CN114164219B

CN114164219B - 一种增强桂花香气物质合成相关OfMYB1R114基因及其编码蛋白和应用

Info

Publication number: CN114164219B
Application number: CN202210035382.6A
Authority: CN
Inventors: 岳远征; 胡宏敏; 张利琴; 严欣; 王良桂; 施婷婷
Original assignee: Nanjing Forestry University
Current assignee: Nanjing Forestry University
Priority date: 2022-01-12
Filing date: 2022-01-12
Publication date: 2023-09-08
Anticipated expiration: 2042-01-12
Also published as: CN114164219A

Abstract

本发明公开了一种增强桂花花香物质合成相关OfMYB1R114基因及其编码蛋白和应用，属于植物分子生物学领域。该OfMYB1R114基因是一种MYB1R转录因子基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明通过克隆得到基因序列的全长，并构建了超表达载体并进行本氏烟草的瞬时转化。结果发现，瞬时转化植株的桂花主要香气物质β‑紫罗兰酮的物质含量相较于对照组CK有显著上升，且其他香气物质含量也明显高于对照组CK的含量，表明OfMYB1R114在增强桂花花香物质方面发挥了重要作用，可用于桂花基因工程中提高观赏性状及遗传品质等繁育工作。

Description

一种增强桂花香气物质合成相关OfMYB1R114基因及其编码蛋白和应用

技术领域

本发明属于植物分子生物学领域，具体涉及一种增强桂花香气物质合成相关OfMYB1R114基因及其编码蛋白和应用。

背景技术

桂花(Osmanthus fragrans)，木犀科木犀属常绿阔叶观赏树种，素以香花著称。桂花的寿命长，适应性广，广泛分布于多个城市。MYB-related(简称MYB1R)转录因子家族是植物特有的一类转录因子家族，参与了次生代谢产物合成、细胞形态发生调控、细胞扩张、周期蛋白转录调控、下胚轴伸长和叶片衰老等过程，对植物的发育过程有十分重要的生物学意义。相关研究表明，MYB-related转录因子可以调控花青素和类黄酮等次生代谢产物的合成。前人对R2R3型MYB转录因子在调控桂花花香物质合成的过程进行了大量的研究工作，并取得了一定的成果。但同样为MYB家族的重大成员，MYB-related亚家族增强桂花花香物质合成的研究还未见报道。因此，研究发掘桂花基因组中调控花香物质合成的重要相关基因具有重要意义，此举将为后期桂花优良品质繁育及提升桂花观赏性状具有重要的促进作用。

发明内容

针对现有技术存在的上述问题，本发明所要解决的第一技术问题在于提供一种增强桂花香气物质合成相关OfMYB1R114基因；本发明所要解决的第二技术问题在于提供增强桂花香气物质合成相关OfMYB1R114基因的表达蛋白；本发明所要解决的第三技术问题在于提供增强桂花香气物质合成相关OfMYB1R114基因的具体应用。

为了解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案如下：

一种增强桂花香气物质合成相关OfMYB1R114基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

所述增强桂花香气物质合成相关OfMYB1R114基因的表达蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

含有所述的增强桂花香气物质合成相关OfMYB1R114基因的重组表达载体或重组菌株。

进一步的，所述重组表达载体为Super1300-OfMYB1R114。

所述的OfMYB1R114基因在增强桂花香气物质合成中的应用，具体包括以下步骤：

1)构建含有如SEQ ID NO.1所示的OfMYB1R114基因的重组表达载体；

2)将步骤1)得到的重组表达载体转化农杆菌，得到重组农杆菌；

3)将重组农杆菌通过瞬时转化注射到被侵染植物中；

4)瞬时转化植物正常生长48h，采集瞬时转化植物叶片进行GC-MS香气物质测定。

进一步的，所述农杆菌为农杆菌GV3101。

进一步的，所述植物为本氏烟草。

所述的增强桂花香气物质合成相关OfMYB1R114基因在桂花育种中的应用。

相比于现有技术，本发明的有益效果为：

本发明提供了一种增强桂花香气物质合成相关OfMYB1R114基因，是一种MYB-related转录因子基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明通过克隆得到基因序列的全长，在此基础上构建了超表达载体并进行本氏烟草的瞬时转化。结果发现，瞬时转化植物的桂花主要香气物质β-紫罗兰酮的物质含量相较于对照组CK有显著上升，且其他物质含量也明显高于对照组CK的含量，表明OfMYB1R114在增强桂花花香物质方面发挥了重要作用。作为增强桂花香气物质合成过程中重要转录因子OfMYB1R114基因，可用于桂花基因工程中提高观赏性状及遗传品质等繁育工作。

