CN114144425A

CN114144425A - 用于阿尔茨海默症的基因治疗

Info

Publication number: CN114144425A
Application number: CN202080052274.9A
Authority: CN
Inventors: 沈洁; R·J·凯莱赫三世
Original assignee: Brigham and Womens Hospital Inc; General Hospital Corp
Current assignee: Brigham and Womens Hospital Inc; General Hospital Corp
Priority date: 2019-05-24
Filing date: 2020-05-21
Publication date: 2022-03-04
Also published as: US20220235374A1; EP3976637A1; AU2020285638A1; WO2020242892A1; CA3141712A1; JP2022533451A; IL288266A; EP3976637A4

Abstract

除了其它方面，本公开提供编码早老素1的人密码子优化的序列，以及用于在基因治疗中使用所述序列以治疗神经退行性疾病的方法，所述神经退行性疾病包括但不限于阿尔茨海默症、额颞叶痴呆、额颞叶变性、匹克病、路易体痴呆、记忆丧失和包括轻度认知损害(MCI)的认知损害。

Description

用于阿尔茨海默症的基因治疗

优先权声明

本申请要求2019年5月24日提交的美国临时专利申请系列号62/852,716的权益。前述文献的全部内容通过引用并入本文。

联邦资助的研究或开发

本发明于美国国立卫生研究院(National Institutes of Health)授予的授权号NS041783在美国政府的支持下完成。美国政府享有本发明的某些权利。

技术领域

本文所描述的为，尤其是，用于使用早老素基因治疗构建体来治疗阿尔茨海默症(AD)和其它神经退行性疾病的组合物和方法。

背景技术

阿尔茨海默症，也称为阿尔茨海默病，占神经退行性痴呆的大部分并且在美国是继心脏病、癌症和中风后的第四致死原因。其表征为患者的脑中的认知功能的进行性丧失、神经退行性病变、神经纤维缠结和淀粉样蛋白斑块。尽管不同患者中的进展速度有所不同，诊断后的平均预期寿命为3至9年。目前，没有对于阿尔茨海默症的治疗。

发明内容

本文描述了可用于治疗患有阿尔茨海默症(AD)和其它神经退行性疾病、病症或病况的受试者的方法和组合物。本公开至少部分基于以下发现：将密码子优化的野生型PSEN1cDNA提供至携带杂合或纯合显性阴性Psen1突变的细胞(一种完善的家族性阿尔茨海默症模型)中，提供了出乎意料地高的表达水平并挽救了这些细胞中受损的γ-分泌酶活性。因此，本公开提供基于PSEN1(表达PS1)和/或PSEN2(表达PS2)的用于阿尔茨海默症和其它神经退行性痴呆的有效基因治疗的方法，表明在该疾病领域的重大突破。

本文提供包含编码人早老素1蛋白(PS1)的人密码子优化的多核苷酸的组合物，例如，包含SEQ ID NO:9或与SEQ ID NO:9具有至少80％、90％、95％或99％同一性的序列的多核苷酸(相对于野生型优化了至少一个密码子)。示例性的人PS1蛋白序列包括SEQ ID NO:5和6，并且可以包括以下序列，所述序列为其中至少包含编码人早老素1(PSEN1)的人密码子优化的多核苷酸的序列。在一些实施方案中，组合物与外泌体或基于脂质的纳米颗粒(LNP)缔合(例如，使用外泌体或基于脂质的纳米颗粒(LNP)配制用于递送)。

本文还提供包含用于在细胞中表达人PSEN1的载体的组合物，所述载体包含本文所述的人密码子优化的多核苷酸，所述人密码子优化的多核苷酸与启动子可操作地连接。

本文还提供本文描述的任何组合物在治疗受试者中的神经退行性疾病、病症或病况的方法中的用途。

在一些实施方案中，载体是病毒载体，例如腺相关病毒(AAV)载体(例如AAV9或AAVrh10)；慢病毒载体；或逆转录病毒载体。

在一些实施方案中，启动子是泛神经元启动子，例如突触蛋白I启动子，或神经元亚型特异性启动子，例如α-钙/钙调蛋白激酶2A启动子。

本文还提供用于治疗神经退行性疾病、病症或病况的方法，所述方法包括向有治疗需要的人受试者施用本文所述的组合物，其中所述受试者在PSEN1的至少一个等位基因中具有一个以上的突变，优选编码显性阴性PSEN1蛋白同种型的突变。

在一些实施方案中，神经退行性疾病、病症或病况是阿尔茨海默症。

在一些实施方案中，阿尔茨海默症是家族性阿尔茨海默症。在一些实施方案中，阿尔茨海默症是晚发性阿尔茨海默症。在一些实施方案中，阿尔茨海默症是散发性阿尔茨海默症。在一些实施方案中，阿尔茨海默症是早发性阿尔茨海默症。

在一些实施方案中，受试者在E280、Y115、L166、C410、Δex9、G548、D257、R278、L435、G384、L392、N141、G206、H163、A79、S290、A260、A426、A431、R269、L271、C1410、E280、P264、E185、L235、M146处具有突变，例如，PSEN1基因中的E280A、Y115H、L166P、C410Y、Δex9、G548、D257A、R278I、L435F、G384A或L392V突变，或PSEN1基因中的N141I、G206A、H163R、A79V、S290C、A260P、A426P、A431E、R269H、L271V、C1410Y、E280G、P264L、E185D、L235V或M146V突变。

在一些实施方案中，神经退行性疾病、病症或病况是额颞叶痴呆、记忆丧失、认知下降或认知损害。在一些实施方案中，认知损害是轻度认知损害(MCI)。

在一些实施方案中，将组合物施用至有治疗需要的受试者的CNS。

在一些实施方案中，将编码PSEN1和/或PSEN2基因或mRNA的多核苷酸通过静脉内递送，通过鞘内递送，通过脑池内递送，通过脑室内递送，或通过立体定向注射至脑的特定区域、任选地至脑室，或通过直接注射至海马体或皮质区，而施用至CNS。

除非另外说明，否则本文所用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域的普通技术人员通常所理解的相同含义。本文描述了用于本发明的方法和材料；也可使用本领域已知的其它合适的方法和材料。材料、方法、和实施例仅为说明性的而不旨在进行限制。本文提及的所有出版物、专利申请、专利、序列、数据库条目、和其它参考文献均通过引用将其全部内容结合在此。在冲突的情况下，本说明书包括定义将占主导。

本发明的其它特征和优点将从以下详细描述和附图、以及从权利要求中显而易见。

附图说明

图1A-B.WT hPS1的引入挽救突变的MEF中受损的γ-分泌酶活性。A，通过NICD产生所测定的γ-分泌酶活性在突变的MEF细胞中以PS剂量依赖性方式降低(WT>PS1杂合KI或KO>纯合PS1 KI或KO>DKO)。B，由WT hPS1恢复受损的γ-分泌酶活性。如图所示，增加的量的pCI-hPSEN1质粒DNA被转染至不同基因型的MEF中。蛋白免疫印迹分析显示，PS1 NTF和NICD两者都在各种PS突变MEF中被恢复。杂合的L435F KI细胞被标记为KI/+或PS1L435F/+。N＝3个独立实验。数据表示为平均值±SEM。*p<0.05；**p<0.01；***p<0.001(单因素ANOVA和图基事后分析)。

图2.内源性人PSEN1(hPSEN1)cDNA与密码子优化的hPSEN1 cDNA(Opti-hPSEN1)的序列比较。

图3A-B.具有密码子优化的PSEN1 cDNA的PS1 NTF的增加的表达水平。A，用增加的量的表达野生型内源性hPSEN1 cDNA (wt_PS1)或密码子优化的hPSEN1 cDNA (opti_PS1)的质粒转染Psen-null MEF，并使用对PS1 N末端为特异性的抗体进行蛋白免疫印记分析。未转染(Untrans)：未转染的MEF作为阴性对照。B，转染有野生型内源性hPSEN1 cDNA (wt_PS1)或密码子优化的hPSEN1 cDNA (opti_PS1)的细胞中的PS1 NTF水平的定量。数据表示为平均值±SEM(n＝3个独立实验)。

图4.密码子优化导致增加的γ-分泌酶活性。用增加的量(12.5、25、50或100ng)的pCI-hPS1或pCI-hPS1opti质粒DNA和CMV-NΔE转染PS DKO MEF，然后进行NICD的蛋白免疫印迹分析。包括未转染或转染有空载体的MEF作为阴性对照。我们发现，通过NICD产生所测定的，相对于pCI-hPS1，pCI-hPS1opti导致显著更高水平的γ-分泌酶活性。数据表示为平均值±SEM(n＝5个独立实验)。使用双因素ANOVA来评价统计显著性。**p<0.01。

具体实施方式

定义

为了更容易地理解本公开，以下首先定义某些术语。对于以下术语和其它术语的附加定义记载在整个说明书中。

施用：

如本文所用，术语“施用”是指将组合物递送或应用至受试者或系统。可通过任何适当的途径施用至动物受试者(例如，施用至人类)。例如，在一些实施方案中，施用可以是支气管内(包括由支气管滴注)、口腔内、肠内、动脉内、真皮内、胃内、髓内、肌内、鼻内、腹膜内、鞘内、静脉内、心室内、粘膜、鼻腔、口服、直肠、皮下、舌下、局部、气管(包括由气管内滴注)、经皮、阴道和玻璃体。

生物学活性：

如本文所用，短语“生物学活性”是指在生物系统中具有活性的任何物质(例如，细胞培养物、生物体等)的特征。例如，当施用至生物体时对该生物体具有生物作用的物质，被认为是具有生物学活性的。生物学活性也可通过体外检测(例如，体外酶检测)来确定。在特定实施方案中，当蛋白质或多肽为具有生物学活性时，共享该蛋白质或多肽的至少一种生物学活性的该蛋白质或多肽的一部分通常称为“生物学活性”部分。在一些实施方案中，蛋白质产生自和/或纯化自细胞培养系统，其在施用至受试者时表现生物学活性。

对照：

如本文所用，术语“对照”具有其领域理解的含义，作为针对所比较的结果的标准。通常，对照用于通过分离变量来得出关于此类变量的结论而增加实验的完整性。在一些实施方案中，对照是与试验反应或检测同时进行的反应或检测以提供比较者(comparator)。在一个实验中，应用“试验”(即，被试变量)。在第二个实验中，不应用作为被试变量的“对照”。在一些实施方案中，对照是历史对照(即，先前进行的试验或检测的历史对照、或先前已知的量或结果)。在一些实施方案中，对照为或包括打印的或以其它方式保存的记录。对照可以是阳性对照或阴性对照。在一些实施方案中，对照可以是“参考对照”，其是用于与试验样品相比较来寻找差异或出于表征目的的样品。

基因治疗：

如本文所用，术语“基因治疗”是指包括将核酸直接或间接施用至受试者的任何治疗。在特定实例中，从施用的核酸表现出蛋白质的治疗价值。

同一性：

如本文所用，术语“同一性”是指聚合分子之间，例如核酸分子之间(例如，DNA分子和/或RNA分子)和/或多肽分子之间的整体相关性。两条核酸序列的同一性百分比的计算，例如，可通过出于最佳比较目的比对两条序列来进行(例如，为了最佳比对可以在第一和第二核酸序列中的一条或两条中引入空位和为了比较目的可忽略非同一序列)。在某些实施方案中，用于比较目的而比对的序列的长度为参考序列的长度的至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、或实质上100％。然后比较在相应核苷酸位置处的核苷酸。当第一序列中的位置被与第二序列中相应位置相同的核苷酸占据时，则分子在该位置处为同一的。考虑到需要引入以实现两条序列的最佳比对的空位数、和各个空位的长度，两条序列之间的同一性百分比是序列共享的相同位置数的函数。可使用数学算法来完成序列的比较和两条序列之间的同一性百分比的确定。例如，可通过使用Meyers和Miller的算法(CABIOS,1989,4:11-17)来确定两条核苷酸序列之间的同一性百分比，其已被整合至使用PAM120权重残基表(weight residue table)、空位长度罚分为12和空位罚分为4的ALIGN程序(版本2.0)。可选地，两条核苷酸序列之间的同一性百分比可使用通过使用NWSgapdna.CMP矩阵的GCG软件包中的GAP程序来确定。各种其它的序列比对程序是可获得的并且可用于确定序列同一性，例如Clustal等。

改善、增加或降低：

如本文所用，术语“改善”、“增加”或“降低”、或语法等同物，指示相对于基线测定，例如在本文所描述的治疗开始之前相同个体中的测定、或在不存在本文所描述的治疗的情况下在对照个体(或多个对照个体)中的测定的值。“对照个体”是患有与正在治疗的个体所患有的相同种类或几乎相同严重程度的例如阿尔茨海默症的个体，所述个体与正在治疗的个体年龄大致相同(以确保治疗的个体和对照个体(一个或多个)的疾病的阶段是可比较的)。

神经退行性病变：

如本文所用，术语“神经退行性病变”是指其中一个或多个神经元受损、功能降低、变为功能障碍的、和/或因细胞死亡而丧失的过程。神经退行性病变包括快速的、逐步的二者，以及中间形式。因此，神经退行性疾病、病况、或症状通常表征为与神经元损伤和/或细胞死亡相关的疾病。

受试者：

如本文所用，术语“受试者”是指人类或任何非人类的动物(例如，哺乳动物如小鼠、大鼠、兔、狗、猫、牛、猪、绵羊、马或灵长目动物)。人类包括产前和产后形式。在许多实施方案中，受试者为人类。受试者可以是患者，其是指为了诊断或治疗疾病而与医疗人员见面的人。术语“受试者”与“个体”或“患者”在本文中可交换地使用。受试者可患有或易患有疾病或病症，但可以表现或不表现该疾病或病症的症状。

遭受：

“遭受”疾病、病症、和/或病况(例如，阿尔茨海默症)的个体已被诊断具有或显示该疾病、病症、和/或病况的一个或多个症状。

易患有：

“易患有”疾病、病症、和/或病况的个体并未被诊断具有和/或可以不显示疾病、病症、和/或病况的症状。在一些实施方案中，易患有疾病、病症、和/或病况(例如，阿尔茨海默症)的个体可表征为以下的一个或多个：(1)与疾病、病症、和/或病况的发展相关的基因突变；(2)与疾病、病症、和/或病况的发展相关的基因多态性；(3)与疾病、病症、和/或病况相关的蛋白质的表达和/或活性的增加和/或降低；(4)与疾病、病症、和/或病况的发展相关的习惯和/或生活方式；(5)疾病、病症、和/或病况的家族史；(6)对某些细菌或病毒的反应；(7)暴露于某些化学物质。在一些实施方案中，易患有疾病、病症、和/或病况的个体将发展为疾病、病症、和/或病况。在一些实施方案中，易患有疾病、病症、和/或病况的个体将不发展为疾病、病症、和/或病况。

治疗有效量：

如本文所用，术语“治疗有效量”是指以合理的收益/风险比适用于任何医疗治疗的对所治疗的受试者赋予治疗效果的治疗性蛋白质。治疗效果可以是客观的(即，由一些试验或标记物可测定的)或主观的(即，受试者给出效果的迹象或感觉)。特别地，“治疗有效量”是指有效治疗、改善、或预防预期的疾病或病况，或例如通过改善与疾病相关的症状、预防或延迟疾病的发作、和/或还减轻疾病的症状的严重程度或频率而显示可检测的治疗或预防效果的治疗性蛋白或组合物的量。通常以可包括多个单位剂量的给药方案施用治疗有效量。对于任何特定的治疗性蛋白质，治疗有效量(和/或在有效给药方案内的合适的单位剂量)可例如依施用途径、与其它药物制剂组合而变化。并且，用于任何特定患者的特定治疗有效量(和/或单位剂量)可取决于包括以下的各种因素：待治疗的病症和病症的严重程度；采用的特定药物制剂的活性；采用的特定组合物；患者的年龄、体重、总体健康、性别和饮食；施用时间、施用途径、和/或采用的特定融合蛋白的分泌或代谢的速率；治疗持续时间；和在医疗领域众所周知的其他因素。

