CN114223728B - 含有益生元与益生菌的早产/低出生体重婴儿配方奶粉 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了含有益生元与益生菌的早产/低出生体重婴儿配方奶粉。具体而言，本发明提供了一种长双歧杆菌婴儿亚种与母乳低聚糖的组合物在制备具有可有效提升生物体对金黄色葡萄球菌感染的抵御能力、可提高生物体先天免疫功效的配方奶粉中的应用，其中，每100g配方奶粉中含有长双歧杆菌婴儿亚种1×103CFU～1×1012CFU，母乳低聚糖0.1g～10g。
Description
技术领域
本发明是关于一种含有益生元与益生菌的早产/低出生体重婴儿配方奶粉，具体地说，是关于一种含有长双歧杆菌婴儿亚种与母乳低聚糖的适用于早产/低出生体重婴儿的配方奶粉、所述奶粉的制备方法与应用。
背景技术
大量医学文献记载，未经母乳喂养的婴儿相对于母乳喂养的婴儿，有较高的疾病率和死亡率。母乳不仅为婴儿提供所需营养，母乳中的活性成分更为婴儿的肠道发育和免疫力完善提供保障。母乳喂养的婴儿与配方奶喂养的婴儿相比，肠道菌群中有益菌的相对丰度更高，特别是双歧杆菌和乳酸菌。
母乳通过菌群的传递，加上母乳低聚糖和母乳中的细胞因子等活性成分，为新生儿建立起健康的肠道菌群。婴儿每天通过母乳摄入107-108个细菌，包括乳酸菌和双歧杆菌。这些菌通过母乳直接传递给婴儿，部分可在婴儿肠道定植，促进生命早期肠道菌群的建立。婴儿肠道菌群的建立，对其肠道的发育，以及对健康和免疫系统有着短期，甚至终生的影响。
母乳低聚糖(Human Milk Oligosaccharides，简称HMOs)是人乳中存在的第三大乳化合物群体。其在婴幼儿早期发育中起着重要的作用。迄今为止，已经确定了130多不同的结构，但功能影响尚为未知。乳中大多数寡糖不能被消化，因此，HMO可以作为益生元。此外，HMO在免疫系统的成熟方面及其作为免疫调节剂的作用显示它对婴幼儿健康发育的重要性。目前，HMO已经被加入到婴儿配方食品中。
金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,S.aureus)是一种革兰氏阳性菌，属于葡萄球菌属，是常见的食源性致病微生物。它广泛存在于自然环境中，在适当条件下，能产生肠毒素并能引起食物中毒，引发过多起由金黄色葡萄球菌导致的食源性微生物食物中毒事件。人体在受到金黄色葡萄球菌感染后，可能会出现恶心、呕吐、头晕等常见的食物中毒症状，并可能出现肠炎、肺炎、皮肤感染、伤口感染溃烂、脑膜炎等症状。
早产/低出生体重儿是指出生胎龄小于37周、出生体重低于2500g的新生儿，是需要特殊关注的群体，在生长发育上主要关注体重增长、免疫力、智力发育、消化吸收等几个方面，合理的营养支持是提高其存活率的关键环节之一，不仅关系到近期生长和疾病转归，而且直接影响远期预后，充足均衡的营养是保证早产/低出生体重儿健康成长的物质基础。
目前在早产/低出生体重婴儿配方奶粉、婴幼儿配方粉、辅食及营养补充剂领域，需要有缓解婴幼儿肠道不适及提升自身抵御致病菌如金黄色葡萄球菌感染能力的解决方案。
发明内容
本案发明人在研究中发现，一些长双歧杆菌婴儿亚种与母乳低聚糖组合可提升生物体抵抗金黄色葡萄球菌感染的能力，从而提供了下述发明：
一方面，本发明提供了一种长双歧杆菌婴儿亚种与母乳低聚糖的组合物在制备母乳化早产/低出生体重婴儿配方奶粉中的应用，其中，每100g配方奶粉中含有长双歧杆菌婴儿亚种1×103CFU～1×1012CFU，母乳低聚糖0.1g～10g。
