CN114129549A - 酚类化合物在鱼类病害防控中的应用 - Google Patents
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Abstract
Description
技术领域
本发明属于生物技术领域,涉及水产养殖的药物,具体涉及一类可以在鱼类病害防控中应用的酚类化合物。
背景技术
水产养殖的兴起被认为是上个世纪全球粮食生产中最深刻的变化之一,也是满足当今人类需求的最环境友好和可持续发展的产业之一。然而,我国水产养殖每年因病害造成的直接经济损失达500多亿元,严重影响了我国水产业的发展。
大口黑鲈弹状病毒病是目前大口黑鲈养殖主要的病害之一,该病主要危害的对象是大口黑鲈苗种,病原为大口黑鲈弹状病毒(Micropterus salmoides rhabdovirus,MSRV),属于弹状病毒科水泡病毒属。患病鱼典型的临床症状为昏睡、螺旋式或不规则的游泳、腹部肿胀、烂身、烂鳍、停止摄食,濒死鱼在水面漫游,严重者体色发黑发病。早期可见肌肉出血,病情严重的出现眼球突出,从下颌到腹部有出血。近年来,此病已在加州鲈鱼养殖中广泛流行,严重时80%池塘发病,死亡率短时间内可高达90%,给加州鲈养殖带来严重的经济损失。
鲤春病毒血症(Spring viremia of carp,SVC)是世界动物卫生组织(Officeinternational des épizooties,OIE)规定必须上报的一种急性出血性病毒病,同时也属于我国一类动物疫病。SVC的病原SVCV几乎可以感染所有的养殖鲤科鱼类,并且会造成患病鱼大量死亡,其中幼鱼的死亡率高达90%以上。因此,做好SVC的防控对水产养殖业的发展具有重大意义。
淡水鱼类小瓜虫病是由于各种淡水鱼的体表和鳃上寄生的小瓜虫引起的,严重时全身皮肤和鳍条布满白色的包囊,因此又被称为“淡水鱼类白点病”。其病原多子小瓜虫(I. multifiliis)是一种寄生淡水硬骨鱼类的原生动物,在分类地位上隶属于纤毛门(Ciliophora)、寡膜纲(Oligohymenophorea)、膜口目(Hymenostomalida)、凹口科(Ophryoglenidae)。由于多子小瓜虫对宿主没有严格的选择性,绝大多数淡水鱼类都受其危害。目前,淡水鱼类小瓜虫病给几乎所有淡水养殖鱼类以及观赏渔业造成巨大的经济损失。
刺激隐核虫病,俗称“海水鱼白点病”,其病原刺激隐核虫(Cryptocaryon irritans)主要寄生在鱼的皮肤、鳍、鳃瓣上,并能寄生在鱼眼角膜、口腔等与外界接触的地方。近年来,在鱼排密集、养殖密度过大、水体流动性差的地方,刺激隐核虫病频繁暴发,导致大量鱼死亡,已成为对海水养殖鱼类威胁最大的病害之一。
厚朴酚/和厚朴酚作为一类小分子酚类化合物,具有广谱的生物学活性,例如抗病毒、抗寄生虫、抗菌、抗炎、抗肿瘤、抗焦虑、镇痛等,被广泛应用于医药和农药领域。同时,厚朴酚/和厚朴酚具有廉价易得、化学性质稳定、结构易于修饰、安全高效、资源丰富等优点,可作为开发药物的先导结构,其衍生物在新药开发上具有广阔的前景。
发明内容
如上所述厚朴酚/和厚朴酚在生物医药、农药(农业)领域已有相对广泛的应用。本发明的目的,一是提供厚朴酚/和厚朴酚类衍生物在水产养殖领域应用,一是提供对鱼类弹状病毒和寄生原虫具有防控效果的药物。
具体地,本发明提供一种酚类化合物在鱼类病害防控中的应用,其所述酚类化合物的化学结构如下所示,其中,
取代基R1为氢,或含氮基团;
取代基R2为氢,或含氮基团;
取代基R3为氢,或羟基;
取代基R4为氢,或羟基。
进一步地,作为所述酚类化合物的优选,所述酚类化合物的取代基R1为氢,或含氮基团;取代基R2为含氮基团;取代基R3为氢;取代基R4为羟基。