治疗：

如本文所用，术语“治疗”(名词、动词或动名词形式)，在其最广义的含义中，是指对一种或多种症状、特征、和/或特定疾病、病状、和/或病况的病因的部分或完全缓解、改善、再生、抑制、延迟其发作、降低其严重程度、和/或降低其发生率。在一些实施方案中，这样的治疗可施用至不显示相关疾病、病症和/或病况的征兆的受试者和/或仅显示疾病、病症、和/或病况的早期征兆的受试者。可选地或另外地，在一些实施方案中，治疗可施用至显示相关疾病、病症和/或病况的一个或多个确定的征兆的受试者。在一些实施方案中，治疗可以针对已被诊断遭受相关疾病、病症和/或病况的受试者。在一些实施方案中，治疗可以针对已知具有与相关疾病、病症和/或病况的发展的增加的风险在统计学上相关的一个或多个敏感因子(susceptibility factor)的受试者。

尽管，一般而言“PS1”是指早老素-1蛋白，且“PS2”是指早老素-2蛋白，在一些情况中，PS1或PS2用于指mRNA或基因。

详细说明

除了其它方面，本公开提供基于向有需要的受试者递送功能性早老素-1(PS1)的用于治疗患有阿尔茨海默症和其它神经退行性疾病、病症和病况的受试者的组合物和方法。特别地，本公开考虑通过向有治疗需要的受试者提供编码早老素-1(PS1)的人密码子优化的多核苷酸的基因治疗，所述有治疗需要的受试者具有与AD相关、例如与早发性家族性阿尔茨海默症(FAD)或与晚发性散发性AD相关的PSEN1或PSEN2突变如显性阴性突变。

在以下部分中详细描述本发明的各个方面。这些部分的使用不意在限制本发明。每个部分可应用于本发明的任何方面。在本申请中，除非另外说明，否则“或”的使用意指“和/或”。

治疗方法

作为非限制性实例，本方法包括在遭受或易患有，例如与PSEN1或PSEN2中的显性阴性突变相关的神经退行性疾病，例如阿尔茨海默症(例如，携带PSEN1或PSEN2突变的家族性AD患者或散发性AD患者)的受试者中表达野生型人早老素-1的基因治疗。除了其它方面，这样的基因治疗的目的在于在家族性或散发性AD患者的脑中增强PS1的表达以校正或克服PS1或PS2表达和/或活性中的不足。在FAD患者中，预期本文所描述的基因治疗方法引起脑中野生型PS1的表达的增加，挽救与PS1或PS2突变相关的γ-分泌酶活性的损害。

早老素基因–PSEN1和PSEN2–中的突变高度外显并且占家族性AD(FAD)中鉴定的所有突变的～90％，突出了它们在AD的发病机制中的重要性。已经报道了PSEN1中超过260种不同的突变，它们是显性遗传的并且主要是错义突变。已知，PSEN1和PSEN2基因的显性阴性突变与早发性家族性阿尔茨海默症相关。人们普遍认为，PS1和早老素-2(PS2)蛋白是γ-分泌酶复合物的一部分，PSEN1和PSEN2基因中的突变有助于阿尔茨海默症患者中淀粉样蛋白β(Aβ)的积累。致病性PSEN1突变顺式作用损害突变体PS1功能并反式作用抑制野生型早老素-1(PS1)功能(Heilig等人J Neurosci 33:11606-717(2013)；Zhou等人Proc Natl AcadSci USA 114:12731–12736(2017)。通常，就其本质而言，显性阴性突变不可通过表达野生型蛋白来挽救(Herskowitz,I.Nature,329:219-222(1987))。然而，令人惊讶的是，如本文所示，将密码子优化的hPSEN1 cDNA转染至携带杂合和纯合PS1突变的永生化MEF中，可以挽救这些细胞中受损的γ-分泌酶活性，甚至比野生型人序列更好(参见下文中的实施例)，表明从密码子优化的外源序列表达野生型PS1可以克服突变早老素蛋白的显性阴性影响。不希望受任何特定理论的束缚，PS1的表达可以通过增加野生型PS1的总水平来实现这一目的，挽救AD患者中γ-分泌酶表达和/或活性的损害。

本文所描述的方法和组合物可同等地用于治疗其它神经退行性疾病、病症或病况。

阿尔茨海默症

本文所描述的方法可用于治疗具有包括但不限于家族性和散发性阿尔茨海默症、早发性或晚发性阿尔茨海默症的全部种类的阿尔茨海默症的受试者或降低其发展的风险。在一些实施方案中，本方法可用于治疗与早老素-1(PS1)和/或早老素-2(PS2)中的突变相关的阿尔茨海默症(AD)的早发型家族型或降低其发展的风险(Sherrington,等人.,Nature375:754-760(1995)；Rogaev,等人,Nature 376:775-778(1995)；Levy-Lahad,等人,Science 269:970-973(1995)；Hiltunen,等人,Eur.J.Hum.Genet.8:259-266(2000)；Jonghe,等人,Hum.Mol.Genet.8:1529-1540(1999)；Tysoe,等人,Am.J.Hum.Genet.62:70-76(1998)；Crook,等人,Nat.Med.4:452-455(1998)，其全部内容通过引用结合在此)。

在一些实施方案中，本方法可用于治疗具有PSEN1或PSEN2等位基因中的突变，例如对野生型PS蛋白具有显性阴性效果的突变的受试者。示例性突变包括C410Y、Δex9、G548、D257A、L166P、R278I、L435F、G384A、Y115H和L392V，以及N141I、G206A、H163R、A79V、S290C、A260P、A426P、A431E、R269H、L271V、C1410Y、E280G、P264L、E185D、L235V和M146V突变(参见，例如Heilig等人,J.Neurosci.,33(28):11606-11617(2013)；Watanabe等人,J.Neurosci.32(15):5085–5096(2012)；Brouwers等人,2008Ann Med 40(8):562–83)；Watanabe和Shen,PNAS 2017年11月28日114(48)12635-12637；Zhou等人,PNAS 2017年11月28日114(48)12731-12736；Hsu等人,Alzheimers Res Ther.2018年7月18日；10(1):67)。可对野生型PS蛋白具有显性阴性效果的另外的示例性突变包括但不限于，在PSEN-1中:N32N；R35Q；D40del(delGAC)；D40del(delACG)；E69D；A79V；V82L；I83_M84del(DelIM,ΔI83/M84,ΔI83/ΔM84)；I83T；M84V；L85P；P88L；V89L(G>T)；V89L(G>C)；C92S；V94M；V96F；V97L；T99A；F105C；F105I；F105L；F105V；R108Q；L113_I114insT(内含子4,InsTAC,p.113+1delG,剪接子5)；L113P；L113Q；Y115C；Y115D；Y115H；T116I；T116N；T116R；P117A；P117L；P117R；P117S；E120D(A>C)；E120D(A>T)；E120G；E120K；E123K；Q127_R128del(CAGA)；InsG(G)(c.379_382delXXXXinsG)；H131R；S132A；L134R；N135D；N135S；N135Y；A136G；M139I(G>C)；M139I(G>A)；M139K；M139L；M139T；M139V；V142F；I143F；I143M；I143N；I143T；I143V；M146I(G>C)；M146I(G>T)；M146I(G>A)；M146L(A>C)；M146L(A>T)；M146V；T147I；T147P；L150P；L153V；Y154C；Y154N；Y156F；Y156_R157insIY；R157S；H163P；H163R；H163Y；A164V；W165C(G>C)；W165C(G>T)；W165G；L166H；L166P；L166R；L166V；L166del；I167del(TTAdel)；I167del(TATdel)；I168T；S169del(ΔS169,Ser169del,ΔS170)；S169L；S169P；S170F；S170P；L171P；L173F(G>C)；L173F(G>T)；L173W；L174del；L174M；L174R；F175S；F176L；F177L；F177S；S178P；G183V；E184D；E184G；V191A；I202F；G206A；G206D；G206S；G206V；G209A；G209E；G209R；G209V；S212Y；I213F；I213L；I213T；H214D；H214N；H214Y；G217D；G217R；L219F；L219P；L219R；R220P；Q222H；Q222P；Q222R；Q223R；L226F；L226R；I229F；S230I；S230N；S230R；A231P；A231T；A231V；L232P；M233I(G>A)；M233I(G>C)；M233L(A>T)；M233L(A>C)；M233T；M233V；L235P；L235R；L235V；F237I；F237L；I238M；K239N；T245P；A246E；A246P；L248P；L248R；L250F；L250S；L250V；Y256S；A260V；V261F；V261L；L262F；L262V；C263F；C263R；P264L；G266S；P267A；P267L；P267S；R269G；R269H；L271V；V272A；E273A；E273G；T274R；A275V；R278I；R278K；R278S；R278T；E280A；(Paisa)；E280G；E280K；L282F；L282R；L282V；F283L；P284L；P284S；A285V；L286P；L286V；T291A；T291P；K311R；E318G；D333G；R352C；R352_S353insR；T354I；R358Q；S365A；S365Y；R377M；R377W；G378E；G378V；G378fs；L381F；L381V；G384A；F386I；F386S；F388L；S390I；S390N；V391F；V391G；L392P；L392V；G394V；A396T；N405S；I408T；A409T；C410Y；V412I；I416T；G417S；L418F；L420R；L424F；L424H；L424R；L424V；A426P；A431E；(Jalisco)；A431V；A434C；A434T；L435F；P436Q；P436S；I437V；I439S；I439V；T440del；869-2A>G；869-22_869-23ins18(ΔE9,Δ9,deltaE9)；I238_K239insI；S290C；T291_S319del(ΔE9Finn,Δ9Finn,Δ9)；S290C；T291_S319del(ΔE9,Δ9)；S290C；T291_S319del A>G(ΔE9,Δ9)；S290C；T291_S319del G>A(ΔE9,Δ9)；S290C；T291_S319del G>T(ΔE9,Δ9)；或S290W；S291_R377del(Δ9-10,Delta9-10,p.Ser290_Arg377delinsTrp,g.73671948_73682054del)(突变相对于Uniprot P49768.1/GenBankRef.No.NM_000021.4命名)中，和在PSEN-2中；T18M；R29H；G34S；R62C；R62H；P69A；R71W；K82R；A85V；V101M；K115Efs*；T122P；T122R；P123L；E126fs；E126K；S130L；V139M；N141I(Volga German)；N141Y；L143H；V148I；K161R；R163H；H169N；M174V；S175C；G212V；V214L；Q228L；Y231C；I235F；A237V；L238F；L238P；M239I；M239V；A252T；A258T；T301M；K306fs；P334A；P334R；P348L；A377V；V393M；T430M；或D439A，突变相对于Uniprot P49810.1/GenBank Ref.No.NP_000438.2命名)。参见，例如，Sun等人,Proc Natl Acad SciUSA.2017；114:E476–E485；Heilig等人,J Neurosci.2013年7月10日；33(28):11606-17；Zhou等人,PNAS 2017年11月28日114(48)12731-12736。在一些实施方案中，所述方法可以包括例如使用本领域已知的方法来确定受试者具有这样的突变。在一些实施方案中，受试者具有如本文所述的突变(例如，使用本领域已知的方法鉴定为具有如本文所述的突变)，并且任选地具有AD的家族史和/或AD的一种以上的症状，并且使用本文所述的方法治疗受试者。在一些实施方案中，受试者尚未具有完全的AD。

典型地，增加的健忘或轻微的混淆是阿尔茨海默症的早期症状。逐渐地，与阿尔茨海默症相关的认知损害导致记忆特别是近期的记忆丧失，迷失方向和对空间关系的曲解，说话、书写、思考、推理困难，性格和行为中的改变导致抑郁、焦虑、社交退缩、情绪波动、对他人的不信任、易怒和攻击性，睡眠习惯的改变，神志恍惚，失去自制力，妄想，并最终死亡。

其它神经退行性疾病、病症或病况

除了阿尔茨海默症，本方法还可用于治疗其它神经退行性疾病、病症或病况，包括额颞叶痴呆、各种类型的记忆丧失、包括但不限于轻度认知损害(MCI)的认知损害，或与PS1或PS2丧失相关的其它病况，例如由于诸如产生显性阴性同种型等的PSEN1或PSEN2中的突变。

密码子优化的早老素-1(PSEN1)

密码子优化的早老素-1(适用于本文所述的组合物和方法的编码PSEN1的多核苷酸可包括全长cDNA或其部分或片段，其编码保留野生型蛋白质的实质性γ-分泌酶活性如γ-分泌酶活性的至少50％、或由(例如，在包括实施例部分中描述的那些的体外γ分泌酶检验中，也参见Watanabe等人，J.Neurosci.32(15):5085–5096(2012))确定的野生型蛋白质的活性的至少60、70、80、90、或95％、或超过100％的蛋白质。在一些实施方案中，合适的密码子优化的PSEN1编码分别与全长野生型PS1或PS2蛋白序列为至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的蛋白质序列。人PSEN1/PS1或PSEN2/PS2的示例性野生型基因组、cDNA或蛋白质序列示于表1和图4A-C和5A-B。PS1通常切割为作为活性形式的N-和C-末端片段。PS-1被加工为两个片段：N末端28kDa片段，和C末端18kDa片段；主要的内切蛋白酶解(endoproteolytic)切割在大亲水环近端部分中的Met298处和在其附近发生(Podlisny等人,Neurobiol Dis.1997；3(4):325-37；Marambaud等人,EMBO J.2002年4月15日；21(8):1948-56)。包含或编码这些切割的形式的序列还可用于本文所述的方法和组合物中，例如编码SEQ ID NO:5的氨基酸1-291、1-292、1-293、1-294、1-295、1-296、1-297、1-298或1-299或SEQ ID NO:6-8的相应片段。

表1：GenBank登录号

>NM_000021.3智人早老素1(PSEN1),转录本变体1，mRNA(SEQ ID NO:1)

