CN114127053B - 一种取代吡嗪化合物、其制备方法和用途 - Google Patents

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Abstract

Description

一种取代吡嗪化合物、其制备方法和用途
发明领域
本发明涉及药物化学领域，并且具体地涉及一种用作SHP2(src homology 2domain containing phosphotyrosine phosphatase 2)抑制剂的取代吡嗪化合物、其制备方法、药物组合物及其在治疗SHP2酶相关疾病(也称作“SHP2磷酸酶相关疾病”或“SHP2相关疾病”)中的用途。
发明背景
SHP2是一种由基因PTPN11编码的蛋白酪氨酸磷酸酶，是PTP家族胞内非受体型成员，其催化蛋白质酪氨酸去磷酸化反应。SHP2具有两个N末端SH2(Src homology 2)结构域(N-SH2和C-SH2)、一个蛋白酪氨酸磷酸酶(PTP)催化结构域和一个富含脯氨酸基团和酪氨酸磷酸化位点的C-末端尾巴。这两个SH2结构域控制SHP2的亚细胞定位和功能调节。在未激活状态下，SHP2处于自抑制状态，N-SH2与PTP相互结合抑制了磷酸酶活性。然而在生长因子、细胞因子或炎症因子，如血小板源性生长因子(platelet derived growth factor，PDGF)和FGF等刺激下，磷酸化酪氨酸残基Tyr542和Tyr580，与N-SH2结合，PTP结构域的催化活性位点暴露，进而解除自抑制状态，激活了SHP2的PTP活性，从而引发由酪氨酸磷酸化所启动的信号传导级联反应。
SHP2在人体中广泛表达，参与Ras-Erk、PI3K-Akt、Jak-Stat、Met、FGFR、EGFR和NF-kB等等多条信号通路，进而调节细胞增殖、分化、迁移、凋亡等生理学功能。SHP2的激活突变体与多种疾病的发生相关，如努南综合征、乳腺癌、黑色素瘤。SHP2的过表达会增加慢性粒细胞白血病、肥大细胞增多症、恶性胶质瘤、肺癌和乳腺癌等癌症的风险，提示SHP2在不同类型癌症及癌症的不同发展阶段中有广泛的作用。
目前已发现嘧啶酮类、吡嗪类、羧酸类、醌类、喹啉类和吲哚类等化合物具有抑制SHP2活性的功能，但本领域仍然亟需新的SHP2抑制剂，特别是具有高活性以及其他优异性质的SHP2抑制剂。我们惊喜地发现一类吡嗪化合物具有较高的SHP2磷酸酶抑制活性，并且具有较好的心脏安全性(较低的hERG抑制)，展示出良好的应用前景。
发明概述
在一方面，本发明提供式(I)的化合物或其药学上可接受的盐、酯、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、同位素标记的化合物、代谢物或前药：
Figure BDA0003458890760000011
其中：
X为直接键或选自S、O、NH和CH2；
Y为直接键或
Figure BDA0003458890760000012
W1、W2和W3各自独立地选自CH和N；
R1选自H、-OH、-NH2、C1-6烷基和C3-6环烷基；
R2在每次出现时各自独立地选自H、卤素、-OH、-OC1-6烷基、-O-C3-6环烷基、-CN、C1-6烷基、C3-6环烷基、C2-6烯基、-S(＝O)g-(C1-6烷基)、-S(＝O)gNH2、-NH2、-NH(C1-6烷基)、-N(C1-6烷基)2、3-12元杂环基、C6-10芳基和5-12元杂芳基，其中所述烷基、环烷基、烯基、杂环基、芳基和杂芳基各自任选地被一个或多个选自卤素、＝O、-OH、-OC1-6烷基、-CN、C1-6烷基、-S(＝O)g-(C1-6烷基)、-NH2、-NH(C1-6烷基)和-N(C1-6烷基)2的取代基取代；
或者，任意2个R2与它们连接的原子一起形成5-10元烃环、5-10元杂环、5-6元杂芳环或苯环，其中所述烃环、杂环、杂芳环和苯环各自任选地被一个或多个选自-NH2、-NH(C1-6烷基)、-N(C1-6烷基)2、卤素、-CN、＝O、-OH、-OC1-6烷基、卤代C1-6烷基和C1-6烷基的取代基取代；