进一步地,作为所述酚类化合物的优选,所述酚类化合物的取代基R1、R2的含氮基团为硝基,或偶氮苯基。
经本发明试验测定,对鱼类病害防控具有特定效果的所述酚类化合物包括:3,3’-二硝基厚朴酚、3-偶氮苯厚朴酚、3-对硝基偶氮苯厚朴酚、3-对甲基偶氮苯厚朴酚、3-间三氟甲基偶氮苯厚朴酚、3,3’-二对硝基偶氮苯厚朴酚、2-对羟基偶氮苯厚朴酚、2-(3,4)-二羟基偶氮苯厚朴酚、3-对三氟甲基偶氮苯厚朴酚、3-对三氯甲基偶氮苯厚朴酚、3-对磺酸基偶氮苯厚朴酚、3-对三溴甲基偶氮苯厚朴酚、3-对氰基偶氮苯厚朴酚、3-对氯偶氮苯厚朴酚、3-对溴偶氮苯厚朴酚、3-对碘偶氮苯厚朴酚、3-对氟偶氮苯厚朴酚。
上述所述酚类化合物的化学结构对应如下:
进一步地,作为所述酚类化合物的优选,所述酚类化合物的取代基R1为氢,或含氮基团;取代基R2为氢,含氮基团;取代基R3为羟基;取代基R4为氢。
进一步地,作为所述酚类化合物的优选,所述酚类化合物的取代基R1、R2的含氮基团为硝基,或偶氮苯基。
经本发明试验测定,对鱼类病害防控具有特定效果的所述酚类化合物包括:3,5’-二硝基和厚朴酚、3-偶氮苯和厚朴酚、3-对硝基偶氮苯和厚朴酚、3-对甲基偶氮苯和厚朴酚、5’-对甲基偶氮苯和厚朴酚、3,5’-对硝基偶氮苯和厚朴酚、3-对羟基偶氮苯和厚朴酚、2-(3,4)-二羟基偶氮苯和厚朴酚、3-对三氟甲基偶氮苯和厚朴酚、3-对三氯甲基偶氮苯和厚朴酚、3-对三溴甲基偶氮苯和厚朴酚、3-对磺酸基偶氮苯和厚朴酚、3-对氰基偶氮苯和厚朴酚、3-对氯偶氮苯和厚朴酚、3-对溴偶氮苯和厚朴酚、3-对碘偶氮苯和厚朴酚、3-对氟偶氮苯和厚朴酚。
上述所述酚类化合物的化学结构对应如下:
如上可见,本发明对鱼类病害防控具有特定效果的所述酚类化合物是厚朴酚/和厚朴酚类衍生物,并且主要是邻位含氮基团取代的厚朴酚/和厚朴酚类衍生物。经本发明试验验证,所述酚类化合物表现出抗/杀灭鱼类弹状病毒和寄生原虫的生物活性。基于此,本发明提出所述酚类化合物用于由弹状病毒、寄生虫引起的鱼类病害的防控。具体地,所述酚类化合物用于大口黑鲈弹状病毒、鲤春病毒血症病毒、多子小瓜虫、刺激隐核虫的防控。
本发明拓展了所述酚类化合物的应用,为鱼类病害防控提供了药物开发新途径。为此,本发明一种鱼类病害防控药物,其有效成分包含所述的酚类化合物。
与现有技术相比,本发明具有下述的有益效果或优点:
本发明明确了34种邻位含氮基团取代厚朴酚/和厚朴酚类衍生物在鱼类病害防控中的应用。具体地,所述酚类化合物对以大口黑鲈弹状病毒、鲤春病毒血症病毒为代表的鱼类弹状病毒具有较强的抗病毒作用,对以多子小瓜虫和刺激隐核虫为代表的寄生原虫具有良好的杀灭作用。通过试验(表1)得出,所述酚类化合物可作为用于水产鱼类弹状病毒及寄生原虫病害防控的候选药物。
附图说明
图1为3,3’-二硝基厚朴酚对感染MSRV的大口黑鲈存活率保护曲线。
图2为3,3’-二硝基厚朴酚对感染MSRV的大口黑鲈肝中病毒表达量的影响。
图3为3,3’-二硝基厚朴酚对感染MSRV的大口黑鲈脾中病毒表达量的影响。
图4为3,3’-二硝基厚朴酚对感染MSRV的大口黑鲈肾中病毒表达量的影响。
具体实施方式
下面结合附表、附图和实施例对本发明做详细说明。
实施例1
本实施例给出所述酚类化合物抗大口黑鲈弹状病毒活性的测定。
(一)离体活性的测定
(1)试验材料
病毒材料:大口黑鲈弹状病毒(Micropterus salmoidesrhabdovirus,MSRV),株型号FJ985,来源于西北农林科技大学动物科技学院。
感染细胞系:草鱼卵巢细胞(Grass carp ovary cell,GCO),来源于浙江省淡水水产研究所。