AAATGACGACAACGGTGAGGGTTCTCGGGCGGGGCCTGGGACAGGCAGCTCCGGGGTCCGCGGTTTCACATCGGAAACAAAACAGCGGCTGGTCTGGAAGGAACCTGAGCTACGAGCCGCGGCGGCAGCGGGGCGGCGGGGAAGCGTATACCTAATCTGGGAGCCTGCAAGTGACAACAGCCTTTGCGGTCCTTAGACAGCTTGGCCTGGAGGAGAACACATGAAAGAAAGAACCTCAAGAGGCTTTGTTTTCTGTGAAACAGTATTTCTATACAGTTGCTCCAATGACAGAGTTACCTGCACCGTTGTCCTACTTCCAGAATGCACAGATGTCTGAGGACAACCACCTGAGCAATACTGTACGTAGCCAGAATGACAATAGAGAACGGCAGGAGCACAACGACAGACGGAGCCTTGGCCACCCTGAGCCATTATCTAATGGACGACCCCAGGGTAACTCCCGGCAGGTGGTGGAGCAAGATGAGGAAGAAGATGAGGAGCTGACATTGAAATATGGCGCCAAGCATGTGATCATGCTCTTTGTCCCTGTGACTCTCTGCATGGTGGTGGTCGTGGCTACCATTAAGTCAGTCAGCTTTTATACCCGGAAGGATGGGCAGCTAATCTATACCCCATTCACAGAAGATACCGAGACTGTGGGCCAGAGAGCCCTGCACTCAATTCTGAATGCTGCCATCATGATCAGTGTCATTGTTGTCATGACTATCCTCCTGGTGGTTCTGTATAAATACAGGTGCTATAAGGTCATCCATGCCTGGCTTATTATATCATCTCTATTGTTGCTGTTCTTTTTTTCATTCATTTACTTGGGGGAAGTGTTTAAAACCTATAACGTTGCTGTGGACTACATTACTGTTGCACTCCTGATCTGGAATTTTGGTGTGGTGGGAATGATTTCCATTCACTGGAAAGGTCCACTTCGACTCCAGCAGGCATATCTCATTATGATTAGTGCCCTCATGGCCCTGGTGTTTATCAAGTACCTCCCTGAATGGACTGCGTGGCTCATCTTGGCTGTGATTTCAGTATATGATTTAGTGGCTGTTTTGTGTCCGAAAGGTCCACTTCGTATGCTGGTTGAAACAGCTCAGGAGAGAAATGAAACGCTTTTTCCAGCTCTCATTTACTCCTCAACAATGGTGTGGTTGGTGAATATGGCAGAAGGAGACCCGGAAGCTCAAAGGAGAGTATCCAAAAATTCCAAGTATAATGCAGAAAGCACAGAAAGGGAGTCACAAGACACTGTTGCAGAGAATGATGATGGCGGGTTCAGTGAGGAATGGGAAGCCCAGAGGGACAGTCATCTAGGGCCTCATCGCTCTACACCTGAGTCACGAGCTGCTGTCCAGGAACTTTCCAGCAGTATCCTCGCTGGTGAAGACCCAGAGGAAAGGGGAGTAAAACTTGGATTGGGAGATTTCATTTTCTACAGTGTTCTGGTTGGTAAAGCCTCAGCAACAGCCAGTGGAGACTGGAACACAACCATAGCCTGTTTCGTAGCCATATTAATTGGTTTGTGCCTTACATTATTACTCCTTGCCATTTTCAAGAAAGCATTGCCAGCTCTTCCAATCTCCATCACCTTTGGGCTTGTTTTCTACTTTGCCACAGATTATCTTGTACAGCCTTTTATGGACCAATTAGCATTCCATCAATTTTATATCTAGCATATTTGCGGTTAGAATCCCATGGATGTTTCTTCTTTGACTATAACAAAATCTGGGGAGGACAAAGGTGATTTTCCTGTGTCCACATCTAACAAAGTCAAGATTCCCGGCTGGACTTTTGCAGCTTCCTTCCAAGTCTTCCTGACCACCTTGCACTATTGGACTTTGGAAGGAGGTGCCTATAGAAAACGATTTTGAACATACTTCATCGCAGTGGACTGTGTCCCTCGGTGCAGAAACTACCAGATTTGAGGGACGAGGTCAAGGAGATATGATAGGCCCGGAAGTTGCTGTGCCCCATCAGCAGCTTGACGCGTGGTCACAGGACGATTTCACTGACACTGCGAACTCTCAGGACTACCGTTACCAAGAGGTTAGGTGAAGTGGTTTAAACCAAACGGAACTCTTCATCTTAAACTACACGTTGAAAATCAACCCAATAATTCTGTATTAACTGAATTCTGAACTTTTCAGGAGGTACTGTGAGGAAGAGCAGGCACCAGCAGCAGAATGGGGAATGGAGAGGTGGGCAGGGGTTCCAGCTTCCCTTTGATTTTTTGCTGCAGACTCATCCTTTTTAAATGAGACTTGTTTTCCCCTCTCTTTGAGTCAAGTCAAATATGTAGATTGCCTTTGGCAATTCTTCTTCTCAAGCACTGACACTCATTACCGTCTGTGATTGCCATTTCTTCCCAAGGCCAGTCTGAACCTGAGGTTGCTTTATCCTAAAAGTTTTAACCTCAGGTTCCAAATTCAGTAAATTTTGGAAACAGTACAGCTATTTCTCATCAATTCTCTATCATGTTGAAGTCAAATTTGGATTTTCCACCAAATTCTGAATTTGTAGACATACTTGTACGCTCACTTGCCCCAGATGCCTCCTCTGTCCTCATTCTTCTCTCCCACACAAGCAGTCTTTTTCTACAGCCAGTAAGGCAGCTCTGTCGTGGTAGCAGATGGTCCCATTATTCTAGGGTCTTACTCTTTGTATGATGAAAAGAATGTGTTATGAATCGGTGCTGTCAGCCCTGCTGTCAGACCTTCTTCCACAGCAAATGAGATGTATGCCCAAAGACGGTAGAATTAAAGAAGAGTAAAATGGCTGTTGAAGCACTTTCTGTCCTGGTATTTTGTTTTTGCTTTTGCCACACAGTAGCTCAGAATTTGAACAAATAGCCAAAAGCTGGTGGTTGATGAATTATGAACTAGTTGTATCAACACAAAGCAAGAGTTGGGGAAAGCCATATTTAACTTGGTGAGCTGTGGGAGAACCTGGTGGCAGAAGGAGAACCAACTGCCAAGGGGAAAGAGAAGGGGCCTCCAGCAGCGAAGGGGATACAGTGAGCTAATGATGTCAAGGAGGAGTTTCAGGTTATTCTCGTCAGCTCCACAAATGGGTGCTTTGTGGTCTCTGCCCGCGTTACCTTTCCTCTCAATGTACCTTTGTGTGAACTGGGCAGTGGAGGTGCCTGCTGCAGTTACCATGGAGTTCAGGCTCTGGGCAGCTCAGTCAGGCAAAACACACAAACAGCCATCAGCCTGTGTGGGCTCAGGGCACCTCTGGACAAAGGCTTGTGGGGCATAACCTTCTTTACCACAGAGAGCCCTTAGCTATGCTGATCAGACCGTAAGCGTTTATGAGAAACTTAGTTTCCTCCTGTGGCTGAGGAGGGGCCAGCTTTTTCTTCTTTTGCCTGCTGTTTTCTCTCCCAATCTATGATATGATATGACCTGGTTTGGGGCTGTCTTTGGTGTTTAGAATATTTGTTTTCTGTCCCAGGATATTTCTTATAAGAACCTAACTTCAAGAGTAGTGTGCGAGTACTGATCTGAATTTAAATTAAAATTGGCTTATATTAGGCAGTCACAGACAGGAAAAATAAGAGCTATGCAAAGAAAGGGGGATTTAAAGTAGTAGGTTCTATCATCTCAATTCATTTTTTTCCATGAAATCCCTTCTTCCAAGATTCATTCCCTCTCTCAGACATGTGCTAGCATGGGTATTATCATTGAGAAAGCACAGCTACAGCAAAGCCACCTGAATAGCAATTTGTGATTGGAAGCATTCTTGAGGGATCCCTAATCTAGAGTAATTTATTTGTGTAAGGATCCCAAATGTGTTGCACCTTTCATGATACATTTCTTCTCTGAAGAGGGTACGTGGGGTGTGTGTATTTAAATCCATCCTATGTATTACTGATTGTCCTGTGTAGAAAGATGGCAATTATTCTGTCTCTTTCTCCAAGTTTGAGCCACATCTCAGCCACATTGTTAGACAGTGTACAGAGAACCTATCTTTCCTTTTTTTTTTTTTAAAGGACAGGATTTTGCTGTGTTGCCCAGGCTAGACTTGAACTCCTGGGCTCAAGTAATCCACCTCAGCCTGAGTAGCTGAGACTACAGCCCATCTTATTTCTTTAAATCATTCATCTCAGGCAGAGAACTTTTCCCTCAAACATTCTTTTTAGAATTAGTTCAGTCATTCCTAAAACATCCAAATGCTAGTCTTCCACCATGAAAAATAGATTGTCACTGGAAAGAACAGTAGCAATTTCCATAAGGATGTGCCTTCACTCACACGGGACAGGCGGTGGTTATAGAGTCGGGCAAAACCAGCAGTAGAGTATGACCAGCCAAGCCAATCTGCTTAATAAAAAGATGGAAGACAGTAAGGAAGGAAAGTAGCCACTAAGAGTCTGAGTCTGACTGGGCTACAGAATAAAGGGTATTTATGGACAGAATGTCATTACATGCCTATGGGAATACCAATCATATTTGGAAGATTTGCAGATTTTTTTTCAGAGAGGAAAGACTCACCTTCCTGTTTTTGGTTCTCAGTAGGTTCGTGTGTGTTCCTAGAATCACAGCTCTGACTCCAAATGACTCAATTTCTCAATTAGAAAAAGTAGAAGCTTTCTAAGCAACTTGGAAGAAAACAGTCATAAGTAAGCAATTTGTTGATTTTACTACAGAAGCAACAACTGAAGAGGCAGTGTTTTTACTTTCAGACTCCGGGATTCCCATTCTGTAGTCTCTCTGCTTTTAAAAACCCTCCTTTTGCAATAGATGCCCAAACAGATGATGTTTATTACTTGTTATTTACGTGGCCTCAGACAGTGTATGTATTCTCGATATAACTTGTAGAGTGTGAAATATAAGTTTAACTACCAAATAAGGTCTCCCAGGGTTAGATGACTGCGGGAAGCCTTTGATCCCAACCCCCAAGGCTTTGTATATTTGATCATTTGTGATCTAACCCTGGAAGAAAAAGAGCTCAGAAACCACTATGAAAAAATTTGTTCAGTGTTTTCTGTGTTCCCGTAGGTTCTGGAGTCTGAGGATGCAAAGATGAATAAGATAAATTCTCAGAATGTAGTTATAATCTCTTGTTTTCTGGTATATGCCATCTTTCTTTAACTTCTCTAAAATATTGGGTATTTGTCAAATAACCACTTTTAACAGTTACCATTACTGAGGGCTTATACATTGGTGTTATAAAAGTGACTTGATTCAGAAATCAATCCATTCAGTAAAGTACTCCTTCTCTAAATTTGCTGTTATGTCTATAAGGAACAGTTTGACCTGCCCTTCTCCTCACCTCCTCACCTGCCTTCCAACATTGAATTTGGAAGGAGACGTGAAAATTGGACATTTGGTTTTGCCCTTGGGCTGGAAACTATCATATAATCATAAGTTTGAGCCTAGAAGTGATCCTTGTGATCTTCTCACCTCTTTAAATTCCCACAACACAAGAGATTAAAAACAGAGGTTTCAGCTCTTCATAGTGCGTTGTGAAATGGCTGGCCAGAGTGTACCAACAAAGCTGTCATCGGGCTCACAGCTCAGAGACATCTGCATGTGATCATCTGCATAGTCCTCTCCTCTAACGGGAAACACCTCAGATTTGCATATAAAAAAGCACCCTGGTGCTGAAATGAACCCCTTTCTTGAACATCAAAGCTGTCTCCCACAGCCTTGGGCAGCAGGGTGCCTCTTAGTGGATGTGCTGGGTCCACCCTGAGCCCTGACATGTGGTGGCAGCATTGCCAGTTGGTCTGTGTGTCTGTGTAGCAGGGACGATTTCCCAGAAAGCAATTTTCCTTTTGAAATACGTAATTGTTGAGACTAGGCAGTTTCAAAGTCAGCTGCATATAGTAGCAAGTACAGGACTGTCTTGTTTTTGGTGTCCTTGGAGGTGCTGGGGTGAGGGTTTCAGTGGGATCATTTACTCTCACATGTTGTCTGCCTTCTGCTTCTGTGGACACTGCTTTGTACTTAATTCAGACAGACTGTGAATACACCTTTTTTATAAATACCTTTCAAATTCTTGGTAAGATATAATTTTGATAGCTGATTGCAGATTTTCTGTATTTGTCAGATTAATAAAGACTGCATGAATCCAAAAAAAAAAAAAAAAAA

>NM_007318.2智人早老素1(PSEN1)，转录本变体2，mRNA(SEQ ID NO:2)