或者，当X为NH或CH2时，任意一个R2和X与它们连接的原子一起形成5-10元烃环、5-10元杂环、5-6元杂芳环或苯环，其中所述烃环、杂环、杂芳环和苯环各自任选地被一个或多个选自-NH2、-NH(C1-6烷基)、-N(C1-6烷基)2、卤素、-CN、＝O、-OH、-OC1-6烷基、卤代C1-6烷基和C1-6烷基的取代基取代；
R4a、R4b、R5a、R5b、R6a、R6b、R7a和R7b各自独立地选自H、卤素、＝O、-CN、-OH、-COOH、-CONH2、-C(O)O-(C1-6烷基)、C1-6烷基、C3-6环烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、-S(＝O)g-(C1-6烷基)、3-6元杂环基、C6-10芳基和5-10元杂芳基，其中所述的烷基、环烷基、烯基、炔基、杂环基、芳基、杂芳基任选地被一个或多个选自-NH2、-OH、＝O、卤素、-CN、-OC1-4烷基、-NH(C1-6烷基)和-N(C1-6烷基)2的取代基取代；
或者，R4a、R4b、R5a、R5b、R6a、R6b、R7a和R7b中任意两个与它们连接的原子(或直接键)一起形成C3-10烃环或4-12元杂环；
或者，R4a、R7a和R3与它们连接的原子一起形成氮杂金刚烷，任选地被一个或多个选自F、Cl、Br、-OH、＝O、-CN、-C(O)O(C1-6烷基)和C1-6烷基的取代基取代；
R8a、R8b各自独立选自H、卤素、C1-6烷基、C3-6环烷基、3-12元杂环基、C2-6烯基、C2-6炔基、C6-12芳基和5-12元的杂芳基，其中所述的烷基、环烷基、烯基、炔基、杂环基、杂芳基和芳基各自任选地被一个或多个选自-N(Rz)2、-NH2、卤素、-CN、-OH、＝O、-OC1-6烷基、C1-6烷基、卤代C1-6烷基、C3-6环烷基、3-12元杂环基、C6-10芳基和5-10元杂芳基的取代基取代；
或者R8a和R8b与连接的原子(或直接键)一起形成C3-8烃环或3-12元杂环，其中所述的烃环和杂环各自任选地被一个或多个选自-N(Rz)2、-NH2、卤素、-CN、＝O、-OH、-OC1-6烷基、C1-6烷基、C3-6环烷基、3-12元杂环基、C6-10芳基、5-10元杂芳基的取代基取代；
当Y为直接键或
Figure BDA0003458890760000021
且R8a和R8b同时为H时，R3选自-CN、-C1-6亚烷基-Rz、-C1-6亚烷基-ORz、C3-6环烷基、C2-6烯基、C2-6炔基和苯基，其中所述的亚烷基、环烷基、烯基、炔基和苯基各自任选地被一个或多个选自卤素、-CN、＝O、-ORz、-OH、-N(Rz)2、-NH2、C1-6烷基、C3-6环烷基、3-6元杂环基、苯基和5-6元杂芳基的取代基取代；/>
当Y为
Figure BDA0003458890760000022
且R8a、R8b不同时为H时，R3选自H、卤素、-ORz、-OH、-CN、-C(O)ORz、-COOH、-CON(Rz)2、-CONH2、-C1-6烷基、-C1-6亚烷基-Rz、-C1-6亚烷基-ORz、-C1-6亚烷基-OH、-C1-6亚烷基-N(Rz)2、C3-6环烷基、3-12元的杂环基、C2-6烯基、C2-6炔基、C6-12芳基、5-12元的杂芳基、-S(＝O)g-(C1-6烷基)、-NH2和-N(Rz)2，其中所述的烷基、亚烷基、环烷基、杂环基、烯基、炔基、杂芳基和芳基各自任选地被一个或多个选自卤素、-CN、＝O、-ORz、-OH、-N(Rz)2、-COOH、-NHRz、-NH2、C1-6烷基、C3-6环烷基、3-12元杂环基、C6-10芳基、5-10元杂芳基、-C(O)ORz、-C(O)N(Rz)2、-C(O)NH2和-NO2的取代基取代；
Rz在每次出现时任选自-CN、-NH-C1-6烷基、C1-6烷基、C3-6环烷基、3-12元杂环基、C2-6烯基、C2-6炔基、C6-12芳基和5-12元杂芳基，其中所述的烷基、环烷基、烯基、炔基、杂环基、杂芳基和芳基各自任选地被一个或多个选自-NH2、卤素、-CN、＝O、-NO2、-OH、-OC1-6烷基、C1-6烷基、卤代C1-6烷基、C3-6环烷基、3-12元杂环基、C6-10芳基和5-10元杂芳基的取代基取代；
