CN108721345B - 一种治疗大宗淡水鱼小瓜虫病的复合制剂 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种治疗大宗淡水鱼小瓜虫病的复合制剂及其应用,所述的复合制剂的组分和质量百分数范围为:氢溴酸常山酮8~12 wt%、贯众提取物32~35wt%、辣椒碱1~2wt%、二硫氰基甲烷0.5~1.5wt%、其余为溶解剂,上述原料的总和为100%。氢溴酸常山酮与贯众乙醇提取物、辣椒碱复配增效明显,且水溶性好、药效稳定,制备方法简单、使用方便,可有效治愈大宗淡水鱼小瓜虫病,并可防止霉菌、细菌继发感染,显著降低大宗淡水鱼小瓜虫病的死亡率,提高养殖经济效益。
Description
技术领域
本发明属于水产养殖技术领域,具体涉及一种用于治疗大宗淡水鱼小瓜虫病的复合制剂。
背景技术
大宗淡水鱼小瓜虫病的病原是多子小瓜虫(Ichthyophthirius multifliis),隶属于原生动物门(Protozoa)、寡膜纤毛纲(Oligohymenophorea)、膜口目(Hymenostomatida)、凹口科(Ophryoglenidae)、小瓜虫属(Ichthyophthirius)的成员,其繁殖适宜水温为15℃~25℃,一般在春秋季节易暴发,并且寄生部位的伤口易造成霉菌和细菌的继发感染,是一类发病迅速、危害较大的鱼类原虫病,且治疗较为困难。对于小瓜虫病的防治,虽然早已筛选出了一些对小瓜虫病有明显防治效果的化学药物(如硝酸亚汞、醋酸亚汞和孔雀石绿等),但这些药都是强毒和强致癌、致畸物质,在鱼体中残留量高,具有严重的环境污染,对鱼和人都有危害,现已禁用。近年来在中草药上筛选出的辣椒和生姜、五倍子、青蒿末、青蒿琥酯等和筛选出的硫酸铜、环烷酸铜、高锰酸钾、氯化钠、福尔马林、生石灰硫磺合剂、冰醋酸双氧水合剂等化学制剂大多数只对小瓜虫幼体有一定效果,而对滋养体阶段成虫没有显著疗效。因而急需筛选出一种对小瓜虫驱杀效果好及安全性高的药物制剂。
常山酮,是一种从植物常山中分离出来的喹唑啉酮类生物碱—常山碱的卤代衍生物,具有广谱抗球虫药的作用,通常用来预防和治疗球虫病,而氢溴酸常山酮对大宗淡水鱼小瓜虫的杀灭作用却未见报道。
针对大宗淡水鱼小瓜虫病的治疗难题,本发明通过长期的研发,研制了一种以氢溴酸常山酮、贯众提取物和辣椒碱为主,以二硫氰基甲烷为辅助功效的复配制剂,提高了使用效果,解决了大多数药物对寄生阶段小瓜虫成虫没有显著的疗效的难题。
发明内容
本发明的目的在于,针对上述现有技术的不足,提供一种制作工艺简单、使用方便、治疗效果好、安全性高的大宗淡水鱼小瓜虫病的复合制剂及其制备方法,为临床提供一种有效的治疗方法。
为实现上述发明目的,本发明采取的技术方案是:
一种治疗大宗淡水鱼小瓜虫病的复合制剂,按质量分数计,其组成为:氢溴酸常山酮8~12wt%、贯众提取物32~35wt%、辣椒碱1~2wt%、二硫氰基甲烷0.5~1.5wt%、其余为溶解剂,上述原料的总和为100%。
优选的,上述用于治疗大宗淡水鱼小瓜虫病的复合制剂,按质量分数计,其组成为:氢溴酸常山酮10wt%、贯众提取物34wt%、辣椒碱1.5wt%、二硫氰基甲烷1wt%、溶解剂为53.5%。