AAATGACGACAACGGTGAGGGTTCTCGGGCGGGGCCTGGGACAGGCAGCTCCGGGGTCCGCGGTTTCACATCGGAAACAAAACAGCGGCTGGTCTGGAAGGAACCTGAGCTACGAGCCGCGGCGGCAGCGGGGCGGCGGGGAAGCGTATACCTAATCTGGGAGCCTGCAAGTGACAACAGCCTTTGCGGTCCTTAGACAGCTTGGCCTGGAGGAGAACACATGAAAGAAAGAACCTCAAGAGGCTTTGTTTTCTGTGAAACAGTATTTCTATACAGTTGCTCCAATGACAGAGTTACCTGCACCGTTGTCCTACTTCCAGAATGCACAGATGTCTGAGGACAACCACCTGAGCAATACTAATGACAATAGAGAACGGCAGGAGCACAACGACAGACGGAGCCTTGGCCACCCTGAGCCATTATCTAATGGACGACCCCAGGGTAACTCCCGGCAGGTGGTGGAGCAAGATGAGGAAGAAGATGAGGAGCTGACATTGAAATATGGCGCCAAGCATGTGATCATGCTCTTTGTCCCTGTGACTCTCTGCATGGTGGTGGTCGTGGCTACCATTAAGTCAGTCAGCTTTTATACCCGGAAGGATGGGCAGCTAATCTATACCCCATTCACAGAAGATACCGAGACTGTGGGCCAGAGAGCCCTGCACTCAATTCTGAATGCTGCCATCATGATCAGTGTCATTGTTGTCATGACTATCCTCCTGGTGGTTCTGTATAAATACAGGTGCTATAAGGTCATCCATGCCTGGCTTATTATATCATCTCTATTGTTGCTGTTCTTTTTTTCATTCATTTACTTGGGGGAAGTGTTTAAAACCTATAACGTTGCTGTGGACTACATTACTGTTGCACTCCTGATCTGGAATTTTGGTGTGGTGGGAATGATTTCCATTCACTGGAAAGGTCCACTTCGACTCCAGCAGGCATATCTCATTATGATTAGTGCCCTCATGGCCCTGGTGTTTATCAAGTACCTCCCTGAATGGACTGCGTGGCTCATCTTGGCTGTGATTTCAGTATATGATTTAGTGGCTGTTTTGTGTCCGAAAGGTCCACTTCGTATGCTGGTTGAAACAGCTCAGGAGAGAAATGAAACGCTTTTTCCAGCTCTCATTTACTCCTCAACAATGGTGTGGTTGGTGAATATGGCAGAAGGAGACCCGGAAGCTCAAAGGAGAGTATCCAAAAATTCCAAGTATAATGCAGAAAGCACAGAAAGGGAGTCACAAGACACTGTTGCAGAGAATGATGATGGCGGGTTCAGTGAGGAATGGGAAGCCCAGAGGGACAGTCATCTAGGGCCTCATCGCTCTACACCTGAGTCACGAGCTGCTGTCCAGGAACTTTCCAGCAGTATCCTCGCTGGTGAAGACCCAGAGGAAAGGGGAGTAAAACTTGGATTGGGAGATTTCATTTTCTACAGTGTTCTGGTTGGTAAAGCCTCAGCAACAGCCAGTGGAGACTGGAACACAACCATAGCCTGTTTCGTAGCCATATTAATTGGTTTGTGCCTTACATTATTACTCCTTGCCATTTTCAAGAAAGCATTGCCAGCTCTTCCAATCTCCATCACCTTTGGGCTTGTTTTCTACTTTGCCACAGATTATCTTGTACAGCCTTTTATGGACCAATTAGCATTCCATCAATTTTATATCTAGCATATTTGCGGTTAGAATCCCATGGATGTTTCTTCTTTGACTATAACAAAATCTGGGGAGGACAAAGGTGATTTTCCTGTGTCCACATCTAACAAAGTCAAGATTCCCGGCTGGACTTTTGCAGCTTCCTTCCAAGTCTTCCTGACCACCTTGCACTATTGGACTTTGGAAGGAGGTGCCTATAGAAAACGATTTTGAACATACTTCATCGCAGTGGACTGTGTCCCTCGGTGCAGAAACTACCAGATTTGAGGGACGAGGTCAAGGAGATATGATAGGCCCGGAAGTTGCTGTGCCCCATCAGCAGCTTGACGCGTGGTCACAGGACGATTTCACTGACACTGCGAACTCTCAGGACTACCGTTACCAAGAGGTTAGGTGAAGTGGTTTAAACCAAACGGAACTCTTCATCTTAAACTACACGTTGAAAATCAACCCAATAATTCTGTATTAACTGAATTCTGAACTTTTCAGGAGGTACTGTGAGGAAGAGCAGGCACCAGCAGCAGAATGGGGAATGGAGAGGTGGGCAGGGGTTCCAGCTTCCCTTTGATTTTTTGCTGCAGACTCATCCTTTTTAAATGAGACTTGTTTTCCCCTCTCTTTGAGTCAAGTCAAATATGTAGATTGCCTTTGGCAATTCTTCTTCTCAAGCACTGACACTCATTACCGTCTGTGATTGCCATTTCTTCCCAAGGCCAGTCTGAACCTGAGGTTGCTTTATCCTAAAAGTTTTAACCTCAGGTTCCAAATTCAGTAAATTTTGGAAACAGTACAGCTATTTCTCATCAATTCTCTATCATGTTGAAGTCAAATTTGGATTTTCCACCAAATTCTGAATTTGTAGACATACTTGTACGCTCACTTGCCCCAGATGCCTCCTCTGTCCTCATTCTTCTCTCCCACACAAGCAGTCTTTTTCTACAGCCAGTAAGGCAGCTCTGTCGTGGTAGCAGATGGTCCCATTATTCTAGGGTCTTACTCTTTGTATGATGAAAAGAATGTGTTATGAATCGGTGCTGTCAGCCCTGCTGTCAGACCTTCTTCCACAGCAAATGAGATGTATGCCCAAAGACGGTAGAATTAAAGAAGAGTAAAATGGCTGTTGAAGCACTTTCTGTCCTGGTATTTTGTTTTTGCTTTTGCCACACAGTAGCTCAGAATTTGAACAAATAGCCAAAAGCTGGTGGTTGATGAATTATGAACTAGTTGTATCAACACAAAGCAAGAGTTGGGGAAAGCCATATTTAACTTGGTGAGCTGTGGGAGAACCTGGTGGCAGAAGGAGAACCAACTGCCAAGGGGAAAGAGAAGGGGCCTCCAGCAGCGAAGGGGATACAGTGAGCTAATGATGTCAAGGAGGAGTTTCAGGTTATTCTCGTCAGCTCCACAAATGGGTGCTTTGTGGTCTCTGCCCGCGTTACCTTTCCTCTCAATGTACCTTTGTGTGAACTGGGCAGTGGAGGTGCCTGCTGCAGTTACCATGGAGTTCAGGCTCTGGGCAGCTCAGTCAGGCAAAACACACAAACAGCCATCAGCCTGTGTGGGCTCAGGGCACCTCTGGACAAAGGCTTGTGGGGCATAACCTTCTTTACCACAGAGAGCCCTTAGCTATGCTGATCAGACCGTAAGCGTTTATGAGAAACTTAGTTTCCTCCTGTGGCTGAGGAGGGGCCAGCTTTTTCTTCTTTTGCCTGCTGTTTTCTCTCCCAATCTATGATATGATATGACCTGGTTTGGGGCTGTCTTTGGTGTTTAGAATATTTGTTTTCTGTCCCAGGATATTTCTTATAAGAACCTAACTTCAAGAGTAGTGTGCGAGTACTGATCTGAATTTAAATTAAAATTGGCTTATATTAGGCAGTCACAGACAGGAAAAATAAGAGCTATGCAAAGAAAGGGGGATTTAAAGTAGTAGGTTCTATCATCTCAATTCATTTTTTTCCATGAAATCCCTTCTTCCAAGATTCATTCCCTCTCTCAGACATGTGCTAGCATGGGTATTATCATTGAGAAAGCACAGCTACAGCAAAGCCACCTGAATAGCAATTTGTGATTGGAAGCATTCTTGAGGGATCCCTAATCTAGAGTAATTTATTTGTGTAAGGATCCCAAATGTGTTGCACCTTTCATGATACATTTCTTCTCTGAAGAGGGTACGTGGGGTGTGTGTATTTAAATCCATCCTATGTATTACTGATTGTCCTGTGTAGAAAGATGGCAATTATTCTGTCTCTTTCTCCAAGTTTGAGCCACATCTCAGCCACATTGTTAGACAGTGTACAGAGAACCTATCTTTCCTTTTTTTTTTTTTAAAGGACAGGATTTTGCTGTGTTGCCCAGGCTAGACTTGAACTCCTGGGCTCAAGTAATCCACCTCAGCCTGAGTAGCTGAGACTACAGCCCATCTTATTTCTTTAAATCATTCATCTCAGGCAGAGAACTTTTCCCTCAAACATTCTTTTTAGAATTAGTTCAGTCATTCCTAAAACATCCAAATGCTAGTCTTCCACCATGAAAAATAGATTGTCACTGGAAAGAACAGTAGCAATTTCCATAAGGATGTGCCTTCACTCACACGGGACAGGCGGTGGTTATAGAGTCGGGCAAAACCAGCAGTAGAGTATGACCAGCCAAGCCAATCTGCTTAATAAAAAGATGGAAGACAGTAAGGAAGGAAAGTAGCCACTAAGAGTCTGAGTCTGACTGGGCTACAGAATAAAGGGTATTTATGGACAGAATGTCATTACATGCCTATGGGAATACCAATCATATTTGGAAGATTTGCAGATTTTTTTTCAGAGAGGAAAGACTCACCTTCCTGTTTTTGGTTCTCAGTAGGTTCGTGTGTGTTCCTAGAATCACAGCTCTGACTCCAAATGACTCAATTTCTCAATTAGAAAAAGTAGAAGCTTTCTAAGCAACTTGGAAGAAAACAGTCATAAGTAAGCAATTTGTTGATTTTACTACAGAAGCAACAACTGAAGAGGCAGTGTTTTTACTTTCAGACTCCGGGATTCCCATTCTGTAGTCTCTCTGCTTTTAAAAACCCTCCTTTTGCAATAGATGCCCAAACAGATGATGTTTATTACTTGTTATTTACGTGGCCTCAGACAGTGTATGTATTCTCGATATAACTTGTAGAGTGTGAAATATAAGTTTAACTACCAAATAAGGTCTCCCAGGGTTAGATGACTGCGGGAAGCCTTTGATCCCAACCCCCAAGGCTTTGTATATTTGATCATTTGTGATCTAACCCTGGAAGAAAAAGAGCTCAGAAACCACTATGAAAAAATTTGTTCAGTGTTTTCTGTGTTCCCGTAGGTTCTGGAGTCTGAGGATGCAAAGATGAATAAGATAAATTCTCAGAATGTAGTTATAATCTCTTGTTTTCTGGTATATGCCATCTTTCTTTAACTTCTCTAAAATATTGGGTATTTGTCAAATAACCACTTTTAACAGTTACCATTACTGAGGGCTTATACATTGGTGTTATAAAAGTGACTTGATTCAGAAATCAATCCATTCAGTAAAGTACTCCTTCTCTAAATTTGCTGTTATGTCTATAAGGAACAGTTTGACCTGCCCTTCTCCTCACCTCCTCACCTGCCTTCCAACATTGAATTTGGAAGGAGACGTGAAAATTGGACATTTGGTTTTGCCCTTGGGCTGGAAACTATCATATAATCATAAGTTTGAGCCTAGAAGTGATCCTTGTGATCTTCTCACCTCTTTAAATTCCCACAACACAAGAGATTAAAAACAGAGGTTTCAGCTCTTCATAGTGCGTTGTGAAATGGCTGGCCAGAGTGTACCAACAAAGCTGTCATCGGGCTCACAGCTCAGAGACATCTGCATGTGATCATCTGCATAGTCCTCTCCTCTAACGGGAAACACCTCAGATTTGCATATAAAAAAGCACCCTGGTGCTGAAATGAACCCCTTTCTTGAACATCAAAGCTGTCTCCCACAGCCTTGGGCAGCAGGGTGCCTCTTAGTGGATGTGCTGGGTCCACCCTGAGCCCTGACATGTGGTGGCAGCATTGCCAGTTGGTCTGTGTGTCTGTGTAGCAGGGACGATTTCCCAGAAAGCAATTTTCCTTTTGAAATACGTAATTGTTGAGACTAGGCAGTTTCAAAGTCAGCTGCATATAGTAGCAAGTACAGGACTGTCTTGTTTTTGGTGTCCTTGGAGGTGCTGGGGTGAGGGTTTCAGTGGGATCATTTACTCTCACATGTTGTCTGCCTTCTGCTTCTGTGGACACTGCTTTGTACTTAATTCAGACAGACTGTGAATACACCTTTTTTATAAATACCTTTCAAATTCTTGGTAAGATATAATTTTGATAGCTGATTGCAGATTTTCTGTATTTGTCAGATTAATAAAGACTGCATGAATCCAAAAAAAAAAAAAAAAAA

>NM_000447.2智人早老素2(PSEN2)，转录本变体1，mRNA(SEQ ID NO:3)

GGGGCCTGGGCCGGCGCCGGGTCCGGCCGGGCGCTCAGCCAGCTGCGTAAACTCCGCTGGAGCGCGGCGGCAGAGCAGGCATTTCCAGCAGTGAGGAGACAGCCAGAAGCAAGCTTTTGGAGCTGAAGGAACCTGAGACAGAAGCTAGTCCCCCCTCTGAATTTTACTGATGAAGAAACTGAGGCCACAGAGCTAAAGTGACTTTTCCCAAGGTCGCCCAGCGAGGACGTGGGACTTCTCAGACGTCAGGAGAGTGATGTGAGGGAGCTGTGTGACCATAGAAAGTGACGTGTTAAAAACCAGCGCTGCCCTCTTTGAAAGCCAGGGAGCATCATTCATTTAGCCTGCTGAGAAGAAGAAACCAAGTGTCCGGGATTCAGACCTCTCTGCGGCCCCAAGTGTTCGTGGTGCTTCCAGAGGCAGGGCTATGCTCACATTCATGGCCTCTGACAGCGAGGAAGAAGTGTGTGATGAGCGGACGTCCCTAATGTCGGCTGAGAGCCCCACGCCGCGCTCCTGCCAGGAGGGCAGGCAGGGCCCAGAGGATGGAGAGAACACTGCCCAGTGGAGAAGCCAGGAGAACGAGGAGGACGGTGAGGAGGACCCTGACCGCTATGTCTGTAGTGGGGTTCCCGGGCGGCCGCCAGGCCTGGAGGAAGAGCTGACCCTCAAATACGGAGCGAAGCACGTGATCATGCTGTTTGTGCCTGTCACTCTGTGCATGATCGTGGTGGTAGCCACCATCAAGTCTGTGCGCTTCTACACAGAGAAGAATGGACAGCTCATCTACACGCCATTCACTGAGGACACACCCTCGGTGGGCCAGCGCCTCCTCAACTCCGTGCTGAACACCCTCATCATGATCAGCGTCATCGTGGTTATGACCATCTTCTTGGTGGTGCTCTACAAGTACCGCTGCTACAAGTTCATCCATGGCTGGTTGATCATGTCTTCACTGATGCTGCTGTTCCTCTTCACCTATATCTACCTTGGGGAAGTGCTCAAGACCTACAATGTGGCCATGGACTACCCCACCCTCTTGCTGACTGTCTGGAACTTCGGGGCAGTGGGCATGGTGTGCATCCACTGGAAGGGCCCTCTGGTGCTGCAGCAGGCCTACCTCATCATGATCAGTGCGCTCATGGCCCTAGTGTTCATCAAGTACCTCCCAGAGTGGTCCGCGTGGGTCATCCTGGGCGCCATCTCTGTGTATGATCTCGTGGCTGTGCTGTGTCCCAAAGGGCCTCTGAGAATGCTGGTAGAAACTGCCCAGGAGAGAAATGAGCCCATATTCCCTGCCCTGATATACTCATCTGCCATGGTGTGGACGGTTGGCATGGCGAAGCTGGACCCCTCCTCTCAGGGTGCCCTCCAGCTCCCCTACGACCCGGAGATGGAAGAAGACTCCTATGACAGTTTTGGGGAGCCTTCATACCCCGAAGTCTTTGAGCCTCCCTTGACTGGCTACCCAGGGGAGGAGCTGGAGGAAGAGGAGGAAAGGGGCGTGAAGCTTGGCCTCGGGGACTTCATCTTCTACAGTGTGCTGGTGGGCAAGGCGGCTGCCACGGGCAGCGGGGACTGGAATACCACGCTGGCCTGCTTCGTGGCCATCCTCATTGGCTTGTGTCTGACCCTCCTGCTGCTTGCTGTGTTCAAGAAGGCGCTGCCCGCCCTCCCCATCTCCATCACGTTCGGGCTCATCTTTTACTTCTCCACGGACAACCTGGTGCGGCCGTTCATGGACACCCTGGCCTCCCATCAGCTCTACATCTGAGGGACATGGTGTGCCACAGGCTGCAAGCTGCAGGGAATTTTCATTGGATGCAGTTGTATAGTTTTACACTCTAGTGCCATATATTTTTAAGACTTTTCTTTCCTTAAAAAATAAAGTACGTGTTTACTTGGTGAGGAGGAGGCAGAACCAGCTCTTTGGTGCCAGCTGTTTCATCACCAGACTTTGGCTCCCGCTTTGGGGAGCGCCTCGCTTCACGGACAGGAAGCACAGCAGGTTTATCCAGATGAACTGAGAAGGTCAGATTAGGGCGGGGAGAAGAGCATCCGGCATGAGGGCTGAGATGCGCAAAGAGTGTGCTCGGGAGTGGCCCCTGGCACCTGGGTGCTCTGGCTGGAGAGGAAAAGCCAGTTCCCTACGAGGAGTGTTCCCAATGCTTTGTCCATGATGTCCTTGTTATTTTATTGCCTTTAGAAACTGAGTCCTGTTCTTGTTACGGCAGTCACACTGCTGGGAAGTGGCTTAATAGTAATATCAATAAATAGATGAGTCCTGTTAGAATCTTGAAAA

>NM_012486.2智人早老素2(PSEN2)，转录本变体2，mRNA(SEQ ID NO:4)

