CN114145356B - 一种可改善免疫应答的配方奶粉及其制备方法与应用 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种可改善免疫应答的配方奶粉及其制备方法与应用。本发明的该配方奶粉中含有2’‑岩藻糖基乳糖、乳糖‑N‑四糖与3’‑唾液酸基乳糖,其中,2’‑岩藻糖基乳糖、乳糖‑N‑四糖与3’‑唾液酸基乳糖在配方奶粉中的总含量为25‑4800mg/100g粉,或换算为奶液的含量为35‑6769mg/L。本发明的配方奶粉能够提升机体免疫应答。
Description
技术领域
本发明是关于一种含有母乳低聚糖的配方奶粉及其制备方法与应用,具体而言,是关于一种含有2’-岩藻糖基乳糖、乳糖-N-四糖与3’-唾液酸基乳糖而具有可提升免疫应答功效的配方奶粉、其制备方法与其在提升个体免疫应答功效方面的应用,属于配方奶粉技术领域。
背景技术
人体的免疫机能分为先天免疫和适应性免疫。单核-巨噬细胞系统(mononuclearphagocyte system,MPS)是天然免疫系统的主要组成部分,在机体抵御外源微生物入侵和清除病原体等方面起着重要作用。单核-巨噬细胞系统包括血液中的单核细胞和组织中固定或游走的巨噬细胞,其中单核细胞作为免疫效应细胞,在机体受外源入侵时从血液迁移至组织中并产生大量的炎症因子;同时其本身具有吞噬功能,能吞噬细胞和有害分子;此外,单核细胞还可分化成树状细胞或巨噬细胞进一步发挥免疫功能。巨噬细胞具有多方面的生物功能,其在天然免疫和适应性免疫的功能主要包括以下几个方面:非特异性免疫防疫,即在机体受到外来病原体入侵激发免疫应答前吞噬清除病原体;清除外来细胞;非特异性免疫监视;递呈抗原;分泌介质IL-1、干扰素及补体(C1,C4,C3,C2,B3因子)等细胞因子。此外巨噬细胞在组织发育、修护和维持机体稳定等方面也有重要功能。
由于单核巨噬细胞系统在机体功能的重要性,使得单核细胞分化成巨噬细胞这一过程尤为重要。巨噬细胞分化的紊乱会导致多种疾病的发生,比如炎症反应,自身免疫性疾病和白血病等。
人体肠道中存在大量的巨噬细胞,这些巨噬细胞主要由单核细胞分化而成,且迭代速度很快,它们能产生肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和许多其他的促炎症因子,对于维持肠道健康可能有重要的作用。TNF-α是一种涉及到系统性炎症的细胞因子,同时也是属于引起急相反应的众多细胞因子中的一员,主要由巨噬细胞分泌。TNF-α生产的失调被认为与许多人类疾病有关,包括阿兹海默氏症、癌症、重性抑郁障碍和肠炎等。
小肠上皮细胞形成了对致病菌的第一道抵御防线。致病菌吸附在小肠上皮细胞,或随之侵入,都会给上皮细胞提供信号,并进一步激发其产生细胞因子或趋化因子。这些是可溶性调节物质,能吸引免疫系统的细胞,或激活单核巨噬细胞系统并启动免疫应答。适宜的免疫应答可保护机体免受感染。特别是对于肠道功能尚未发育健全的婴幼儿而言,适宜的免疫应答是重要的。
因此,需要有维持单核细胞向巨噬细胞分化后正常免疫应答机能以促进肠道健康的解决方案。
发明内容
本发明的一个目的在于提供一种可改善免疫应答的配方奶粉。
本发明的另一目的在于提供所述配方奶粉的制备方法。
本发明的另一目的在于提供所述配方奶粉的应用。
本案发明人在实验研究中发现,母乳低聚糖2’-岩藻糖基乳糖、乳糖-N-四糖与3’-唾液酸基乳糖复配后,可改善机体单核细胞分化为巨噬细胞的免疫应答机能。从而,本发明中将2’-岩藻糖基乳糖、乳糖-N-四糖与3’-唾液酸基乳糖添加到奶粉中,提供了一种可改善免疫应答以促进肠道健康的配方奶粉。
具体而言,本发明提供了一种配方奶粉,该配方奶粉中含有2’-岩藻糖基乳糖、乳糖-N-四糖与3’-唾液酸基乳糖,其中,2’-岩藻糖基乳糖、乳糖-N-四糖与3’-唾液酸基乳糖在配方奶粉中的总含量为25-4800mg/100g粉,或换算为奶液的含量为35-6769mg/L。