作为优选,所述的贯众提取物为30︰1的醇提取物(具体为30公斤的贯众原料药经醇溶剂提取后的产品为1公斤贯众提取物),溶解剂为二甲基甲酰胺。
本发明一种治疗大宗淡水鱼小瓜虫病的复合制剂的配方依据及各原料特点在于:氢溴酸常山酮、贯众提取物和辣椒碱的药物配伍增效作用明显,杀虫效果比单一组分更为显著,达到对大宗淡水鱼小瓜虫的杀灭作用,在驱杀小瓜虫的复合制剂中添加了二硫氰基甲烷消毒剂,在驱杀大宗淡水鱼小瓜虫的同时又可防止寄生部位的伤口造成霉菌和细菌的继发感染,这也是小瓜虫病害控制的重要因素,取得了良好效果。
一种治疗大宗淡水鱼小瓜虫复合制剂的制备方法,其步骤如下:
(1)按配比称取各原料组分;
(2)将氢溴酸常山酮加入溶解剂二甲基甲酰胺中,并搅拌至氢溴酸常山酮完全溶解;
(3)将贯众提取物、辣椒碱和二硫氰基甲烷依次加入步骤(2)所得的混合溶液中,并搅拌至完全溶解,即得到用于治疗大宗淡水鱼小瓜虫病的复合制剂。
本发明用于治疗大宗淡水鱼小瓜虫病复合制剂,使用剂量为1.6mg/L的水体浓度,连续浸浴48小时,可有效驱杀大宗淡水鱼小瓜虫。
本发明的有益效果在于:
1)本发明的复合制剂主要成份毒性低,安全性高,氢溴酸常山酮与贯众提取物、辣椒碱配伍使用具有显著的协同增效作用,提高了药效,降低了药物使用剂量;克服其他药物如辣椒生姜合剂、五倍子、青蒿末、青蒿琥酯、福尔马林、硫酸铜、环烷酸铜、高锰酸钾、氯化钠、生石灰硫磺合剂、冰醋酸双氧水合剂等疗效差的问题。
2)本发明的复合制剂可有效杀灭寄生大宗淡水鱼寄生小瓜虫,并防止霉菌和细菌对寄生部位的伤口造成继发感染。
3)本发明的复合制剂制备方法简单,使用方便,驱杀大宗淡水鱼小瓜虫的效果显著,且药效温和、稳定,水溶性好,对大宗淡水鱼刺激性较小。
具体实施方式
为了更清楚的理解本发明以及本发明复合制剂的药效,以下通过发明人给出的依本发明技术方案所完成的具体的实施例对本发明作进一步的详细描述,这些仅是本发明较好的实施例,但不限于这些实施例。
实施例1
一种治疗大宗淡水鱼小瓜虫病的复合制剂,由下述质量百分比的原料组成:氢溴酸常山酮12wt%、贯众提取物32wt%、辣椒碱2wt%、二硫氰基甲烷1wt%、二甲基甲酰胺53%。
制备:按配比称取各原料组分;依次将氢溴酸常山酮、贯众提取物、辣椒碱和二硫氰基甲烷溶于二甲基甲酰胺中,搅拌均匀,得到一种黄褐色液体,即为本发明实施例1用于治疗大宗淡水鱼小瓜虫病的复合制剂。
实施例2
一种治疗大宗淡水鱼小瓜虫病的复合制剂,由下述质量百分比的原料组成:氢溴酸常山酮10wt%、贯众提取物35wt%、辣椒碱1.5wt%、二硫氰基甲烷0.5wt%、二甲基甲酰胺53%。
制备:同实施例1。
实施例3
一种治疗大宗淡水鱼小瓜虫病的复合制剂,由下述质量百分比的原料组成:氢溴酸常山酮8wt%、贯众提取物32wt%、辣椒碱1wt%、二硫氰基甲烷1wt%、二甲基甲酰胺58%。
制备:同实施例1。
实施例4
一种治疗大宗淡水鱼小瓜虫病的复合制剂,由下述质量百分比的原料组成:氢溴酸常山酮9wt%、贯众提取物33wt%、辣椒碱1.5wt%、二硫氰基甲烷1.5wt%、二甲基甲酰胺55%。
制备:同实施例1。
实施例5
一种治疗大宗淡水鱼小瓜虫病的复合制剂,由下述质量百分比的原料组成:氢溴酸常山酮11wt%、贯众提取物34wt%、辣椒碱1wt%、二硫氰基甲烷1wt%、二甲基甲酰胺53%。