附图说明

图1为目的基因OfMYB1R114扩增产物琼脂糖凝胶电泳图；

图2为目的基因OfMYB1R114扩增片段与Super1300载体连接转化后阳性单菌落检测图；

图3为双酶切后的载体琼脂糖凝胶电泳图；

图4为转化农杆菌GV3101后的菌检琼脂糖凝胶电泳图；

图5为瞬时转化植株香气物质成分分析图；图中，横坐标的物质为VIP＞1且p＜0.05差异性显著的物质；

图6为瞬时转化植株半定量电泳图；图中，泳道L1-L4为对照组瞬时转化植株，泳道L5-L10为目的基因瞬时转化植株的条带。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明进一步进行描述。以下实施例中，未详细叙述的操作均为常规生物学实验操作，可参照分子生物学实验手册以及现有公开的期刊文献等进行，或者按照试剂盒和产品说明书进行。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

本申请所用材料为日香桂盛花期花朵，所用的本氏烟草实生苗由南京林业大学王良桂课题组提供。2021年6月，将瞬时超表达载体注射入生长健康35天的本氏烟草叶片中，注射后放置于生长室(日照：15/9h，144μmol·m^-2·s^-1)，正常生长2天后，用无菌剪刀剪下注射过超表载体的叶片装入灭菌的离心管中，立即放入液氮中速冻，然后置于-80℃冰箱内保存。

本实施例采用TIANGEN植物RNA提取试剂盒(DP432)提取植物总RNA。采用TaKaRaPrimeScript^TM RT Master Mix(Perfect Real Time)反转录试剂盒将所提取到的RNA反转录成cDNA，最后得到的cDNA加水稀释10倍后于-20℃冰箱保存。

实施例1

一、构建桂花OfMYB1R114基因的超表达载体

(1)获取目的基因

根据南京林业大学王良桂课题组已发表的桂花全基因组数据库(http：//117.78.20.255/)，筛选得到1个基因序列，与模式植物拟南芥的序列进行比对，判断该基因属于MYB-related基因家族，根据该基因家族成员在染色体上的位置命名为OfMYB1R114。

(2)设计引物

利用BioXM软件对该基因的核苷酸全长序列进行酶切位点分析，选择KpnI和SmaI作为限制性内切酶酶切位点。利用CE design软件设计引物。按要求进行相关信息的填写，具体包括1300载体(Super1300载体)上的酶切位点附近的序列、目的基因全长、按照5′端和3′端的顺序填写酶切位点，即可得到扩增载体MYB1R114-1300的引物。同时，从NCBI数据库(https：//www.ncbi.nlm.nih.gov/)提取1300载体的正向引物和本氏烟草的内参基因L25序列，将设计好的序列由捷瑞生物公司合成，具体如下：

(3)目的基因扩增

以稀释10倍的桂花cDNA为模板，进行PCR扩增，体系(20μL)如下：

正向引物MYB1R114-1300F 1μL，反向引物MYB1R114-1300R 1μL，cDNA 1μL，PrimeSTAR 10μL(高保真PCR酶购买于宝日医生物技术(北京)有限公司高速高保真PCR酶R045A)，ddH₂O 7μL。反应条件为：98℃变性10s；58℃退火15s；72℃延伸1min，35个循环；72℃总延伸10min；16℃终止反应。将获得的扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳，然后利用试剂盒(湖南艾科瑞生物工程有限公司AG21005)进行切胶回收。