GGGGCCTGGGCCGGCGCCGGGTCCGGCCGGGCGCTCAGCCAGCTGCGTAAACTCCGCTGGAGCGCGGCGGCAGAGCAGGCATTTCCAGCAGTGAGGAGACAGCCAGAAGCAAGCTTTTGGAGCTGAAGGAACCTGAGACAGAAGCTAGTCCCCCCTCTGAATTTTACTGATGAAGAAACTGAGGCCACAGAGCTAAAGTGACTTTTCCCAAGGTCGCCCAGCGAGGACGTGGGACTTCTCAGACGTCAGGAGAGTGATGTGAGGGAGCTGTGTGACCATAGAAAGTGACGTGTTAAAAACCAGCGCTGCCCTCTTTGAAAGCCAGGGAGCATCATTCATTTAGCCTGCTGAGAAGAAGAAACCAAGTGTCCGGGATTCAGACCTCTCTGCGGCCCCAAGTGTTCGTGGTGCTTCCAGAGGCAGGGCTATGCTCACATTCATGGCCTCTGACAGCGAGGAAGAAGTGTGTGATGAGCGGACGTCCCTAATGTCGGCTGAGAGCCCCACGCCGCGCTCCTGCCAGGAGGGCAGGCAGGGCCCAGAGGATGGAGAGAACACTGCCCAGTGGAGAAGCCAGGAGAACGAGGAGGACGGTGAGGAGGACCCTGACCGCTATGTCTGTAGTGGGGTTCCCGGGCGGCCGCCAGGCCTGGAGGAAGAGCTGACCCTCAAATACGGAGCGAAGCACGTGATCATGCTGTTTGTGCCTGTCACTCTGTGCATGATCGTGGTGGTAGCCACCATCAAGTCTGTGCGCTTCTACACAGAGAAGAATGGACAGCTCATCTACACGCCATTCACTGAGGACACACCCTCGGTGGGCCAGCGCCTCCTCAACTCCGTGCTGAACACCCTCATCATGATCAGCGTCATCGTGGTTATGACCATCTTCTTGGTGGTGCTCTACAAGTACCGCTGCTACAAGTTCATCCATGGCTGGTTGATCATGTCTTCACTGATGCTGCTGTTCCTCTTCACCTATATCTACCTTGGGGAAGTGCTCAAGACCTACAATGTGGCCATGGACTACCCCACCCTCTTGCTGACTGTCTGGAACTTCGGGGCAGTGGGCATGGTGTGCATCCACTGGAAGGGCCCTCTGGTGCTGCAGCAGGCCTACCTCATCATGATCAGTGCGCTCATGGCCCTAGTGTTCATCAAGTACCTCCCAGAGTGGTCCGCGTGGGTCATCCTGGGCGCCATCTCTGTGTATGATCTCGTGGCTGTGCTGTGTCCCAAAGGGCCTCTGAGAATGCTGGTAGAAACTGCCCAGGAGAGAAATGAGCCCATATTCCCTGCCCTGATATACTCATCTGCCATGGTGTGGACGGTTGGCATGGCGAAGCTGGACCCCTCCTCTCAGGGTGCCCTCCAGCTCCCCTACGACCCGGAGATGGAAGACTCCTATGACAGTTTTGGGGAGCCTTCATACCCCGAAGTCTTTGAGCCTCCCTTGACTGGCTACCCAGGGGAGGAGCTGGAGGAAGAGGAGGAAAGGGGCGTGAAGCTTGGCCTCGGGGACTTCATCTTCTACAGTGTGCTGGTGGGCAAGGCGGCTGCCACGGGCAGCGGGGACTGGAATACCACGCTGGCCTGCTTCGTGGCCATCCTCATTGGCTTGTGTCTGACCCTCCTGCTGCTTGCTGTGTTCAAGAAGGCGCTGCCCGCCCTCCCCATCTCCATCACGTTCGGGCTCATCTTTTACTTCTCCACGGACAACCTGGTGCGGCCGTTCATGGACACCCTGGCCTCCCATCAGCTCTACATCTGAGGGACATGGTGTGCCACAGGCTGCAAGCTGCAGGGAATTTTCATTGGATGCAGTTGTATAGTTTTACACTCTAGTGCCATATATTTTTAAGACTTTTCTTTCCTTAAAAAATAAAGTACGTGTTTACTTGGTGAGGAGGAGGCAGAACCAGCTCTTTGGTGCCAGCTGTTTCATCACCAGACTTTGGCTCCCGCTTTGGGGAGCGCCTCGCTTCACGGACAGGAAGCACAGCAGGTTTATCCAGATGAACTGAGAAGGTCAGATTAGGGCGGGGAGAAGAGCATCCGGCATGAGGGCTGAGATGCGCAAAGAGTGTGCTCGGGAGTGGCCCCTGGCACCTGGGTGCTCTGGCTGGAGAGGAAAAGCCAGTTCCCTACGAGGAGTGTTCCCAATGCTTTGTCCATGATGTCCTTGTTATTTTATTGCCTTTAGAAACTGAGTCCTGTTCTTGTTACGGCAGTCACACTGCTGGGAAGTGGCTTAATAGTAATATCAATAAATAGATGAGTCCTGTTAGAATCTTGAAAA

>NP_000012.1早老素-1同种型I-467[智人](SEQ ID NO:5)

>NP_015557.2早老素-1同种型I-463[智人](SEQ ID NO:6)

>NP_000438.2早老素-2同种型1[智人](SEQ ID NO:7)

>NP_036618.2早老素-2同种型2[智人](SEQ ID NO:8)

为了确定两条氨基酸序列、或两条核酸序列的同一性百分比，出于最佳比较目的而比对序列(例如，为了最佳比对可以在第一和第二氨基酸或核酸序列中的一条或两条中引入空位和为了比较目的可忽略非同源序列)。用于比较目的而比对的参考序列的长度是参考序列的长度的至少80％，并且在一些实施方案中为至少90％或100％。然后比较在相应氨基酸位置或核苷酸位置处的氨基酸残基或核苷酸。当第一序列中的位置被与第二序列中相应位置相同的氨基酸残基或核苷酸占据时，则分子在该位置处为同一的。考虑到需要引入以实现两条序列的最佳比对的空位数、和各个空位的长度，两条序列之间的同一性百分比是序列共享的相同位置数的函数。在其它实施方案中，两条氨基酸序列的同一性百分比可作为两条氨基酸序列中相应位置处相同的氨基酸家族(例如，带正电、带负电、极性和不带电的、疏水的)内的氨基酸残基的保守性的函数(例如，在两条序列中特定位置处存在的丙氨酸残基替换缬氨酸残基显示高度保守性，但在两条序列中特定位置处存在的精氨酸残基替换天冬氨酸残基则显示低度保守性)。

例如，两条氨基酸序列之间的同一性百分比可使用已被整合至GCG软件包中的GAP程序中的Needleman和Wunsch((1970)J.Mol.Biol.48:444-453)算法、使用例如具有默认值的空位罚分、空位延伸罚分为4、和移码空位罚分的Blossum得分矩阵来确定。

密码子优化的早老素1

密码子优化对于在特定宿主细胞-例如细菌、小鼠、人中表达蛋白质是可取的。本领域技术人员将理解，由于遗传密码的简并性，可以产生大量的编码人早老素1的cDNA，其中一些与任何已知的和天然存在的基因的cDNA具有最小的相似性。因此，本发明考虑通过基于可能的密码子选择来选择组合而产生的各种和每一种可能的cDNA变异。这些组合是根据适用于编码天然存在的人早老素变体的多核苷酸的标准三联体遗传密码而产生的，并且所有这些变异都被认为是具体公开的。本文公开了示例性密码子优化的人PSEN1核苷酸序列–例如，SEQ ID NO:9；参见图2。该密码子优化的人PSEN1核苷酸序列是通过用在人细胞中以较低频率出现的天然存在的PSEN1核苷酸序列中的密码子替换在人细胞中以较高频率出现的密码子而产生的。密码子优化的人PSEN1核苷酸序列可以包括其中小于100％的密码子被优化的序列，例如，其中仅20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％或90％的野生型非优化的密码子被优化。密码子的出现频率可以通过本领域已知的方法计算确定。表1公开了这些密码子频率的示例性计算。

示例性密码子优化的人PSEN1序列如下：

>密码子优化的智人早老素1(PSEN1)cDNA(SEQ ID NO:9)

表1.人中密码子使用频率表(来源：Gen

GenScript密码子使用频率表工具)

突变的早老素1

在一些实施方案中，PS1蛋白包含突变。在一些实施方案中，突变为保守替换。这样的改变包括任意的异亮氨酸(I)、缬氨酸(V)、和亮氨酸(L)对这些疏水性氨基酸的任何其它氨基酸的替换；天冬氨酸(D)对谷氨酸(E)的替换，反之亦然；谷氨酰胺(Q)对天冬酰胺(N)的替换，反之亦然；和丝氨酸(S)对苏氨酸(T)的替换，反之亦然。其它替换也可被认为是保守的，这取决于特定氨基酸的环境和其在蛋白质的三维结构中的作用。例如，甘氨酸(G)和丙氨酸(A)可经常互换，丙氨酸(A)和缬氨酸(V)也可经常互换。相对疏水的甲硫氨酸(M)可经常与亮氨酸和异亮氨酸互换，且有时与缬氨酸互换。赖氨酸(K)和精氨酸(R)可经常在其中氨基酸残基的重要特征为其电荷且这两种氨基酸残基的pK的差异不显著的位置处互换。在特定环境下，其它改变仍可被认为是“保守的”(参见，例如，US20110201052的表III；13-15页“Biochemistry”第2版.Stryer编辑(Stanford University)；Henikoff等人,PNAS 1992第89卷10915-10919；Lei等人,J Biol Chem 1995年5月19日；270(20):11882-6)。

在一些实施方案中，该方法包括将一个以上的另外的突变引入人PS1序列(SEQ IDNO:5或6)。因此，在一些实施方案中，所述序列可以与人PS1的至少60％、70％、80％、90％或100％具有至少80％、85％、90％、95％或99％同一性。

为了确定两条氨基酸序列、或两条核酸序列的同一性百分比，出于最佳比较目的而比对序列(例如，为了最佳比对可以在第一和第二氨基酸或核酸序列中的一条或两条中引入空位和为了比较目的可忽略非同源序列)。用于比较目的而对比的参考序列的长度通常为参考序列的长度的至少80％，和在一些实施方案中为至少90％或100％。然后比较相应氨基酸位置或核苷酸位置处的氨基酸残基或核苷酸。当第一序列中的位置被与第二序列中相应位置相同的氨基酸残基或核苷酸占据时，则分子在该位置处为同一的(如本文所用，氨基酸或核酸“同一”等同于氨基酸或核酸“同源”)。考虑到需要引入以实现两条序列的最佳比对的空位数、和各个空位的长度，两条序列之间的同一性百分比是序列共享的相同位置数的函数。在其它实施方案中，两条氨基酸序列的同一性百分比可作为两条氨基酸序列中相应位置处的相同的氨基酸家族(例如，带正电、带负电、极性和不带电的、疏水的)内的氨基酸残基的保守性的函数(例如，在两条序列中特定位置处存在的丙氨酸残基替换缬氨酸残基显示高度保守性，但在两条序列中特定位置处存在的精氨酸残基替换天冬氨酸残基则显示低度保守性)。

为了本方法的目的，序列的比较和两条序列之间的同一性百分比的确定可使用空位罚分为12、空位延伸罚分为4、和移码空位罚分为5的Blossum 62得分矩阵来完成。

递送载体

编码PS1多肽或其治疗活性片段的密码子优化的核酸可整合至基因构建体中用作基因治疗方案的一部分。例如，本文描述用于体内递送和在特定细胞类型、特别是脑皮质神经元细胞中表达编码PS1多肽或其活性片段的密码子优化的多核苷酸的靶向表达载体。这样的组分的表达构建体可在任何有效载体中施用，例如能够有效体内递送组分基因至细胞的任何制剂或组合物。方法包括将基因插入至病毒载体，优选腺相关病毒中。病毒载体通常直接转导细胞。

可以采用能够高效转导CNS神经元的病毒载体，包括rAAV(例如，AAV1-AAV12)载体的任何血清型、重组或嵌合AAV载体、以及慢病毒或其它合适的病毒载体。在一些实施方案中，编码PS1的密码子优化的多核苷酸可操作地连接至适于在CNS中的表达的启动子。例如神经元亚型特异性特定启动子如α-钙/钙调蛋白激酶2A启动子可用于靶向刺激性神经元。可选地，泛神经元启动子，例如突触蛋白I启动子，可用于驱动PS1表达。其它示例性启动子包括但不限于，巨细胞病毒(CMV)早期增强子/启动子；杂合CMV增强/鸡β-肌动蛋白(CBA)启动子；包括CMV早期增强子元件、鸡β-肌动蛋白的第一外显子和第一内含子、和兔β-珠蛋白基因的剪接受体的启动子(通常称为“CAG启动子”)；或由CMV即刻早期增强子和CBA内含子1/外显子1构成的1.6kb杂合启动子(通常称为CAGGS启动子；Niwa等人.Gene,108:193-199(1991))。CAGGS启动子(Niwa等人,1991)已显示在脑中提供普遍且长期的表达(Klein等人,Exp.Neurol.176:66-74(2002))。用于将核酸体内导入至细胞中的一种方法是通过使用含有核酸如编码PS1的密码子优化的cDNA的病毒载体。除了其它方面以外，用病毒载体感染细胞具有大部分的靶细胞可接收核酸的优点。此外，在病毒载体内编码的分子，例如通过包含在病毒载体内的cDNA，在已摄取病毒载体核酸的细胞中有效表达。

对于核酸的递送特别有用的病毒载体系统是腺相关病毒(AAV)。腺相关病毒是天然存在的缺陷性病毒，其需要例如腺病毒或疱疹病毒等其它病毒作为有效复制和生产性生命周期的辅助病毒。(关于综述参见Muzyczka等人,Curr.Topics in Micro andImmunol.158:97-129(1992))。AAV载体有效转导各种细胞类型并且可在体内产生转基因的长期表达。尽管AAV载体基因组可作为附加体保持在细胞内，已观察到载体整合(参见例如Deyle和Russell,Curr Opin Mol Ther.2009年8月；11(4):442–447；Asokan等人,MolTher.2012年4月；20(4):699–708；Flotte等人,Am.J.Respir.Cell.Mol.Biol.7:349-356(1992)；Samulski等人,J.Virol.63:3822-3828(1989)；和McLaughlin等人,J.Virol.62:1963-1973(1989))。例如AAV2等AAV载体已广泛用于基因扩增或替换并且已在动物模型以及临床的范围内显示治疗功效；参见，例如，Mingozzi和High,Nature Reviews Genetics12,341-355(2011)；Deyle和Russell,Curr Opin Mol Ther.2009年8月；11(4):442–447；Asokan等人,Mol Ther.2012年4月；20(4):699–708。含有AAV的少至300个碱基对的AAV载体可被包装并可产生重组蛋白表达。用于产生重组逆转录病毒的方案和用于用这样的病毒体外或体内感染细胞的方案是本领域已知的，例如，可见于Ausubel,等人,编辑,CurrentProtocols in Molecular Biology,Greene Publishing Associates,(1989),Sections9.10-9.14，和其它标准实验室手册。已描述使用AAV载体递送构建体以在脑中表达，例如在Iwata等人,Sci Rep.2013；3:1472；Hester等人,Curr Gene Ther.2009年10月；9(5):428-33；Doll等人,Gene Therapy 1996,3(5):437-447；和Foley等人,J Control Release.2014年12月28日；196:71-8。

因此，在一些实施方案中，密码子优化的PSEN1编码核酸存在于用于基因治疗的载体中，例如AAV载体。在一些情况下，AAV载体选自由以下组成的组：AAV1、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAVrh10、AAV11和AAV12。在优选实施方案中，AAV是AAV9或AAVrh10。

本文所描述的载体可以是假型载体(pseudotyped vector)。假型化提供用于调节载体的靶细胞群的机制。例如，假型AAV载体可用于本文所描述的各种方法。假型载体为在第二载体例如第二AAV血清型的衣壳中含有一种载体的基因组例如一种AAV血清型的基因组的那些。假型化的方法是本领域公知的。例如，载体可由源自以下的包膜糖蛋白假型化：弹状病毒水泡性口炎病毒(VSV)血清型(印第安纳和章地埔拉株)、狂犬病病毒(例如，各种Evelyn–Rokitnicki–Abelseth ERA株和攻击病毒标准株(CVS))、狂犬病毒属莫科拉病毒、狂犬病相关病毒、水泡型口炎病毒(VSV)、莫科拉病毒(MV)、淋巴细胞型脉络丛脑膜炎病毒(LCMV)、狂犬病病毒糖蛋白(RV-G)、糖蛋白B型(FuG-B)、FuG-B的变体(FuG-B2)或莫洛尼鼠白血病病毒(MuLV)。病毒可以是假型，以用于一种或多种神经元或细胞群的转导。