制备:同实施例1。
实施例6
一种治疗大宗淡水鱼小瓜虫病的复合制剂,由下述质量百分比的原料组成:氢溴酸常山酮10wt%、贯众提取物34wt%、辣椒碱1.5wt%、二硫氰基甲烷1wt%、二甲基甲酰胺53.5%。
上述实施例可以列举很多,在此不一一列举,从申请人所做的大量实验得到的数据证明,只要是按照本发明的技术方案的参数范围选择,即可制备出达到本发明目的的治疗大宗淡水鱼小瓜虫病的复合制剂,效果良好。
上述实施例中复合制剂的使用剂量为1.6g/m3水体的浓度,连续浸泡48小时,可有效杀灭寄生大宗淡水鱼寄生小瓜虫,并防止霉菌和细菌对寄生部位伤口的继发感染。
以下是本发明复合制剂用于治疗大宗淡水鱼小瓜虫病的效果试验:
一、复合制剂对寄生小瓜虫的杀灭药效试验
1材料和方法
1.1试验鱼
患小瓜虫病的鲫鱼苗种由福建省淡水水产研究所顺昌苗种繁育协作基地提供,试验用患小瓜虫病的鲫鱼苗种全长为4~6cm,平均规格为(5.12±0.64)cm,抽样镜检其鳃部和体表寄生有大量小瓜虫;试验鲫鱼苗种暂养于协作基地实验室内0.4m×0.8m×0.4m的玻璃水簇箱中,连续充气增氧,每天换水1次,每次换水量约30%左右;暂养2d后检查,小瓜虫数量未明显减少,即可用于试验。
1.2试验药品
试验药品来源及规格,见表1。
表1试验药品来源及规格
氢溴酸常山酮、贯众提取物和辣椒碱分别以二甲基甲酰胺溶解配置成10g/L的母液,试验用复合制剂由按氢溴酸常山酮10wt%、贯众提取物34wt%、辣椒碱1.5wt%、二硫氰基甲烷1wt%、二甲基甲酰胺53.5wt%的配比称取各原料组分,依次将氢溴酸常山酮、贯众提取物、辣椒碱和二硫氰基甲烷溶解于二甲基甲酰胺中,混合搅拌均匀,备用。
1.3氢溴酸常山酮、贯众提取物和辣椒碱对寄生小瓜虫的杀灭试验
根据预试验结果,按照等对数间距设置氢溴酸常山酮、贯众提取物和辣椒碱对寄生小瓜虫的杀灭试验的7个试验浓度(表2),每个试验浓度设置3个重复,并设置一个空白对照组。每个试验组分别放入受小瓜虫感染且活力较好的鲫鱼苗20尾,试验期间不间断充气,水温24℃~26℃,连续浸浴72h。分别于24、48h和72h每个试验水簇箱随机采样3尾鲫鱼苗,取全鳃镜检寄生小瓜虫数量,统计平均杀虫率。
杀虫率(%)=(对照组三代虫平均存活数量-试验组三代虫平均存活数量)/对照组三代虫平均存活数量×100%。
表2氢溴酸常山酮、贯众提取物和辣椒碱对寄生小瓜虫杀灭试验的浓度组
1.4复合制剂对寄生小瓜虫的杀灭试验
根据前期试验结果,按氢溴酸常山酮10wt%、贯众提取物34wt%、辣椒碱1.5wt%、二硫氰基甲烷1wt%、二甲基甲酰胺53.5%的比例配制复合制剂,按照等对数间距设置复合制剂对寄生小瓜虫杀灭试验的浓度梯度为:0.40、0.63、1.00、1.60、2.50、4.00、6.30mg/L的7个试验组和空白对照组,每组放试验病鱼20尾。试验过程不间断充气,试验水温24℃~26℃,连续浸浴观察72h。分别于浸浴24h、48h和72h取3尾试验鱼检查鱼体小瓜虫的寄生状况,并统计杀虫率和患病试验鱼的存活率。
试验鱼平均死亡率(%)=(投放鱼数量-镜检时的鱼存活数量)/投放鱼数量×100%。1.5数据处理