g为0、1或2；
n为0、1、2、3、4或5。
在另一方面，本发明提供一种药物组合物，其包含式(I)的化合物或其药学上可接受的盐、酯、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、同位素标记的化合物、代谢物或前药以及一种或多种药学上可接受的载体。
在又一方面，本发明提供式(I)的化合物或其药学上可接受的盐、酯、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、同位素标记的化合物、代谢物或前药或者本发明的药物组合物在制备用于预防或治疗SHP2磷酸酶相关疾病的药物中的用途。
在进一步的方面，本发明提供一种用于预防或治疗SHP2磷酸酶相关疾病的方法，所述方法包括向有此需要的个体给药式(I)的化合物或其药学上可接受的盐、酯、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、同位素标记的化合物、代谢物或前药或者本发明的药物组合物。
在另一方面，本发明提供式(I)的化合物或其药学上可接受的盐、酯、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、同位素标记的化合物、代谢物或前药或者本发明的药物组合物，用于预防或治疗SHP2磷酸酶相关疾病。
在一个实施方案中，所述SHP2磷酸酶相关疾病为对SHP2磷酸酶抑制敏感或有响应的疾病。在进一步的实施方案中，所述SHP2磷酸酶相关疾病为肿瘤类病症，包括但不限于实体和血液恶性肿瘤。
在另一个方面，本发明进一步提供式(I)的化合物或其药学上可接受的盐、酯、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、同位素标记的化合物、代谢物或前药或者本发明的药物组合物与另外的治疗方法组合用于预防或治疗SHP2磷酸酶相关疾病的方法，所述另外的治疗方法包括但不限于：放射疗法、化疗疗法，免疫疗法或其组合。
附图简要描述
图1显示试验例4的小鼠模型中皮下移植瘤的体积变化。
图2显示试验例4中的小鼠体重变化。
图3显示试验例5的小鼠模型中皮下移植瘤的体积变化。
图4显示试验例5中的小鼠体重变化。
发明详述
一般术语和定义
除非在下文中另有定义，本文中所用的所有技术术语和科学术语的含义意图与本领域技术人员通常所理解的相同。提及本文中使用的技术意图指在本领域中通常所理解的技术，包括那些对本领域技术人员显而易见的技术的变化或等效技术的替换。虽然相信以下术语对于本领域技术人员很好理解，但仍然阐述以下定义以更好地解释本发明。
术语“包括”、“包含”、“具有”、“含有”或“涉及”及其在本文中的其它变体形式为包含性的或开放式的，且不排除其它未列举的元素或方法步骤。本领域技术人员应当理解，上述术语如“包括”涵盖“由…组成”的含义。
术语“约”是指在所述数值的±10％范围内，优选±5％范围内，更优选±2％范围内。
除非另有声明，浓度以重量计，比例(包括百分比)以摩尔量计。
术语“一个(种)或多个(种)”或者类似的表述“至少一个(种)”可以表示例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10个(种)或更多个(种)。
当公开了数值范围的下限和上限时，落入该范围中的任何数值和任何包括的范围都被具体公开。特别地，本文公开的值的每个取值范围(以形式“约a至b”，或同等的，“大约a至b”，或同等的，“约a-b”)，应理解为表示涵盖于较宽范围中的每个数值和范围。
例如，表述“C1-6”应理解为涵盖其中的任意亚范围以及每个点值，例如C2-5、C3-4、C1-2、C1-3、C1-4、C1-5等，以及C1、C2、C3、C4、C5、C6等。例如，表述“C3-10”也应当以类似的方式理解，例如可以涵盖包含于其中的任意亚范围和点值，例如C3-9、C6-9、C6-8、C6-7、C7-10、C7-9、C7-8、C8-9等以及C3、C4、C5、C6、C7、C8、C9、C10等。又例如，表述“3-10元”应理解为涵盖其中的任意亚范围以及的每个点值，例如3-4元、3-5元、3-6元、3-7元、3-8元、3-9元、4-5元、4-6元、4-7元、4-8元、5-7元、5-8元、6-7元等以及3、4、5、6、7、8、9、10元等。还例如，表述“5-10元”也应当以类似的方式理解，例如可以涵盖包含于其中的任意亚范围和点值，例如5-6元、5-7元、5-8元、5-9元、5-10元、6-7元、6-8元、6-9元、6-10元、7-8元等以及5、6、7、8、9、10元等。
