CN114146009A

CN114146009A - 一种dha抗衰抗炎纳米组合物及其制备方法和应用

Info

Publication number: CN114146009A
Application number: CN202111537043.XA
Authority: CN
Inventors: 刘卫; 李翔宇; 吴雨桐; 肖敏; 罗丹; 胡雄; 沈慧慧; 雷俊华
Original assignee: Wuhan Zhongke Optics Valley Green Biotechnology Co ltd; Wuhan Best Carrier Biotechnology Co ltd
Current assignee: Wuhan Zhongke Optics Valley Green Biotechnology Co ltd; Wuhan Best Carrier Biotechnology Co ltd
Priority date: 2021-12-13
Filing date: 2021-12-13
Publication date: 2022-03-08
Anticipated expiration: 2041-12-13
Also published as: CN114146009B

Abstract

本发明属于化妆品技术领域，具体涉及一种DHA抗衰抗炎纳米组合物及其制备方法和应用。本发明提供了一种DHA抗衰抗炎纳米组合物，含有DHA、麦角硫因、玻色因、维生素E、磷脂、胆固醇、柔性剂、多元醇和水，其中DHA含量为0.1～20％，麦角硫因含量为0.01～20％，玻色因含量为0.01～20％，维生素E含量为0.1～20％。本发明所述纳米组合物中DHA、麦角硫因、玻色因和维生素E能协同增效，纳米组合物具有的柔性脂质囊泡结构与皮肤细胞结构接近，生物相容性好，能显著提高活性物的透皮性能，并能在皮肤中长时间滞留，提高其生物利用度，具有优异的抗衰抗炎功效，且纳米组合物对皮肤温和无刺激，在化妆品中使用方便。

Description

一种DHA抗衰抗炎纳米组合物及其制备方法和应用

技术领域

本发明属于化妆品技术领域，具体涉及一种DHA抗衰抗炎纳米组合物及其制备方法和应用。

背景技术

皮肤暴露在紫外线照射下，或压力过大时，细胞内会生成过量的活性氧(ROS)，引起衰老相关基因表达，诱发炎症级联反应并降低弹力蛋白和胶原蛋白的表达量，导致皮肤出现松弛、皱纹等老化现象。

二十二碳六烯酸(DHA)是人体所必需的一种多不饱和脂肪酸，通常存在于深海鱼鱼油中，DHA是神经系统细胞生长及维持的一种主要元素，是大脑和视网膜的重要构成脂肪酸，广泛用于孕妇、婴幼儿奶制品及保健品中。DHA还能抑制炎症发生并具有抗氧化、抗衰老作用，DHA抗炎作用是通过干扰炎性细胞内信号传导途径来抑制炎症反应；随着年龄的增加，人血小板、红细胞膜脂质中DHA含量减少，SOD活性降低，补充DHA可使红细胞膜脂质中DHA含量增加，SOD活性增强，故DHA具有抗氧化、抗衰老作用。

然而，DHA易被氧化，极不稳定，其氧化产物与氨基化合物结合生成具有强烈腥臭味的胺类物质，故其鲜少用于化妆品中；并且由于皮肤自有的屏障功能，使得DHA等活性物很难透过角质层到达真皮层发挥作用，生物利用度低，无法充分发挥活性物的功效。

发明内容

针对背景技术的不足，本发明提供了一种DHA抗衰抗炎纳米组合物及其制备方法和应用，保持DHA的稳定性，促进细胞对DHA的吸收，提高生物利用度，增强抗衰抗炎功效。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种DHA抗衰抗炎纳米组合物，包括以下质量百分含量的组分：DHA0.1～20％、麦角硫因0.01～20％、玻色因0.01～20％、维生素E0.1～20％和余量的载体辅料；所述载体辅料包括磷脂、胆固醇、柔性剂、多元醇和水。

优选的，所述胆固醇占所述纳米组合物总质量的0.1～5％。

优选的，所述磷脂包括脑磷脂、卵磷脂类磷脂和磷脂酰胆碱类磷脂中的一种或多种；所述磷脂占所述纳米组合物总质量的0.5～20％。

优选的，所述柔性剂包括胆酸类柔性剂、聚乙二醇类柔性剂、聚甘油类柔性剂、月桂酰类柔性剂和蔗糖类柔性剂中的一种或多种；所述柔性剂占所述纳米组合物总质量的1～20％。

优选的，所述多元醇包括丙二醇、丁二醇、1,2-戊二醇、1,2-己二醇、1,3-丙二醇、二丙二醇、山梨醇、甲基丙二醇、辛甘醇和甘油中的一种或多种；所述多元醇占所述纳米组合物总质量的1～40％。

优选的，所述纳米组合物的粒径为10～200nm，Zeta电位为-60～0mV。

本发明提供了上述纳米组合物的制备方法，包括如下步骤：

将DHA、维生素E和部分载体辅料混合，得脂质溶液；

将麦角硫因、波色因和余量载体辅料混合，得到水相溶液；

将所述脂质溶液与所述水相溶液混合乳化后进行微米化处理，得到微米级分散体；

将所述微米级分散体进行纳米化处理，得DHA抗衰抗炎纳米组合物。

优选的，所述混合乳化的方式包括：在搅拌条件下，将所述脂质溶液滴加至所述水相溶液中。

优选的，所述微米化处理包括高速剪切乳化；所述纳米化处理包括高压均质处理或高速微射流处理。

本发明还提供了上述纳米组合物在化妆品中的应用。

本发明提供了一种DHA抗衰抗炎纳米组合物，含有麦角硫因、DHA、磷脂、胆固醇、维生素E琥珀酸聚乙二醇酯、柔性剂、多元醇和水，其中DHA含量为0.1～20％，麦角硫因含量为0.01～20％，玻色因含量为0.01～20％，维生素E含量为0.1～20％。本发明DHA能抑制炎症发生并具有抗氧化、抗衰老作用；麦角硫因是天然稀有的手性氨基酸类强抗氧化剂，安全无毒，具有清除自由基、抑制炎症、保护细胞和防止光老化等多种生理功能；玻色因可促进Ⅳ型和Ⅶ型胶原蛋白合成，从而改善皮肤细纹、延缓皮肤衰老，此外还可以刺激真皮层分泌GAGs(糖胺聚糖)，起到保湿、修复的功效；维生素E具有抗氧化、清除自由基的效果。本发明将DHA、麦角硫因、波色因和维生素E作为活性成分，具有很好的协同作用，麦角硫因不仅可以保持DHA的稳定性，还可以促进细胞对DHA的吸收，有效增强DHA的功效。

本发明DHA抗衰抗炎纳米组合物粒径在10～200nm，具有粒径小，比表面积大的特性，与细胞之间具有更强的粘附性。本发明DHA抗衰抗炎纳米组合物具有柔性脂质囊泡的磷脂双分子层结构，与皮肤细胞结构接近，故生物相容性更好；并且柔性脂质囊泡的变形能力高，能以皮肤水化压力为动力，高效穿透比其自身小数倍的孔道，能显著提高活性物的透皮性能，使其透过角质层进入真皮层，提高活性物的皮肤透过量。

