AU 2019902672
<151> 2019-07-26
<160> 13
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 595
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 1
Met Pro Ala Cys Cys Ser Cys Ser Asp Val Phe Gln Tyr Glu Thr Asn
1 5 10 15
Lys Val Thr Arg Ile Gln Ser Met Asn Tyr Gly Thr Ile Lys Trp Phe
20 25 30
Phe His Val Ile Ile Phe Ser Tyr Val Cys Phe Ala Leu Val Ser Asp
35 40 45
Lys Leu Tyr Gln Arg Lys Glu Pro Val Ile Ser Ser Val His Thr Lys
50 55 60
Val Lys Gly Ile Ala Glu Val Lys Glu Glu Ile Val Glu Asn Gly Val
65 70 75 80
Lys Lys Leu Val His Ser Val Phe Asp Thr Ala Asp Tyr Thr Phe Pro
85 90 95
Leu Gln Gly Asn Ser Phe Phe Val Met Thr Asn Phe Leu Lys Thr Glu
100 105 110
Gly Gln Glu Gln Arg Leu Cys Pro Glu Tyr Pro Thr Arg Arg Thr Leu
115 120 125
Cys Ser Ser Asp Arg Gly Cys Lys Lys Gly Trp Met Asp Pro Gln Ser
130 135 140
Lys Gly Ile Gln Thr Gly Arg Cys Val Val His Glu Gly Asn Gln Lys
145 150 155 160
Thr Cys Glu Val Ser Ala Trp Cys Pro Ile Glu Ala Val Glu Glu Ala
165 170 175
Pro Arg Pro Ala Leu Leu Asn Ser Ala Glu Asn Phe Thr Val Leu Ile
180 185 190
Lys Asn Asn Ile Asp Phe Pro Gly His Asn Tyr Thr Thr Arg Asn Ile
195 200 205
Leu Pro Gly Leu Asn Ile Thr Cys Thr Phe His Lys Thr Gln Asn Pro
210 215 220
Gln Cys Pro Ile Phe Arg Leu Gly Asp Ile Phe Arg Glu Thr Gly Asp
225 230 235 240
Asn Phe Ser Asp Val Ala Ile Gln Gly Gly Ile Met Gly Ile Glu Ile
245 250 255
Tyr Trp Asp Cys Asn Leu Asp Arg Trp Phe His His Cys Arg Pro Lys
260 265 270
Tyr Ser Phe Arg Arg Leu Asp Asp Lys Thr Thr Asn Val Ser Leu Tyr
275 280 285
Pro Gly Tyr Asn Phe Arg Tyr Ala Lys Tyr Tyr Lys Glu Asn Asn Val
290 295 300
Glu Lys Arg Thr Leu Ile Lys Val Phe Gly Ile Arg Phe Asp Ile Leu
305 310 315 320
Val Phe Gly Thr Gly Gly Lys Phe Asp Ile Ile Gln Leu Val Val Tyr
325 330 335
Ile Gly Ser Thr Leu Ser Tyr Phe Gly Leu Ala Ala Val Phe Ile Asp
340 345 350
Phe Leu Ile Asp Thr Tyr Ser Ser Asn Cys Cys Arg Ser His Ile Tyr
355 360 365
Pro Trp Cys Lys Cys Cys Gln Pro Cys Val Val Asn Glu Tyr Tyr Tyr
370 375 380
Arg Lys Lys Cys Glu Ser Ile Val Glu Pro Lys Pro Thr Leu Lys Tyr
385 390 395 400
Val Ser Phe Val Asp Glu Ser His Ile Arg Met Val Asn Gln Gln Leu