2’-岩藻糖基乳糖(2’-fucosyllactose,2’-FL或2-FL或2FL),为岩藻糖与乳糖形成的三糖结构,是岩藻糖基类低聚糖的代表性物质。市售该物质通常为经微生物发酵法制备,与人乳中发现的2’-岩藻糖基乳糖具有相同结构。
乳糖-N-四糖,是以核心糖链为基础结构,且不含岩藻糖基或唾液酸基的低聚糖的代表性物质。现有技术中的乳糖-N-四糖商品,多是经微生物发酵法制备,与人乳中发现的乳糖-N-四糖寡糖具有相同结构。
3’-唾液酸基乳糖(3’-sialyllactose,3’-SL或3-SL或3SL),为唾液酸与乳糖形成的三糖结构,是唾液酸基类低聚糖的代表性物质。现有技术中的3’-唾液酸基乳糖商品,多是经微生物发酵法制备,与人乳中发现的3’-唾液酸基乳糖具有相同结构。
根据本发明的优选具体实施方案,本发明的配方奶粉中,所述2’-岩藻糖基乳糖、乳糖-N-四糖与3’-唾液酸基乳糖在配方奶粉中的总含量为165-4250mg/100g粉,或换算为奶液的含量为232-5992mg/L。
根据本发明的具体实施方案,本发明的配方奶粉是用于改善免疫应答,具体而言其是用于改善单核细胞分化为巨噬细胞的免疫应答活性。在本发明的一些具体实施方案中,所述改善单核细胞分化为巨噬细胞的免疫应答活性,是指提升单核细胞分化为巨噬细胞后应对刺激时的免疫应答活性,或是预防单核细胞受训分化为巨噬细胞后免疫应答活性的下降。特别是在人体肠道中,菌群代谢紊乱会产生异常浓度的脂多糖等毒素,本发明的研究发现,母乳低聚糖2’-岩藻糖基乳糖、乳糖-N-四糖与3’-唾液酸基乳糖的组合物可提升巨噬细胞应对这些毒素刺激的免疫应答活性。此外,单核细胞如果经过一些肠道毒素的刺激(即受训条件),再分化为巨噬细胞后其免疫应答活性会降低,而本发明发现母乳低聚糖2’-岩藻糖基乳糖、乳糖-N-四糖与3’-唾液酸基乳糖的组合物可预防免疫应答活性的降低,甚至进一步提升免疫应答活性。根据本发明的一些具体实施方案,本发明中通过检测单核细胞分化成巨噬细胞后分泌TNF-α的量来表征免疫应答活性。实验证明,本发明的母乳低聚糖2’-岩藻糖基乳糖、乳糖-N-四糖与3’-唾液酸基乳糖的组合物,可提升单核细胞分化为巨噬细胞后应对刺激(例如脂多糖刺激)时分泌TNF-α的量。从而,本发明中将母乳低聚糖2’-岩藻糖基乳糖、乳糖-N-四糖与3’-唾液酸基乳糖添加到配方奶粉中,提供了一种具有可改善免疫应答功效、有利于促进肠道健康的配方奶粉。
根据本发明的具体实施方案,本发明的配方奶粉中,所述2’-岩藻糖基乳糖、乳糖-N-四糖与3’-唾液酸基乳糖的质量比为3~5:1.5~2.5:1。
在本发明一些优选的实施方案中,本发明的配方奶粉中所述2’-岩藻糖基乳糖、乳糖-N-四糖与3’-唾液酸基乳糖的质量比为4:2:1。
根据本发明的具体实施方案,本发明的配方奶粉,可以是婴幼儿配方粉(婴幼儿配方食品),也可以是非婴幼儿乳粉例如儿童用乳粉或是成年人(包括中老年人)用乳粉。
根据本发明的一些具体实施方案,本发明的配方奶粉中,2’-岩藻糖基乳糖在乳粉中的含量至少为90mg/100g粉,或以换算成奶液计至少为127mg/L。在本发明的一些具体实施方案中,2’-岩藻糖基乳糖在乳粉中的含量为90-2500mg/100g粉,或以换算成奶液计为127-3525mg/L。
另,乳糖-N-四糖与3’-唾液酸基乳糖的量参照前述比例应用。
根据本发明的具体实施方案,本发明的配方奶粉中,还包括配方奶粉中的其他常规组分如蛋白质、脂肪、碳水化合物等。在本发明的一些具体实施方案中,本发明的配方奶粉为婴幼儿配方粉(婴幼儿配方食品)、儿童配方奶粉(针对儿童的乳粉)或是成人配方奶粉(针对成人例如中老年人的乳粉)。本发明的配方奶粉具有可改善免疫应答的功效,特别适用于改善个体肠道巨噬细胞的免疫应答。