待测药液的配制:准确称取20 mg待测化合物(所述酚类化合物),置于1.5 mL离心管中,加入1mL二甲基亚砜(DMSO)溶解,即得浓度为20 mg/mL的待测药液,冰箱保存(4℃或-80℃),备用。
细胞培养、病毒增殖及滴度检测:从冰箱中取出冻存的GCO细胞,37℃水浴快速融化,然后用含10%胎牛血清(fetal bovine serum,FBS)的M199细胞培养基(含100 IU/mL青霉素和0.1 mg/mL链霉素)进行细胞复苏。待细胞生长稳定后,对其进行传代培养,培养箱温度维持在25±0.5℃,CO2浓度为5%。根据细胞生长密度及状态,每2~3天传代一次。
从液氮中取出冻存的MSRV病毒悬液,用无血清的M199培养基漂洗25 mL细胞培养瓶长至80%~90%的GCO细胞,按体积比为0.1%接种病毒悬液。25℃孵育48 h后,利用倒置显微镜观察GCO细胞感染病毒的情况,待80%以上细胞出现细胞病变效应(cytopathic effect,CPE)时,收取培养瓶中的病毒,并分装于1.5 mL冻存管,液氮中保存、备用。
向96孔细胞培养板中加入密度为1×104/孔的GCO细胞100 μL,25℃培养16~24 h。待细胞生长至80%~90%时,向其中接种稀释度为101~108的病毒液100 μL/孔,每个稀释度设置8个平行孔,25℃培养箱中培养96 h。实验设置3组平行,每隔24 h观察记录各稀释度单层细胞的CPE现象,并记录相应孔数,按照Reed-Muench法计算MSRV的半数组织细胞感染量(tissue culture infective dose,TCID50)。
(2)抗病毒活性测定
进行抗病毒活性测定前,利用MTT法检测衍生物对GCO细胞的毒性作用。将密度约为1×104/孔细胞接种于96孔板中,放置在25℃、二氧化碳浓度为5%的细胞培养箱中培养约16 h~24 h。待细胞在96孔板中覆盖80~90%时,加入不同浓度的衍生物继续培养48 h,按照MTT法测细胞活性。
MTT法的操作步骤:弃去培养上清,用磷酸盐缓冲液(PBS)清洗细胞3遍后,每孔加入90 μL的PBS,再加入10 μL的MTT溶液,在培养箱中孵育4 h,然后弃去上清,每孔加入100μL的DMSO,室温摇床振荡5 min,使紫色结晶物溶解。用酶标仪在波长490nm下检测各孔的吸光值,依据公式计算细胞的存活率。
细胞存活率=(OD处理组490 nm-OD空白组490 nm)/(OD对照组490 nm-OD空白组490 nm)×100%。
根据试验结果,判定所述酚类化合物对GCO细胞的毒性作用,然后在安全浓度范围内设定一系列药物浓度梯度,测定所述酚类化合物抗MSRV的有效活性浓度。具体操作步骤如下:
a)将密度为1×105/孔的GCO细胞接种于12孔细胞培养板中,25℃培养16~24 h,待细胞生长至单层时,吸出培养基,M199培养基漂洗2~3次,加入MSRV稀释液(1×103 TCID50,M199培养基稀释),25℃孵育2 h;
b)用细胞维持液将母液浓度为20 mg/mL的所述酚类化合物稀释至检测浓度。病毒孵育2 h后,吸出病毒液,0.1 M PBS漂洗2~3次,加入新鲜配制的所述酚类化合物稀释液或细胞维持液(对照组),25℃继续培养48 h;
c)所述酚类化合物暴露48 h后,将药液吸出,0.1 M PBS洗涤GCO细胞2~3次,用含EDTA、浓度为0.25%的胰蛋白酶消化细胞,然后1000 rpm、5 min离心收集样品,弃去上清后向收集的细胞内加入Trizol试剂,提取样品总RNA。
总RNA提取具体方法如下:
a)将含GCO细胞的Trizol液转移至1.5 mL无菌无酶的EP管中,用无菌枪头反复吹打直至管底无沉淀;