405 410 415
Leu Gly Arg Ser Leu Gln Asp Val Lys Gly Gln Glu Val Pro Arg Pro
420 425 430
Ala Met Asp Phe Thr Asp Leu Ser Arg Leu Pro Leu Ala Leu His Asp
435 440 445
Thr Pro Pro Ile Pro Gly Gln Pro Glu Glu Ile Gln Leu Leu Arg Lys
450 455 460
Glu Ala Thr Pro Arg Ser Arg Asp Ser Pro Val Trp Cys Gln Cys Gly
465 470 475 480
Ser Cys Leu Pro Ser Gln Leu Pro Glu Ser His Arg Cys Leu Glu Glu
485 490 495
Leu Cys Cys Arg Lys Lys Pro Gly Ala Cys Ile Thr Thr Ser Glu Leu
500 505 510
Phe Arg Lys Leu Val Leu Ser Arg His Val Leu Gln Phe Leu Leu Leu
515 520 525
Tyr Gln Glu Pro Leu Leu Ala Leu Asp Val Asp Ser Thr Asn Ser Arg
530 535 540
Leu Arg His Cys Ala Tyr Arg Cys Tyr Ala Thr Trp Arg Phe Gly Ser
545 550 555 560
Gln Asp Met Ala Asp Phe Ala Ile Leu Pro Ser Cys Cys Arg Trp Arg
565 570 575
Ile Arg Lys Glu Phe Pro Lys Ser Glu Gly Gln Tyr Ser Gly Phe Lys
580 585 590
Ser Pro Tyr
595
<210> 2
<211> 9
<212> PRT
<213> 智人
<400> 2
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1 5
<210> 3
<211> 10
<212> PRT
<213> 智人
<400> 3
Gly His Asn Tyr Thr Thr Arg Asn Ile Leu
1 5 10
<210> 4
<211> 13
<212> PRT
<213> 智人
<400> 4
Asp Phe Pro Gly His Asn Tyr Thr Thr Arg Asn Ile Leu
1 5 10
<210> 5
<211> 17
<212> PRT
<213> 智人
<400> 5
Gly His Asn Tyr Thr Thr Arg Asn Ile Leu Pro Gly Leu Asn Ile Thr
1 5 10 15
Cys
<210> 6
<211> 209
<212> PRT
<213> 智人
<400> 6
Met Pro Ala Cys Cys Ser Cys Ser Asp Val Phe Gln Tyr Glu Thr Asn
1 5 10 15
Lys Val Thr Arg Ile Gln Ser Met Asn Tyr Gly Thr Ile Lys Trp Phe
20 25 30
Phe His Val Ile Ile Phe Ser Tyr Val Cys Phe Ala Leu Val Ser Asp
35 40 45
Lys Leu Tyr Gln Arg Lys Glu Pro Val Ile Ser Ser Val His Thr Lys
50 55 60
Val Lys Gly Ile Ala Glu Val Lys Glu Glu Ile Val Glu Asn Gly Val
65 70 75 80
Lys Lys Leu Val His Ser Val Phe Asp Thr Ala Asp Tyr Thr Phe Pro
85 90 95
Leu Gln Gly Asn Ser Phe Phe Val Met Thr Asn Phe Leu Lys Thr Glu
100 105 110
Gly Gln Glu Gln Arg Leu Cys Pro Glu Tyr Pro Thr Arg Arg Thr Leu
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Cys Ser Ser Asp Arg Gly Cys Lys Lys Gly Trp Met Asp Pro Gln Ser
130 135 140
Lys Gly Ile Gln Thr Gly Arg Cys Val Val His Glu Gly Asn Gln Lys