本发明提供的DHA抗衰抗炎纳米组合物易溶于水，其中所含活性物在水中的溶解度也相应提高，并且可直接添加到不同类型的抗衰抗炎产品中，使用方便，温和无刺激。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍。

图1为实施例12制备的纳米复合霜剂和对比例6制备的普通霜剂在12h后体外皮肤累积透过量；与普通霜剂比较，^**P<0.01；

图2为实施例12制备的纳米复合霜剂和对比例6制备的普通霜剂的体外皮肤滞留量；与普通霜剂比较，^**P<0.01；

图3为测试样品抗UVB损伤结果；与模型组比较，^##P<0.01；与游离原料组比较，^*P<0.05；与DHA组比较，^aP<0.05；与麦角硫因组比较，^bP<0.05；与维生素E组比较，^cP<0.05；与波色因组比较，^dP<0.05；

图4为测试样品ROS含量测定结果；与模型组比较，^##P<0.01；与游离原料组比较，^*P<0.05；与DHA组比较，^aP<0.05；与麦角硫因组比较，^bP<0.05；与维生素E组比较，^cP<0.05；与波色因组比较，^dP<0.05；

图5为实施例12和对比例6～10平均表面皱纹减少量结果；与对比例6比较，^*P<0.05；与对比例7比较，^aP<0.05；与对比例8比较，^bP<0.05；与对比例9比较，^cP<0.05；与对比例10比较，^dP<0.05；

图6为实施例12和对比例6～10皮肤弹性值的增加量结果；与对比例6比较，^*P<0.05；与对比例7比较，^aP<0.05；与对比例8比较，^bP<0.05；与对比例9比较，^cP<0.05；与对比例10比较，^dP<0.05。

具体实施方式

本发明提供了一种DHA抗衰抗炎纳米组合物，包括以下质量百分含量的组分：DHA0.1～20％、麦角硫因0.01～20％、玻色因0.01～20％、维生素E0.1～20％和余量的载体辅料。

本发明所述纳米组合物的原料中包括DHA，所述DHA的质量百分含量为0.1～20％，优选为0.5～15％，进一步优选为1～10％。本发明所述DHA能抑制炎症发生并具有抗氧化、抗衰老作用，具体的，DHA通过干扰炎性细胞内信号传导途径来抑制炎症反应，发挥抗炎作用；DHA能够通过触发线粒体酶作用恢复和平衡受老化影响的细胞线粒体能量，减少表面皱纹，紧致皮肤；其次，DHA不仅能够促进ATP的合成，防止内部老化的同时保护皮肤避免自由基、化学物质和污染导致的外部老化，还能促进成纤维细胞的生长、新陈代谢及胶原蛋白的合成，重建皮肤结缔组织，保持皮肤的弹性和紧致性，发挥抗衰老作用。

本发明所述纳米组合物的原料中包括麦角硫因，所述麦角硫因的质量百分含量为0.01～20％，优选为0.05～10％，进一步优选为0.1～5％。本发明所述麦角硫因是天然的抗氧化剂、紫外线的生理过滤器和细胞的生理保护剂，安全无毒，具有清除自由基，抑制炎症，保护细胞，防止光老化等多种生理功能，具体的，麦角硫因通过抑制过氧亚硝基阴离子介导的氨基酸氧化，如络氨酸硝化，从而起到抗炎作用；麦角硫因不仅通过有效清除引起皮肤老化的自由基，保护细胞膜和线粒体膜免受氧化损伤；还能在紫外吸收范围内，最大程度的减少活性氧的形成，并保护细胞免受辐射损伤，减轻皮肤衰老；同时麦角硫因能够调节细胞内的氧化还原反应，参与细胞内的能量调节发挥抗衰老作用。

本发明所述纳米组合物的原料中包括玻色因，所述玻色因的质量百分含量为0.01～20％，优选为0.05～10％，进一步优选为0.1～5％。玻色因可促进Ⅳ型和Ⅶ型胶原蛋白合成，从而改善皮肤细纹、延缓皮肤衰老，此外还可以刺激真皮层分泌GAGs(糖胺聚糖)，起到保湿、修复的功效。

本发明所述纳米组合物的原料中包括维生素E，所述维生素E的质量百分含量为0.1～20％，优选为0.5～15％，进一步优选为1～10％。维生素E具有抗氧化、清除自由基的效果，同时还可以滋润、保湿皮肤。

在本发明中，所述DHA、麦角硫因、波色因和维生素E复配，存在协同增效的作用，DHA性质不稳定，易被氧化，麦角硫因和维生素E不仅可以保持DHA的稳定性，还可以促进细胞对DHA的吸收，有效增强DHA的功效。本发明合理控量，复配后抗衰、抗炎的效果优于单一成分的高浓度使用，即本发明通过DHA、麦角硫因、波色因和维生素E复配，提高了抗衰和抗炎效果。

在本发明中，所述纳米组合物的原料中还包括载体辅料，所述载体辅料优选包括磷脂、胆固醇、柔性剂、多元醇和水。本发明以特定的载体包载DHA、麦角硫因、波色因和维生素E，能够进一步提高活性成分的稳定性，降低DHA的鱼腥味。

在本发明中，所述纳米组合物中磷脂的质量百分含量为0.5～20％，优选为1～15％，进一步优选为2～10％。本发明所述磷脂优选包括脑磷脂、卵磷脂类磷脂和磷脂酰胆碱类磷脂中的一种或多种。本发明所述卵磷脂类磷脂优选包括大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂、羟基化卵磷脂和氢化卵磷脂中的一种或多种，进一步优选为大豆卵磷脂和/或蛋黄卵磷脂。本发明所述磷脂酰胆碱类磷脂优选包括二硬脂酰磷脂酰胆碱、二月桂酰磷脂酰胆碱、二棕榈酰磷脂酰胆碱和二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱中的一种或多种，进一步优选为二月桂酰磷脂酰胆碱、二棕榈酰磷脂酰胆碱、二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱中的一种或几种。本发明在具体实施过程中，优选使用1种或2种磷脂。当本发明使用1种磷脂时，优选使用大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂或二棕榈酰磷脂酰胆碱；当本发明使用2种磷脂时，优选使用大豆卵磷脂和二棕榈酰磷脂酰胆碱的混合物，或者优选使用蛋黄卵磷脂和二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱的混合物。本发明所述大豆卵磷脂和二棕榈酰磷脂酰胆碱的混合物中大豆卵磷脂和二棕榈酰磷脂酰胆碱的质量比优选为0.5～3：1，更优选为5：4；所述蛋黄卵磷脂和二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱的混合物中蛋黄卵磷脂和二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱的质量比优选为0.5～3：1，更优选为1：1。