在没有限制的情况下，假型载体的说明性实例包括重组AAV2/1、AAV2/2、AAV2/5、AAV2/6、AAV2/7、AAV2/8、AAV9、AAVrh10、AAV11、和AAV12血清型载体。本领域已知这样的载体可被工程化以包括编码人蛋白质或其它蛋白质的转基因。在特定实例中，本公开可包括含有如本文所公开的核酸的假型AAV9或AAVrh10病毒载体。参见Viral Vectors for GeneTherapy:Methods and Protocols,编辑.Machida,Humana Press,2003。

在一些情况下，可基于预期的用途，例如基于预期的施用途径，来选择特定的AAV血清型载体。

用于在基因治疗中应用AAV载体构建体的各种方法是本领域已知的，包括用于施用至人受试者的修饰、纯化、和制备的方法(参见，例如Viral Vectors for Gene Therapy:Methods and Protocols,编辑.Machida,Humana Press,2003)。另外，已描述靶向CNS的细胞的基于AAV的基因治疗(参见，例如，美国专利6,180,613和6,503,888)。可使用本领域已知的技术来生产高滴度AAV制剂，例如如美国专利号5,658,776中所述。

载体构建体是指包括病毒基因组和转基因的全部或部分的多核苷酸分子。在一些情况中，基因转移可通过例如腺病毒(Ad)或腺相关病毒(AAV)等DNA病毒载体介导。用于基因治疗的方法的其它载体为本领域已知的。例如，本文所公开的构建体可包括甲病毒、疱疹病毒、逆转录病毒、慢病毒、或痘苗病毒。

腺病毒是相对充分表征的病毒组，包括超过50种血清型(参见，例如WO95/27071，其通过引用结合在此)。腺病毒通过应用分子生物学技术而是易处理的并且可不需要整合至宿主细胞基因组中。已构建重组Ad来源的载体，其包括降低野生型病毒的重组或产生的潜力的载体(参见，例如，国际专利公布WO 95/00655和WO 95/11984，其通过引用结合在此)。野生型AAV具有高传染性且能够高度特异性地整合至宿主基因组中(参见，例如Hermonat和Muzyczka 1984Proc.Natl.Acad.Sci.,USA 81:6466-6470和Lebkowski等人.1988Mol.Cell.Biol.8:3988-3996)。

非天然调控序列、基因控制序列、启动子、非编码序列、内含子、或编码序列可被包含在如本文所公开的核酸中。本文进一步预期包含核酸标签或信号序列、或编码蛋白质标签或蛋白质信号序列的核酸。典型地，编码区与一种或多种调控核酸组分可操作地连接。

包含在如本文所公开的核酸中的启动子可以是组织或细胞型特异性启动子、对多个组织或细胞类型具有特异性的启动子、器官特异性启动子、对多种器官具有特异性的启动子、全身型或遍在型启动子、或几乎全身型或遍在型启动子。具有随机型表达、诱导型表达、条件型表达、或以其它方式间断的、多变的、或不可预知的表达的启动子也包含在本公开的范围内。启动子可包含任何上述特征或本领域已知的其它启动子特征。

在临床环境中，可通过多种方法中的任何一种将用于治疗基因的基因递送系统引入至受试者中，各个方法为本领域中所熟悉的。例如，基因递送系统的药物制剂可全身地引入，例如通过静脉内注射，并且将主要由基因递送运载体所提供的转染特异性、由于控制受体基因表达的转录调控序列所引起的细胞型或组织型表达、或其组合而发生靶细胞中的蛋白质的特异性转导。在其它实施方案中，重组基因的初始递送更加受限，同时向受试者中的引入相当局部。例如，基因递送运载体可通过导管(参见美国专利5,328,470)或通过立体定向注射例如任选地注射至小脑延髓池、脑室、腰椎鞘内间隙、直接注射至海马体(例如，Chen等人,PNAS USA91:3054-3057(1994))而引入。在优选实施方案中，早老素表达病毒的递送方法包括静脉内、鞘内、脑室内、脑池内、和立体定向实质内施用。

方法可进一步通过临床前试验而最佳化来实现神经退行性病变、痴呆、突触功能障碍和早老素条件型双敲除(knockout)小鼠和表达FAD突变的早老素-1基因敲入(knockin)小鼠中的分子改变的最佳挽救。

基因治疗构建体的药物制剂可基本上由可接受的稀释剂中的基因递送系统组成，或可包括其中嵌入有基因递送运载体的缓释基质。可选地，完全基因递送系统(completegene delivery system)可自例如逆转录病毒载体等重组细胞中完整产生，药物制剂可包括一种或多种产生基因递送系统的细胞。

递送制剂和药物组合物

在一些实施方案中，用于体内递送至靶组织的如本文所公开的多核苷酸包封在纳米颗粒中或与纳米颗粒缔合。用于纳米颗粒包装的方法在本领域中是已知的，并且在以下中描述：例如，Bose S,等人(Role of Nucleolin in Human Parainfluenza Virus Type3Infection of Human Lung Epithelial Cells.J.Virol.78:8146.2004)；Dong Y等人Poly(d,l-lactide-co-glycolide)/montmorillonite nanoparticles for oraldelivery of anticancer drugs.Biomaterials 26:6068.2005)；Lobenberg R.等人(Improved body distribution of 14C-labelled AZT bound to nanoparticles inrats determined by radioluminography.J Drug Target5:171.1998)；Sakuma S R等人(Mucoadhesion of polystyrene nanoparticles having surface hydrophilicpolymeric chains in the gastrointestinal tract.Int J Pharm 177:161.1999)；Virovic L等人Novel delivery methods for treatment of viral hepatitis:anupdate.Expert Opin Drug Deliv 2:707.2005)；和Zimmermann E等人,Electrolyte-andpH-stabilities of aqueous solid lipid nanoparticle(SLN)dispersions inartificial gastrointestinal media.Eur J Pharm Biopharm 52:203.2001)。在一些实施方案中，在囊泡例如在脂质体中将一种或多种多核苷酸体内递送至靶组织(参见Langer,Science 249:1527-1533(1990)；Treat等人,in Liposomes in the Therapy ofInfectious Disease and Cancer,Lopez-Berestein和Fidler(编辑.),Liss,New York,第353-365页(1989)；Lopez-Berestein,ibid.,第317-327页；参见通常如上所述)。在一些实施方案中，使用基于脂质的纳米颗粒(LNP)；参见，例如，Robinson等人,Mol Ther.2018年8月1日；26(8):2034-2046；US9956271B2。

本方法和组合物可包括含有一种以上的如本文所述的治疗性分子–例如多核苷酸或RNA–的微泡(microvesicle)或其制剂。如本文所用的术语，“微泡”是指源自膜的微泡，其包括一系列细胞外囊泡，包括在正常生理和病理条件下由许多细胞类型分泌的外泌体、微粒和脱落微泡(shed microvesicle)。参见，例如EP2010663B1。本文所描述的方法和组合物可应用至所有尺寸的微泡；在一个实施方案中，30至200nm，在一个实施方案中，30至800nm，在一个实施方案中，至多2um。本文所描述的方法和组合物也可更广泛地应用于所有细胞外囊泡，其为包括外泌体、脱落微泡、肿瘤泌体(oncosome)、核外颗粒体(ectosome)、和逆转录病毒样颗粒的术语。这样的微泡或制剂由本文所述的方法产生。如本文所用的术语，微泡制剂是指从同一细胞来源获得/制备的微泡群。这样的制剂例如在体外通过培养表达本发明的核酸分子的细胞并分离由所述细胞产生的微泡来生产。这样的微泡的分离方法是本领域已知的(Thery等人,Isolation and characterization of exosomes from cell culturesupernatants and biological fluids,in Current Protocols Cell Biology,第3章,322,(John Wiley,2006)；Palmisano等人,(Mol Cell Proteomics.2012August；11(8):230-43)和

等人,((2012)PLoS ONE 7(4):e34653.doi:10.1371/journal.pone.0034653))，本文描述了它们的一些实例。用于从培养中的细胞分离微泡的这样的技术包括但不限于蔗糖梯度纯化/分离和差速离心，并且可被改动以用于本文所描述的方法或组合物。参见，例如EP2010663B1。

在一些实施方案中，通过以足以从培养基中分离细胞的时间(例如，约15分钟)缓慢离心(例如，以约300g)供体细胞的培养基来分离微泡。这将微泡留在上清液中，从而产生微泡制剂。在一个实施方案中，以足以沉淀细胞碎片的时间(例如，约30分钟)更强力地离心(例如，以约16,000g)来自缓慢离心的培养基或上清液。这将微泡留在上清液中，从而产生微泡制剂。在一个实施方案中，对培养基、缓慢离心制剂、或强力离心制剂进行过滤(例如，通过0.22μm过滤器或0.8μm过滤器，借此使微泡穿过过滤器。在一个实施方案中，以将充分沉淀微泡的时间(例如，约80分钟)对滤液进行最终超速离心(例如，以约110,000g)。所得的沉淀(pellet)含有微泡且可重悬于体积为产生对进一步使用有用的浓度的缓冲液中，从而产生微泡制剂。在一个实施方案中，微泡制剂通过蔗糖浓度梯度纯化来制备。在一个实施方案中，用DNAse(例如，DNAse I)和/或RNAse和/或蛋白酶进一步处理微泡来分别消除来自外部的污染DNA、RNA、或蛋白质。在一个实施方案中，微泡制剂含有一种以上的RNAse抑制剂。

包含在微泡制剂中的分子将包括治疗性分子。典型地，制剂中的微泡将为异源性群体，并且各个微泡将含有与制剂中的其它微泡的分子可以相同或可以不同的分子的补体。微泡制剂中的治疗性分子的含量可以定量地或定性地表达。一种这样的方法是将含量表示为微泡制剂内的总分子的百分比。举例来说，如果治疗性分子为mRNA，含量可以表示为微泡制剂的总RNA含量的百分比，或可选地表示为微泡制剂的总mRNA含量的百分比。类似地，如果治疗性分子是蛋白质，则含量可表示为微泡内总蛋白质的百分比。在一个实施方案中，由本文所描述的方法产生的治疗性微泡或其制剂，与获得自对照细胞(获得自未进行科学操作来增加治疗性分子的表达的相同来源的细胞)的微泡相比，含有可检测的、统计学上显著增加的量的治疗性分子。在一个实施方案中，治疗性分子以比获得自对照细胞的微泡中的多至少约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、或90％的量存在。还可以实现更高水平的富集。在一个实施方案中，治疗性分子以比对照细胞微泡多至少2倍存在于微泡或其制剂中。还可获得更高倍的富集(例如，3、4、5、6、7、8、9或10倍)。

在一个实施方案中，相对高百分比的微泡内容物为治疗性分子(例如，通过过表达或将分子特异性靶向微泡来实现)。在一个实施方案中，治疗性分子的微泡含量为总(类似)分子含量的至少约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％或90％(例如，治疗性分子为mRNA且为微泡的总mRNA含量的约10％)。还可实现更高水平的富集。在一个实施方案中，治疗性分子以比所有其它这样(类似)分子多至少2倍存在于微泡或其制剂中。还可获得更高倍数的富集(例如，3、4、5、6、7、8、9或10倍)。

实施例

在以下实施例中进一步描述本发明，其不限制权利要求中描述的本发明的范围。

实施例1：γ-分泌酶活性在具有各种PS基因型的MEF中的剂量依赖性挽救：PS1^+/+、PS1^L435F/+、PS1^+/-、PS1^L435F/L435F、PS1^-/-和PS1^-/-；PS2^-/-

为了确定降低的与PSEN1突变相关的γ-分泌酶活性是否可通过引入野生型(WT)hPS1来校正，衍生出来自携带各种PS基因型的胚胎的原代MEF：PS1^+/+、PS1^L435F/+、PS1^+/-、PS1^L435F/L435F、PS1^-/-和PS1^-/-；PS2^-/-(DKO)。由CMV-NΔE瞬时转染永生化MEF，且通过测定NICD和PS1 NTF/CTF的水平来评价γ-分泌酶活性。NICD水平以PS1剂量敏感性方式降低，且在DKO细胞中不可检测(图1A)。NICD水平在PS1^L435F/L435F MEF(“L435F KI/KI”MEF)和PS1^-/-MEF中降低但是可检测的(图1A)，然而通过使用L435F KI/KI和PS1^-/-胚胎脑的体外γ-分泌酶测定无法检测到从头NICD产生(Xia等人,Neuron.2015年3月4日；85(5):967-81)。不希望受任何特定理论的束缚，申请人主张这可能是由于PS2在胚胎脑中正常表达的水平相对于MEF较低，导致在L435F KI/KI和PS1^-/-脑中的整体PS活性相对于MEF较低。为了试验该假设，在PS1^L435F/+；PS2^-/-MEF中测定γ-分泌酶活性并与PS1^L435F/+MEF相比较。与PS1^L435F/+MEF相比，γ-分泌酶活性在PS1^L435F/+；PS2^-/-MEF中为较低的(图1B)。

为了确定在各种PS突变MEF中的受损的γ-分泌酶活性是否可以通过引入WT hPS1而被挽救，将各种量(0、20、40、80ng)的野生型hPS1cDNA(pCI-hPS1)同CMV-NΔE一起转染至MEF。应注意地，将增加量的pC1-hPS1转染至MEF导致突变(PS1^L435F/+、PS1^L435F/+；PS2^-/-和DKO)MEF中的PS1蛋白的累积以及PS1 NTF和NICD的水平恢复(图1B)。这些结果表明外源WT hPS1可挽救在各种PS突变MEF中受损的γ-分泌酶活性。

实施例2：优化的野生型人PS1体外表达系统的开发

方法

细胞培养和转染

将缺少内源性PS1和PS2的Psen-空小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)维持在补充有10％FBS的DMEM中，并根据说明、使用Lipofectamine 3000，在具有或不具有γ-分泌酶报告基因CMV-NΔE的情况下用表达野生型内源性hPSEN1cDNA(wt_PS1)或密码子优化的hPSEN1 cDNA(opti_PS1)的质粒瞬时转染。在24小时时间点处收集细胞裂解物。

蛋白免疫印迹

对细胞裂解物进行SDS-PAGE，并将蛋白质转移至硝酸纤维素膜上。在TBST/5％脱脂奶粉中封闭后，将膜与一抗一起孵育过夜。为了控制上样，进行膜再生(strip)并用抗β-肌动蛋白抗体进行重新探针检测(re-probed)。使用ImageJ软件定量条带强度，并将结果归一化为β-肌动蛋白水平。使用的抗体包括大鼠抗PS1-NTF、兔抗裂解的Notch(Val1744)(NICD)和小鼠抗β-肌动蛋白。

结果

首先，我们在Psen-null MEF中表达wt_hPS1或opti_hPS1，以消除内源性PS1或PS2的任何贡献。当用增加的量的编码wt_hPS1或opti_hPS1的载体转染Psen-null MEF时，我们检测到PS1 NTF的水平逐渐增加。相对于wt_hPS1，优化的hPS1始终表达更多的PS1(图3A-3B)。

作为用于γ-分泌酶介导的切割的底物的NotchΔE与wt_hPS1或opti_hPS1共表达以直接测定γ-分泌酶活性。Notch被γ-分泌酶切割释放Notch胞内结构域(NICD)。我们评价了产生NICD的γ-分泌酶介导的NotchΔE切割作为γ-分泌酶活性的函数的剂量反应关系。NICD的产生在转染的PS1载体量较低时呈线性增加，但在较高水平下接近饱和。更重要的是，对于各个点而言，优化的hPS1具有更高的γ-分泌酶活性(图3)。

使用ELISA在培养基中测定分泌的内源性Aβ40和42水平。另一种γ-分泌酶底物APP C99用于通过将CMV-C99瞬时转染至各MEF细胞系中，连同增加量的pCI-hPS1opti来评价γ-分泌酶活性。建立了原代和永生化C410Y、E280A和D385A KI/+和KI/KI MEF以及PS1KI/+；PS2-/-MEF。确定了KI/+和KI/KI MEF是否再现了与KI/+和KI/KI大脑相似的表型，并且通过NICD和AICD产生来测定引入WT hPS1是否可以以剂量依赖性方式恢复降低的γ-分泌酶活性。用每个基因型的多个独立的MEF细胞系重复实验。进行功效分析以确定完成研究所需的样本大小和独立实验的数量。