本发明的所述母乳化早产/低出生体重婴儿配方奶粉具有可有效提升生物体对金黄色葡萄球菌感染的抵御能力和/或提高生物体先天免疫功效。
另一方面，本发明还提供了一种母乳化早产/低出生体重婴儿配方奶粉，其具有可有效提升生物体对金黄色葡萄球菌感染的抵御能力、可提高生物体先天免疫功效，其是将长双歧杆菌婴儿亚种与母乳低聚糖添加到母乳化早产/低出生体重婴儿配方奶粉中制备得到的。
根据本发明的具体实施方案，本发明的母乳化早产/低出生体重婴儿配方奶粉，主要适用于无喂养不耐受(FI)临床表现的晚期早产儿及足月低出生体重婴儿。
根据本发明的具体实施方案，本发明的所述母乳化早产/低出生体重婴儿配方奶粉中，所述长双歧杆菌婴儿亚种包括保藏编号为CGMCC No.21109的长双歧杆菌婴儿亚种(Bifidobacterium longum subsp.infantis)YLGB-1496菌株。保藏编号为CGMCC No.21109的长双歧杆菌婴儿亚种菌株已于2020年12月05日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，保藏日期：2020年12月05日；保藏编号：CGMCC No.21109；分类命名：长双歧杆菌婴儿亚种(Bifidobacterium longum subsp.infantis)。本发明中将该菌株也称为YLGB-1496或GB-1496。
根据本发明的具体实施方案，本发明的所述母乳化早产/低出生体重婴儿配方奶粉中，总蛋白质含量为10g～20g/100g，乳清蛋白占总蛋白的比例为50％～90％；脂肪含量为15g～30g/100g，中链甘油三酯占总脂肪比例为20-38％；碳水化合物含量为50g～70g/100g。
根据本发明的具体实施方案，本发明的所述母乳化早产/低出生体重婴儿配方奶粉中，还含有亚油酸与α-亚麻酸，亚油酸含量为2700～4500mg/100g，α-亚麻酸含量为270～450mg/100g。
根据本发明的具体实施方案，本发明中的所述母乳化早产/低出生体重婴儿配方奶粉可以为针对在医院内，营养需求可满足出生体重大于1500g的早产/低出生体重儿；以及进入第二阶段“稳定-生长期”的早产/低出生体重儿婴儿的配方粉，针对满足出院条件后的婴儿的配方粉。具体地，针对院内配方粉中，总蛋白含量为10～20g/100g，乳清蛋白占总蛋白的比例为60～90％，脂肪含量为23～30g/100g，中链甘油三酯占总脂肪比例为20-38％，亚油酸含量为2700～4500mg/100g，α-亚麻酸含量为270～450mg/100g，碳水化合物含量为50～60g/100g。针对出院后的配方粉中，总蛋白含量为10～20g/100g，乳清蛋白占总蛋白的比例为50～80％，脂肪含量为20～30g/100g，中链甘油三酯占总脂肪比例为20-38％，亚油酸含量为2700～4500mg/100g，α-亚麻酸含量为270～450mg/100g，碳水化合物含量为50～60g/100g。
根据本发明的具体实施方案，本发明的所述母乳化早产/低出生体重婴儿配方奶粉，基于1000重量份的母乳化早产/低出生体重婴儿配方奶粉，其原料组成包括：