在本发明中，所述纳米组合物中柔性剂的质量百分含量为1～20％，优选为5～18％，进一步优选为8～14％。本发明所述柔性剂优选包括胆酸类柔性剂、聚乙二醇类柔性剂、聚甘油类柔性剂、月桂酰类柔性剂和蔗糖类柔性剂中的一种或多种。本发明所述胆酸类柔性剂优选包括胆酸、胆酸钠和脱氧胆酸钠中的一种或多种，进一步优选胆酸和/或胆酸钠。本发明所述聚乙二醇类柔性剂优选包括PEG-8辛酸/癸酸甘油酯类、PEG-9椰油基甘油酯类、聚氧乙烯氢化蓖麻油和聚氧乙烯失水山梨醇脂肪酸酯中的一种或多种，进一步优选为PEG-8辛酸/癸酸甘油酯类、聚氧乙烯氢化蓖麻油和聚氧乙烯失水山梨醇脂肪酸酯中的一种或多种，更优选为PEG-8辛酸/癸酸甘油酯类和/或聚氧乙烯氢化蓖麻油。本发明所述聚甘油类柔性剂优选为聚甘油-10肉豆蔻酸酯。本发明所述月桂酰类柔性剂优选为植物甾醇/辛基十二醇月桂酰谷氨酸酯和/或月桂酰乳酰乳酸钠。本发明所述蔗糖类柔性剂优选为蔗糖肉豆蔻酸酯。本发明在具体实施过程中，优选使用1种或2种柔性剂。当本发明使用1种柔性剂时，优选为胆酸、PEG-8辛酸/癸酸甘油酯类、植物甾醇/辛基十二醇月桂酰谷氨酸酯或聚氧乙烯氢化蓖麻油；当本发明使用2种柔性剂时，优选使用胆酸和PEG-8辛酸/癸酸甘油酯类的混合物，或者优选使用胆酸钠和聚氧乙烯氢化蓖麻油的混合物，或者优选使用植物甾醇/辛基十二醇月桂酰谷氨酸酯和聚氧乙烯氢化蓖麻油的混合物。本发明所述胆酸和PEG-8辛酸/癸酸甘油酯类的混合物中胆酸和PEG-8辛酸/癸酸甘油酯类的质量比优选为0.5～3：1，更优选为1：1；所述胆酸钠和聚氧乙烯氢化蓖麻油的混合物中胆酸钠和聚氧乙烯氢化蓖麻油的质量比优选为0.5～5：1，更优选为5：4；所述植物甾醇/辛基十二醇月桂酰谷氨酸酯和聚氧乙烯氢化蓖麻油的混合物中植物甾醇/辛基十二醇月桂酰谷氨酸酯和聚氧乙烯氢化蓖麻油的质量比优选为0.5～3：1，更优选为1：1。

在本发明中，柔性剂的加入使得纳米脂质囊泡流动性增加，具有高度的变形能力，能以皮肤水化压力为动力，高效穿透比其自身小数倍的孔道，能显著提高活性物的透皮性能。

在本发明中，所述纳米组合物中多元醇的质量百分含量为1～40％，优选为5～35％，进一步优选为10～30％。本发明所述多元醇优选包括丙二醇、丁二醇、1,2-戊二醇、1,2-己二醇、1,3-丙二醇、二丙二醇、山梨醇、甲基丙二醇、辛甘醇和甘油中的一种或多种，进一步优选为1,3-丙二醇、丁二醇、1,2-戊二醇、1,2-己二醇、二丙二醇和甘油中的一种或多种，更优选为1,3-丙二醇、丁二醇、1,2-戊二醇和1,2-己二醇中的一种或多种。本发明在具体实施过程中，优选使用1种或2种多元醇。当本发明使用1种多元醇时，优选为1,3-丙二醇、1,2-戊二醇或1,2-己二醇；当本发明使用2种多元醇时，优选使用1,2-戊二醇和1,2-己二醇的混合物，或者优选使用丁二醇和1,2-戊二醇的混合物，或者优选使用1,3-丙二醇和1,2-戊二醇的混合物，或者优选使用二丙二醇和甘油的混合物，或者优选为1,3-丙二醇和1,2-己二醇的混合物。本发明所述1,2-戊二醇和1,2-己二醇的混合物中1,2-戊二醇和1,2-己二醇的质量比优选为0.5～5：1，更优选为2：1；本发明所述丁二醇和1,2-戊二醇的混合物中丁二醇和1,2-戊二醇的质量比优选为0.1～3：1，更优选为2：5；本发明所述1,3-丙二醇和1,2-戊二醇的混合物中1,3-丙二醇和1,2-戊二醇的质量比优选为0.5～5：1，更优选为3：2。本发明所述二丙二醇和甘油的混合物中二丙二醇和甘油的质量比优选为0.1～3：1，更优选为3：4。本发明所述1,3-丙二醇和1,2-己二醇的混合物中1,3-丙二醇和1,2-己二醇的质量比优选为0.5～3：1，更优选为1：1。

在本发明中，多元醇不仅可作为溶剂溶解载体辅料，还起到助乳化的作用，可稳定纳米脂质囊泡结构，同时多元醇有促进活性成分透皮的作用，还能改善难溶活性物的溶解性和水分散性。

在本发明中，所述纳米组合物中胆固醇的质量百分含量为0.1～5％，优选为0.5～4％，进一步优选为1～3％。

在本发明中，所述磷脂和胆固醇组成的类脂双分子层结构能够进入皮肤角质层细胞内部，与角蛋白相互作用，使角质层细胞的致密程度降低，并构成脂质通道，促进活性物透过角质层；适量胆固醇的加入，可稳定磷脂双分子层结构，增加膜强度而有利于物质的包裹，起到稳定脂膜和减少泄漏的作用。

本发明在具体实施过程中，优选将不同的磷脂、不同的柔性剂和不同的多元醇组合使用，能够使分子之间的作用更为紧密，形成更加紧密、高强度的复合膜，使得纳米组合物更加稳定。

在本发明中，所述纳米组合物中水发挥溶剂的作用，溶解DHA抗衰抗炎纳米组合物中水溶性物质。本发明对所述水的来源没有严格要求，优选使用为纯化水；本发明对水的用量没有严格要求，除去所述DHA抗衰抗炎纳米组合物中包括的其他物质，剩余的质量百分含量即为水的用量。

本发明对所述DHA抗衰抗炎纳米组合物中的组分的来源没有特殊要求，采用本领域技术人员所熟知的市售商品即可。

本发明还提供了上述技术方案所述DHA抗衰抗炎纳米组合物的制备方法，包括以下步骤：

将DHA、维生素E和部分载体辅料混合，得脂质溶液；

将麦角硫因、波色因和剩余载体辅料混合，得到水相溶液；

本发明将DHA、维生素E和部分载体辅料混合，得脂质溶液。本发明在制备脂质溶液的过程中，所述部分载体辅料优选为磷脂、胆固醇和多元醇，进一步优选为大豆卵磷脂、胆固醇和1,3-丙二醇；或者进一步优选为蛋黄卵磷脂、胆固醇和1,2-戊二醇；或者进一步优选为二棕榈酰磷脂酰胆碱、胆固醇、1,2-戊二醇和1,2-己二醇；或者进一步优选为大豆卵磷脂、二棕榈酰磷脂酰胆碱、胆固醇、1,3-丙二醇和丁二醇；或者进一步优选为蛋黄卵磷脂、二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱、胆固醇、1,3-丙二醇和1,2-戊二醇；或者进一步优选为脑磷脂、二硬脂酰磷脂酰胆碱、胆固醇、1,3-丙二醇和1,2-己二醇；或者进一步优选为羟基化卵磷脂、二月桂酰磷脂酰胆碱、胆固醇、丁二醇和1,2-戊二醇；或者进一步优选为氢化卵磷脂、二棕榈酰磷脂酰胆碱、胆固醇、二丙二醇和甘油；或者进一步优选为大豆卵磷脂、二棕榈酰磷脂酰胆碱、胆固醇、1,2-戊二醇和1,2-己二醇；或者进一步优选为大豆卵磷脂、胆固醇和1,2-己二醇；或者进一步优选为蛋黄卵磷脂、二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱、胆固醇、1,3-丙二醇和1,2-戊二醇。本发明所述混合的温度优选为20～70℃，进一步优选为20～40℃或50～70℃，更优选为20～30℃或50～60℃。本发明所述混合优选在水浴下进行，使得各组分均匀分散。