(4)双酶切Super1300载体

提前将双酶切Super1300载体从-80℃超低温冰箱中取出进行活化和摇菌，按照质粒提取试剂盒(北京天根生化科技有限公司)提取Super1300载体质粒，随后进行双酶切实验，体系(20μL)为：限制性内切酶KpnI 1μL，限制性内切酶SmaI 1μL，Buffer 2μL(Buffer为Takara限制性内切酶附带)，载体质粒X μL，ddH₂O补足至20μL。

其中X(μL)＝1000ng/载体质粒浓度(ng/μL)。将离心管微微震荡，使其混匀，瞬时离心6s，置于37℃的水浴锅内培养1h。将双酶切后的载体进行琼脂糖凝胶电泳，然后利用试剂盒进行切胶回收(湖南艾科瑞生物工程有限公司)，下同。

(5)扩增片段与Super1300载体的连接转化

连接体系(20μL)如下：目的基因回收产物X μL，Super1300载体双酶切回收产物YμL，连接酶2μL，Buffer 1μL，ddH₂O Add to 20μL(连接酶和Buffer源于南京诺唯赞生物科技有限公司同源重组试剂c112)。

其中X(μL)＝200ng/目的基因回收产物浓度(ng/μL)，Y(μL)＝200ng/质粒双酶切回收产物浓度(ng/μL)。将离心管微微震荡，使其混匀，瞬时离心6s，置于37℃的水浴锅内培养30min，冰上2min。

转化：超净工作台内，用移液枪取5μL的连接产物于50μL的Trelief^TM 5α感受态细胞，轻弹混匀，冰浴5min，42℃水浴60s，再冰浴2min，加250μL液体LB(不含Kana)，37℃，200rpm的摇床内孵育30min。

涂板：取200μL孵育后的菌液，用灭菌的玻璃棒均匀涂布在LB固体培养基上(内含50mg/L的Kana)并晾干，用封口膜后倒置在37℃恒温培养箱内培养12-14h。

(6)阳性单菌落检测和测序

当培养基上长出菌后，于超净工作台内进行单菌落检测。每个基因挑取8个饱满的单菌落，依序依次在含Kana抗性的LB固体培养基上进行备份，并用无菌牙签将相应的单菌落沾取至以下20μL体系中进行菌检：1300F 1μL，OfMYB1R114-1300R 1μL，Green Mix 10μL(Green Mix购于南京诺唯赞生物科技有限公司)，ddH₂O 8μL。

PCR反应条件为：94℃预变性3min；94℃变性30s；58℃退火30s；72℃延伸1min，35个循环；72℃总延伸10min；16℃终止反应。将获得的扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳，挑取3个长度正确的阳性单菌落送测，测得OfMYB1R114基因的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，选取碱基错配率最低的阳性单菌落提取质粒进行后续实验。

二、转化农杆菌GV3101

(1)将保存在-80℃超低温冰箱内的GV3101感受态取出放在冰上融化。每33μL感受态加入1μL质粒，吸打混匀后依次冰浴20min、液氨速冻5min、37℃水浴5min、冰浴5min。

(2)加500μL无抗性的LB液体培养基，28℃，200rpm摇床上培养1h。

(3)培养完成后，将菌液6000rpm，离心1min，弃去部分上清液，留100μL均匀涂布于LB固体培养基上(内含50mg/L Kana)，封口膜密封，倒置于28℃培养箱中培养40-48h。

(4)菌检和备份：菌检中的目的条带正确且亮度一致，则将备份的板子中相对应的菌落挑入LB液体培养基(内含50mg/L Kana)中摇菌，再将菌液和50％甘油按3∶7的体积比保菌，液氮中速冻后保存在-80℃超低温冰箱内。

三、侵染本氏烟草并进行香气物质GC-MS测定

(1)摇菌：将Super1300空载、P19辅助表达载体和已转入农杆菌的GFP：：Super1300-OfMYB1R114目标基因融合表达载体的菌液于-80℃取出常温融化至冰水混合状态后插入冰中融化，按照300μL菌液加入30mL LB液体培养基中(含Kana 10μg·mL^-1)，28℃、200rpm避光振荡培养，直至菌液OD₆₀₀＝0.6-0.8之间。