实施例3：优化的野生型人PS1体内表达系统的开发

开发出在CAMK2A启动子的控制下组成型或诱导型表达人PSEN1野生型cDNA的转基因小鼠。为了最大化PS1的产生和活性，对hPS1进行密码子优化(hPS1opti)，然后通过将增加量的pCI-hPS1或pCI-hPS1opti和CMV-NΔE共转染至PS DKO MEF而比较在内源性hPS1和hPS1opti cDNA之间的PS1水平和γ-分泌酶活性。相对于内源性hPS1 cDNA，hPS1opti cDNA引起更高水平的PS1 NTF和更高的γ-分泌酶活性，通过NICD产生来测定(图3)。

实施例4：确定hPS1opti的出生后递送(postnatal delivery)是否可以挽救PScDKO小鼠中的表型

已制备表2中列出的载体。鉴定了在注射后4和8周赋予最高GFP染色的载体。为此，在P0-2注射PS cDKO幼崽(批次–10个繁殖笼：F/F；-/-；Cre/Cre与F/F；-/-杂交)。

表2.载体列表

UID	描述
		01	AAV9/mCaMKII-内含子-hPS1opti-T2A-EGFP-SV40pA
02	AAV9/hCaMKII-内含子-hPS1opti-T2A-EGFP-SV40pA
		03	AAV9/hCaMKII-内含子-EGFP-SV40pA
04	AAV9/hSynI-内含子-hPS1opti-T2A-EGFP-SV40pA
		05	AAV9/hCaMKII-内含子-hPS1opti-SV40pA
06	AAV9/hSynI-内含子-hPS1opti-SV40A

选择AAV–例如，AAV9/hCaMKII-内含子-hPS1opti-T2A-EGFP-SV40pA或AAV9/hCaMKII-内含子-EGFP-SV40pA–并通过ICV在P0-P2注射至PS cDKO小鼠中。在第4和8周龄时进行蛋白免疫印迹分析，以确定PS1、APP、Nicastrin、PEN-2的水平；对照和PS cDKO小鼠在第4周和第8周作为另外的对照包括在内。在8周龄时测定γ分泌酶活性、NICD产生、和Aβ水平(通过皮质裂解物的ELISA)。此外，在2月龄时进行电生理分析–例如，谢氏侧支(Schaffercollateral)、PPF、FF和LTP–，并在2-3月龄时进行行为分析–例如，水迷宫(watermaze)。在6月龄时进行神经病变分析(Neuropath analysis)。

实施例5：确定hPS1opti的出生后递送是否可以挽救由FAD突变引起的表型

产生表3中列出的小鼠，并使用测定PS1和APP水平的蛋白免疫印迹分析；体外γ-分泌酶活性检验；ELISA，在6月龄时的电生理分析；在6和12月龄时的行为分析；在6、12和18月龄时的神经病变分析来进行分析。

表3.小鼠基因型列表

实施例6：确定在成人大脑中递送的AAV9/hPS1opti是否可以挽救由体内PS功能丧失(PS cDKO、FAD KI)引起的表型

如表2中所列出地制备载体，并通过CSF内(intra-CSF)、通过ICM使用50ulHamilton注射器将10ul注射液递送至小脑延髓池1x10¹²vg)、通过脑实质内递送、或通过鞘内递送使用10ul 3.3x10¹¹vg腰椎穿刺，来将其注射至小鼠。研究的小鼠将包括(i)PS cDKO；(ii)KI/+；(iii)KI/+；PS2-/-；和(iv)KI/fPS1；PS2-/-；Cre。我们将对小鼠进行以下分析：测定PS1和APP水平的蛋白免疫印迹分析；体外γ-分泌酶检验；Aβ肽的ELISA测定，在6月龄时的电生理分析；在6和12月龄时的行为分析；在6、12和18月龄时的神经病变分析。

其它实施方案

应理解，即使已结合本发明的详细的说明来描述本发明，前述说明旨在为示例性的且不旨在限制本发明的范围，本发明的范围由所附权利要求的范围来界定。其它方面、优点、和修改在所附权利要求的范围内。

序列表

<110> 布里格姆妇女医院（The Brigham and Women`s Hospital, Inc.）

总医院公司（The General Hospital Corporation）

<120> 用于阿尔茨海默症的基因治疗

<130> 29618-0234WO1

<150> 62/852,716

<151> 2019-05-24

<160> 11

<170> PatentIn 版本 3.5

<210> 1

<211> 6107

<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 1

aaatgacgac aacggtgagg gttctcgggc ggggcctggg acaggcagct ccggggtccg 60

cggtttcaca tcggaaacaa aacagcggct ggtctggaag gaacctgagc tacgagccgc 120

ggcggcagcg gggcggcggg gaagcgtata cctaatctgg gagcctgcaa gtgacaacag 180

cctttgcggt ccttagacag cttggcctgg aggagaacac atgaaagaaa gaacctcaag 240

aggctttgtt ttctgtgaaa cagtatttct atacagttgc tccaatgaca gagttacctg 300

caccgttgtc ctacttccag aatgcacaga tgtctgagga caaccacctg agcaatactg 360

tacgtagcca gaatgacaat agagaacggc aggagcacaa cgacagacgg agccttggcc 420

accctgagcc attatctaat ggacgacccc agggtaactc ccggcaggtg gtggagcaag 480

atgaggaaga agatgaggag ctgacattga aatatggcgc caagcatgtg atcatgctct 540

ttgtccctgt gactctctgc atggtggtgg tcgtggctac cattaagtca gtcagctttt 600

atacccggaa ggatgggcag ctaatctata ccccattcac agaagatacc gagactgtgg 660

gccagagagc cctgcactca attctgaatg ctgccatcat gatcagtgtc attgttgtca 720

tgactatcct cctggtggtt ctgtataaat acaggtgcta taaggtcatc catgcctggc 780

ttattatatc atctctattg ttgctgttct ttttttcatt catttacttg ggggaagtgt 840

ttaaaaccta taacgttgct gtggactaca ttactgttgc actcctgatc tggaattttg 900

gtgtggtggg aatgatttcc attcactgga aaggtccact tcgactccag caggcatatc 960

tcattatgat tagtgccctc atggccctgg tgtttatcaa gtacctccct gaatggactg 1020

cgtggctcat cttggctgtg atttcagtat atgatttagt ggctgttttg tgtccgaaag 1080

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agaggatgga gagaacactg cccagtggag aagccaggag aacgaggagg acggtgagga 600