本发明将麦角硫因、波色因和剩余载体辅料混合，得到水相溶液。本发明在制备水相溶液的过程中，所述剩余载体辅料优选为柔性剂与水。本发明所述混合的温度优选为20～70℃，进一步优选为20～40℃或50～70℃，更优选为20～30℃或50～60℃。本发明所述混合优选在水浴下进行，，使得各组分均匀分散。

本发明分别制备脂质溶液和水相溶液，能使油溶活性成分和水溶活性成分充分溶解，提高了纳米组合物的稳定性和载药量。

得脂质溶液和水相溶液后，本发明将所述脂质溶液和水相溶液处理混合乳化后微米化处理，得到微米级分散体。本发明所述混合乳化的方式优选包括：将所述脂质溶液滴加至所述水相溶液中。所述滴加的速度优选为1～15滴/秒，进一步优选为1～5滴/秒或6～15滴/秒，更优选为2～4滴/秒或7～12滴/秒，最优选为3～4滴/秒或8～10滴/秒。本发明在具体实施过程中，所述1滴的体积优选为0.05～0.1mL，进一步优选为0.06～0.08mL。相比将所述水相溶液滴加至所述脂质溶液中，本发明将所述脂质溶液滴加至所述水相溶液中得到的脂质囊泡结构更加稳定，囊泡粒径更加均一。

本发明所述混合乳化优选在搅拌条件下进行，所述搅拌的速率优选为200～1000r/min，进一步优选为200～600r/min或700～1000r/min，更优选为300～500r/min或700～900r/min，最优选为320～400r/min或700～800r/min。本发明所述混合乳化的温度优选为20～70℃，进一步优选为20～40℃或50～70℃，更优选为20～30℃或50～60℃。本发明所述微米化处理的方式优选为高速剪切乳化。

本发明所述剪切的转速优选为3000～16000rpm，进一步优选为3000～9000rpm或10000～16000rpm，更优选为4000～8000rpm或10000～14000rpm，最优选为5000～7000rpm或10000～12000rpm。本发明所述剪切的时间优选为1～12min，进一步优选为2～7min或8～12min，更优选为3～6min或8～10min，最优选为3～5min或8～9min。

本发明所述微米化处理得到的微米化分散体粒径优选为1～100μm，进一步优选为10～50μm，更优选为20～30μm。

得到微米级分散体后，本发明对所述微米级分散体进行纳米化处理，得DHA抗衰抗炎纳米组合物。本发明所述纳米化处理的方式优选为高压均质处理或高速微射流处理。当选择高压均质处理微米级分散体至纳米级时，所述高压均质处理的压力优选为200～1800bar，进一步优选为200～1000bar或1200～1800bar，更优选为400～800bar或1200～1500bar，最优选为400～600bar或1300～1400bar。本发明所述高压均质的循环次数优选为1～12次，进一步优选为2～4次或5～8次，更优选为3～4次或6～7次；所述高压均质的温度优选为20～70℃，进一步优选为20～40℃或50～70℃，更优选为20～30℃或50～60℃。

当采用高速微射流技术处理微米级分散体至纳米级时，所述高速微射流处理的压力优选为4000～17000psi，进一步优选为6000～14000psi，更优选为8000～12000psi；所述高速微射流处理的循环次数优选为1～12次，进一步优选为2～10次，更优选为5～8次；所述高速微射流处理温度优选为20～70℃，进一步优选为20～40℃或50～70℃，更优选为20～30℃或50～60℃。

本发明所述纳米化处理得到的DHA抗衰抗炎纳米组合物的粒径为10～200nm，优选为20～80nm；所述纳米化处理得到的DHA抗衰抗炎纳米组合物的Zeta电位为-60～0mV，优选为-50～-10mV。本发明提供的DHA抗衰抗炎纳米组合物具有粒径小，比表面积大的特性，与细胞之间具有更强的粘附性，且制备的DHA抗衰抗炎纳米组合物具备柔性脂质囊泡的磷脂双分子层结构，与皮肤细胞结构接近，生物相容性好，柔性脂质囊泡具有高度的变形能力，能以皮肤水化压力为动力，高效穿透比其自身小数倍的孔道，能显著提高活性物的透皮性能，使其透过角质层进入真皮层，提高活性物的皮肤透过量。

本发明还提供了上述技术方案所述DHA抗衰抗炎纳米组合物在制备化妆品中的应用。具体的，本发明所述DHA抗衰抗炎纳米组合物用于制备具有抗衰老、抗氧化、抗炎等功效的化妆品。所述化妆品的形式包括但不限于化妆水、膏霜、乳液、面膜和凝胶。本发明所述DHA抗衰抗炎纳米组合物易溶于水，可提高活性物在水中的溶解度，可直接添加到不同类型的抗衰抗炎产品中，使用方便，温和无刺激。本发明所述DHA抗衰抗炎纳米组合物在化妆品中添加的质量百分含量优选为0.1～30％，进一步优选为0.5～20％。

为了进一步说明本发明，下面结合附图和实施例对本发明提供的DHA抗衰抗炎纳米组合物进行详细地描述，但不能将它们理解为对本发明保护范围的限定。

实施例1

按质量百分含量备料：将0.1％DHA、20％维生素E、0.5％大豆卵磷脂、0.1％胆固醇、1％1,3-丙二醇在温度为50℃水浴条件下混合溶解，得到脂质溶液，备用；

将20％麦角硫因、20％波色因、4％PEG-8辛酸/癸酸甘油酯类与34.3％水混合，在温度为50℃水浴条件下搅拌溶解，得到水相溶液，备用；

(具体的：将0.1gDHA、20g维生素E、0.5g大豆卵磷脂、0.1g胆固醇、1g1,3-丙二醇在温度为50℃水浴条件下混合溶解，得到脂质溶液，备用；

将20g麦角硫因、20g波色因、4gPEG-8辛酸/癸酸甘油酯类与34.3g水混合，在温度为50℃水浴条件下搅拌溶解，得到水相溶液，备用；下述实施例中均为此种100g的配料形式，下述不再赘述)。

将脂质溶液以3滴/秒的速度滴加至水相溶液中并在1000r/min的转率下不断搅拌，混合完成后，在转速为7000rpm的条件下高速剪切乳化6min，得到微米级分散体；