术语“烷基”，在本文中单独或与其他基团组合使用时，指饱和的直链或支链烃基。如本文中所使用，术语“C1-6烷基”指具有1-6个碳原子(例如1、2、3、4、5或6个碳原子)的饱和直链或支链烃基。例如“C1-6烷基”可以是甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、异戊基、新戊基或正己基等。
如本文中所使用，术语“亚烷基”指饱和的直链或支链的二价烃基。例如，如本文中所使用，术语“C1-6亚烷基”指具有1-6个碳原子饱和的直链或支链的二价烃基。包括但不限于亚甲基、亚乙基、亚丙基或亚丁基等。
术语“环烷基”，在本文中单独或与其他基团组合使用时，指饱和的或者部分饱和的非芳族单环或多环(诸如双环)烃环(例如单环，如环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基、环壬基、环丁烯、环戊烯、环己烯；或双环，包括螺环、稠合或桥连系统(诸如双环[1.1.1]戊基、双环[2.2.1]庚基、双环[3.2.1]辛基或双环[5.2.0]壬基、十氢化萘基等)。例如，术语“C3-12环烷基”指具有3-12个环碳原子(如3、4、5、6、7、8、9或10个)的环烷基。
术语“烃环”，在本文中单独或与其他基团组合使用时，指具有例如3-10个(适合地具有5-8个，更适合地具有5-6个)环碳原子的饱和或不饱和的(即在环内具有一个或多个双键和/或三键)单环或多环烃环，其包括但不限于环丙基环、环丁基环、环戊基环、环己基环、环庚基环、环辛基环、环壬基环、环己烯基环等。
术语“卤素”基团，在本文中单独或与其他基团组合使用时，表示F、Cl、Br或I。
术语“烯基”，如本文中单独或与其他基团组合使用时，指具有一个或多个碳碳双键的直链或支链烃基。例如，如本文中所使用，术语“C2-6烯基”指具有2-6个碳原子以及一个、两个或三个碳碳双键的直链或支链烃基，优选含有一个碳碳双键的C2-6烯基。实例包括但不限于乙烯基、1-丙烯基、2-丙烯基、2-丁烯基、3-丁烯基、2-戊烯基、3-戊烯基、4-戊烯基、2-己烯基、3-己烯基、4-己烯基、5-己烯基、2-甲基-2-丙烯基和4-甲基-3-戊烯基等。
术语“炔基”，如本文中单独或与其他基团组合使用时，指具有一个或多个碳碳三键的直链或支链烃基。例如，如本文中所使用，术语“C2-6炔基”指具有2-6个碳原子以及一个、两个或三个碳碳三键的直链或支链烃基，优选含有一个碳碳三键的C2-6烯基。实例包括但不限于乙炔基、1-丙炔基、2-丙炔基、2-丁炔基、3-丁炔基、2-戊炔基、3-戊炔基、4-戊炔基、2-己炔基、3-己炔基、4-己炔基、5-己炔基等。
术语“杂环基”或“杂环”，在本文中单独或与其他基团组合使用时，指具有例如3-15个(适合地具有3-8个，更适合地具有3-6个)环原子的单环或双环的非芳香环体系(例如3-15元、3-8元、3-6元)，其中至少一个环原子(例如1或2个)是选自N、O、P和S的杂原子，且其余环原子是C。所述环体系可以是稠合环系、桥环体系或螺环体系。该环体系可以是饱和(也可以理解为相应的“杂环烷基”)或不饱和的(即在环内具有一个或多个双键和/或三键)。该术语还涵盖这样的情况，其中的C原子可以被(＝O)取代和/或环上的S原子可以被1个或2个(＝O)取代。杂环基的实例包括但不限于：环氧乙烷基、环硫乙烷基、环氮乙烷基、氮杂环丁基、氧杂环丁基、硫杂环丁基、四氢呋喃基、四氢噻吩基、二氧杂环戊烯基、吡咯烷基、吡咯烷酮基、咪唑烷基、吡唑烷基、吡咯啉基、四氢吡喃基、哌啶基、吗啉基、1,4-噻噁烷基、1,4-二氧六环基、二噻烷基、硫吗啉基、哌嗪基或三噻烷基等。