ggaccctgac cgctatgtct gtagtggggt tcccgggcgg ccgccaggcc tggaggaaga 660

gctgaccctc aaatacggag cgaagcacgt gatcatgctg tttgtgcctg tcactctgtg 720

catgatcgtg gtggtagcca ccatcaagtc tgtgcgcttc tacacagaga agaatggaca 780

gctcatctac acgccattca ctgaggacac accctcggtg ggccagcgcc tcctcaactc 840

cgtgctgaac accctcatca tgatcagcgt catcgtggtt atgaccatct tcttggtggt 900

gctctacaag taccgctgct acaagttcat ccatggctgg ttgatcatgt cttcactgat 960

gctgctgttc ctcttcacct atatctacct tggggaagtg ctcaagacct acaatgtggc 1020

catggactac cccaccctct tgctgactgt ctggaacttc ggggcagtgg gcatggtgtg 1080

catccactgg aagggccctc tggtgctgca gcaggcctac ctcatcatga tcagtgcgct 1140

catggcccta gtgttcatca agtacctccc agagtggtcc gcgtgggtca tcctgggcgc 1200

catctctgtg tatgatctcg tggctgtgct gtgtcccaaa gggcctctga gaatgctggt 1260

agaaactgcc caggagagaa atgagcccat attccctgcc ctgatatact catctgccat 1320

ggtgtggacg gttggcatgg cgaagctgga cccctcctct cagggtgccc tccagctccc 1380

ctacgacccg gagatggaag actcctatga cagttttggg gagccttcat accccgaagt 1440

ctttgagcct cccttgactg gctacccagg ggaggagctg gaggaagagg aggaaagggg 1500

cgtgaagctt ggcctcgggg acttcatctt ctacagtgtg ctggtgggca aggcggctgc 1560

cacgggcagc ggggactgga ataccacgct ggcctgcttc gtggccatcc tcattggctt 1620

gtgtctgacc ctcctgctgc ttgctgtgtt caagaaggcg ctgcccgccc tccccatctc 1680

catcacgttc gggctcatct tttacttctc cacggacaac ctggtgcggc cgttcatgga 1740

caccctggcc tcccatcagc tctacatctg agggacatgg tgtgccacag gctgcaagct 1800

gcagggaatt ttcattggat gcagttgtat agttttacac tctagtgcca tatattttta 1860

agacttttct ttccttaaaa aataaagtac gtgtttactt ggtgaggagg aggcagaacc 1920

agctctttgg tgccagctgt ttcatcacca gactttggct cccgctttgg ggagcgcctc 1980

gcttcacgga caggaagcac agcaggttta tccagatgaa ctgagaaggt cagattaggg 2040

cggggagaag agcatccggc atgagggctg agatgcgcaa agagtgtgct cgggagtggc 2100

ccctggcacc tgggtgctct ggctggagag gaaaagccag ttccctacga ggagtgttcc 2160

caatgctttg tccatgatgt ccttgttatt ttattgcctt tagaaactga gtcctgttct 2220

tgttacggca gtcacactgc tgggaagtgg cttaatagta atatcaataa atagatgagt 2280

cctgttagaa tcttgaaaa 2299

<210> 5

<211> 467

<212> PRT

<213> 智人

<400> 5

Met Thr Glu Leu Pro Ala Pro Leu Ser Tyr Phe Gln Asn Ala Gln Met

1 5 10 15

Ser Glu Asp Asn His Leu Ser Asn Thr Val Arg Ser Gln Asn Asp Asn

20 25 30

Arg Glu Arg Gln Glu His Asn Asp Arg Arg Ser Leu Gly His Pro Glu

35 40 45

Pro Leu Ser Asn Gly Arg Pro Gln Gly Asn Ser Arg Gln Val Val Glu

50 55 60

Gln Asp Glu Glu Glu Asp Glu Glu Leu Thr Leu Lys Tyr Gly Ala Lys

65 70 75 80

His Val Ile Met Leu Phe Val Pro Val Thr Leu Cys Met Val Val Val

85 90 95

Val Ala Thr Ile Lys Ser Val Ser Phe Tyr Thr Arg Lys Asp Gly Gln

100 105 110

Leu Ile Tyr Thr Pro Phe Thr Glu Asp Thr Glu Thr Val Gly Gln Arg

115 120 125

Ala Leu His Ser Ile Leu Asn Ala Ala Ile Met Ile Ser Val Ile Val

130 135 140

Val Met Thr Ile Leu Leu Val Val Leu Tyr Lys Tyr Arg Cys Tyr Lys

145 150 155 160

Val Ile His Ala Trp Leu Ile Ile Ser Ser Leu Leu Leu Leu Phe Phe

165 170 175

Phe Ser Phe Ile Tyr Leu Gly Glu Val Phe Lys Thr Tyr Asn Val Ala

180 185 190

Val Asp Tyr Ile Thr Val Ala Leu Leu Ile Trp Asn Phe Gly Val Val

195 200 205

Gly Met Ile Ser Ile His Trp Lys Gly Pro Leu Arg Leu Gln Gln Ala

210 215 220

Tyr Leu Ile Met Ile Ser Ala Leu Met Ala Leu Val Phe Ile Lys Tyr

225 230 235 240

Leu Pro Glu Trp Thr Ala Trp Leu Ile Leu Ala Val Ile Ser Val Tyr

245 250 255

Asp Leu Val Ala Val Leu Cys Pro Lys Gly Pro Leu Arg Met Leu Val

260 265 270

Glu Thr Ala Gln Glu Arg Asn Glu Thr Leu Phe Pro Ala Leu Ile Tyr

275 280 285

Ser Ser Thr Met Val Trp Leu Val Asn Met Ala Glu Gly Asp Pro Glu

290 295 300

Ala Gln Arg Arg Val Ser Lys Asn Ser Lys Tyr Asn Ala Glu Ser Thr

305 310 315 320

Glu Arg Glu Ser Gln Asp Thr Val Ala Glu Asn Asp Asp Gly Gly Phe

325 330 335

Ser Glu Glu Trp Glu Ala Gln Arg Asp Ser His Leu Gly Pro His Arg

340 345 350

Ser Thr Pro Glu Ser Arg Ala Ala Val Gln Glu Leu Ser Ser Ser Ile

355 360 365

Leu Ala Gly Glu Asp Pro Glu Glu Arg Gly Val Lys Leu Gly Leu Gly

370 375 380

Asp Phe Ile Phe Tyr Ser Val Leu Val Gly Lys Ala Ser Ala Thr Ala

385 390 395 400

Ser Gly Asp Trp Asn Thr Thr Ile Ala Cys Phe Val Ala Ile Leu Ile

405 410 415

Gly Leu Cys Leu Thr Leu Leu Leu Leu Ala Ile Phe Lys Lys Ala Leu

420 425 430

Pro Ala Leu Pro Ile Ser Ile Thr Phe Gly Leu Val Phe Tyr Phe Ala

435 440 445

Thr Asp Tyr Leu Val Gln Pro Phe Met Asp Gln Leu Ala Phe His Gln

450 455 460

Phe Tyr Ile

465

<210> 6

<211> 463

<212> PRT

<213> 智人

<400> 6

Met Thr Glu Leu Pro Ala Pro Leu Ser Tyr Phe Gln Asn Ala Gln Met

1 5 10 15

Ser Glu Asp Asn His Leu Ser Asn Thr Asn Asp Asn Arg Glu Arg Gln

20 25 30

Glu His Asn Asp Arg Arg Ser Leu Gly His Pro Glu Pro Leu Ser Asn

35 40 45

Gly Arg Pro Gln Gly Asn Ser Arg Gln Val Val Glu Gln Asp Glu Glu

50 55 60

Glu Asp Glu Glu Leu Thr Leu Lys Tyr Gly Ala Lys His Val Ile Met

65 70 75 80

Leu Phe Val Pro Val Thr Leu Cys Met Val Val Val Val Ala Thr Ile

85 90 95

Lys Ser Val Ser Phe Tyr Thr Arg Lys Asp Gly Gln Leu Ile Tyr Thr

100 105 110

Pro Phe Thr Glu Asp Thr Glu Thr Val Gly Gln Arg Ala Leu His Ser

115 120 125

Ile Leu Asn Ala Ala Ile Met Ile Ser Val Ile Val Val Met Thr Ile

130 135 140

Leu Leu Val Val Leu Tyr Lys Tyr Arg Cys Tyr Lys Val Ile His Ala

145 150 155 160

Trp Leu Ile Ile Ser Ser Leu Leu Leu Leu Phe Phe Phe Ser Phe Ile

165 170 175

Tyr Leu Gly Glu Val Phe Lys Thr Tyr Asn Val Ala Val Asp Tyr Ile

180 185 190

Thr Val Ala Leu Leu Ile Trp Asn Phe Gly Val Val Gly Met Ile Ser

195 200 205

Ile His Trp Lys Gly Pro Leu Arg Leu Gln Gln Ala Tyr Leu Ile Met

210 215 220

Ile Ser Ala Leu Met Ala Leu Val Phe Ile Lys Tyr Leu Pro Glu Trp

225 230 235 240

Thr Ala Trp Leu Ile Leu Ala Val Ile Ser Val Tyr Asp Leu Val Ala

245 250 255

Val Leu Cys Pro Lys Gly Pro Leu Arg Met Leu Val Glu Thr Ala Gln

260 265 270

Glu Arg Asn Glu Thr Leu Phe Pro Ala Leu Ile Tyr Ser Ser Thr Met

275 280 285

Val Trp Leu Val Asn Met Ala Glu Gly Asp Pro Glu Ala Gln Arg Arg

290 295 300

Val Ser Lys Asn Ser Lys Tyr Asn Ala Glu Ser Thr Glu Arg Glu Ser

305 310 315 320

Gln Asp Thr Val Ala Glu Asn Asp Asp Gly Gly Phe Ser Glu Glu Trp

325 330 335

Glu Ala Gln Arg Asp Ser His Leu Gly Pro His Arg Ser Thr Pro Glu

340 345 350

Ser Arg Ala Ala Val Gln Glu Leu Ser Ser Ser Ile Leu Ala Gly Glu

355 360 365

Asp Pro Glu Glu Arg Gly Val Lys Leu Gly Leu Gly Asp Phe Ile Phe

370 375 380

Tyr Ser Val Leu Val Gly Lys Ala Ser Ala Thr Ala Ser Gly Asp Trp

385 390 395 400

Asn Thr Thr Ile Ala Cys Phe Val Ala Ile Leu Ile Gly Leu Cys Leu

405 410 415

Thr Leu Leu Leu Leu Ala Ile Phe Lys Lys Ala Leu Pro Ala Leu Pro

420 425 430

Ile Ser Ile Thr Phe Gly Leu Val Phe Tyr Phe Ala Thr Asp Tyr Leu

435 440 445

Val Gln Pro Phe Met Asp Gln Leu Ala Phe His Gln Phe Tyr Ile

450 455 460

<210> 7

<211> 448

<212> PRT

<213> 智人

<400> 7

Met Leu Thr Phe Met Ala Ser Asp Ser Glu Glu Glu Val Cys Asp Glu

1 5 10 15

Arg Thr Ser Leu Met Ser Ala Glu Ser Pro Thr Pro Arg Ser Cys Gln

20 25 30

Glu Gly Arg Gln Gly Pro Glu Asp Gly Glu Asn Thr Ala Gln Trp Arg

35 40 45

Ser Gln Glu Asn Glu Glu Asp Gly Glu Glu Asp Pro Asp Arg Tyr Val

50 55 60

Cys Ser Gly Val Pro Gly Arg Pro Pro Gly Leu Glu Glu Glu Leu Thr

65 70 75 80

Leu Lys Tyr Gly Ala Lys His Val Ile Met Leu Phe Val Pro Val Thr

85 90 95

Leu Cys Met Ile Val Val Val Ala Thr Ile Lys Ser Val Arg Phe Tyr

100 105 110

Thr Glu Lys Asn Gly Gln Leu Ile Tyr Thr Pro Phe Thr Glu Asp Thr

115 120 125

Pro Ser Val Gly Gln Arg Leu Leu Asn Ser Val Leu Asn Thr Leu Ile

130 135 140

Met Ile Ser Val Ile Val Val Met Thr Ile Phe Leu Val Val Leu Tyr

145 150 155 160

Lys Tyr Arg Cys Tyr Lys Phe Ile His Gly Trp Leu Ile Met Ser Ser

165 170 175

Leu Met Leu Leu Phe Leu Phe Thr Tyr Ile Tyr Leu Gly Glu Val Leu

180 185 190

Lys Thr Tyr Asn Val Ala Met Asp Tyr Pro Thr Leu Leu Leu Thr Val

195 200 205

Trp Asn Phe Gly Ala Val Gly Met Val Cys Ile His Trp Lys Gly Pro

210 215 220

Leu Val Leu Gln Gln Ala Tyr Leu Ile Met Ile Ser Ala Leu Met Ala

225 230 235 240

Leu Val Phe Ile Lys Tyr Leu Pro Glu Trp Ser Ala Trp Val Ile Leu

245 250 255

Gly Ala Ile Ser Val Tyr Asp Leu Val Ala Val Leu Cys Pro Lys Gly

260 265 270

Pro Leu Arg Met Leu Val Glu Thr Ala Gln Glu Arg Asn Glu Pro Ile

275 280 285

Phe Pro Ala Leu Ile Tyr Ser Ser Ala Met Val Trp Thr Val Gly Met

290 295 300

Ala Lys Leu Asp Pro Ser Ser Gln Gly Ala Leu Gln Leu Pro Tyr Asp

305 310 315 320

Pro Glu Met Glu Glu Asp Ser Tyr Asp Ser Phe Gly Glu Pro Ser Tyr

325 330 335

Pro Glu Val Phe Glu Pro Pro Leu Thr Gly Tyr Pro Gly Glu Glu Leu

340 345 350

Glu Glu Glu Glu Glu Arg Gly Val Lys Leu Gly Leu Gly Asp Phe Ile

355 360 365

Phe Tyr Ser Val Leu Val Gly Lys Ala Ala Ala Thr Gly Ser Gly Asp

370 375 380

Trp Asn Thr Thr Leu Ala Cys Phe Val Ala Ile Leu Ile Gly Leu Cys

385 390 395 400

Leu Thr Leu Leu Leu Leu Ala Val Phe Lys Lys Ala Leu Pro Ala Leu

405 410 415

Pro Ile Ser Ile Thr Phe Gly Leu Ile Phe Tyr Phe Ser Thr Asp Asn

420 425 430

Leu Val Arg Pro Phe Met Asp Thr Leu Ala Ser His Gln Leu Tyr Ile

435 440 445

<210> 8

<211> 447

<212> PRT

<213> 智人

<400> 8

Met Leu Thr Phe Met Ala Ser Asp Ser Glu Glu Glu Val Cys Asp Glu

1 5 10 15

Arg Thr Ser Leu Met Ser Ala Glu Ser Pro Thr Pro Arg Ser Cys Gln

20 25 30

Glu Gly Arg Gln Gly Pro Glu Asp Gly Glu Asn Thr Ala Gln Trp Arg

35 40 45

Ser Gln Glu Asn Glu Glu Asp Gly Glu Glu Asp Pro Asp Arg Tyr Val

50 55 60

Cys Ser Gly Val Pro Gly Arg Pro Pro Gly Leu Glu Glu Glu Leu Thr

65 70 75 80

Leu Lys Tyr Gly Ala Lys His Val Ile Met Leu Phe Val Pro Val Thr

85 90 95

Leu Cys Met Ile Val Val Val Ala Thr Ile Lys Ser Val Arg Phe Tyr

100 105 110

Thr Glu Lys Asn Gly Gln Leu Ile Tyr Thr Pro Phe Thr Glu Asp Thr

115 120 125

Pro Ser Val Gly Gln Arg Leu Leu Asn Ser Val Leu Asn Thr Leu Ile

130 135 140

Met Ile Ser Val Ile Val Val Met Thr Ile Phe Leu Val Val Leu Tyr

145 150 155 160

Lys Tyr Arg Cys Tyr Lys Phe Ile His Gly Trp Leu Ile Met Ser Ser

165 170 175

Leu Met Leu Leu Phe Leu Phe Thr Tyr Ile Tyr Leu Gly Glu Val Leu

180 185 190

Lys Thr Tyr Asn Val Ala Met Asp Tyr Pro Thr Leu Leu Leu Thr Val

195 200 205

Trp Asn Phe Gly Ala Val Gly Met Val Cys Ile His Trp Lys Gly Pro

210 215 220

Leu Val Leu Gln Gln Ala Tyr Leu Ile Met Ile Ser Ala Leu Met Ala

225 230 235 240

Leu Val Phe Ile Lys Tyr Leu Pro Glu Trp Ser Ala Trp Val Ile Leu

245 250 255

Gly Ala Ile Ser Val Tyr Asp Leu Val Ala Val Leu Cys Pro Lys Gly

260 265 270

Pro Leu Arg Met Leu Val Glu Thr Ala Gln Glu Arg Asn Glu Pro Ile

275 280 285

Phe Pro Ala Leu Ile Tyr Ser Ser Ala Met Val Trp Thr Val Gly Met

290 295 300

Ala Lys Leu Asp Pro Ser Ser Gln Gly Ala Leu Gln Leu Pro Tyr Asp

305 310 315 320

Pro Glu Met Glu Asp Ser Tyr Asp Ser Phe Gly Glu Pro Ser Tyr Pro

325 330 335

Glu Val Phe Glu Pro Pro Leu Thr Gly Tyr Pro Gly Glu Glu Leu Glu

340 345 350

Glu Glu Glu Glu Arg Gly Val Lys Leu Gly Leu Gly Asp Phe Ile Phe

355 360 365

Tyr Ser Val Leu Val Gly Lys Ala Ala Ala Thr Gly Ser Gly Asp Trp

370 375 380

Asn Thr Thr Leu Ala Cys Phe Val Ala Ile Leu Ile Gly Leu Cys Leu

385 390 395 400

Thr Leu Leu Leu Leu Ala Val Phe Lys Lys Ala Leu Pro Ala Leu Pro

405 410 415

Ile Ser Ile Thr Phe Gly Leu Ile Phe Tyr Phe Ser Thr Asp Asn Leu

420 425 430

Val Arg Pro Phe Met Asp Thr Leu Ala Ser His Gln Leu Tyr Ile

435 440 445

<210> 9

<211> 1414

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 密码子优化的智人早老素1 (PSEN1) cDNA

<400> 9

cgacgccacc atgacagaac tgcctgcccc cctgagctac ttccagaacg cccagatgag 60

cgaggacaac cacctgagca acaccgtgcg gagccagaac gacaacagag agcggcagga 120

acacaacgac aggcggagcc tgggacaccc tgagcccctg tctaatggca gaccccaggg 180

caacagcaga caggtggtgg aacaggacga ggaagaggac gaagaactga ccctgaagta 240

cggcgccaag cacgtgatca tgctgttcgt gcccgtgacc ctgtgcatgg tcgtggtggt 300

ggccacaatc aagagcgtgt ccttctacac ccggaaggac ggccagctga tctacacccc 360

cttcaccgag gacaccgaga cagtgggaca gagagccctg cacagcatcc tgaacgccgc 420

catcatgatc agcgtgatcg tcgtgatgac catcctgctg gtggtgctgt acaagtaccg 480

gtgctacaaa gtgatccacg cctggctgat catcagcagc ctgctgctgc tgttcttctt 540

tagcttcatc tacctgggcg aggtgttcaa gacctacaac gtggccgtgg actacatcac 600

cgtggccctg ctgatctgga acttcggcgt cgtgggcatg atctccatcc actggaaggg 660

ccccctgaga ctgcagcagg cctacctgat tatgatctcc gccctgatgg ccctggtgtt 720

catcaagtac ctgcccgagt ggaccgcttg gctgatcctg gccgtgatct ccgtgtacga 780

cctggtggcc gtgctgtgcc ctaagggacc tctgcggatg ctggtggaaa ccgcccagga 840

acggaacgag acactgttcc ctgccctgat ctactccagc acaatggtgt ggctcgtgaa 900

catggccgag ggcgatcctg aggcccagcg gagagtgtcc aagaactcca agtacaacgc 960

cgagagcacc gagcgcgaga gccaggatac agtggccgag aatgacgacg gcggcttcag 1020

cgaggaatgg gaggcccaga gagatagcca cctgggccct cacagaagca cccctgaatc 1080

tagagccgcc gtgcaggaac tgagcagctc cattctggcc ggcgaggacc ccgaagaaag 1140

aggcgtgaaa ctgggcctgg gcgacttcat cttctacagc gtgctcgtgg gcaaggccag 1200

cgccacagct agcggcgact ggaacaccac aatcgcctgc ttcgtggcca tcctgatcgg 1260

cctgtgtctg acacttctgc tgctggccat cttcaagaag gccctgcccg ccctgcctat 1320

cagcatcacc ttcggcctgg tgttttactt cgccaccgac tacctggtgc agcccttcat 1380

ggaccagctg gccttccacc agttctacat ctga 1414

<210> 10

<211> 10

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 人Kozak共有序列

<220>

<221> misc_feature

<222> (4)..(4)

<223> n=g或a

<400> 10

gccnccatgg 10

<210> 11

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> hPSEN1opti Kozak seq

<400> 11

cgacgccacc atgacagaac tgc 23

Claims

1.一种组合物，其包含编码人早老素1(PSEN1)的人密码子优化的多核苷酸。

2.根据权利要求1所述的组合物，其中所述编码人PSEN1的人密码子优化的多核苷酸以相对于野生型优化了至少一个密码子的方式与SEQ ID NO:9具有至少95％同一性。

3.根据权利要求1所述的组合物，其中所述编码人PSEN1的人密码子优化的多核苷酸包含SEQ ID NO:9。

4.根据权利要求1至3任一项所述的组合物，其与外泌体或基于脂质的纳米颗粒(LNP)缔合(例如，使用外泌体或基于脂质的纳米颗粒(LNP)配制用于递送)。

5.一种组合物，其包含用于在细胞中表达人PSEN1的载体，所述载体包含根据权利要求1至3任一项所述的人密码子优化的多核苷酸，所述人密码子优化的多核苷酸与启动子可操作地连接。

6.根据权利要求5所述的组合物，其中所述载体是病毒载体。

7.根据权利要求6所述的组合物，其中所述病毒载体是腺相关病毒(AAV)载体。

8.根据权利要求7所述的组合物，其中所述AAV载体是AAV9或AAVrh10。

9.根据权利要求6所述的组合物，其中所述病毒载体是慢病毒载体或逆转录病毒载体。

10.根据权利要求5所述的组合物，其中所述启动子是泛神经元启动子。

11.根据权利要求10所述的组合物，其中所述泛神经元启动子是突触蛋白I启动子。

12.根据权利要求5所述的组合物，其中所述启动子是神经元亚型特异性启动子。

13.根据权利要求12所述的组合物，其中所述神经元亚型特异性启动子是α-钙/钙调蛋白激酶2A启动子。

14.一种治疗神经退行性疾病、病症或病况的方法，所述方法包括向有治疗需要的人受试者施用根据权利要求1至13任一项所述的组合物，其中所述受试者在PSEN1的至少一个等位基因中具有一个以上的突变、优选编码显性阴性PSEN1蛋白同种型的突变。

15.根据权利要求14所述的方法，其中所述神经退行性疾病、病症或病况是阿尔茨海默症。

16.根据权利要求15所述的方法，其中所述阿尔茨海默症是家族性阿尔茨海默症。

17.根据权利要求15或16所述的方法，其中所述受试者在PSEN1基因中具有E280A、Y115H、L166P、C410Y、Δex9、G548、D257A、R278I、L435F、G384A或L392V突变，或在PSEN1基因中具有N141I、G206A、H163R、A79V、S290C、A260P、A426P、A431E、R269H、L271V、C1410Y、E280G、P264L、E185D、L235V或M146V突变。

18.根据权利要求15所述的方法，其中所述阿尔茨海默症是散发性阿尔茨海默症。

19.根据权利要求15所述的方法，其中所述阿尔茨海默症是晚发性或早发性阿尔茨海默症。

20.根据权利要求14所述的方法，其中所述神经退行性疾病、病症或病况是额颞叶痴呆、记忆丧失、认知下降或认知损害。

21.根据权利要求20所述的方法，其中所述认知损害是轻度认知损害(MCI)。

22.根据权利要求14至20任一项所述的方法，其中将所述组合物施用至有治疗需要的受试者的CNS。

23.根据权利要求22所述的方法，其中将编码PSEN1和/或PSEN2基因或mRNA的多核苷酸通过静脉内递送，通过鞘内递送，通过脑池内递送，通过脑室内递送，或通过立体定向注射至脑的特定区域、任选地至小脑延髓池、脑室、或腰椎鞘内间隙，或通过直接注射至海马体或皮质区，而施用至CNS。