145 150 155 160
Thr Cys Glu Val Ser Ala Trp Cys Pro Ile Glu Ala Val Glu Glu Ala
165 170 175
Pro Arg Pro Ala Leu Leu Asn Ser Ala Glu Asn Phe Thr Val Leu Ile
180 185 190
Lys Asn Asn Ile Asp Phe Pro Gly His Asn Tyr Thr Thr Arg Asn Ile
195 200 205
Leu
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<212> PRT
<213> 智人
<400> 7
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1 5 10 15
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<212> PRT
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<212> DNA
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gagatattgt gaggacaaat tgaga 25
<210> 13
<211> 25
<212> DNA
<213> 智人
<400> 13
cccgcagagc aaaggaattc agacc 25

Claims (53)

1.在不响应于或不再响应于化学治疗和/或放射治疗的个体中治疗癌症的方法，所述方法包括以下从而在所述个体中治疗癌症：
-提供不响应于或不再响应于化学治疗剂和/或放射治疗的个体；
-向所述个体施用P2X7受体靶向治疗；
其中所述P2X7受体对ATP的响应受损，使得其在正常生理条件下不能形成凋亡孔。
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述P2X7受体靶向治疗是与P2X7受体结合的分子，所述P2X7受体对ATP的响应受损，使得其在正常生理条件下不能形成凋亡孔。
3.根据权利要求1所述的方法，其中所述P2X7受体靶向治疗是诱导针对P2X7受体的免疫应答的分子，所述P2X7受体对ATP的响应受损，使得其在正常生理条件下不能形成凋亡孔。
4.根据权利要求1所述的方法，其中所述P2X7受体靶向治疗是降低P2X7受体水平的分子，所述P2X7受体对ATP的响应受损，使得其在正常生理条件下不能形成凋亡孔。
5.根据权利要求2所述的方法，其中所述与P2X7受体结合的分子是抗体或基于细胞的治疗。
6.根据权利要求3所述的方法，其中所述诱导针对P2X7受体的免疫应答的分子是在所述个体中的免疫原，其形式为P2X7受体，或能够在所述个体中诱导针对P2X7受体的免疫应答的P2X7受体片段，其中所述P2X7受体对ATP的响应受损，使得其在正常生理条件下不能形成凋亡孔。
7.根据权利要求4所述的方法，其中所述降低P2X7受体水平的分子是干扰RNA。
8.在不响应于或不再响应于化学治疗和/或放射治疗的个体中治疗癌症的方法，所述方法包括以下从而在所述个体中治疗癌症：
-提供不响应于或不再响应于化学治疗剂的个体；
-在所述个体中提供完整抗体或其包含用于与所述个体表达的P2X7受体结合的可变结构域的片段；
-其中所述P2X7受体对ATP的响应受损，使得其在正常生理条件下不能形成凋亡孔。
9.权利要求1至8中任一项所述的方法，其中所述抗体片段选自dAb、Fab、Fd、Fv、F(ab’)2和scFv。
10.权利要求1至9中任一项所述的方法，其中所述抗体或其片段不与功能性P2X7受体结合。
11.权利要求1至10中任一项所述的方法，其中抗体或其片段与根据SEQ ID NO：1至11中任一项中所示的氨基酸序列结合。
12.根据权利要求11所述的方法，其中抗体或其片段与根据SEQ ID NO：2至5中任一项中所示的氨基酸序列结合。
13.在不响应于或不再响应于化学治疗和/或放射治疗的个体中治疗癌症的方法，所述方法包括以下从而在所述个体中治疗癌症：
-提供不响应于或不再响应于化学治疗剂的个体；
-在所述个体中提供靶向P2X7受体表达癌细胞的基于细胞的治疗；
-其中所述P2X7受体对ATP的响应受损，使得其在正常生理条件下不能形成凋亡孔。
14.根据权利要求13所述的方法，其中所述靶向P2X7受体表达癌细胞的基于细胞的治疗是具有与P2X7受体表达癌细胞结合的能力的细胞毒性细胞。
15.根据权利要求14所述的方法，其中所述具有与P2X7受体表达癌细胞结合的能力的细胞毒性细胞是CAR-T细胞。
16.根据权利要求13至15中任一项所述的方法，其中所述细胞毒性细胞，优选CAR-T细胞，表达包含抗原识别结构域和信号传导结构域的嵌合抗原受体，其中所述抗原识别结构域识别功能失调或无功能P2X7受体(即P2X7受体对ATP的响应受损，使得其在正常生理条件下不能形成凋亡孔)。