术语“芳基”或“芳环”，在本文中单独或与其他基团组合使用时，指具有共轭π电子系统的全碳单环或稠合环多环(如双环)芳族基团或芳族环。如本文中所使用，术语“C6-10芳基”指含有6-10个碳原子的芳族基团。其实例包括但不限于苯基和萘基等。
术语“杂芳基”或“杂芳环”，在本文中单独或与其他基团组合使用时，指具有共轭π电子系统的芳族基团或芳族环，其中一个或多个(如1、2或3个)环原子是选自N、O、P和S的杂原子，其余的环原子为C。杂芳基或杂芳环可以用环原子的数目表征。例如，5-10元杂芳基可以含有5-10个(例如5、6、7、8、9或10个)环原子，特别是含有5、6、9、10个环原子。并且在每一种情况下，杂芳基或杂芳环可任选为进一步苯并稠合的。例如，杂芳基的实例有噻吩基、呋喃基、吡咯基、噁唑基、噻唑基、咪唑基、吡唑基、吡嗪基、异噁唑基、异噻唑基、噁二唑基、三唑基、噻二唑基等，以及它们的苯并衍生物；或吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、三嗪基、喹啉基、异喹啉基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、吲哚基、异吲哚基等，以及它们的苯并衍生物。
术语“羟基”表示-OH。
术语“氰基”表示-CN。
术语“硝基”表示-NO2。
术语“氨基”表示-NH2。
术语“取代”、“取代的”和“合适的取代”指所指定的原子上的一个或多个(例如一个、两个、三个或四个)氢被从所指出的基团的选择代替，条件是未超过所指定的原子在当前情况下的正常原子价并且所述取代形成稳定的化合物。取代基和/或变量的组合仅仅当这种组合形成稳定的化合物时才是允许的。
如果取代基被描述为“任选地…被取代”，则取代基可(1)未被取代，或(2)被取代。如果某个原子或基团被描述为任选地被取代基列表中的一个或多个取代，则该原子或基团上的一个或多个氢可被独立地选择的、任选的取代基替代。如果取代基被描述为“独立地选自”或“各自独立地为”，则各取代基互相独立地加以选择。因此，各取代基可与另一(其他)取代基相同或不同。例如，某个取代基或取代位置或者不同的取代基或取代位置具有可能相同或不同符号指代的R基团(例如但不限于R2和/或Rz)的选择时，各个R之间独立地加以选择，即可以相同也可以不同。关于数值如g、n的选择也是如此。
除非指明，否则如本文中所使用，取代基的连接点可来自取代基的任意适宜位置。
当取代基的键显示为穿过环中连接两个原子的键时，则这样的取代基可键连至该可取代的环中的任一成环原子。
本发明还包括所有药学上可接受的同位素标记的化合物，其与本发明的化合物相同，除了一个或多个原子被具有相同原子序数但原子质量或质量数不同于在自然界中占优势的原子质量或质量数的原子替代。适合包含入本发明的化合物中的同位素的实例包括(但不限于)氢的同位素(例如氘(2H)、氚(3H))；碳的同位素(例如13C及14C)；氯的同位素(例如37Cl)；碘的同位素(例如125I)；氮的同位素(例如13N及15N)；氧的同位素(例如17O及18O)；磷的同位素(例如32P)；及硫的同位素(例如34S)。
术语“立体异构体”表示由于至少一个不对称中心形成的异构体。在具有一个或多个(例如一个、两个、三个或四个)不对称中心的化合物中，其可产生外消旋混合物、单一对映异构体、非对映异构体混合物和单独的非对映异构体。特定个别分子也可以几何异构体(顺式/反式)存在。类似地，本发明的化合物可以两种或更多种处于快速平衡的结构不同的形式的混合物(通常称作互变异构体)存在。互变异构体的代表性实例包括酮-烯醇互变异构体、苯酚-酮互变异构体、亚硝基-肟互变异构体、亚胺-烯胺互变异构体等。要理解，本发明的范围涵盖所有这样的以任意比例(例如60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％)的异构体或其混合物。
本文中可使用实线
Figure BDA0003458890760000051
实楔形/>
Figure BDA0003458890760000052
或虚楔形/>
Figure BDA0003458890760000053
