CN110772510B - 蒿本内酯的用途 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种蒿本内酯的新用途，蒿本内酯作为制备灭杀小瓜虫药物的应用。本发明蒿本内酯为天然化合物，毒性小，安全性好，对水产动物无毒害，对小瓜虫的杀灭效果显著。

Description

蒿本内酯的用途
技术领域
本发明涉及水产养殖技术领域，特别涉及一种蒿本内酯的用途。
背景技术
小瓜虫是几乎可以感染所有淡水鱼类的重要寄生虫，给水产业造成了巨大的危害。而治疗这种寄生虫最有效的药物是硝酸亚汞和孔雀石绿，而这两种药物均具有致癌等作用，故而已被禁用。随着这两种药物的禁用，目前国内外对这种寄生虫的防治主要采用甲醛、硫酸铜、高锰酸钾、溴硝醇等，但是这些药物对小瓜虫没有显著的疗效，同时长期使用带来了药物残留、环境污染、耐药性等问题，因而急需寻找一种对小瓜虫有特效的药物。
蒿本内酯，又名藁本内酯，是由Mitsuhashi于1960年对伞形科藁本属植物ligusticum acutilobum进行分离所得到的、具淡黄色带香味的油状液体，命名为ligustilide，沸点为168-169℃，可溶于乙醇、甲醇、乙醚、乙酸乙酯、石油醚等有机溶剂，分子式为C12H14O2，相对分子质量为190.24。藁本内酯是苯酞类化合物的典型代表，多存在于中药当归、川芎等伞形科植物中。藁本内酯具有神经保护、扩张血管、抑制血管平滑肌细胞增殖，抗癌抗肿瘤、镇痛消炎等多种药理作用。目前，没有研究报道过蒿本内酯对小瓜虫具有灭杀作用。
发明内容
本发明的目的在于提供一种蒿本内酯的用途，蒿本内酯为天然化合物，毒性小，安全性好，对水产动物无毒害，对小瓜虫的杀灭效果显著。
本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：
一种蒿本内酯的用途，蒿本内酯作为制备灭杀小瓜虫药物的应用。
一种杀灭水产动物体外小瓜虫的防治剂，按重量百分比计由以下组分混合制成：蒿本内酯5％～15％，表面活性剂5％～10％，溶解剂10～20％，其余为溶剂。
所述溶解剂为二甲基亚砜或N,N-二甲基甲酰胺。
所述表面活性剂为吐温。
所述吐温为吐温-20或吐温-80。
所述溶剂为水。
本发明的有益效果是：蒿本内酯为天然化合物，毒性小，安全性好，对水产动物无毒害，对小瓜虫的杀灭效果显著。
附图说明
图1是蒿本内酯对小瓜虫幼虫的杀灭作用。
具体实施方式
下面通过具体实施例，对本发明的技术方案作进一步的具体说明。
本发明中，若非特指，所采用的原料和设备等均可从市场购得或是本领域常用的。下述实施例中的方法，如无特别说明，均为本领域的常规方法。
实施例1：
一种杀灭水产动物体外小瓜虫的防治剂，按重量百分比计由以下组分混合制成：蒿本内酯5％，吐温-20 5％，二甲基亚砜10％，水80％。
实施例2：
一种杀灭水产动物体外小瓜虫的防治剂，按重量百分比计由以下组分混合制成：蒿本内酯15％，吐温-80 10％，N,N-二甲基甲酰胺20％，水55％。
实施例3：
一种杀灭水产动物体外小瓜虫的防治剂，按重量百分比计由以下组分混合制成：蒿本内酯10％，吐温-20 7％，N,N-二甲基甲酰胺15％，水68％。
实施例4：
一种杀灭水产动物体外小瓜虫的防治剂，按重量百分比计由以下组分混合制成：蒿本内酯12％，吐温-80 8％，二甲基亚砜15％，水65％。
防治剂的制备方法为将各组分混合均匀即可，本发明的防治剂可直接泼洒于池塘中，以池塘水量为参考，使用剂量为15-25mL/m3均可。
杀灭寄生小瓜虫的药效试验
1材料与方法
1.1试验鱼
严重感染小瓜虫的草鱼(67.8±5.6g)来自浙江省淡水水产研究所苗种基地。随机选取10尾鱼，取全鳃镜检观察统计鳃上小瓜虫数量，试验鱼小瓜虫感染率为100％，每尾鱼平均感染小瓜虫约110个。
1.2体外杀虫试验
将严重感染小瓜虫的草鱼放入烧杯中，待小瓜虫游出后，用吸管将成熟小瓜虫收集放入平皿中，一部分虫体用于小瓜虫幼虫的培养，一部分用于包囊的收集。
1.2.1对小瓜虫幼体的体外杀虫试验
试验在24孔细胞培养板上进行，于每个细胞孔中加入约2ml不同浓度的防治剂(5.0，7.0，9.0，11.0，13.0和15.0mg/L-1)和约100个小瓜虫幼虫，于用药后10min、1h、2h、3h、4h镜检观察一次，4h后统计各孔的小瓜虫死亡率。试验设置溶解剂对照组和充分暴气自然水对照组，每组试验重复三次。
小瓜虫死亡判断标准：虫体纤毛不运动，胞质不流动，胞膜破裂，细胞核破碎。
1.2.2对小瓜虫包囊的体外杀虫试验
试验在24孔细胞培养板上进行，于每个细胞孔中加入约2ml不同浓度的防治剂(5.0，7.0，9.0，11.0，13.0和15.0mg/L-1)和30个小瓜虫包囊，于用药后4h镜检观察一次，4h后统计各孔的小瓜虫包囊死亡率。试验设置二甲基亚砜对照组和充分暴气自然水对照组，每组试验重复三次。