淀粉糖200～400重量份、食用植物调和油200～300重量份、脱盐乳清粉100～300重量份、乳清蛋白粉0～100重量份、脱脂奶粉50～150重量份、乳清蛋白粉(α-乳清蛋白粉)0-40重量份、酪蛋白0～30重量份、无水奶油0-50重量份、大豆磷脂0～5重量份、低聚果糖粉0～30重量份、低聚半乳糖浆0～90重量份。
上述原料配方中，淀粉糖可以是麦芽糊精、也可以是固体玉米糖浆，或其他符合国标要求的淀粉糖原料。
上述原料配方中，乳清蛋白粉包括乳清蛋白粉(水解工艺)。
上述原料配方中，脱盐乳清粉、乳清蛋白粉、脱脂奶粉的蛋白质、乳糖和脂肪可用生牛乳全部或部分替代。
根据本发明的具体实施方案，本发明的母乳化早产/低出生体重婴儿配方奶粉中，除上述组分外，还可包括婴儿配方奶粉的常规组分，例如还可以包括复配营养素、膳食纤维、肌醇、牛磺酸、左旋肉碱、二十二碳六烯酸、二十碳四烯酸、叶黄素、核苷酸、乳铁蛋白中的一种或多种。在一些优选的实施方案中，所述配方奶粉包括0-20份的营养素，所述营养素包括维生素和矿物质，或进一步选择性包括膳食纤维(低聚果糖、低聚半乳糖、多聚果糖等)、肌醇、牛磺酸、左旋肉碱、二十二碳六烯酸、二十碳四烯酸、叶黄素、核苷酸、乳铁蛋白中的一种或多种。复配营养素主要包括：复配维生素：维生素A、维生素D、维生素E、维生素K1、维生素B1、维生素B2、维生素B6、维生素B12、烟酸、叶酸、泛酸、维生素C、胆碱、生物素；复配矿物质：钠、钾、钙、磷、铜、铁、锌、锰、碘、硒、镁、钾及它们的衍生物。在一些具体实施方案中，基于1000重量份的母乳化早产/低出生体重婴儿配方奶粉，其原料组成包括：复配维生素1～7重量份、矿物质一0～3重量份、矿物质二1～20重量份；矿物质三1-20重量份、氯化镁1-3重量份、氯化胆碱0～3重量份，其中，矿物质一包括铜、铁、碘等元素，矿物质二包括钠、钾等元素、矿物质三包括钙、磷等元素。所述各维生素、矿物质的来源、含量及使用量，应该符合特医婴儿配方食品国家标准及相关法规。
本发明配方中的复配维生素、各种矿物质可以采用符合国家标准的营养成分的复合营养素组合物，按照不同配方使用不同添加量，具体添加方式可以参照所属领域的常规操作进行。优选地，本发明的配方奶粉根据需要若添加复合营养素可选择性采用下述复配营养素成分中的任一或任意组合(每克含量；各指标按添加范围的中间值计算量；基本不存在所有指标含量同时最大的情况)，所述复配营养素至少包括复配维生素、钙粉、矿物质营养包，各组分用量为：
1)复配维生素，每克复配维生素中：
维生素A：2000～5000μgRE
维生素D：24～70μg
维生素E：13～50mgα-TE
维生素K1：50～3000μg
维生素B1：1000～6500μg
维生素B2：600～3000μg
维生素B6：1000～4000μg
维生素B12：1～14.0μg
烟酰胺：12000～40000μg
叶酸：300～653μg
泛酸：8750～16230μg
维生素C:100～500mg
生物素：40～150μg
肌醇：0～500μg
牛磺酸：0～200μg
左旋肉碱：0～100μg
2)矿物质一，每克矿物质一中：
铁：23～95mg
锌：25～100mg
铜：2200～5540μg
硒：20～200μg
碘：200～1592μg
锰：500～500μg
3)矿物质二，每克矿物质一中：
钠：30～400mg
钾：63～400mg
4)矿物质三，每克矿物质一中：
钙：110～500mg
磷：75～300mg。
根据本发明的具体实施方案，基于1000重量份的母乳化早产/低出生体重婴儿配方奶粉，其原料组成还包括：DHA3～18重量份、ARA3～18重量份。