b)每1 mL Trizol加入200 μL氯仿,然后涡旋振荡15 s使溶液充分乳化,室温静置2~3分钟,12000 g、4℃离心15分钟;
c)小心吸取上层水相400~500 μL转移至新的无菌无酶EP管中,再加入等体积的异丙醇,上下颠倒EP管使液体充分混匀,室温静置10分钟,12000 g、4℃离心10分钟;
d)吸弃上清液,沿管壁缓慢加入1 mL 75%的乙醇,上下颠倒EP管洗涤沉淀,7500g、4℃离心5 min后吸弃乙醇;
e)室温干燥沉淀10分钟左右,加入15~20 μL无RNA酶的超纯水溶解RNA,-80℃保存备用。
使用诺唯赞(Vazyme)反转录试剂盒对各样品总RNA进行反转录PCR,具体方法如表1。
表1.反转录PCR反应体系
试剂 | 体积 |
无RNA酶 ddH<sub>2</sub>O | 补足至 8 μL |
4 × gDNA wiper Mix | 0.5 μL |
Oligo (dT)<sub>18 </sub>(10 μM) | 0.5 μL |
模板RNA | 1 pg~500 ng |
用移液器将上述样品轻轻吹打混匀。42℃反应2分钟。再在第1步的反应管中直接加入5×Select qRT SuperMix Ⅱ 2 μL,使用移液器轻轻吹打混匀。50℃反应15分钟,85℃反应2分钟。
以β-actin为内参、反转录产物为模板,利用实时定量PCR检测衍生物抗病毒活性,比较MSRV在各个衍生物不同浓度处理后的复制情况。MSRV G蛋白基因和GCO细胞内参基因引物序列如表1所示。
表2.离体抗MSRV活性引物序列
反转录PCR合成的cDNA模板用Vazyme AceQ® qPCR SYBR® Green Master Mix试剂盒进行qRT-PCR扩增,条件为:95℃预变性5 min;95℃变性10 s,60℃退火30s,循环40次;熔解曲线分析,65℃至95℃,每步5 s。仪器为Bio-Rad CFX96 Real-Time PCR DetectionSystem。总体积为15 μL的反应体系如表3所示。利用2-△△Ct法分析实时定量数据。
表3.实时定量PCR反应体系
试剂名称 | 体积 |
SYBR<sup>®</sup> Green Master Mix | 7.5 μL |
Forward/Reverse Primers | 0.3 μL |
模板cDNA | 1.5 μL |
ddH<sub>2</sub>O | 5.4 μL |
Total | 15 μL |
根据药物浓度与抗病毒抑制率之间的关系,得到所述酚类化合物对大口黑鲈弹状病毒的半数抑制浓度(IC50),结果如表6所示,其中邻位二取代硝基厚朴酚衍生物化合物1对大口黑鲈弹状病毒的抗病毒活性最好,IC50值为0.36mg/L。
(二)化合物1对感染MSRV的大口黑鲈的在体效果验证
(1)试验材料
试验鱼:试验用大口黑鲈(1000尾)来自福建水产养殖场,鱼的全长和体重分别为4.60±0.52 cm、1.23±0.41 g。试验前所有鱼均在循环水养殖池中用商业饲料(复兴有机饲料有限公司)饲养(温度25℃,pH值6.5-8.5,溶解氧高于5 mg/L)。
(2)预试验:
病毒攻毒浓度的确定:用PBS将MSRV病毒母液稀释101、102、103、104、105倍,对大口黑鲈按20μL/尾进行腹腔注射,对照组则注射PBS,每组20尾鱼。攻毒后的鱼在28℃水温,溶解氧>5mg/L的水族箱中进行饲养,每隔24h观察并记录大口黑鲈死亡情况,直至第7 d。
药物毒性检测:将20 mg/mL的化合物1药物母液按鱼体重配制成5mg/kg、10mg/kg、20mg/kg、40mg/kg共4个浓度组,每组20尾鱼,每尾鱼注射20 μL,持续4天观察大口黑鲈死亡情况,记录分析,以测定化合物1对于鱼体的安全浓度。