(2)准备混合菌液：称取0.0196g的乙酰丁香酮(AS)粉末，使用二甲基亚砜助溶(在通风橱操作)，再加入适量无菌水定容到100ml，获得母液，取母液15ml加入85ml的无菌水，从而获得150μmol·L^-1的AS；称取0.2035g的MgCl₂和0.2135g的2-(N-吗啉)乙磺酸一水物(MES)加入到配好的150μmol·L^-1的AS溶液中；将菌液时进行离心(4℃、5000rpm、10min)，弃上清，收集菌体，使用当天配制的缓冲液进行重悬，最后按照最佳比例混合(P19辅助载体：目的基因(V∶V)＝5∶7)，充分震荡混匀后活化3h。

(3)侵染：生长健壮的35-40d左右的本氏烟草提前2天控水，使用1mL一次性注射器将混合菌液注入本氏烟草叶片背面。

(4)培养：将注射过目的基因混合菌液的瞬时转化植株和注射过空载体菌液的瞬时转化植株浇透水，放于生长室中培养2天(日照：15/9h，144μmol·m^-2·s^-1)。

(5)瞬时转化植株的香气物质测定：室温下(25±2℃)用无菌剪刀剪下0.4g本氏烟草叶片，记录叶片重量后放置于密封的1ml萃取瓶中，加入内标溶液(1/10000葵酸乙酯∶1微的葵酸乙酯标样加入到10ml的甲醇)后摇晃混匀后平衡15min；在温度45℃的水浴锅中，密封后用65μm DB/5MS的萃取头插入萃取瓶中部，萃取30min后将萃取头插入色谱柱TRACETR-5 MS C30m×0.25mm×0.25gym)，载气为高纯度氦气(He)，氦气流速为1mL/min，不分流进样，进样口温度250℃，解吸附时间为3min；温度程序为：首先温度60℃，保持2min，第一个升温程序为60℃上升到150℃，速度为5℃/min，第二个升温程序为150℃升至250℃速度为10℃/min，再保持1min；质谱条件为离子源温度250℃，电离方式EI，电子能量70eV。

(6)瞬时转化植株的香气物质分析：将数据中的硅氧化物杂质去除后，计算出各种物质的相对含量，将物质的相对含量导入SIMCA5.0中计算VIP＞1的物质并对其中差异性p＜0.05的物质进行统计分析，表明OfMYB1R114对差异性p＜0.05的挥发性有机物质具有重要的调控作用。

(7)瞬时转化植株的半定量验证：采用TIANGEN植物RNA提取试剂盒(DP432)提取植物总RNA。采用TaKaRa PrimeScript^TM RT Master Mix(Perfect Real Time)反转录试剂盒将所提取到的RNA反转录成cDNA，最后得到的cDNA加水稀释10倍后于取1μL作为模板，加入1300F 1μL，MYB1R114-1300R 1μL，Green Mix 10μL，ddH₂O 7μL，配成20μL的体系进行半定量实验，半定量实验中PCR程序为：94℃预变性3min；94℃变性30s；58℃退火30s；72℃延伸45s，35个循环；72℃总延伸10min；16℃终止反应；将获得的PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳。

序列表

<110> 南京林业大学

<120> 一种增强桂花香气物质合成相关ofMYB1R114基因及其编码蛋白和应用

<130> 1

<160> 8

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 2319

<212> DNA

<213> OfMYB1R114基因(Artificial)