根据本发明的具体实施方案，本发明的母乳化早产/低出生体重婴儿配方奶粉中，所述母乳低聚糖包括2’-岩藻糖基乳糖、3’-岩藻糖基乳糖、乳糖-N-四糖、3’-唾液酸基乳糖、6’-唾液酸基乳糖中的一种或多种。
2’-岩藻糖基乳糖(2’-fucosyllactose，2’-FL)，为岩藻糖与乳糖形成的三糖结构，是岩藻糖基类低聚糖的代表性物质。市售该物质通常为经微生物发酵法制备，与人乳中发现的2’-岩藻糖基乳糖具有相同结构。
3-岩藻糖基乳糖(3-fucosyllactose，3-FL)，为岩藻糖与乳糖形成的三糖结构，与2’-岩藻糖基乳糖互为同分异构体，是岩藻糖基类低聚糖的代表性物质。市售该物质通常为经微生物发酵法制备，与人乳中发现的3-岩藻糖基乳糖具有相同结构。
乳糖-N-四糖(lacto-N-tetraose，LNT)，是以核心糖链为基础结构且不含岩藻糖基或唾液酸基的低聚糖的代表性物质，市售该物质通常为经微生物发酵法制备，且与人乳中发现的乳糖-N-四糖具有相同结构。
3’-唾液酸基乳糖(3’-sialyllactose，3’-SL)，为唾液酸与乳糖形成的三糖结构，与6’-唾液酸基乳糖互为同分异构体，是唾液酸基类低聚糖的代表性物质。市售该物质通常为经微生物发酵法制备，与人乳中发现的3’-唾液酸基乳糖具有相同结构。
6’-唾液酸基乳糖(6’-sialyllactose，6’-SL)，为唾液酸与乳糖形成的三糖结构，与3’-唾液酸基乳糖互为同分异构体，是唾液酸基类低聚糖的代表性物质。市售该物质通常为经微生物发酵法制备，与人乳中发现的6’-唾液酸基乳糖具有相同结构。
根据本发明的具体实施方案，本发明的母乳化早产/低出生体重婴儿配方奶粉中，包括质量含量0.2％～5％的母乳低聚糖。
根据本发明的具体实施方案，本发明的母乳化早产/低出生体重婴儿配方奶粉中，所述母乳低聚糖是由2’-岩藻糖基乳糖(2’-FL)、3-岩藻糖基乳糖(3-FL)、乳糖-N-四糖(LNT)、3’-唾液酸基乳糖(3’-SL)和6’-唾液酸基乳糖(6’-SL)中的至少二种、至少三种或至少四种组成的组合。
根据本发明的具体实施方案，本发明的母乳化早产/低出生体重婴儿配方奶粉中，所述提升生物体对金黄色葡萄球菌感染抵御能力包括：提升个体预防金黄色葡萄球菌感染的能力，降低金黄色葡萄球菌感染个体的能力，和/或缓解金黄色葡萄球菌感染引起的各种症状例如食物中毒(包括恶心、呕吐、头晕等)、肠炎、肺炎、皮肤感染、伤口溃烂或脑膜炎等。
另一方面，本发明还提供了一种制备所述母乳化早产/低出生体重婴儿配方奶粉的方法，该方法采用湿法或干法或干湿复合生产工艺，将长双歧杆菌婴儿亚种和母乳低聚糖组合物与配方中的其他原料混合，制备所述母乳化配方奶粉。其制备的工艺流程主要包括：配料、均质、浓缩杀菌、喷雾干燥、干混得到成品。本发明中，长双歧杆菌婴儿亚种可以在配料时一起混料(在婴儿配方粉中以灭活形式存在)，优选在后混料过程中添加(在婴儿配方粉中以活菌形式存在)。本发明中，母乳低聚糖可以在配料时一起混料，也可以在后混料过程中添加。
根据本发明的具体实施方案，本发明的含有益生菌与益生元组合物的母乳化早产/低出生体重婴儿配方奶粉具体制备工艺如下：
1)牛乳粗滤：将牛乳经过粗过滤及平衡缸脱气后，经过板式换热器预热后，经过分离机分离杂质。(需要时)