将微米级分散体在50℃、压力为1800bar的条件下进行高压均质处理，循环5次，冷却至室温，得到纳米组合物。

对上述纳米组合物的粒径和Zeta电位进行检测，可得该纳米组合物粒径为46.2nm，Zeta电位为-58.6mV。

实施例2

将1％DHA、18％维生素E、1％蛋黄卵磷脂、0.5％胆固醇、5％1,2-戊二醇在温度为50℃水浴条件下混合溶解，得到脂质溶液，备用；

将18％麦角硫因、18％波色因、3％聚氧乙烯氢化蓖麻油与35.5％水混合，在温度为50℃水浴条件下搅拌溶解，得到水相溶液，备用；

将脂质溶液以4滴/秒的速度滴加至水相溶液中并在700r/min的转率下不断搅拌，混合完成后，在转速为14000rpm的条件下高速剪切乳化7min，得到微米级分散体；

将微米级分散体在50℃、压力为1600bar的条件下进行高压均质处理，循环8次，冷却至室温，得到纳米组合物。

对上述纳米组合物的粒径和Zeta电位进行检测，可得该纳米组合物粒径为91.2nm，Zeta电位为-24.6mV。

实施例3

将16％DHA、15％维生素E、3％二棕榈酰磷脂酰胆碱、1.5％胆固醇、10％1,2-戊二醇、5％1,2-己二醇在温度为20℃水浴条件下混合溶解，得到脂质溶液，备用；

将12％麦角硫因、15％波色因、6％聚氧乙烯失水山梨醇脂肪酸酯与16.5％水混合，在温度为20℃水浴条件下搅拌溶解，得到水相溶液，备用；

将脂质溶液以15滴/秒的速度滴加至水相溶液中并在600r/min的转率下不断搅拌，混合完成后，在转速为5000rpm的条件下高速剪切乳化4min，得到微米级分散体；

将微米级分散体在20℃、压力为1200bar的条件下进行高压均质处理，循环3次，冷却至室温，得到纳米组合物。

对上述纳米组合物的粒径和Zeta电位进行检测，可得该纳米组合物粒径为17.8nm，Zeta电位为-48.5mV。

实施例4

将8％DHA、8％维生素E、4％大豆卵磷脂、4％二棕榈酰磷脂酰胆碱、2％胆固醇、10％1,3-丙二醇、10％丁二醇在温度为30℃水浴条件下混合溶解，得到脂质溶液，备用；

将15％麦角硫因、8％波色因、8％月桂酰乳酰乳酸钠与23％水混合，在温度为30℃水浴条件下搅拌溶解，得到水相溶液，备用；

将脂质溶液以7滴/秒的速度滴加至水相溶液中并在400r/min的转率下不断搅拌，混合完成后，在转速为5000rpm的条件下高速剪切乳化3min，得到微米级分散体；

将微米级分散体在30℃、压力为600bar的条件下进行高压均质处理，循环4次，冷却至室温，得到纳米组合物。

对上述纳米组合物的粒径和Zeta电位进行检测，可得该纳米组合物粒径为89.7nm，Zeta电位为-31.5mV。

实施例5

将2％DHA、1％维生素E、10％氢化卵磷脂、10％二棕榈酰磷脂酰胆碱、4.5％胆固醇、15％二丙二醇、20％甘油在温度为60℃水浴条件下混合溶解，得到脂质溶液，备用；

将0.1％麦角硫因、0.1％波色因、10％聚甘油-10肉豆蔻酸酯、10％蔗糖肉豆蔻酸酯与17.3％水混合，在温度为60℃水浴条件下搅拌溶解，得到水相溶液，备用；

将脂质溶液以2滴/秒的速度滴加至水相溶液中并在800r/min的转率下不断搅拌，混合完成后，在转速为8000rpm的条件下高速剪切乳化10min，得到微米级分散体；

将微米级分散体在60℃、压力为1000bar的条件下进行高压均质处理，循环12次，冷却至室温，得到纳米组合物。

对上述纳米组合物的粒径和Zeta电位进行检测，可得该纳米组合物粒径为95.1nm，Zeta电位为-37.9mV。

实施例6

将5％DHA、3％维生素E、1％蛋黄卵磷脂、1％二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱、4％胆固醇、15％1,3-丙二醇、15％1,2-戊二醇在温度为60℃水浴条件下混合溶解，得到脂质溶液，备用；

将1％麦角硫因、1％波色因、8％胆酸钠、5％聚氧乙烯氢化蓖麻油与41％水混合，在温度为60℃水浴条件下搅拌溶解，得到水相溶液，备用；

将脂质溶液以6滴/秒的速度滴加至水相溶液中并在900r/min的转率下不断搅拌，混合完成后，在转速为10000rpm的条件下高速剪切乳化8min，得到微米级分散体；

将微米级分散体在60℃、压力为17000psi的条件下进行高速微射流处理，循环2次，冷却至室温，得到纳米组合物。

对上述纳米组合物的粒径和Zeta电位进行检测，可得该纳米组合物粒径为27.1nm，Zeta电位为-35.5mV。

实施例7

将10％DHA、6％维生素E、5％脑磷脂、5％二硬脂酰磷脂酰胆碱、2.5％胆固醇、10％1,3-丙二醇、10％1,2-己二醇在温度为40℃水浴条件下混合溶解，得到脂质溶液，备用；

将5％麦角硫因、5％波色因、10％胆酸钠、8％聚氧乙烯氢化蓖麻油与23.5％水混合，在温度为40℃水浴条件下搅拌溶解，得到水相溶液，备用；

将脂质溶液以8滴/秒的速度滴加至水相溶液中并在500r/min的转率下不断搅拌，混合完成后，在转速为12000rpm的条件下高速剪切乳化5min，得到微米级分散体；

将微米级分散体在40℃、压力为4000psi的条件下进行高速微射流处理，循环7次，冷却至室温，得到纳米组合物。

对上述纳米组合物的粒径和Zeta电位进行检测，可得该纳米组合物粒径为86.5nm，Zeta电位为-51.7mV。

实施例8

将12％DHA、5％维生素E、6％蛋黄卵磷脂、6％二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱、3％胆固醇、15％1,3-丙二醇、10％1,2-戊二醇在温度为40℃水浴条件下混合溶解，得到脂质溶液，备用；

将8％麦角硫因、3％波色因、6％胆酸、6％PEG-8辛酸/癸酸甘油酯类与20％水混合，在温度为40℃水浴条件下搅拌溶解，得到水相溶液，备用；

将脂质溶液以5滴/秒的速度滴加至水相溶液中并在600r/min的转率下不断搅拌，混合完成后，在转速为6000rpm的条件下高速剪切乳化9min，得到微米级分散体；

将微米级分散体在40℃、压力为800bar的条件下进行高压均质处理，循环9次，冷却至室温，得到纳米组合物。

对上述纳米组合物的粒径和Zeta电位进行检测，可得该纳米组合物粒径为46.3nm，Zeta电位为-45.8mV。

实施例9

将15％DHA、0.1％维生素E、7％羟基化卵磷脂、8％二月桂酰磷脂酰胆碱、3.5％胆固醇、8％丁二醇、20％1,2-戊二醇在温度为70℃水浴条件下混合溶解，得到脂质溶液，备用；