根据本发明的具体实施方案,本发明的配方奶粉中总蛋白含量为10~20g/100g,所述的总蛋白主要包括乳蛋白。此外,其中乳清蛋白占总蛋白的比例通常控制为38%~70%。具体而言,提供乳蛋白的原料包括基础原料牛奶、全脂奶粉、脱脂奶粉、乳清蛋白粉、脱盐乳清粉中的一种或多种;优选地,基于1000重量份的本发明所述的配方奶粉,其原料包括:生牛乳850~3500重量份,脱脂奶粉0~300重量份,所述生牛乳、脱脂奶粉可部分或全部用相当量的全脂奶粉、脱脂牛奶替代。进一步,为强化乳清蛋白可添加乳清蛋白粉(例如乳清蛋白粉WPC 80%、乳清蛋白粉WPC 34%等)、脱盐乳清粉(例如脱盐乳清粉D70、D90等)中的一种或多种,优选包括脱盐乳清粉以及乳清蛋白粉(例如乳清蛋白粉WPC 80%和/或乳清蛋白粉WPC 34%);且为强化产品中的α-乳清蛋白可进一步添加有原料α-乳清蛋白粉,以及为强化产品中的β-酪蛋白更进一步添加有原料β-酪蛋白粉;优选地,基于1000重量份的本发明所述的配方奶粉,其原料包括:乳清蛋白粉0~170重量份;脱盐乳清粉25~300重量份;α-乳清蛋白粉0~40重量份;β-酪蛋白粉0~25重量份。
根据本发明的具体实施方案,本发明的配方奶粉中,脂肪含量为15~29g/100g。提供脂肪的原料除含有乳脂的基础原料(如前述的生牛乳、脱脂奶粉)或无水奶油外,还可包括植物油,所述植物油可以包括葵花籽油、玉米油、大豆油、低芥酸菜籽油、椰子油、棕榈油、核桃油中的一种或多种,优选包括葵花籽油、玉米油和大豆油,这些植物油的添加一方面为产品提供脂肪成分,另一方面提供亚油酸,同时还可提供α-亚麻酸(优选地,本发明的奶粉中α-亚麻酸含量为200~500mg/100g)。此外,提供脂肪的原料还可选择性包括为提供1,3-二油酸-2-棕榈酸甘油三酯而添加的原料OPO结构脂。由于目前市场上所售OPO结构脂原料纯度不一,即其中有效成分1,3-二油酸-2-棕榈酸甘油三酯的含量不尽相同,通常在40%~70%左右,本发明中,为区分有效成分1,3-二油酸-2-棕榈酸甘油三酯及其原料,在描述有效成分时采用术语“1,3-二油酸-2-棕榈酸甘油三酯”,在描述提供有效成分1,3-二油酸-2-棕榈酸甘油三酯的食品原料时采用俗称“OPO结构脂”。OPO结构脂的具体添加量可根据本发明奶粉产品中对1,3-二油酸-2-棕榈酸甘油三酯的含量要求及OPO结构脂原料纯度进行换算。更优选地,基于1000重量份的本发明所述的配方奶粉,其原料包括:葵花籽油0~80重量份;玉米油0~40重量份;大豆油0~80重量份;OPO结构脂0~140重量份;无水奶油0~4重量份。
优选地,本发明中所用原料葵花籽油、玉米油、大豆油、OPO结构脂中的亚油酸和α-亚麻酸的含量分别为7.6%~8.9%、0.25%~0.38%,53.0%~56.20%、0.9%~1.6%,50.0%~53.5%、7.6%~9.6%,5.9%~6.3%、0.4%~0.62%,所用的低芥酸菜籽油亚油酸和α-亚麻酸的含量分别为16%~19%、8.0%~10.6%,椰子油亚油酸和α-亚麻酸的含量分别为1%~3%、0~1%。OPO结构脂原料中1,3-二油酸-2-棕榈酸甘油三酯的有效含量为40%~70%。
根据本发明的具体实施方案,本发明的配方奶粉中,碳水化合物来自含有乳糖的基础原料如牛奶、全脂奶粉和/或脱脂奶粉等,此外可根据需要额外添加乳糖原料来提供碳水化合物。优选地,基于1000重量份的所述配方奶粉,其原料包括:乳糖90~325重量份。可在所述范围内调整乳糖的具体添加量以使本发明的配方奶粉碳水化合物含量为50g~58g/100g。
根据本发明的具体实施方案,本发明的配方奶粉,其原料中还可包括适当的DHA、ARA、核苷酸、乳铁蛋白等中的一种或多种,还包括包含钙粉、维生素和矿物质的复配营养素。优选地,基于1000重量份的所述配方奶粉,其原料包括:DHA为8-15重量份,ARA为14-28重量份;乳铁蛋白0~0.7重量份;包含钙粉、维生素和矿物质的复配营养素8~17重量份。
本发明的配方奶粉中,所述的复配营养素为符合国家标准的营养成分的组合,按照不同配方使用不同添加量。本发明的配方奶粉根据需要若添加营养素可选择性采用下述复配营养素成分中的任一或任意组合。优选地,所述复配营养素至少包括复配维生素、钙粉、矿物质营养包,各组分用量为:
1)复配维生素,每克复配维生素中:
牛磺酸:140~340mg
维生素A:1700~5800μgRE
维生素D:25~70μg
维生素B1:3000~6800μg
维生素B2:3500~6900μg
维生素B6:2400~4000μg
维生素B12:8~20μg
维生素K1:200~700μg
维生素C:155~700mg
维生素E:10~70mgα-TE
烟酰胺:10000~41550μg
叶酸:500~920μg
生物素:100~245μg
泛酸:7100~25230μg
肌醇:0-250mg
左旋肉碱:0-60mg
2)矿物质二,每克矿物质二中:
钙:300~455mg
磷:75~150mg
3)矿物质一,每克矿物质一中:
铁:40~110mg
锌:23~90mg
铜:2600~4180μg
碘:500~995μg
硒:0~200μg
锰:0~579μg
4)复配氯化镁,每克氯化镁包中:
镁:80~170mg
5)复配氯化钾,每克氯化钾包中:
钾:400~580mg;
6)氯化胆碱,每克氯化胆碱包中
胆碱:300~950mg
上述复配营养素的基料优选为乳糖或L-抗坏血酸钠。基于1000重量份的所述配方奶粉,复配营养素的添加量为7~17重量份,其中,复配维生素营养包优选为2~4重量份,矿物质二营养包优选为2~12重量份,矿物质一营养包优选为0.5~3重量份,氯化镁0~2重量份,氯化钾0~4.5重量份,各营养包的基料优选为乳糖或L-抗坏血酸钠。
上述复配营养素的各组分含量,是指为强化所述营养素物质的添加量,不包括奶粉其他原料中的营养素组分含量,例如,矿物质二中的钙粉(碳酸钙),每1000千克奶粉中“钙:1300~1600g”是指为强化产品中的钙元素,基于1000千克重量的奶粉,添加矿物质二(例如碳酸钙)以其中钙元素重量计为1300~1600g。
根据本发明的具体实施方案,本发明的配方奶粉中,还可包括益生菌,优选地,所述益生菌为双歧杆菌。优选地,基于1000重量份的所述配方奶粉,双歧杆菌的添加量为0.1~0.2重量份;再优选为0.18~0.2重量份。更优选地,每重量份双歧杆菌粉含双歧杆菌为3×1010CFU以上。
根据本发明的一些优选的具体实施方案,本发明的配方奶粉,其原料包括:
HMO(2’-岩藻糖基乳糖、乳糖-N-四糖与3’-唾液酸基乳糖)0.25-42.5重量份。
可以理解,本发明的配方奶粉中,各原料的具体用量应在满足对配方奶粉产品指标要求的前提下进行调整而确定。本发明的配方奶粉中,未详细说明或列出的产品性能指标均应按照婴幼儿配方食品或调制乳粉的国家标准及相关标准和法规的规定执行。
本发明的配方奶粉中,各原料均可商购获得,各原料的选用应符合相关标准要求。此外,所述复配营养素也可自行复配。本发明中仅是为方便表述而采用“复配”,并不意味着复配物中各组分必须先混合在一起再应用。各原料均应在满足相关法规前提下添加使用。
在本发明的一些具体实施方案中,本发明的配方奶粉中的总蛋白含量为10~20g/100g,乳清蛋白占总蛋白的比例为38%~70%,α-乳清蛋白含量为1~3g/100g,β-酪蛋白含量为0~4g/100g,脂肪含量为15~29g/100g,亚油酸含量为1800~5000mg/100g,α-亚麻酸含量200~500mg/100g,膳食纤维0.95~6.3g/100g,碳水化合物含量为50~58g/100g,母乳低聚糖(2’-岩藻糖基乳糖、乳糖-N-四糖与3’-唾液酸基乳糖)25-4250mg/100g。优选地,其中所述膳食纤维包括母乳低聚糖,还可包括低聚半乳糖和/或低聚果糖。
另一方面,本发明还提供了所述配方奶粉的制备方法,该方法包括:
采用湿法或干法或干湿复合生产工艺,将所述2’-岩藻糖基乳糖、乳糖-N-四糖与3’-唾液酸基乳糖与配方中的其他原料混合,制备所述配方奶粉。
具体地,本发明的制备所述配方奶粉的方法,其制备的工艺流程主要包括:配料、均质、浓缩杀菌、喷雾干燥、干混得到成品。
在一些具体实施方案中,本发明的制备所述配方奶粉的方法包括:
1)牛奶粗滤:牛奶经过粗过滤及平衡缸脱气后,经过板式换热器预热后,经过分离机分离杂质。
2)牛奶均质杀菌:去除杂质后的生牛乳一部分进入均质机均质,另一部分不均质,二者在均质后进行混合进入杀菌系统杀菌。
3)粉类添加:各种粉类原料按配方经计量后通过风送系统统一加入到配粉罐中贮存。
4)真空吸粉:配粉罐中的各种粉类原料(包括母乳低聚糖原料)通过真空系统吸入真空混料罐中。
5)溶化配油:按配方要求将配方中规定的油脂放入化油间,化油间的温度应保持在50~90℃,待油溶化后,按配方比例要求通过油泵和流量计打入混合油贮罐中。
6)混合油料贮存:混合油在油贮存罐中保温贮存,温度40~50℃,贮存时间小于12小时防止脂肪氧化。
7)称重:按配方要求将混合油经油泵打入混料罐。
8)营养素溶解添加:钙粉、矿物质、维生素等分别添加,用100~200kg纯净水,分别溶解后,打入湿混缸,每打完一种用100kg纯净水冲洗添加罐和管线。
9)过滤:经混合的料液经滤网过滤,去除原料中可能带入的物理杂质。
10)均质:混合后的料液通过均质机进行均质,均质一级压力为105±5bar,均质一级压力为32±3bar,将脂肪球进行机械处理,把它们分散成均匀一致的脂肪球。
11)冷却与贮存:均质后的料液进入板式换热器进行冷却:冷却至20℃以下,暂存在预存缸中,6小时内进入下道工序,搅拌器按设定需求开启。
12)浓缩杀菌:生产时使用双效浓缩,杀菌温度≥83℃,杀菌时间25秒。出料浓度均为48%~52%干物质。
13)浓奶贮存、预热过滤、喷雾干燥:浓缩后的奶暂存在浓奶平衡罐。经刮板预热器预热到60~70℃,预热后物料经1mm孔径的过滤器过滤后,用高压泵打入干燥塔喷雾干燥,细粉按要求在塔顶或流化床附聚。进风温度:165~180℃,排风温度75-90℃,高压泵压力160~210bar,塔负压-4~-2mbar。
14)流化床干燥冷却:从干燥塔出来的粉再经流化床(一级)二次干燥后,经流化床(二级)冷却到25~30℃,得到奶粉主料。可根据需要将磷脂类载体加热至60~65℃,在压缩空气作用下,均匀分散到粉表面,使粉颗粒附聚增加其颗粒度和速溶性。
15)分装:当配方中包括DHA、ARA乳铁蛋白、双歧杆菌时,按照配方要求,将DHA、ARA乳铁蛋白、双歧杆菌称量封袋分装。
16)干混:将称量好的DHA、ARA、乳铁蛋白、双歧杆菌与奶粉主料在干混机内混均。
17)筛粉:通过振动筛,使奶粉的颗粒度均匀,粉渣报废处理。
18)出粉:用经过消毒的集粉箱接粉,并由出粉间运至上粉间。
19)上粉:将奶粉按包装要求倒入大小包装机上的储粉罐中。
20)包装:800克自动包装机充氮包装。充氮时含氧量低于1%。900克铁听自动充氮包装含氧量低于5%。
21)装箱:将已包装的小袋装入纸箱中同时加入粉勺,用封箱机封口。
22)成品检验:对包装完后的产品按检验计划进行抽样检验。
23)入库贮存:经检验合格的产品入库贮存,要求在常温下贮存,湿度≤65%。
另一方面,本发明还提供了所述配方奶粉在作为改善免疫应答的食品中的应用。换而言之,本发明提供了所述的2’-岩藻糖基乳糖、乳糖-N-四糖与3’-唾液酸基乳糖的组合物在制备改善免疫应答功效(有利于提升机体免疫应答)的食品(配方奶粉)中的应用。
综合而言,本发明提供了一种含有2’-岩藻糖基乳糖、乳糖-N-四糖与3’-唾液酸基乳糖的配方奶粉及其制备方法,本发明的配方奶粉可用于改善单核细胞分化为巨噬细胞的免疫应答活性,能提升单核细胞分化为巨噬细胞后的免疫应答活性,预防单核细胞受训分化为巨噬细胞后免疫应答活性的下降,有利于改善个体免疫应答。
附图说明
图1显示本发明中的母乳低聚糖对单核细胞分化巨噬细胞的免疫应答的效果。
具体实施方式
为了对本发明的技术特征、目的和有益效果有更加清楚的理解,现结合具体实例对本发明的技术方案进行以下详细说明,应理解这些实例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。