2)牛乳均质杀菌：去除杂质后的生牛乳一部分进入均质机均质，另一部分不均质，二者在均质后进行混合进入杀菌系统杀菌。(需要时)
3)粉类添加：各种粉类原料按配方经计量后通过风送系统统一加入到配粉罐中，并通过真空系统吸入真空混料罐中。
4)溶化抽油：按配方要求将配方中规定的油脂放入化油间，化油间的温度保持在50～90℃，待油溶化后，打入混合油贮罐中，并按配方要求将混合油经油泵抽入混料罐中。
5)营养素溶解添加：将矿物质、钙粉、维生素等营养素包用纯净水分别溶解后，依序添加到混料罐中，得到混合的料液。
6)母乳低聚糖组合物溶解添加：将HMO(如2’FL)原料用步骤5中干净的营养素罐充分溶解，添加到混料罐中，得到含HMO的混合料液或在真空混料罐的小料斗处充分溶解后，抽入真空混料罐中，得到含HMO的混合料液。
7)过滤：经含HMO的混合料液经滤网过滤，去除原料中可能带入的物理杂质。
8)均质：混合后的料液通过均质机进行均质，将脂肪球进行机械处理，把它们分散成均匀一致的脂肪球。
9)冷却与贮存：均质后的料液进入板式换热器进行冷却：冷却至15℃以下，暂存在预存缸中，搅拌。
10)杀菌浓缩：料液经预热、闪蒸后进入直喷式杀菌器，进入保温管，完成杀菌；杀菌后的料液经过滤进，进入降膜式蒸发器，进行蒸发浓缩，得到浓缩后的奶液。
11)喷雾干燥：浓缩后的奶液经预热、过滤，高压输送至干燥塔顶部，同时奶液与进入干燥塔的热空气进行热交换，奶液在下落的过程中被瞬间蒸发，在干燥塔底部形成乳粉颗粒。
12)流化床二次干燥：从干燥塔出来的乳粉颗粒经流化床二次干燥冷却，在此期间在乳粉表面进行磷脂喷涂，得到半成品。
13)预混、干混、包装：将经检验合格的一部分基粉与干混小料进行预混后，加入干混机，按照配方比例，进行投料，完成干混，包装，得到最终乳粉产品。
综上所述，本发明发现包括长双歧杆菌婴儿亚种和母乳低聚糖的所述组合物具有可提高生物体先天免疫、可有效提升生物体对金黄色葡萄球菌感染的抵御能力，将其应用于母乳化早产/低出生体重婴儿配方奶粉中可抗感染、提高免疫力，具有广泛的应用前景。
附图说明
图1显示15mg/mL的母乳低聚糖2’-FL与益生菌YLGB-1496组合物对秀丽隐杆线虫受到金黄色葡萄球菌感染时存活率的影响。
用于专利程序的微生物保藏：
婴儿双歧杆菌YLGB-1496(或GB-1496)菌株：
保藏日期：2020年12月05日；
保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)；
保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所；
保藏编号：CGMCC No.21109；
分类命名：长双歧杆菌婴儿亚种(Bifidobacterium longum subsp.infantis)。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
除非另外专门定义，本文使用的所有技术和科学术语都与相关领域普通技术人员的通常理解具有相同的含义。
实施例中未详细注明的操作条件，按照所属领域的常规操作进行。
本发明中所用益生菌长双歧杆菌婴儿亚种YLGB-1496(来源为中国健康妈妈母乳，已于2020年12月05日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，保藏日期：2020年12月05日；保藏编号：CGMCC No.21109；分类命名：长双歧杆菌婴儿亚种(Bifidobacterium longum subsp.infantis))。