(3)存活率观察
根据上述攻毒浓度预试验与毒性试验结果,选择将病毒母液稀释103倍作为最终攻毒浓度、20mg/kg的化合物1作为药物目的浓度。将新鲜配制的病毒液与药物混合后,立刻用腹腔注射方式对大口黑鲈进行注射(20μL/尾,每组共30尾鱼),每24h观察并记录大口黑鲈死亡情况,直至第14d。化合物1对感染MSRV大口黑鲈的保护率如图1所示,其将大口黑鲈的存活率提高了36%。
(4)病毒量测定
病毒感染和药物处理同存活率观察,然后在感染的第1、3、5天分别随机收集3条大口黑鲈,采集肝、脾和肾脏进行RT-qPCR检测。RNA提取、反转录以及qPCR具体过程同上。MSRVG蛋白基因和大口黑鲈内参基因引物序列如表4所示。
表4.所述酚类化合物在体抗MSRV活性引物序列
基因名称 | 引物序列(5'—3') | |
Largemouth bass β-actin | Forward | CCACCACAGCCGAGAGGGAA |
Reverse | TCATGGTGGATGGGGCCAGG | |
MSRV glycoprotein (G) | Forward | TGTCAATGTGCGGAGAGGTG |
Reverse | TGTGATACGTAGCTGAGCCG |
病毒量检测结果如图2-4所示,在感染的第3天和第5天,化合物1均显著降低了肝、脾和肾中MSRV的表达量。
实施例2
本实施例给出所述酚类化合物抗鲤春病毒血症病毒活性的测定。
(一)离体抗SVCV活性测定
(1)试验材料
病毒材料:鲤春病毒血症病毒(Spring viremia of carp virus,SVCV),株型号0504,由大连海洋大学提供。
感染细胞系:黑头软口鲦上皮瘤细胞(Epithelioma papulosum cyprini,EPC),由中国水产科学院长江水产研究所提供。
待测药液的配制:同实施例1。
细胞培养、病毒增殖及滴度检测:同实施例1。
同案例一
(2)衍生物抗病毒活性测定
实施步骤同实施例1,引物序列如表5所示。
表5.所述酚类化合物离体抗SVCV活性引物序列
所述酚类化合物抗SVCV的活性结果如表6所示,其中邻位二取代硝基厚朴酚衍生物化合物1对SVCV的抗病毒活性最好,IC50值为6.80mg/L。
实施例3
本实施例给出所述酚类化合物抗多子小瓜虫活性的测定。
(1)试验材料
试验动物为金鱼(Carassius auratus),体重均小于5.0 g,来源于陕西省咸阳市长兴金鱼养殖场。
多子小瓜虫是从陕西省朱雀路花鸟市场的患病金鱼分离得到,其传代方式:将金鱼置于若干40 L温度为22.0±2.0℃的水箱中,用充氧泵进行增氧,虹吸法吸污,隔天换水1/3。
收集小瓜虫的方法:首先将若干严重寄生小瓜虫的金鱼置于装有300 mL过滤水的烧杯30分钟。由于金鱼不停的游动,成熟的小瓜虫从金鱼体表脱落,用吸管收集脱落的小瓜虫包囊。然后将收集到的包囊在23.5±0.5℃温度中培养18~20 h得到小瓜虫幼虫。
小瓜虫计数方法:用移液器移取2 μL的幼虫悬液置载玻片上,并在解剖镜下计数,重复十次取平均值作为小瓜虫幼虫悬液浓度,再据此浓度计数小瓜虫。
待测药物的配制:试验所用酚类化合物纯度为99.0%,由西北农林科技大学水产动物病害实验室化学合成所得。用二甲基亚砜(DMSO,购自西安化学试剂厂)充分溶解,定容于100 mL容量瓶中,配成浓度为10 mg/mL的酚类化合物母液,4℃冰箱保存备用。
(2)杀灭小瓜虫幼虫及包囊活性的测定