除非另外专门定义,本文使用的所有技术和科学术语都与相关领域普通技术人员的通常理解具有相同的含义。实施例中各组分的含量检测采用所属领域中的常规方法。实施例中未详细注明的操作条件,按照所属领域的常规操作进行。
实施例1、婴儿配方奶粉(制备1000千克)
生牛乳1000千克,乳糖334千克,乳清蛋白粉WPC80%25千克,脱盐乳清粉D90 175千克,玉米油40千克,大豆油50千克,OPO结构脂140千克,α-乳清蛋白粉27千克,β-酪蛋白粉9千克,无水奶油1千克,低聚果糖粉8千克,低聚半乳糖浆10千克,母乳低聚糖组合物1.65千克,复配营养素17千克,DHA12千克,ARA 22千克,双歧杆菌0.1千克。
其中复配营养素包括复配维生素营养包约2.5千克、氯化胆碱营养包约0.75千克、钙粉营养包约6千克、矿物质营养包约1千克、氯化镁营养包约1.5千克和氯化钾营养包约2千克,各营养包的基料为乳糖。
本实施例的婴儿配方奶粉具体制备工艺如下:
1)牛乳粗滤:将牛乳经过粗过滤及平衡缸脱气后,经过板式换热器预热后,经过分离机分离杂质。
2)牛乳均质杀菌:去除杂质后的生牛乳一部分进入均质机均质,另一部分不均质,二者在均质后进行混合进入杀菌系统杀菌。
3)粉类添加:各种粉类原料按配方经计量后通过风送系统统一加入到配粉罐中,并通过真空系统吸入真空混料罐中;
4)溶化配油:按配方要求将配方中规定的油脂放入化油间,化油间的温度保持在50~90℃,待油溶化后,打入混合油贮罐中,并按配方要求将混合油经油泵打入混料罐中;
5)营养素溶解添加:将钙粉、维生素、矿物质等营养素包用纯净水分别溶解后,依序添加到混料罐中,得到混合的料液。
6)过滤:经混合的料液经滤网过滤,去除原料中可能带入的物理杂质。
7)均质:混合后的料液通过均质机进行均质,将脂肪球进行机械处理,把它们分散成均匀一致的脂肪球。
8)冷却与贮存:均质后的料液进入板式换热器进行冷却:冷却至20℃以下,暂存在预存缸中,6小时内进入下道工序,搅拌器按设定需求开启。
9)浓缩杀菌:生产时使用双效浓缩,杀菌温度≥83℃,杀菌时间25秒。出料浓度均为50%干物质。
10)浓奶贮存、预热过滤、喷雾干燥:浓缩后的奶暂存在浓奶平衡罐。经刮板预热器预热到60℃,预热后物料经1mm孔径的过滤器过滤后,用高压泵打入干燥塔喷雾干燥,细粉按要求在塔顶或流化床附聚。进风温度:180℃,排风温度86℃,高压泵压力200bar,塔负压-4mba左右。
11)流化床干燥冷却:从干燥塔出来的粉再经流化床(一级)二次干燥后,经流化床(二级)冷却到30℃,得到奶粉主料。
12)分装:按照配方要求,将DHA、ARA或双歧杆菌称量封袋分装。
13)干混:将称量好的DHA、ARA或双歧杆菌与奶粉主料在干混机内混均。
14)筛粉:通过振动筛,使奶粉的颗粒度均匀,粉渣报废处理。
15)出粉:用经过消毒的集粉箱接粉,并由出粉间运至上粉间。
16)上粉:将奶粉按包装要求倒入大小包装机上的储粉罐中。
17)包装:400克自动包装机充氮包装。充氮时含氧量低于1%。900克铁听自动充氮包装含氧量低于5%。
18)装箱:将已包装的小袋装入纸箱中同时加入粉勺,用封箱机封口。
19)成品检验:对包装完后的产品按检验计划进行抽样检验。
20)入库贮存:经检验合格的产品入库贮存,要求在常温下贮存,湿度≤65%。
本产品中母乳低聚糖含量为165mg/100g粉,换算为奶液的含量为232mg/L,其中2’-岩藻糖基乳糖(2’-fucosyllactose,2’-FL或2-FL)的含量为90mg/100g粉,换算为奶液的含量为127mg/L;乳糖-N-四糖(lacto-N-tetraose,LNT)为45mg/100g粉,换算为奶液的含量为63mg/L;3’-唾液酸基乳糖(3’-sialyllactose,3’-SL)为30mg/100g粉,换算为奶液的含量为42mg/L。
实施例2、婴儿配方奶粉(制备1000千克)