各药物对小瓜虫的半数致死浓度(LC50)采用概率单位法计算,SPSS17.0软件probit模块进行数据分析处理。
以氢溴酸常山酮为标准药剂,对联合药物的毒力评判采用孙云沛法计算共毒系数(CTC),评判标准为:CTC<80为拮抗作用,80<CTC<120为相加作用,120<CTC<200为增效作用,CTC>200为显著增效作用。其计算公式如下:
实际毒力指数(ATI)﹦标准药剂的LC50/混合药剂的LC50×100%
毒力指数(TI)﹦标准药剂的LC50/供试药剂的LC50×100%
理论毒力指数(TTI)﹦标准药剂毒力指数×标准药剂在混合药剂中百分比+∑(供试验药剂毒力指数×供试药剂在混合药剂中百分比)
共毒系数(CTC)﹦实际毒力指数(ATI)/理论毒力指数(TTI)×100%
2结果
2.1氢溴酸常山酮对寄生小瓜虫的杀灭效果
不同浓度氢溴酸常山酮对寄生小瓜虫的杀灭效果详见表3。试验结果显示,随着药物浓度增加,药物浸泡时间的延长,对小瓜虫的杀虫率逐渐提高,1.25mg/L浓度组浸浴72h的平均小瓜虫的杀虫率达到92.1%,杀虫效果与药物浓度、作用时间成正比,说明了氢溴酸常山酮对寄生在鱼体上的小瓜虫有一定的杀灭效果,完全杀灭小瓜虫的有效浓度较高。
表3不同浓度氢溴酸常山酮对寄生小瓜虫的杀虫率(%)
2.2贯众提取物对寄生小瓜虫的杀灭效果
不同浓度贯众提取物对寄生小瓜虫的杀灭效果见表4。从试验结果可以看出,浸浴72h后,4.00mg/L的试验组杀虫率达到83.6%,而1.0mg/L试验组杀虫率仅达到26.6%。说明了贯众提取物对寄生小瓜虫有一定的驱杀效果,杀虫效果与作用时间、药物浓度成正比。
表4不同浓度贯众提取物对寄生小瓜虫的杀虫率(%)
2.3辣椒碱对寄生小瓜虫的杀灭效果
不同浓度辣椒碱对寄生小瓜虫的杀灭效果见表5。从试验结果可以看出,随着药物浓度增加,药物浸泡时间的延长,对小瓜虫的杀虫率逐渐提高,浸浴72h后,0.79mg/L的试验组杀虫率达到82.3%,说明了贯众提取物对寄生小瓜虫有一定的驱杀效果,杀虫效果与作用时间、药物浓度成正比。
表5不同浓度辣椒碱对寄生小瓜虫的杀虫率(%)
2.4复合制剂对寄生小瓜虫的杀灭效果
不同复合制剂对寄生小瓜虫的杀灭效果见表6。从试验结果可以看出,1.6mg/L以上浓度的试验组浸浴48h检查未发现有小瓜虫寄生,病鱼存活率达到100%,72h后鱼体表无炎症出现,试验鱼恢复摄食,说明试验鱼已痊愈。试验结果证实了该复合制剂能有效杀灭鱼体上寄生小瓜虫,显著降低大宗淡水鱼小瓜虫病的死亡率。
表6不同浓度复合制剂对寄生小瓜虫的杀虫率和试验鱼存活率(%)
2.5联合药物的毒力评判
联合药物的毒力评判采用孙云沛法计算共毒系数(CTC),本试验以氢溴酸常山酮为标准药剂,通过公式计算复合制剂对寄生小瓜虫的48h、72h作用时间的实际毒力指数(ATI)、理论毒力指数(TTI)和共毒系数(CTC),详见表7。
表7复合制剂对大宗淡水鱼寄生小瓜虫的毒力及联合作用
通过实验可知,复合制剂中氢溴酸常山酮、贯众提取物和辣椒碱三种活性成份按照质量百分比分别为10wt%、34wt%和1.5wt%进行复配,对杀灭大宗淡水鱼寄生小瓜虫具有增益作用,其48h和72h实验组的共毒系数为399.26和405.93,均大于200以上,具有显著增效作用。