描绘本发明的化合物的碳-碳键。使用实线以描绘键连至不对称碳原子的键欲表明，包括该碳原子处的所有可能的立体异构体(例如，特定的对映异构体、外消旋混合物等)。使用实或虚楔形以描绘键连至不对称碳原子的键欲表明，存在所示的立体异构体。当存在于外消旋混合物中时，使用实及虚楔形以定义相对立体化学，而非绝对立体化学。除非另外指明，否则本发明的化合物可以以立体异构体(其包括顺式及反式异构体、光学异构体(例如R及S对映异构体)、非对映异构体、几何异构体、旋转异构体、构象异构体、阻转异构体及其混合物)的形式存在。本发明的化合物可表现一种以上类型的异构现象，且由其混合物(例如外消旋混合物及非对映异构体对)组成。
本发明还涵盖本发明的化合物的所有可能的结晶形式或多晶型物，其可为单一多晶型物或多于一种多晶型物的任意比例的混合物。
还应当理解，本发明的某些化合物可以游离形式存在用于治疗，或适当时，以其药学上可接受的衍生物形式存在。在本发明中，药学上可接受的衍生物包括但不限于，药学上可接受的盐、酯、溶剂合物、代谢物或前药，在将它们向需要其的患者给药后，能够直接或间接提供式(I)的化合物或其代谢物。因此，当在本文中提及“本发明的化合物”时，也意在涵盖化合物的上述各种衍生物形式。
本发明的化合物的药学上可接受的盐包括其酸加成盐及碱加成盐。适合的酸加成盐由形成药学可接受盐的酸来形成。实例包括盐酸盐、乙酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、碳酸氢盐/碳酸盐、葡庚糖酸盐、葡糖酸盐、硝酸盐、乳清酸盐、棕榈酸盐及其它类似的盐。适合的碱加成盐由形成药学可接受盐的碱来形成。实例包括铝盐、精氨酸盐、胆碱盐、镁盐及其它类似的盐。适合的盐的综述参见例如“Remington′s Pharmaceutical Sciences”，MackPublishing Company,Easton,Pa.,(2005)；和“药用盐手册：性质、选择和应用”(Handbookof Pharmaceutical Salts：Properties,Selection,and Use)，Stahl and Wermuth(Wiley-VCH,Weinheim,Germany,2002)。用于制备本发明的化合物的药学上可接受的盐的方法为本领域技术人员已知的。
如本文中所使用，术语“酯”意指衍生自本文所描述的化合物的酯，其包括生理上可水解的酯(可在生理条件下水解以释放游离酸或醇形式的本发明的化合物)。本发明的化合物本身也可以是酯。
本发明的化合物可以溶剂合物(优选水合物)的形式存在，其中本发明的化合物包含作为所述化合物晶格的结构要素的极性溶剂，特别是例如水、甲醇或乙醇。极性溶剂特别是水的量可以化学计量比或非化学计量比存在。
本领域技术人员会理解，由于氮需要可用的孤对电子来氧化成氧化物，因此并非所有的含氮杂环都能够形成N-氧化物。本领域技术人员会识别能够形成N-氧化物的含氮杂环。本领域技术人员还会认识到叔胺能够形成N-氧化物。用于制备杂环和叔胺的N-氧化物的合成方法是本领域技术人员熟知的，包括用过氧酸如过氧乙酸和间氯过氧苯甲酸(mCPBA)、过氧化氢、烷基过氧化氢如叔丁基过氧化氢、过硼酸钠和双环氧乙烷(dioxirane)如二甲基双环氧乙烷来氧化杂环和叔胺。这些用于制备N-氧化物的方法已在文献中得到广泛描述和综述，参见例如：T.L.Gilchrist,Comprehensive Organic Synthesis,vol.7,pp748-750(A.R.Katritzky和A.J.Boulton,Eds.,Academic Press)；以及G.W.H.Cheeseman和E.S.G.Werstiuk，Advances in Heterocyclic Chemistry,vol.22,pp 390-392(A.R.Katritzky和A.J.Boulton,Eds.,Academic Press)。
在本发明的范围内还包括本发明的化合物的代谢物，即在给药本发明的化合物时体内形成的物质。化合物的代谢产物可以通过所属领域公知的技术来进行鉴定，其活性可以通过试验的方法进行表征。这样的产物可由例如被给药的化合物的氧化、还原、水解、酰胺化、脱酰胺化、酯化、酶解等产生。因此，本发明包括本发明的化合物的代谢物，包括通过使本发明的化合物与哺乳动物接触足以产生其代谢产物的时间的方法制得的化合物。