生牛乳1000千克,脱脂奶粉250千块,乳糖117.5千克,乳清蛋白粉WPC34%50千克,脱盐乳清粉D90 225千克,OPO结构脂106千克,大豆油37千克,玉米油30千克,α-乳清蛋白粉10千克,β-酪蛋白粉10千克,低聚果糖粉5千克,低聚半乳糖浆15千克,母乳低聚糖组合物42.5千克,复配营养素11千克,DHA12千克,ARA 14千克,双歧杆菌0.2千克,核苷酸0.65千克。
其中复配营养素包括复配维生素营养包约1.5千克、氯化胆碱营养包约0.75千克、钙粉营养包约5千克、矿物质营养包约1千克、氯化镁营养包约0.75千克和氯化钾营养包约2千克,各营养包的基料为乳糖。产品制备工艺如实施例一。
本产品中母乳低聚糖含量为4250mg/100g粉,换算为奶液的含量为5992.5mg/L,其中2’-岩藻糖基乳糖(2’-fucosyllactose,2’-FL或2-FL)的含量为2500mg/100g粉3525;乳糖-N-四糖(lacto-N-tetraose,LNT)为1250mg/100g粉1762.5;3’-唾液酸基乳糖(3’-sialyllactose,3’-SL)为500mg/100g粉705。
实施例3、婴儿配方奶粉(制备1000千克)
生牛乳1000千克,乳糖200千克,乳清蛋白粉WPC34%75千克,脱盐乳清粉D90 175千克,葵花油105千克,大豆油45千克,玉米油23千克,α-乳清蛋白粉10千克,β-酪蛋白粉10千克,低聚果糖粉3千克,低聚半乳糖浆25千克,母乳低聚糖组合物24千克,复配营养素18.85千克,DHA12千克,ARA 14千克,双歧杆菌0.1千克,核苷酸0.6千克。
其中复配营养素包括复配维生素营养包约3.5千克、氯化胆碱营养包约1.5千克、钙粉营养包约10千克、矿物质营养包约1千克、氯化镁营养包约0.85千克和氯化钾营养包约2千克,各营养包的基料为乳糖。产品制备工艺如实施例一。
本产品中母乳低聚糖含量为2400mg/100g粉,换算为奶液的含量为3384mg/L,其中2’-岩藻糖基乳糖(2’-fucosyllactose,2’-FL或2-FL)的含量为1500mg/100g粉;乳糖-N-四糖(lacto-N-tetraose,LNT)为600mg/100g粉;3’-唾液酸基乳糖(3’-sialyllactose,3’-SL)为300mg/100g粉。
母乳低聚糖组合物改善单核细胞分化为巨噬细胞免疫应答功效实验
通过驯化与激活单核细胞考察了HMO对单核细胞分化为巨噬细胞免疫应答活性的影响。
单核细胞的采集与培养
具体血样采集与培养的实验条件如下所述:
使用生产商推荐的操作方法,采用quadroMACS系统和CD14 microbeads磁珠分选试剂盒(Miltenyi Biotec,莱顿,荷兰),从多名健康的成年捐献者血样中分离获得单核细胞。采集血样前,获得了捐献者的书面同意。
单核细胞的培养:在添加了10%胎牛血清(FBS,Hyclone,埃因霍温,荷兰),1%MEM非必需氨基酸(Gibco布雷斯维克,荷兰),1%丙酮酸钠(Lonza,布雷达,荷兰),1%青霉素/链霉素(Sigma,圣路易斯,密苏里州,美国)的RPMI 1640–Glutamax培养基(Gibco,布雷斯维克,荷兰)中,以1×106细胞/2ml/孔的浓度在24孔板培养。
免疫应答活性考察实验包括了预处理单核细胞以及6天后进行的免疫应答挑战测试。具体操作如下:
单核细胞从液氮中恢复,在恢复1天后,分别进行以下组别的实验,且本实验中所有HMO原料均来自于Jennewein:
HMO组:将不同HMO受试样品(不同HMO单体或不同比例的HMO组合物,其中HMO组合物中各单体比例以质量比计)添加到单核细胞培养基中,添加终浓度为0.1mg/mL,与单核细胞共同培养24小时,之后更换新鲜的培养基(冲洗掉受试HMO)继续培养6天,以使单核细胞分化为巨噬细胞。然后,添加脂多糖(脂多糖在培养基中的终浓度10ng/mL)刺激24小时,再从上清液中测定分泌的TNF-α情况。