二、复合制剂对鲤鱼、鲫鱼、草鱼、鲢鱼、鳙鱼和鳊鱼的急性毒性试验
1材料与方法
试验用鲤鱼、鲫鱼、草鱼、鲢鱼、鳙鱼和鳊鱼等由福建省淡水水产研究所顺昌苗种繁育协作基地提供,各品种平均规格详见表8。
表8试验鱼品种和平均规格
试验鱼体健康,于实验室暂养3天。试验用水簇缸水体体积为50L,试验期间水温为(26.0±1.0)℃,Ph 7.6~8.0,试验期间不间断充气增氧,维持实验水体溶解氧保持在5.0mg/L以上。按照SC/T 1087.1-2006《渔药毒性试验方法.第1部分:外用渔药急性毒性试验》进行毒性实验,正式试验前预实验确定复合制剂对各试验品种致死浓度的上下限,根据预实验结果按照等对数间距分别设置各试验品种的复合制剂的试验浓度组:5.6、7.5、10.0、13.5、18.0、24.0、32.0mg/L,每个试验浓度设置3个平行试验组,每个平行试验组放入10尾试验鱼。
记录统计24h、48h、72h和96h各时段试验鱼种的死亡率。试验数据采用Excel2007软件处理,复合制剂对各试验鱼的半数致死浓度(LC50)采用概率单位法计算,SPSS17.0软件probit模块进行数据分析处理。并计算复合制剂对各试验鱼种的安全浓度,安全浓度的计算公式:
安全浓度(SC)=96hLC50×0.1。
2试验结果
复合制剂对鲤鱼、鲫鱼、草鱼、鲢鱼、鳙鱼和鳊鱼等大宗淡水鱼半致死(LC50)和安全浓度(SC)详见表9。对鲤鱼、鲫鱼、草鱼、鲢鱼、鳙鱼和鳊鱼安全浓度在1.288~1.824mg/L,与该复合制剂推荐的使用剂量1.6mg/L基本接近。从以上试验结果可见,该复合制剂在鲤鱼、鲫鱼、草鱼、鲢鱼、鳙鱼和鳊鱼等大宗淡水鱼使用是安全的。
表9复合制剂对各试验鱼种的半致死浓度和安全浓度
Claims (5)
1.一种复合制剂在制备治疗大宗淡水鱼小瓜虫病药物上的应用,其特征在于:所述复合制剂按质量分数计,其原料组成为:氢溴酸常山酮8~12 wt%、贯众提取物32~35wt%、辣椒碱1~2wt%、二硫氰基甲烷0.5~1.5wt%、其余为溶解剂,上述原料的总和为100%;所述复合制剂的水体浓度使用剂量为1.6 mg/L;所述大宗淡水鱼为鲤鱼或鲫鱼。
2.根据权利要求1所述的应用,其特征在于:所述复合制剂按质量分数计,其原料组成为:按质量分数计,其组成为:氢溴酸常山酮10 wt%、贯众提取物34wt%、辣椒碱1.5wt%、二硫氰基甲烷1wt%、其余为溶解剂,上述原料的总和为100%。
3.根据权利要求1或2所述的应用,其特征在于:所述的贯众提取物为30︰1的醇提取物,具体为30公斤的贯众原料药经醇溶剂提取后的产品为1公斤贯众提取物。
4.根据权利要求1或2所述的应用,其特征在于:溶解剂为二甲基甲酰胺。
5.根据权利要求1或2所述的应用,其特征在于:所述复合制剂制备方法包括以下步骤:
(1)按比例称取氢溴酸常山酮、贯众提取物、辣椒碱、二硫氰基甲烷、溶解剂,备用;
(2)将氢溴酸常山酮加入溶解剂中,并搅拌至氢溴酸常山酮完全溶解;
(3)将贯众提取物、辣椒碱和二硫氰基甲烷依次加入步骤(2)所得的混合溶液中,并搅拌至完全溶解,得到用于治疗大宗淡水鱼小瓜虫病的复合制剂。
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