<400> 1

atggacccat attcgtctgg agaagaactc gctgtcaaga caaggaaacc atatacaatc 60

actaagcaaa gggagcgatg gacagatgag gagcataata ggtttctaga ggcccttaag 120

ctctatggac gtgcttggca acgaatagaa gaacatgtag gaaccaagac tgctgtgcag 180

atcagaagtc atgcacaaaa gttttttaca aagctagaga aagaggcttt tattaaagga 240

gttccaattg gacatactct tgacattgaa attcctcctc cgcgtccgaa aaagaaacca 300

agcaatcctt atccaaggaa gacaagtgca ggagctccta cttctcagac agaagtgaag 360

gatggtaaaa tgttggccct tgtttcttct ttgtatgtgc ataaaaccac actggacttg 420

gagaaagaac cagttcctga tgagaaacat ggtgatgatg gaaagatggg aagcactaag 480

ctgtacgaag atgagggcag tgtctctgag gctgtgaccc ttctcaagac agttacttgc 540

acctctccat cttcaataat caaaagttcc ttgacaactt cagtttcacg tagaaactca 600

tacagtgaat ttctcctgag ctctaaaggg gcaaataatg aggatgaaac aactgaatcc 660

catatcacca ttgaacaaaa aggacatcag aaagacaaat ttgataacag caagctgtct 720

caggattatg gcttatgtaa cactgtgaac attggaaatt ctcaactttt acatgagaaa 780

tctgtacaag gtgaagtaac agatgagctg aatcattcca caaatattga tgcatttctg 840

aacagtgatg tgcaagcctc tcagaactat cctagacatg ttgcagttca cattctggat 900

gggagcttag gaatgaatac acagaatgtt tccccagtta tacaatatca agaacctatg 960

tttcatcaaa tggggggagt taatggccac ccaaatctat ttatgaatcc gacttcatct 1020

actgcttctg aacatcaaag taatggatcg tctttcattc atcaatcatt accgagtttc 1080

catccaatct caaacccaat ccccaatcaa gaagattacc gatcatttct gcacatgtca 1140

tctatgtttt caagtcttat tgtatctgct ttgttacaaa atccagcagc ccatgccgct 1200

gcaagctttg cagctccata ctggccatgt acaaacatgg attctccagc agaccaccct 1260

gcaagaggat ttcagtcagg gcagataaat tcagctccta gtatggaagc aattgctgca 1320

gctacagtag cagctgcaac ggcatggtgg acggcccatg gcttactccc attttgttct 1380

ccatttcacc cgggctttac atgttctccc tcatcaacat cagcagttcc aatggatatg 1440

agtaaagata gaggagctaa tactgaaaga agagaaaatg ctcctgatcc cgccacctta 1500

ggcggtcaac tactagaacc agagtgttct gaggctttgc aagaacagca ttcagctttg 1560

aagtcaccag tgttgtcgtt gtcagattcc ttggaaagtg aaggtgcaca gcgaaatgtt 1620

ggattagctg ctactgaaac tgaacggact gcagatgcag caatgctgaa tgatttgaac 1680

aagtcaaaaa gcagaaagca ggtggaccgt tcttcatgtg gatccaacac accttccagc 1740

agtgaagtag aggcagatgc tttggagaat cattcaaaag gaaaagaaga gaagcatgtg 1800

aaatataagg agtcaaaaga acctgatgta aatcatatag ctcttgactc cactagtcga 1860

cgttgtagaa gcaccagcaa tataagtgat tcttggaagg aagtgtctca agggggacga 1920

ctggcttttc aggcactctt ctctagagaa gtattgccac aaagtttttc cccaccccat 1980

ggtttagaca aaagggattt gaaaaataac gataagggca tagaaagttc acaagagaaa 2040

gatgaagatg gattgcagtt agaccttaat ggtaagacgt gggatacctc ttctgggaag 2100

ctaagaatgg aagataatgc tactttgata ggtaaaaaca aagaagaggg actcctgagt 2160

atgggacttg gatacgcaaa gctaaaagct cgtagaacag ggtttaaacc ttacaaaagg 2220

tgcacgatag aggcaaaaga gagctggtca caggacaatg gccaggaaga agagaaaggc 2280

cctaagagaa tacgcctaga aggagaggct tctacctaa 2319

<210> 2

<211> 772

<212> PRT

<213> OfMYB1R114基因的表达蛋白(Artificial)