衍生物杀灭幼虫活性测定:采用固定法测定酚类化合物对小瓜虫幼虫的杀灭效果。在96孔板的每一孔中放入300个幼虫。再依次放入酚类化合物母液使药物的最终浓度分别达到0、0.05、0.1、0.2、0.3、0.5、0.7和0.8 mg/L。然后在4 h时用解剖镜观察并记录死亡的小瓜虫幼虫。认为形态不正常或是无法活动的小瓜虫幼虫为死亡。整个实验在温度为23.5±0.5℃环境中进行,并用不同宿主不同时间培养的小瓜虫幼虫重复3次。
酚类化合物杀灭小瓜虫包囊活性的测定:在24孔板的每一孔中放入30个小瓜虫包囊(体积为1 mL),再依次加入衍生物母液使药物的最终浓度分别达到0、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0和1.2 mg/L。将24孔板置于培养箱恒温培养(23.5±0.5℃)。18~20 h后取出24孔板在解剖镜下记录死亡的小瓜虫包囊(无法完成繁殖的小瓜虫包囊被认为死亡)并统计小瓜虫幼虫的数量,依此计算小瓜虫的繁殖率(每孔中小瓜虫幼虫的数量/存活的小瓜虫包囊),整个实验重复3次。
酚类化合物杀灭小瓜虫幼虫及包囊活性如表6所示,其中对小瓜虫幼虫及包囊杀灭活性最高的衍生物为化合物1。当化合物1浓度为0.1 mg/L时即可100%杀灭多子小瓜虫幼虫,并能显著影响小瓜虫包囊的形成率及孵化率(p<0.05)。
实施例4
本实施例给出所述酚类化合物抗刺激隐核虫活性测定。
(1)试验材料
试验动物为卵形鲳鲹(Trachinotus ovatus),体重约为69.0 g,购自于广西北海某养殖场。刺激隐核虫是从网箱养殖中患病卵形鲳鲹分离得到。
刺激隐核虫的孵化:将感染刺激隐核虫的卵形鲳鰺断尾放血,剪下鳃放在装有过滤无菌海水的平板上,成熟的滋养体从鳃丝自然脱落,用过滤的无菌海水冲洗3次并收集,用含有双抗(青霉素:100 IU/mL,链霉素:100 μg/mL)的过滤无菌海水进行培养,在27℃培养2.5天后,包囊开始释放出幼虫,1h内收集幼虫进行衍生物抗虫活性的测定。
刺激隐核虫幼虫的计数方法:用移液器移取2 μL的幼虫悬液置载玻片上,并在解剖镜下计数,重复十次取平均值作为幼虫悬液浓度,再据此浓度计数刺激隐核虫数量。
待测药物的配制:试验所用衍生物纯度为99.0%,由西北农林科技大学水产动物病害实验室化学合成所得。用二甲基亚砜(DMSO,购自西安化学试剂厂)充分溶解,定容于100mL容量瓶中,配成浓度为10 mg/mL的酚类化合物母液,4℃冰箱保存备用。
(2)杀灭刺激隐核虫幼虫活性的测定
在24孔板的每一孔中加入1mL含有约250个刺激隐核虫幼虫的过滤灭菌海水。再依次放入酚类化合物母液使药物的最终浓度分别达到0、0.1、0.3、0.5、0.7、1.0、3.0和5.0mg/L。平板在27℃培养箱中孵育0.5 h后用解剖镜观察并记录死亡的刺激隐核虫幼虫。认为形态不正常或是无法活动的小瓜虫幼虫为死亡。整个实验在温度为27.0±0.5℃环境中进行,每个实验重复3次,并最终使用SPSS软件计算化合物对刺激隐核虫幼虫的杀灭活性。
酚类化合物杀灭刺激隐核虫活性如表6所示,其中化合物1对刺激隐核虫幼虫的杀灭效果也是所有衍生物中最好的。当化合物1浓度为2.0 mg/L时即可100%杀灭刺激隐核虫幼虫。
表6 酚类化合物对鱼类弹状病毒的抗病毒活性以及对寄生原虫的杀灭活性
15 | 3-对三氟甲基偶氮苯厚朴酚 | 9.364 | 10.746 | 1.256 | 3.584 | 2.457 |
16 | 3-对三氯甲基偶氮苯厚朴酚 | 9.475 | 11.258 | 3.427 | 0.265 | 5.291 |
17 | 3-对磺酸基偶氮苯厚朴酚 | 13.584 | 15.681 | 2.153 | 0.591 | 3.764 |
18 | 3-对三溴甲基偶氮苯厚朴酚 | 4.394 | 9.353 | 0.362 | 1.345 | 0.586 |