17.根据权利要求16所述的方法，其中与野生型(功能性)P2X7受体的ATP结合能力相比，所述功能失调或无功能P2X7受体结合ATP的能力降低。
18.根据权利要求16或17所述的方法，其中所述功能失调或无功能P2X7受体具有使所述受体功能失调或无功能的构象变化。
19.根据权利要求18所述的方法，其中所述抗原识别结构域识别包含从所述功能失调P2X7受体的第200位氨基酸甘氨酸跨至第216位氨基酸半胱氨酸的一个或更多个氨基酸残基的表位。
20.根据权利要求16至19中任一项所述的方法，其中所述抗原识别结构域与和所述功能失调或无功能P2X7受体结合的抗体或其片段具有氨基酸序列同源性，所述和所述功能失调或无功能P2X7受体结合的抗体或其片段包括根据本文中所述的任何抗体或其片段。
21.根据权利要求16至20中任一项所述的方法，其中所述抗原识别结构域与和功能失调或无功能P2X7受体结合的抗体的片段抗原结合(Fab)部分、单链可变片段(scFv)或单抗体结构域(dAb)具有氨基酸序列同源性。
22.根据权利要求16至21中任一项所述的方法，其中所述抗原识别结构域与和功能失调P2X7受体结合的多价单链可变片段(scFv)具有氨基酸序列同源性。
23.根据权利要求22所述的方法，其中所述多价单链可变片段(scFv)可以是二价或三价scFv。
24.根据权利要求16至23中任一项所述的方法，其中所述信号传导结构域可包含来源于激活受体的部分。
25.根据权利要求24所述的方法，其中所述激活受体是CD3共受体复合物的成员。
26.根据权利要求25所述的方法，其中来源于所述CD3共受体复合物的部分是CD3-ζ。
27.根据权利要求25所述的方法，其中所述激活受体是Fc受体，优选地，所述来源于所述Fc受体的部分是FcεRI或FcγRI。
28.根据权利要求16至27中任一项所述的方法，其中所述信号传导结构域包含来源于共刺激受体的部分。
29.根据权利要求28所述的方法，其中所述信号传导结构域包含来源于激活受体的部分和来源于共刺激受体的部分。
30.根据权利要求28或29所述的方法，其中所述共刺激受体选自CD27、CD28、CD30、CD40、DAP10、OX40、4-1BB(CD137)和ICOS。
31.根据权利要求13至30中任一项所述的方法，其中所述细胞毒性细胞是任何以下细胞：
·白细胞，
·外周血单个核细胞(PBMC)，
·淋巴细胞，
·T细胞，
·CD4+ T细胞，
·CD8+ T细胞，
·自然杀伤细胞，或
·自然杀伤T细胞。
32.在不响应于或不再响应于化学治疗和/或放射治疗的个体中治疗癌症的方法，所述方法包括以下从而在所述个体中治疗癌症：
-提供不响应于或不再响应于化学治疗的个体；
-在所述个体中形成针对该个体所表达的P2X7受体的免疫应答；
其中所述P2X7受体对ATP的响应受损，使得其在正常生理条件下不能形成凋亡孔。
33.权利要求32所述的方法，其中所述免疫应答通过在所述个体中提供免疫原来形成，所述免疫原的形式为P2X7受体，或能够在所述个体中诱导针对P2X7受体的免疫应答的P2X7受体片段，其中所述P2X7受体对ATP的响应受损，使得其在正常生理条件下不能形成凋亡孔。
34.权利要求32或33所述的方法，其中所述P2X7受体片段具有根据SEQ ID NO：1至10中任一项中所示的氨基酸序列。
35.权利要求32至34中任一项所述的方法，其中所述免疫原在对所述个体的初始施用中提供，从而在所述个体中形成包括IgM产生的应答。
36.权利要求32至35中任一项所述的方法，其中所述免疫原在对所述个体的初始施用中提供，从而形成包括IgM产生的应答，并且在随后的时间，在所述初始施用之外的进一步施用中提供，从而形成包括IgG产生的应答。
37.权利要求1至36中任一项所述的方法，其中所述个体不响应于或不再响应于的所述化学治疗是选自以下的一种或更多种化学治疗剂：氧氮磷杂环己烷、拓扑异构酶I抑制剂、拓扑异构酶II抑制剂、蛋白酶体抑制剂、抗叶酸剂、氮芥、乙烯亚胺衍生物、烷基磺酸盐、亚硝基脲、三氮烯、叶酸类似物、蒽环素、紫杉烷、COX-2抑制剂、嘧啶类似物、嘌呤类似物、嘌呤拮抗剂、抗代谢物、抗生素、表鬼臼毒素、基于铂的药剂、核糖核苷酸还原酶抑制剂、长春花生物碱、取代脲、肼衍生物、肾上腺皮质抑制剂、内皮抑素、喜树碱、奥沙利铂、多柔比星和多柔比星类似物、抗生素、L-天冬酰胺酶、酪氨酸激酶抑制剂、及其衍生物或变体。
38.权利要求1至36中任一项所述的方法，其中所述个体不响应于或不再响应于的所述化学治疗是选自以下的一种或更多种化学治疗剂：多柔比星、顺铂、长春新碱、达卡巴嗪(DTIC)、环磷酰胺、CPT-11、奥沙利铂、吉西他滨和5-氟尿嘧啶/亚叶酸。