<400> 2

Met Asp Pro Tyr Ser Ser Gly Glu Glu Leu Ala Val Lys Thr Arg Lys

1 5 10 15

Pro Tyr Thr Ile Thr Lys Gln Arg Glu Arg Trp Thr Asp Glu Glu His

20 25 30

Asn Arg Phe Leu Glu Ala Leu Lys Leu Tyr Gly Arg Ala Trp Gln Arg

35 40 45

Ile Glu Glu His Val Gly Thr Lys Thr Ala Val Gln Ile Arg Ser His

50 55 60

Ala Gln Lys Phe Phe Thr Lys Leu Glu Lys Glu Ala Phe Ile Lys Gly

65 70 75 80

Val Pro Ile Gly His Thr Leu Asp Ile Glu Ile Pro Pro Pro Arg Pro

85 90 95

Lys Lys Lys Pro Ser Asn Pro Tyr Pro Arg Lys Thr Ser Ala Gly Ala

100 105 110

Pro Thr Ser Gln Thr Glu Val Lys Asp Gly Lys Met Leu Ala Leu Val

115 120 125

Ser Ser Leu Tyr Val His Lys Thr Thr Leu Asp Leu Glu Lys Glu Pro

130 135 140

Val Pro Asp Glu Lys His Gly Asp Asp Gly Lys Met Gly Ser Thr Lys

145 150 155 160

Leu Tyr Glu Asp Glu Gly Ser Val Ser Glu Ala Val Thr Leu Leu Lys

165 170 175

Thr Val Thr Cys Thr Ser Pro Ser Ser Ile Ile Lys Ser Ser Leu Thr

180 185 190

Thr Ser Val Ser Arg Arg Asn Ser Tyr Ser Glu Phe Leu Leu Ser Ser

195 200 205

Lys Gly Ala Asn Asn Glu Asp Glu Thr Thr Glu Ser His Ile Thr Ile

210 215 220

Glu Gln Lys Gly His Gln Lys Asp Lys Phe Asp Asn Ser Lys Leu Ser

225 230 235 240

Gln Asp Tyr Gly Leu Cys Asn Thr Val Asn Ile Gly Asn Ser Gln Leu

245 250 255

Leu His Glu Lys Ser Val Gln Gly Glu Val Thr Asp Glu Leu Asn His

260 265 270

Ser Thr Asn Ile Asp Ala Phe Leu Asn Ser Asp Val Gln Ala Ser Gln

275 280 285

Asn Tyr Pro Arg His Val Ala Val His Ile Leu Asp Gly Ser Leu Gly

290 295 300

Met Asn Thr Gln Asn Val Ser Pro Val Ile Gln Tyr Gln Glu Pro Met

305 310 315 320

Phe His Gln Met Gly Gly Val Asn Gly His Pro Asn Leu Phe Met Asn

325 330 335

Pro Thr Ser Ser Thr Ala Ser Glu His Gln Ser Asn Gly Ser Ser Phe

340 345 350

Ile His Gln Ser Leu Pro Ser Phe His Pro Ile Ser Asn Pro Ile Pro

355 360 365

Asn Gln Glu Asp Tyr Arg Ser Phe Leu His Met Ser Ser Met Phe Ser

370 375 380

Ser Leu Ile Val Ser Ala Leu Leu Gln Asn Pro Ala Ala His Ala Ala

385 390 395 400

Ala Ser Phe Ala Ala Pro Tyr Trp Pro Cys Thr Asn Met Asp Ser Pro

405 410 415

Ala Asp His Pro Ala Arg Gly Phe Gln Ser Gly Gln Ile Asn Ser Ala

420 425 430

Pro Ser Met Glu Ala Ile Ala Ala Ala Thr Val Ala Ala Ala Thr Ala

435 440 445

Trp Trp Thr Ala His Gly Leu Leu Pro Phe Cys Ser Pro Phe His Pro

450 455 460

Gly Phe Thr Cys Ser Pro Ser Ser Thr Ser Ala Val Pro Met Asp Met

465 470 475 480

Ser Lys Asp Arg Gly Ala Asn Thr Glu Arg Arg Glu Asn Ala Pro Asp

485 490 495

