CN104288131A - 丁香酚在杀灭小瓜虫中的应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及丁香酚（C10H12O2）的用途，具体在杀灭小瓜虫中的应用，尤其涉及在杀灭水产动物体外小瓜虫药物中的用途，提供了一种杀灭水产动物体外小瓜虫防治剂，包括下列重量百分比的原料：丁香酚5％~25％，表面活性剂5％~10％，溶解剂10~20％，其余为溶剂。本发明采用丁香酚，毒性小，对水产动物无毒害、残留少；利用特定溶解剂及溶剂，溶解效果好，并且溶解剂可以协助防治剂进入小瓜虫体内，对小瓜虫的杀灭效果显著；防治剂的制备简单、使用方便，生产成本低。

Description

丁香酚在杀灭小瓜虫中的应用
技术领域
本发明涉及丁香酚（C10H12O2）的用途，具体在杀灭小瓜虫中的应用，尤其涉及在杀灭水产动物体外小瓜虫药物中的用途。 
技术背景
丁香酚（4-烯丙基-2-甲氧基苯酚，eugenol）是丁香及丁香罗勒油的主要成分，其天然存在于多种精油中，尤以丁香油(含80%)、月桂叶油(含80%)、丁香罗勒油(含60%)含量为最多，在樟脑油、金合欢油、紫罗兰油、依兰油中均有存在。其结构式为： 
 