本发明中所用HMO原料均来自于Jennewein。
实施例1、含有益生菌与益生元组合物的婴儿配方奶粉(制备1000千克)：
麦芽糊精285kg、食用植物调和油248kg、脱盐乳清粉240kg、乳清蛋白粉(WPC80)85kg、脱脂奶粉90kg、乳清蛋白粉(α-乳清蛋白粉)20kg、酪蛋白10kg、大豆磷脂4重量份、母乳低聚糖组合物(其中全部为2’FL)30千克、复配维生素6kg、矿物质一2kg、矿物质二17kg；矿物质三19kg、氯化镁3kg、氯化胆碱1kg、DHA8.7千克，ARA 15千克，核苷酸0.3千克，长双歧杆菌亚种YLGB-1496 0.2千克。各营养包的基料为乳糖。
本实施例的含有益生菌与益生元组合物的婴儿配方奶粉具体制备工艺如下：
1)牛乳粗滤：将牛乳经过粗过滤及平衡缸脱气后，经过板式换热器预热后，经过分离机分离杂质。
2)牛乳均质杀菌：去除杂质后的生牛乳一部分进入均质机均质，另一部分不均质，二者在均质后进行混合进入杀菌系统杀菌。(需要时)
3)粉类添加：各种粉类原料按配方经计量后通过风送系统统一加入到配粉罐中，并通过真空系统吸入真空混料罐中；
4)溶化抽油：按配方要求将配方中规定的油脂放入化油间，化油间的温度保持在50～90℃，待油溶化后，打入混合油贮罐中，并按配方要求将混合油经油泵抽入混料罐中；
5)营养素溶解添加：将矿物质二、钙粉、维生素、矿物质一等营养素包用纯净水分别溶解后，依序添加到混料罐中，得到混合的料液。
6)母乳低聚糖组合物溶解添加：将母乳低聚糖组合物原料用步骤5中干净的营养素罐充分溶解，添加到混料罐中，得到母乳低聚糖组合物的混合料液或在真空混料罐的小料斗处充分溶解后，抽入真空混料罐中，得到母乳低聚糖组合物的混合料液。
7)过滤：母乳低聚糖组合物混合料液经滤网过滤，去除原料中可能带入的物理杂质。
8)均质：混合后的料液通过均质机进行均质，将脂肪球进行机械处理，把它们分散成均匀一致的脂肪球。
9)冷却与贮存：均质后的料液进入板式换热器进行冷却：冷却至15℃以下，暂存在预存缸中，搅拌。
10)杀菌浓缩：料液经预热、闪蒸后进入直喷式杀菌器，进入保温管，完成杀菌；杀菌后的料液经过滤进，进入降膜式蒸发器，进行蒸发浓缩，得到浓缩后的奶液。
11)喷雾干燥：浓缩后的奶液经预热、过滤，高压输送至干燥塔顶部，同时奶液与进入干燥塔的热空气进行热交换，奶液在下落的过程中被瞬间蒸发，在干燥塔底部形成乳粉颗粒。
12)流化床二次干燥：从干燥塔出来的乳粉颗粒经流化床二次干燥冷却，在此期间在乳粉表面进行磷脂喷涂，得到半成品。
13)预混、干混、包装：将经检验合格的一部分基粉与干混小料进行预混后，加入干混机，按照配方比例，进行投料，完成干混，包装，得到最终乳粉产品。
其中本产品中母乳低聚糖2’FL的含量为3g/100g；长双歧杆菌亚种YLGB-1496含量为1×108CFU/g。
实施例2含有益生菌与益生元组合物的婴儿配方奶粉(制备1000千克)：
麦芽糊精500kg、食用植物调和油250kg、乳清蛋白粉(WPC80)120kg、脱脂奶粉88kg、乳清蛋白粉(α-乳清蛋白粉)20kg、酪蛋白10kg、大豆磷脂4kg、母乳低聚糖组合物(其中全部为2’FL)16kg、复配维生素6kg、矿物质一2kg、矿物质二17kg；矿物质三19kg、氯化镁3kg、氯化胆碱1kg、DHA8.7kg，ARA 15kg，长双歧杆菌亚种YLGB-1496 0.1kg。各营养包的基料为乳糖。