19 | 3-对氰基偶氮苯厚朴酚 | 2.580 | 3.134 | 0.831 | 8.476 | 5.326 |
20 | 3-对氯偶氮苯厚朴酚 | 4.275 | 5.660 | 1.747 | 6.242 | 4.287 |
21 | 3-对溴偶氮苯厚朴酚 | 5.423 | 8.394 | 2.556 | 3.165 | 1.194 |
22 | 3-对碘偶氮苯厚朴酚 | 6.894 | 7.646 | 0.349 | 0.114 | 8.526 |
23 | 3-对氟偶氮苯厚朴酚 | 14.571 | 12.382 | 4.218 | 0.486 | 3.264 |
24 | 3-对羟基偶氮苯和厚朴酚 | 18.697 | 7.904 | 3.142 | 2.537 | 1.127 |
25 | 2-(3,4)-二羟基偶氮苯和厚朴酚 | 13.425 | 14.830 | 0.076 | 1.463 | 2.394 |
26 | 3-对三氟甲基偶氮苯和厚朴酚 | 6.450 | 11.466 | 0.845 | 3.958 | 9.845 |
27 | 3-对三氯甲基偶氮苯和厚朴酚 | 8.992 | 7.574 | 7.651 | 0.834 | 6.315 |
28 | 3-对三溴甲基偶氮苯和厚朴酚 | 15.736 | 18.120 | 4.513 | 4.274 | 0.845 |
29 | 3-对磺酸基偶氮苯和厚朴酚 | 3.480 | 7.253 | 3.282 | 6.038 | 4.064 |
30 | 3-对氰基偶氮苯和厚朴酚 | 5.863 | 13.165 | 1.175 | 5.263 | 2.180 |
31 | 3-对氯偶氮苯和厚朴酚 | 2.490 | 16.731 | 0.596 | 1.082 | 1.572 |
32 | 3-对溴偶氮苯和厚朴酚 | 7.582 | 9.267 | 3.643 | 0.769 | 7.484 |
33 | 3-对碘偶氮苯和厚朴酚 | 3.613 | 4.358 | 0.185 | 1.954 | 3.450 |
34 | 3-对氟偶氮苯和厚朴酚 | 10.563 | 12.462 | 2.576 | 5.834 | 2.386 |
上述实施例1-4给出了邻位含氮基团取代厚朴酚/和厚朴酚类衍生物在制备抗/杀灭鱼类弹状病毒和寄生原虫药物中的应用。表6所示34种酚类化合物菌均表现出抗病毒活性和多子小瓜虫的杀灭活性,其中,化合物1对大口黑鲈弹状病毒的抗病毒活性和多子小瓜虫的杀灭效果均为最好。
尽管已描述了本发明的优选实施例,但本领域内的技术人员一旦得知了基本创造性概念,则可对这些实施例作出另外的变更和修改。所以,所附权利要求意欲解释为包括优选实施例以及落入本发明范围的所有变更和修改。
显然,本领域的技术人员可以对本发明进行各种改动和变型而不脱离本发明的精神和范围。这样,倘若本发明的这些修改和变型属于本发明权利要求及其等同技术的范围之内,则本发明也意图包含这些改动和变型在内。
Claims (7)
2.根据权利要求1所述的应用,其特征在于,所述酚类化合物的取代基R1、R2的含氮基团为硝基,或偶氮苯基。
5.根据权利要求1-4任一项所述的应用,其特征在于,所述酚类化合物用于由弹状病毒、寄生虫引起的鱼类病害的防控。
6.根据权利要求5所述的应用,其特征在于,所述酚类化合物用于大口黑鲈弹状病毒、鲤春病毒血症病毒、多子小瓜虫、刺激隐核虫的防控。
7.一种鱼类病害防控药物,其有效成分包含权利要求1-4任一项所述的酚类化合物。
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