小瓜虫包囊死亡判断标准：包囊未分裂或包囊未孵出幼虫。
1.3体内杀灭小瓜虫试验
在一个体积为1m3的水泥池中放入120尾健康未感染任何寄生虫的草鱼，暂养一周后，放入600000个小瓜虫幼虫进行感染，感染24h后，将感染有小瓜虫的草鱼进行分组，每组10尾鱼，并放入100L的鱼缸中。根据体外杀虫试验设置防治剂的杀虫试验浓度为5.0、10.0和15.0mL/m3。于体积为80cm×60cm×40cm的玻璃缸内盛入充分曝气的自然水，pH 7.0～7.5，水温25±1℃。按照设定好的浓度向水体中加入不同浓度的防治剂，并搅拌均匀，并在第3天和第5天，每个试验组重新加换新的防治剂。
试验第5天时，每个浓度组取出3尾草鱼，并放入烧杯中，按照体外杀虫试验的方法收集包囊，并观察包囊的死亡和分裂情况。
试验第10天，将所有组内的草鱼取出，全鳃制片、镜检，统计每尾草鱼在鳃部小瓜虫存活数量，计算平均杀虫率。
杀虫率(％)＝(对照组的小瓜虫平均存活数量－试验组的小瓜虫平均存活数量)/对照组的小瓜虫平均存活数量×100％
鱼平均死亡率(％)＝(投放的鱼数量-镜检时的鱼存活数量)/投放的鱼数量×100％。
1.4.蒿本内酯对草鱼的急性毒性试验
试验在体积为80L的玻璃缸中进行，每个缸中放置健康的草鱼10尾，并加入浓度为50.0,70.0,90.0,110.0,130.0和150.0mg L-1防治剂，48h后统计草鱼死亡数量，并计算蒿本内酯对草鱼的半致死浓度。每个浓度组做3个重复，试验设置一个对照组。
2结果
试验数据用SPSS16.0统计学软件进行处理，所有参数均用均数±标准差(X±SD)表示。
2.1体外杀小瓜虫试验
蒿本内酯对小瓜虫幼虫的体外杀灭作用见附图1。由附图1可知：蒿本内酯对小瓜虫具有较强的杀灭作用，并且随着浓度的增加其杀灭作用逐渐增强，他对小瓜虫幼虫10min-、1h-、2h-、3h和4h-半数致死有效浓度(EC50)(95％CI)的浓度分别为3.5(3.2-3.8)、3.1(2.9-3.3)、3.0(2.7-3.3)、2.9(2.7-3.1)和2.8(2.6-3.0)mg L-1，其浓度为5.0mg L-1时，对小瓜虫的杀灭率为100％。
蒿本内酯对小瓜虫包囊的体外杀灭作用见表1。由表1可知：蒿本内酯在浓度为15.0mg L-1包囊未分裂，也未孵出幼虫，其对包囊的杀虫率为100％。其浓度为13.0、11.0及9.0mg L-1时对包囊的杀灭率分别为86.7％、66.7％和43.3％，而5.0mg L-1浓度组对包囊基本没有作用，全部包囊均孵化出来。蒿本内酯对小瓜虫包囊的4h-EC50(95％CI)为9.6(9.1-10.1)mg L-1。
2.2蒿本内酯的体内杀虫试验
蒿本内酯对寄生于草鱼上的体内杀虫试验结果如表2。由表2可知：蒿本内酯对小瓜虫具有较强的杀灭作用，使用药物后，草鱼体表和鳃上的小瓜虫数量明显减少，且其掉落后的包囊的幼虫孵化率明显减少。当其浓度为15.0mg L-1时，草鱼的死亡率为30.0％，其鳃上和鳍条的小瓜虫数为45.2±11.5。而对照组的草鱼死亡率为90.0％，鳃和鳍条上小瓜虫的数量为435.8±35.8。结果表明蒿本内酯对感染有小瓜虫的试验鱼具有较强的保护作用。
2.3蒿本内酯对草鱼的急性毒性试验
浓度为50.0mg L-1蒿本内酯用药48h后草鱼死亡率为0，且草鱼活性正常，也未见异常反应。浓度为150.0mg L-1蒿本内酯用药4h后草鱼即出现呼吸急促，跳跃等异常反应，48h后草鱼全部死亡。蒿本内酯对草鱼的48h LD50为105.8mg L-1(其95％置信区间为100.3-111.3mg L-1)。
表1蒿本内酯对小瓜虫包囊的体外杀灭效果(mg L-1)
浓度(mg L<sup>-1</sup>) 包囊死亡率(％) 包囊孵化(个)
0(control) 0±0a 562.5±32.5a
5.0 3.3±1.1b 543.8±23.6a
7.0 16.7±3.3c 525.6±43.9a
9.0 43.3±2.2d 325.4±23.3b
11.0 66.7±3.3e 267.4±18.8c
13.0 86.7±6.7e 102.6±22.2d
15.0 100±0.0f 0.0±0.0e
注：不同字母表示差异显著(p＜0.05)
表2蒿本内酯对小瓜虫的体内杀虫效果
Figure GDA0003575215320000041
Figure GDA0003575215320000051
注：不同字母表示差异显著(p＜0.05)。
以上所述的实施例只是本发明的一种较佳的方案，并非对本发明作任何形式上的限制，在不超出权利要求所记载的技术方案的前提下还有其它的变体及改型。

Claims (1)

1.一种蒿本内酯的用途，其特征在于：蒿本内酯作为制备灭杀小瓜虫药物的应用。
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