产品制备工艺如实施例1。
其中本产品中母乳低聚糖2’FL的含量约为1.6g/100g；长双歧杆菌亚种YLGB-1496含量为1×107CFU/g。
实施例3含有益生菌与益生元组合物的婴儿配方奶粉(制备1000千克)：
固体玉米糖浆250kg、食用植物调和油250kg、乳清蛋白粉(WPC80)50kg、脱脂奶粉135kg、乳清蛋白粉(α-乳清蛋白粉)30kg、酪蛋白10kg、大豆磷脂4kg、低聚果糖粉20kg，低聚半乳糖浆40kg、母乳低聚糖组合物(其中全部为2’FL)5kg、复配维生素4kg、矿物质一1.5kg、矿物质二15kg；矿物质三15kg、氯化镁3kg、氯化胆碱1kg、DHA9kg，ARA 16kg，长双歧杆菌亚种YLGB-1496 0.1千克。各营养包的基料为乳糖。
产品制备工艺如实施例1。
本产品中,母乳低聚糖2’FL的含量约为0.5g/100g；长双歧杆菌亚种YLGB-1496含量为4×106CFU/g。
实施例4含有益生菌与益生元组合物的婴儿配方奶粉(制备1000千克)：
固体玉米糖浆250kg、食用植物调和油250kg、乳清蛋白粉(WPC80)50kg、脱脂奶粉135kg、乳清蛋白粉(α-乳清蛋白粉)30kg、酪蛋白10kg、大豆磷脂4kg、低聚果糖粉20kg，低聚半乳糖浆40kg、母乳低聚糖组合物5kg(其中2’FL 2.65kg，LNT 0.8kg)、复配维生素4kg、矿物质一1.5kg、矿物质二15kg；矿物质三15kg、氯化镁3kg、氯化胆碱1kg、DHA9kg，ARA 16kg，长双歧杆菌亚种YLGB-1496 0.1千克。各营养包的基料为乳糖。
产品制备工艺如实施例1。
本产品中,母乳低聚糖组合物其中2’FL的含量约为0.265g/100g，LNT的含量约为0.8g/100g；长双歧杆菌亚种YLGB-1496含量为4×106CFU/g。
长双歧杆菌婴儿亚种与母乳低聚糖组合物功效实验
益生菌长双歧杆菌婴儿亚种YLGB-1496，用补充了1％半胱氨酸的MRS培养基来培养受试的益生菌，并在37℃厌氧环境中孵育过夜。收获菌体并用生理盐水溶液冲洗，调整益生菌浓度将其接种在含有线虫生长培养基的平皿中，每个培养皿平板中益生菌为1×108CFU或1×107CFU。
HMO用蒸馏水配置母乳低聚糖溶液。
1.线虫感染模型
获取了年龄一致的线虫并将其培养在含线虫琼脂培养基(NGM培养基，线虫培养基中含有大肠杆菌OP50为食物)的培养皿中，添加了不同剂量的HMO(15mg/mL)与益生菌(1×108CFU、1×107CFU)组合物进行共培养(每个线虫培养皿中加入的液体总体积是10mL。对于浓度为15mg/mL的HMO受试组，每个培养皿中HMO的最终量是150mg。因此每个培养皿平板中，益生菌与HMO的添加量比例为：1×108CFU：150mg，或1×107CFU：150mg)。在线虫成年后，它们被转移到接种了金黄色葡萄球菌ATCC25923的培养皿中，添加量为108～109CFU/mL，来模拟受到金黄色葡萄球菌感染的情况。各组别在感染阶段添加的干预物(益生菌和/或HMO)情况分别与培养阶段相同。使用了两个对照，分别是没有致病菌的条件(线虫培养皿中含有大肠杆菌OP50)，以及有致病菌金黄色葡萄球菌感染但没有任何干预物的(只含有金黄色葡萄球菌的培养皿)。另设置培养阶段添加干预物而感染阶段没有任何干预物的组别、以及培养阶段未添加干预物而感染阶段添加干预物的组别。