39.权利要求1至36中任一项所述的方法，其中所述个体不响应于或不再响应于的所述化学治疗是选自以下的一种或更多种化学治疗剂：5FU、亚叶酸、博来霉素、依托泊苷、顺铂、卡培他滨、奥沙利铂、达卡巴嗪、环磷酰胺、长春新碱、多柔比星、伊立替康、吉西他滨、丝裂霉素-C、吉西他滨、卡铂、紫杉醇、培美曲塞、羟乙基-氯乙基亚硝基脲(HeCNU)、他莫昔芬、甲氨蝶呤、表柔比星、长春地辛、埃罗替尼、贝伐单抗、和西妥昔单抗。
40.在个体中治疗癌症的方法，所述方法包括以下从而在所述个体中治疗癌症：
-向待治疗所述癌症的所述个体施用化学治疗剂和/或放射治疗；以及
-向所述个体施用完整抗体或其包含用于与所述个体表达的P2X7受体结合的可变结构域的片段；
其中所述P2X7受体对ATP的响应受损，使得其在正常生理条件下不能形成凋亡孔。
41.权利要求40所述的方法，其中所述化学治疗剂或放射治疗与抗体或其片段同时施用。
42.权利要求41所述的方法，其中所述化学治疗剂或放射治疗与抗体或其片段顺序施用。
43.权利要求42所述的方法，其中所述化学治疗剂或放射治疗在所述抗体或其片段之前施用。
44.在个体中治疗癌症的方法，所述方法包括以下从而在所述个体中治疗癌症：
-向待治疗所述癌症的所述个体施用化学治疗剂和/或放射治疗；以及
-在所述个体中形成针对该个体所表达的P2X7受体的免疫应答；
其中所述P2X7受体对ATP的响应受损，使得其在正常生理条件下不能形成凋亡孔。
45.权利要求44所述的方法，其中所述免疫应答通过在所述个体中提供免疫原来形成，所述免疫原的形式为P2X7受体，或能够在所述个体中诱导针对P2X7受体的免疫应答的P2X7受体片段，其中所述P2X7受体对ATP的响应受损，使得其在正常生理条件下不能形成凋亡孔。
46.权利要求44或45所述的方法，其中所述P2X7受体片段具有根据SEQ ID NO：1至10中任一项中所示的氨基酸序列。
47.权利要求44至46中任一项所述的方法，其中所述免疫原在对所述个体的初始施用中提供，从而在所述个体中形成包括IgM产生的应答。
48.权利要求44至47中任一项所述的方法，其中所述免疫原在对所述个体的初始施用中提供，从而形成包括IgM产生的应答，并且在随后的时间，在所述初始施用之外的进一步施用中提供，从而形成包括IgG产生的应答。
49.权利要求1至48中任一项所述的方法，其中所述癌症选自脑癌、食管癌、口腔癌、舌癌、甲状腺癌、肺癌、胃癌、胰腺癌、肾癌、结直肠癌、直肠癌、前列腺癌、膀胱癌、宫颈癌、上皮细胞癌、皮肤癌、白血病、淋巴瘤、骨髓瘤、乳腺癌、卵巢癌、子宫内膜癌和睾丸癌。
50.根据权利要求1至49中任一项所述的方法，其中所述癌症选自肺癌、食管癌、卵巢癌、胃癌、结直肠癌、前列腺癌、膀胱癌、宫颈癌、阴道癌、上皮细胞癌、皮肤癌、血液相关癌症、乳腺癌、子宫内膜癌、子宫癌和睾丸癌。
51.权利要求1至50中任一项所述的方法，其中所述个体患有神经母细胞瘤。
52.权利要求1至50中任一项所述的方法，其中所述个体患有卵巢癌。
53.权利要求1至50中任一项所述的方法，其中所述个体患有结直肠癌。
CN202080053631.3A 2019-07-26 2020-07-24 P2x7受体靶向治疗 Pending CN114173811A (zh)

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AU2019902672A AU2019902672A0 (en) 2019-07-26 Methods of treatment
AU2019902672 2019-07-26
PCT/GB2020/051791 WO2021019222A1 (en) 2019-07-26 2020-07-24 P2x7 receptor targeted therapy

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* Cited by examiner, † Cited by third party
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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US20110229411A1 (en) * 2008-11-27 2011-09-22 Institut Gustave Roussy Use of p2x7 pathway for assessing the sensitivity of a subject to a cancer treatment

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN117771376A (zh) * 2024-02-26 2024-03-29 四川大学华西第二医院 一类化合物在注意缺陷与多动障碍中的应用及产品
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