将2％麦角硫因、0.5％波色因、10％脱氧胆酸钠、5％PEG-9椰油基甘油酯类与20.9％水混合，在温度为70℃水浴条件下搅拌溶解，得到水相溶液，备用；

将脂质溶液以10滴/秒的速度滴加至水相溶液中并在700r/min的转率下不断搅拌，混合完成后，在转速为4000rpm的条件下高速剪切乳化2min，得到微米级分散体；

将微米级分散体在70℃、压力为1400bar的条件下进行高压均质处理，循环10次，冷却至室温，得到纳米组合物。

对上述纳米组合物的粒径和Zeta电位进行检测，可得该纳米组合物粒径为148.3nm，Zeta电位为-12.3mV。

实施例10

将20％DHA、0.5％维生素E、10％大豆卵磷脂、8％二棕榈酰磷脂酰胆碱、5％胆固醇、20％1,2-戊二醇、20％1,2-己二醇在温度为50℃水浴条件下混合溶解，得到脂质溶液，备用；

将0.01％麦角硫因、0.01％波色因、5％植物甾醇/辛基十二醇月桂酰谷氨酸酯、5％聚氧乙烯氢化蓖麻油与6.48％水混合，在温度为50℃水浴条件下搅拌溶解，得到水相溶液，备用；

将脂质溶液以1滴/秒的速度滴加至水相溶液中并在600r/min的转率下不断搅拌，混合完成后，在转速为16000rpm的条件下高速剪切乳化12min，得到微米级分散体；

将微米级分散体在50℃、压力为500bar的条件下进行高压均质处理，循环6次，冷却至室温，得到纳米组合物。

对上述纳米组合物的粒径和Zeta电位进行检测，可得该纳米组合物粒径为189.6nm，Zeta电位为-28.7mV。

实施例11

将18％DHA、10％维生素E、16％大豆卵磷脂、1％胆固醇、10％1,2-己二醇在温度为50℃水浴条件下混合溶解，得到脂质溶液，备用；

将10％麦角硫因、10％波色因、5％聚氧乙烯氢化蓖麻油与20％水混合，在温度为50℃水浴条件下搅拌溶解，得到水相溶液，备用；

将脂质溶液以12滴/秒的速度滴加至水相溶液中并在200r/min的转率下不断搅拌，混合完成后，在转速为3000rpm的条件下高速剪切乳化1min，得到微米级分散体；

将微米级分散体在50℃、压力为200bar的条件下进行高压均质处理，循环1次，冷却至室温，得到纳米组合物。

对上述纳米组合物的粒径和Zeta电位进行检测，可得该纳米组合物粒径为59.5nm，Zeta电位为-33.1mV。

对比例1

同实施例4，区别在于，将水相溶液以7滴/秒的速度滴加至脂质溶液中。

对比例2

同实施例5，区别在于，将10％氢化卵磷脂、10％二棕榈酰磷脂酰胆碱替换为10％氢化大豆卵磷脂、10％氢化磷脂酰胆碱。

对比例3

同实施例6，区别在于，将8％胆酸钠、5％聚氧乙烯氢化蓖麻油替换为8％甘氨胆酸、5％月桂基葡糖苷。

对比例4

同实施例7，区别在于，将10％1,3-丙二醇、10％1,2-己二醇替换为10％乙醇、10％PEG-200。

测试例1

稳定性试验

将实施例4～7和对比例1～4所制得的DHA抗衰抗炎纳米组合物置于密闭容器中，在常温、4℃、45℃避光条件以及10℃紫外线辐照(光照度为4000lux)的条件下各放置3个月，检查样品在贮存前后各条件下的外观，测试纳米组合物在贮存前后各条件下的粒径、Zeta电位，实验结果如表1～2所示。

表1实施例4～7DHA抗衰抗炎纳米组合物稳定性试验结果

表2对比例1～4DHA抗衰抗炎纳米组合物稳定性试验结果

由表1可以看出，本发明DHA抗衰抗炎纳米组合物粒径在10～200nm之间，Zeta电位在-60～0mV之间，满足实际应用要求。DHA抗衰抗炎纳米组合物在常温、4℃、45℃、10℃紫外线辐照(光照度4000lux)条件下各放置3个月后也未出现团聚分层现象，并且纳米组合物粒径和Zeta电位未发生显著性变化，仍然满足实际应用需求，尤其在活性成分浓度高的情况下纳米组合物仍然较稳定，未发现结晶析出现象，无活性成分泄漏。因此，本发明提供的DHA抗衰抗炎纳米组合物具有良好的稳定性。

由表2可以看出，对比例1制备的纳米组合物在90天后常温粒径显著变大，Zeta电位显著变小，其他条件均析出结晶或分层，说明制备工艺对纳米组合物的稳定性、纳米颗粒的均一性有重要影响；对比例2制备的纳米组合物在90天后各条件均析出结晶、团聚或分层，对比例3～4制备的纳米组合物在制备完成后就出现分层或析出结晶现象，说明本专利中磷脂、柔性剂、多元醇的种类对纳米组合物的稳定性有重要影响，进而影响组合物中活性成分的稳定性和功效。

对比例5

制备空白霜剂：将5％辛酸癸酸甘油三酯、5％白油、2％十六十八醇、2％硬脂醇聚醚-2、2％硬脂醇聚醚-21于75℃水浴中加热熔融后得到油相；将5％丙二醇、0.15％卡波姆和余量的纯化水于75℃水浴溶解，得到水相；得到油相和水相后，于75℃条件下将油相以5滴/秒的速度滴加至水相中，滴加过程中控制搅拌速率为800rpm，混合完成后于10000rpm转速下剪切乳化3min，加入0.15％三乙醇胺，继续剪切2min，冷却后加入0.5％苯氧乙醇，搅拌均匀即得空白霜剂。

测试例2

将实施例1～11所制得的DHA抗衰抗炎纳米组合物样品，分别与对比例5中的空白霜剂按照质量百分含量比3:7进行复配，进行皮肤刺激性试验：

取健康家兔72只，体重(2.0±0.2)kg，随机分为12组，每组动物6只，于实验前24h将家兔背部皮肤两侧去毛，去毛后24h检查去毛皮肤是否受伤，受伤皮肤不宜做皮肤刺激性试验。每天涂抹使用实施例1～11得到的DHA抗衰抗炎纳米组合物制备的复合霜剂3次，连续涂抹7天，同时涂抹对比例5空白霜剂(不给予任何药物)进行对照，观察试验结果，将试验结果列于表2中。

表3实施例1～11样品制备的霜剂及空白组皮肤刺激性观察结果

注：“+”家兔皮肤充血、红肿；“++”表示充血、红肿现象仍在，但有增加趋势；“—”表示无充血、红肿现象。

根据表3中的试验结果可以看出，使用实施例1～11DHA抗衰抗炎纳米组合物制备的复合霜剂及空白霜剂涂抹于家兔皮肤后均无充血、红肿现象，说明本发明提供的纳米组合物对皮肤没有刺激性，安全性高。

实施例12

将实施例5制备的纳米组合物与对比例5中的空白霜剂按照质量百分含量1：9进行复配，即得到纳米复合霜剂(纳米复合霜剂中功效成分及含量分别为：0.2％DHA、0.01％麦角硫因、0.1％维生素E、0.01％波色因)。