将线虫培养几天后，对它们的存活率进行每日计数。如果线虫对铂丝没有反应，则可被认为是死亡。每种条件均进行了两次独立测定。
对存活曲线进行了统计学的比较分析，用GraphPad Prism 4统计学软件包进行了log rank survival显著性分析。用One-way ANOVA分析在感染第三天存活率的显著性差异。对各组在每一天的存活率数据，用Two-way ANOVA进行了统计分析，并用Dunnett’posthoc test进行了显著性分析。
实验结果：
如图1所示，15mg/mL的HMO 2’-FL与YLGB-1496(108CFU)对于线虫受到金黄色葡萄球菌的感染情况下的存活率，都起到了显著的保护与提升作用(P<0.0001)，并且二者的保护作用是比较相近的。而107的YLGB-1496菌对于此情况下的线虫存活率也有较好的保护作用，虽然此作用显著的低于108情况下的存活率(P<0.05)。当2’-FL与YLGB-1496菌株(108CFU)形成组合物，这种情况下对于线虫受到金葡菌感染时的存活率的提升作用，比单独的这两种物质，即单独菌株或者单独HMO，效果都显著更好，且组合物相比单独的原料，实现了22％的存活率提升(P<0.001)。可见当2’-FL与YLGB-1496形成组合物，二者体现了较好的协同效应。
Claims (5)
1.一种长双歧杆菌婴儿亚种与母乳低聚糖的组合物在制备具有可有效提升生物体对金黄色葡萄球菌感染的抵御能力功效的母乳化早产/低出生体重婴儿配方奶粉中的应用，其中，每100g配方奶粉中含有长双歧杆菌婴儿亚种4×108CFU~1×1012CFU，母乳低聚糖2’-岩藻糖基乳糖0.1g~3g；并且，长双歧杆菌婴儿亚种与2’-岩藻糖基乳糖的比例为1×108CFU：150mg；
其中，所述长双歧杆菌婴儿亚种为保藏编号为CGMCC No.21109的长双歧杆菌婴儿亚种(Bifidobacterium longum subsp. infantis) YLGB-1496菌株。
2.根据权利要求1所述的应用，其中，所述配方奶粉中的总蛋白质含量为10g~20g/100g，乳清蛋白占总蛋白的比例为50%~90%；脂肪含量为15g~30g/100g，中链甘油三酯占总脂肪比例为20-38%；碳水化合物含量为50g~70g/100g。
3.根据权利要求1所述的应用，其中，基于1000重量份的母乳化早产/低出生体重婴儿配方奶粉，其原料组成包括：
淀粉糖200~400重量份、食用植物调和油200~300重量份、脱盐乳清粉100~300重量份、乳清蛋白粉0~100重量份、脱脂奶粉50~150重量份、α-乳清蛋白粉0-40重量份、酪蛋白0~30重量份、无水奶油0-50重量份、大豆磷脂0~5重量份、低聚果糖粉0~30重量份、低聚半乳糖浆0~90重量份。
4.根据权利要求3所述的应用，其中，母乳化早产/低出生体重婴儿配方奶粉的原料组成还包括膳食纤维、肌醇、牛磺酸、左旋肉碱、二十二碳六烯酸、二十碳四烯酸、叶黄素、核苷酸、乳铁蛋白中的一种或多种。
5.根据权利要求1所述的应用，其中，基于1000重量份的母乳化早产/低出生体重婴儿配方奶粉，其原料组成还包括：DHA3~18重量份、ARA3~18重量份。
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