对照组1(脂多糖组):采用脂多糖对单核细胞进行预处理,即,将脂多糖添加到单核细胞培养基中,添加终浓度为0.1mg/mL,与单核细胞共同培养24小时,之后更换新鲜的培养基(冲洗掉LPS)继续培养6天,以使单核细胞分化为巨噬细胞。然后,添加脂多糖(脂多糖在培养基中的终浓度10ng/mL)刺激24小时,再从上清液中测定分泌的TNF-α情况。该对照组前期脂多糖预处理的目的是使单核细胞对后续的再度刺激做出响应的能力下降,预期脂多糖可降低单核细胞对于第二次脂多糖刺激的响应情况。
对照组2(培养基组):单核细胞在未添加任何受试物质的培养基中培养7天,以使单核细胞分化为巨噬细胞。然后,添加脂多糖(脂多糖在培养基中的终浓度10ng/mL)刺激24小时,再从上清液中测定分泌的TNF-α情况。实验方法参考了Bekkering等人(2016,Clinical and Vaccine Immunology)报道的方法,使用ELISA(酶联免疫吸附测定)和TNF-α专用试剂盒测定TNF-α,且ELISA测定的波长为450nm,使用Plate Reader Spark装置进行吸收值测定,Spark的序列号为2009003477,SparkControl应用的序列号为V3.1。
数据分析
用one way ANOVA对巨噬细胞免疫应答数据进行统计分析。两个组若有显著性差异,且p<0.05,则用星号*表示。两个星号**表示p<0.01。三个星号***表示p<0.001。
实验结果
实验结果请参见图1。质量比为4:2:1的2’-FL:LNT:3’-SL母乳低聚糖组合物的组别,在单核细胞受训模型中,显示出了对于TNF-α分泌量的显著提升作用(p<0.05)。
此外,如实验预期,脂多糖组别的测试结果显示,脂多糖降低了免疫响应,可见相比不含任何受试物质的培养基组,脂多糖组降低效果很显著。
实验结果证明,包括特定比例的2’-岩藻糖基乳糖、乳糖-N-四糖与3’-唾液酸基乳糖的母乳低聚糖组合物对于改善单核细胞分化为巨噬细胞的免疫应答活性有显著效果,体现了该组合物的协同效应。
Claims (8)
1.一种配方奶粉在制备用于改善单核细胞分化为巨噬细胞的免疫应答活性的食品中的应用,该配方奶粉中含有2’-岩藻糖基乳糖、乳糖-N-四糖与3’-唾液酸基乳糖作为改善单核细胞分化为巨噬细胞的免疫应答活性的活性成分,其中,所述2’-岩藻糖基乳糖、乳糖-N-四糖与3’-唾液酸基乳糖的质量比为3~5:1.5~2.5:1,2’-岩藻糖基乳糖、乳糖-N-四糖与3’-唾液酸基乳糖在配方奶粉中的总含量为25-4800mg/100g粉,或换算为奶液的含量为35-6769mg/L。
2. 根据权利要求1所述的应用,该配方奶粉中的总蛋白含量为10~20g/100g,乳清蛋白占总蛋白的比例为38%~70%,α-乳清蛋白含量为1~3 g/100g,β-酪蛋白含量为0~4 g/100g,脂肪含量为15~29g/100g,亚油酸含量为1800~5000mg/100g,α-亚麻酸含量200~500mg/100g,膳食纤维含量0.95~6.3g/100g,碳水化合物含量为50~58g/100g。
3.根据权利要求2所述的应用,其中,所述膳食纤维包括母乳低聚糖。
4.根据权利要求3所述的应用,其中,所述膳食纤维还包括低聚半乳糖和/或低聚果糖。
5. 根据权利要求1所述的应用,其中,所述2’-岩藻糖基乳糖、乳糖-N-四糖与3’-唾液酸基乳糖在配方奶粉中的总含量为165-4250mg/100g粉,或换算为奶液的含量为232-5992mg/L。
6. 根据权利要求1所述的应用,2’-岩藻糖基乳糖在乳粉中的含量至少为90 mg/100g粉,或以换算成奶液计至少为127 mg/L。
7.根据权利要求1所述的应用,其为婴幼儿配方粉、儿童用乳粉或是成年人用乳粉。
8.权利要求1~7任一项所述的应用,其中,所述配方奶粉是按照以下方法制备得到的,该方法包括:
采用湿法或干法或干湿复合生产工艺,将所述2’-岩藻糖基乳糖、乳糖-N-四糖与3’-唾液酸基乳糖与配方中的其他原料混合,制备所述配方奶粉。
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