丁香酚，分子式为C10H12O2，分子量为164.2，呈无色至淡黄色微稠厚液体，有强烈的丁香香气，不溶于水，溶于2体积60%乙醇与油类中。熔点195-205℃，沸点250-255℃，相对密度1.064-1.068，折射率1.540-1.542。该化合物并且在100℃以内对热稳定，其杀菌作用可能作用于细菌细胞壁上的脂质和蛋白质，使之发生变性而发挥抗菌作用。近年来该化合物主要用于香水香精以及各种化妆品香精和皂用香精配方中，也用于抗菌、麻醉、解热、抗氧化、降血压、抗肿瘤、促进透皮吸收、祛蚊等多种药理活性，还可用于食用香精的调配及食品防腐保鲜作用。但是，其作用也仅限于此，没有深入研究其更广泛的作用范围。
小瓜虫属凹口科、小瓜虫属，主要寄生在鱼类的皮肤、鳍、鳃、头、口腔及眼等部位，形成胞囊呈白色小点状，肉眼可见。严重时鱼体浑身可见小白点，故称白点病。它引起体表各组织充血，鱼类感染小瓜虫后不能觅食，加之继发细菌、病毒感染，可造成大批鱼死亡，其死亡率可达60%～70%，甚至全军覆没，对养殖生产带来严重威胁。治疗此病的药物较多，主要有硝酸亚汞、醋酸亚汞、孔雀石绿、福尔马林、硫酸铜、高锰酸钾等。但前三种会造成药残而危害人类健康，国家已明文禁用，后几种疗效逐年减退，甚至无效。目前暂无较理想的防治方法。 
发明内容
本发明在于提供丁香酚的新用途，即在杀灭小瓜虫药物中的应用。 
进一步的讲，是在制备杀灭小瓜虫药物中的应用。 
更进一步的讲，本发明的主要目的在于提供丁香酚在制备杀灭水产动物体外小瓜虫药物中的应用。 
本发明还提供了一种杀灭水产动物体外小瓜虫防治剂，包括下列重量百分比的原料：丁香酚5％~25％，表面活性剂5％~10％，溶解剂10~20％，其余为溶剂。 
作为优选，所述的表面活性剂是吐温。 
进一步优选，所述的表面活性剂是吐温-20。 
作为优选，所述溶解剂为非质子极性溶剂；更优选地，所述非质子极性溶剂为二甲基亚砜。 
作为优选，所述的溶剂为醇类溶剂，优选无水乙醇。 
本发明还有一个目的，是提供上述杀灭水产动物体外小瓜虫防治剂的制备方法，按以下步骤进行： 
1）按配方量称取各组分原料，备用；
2）将丁香酚和溶解剂混合，搅拌至丁香酚完全溶解，得到混合液；
3）将表面活性剂、溶剂加入步骤2）所得的混合液中，搅拌均匀，即得杀灭水产动物体外小瓜虫防治剂。
本发明的杀灭水产动物体外小瓜虫防治剂的使用方法简单，直接用水稀释，按1~5 mL/m3  的剂量泼洒于水产动物养殖池中即可有效的防治或杀灭鱼类体外小瓜虫。 
本发明采用丁香酚，毒性小，对水产动物无毒害、残留少；利用特定溶解剂及溶剂，溶解效果好，并且溶解剂可以协助防治剂进入小瓜虫体内，对小瓜虫的杀灭效果显著；防治剂的制备简单、使用方便，生产成本低。 
附图说明
图1为丁香酚对小瓜虫的体外杀灭作用图； 
图2为丁香酚对小瓜虫的体外杀灭作用后小瓜虫的显微结构；
图3为丁香酚对寄生于金鱼上的体内杀虫试验结果图。
具体实施方式
为了更清楚的理解本发明以及本发明药剂的药效，以下通过发明人给出的依本发明技术方案所完成的具体的实施例对本发明作进一步的详细描述，这些仅是本发明较好的实施例，但不限于这些实施例。 
实施例1： 
称取丁香酚5g，在10g二甲基亚砜中搅拌溶解，称取表面活性剂吐温-20 5g，溶剂乙醇80g，混合搅拌均匀即得杀灭水产动物体外小瓜虫防治剂。
实施例2： 
称取丁香酚10g，在20g二甲基亚砜中搅拌溶解，称取表面活性剂吐温-20 10g，溶剂乙醇60g，混合搅拌均匀即得杀灭水产动物体外小瓜虫防治剂。
上述实施例可以列举很多，再此不一一列举，从申请人所做的大实验得到的数据证明，只要是按照本发明的技术方案的参数范围选择，即可制备出达到本发明目的的水产动物小瓜虫防治剂。 
上述防治剂可直接用水稀释后，泼洒于池塘中，使用剂量为：3~5 mL/m3。 
以下是本发明提供的防治剂杀灭寄生鱼类小瓜虫的药效的试验： 
1 材料与方法
1.1 试验鱼
严重感染小瓜虫的金鱼（5.1 ± 1.8g），在水泥池中暂养7d后，随机选取10尾鱼，取全鳃镜检观察统计鳃上小瓜虫数量，试验鱼小瓜虫感染率为100%，每尾鱼平均感染小瓜虫约60个。
试验用药为按照实施例1的防治剂。 
1.2 体外杀虫试验 
体外试验在24孔细胞培养板上进行，将严重感染小瓜虫的草鱼全鳃放入盛有蒸馏水的平皿中，待小瓜虫自鳃中游出后，用吸管将成熟小瓜虫收集放入另一平皿中备用。于每个细胞孔中加入约2ml不同浓度的药液（1.0，1.5，2.0，2.5，3.0 和 3.5 ml/m3）和20个小瓜虫成虫，每小时镜检观察一次，4h后统计各孔的小瓜虫死亡率。试验设置DMSO对照组和充分暴气自然水对照组，每组试验重复三次。
    小瓜虫死亡判断标准：虫体纤毛不运动，胞质不流动，胞膜破裂，细胞核破碎。 
1.3 体内杀虫试验 
根据体外杀虫试验设置丁香酚的杀虫试验浓度为2.0，2.5，3.0，3.5，4.0，4.5和5ml/m3。于体积为80cm×60cm×40cm的玻璃缸内盛入充分曝气的自然水，pH 7.0～7.5，水温25±1℃。按照设定好的浓度向水体中加入不同浓度的丁香酚，并搅拌均匀。每个玻璃缸投放感染有小瓜虫的金鱼10尾，用药96 h后取金鱼全鳃制片、镜检，统计每尾金鱼在鳃部小瓜虫存活数量，计算平均杀虫率，实验重复2次，并同时进行DMSO对照试验。
杀虫率(%)=(对照组的小瓜虫平均存活数量－试验组的小瓜虫平均存活数量)/对照组的小瓜虫平均存活数量×100% 
鱼平均死亡率(%)=(投放的鱼数量-镜检时的鱼存活数量)/投放的鱼数量×100%
小瓜虫死亡的判断标准为：虫体纤毛不运动，胞质不流动，胞膜破裂，细胞核破碎。
1.4 数据处理 
试验数据用SPSS16.0统计学软件进行处理，所有参数均用均数±标准差(±SD)表示。
 2 结果
2.1 丁香酚的体外杀小瓜虫试验
丁香酚对小瓜虫的体外杀灭作用见图1。由图1可知：丁香酚对小瓜虫具有较强的杀灭作用，随着浓度的增加其杀灭作用逐渐增强，其浓度为3.5 ml/m3时，对小瓜虫的杀灭率为100%，其4h的LC50 和 LC90 分别为 2.15，3.04ml/m3。
体外杀虫试验结果还显示：丁香酚对小瓜虫的结构具有极大的破坏作用。经4h作用后，丁香酚浓度为 5.0 mg/l情况下，小瓜虫的细胞膜完全破坏，胞质外流，细胞核不可见，纤毛停止运动。而对照组小瓜虫结构完好，纤毛运动自由，大核清晰可见（图2）（A为用药组，B为对照组，显微结构（4×10））。这可能是丁香酚杀虫的主要作用机理。 
2.2 丁香酚的体内杀虫试验 
丁香酚对寄生于金鱼上的体内杀虫试验结果如图3。由图3可知：丁香酚对小瓜虫具有较强的杀灭作用，其浓度为2.0，2.5，3.0，3.5，4.0，4.5和5 ml/m3时，96h对寄生草鱼上的小瓜虫的杀虫率分别为：15.1%，18.7%，30.5%，51.5%，70.2%，78.3%和80.4%。2.0，2.5，3.0mL/m3浓度组的金鱼死亡率为50%，3.5mL/m3浓度组的金鱼死亡率为30%，而对照组的金鱼死亡率为60%，其余实验组死亡率为20%，结果表明丁香酚对感染有小瓜虫的试验鱼具有较强的保护作用。