Pro Ala Thr Leu Gly Gly Gln Leu Leu Glu Pro Glu Cys Ser Glu Ala

500 505 510

Leu Gln Glu Gln His Ser Ala Leu Lys Ser Pro Val Leu Ser Leu Ser

515 520 525

Asp Ser Leu Glu Ser Glu Gly Ala Gln Arg Asn Val Gly Leu Ala Ala

530 535 540

Thr Glu Thr Glu Arg Thr Ala Asp Ala Ala Met Leu Asn Asp Leu Asn

545 550 555 560

Lys Ser Lys Ser Arg Lys Gln Val Asp Arg Ser Ser Cys Gly Ser Asn

565 570 575

Thr Pro Ser Ser Ser Glu Val Glu Ala Asp Ala Leu Glu Asn His Ser

580 585 590

Lys Gly Lys Glu Glu Lys His Val Lys Tyr Lys Glu Ser Lys Glu Pro

595 600 605

Asp Val Asn His Ile Ala Leu Asp Ser Thr Ser Arg Arg Cys Arg Ser

610 615 620

Thr Ser Asn Ile Ser Asp Ser Trp Lys Glu Val Ser Gln Gly Gly Arg

625 630 635 640

Leu Ala Phe Gln Ala Leu Phe Ser Arg Glu Val Leu Pro Gln Ser Phe

645 650 655

Ser Pro Pro His Gly Leu Asp Lys Arg Asp Leu Lys Asn Asn Asp Lys

660 665 670

Gly Ile Glu Ser Ser Gln Glu Lys Asp Glu Asp Gly Leu Gln Leu Asp

675 680 685

Leu Asn Gly Lys Thr Trp Asp Thr Ser Ser Gly Lys Leu Arg Met Glu

690 695 700

Asp Asn Ala Thr Leu Ile Gly Lys Asn Lys Glu Glu Gly Leu Leu Ser

705 710 715 720

Met Gly Leu Gly Tyr Ala Lys Leu Lys Ala Arg Arg Thr Gly Phe Lys

725 730 735

Pro Tyr Lys Arg Cys Thr Ile Glu Ala Lys Glu Ser Trp Ser Gln Asp

740 745 750

Asn Gly Gln Glu Glu Glu Lys Gly Pro Lys Arg Ile Arg Leu Glu Gly

755 760 765

Glu Ala Ser Thr

770

<210> 3

<211> 47

<212> DNA

<213> MYB1R114-1300F(Artificial)

<400> 3

aagcttctgc aggggcccgg gatggaatcc aaagtttata ggaatcc 47

<210> 4

<211> 45

<212> DNA

<213> MYB1R114-1300R(Artificial)

<400> 4

gcccttgctc accatggtac cgacaaggca actctcatgt tgtga 45

<210> 5

<211> 21

<212> DNA

<213> L25F(Artificial)

<400> 5

gctaaggttg ccaaggctgt c 21

<210> 6

<211> 25

<212> DNA

<213> L25R(Artificial)

<400> 6

taaggtattg actttctttg tctga 25

<210> 7

<211> 21

<212> DNA

<213> OfMYB1R114F(Artificial)

<400> 7

atcgcctgga gtgaatgcta c 21

<210> 8

<211> 22

<212> DNA

<213> OfMYB1R114R(Artificial)

<400> 8

caccaagtaa tgcgttcaca gc 22

Claims

1.增强桂花香气物质合成相关OfMYB1R114基因在增强桂花香气物质合成中的应用，其特征在于，所述OfMYB1R114基因核苷酸序列如SEQ ID NO .1所示；所述桂花香气物质为壬醛、β-紫罗兰酮。

2.根据权利要求1所述的OfMYB1R114基因在增强桂花香气物质合成中的应用，其特征在于，包括以下步骤：

1)构建含有如SEQ ID NO .1所示的OfMYB1R114基因的重组表达载体；

3)将重组农杆菌通过瞬时转化注射到本氏烟草或桂花中；

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述农杆菌为农杆菌GV3101。

4.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述植物为本氏烟草。

5.增强桂花香气物质合成相关OfMYB1R114基因在桂花育种中的应用，其特征在于，所述OfMYB1R114基因核苷酸序列如SEQ ID NO .1所示；所述桂花育种为增强桂花香气物质合成；所述桂花香气物质为壬醛、β-紫罗兰酮。