对比例6

制备与实施例12中功效成分及含量相同的普通霜剂，具体的：将0.2％DHA、、0.1％维生素E、5％辛酸癸酸甘油三酯、5％白油、2％十六十八醇、2％硬脂醇聚醚-2、2％硬脂醇聚醚-21于75℃水浴中加热熔融后得到油相；将0.01％麦角硫因、0.01％波色因、5％丙二醇、0.15％卡波姆和余量的纯化水于75℃水浴溶解，得到水相；将油相滴加至水相搅拌混合，于10000rpm转速下剪切乳化3min，加入0.15％三乙醇胺，继续剪切2min，冷却后加入0.5％苯氧乙醇，搅拌均匀，即得与纳米复合霜剂中功效成分及含量相同的普通霜剂。

对比例7

同对比例6，区别在于不含有麦角硫因、维生素E、波色因，且DHA的质量百分含量为0.32％。

对比例8

同对比例6，区别在于不含有DHA、维生素E、波色因，且麦角硫因的质量百分含量为0.32％。

对比例9

同对比例6，区别在于不含有DHA、波色因，麦角硫因，且维生素E的质量百分含量为0.32％。

对比例10

同对比例6，区别在于不含有DHA、麦角硫因，维生素E，且波色因的质量百分含量为0.32％。

测试例3

体外透皮实验

采用垂直式Franz扩散池法进行离体鼠皮的透皮实验。将SD雄性大鼠腹部皮肤固定于接收室和供给室之间，取实施例12制备的纳米复合霜剂和对比例6制备的普通霜剂各1g于供给室中，以质量分数15％乙醇、5％吐温-80和80％的生理盐水为接收液，37℃下搅拌扩散。于1，2，4，6，8，10，12h取0.5mL接收液，并即时补充等量恒温的新鲜接收液。HPLC分析，计算不同时间特定药物单位面积累积透过量。12h后，取下皮肤，洗净后剪碎，研磨成匀浆液，加适量接收液离心，取上清液HPLC分析，计算特定药物的单位面积皮肤滞留量。本实验中测定的药物为DHA。实验数据如图1、图2、表4。

表4纳米复合霜剂和普通霜剂在12h后体外皮肤累积透过量和皮肤滞留量结果

组别	纳米复合霜剂	普通霜剂
			皮肤累积透过量(μg/cm<sup>2</sup>)	188.6	102.7
皮肤滞留量(μg/cm<sup>2</sup>)	61.1	28.4

由图1和表4可知，对比例6制备的普通霜剂12h后皮肤累积透过量仅为102.7μg/cm²，而实施例12制备的纳米复合霜剂12h后皮肤累积透过量为188.6μg/cm²(^**P<0.01)，表明活性物经纳米组合物包载后在皮肤中的累积透过量显著提高。由于皮肤自有屏障功能，活性成分难以透过角质层进入真皮层发挥作用，经纳米包载后由于纳米载体粒径小，比表面积大，与细胞之间具有更强的粘附性，且制备的DHA抗衰抗炎纳米组合物具有柔性脂质囊泡的磷脂双分子层结构，与皮肤细胞结构接近，生物相容性好，柔性脂质囊泡具有高度的变形能力，能以皮肤水化压力为动力，高效穿透比其自身小数倍的孔道，能显著提高活性物的透皮性能，使其透过角质层进入真皮层，提高活性物的皮肤透过量。

由图2和表4可知，对比例6制备的普通霜剂12h后皮肤滞留量仅为28.4μg/cm²，而实施例12制备的纳米复合霜剂12h后皮肤滞留量为61.1μg/cm²(^**P<0.01)，表明活性物经纳米组合物包载后在皮肤中的滞留量显著提高，延长活性成分在皮肤中的滞留时间，提高其生物利用度，增强抗衰抗炎功效。

测试例4

测试样品：将实施例5、实施例6及实施例7所得纳米组合物用DMEM培养液稀释1000倍得到的纳米组合物培养样品；用相同培养液配置与实施例5纳米组合物培养样品活性物浓度相同的游离原料培养样品，作为游离原料组；以DHA为活性物，用相同培养液配置与游离原料组活性物总浓度相同的DHA原料培养样品；以麦角硫因为活性物，用相同培养液配置与游离原料组活性物总浓度相同的麦角硫因原料培养样品；以维生素E为活性物，用相同培养液配置与游离原料组活性物总浓度相同的维生素E原料培养样品；以波色因为活性物，用相同培养液配置与游离原料组活性物总浓度相同的波色因原料培养样品；

将成纤维细胞以每孔8×10³个细胞的密度接种到96孔板中，置于37℃、5％CO₂细胞培养箱中培养24h。吸出细胞板中的培养基，空白对照组和模型组各加入500μL的无血清培养基，空白对照组避光培养，模型组用15W的UVB灯管，水平放置在距离细胞培养瓶底20cm的正上方进行照射，辐照时间30min，强度60J/min，给药组加入测试样品后在同样条件下进行UVB照射处理，每次照射完成后将细胞放入培养箱中继续培养。培养24h后，每孔加入10μL的CCK-8溶液，在培养箱中孵育2h，使用酶标仪在450nm处测定OD值，计算细胞存活率(％)。实验结果见图3和表5。

表5测试样品抗UVB损伤结果

由表5和图3可知，经UVB损伤的HSF细胞存活率显著下降。与模型组比较，实施例5～7对细胞存活率的升高具有显著性差异(^##P<0.01)；与游离原料组(51.64％)比较，实施例5所得纳米组合物组(61.64％)对HSF细胞存活率的提高具有显著性差异(^*P<0.05)，说明本发明制备的DHA抗衰抗炎纳米组合物能有效抵御紫外对皮肤的损伤，且活性物经纳米包载后能更加有效修复紫外对皮肤的损伤；测试样品活性物总含量相同，与DHA组、麦角硫因组、维生素E组、波色因组比较，游离原料组对HSF细胞存活率的提高具有显著性差异(与DHA组比较，^aP<0.05；与麦角硫因组比较，^bP<0.05；与维生素E组比较，^cP<0.05；与波色因组比较，^dP<0.05)，说明DHA、麦角硫因、维生素E、波色因搭配使用可以协同增效，比单独使用高浓度的活性成分修复紫外损伤效果更好。

测试例5

HSF氧化细胞模型胞内ROS含量的测定

测试样品：同测试例4。

取对数生长期的HSF细胞，以每孔3×10⁴个细胞的密度接种于24孔板培养24h后，将细胞分为空白对照组、模型组、给药组，每组3个复孔。给药组每孔分别加入含有1mmol/LH₂O₂和测试样品的DMEM完全培养基继续培养，每组设3个复孔。孵育24h后，用DMEM培养基将细胞洗涤3次，加入含有20μmol/L DCFH-DA的DMEM培养基继续孵育20min。然后弃去培养液，细胞用PBS洗涤3次，用含有1％TritonX-100(V％)的细胞裂解液，然后置于-80℃冷冻裂解30min，随后在室温条件下解冻，收集细胞裂解液离心，取上清用酶标仪检测荧光强度。BCA蛋白浓度测定试剂盒测定每组细胞的蛋白质水平。每组的ROS水平用平均荧光强度除以蛋白质质量表示。实验结果如图4、表6。