Claims (10)

1.丁香酚在杀灭小瓜虫中的应用。
2.丁香酚在制备杀灭水产动物体外小瓜虫药物中的应用。
3.一种杀灭水产动物体外小瓜虫防治剂，其特征在于：包括下列重量百分比的原料：丁香酚5％~25％，表面活性剂5％~10％，溶解剂10~20％，其余为溶剂。
4.根据权利要求3所述一种杀灭水产动物体外小瓜虫防治剂，其特征在于：所述溶解剂为非质子极性溶剂，所述溶剂为醇类溶剂。
5.根据权利要求4所述一种杀灭水产动物体外小瓜虫防治剂，其特征在于：所述非质子极性溶剂为二甲基亚砜。
6.根据权利要求4所述一种杀灭水产动物体外小瓜虫防治剂，其特征在于：所述溶剂为无水乙醇。
7.根据权利要求3所述一种杀灭水产动物体外小瓜虫防治剂，其特征在于：所述表面活性剂为吐温。
8.根据权利要求7所述一种杀灭水产动物体外小瓜虫防治剂，其特征在于：所述表面活性剂为吐温-20。
9.如权利要求3所述一种杀灭水产动物体外小瓜虫防治剂的制备方法，其特征在于：按以下步骤进行：                                                                                                                       
1）按配方量称取各组分原料，备用；
2）将丁香酚和溶解剂混合，搅拌至丁香酚完全溶解，得到混合液；
3）将表面活性剂、溶剂加入步骤2）所得的混合液中，搅拌均匀，即得杀灭水产动物体外小瓜虫防治剂。
10.如权利要求3所述一种杀灭水产动物体外小瓜虫防治剂，其使用方法与用量为：用水稀释后泼洒于水产动物养殖池中，使用剂量为1~5 ml/m3。
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