表6测试样品ROS含量测定结果

由表6和图4可知，经H₂O₂诱导的氧化应激刺激了HSF细胞内ROS的产生。与模型组比较，实施例5～7能显著抑制ROS的生成(^##P<0.01)；与游离原料组(2145)比较，实施例5所得纳米组合物组(1866)对细胞内ROS水平的降低具有显著性差异(^*P<0.05)，说明本发明制备的DHA抗衰抗炎纳米组合物能有效清除引起皮肤老化的氧自由基，且活性物经纳米包载后抗自由基氧化的效果更优；测试样品活性物总含量相同，与DHA组、麦角硫因组、维生素E组、波色因组比较，游离原料组对胞内ROS水平的降低具有显著性差异(与DHA组比较，^aP<0.05；与麦角硫因组比较，^bP<0.05；与维生素E组比较，^cP<0.05；与波色因组比较，^dP<0.05)，说明DHA、麦角硫因、维生素E、波色因搭配使用可以协同增效，比单独使用高浓度的活性成分抗自由基氧化的效果更好。

测试例6

抗衰功效测试

测试样品：实施例12，对比例6～10。

选用皮肤分析测试仪VISIA、皮肤弹性测试仪MPA580进行DHA抗衰抗炎纳米组合物的皮肤纹理、皮肤弹性测试，综合评价DHA抗衰抗炎纳米组合物的抗衰功效。

选取6组每组30名皮肤健康、无化妆品过敏史、年龄在30～45岁之间的志愿者作为受试者，进行皮肤纹理、皮肤弹性测试。试用部位为脸部两颧，分别于试验前及连续使用样品1周、2周、4周和8周后，由同一个人测试试验部位的皮肤表面纹理、皮肤弹性，计算受试者不同时间段平均表面皱纹减少量、皮肤弹性值的增加量，实验结果如图5～6和表7～8。

表7实施例12和对比例6～10平均表面皱纹减少量结果

由图5和表7可知，实施例12制备的纳米复合霜剂能显著减少皮肤表面皱纹量，说明本申请制备的DHA抗衰抗炎纳米组合物能有效抑制皱纹的生长，并消除原有的皱纹，具有显著的抗衰效果。对比例6为活性成分和含量与实施例12相同的游离普通霜剂，与对比例6相比，实施例12的纳米复合霜剂对平均表面皱纹减少量具有显著性差异(^*P<0.05)，表明活性物经纳米包载后能更加有效抑制皱纹的生长，对皱纹有更好的改善作用，具有更优异的抗衰效果。对比例6～10活性物总含量相同，与对比例7～10相比，对比例6平均表面皱纹减少量具有显著性差异(与对比例7比较，^aP<0.05；与对比例8比较，^bP<0.05；与对比例9比较，^cP<0.05；与对比例10比较，^dP<0.05)，说明DHA、麦角硫因、维生素E、波色因搭配使用可以协同增效，比单独使用高浓度活性成分抑制皱纹效果更好。

表8实施例12和对比例6～10皮肤弹性值的增加量结果

由图6和表8可知，实施例12制备的纳米复合霜剂能显著增加皮肤弹性，说明本申请制备的DHA抗衰抗炎纳米组合物能有效刺激成纤维细胞更新，从而促进胶原蛋白和弹性蛋白的合成，增强皮肤弹性，促进皮肤更新。对比例6为活性成分和含量与实施例12相同的游离普通霜剂，与对比例6相比，实施例12的纳米复合霜剂对皮肤弹性值的增加量具有显著性差异(^*P<0.05)，表明活性物经纳米包载后能显著增强皮肤弹性，促进胶原蛋白和弹性蛋白的合成，紧致皮肤。对比例6～10活性物总含量相同，与对比例7～10相比，对比例6皮肤弹性值的增加量具有显著性差异(与对比例7比较，^aP<0.05；与对比例8比较，^bP<0.05；与对比例9比较，^cP<0.05；与对比例10比较，^dP<0.05)，说明DHA、麦角硫因、维生素E、波色因搭配使用可以协同增效，比单独使用高浓度活性成分增强皮肤弹性效果更好。

本发明制备的DHA抗衰抗炎纳米组合物中DHA、麦角硫因、维生素E、波色因能协同增效，制备的柔性脂质囊泡与皮肤细胞结构接近，生物相容性好，能显著提高活性物的透皮性能，并能在皮肤中长时间滞留，提高其生物利用度，具有优异的抗衰抗炎功效；DHA经纳米包载后稳定性大大提高，鱼腥味显著降低，且纳米组合物对皮肤温和无刺激，在化妆品中使用方便。

尽管上述实施例对本发明做出了详尽的描述，但它仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部实施例，人们还可以根据本实施例在不经创造性前提下获得其他实施例，这些实施例都属于本发明保护范围。

Claims

1.一种DHA抗衰抗炎纳米组合物，其特征在于，包括以下质量百分含量的组分：DHA 0.1～20％、麦角硫因0.01～20％、玻色因0.01～20％、维生素E0.1～20％和余量的载体辅料；所述载体辅料包括磷脂、胆固醇、柔性剂、多元醇和水。

2.根据权利要求1所述的纳米组合物，其特征在于，所述胆固醇占所述纳米组合物总质量的0.1～5％。

3.根据权利要求1所述的纳米组合物，其特征在于，所述磷脂包括脑磷脂、卵磷脂类磷脂和磷脂酰胆碱类磷脂中的一种或多种；所述磷脂占所述纳米组合物总质量的0.5～20％。

4.根据权利要求1所述的纳米组合物，其特征在于，所述柔性剂包括胆酸类柔性剂、聚乙二醇类柔性剂、聚甘油类柔性剂、月桂酰类柔性剂和蔗糖类柔性剂中的一种或多种；所述柔性剂占所述纳米组合物总质量的1～20％。

5.根据权利要求1所述的纳米组合物，其特征在于，所述多元醇包括丙二醇、丁二醇、1,2-戊二醇、1,2-己二醇、1,3-丙二醇、二丙二醇、山梨醇、甲基丙二醇、辛甘醇和甘油中的一种或多种；所述多元醇占所述纳米组合物总质量的1～40％。

6.根据权利要求1～5所述的纳米组合物，其特征在于，所述纳米组合物的粒径为10～200nm，Zeta电位为-60～0mV。

7.权利要求1～6任意一项所述的纳米组合物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

将DHA、维生素E和部分载体辅料混合，得脂质溶液；

将麦角硫因、玻色因和余量载体辅料混合，得到水相溶液；

8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述混合乳化的方式包括：在搅拌条件下，将所述脂质溶液滴加至所述水相溶液中。

9.根据权利要求7或8所述的制备方法，其特征在于，所述微米化处理包括高速剪切乳化；所述纳米化处理包括高压均质处理或高速微射流处理。

10.权利要求1～6任意一项所述的纳米组合物或权利要求7～9任意一项所述的制备方法制备得到的纳米组合物在化妆品中的应用。