本发明在其范围内进一步包括本发明的化合物的前药，其为自身可具有较小药理学活性或无药理学活性的本发明的化合物的某些衍生物当被给药至身体中或其上时可通过例如水解裂解转化成具有期望活性的本发明的化合物。通常这样的前药会是所述化合物的官能团衍生物，其易于在体内转化成期望的治疗活性化合物。关于前药的使用的其他信息可参见“Pro-drugs as Novel Delivery Systems”，第14卷，ACS Symposium Series(T.Higuchi及V.Stella)。本发明的前药可例如通过用本领域技术人员已知作为“前-部分(pro-moiety)(例如“Design of Prodrugs”，H.Bundgaard(Elsevier,1985)中所述)”的某些部分替代本发明的化合物中存在的适当官能团来制备。
本发明还涵盖含有保护基的本发明的化合物。在制备本发明的化合物的任何过程中，保护在任何有关分子上的敏感基团或反应基团可能是必需的和/或期望的，由此形成本发明的化合物的化学保护的形式。这可以通过常规的保护基实现，例如，在T.W.Greene&P.G.M.Wuts,Protective Groups in Organic Synthesis,John Wiley&Sons,2006中所述的那些保护基，这些参考文献通过援引加入本文。使用本领域已知的方法，在适当的后续阶段可以移除保护基。
本发明还涵盖本文所述化合物的制备方法。应当理解，本发明的化合物可使用下文描述的方法以及合成有机化学领域中已知的合成方法或本领域技术人员所了解的其变化形式来合成。优选方法包括(但不限于)下文所述那些。反应可在适于所使用的试剂和材料且适合于实现转化的溶剂或溶剂混合物中进行。
术语“活性成分”、“治疗剂”，“活性物质”或“活性剂”是指一种化学实体，它可以有效地治疗目标病症或病况的一种或多种症状。
如本文中所使用的术语“有效量”(例如“治疗有效量”或“预防有效量”)指给药后会在一定程度上实现预期效果的活性成分的量，例如缓解所治疗病症的一种或多种症状或预防病症或其症状的出现。
除非另外说明，否则如本文中所使用，术语“治疗”意指逆转、减轻、抑制这样的术语所应用的病症或病况或者这样的病症或病况的一种或多种症状的进展，或预防这样的病症或病况或者这样的病症或病况的一种或多种症状。
如本文所使用的“个体”包括人或非人动物。示例性人个体包括患有疾病(例如本文所述的疾病)的人个体(称为患者)或正常个体。本发明中“非人动物”包括所有脊椎动物，例如非哺乳动物(例如鸟类、两栖动物、爬行动物)和哺乳动物，例如非人灵长类、家畜和/或驯化动物(例如绵羊、犬、猫、奶牛、猪等)。
发明详述
本发明的化合物
在一个方面，本发明提供式(I)的化合物或其药学上可接受的盐、酯、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、同位素标记的化合物、代谢物或前药：
Figure BDA0003458890760000061
其中：
X为直接键或选自S、O、NH和CH2；
Y为直接键或
Figure BDA0003458890760000071
W1、W2和W3各自独立地选自CH和N；
R1选自H、-OH、-NH2、C1-6烷基和C3-6环烷基；
R2在每次出现时各自独立地选自H、卤素、-OH、-OC1-6烷基、-O-C3-6环烷基、-CN、C1-6烷基、C3-6环烷基、C2-6烯基、-S(＝O)g-(C1-6烷基)、-S(＝O)gNH2、-NH2、-NH(C1-6烷基)、-N(C1-6烷基)2、3-12元杂环基、C6-10芳基和5-12元杂芳基，优选的，R2在每次出现时各自独立地选自H、卤素、-OH、-OC1-6烷基、-CN、C1-6烷基、C3-6环烷基、C2-6烯基、-S(＝O)g-(C1-6烷基)、-NH2、-NH(C1-6烷基)、-N(C1-6烷基)2、3-12元杂环基、C6-10芳基和5-12元杂芳基，其中所述烷基、环烷基、烯基、杂环基、芳基和杂芳基各自任选地被一个或多个选自卤素、＝O、-OH、-OC1-6烷基、-CN、C1-6烷基、-S(＝O)g-(C1-6烷基)、-NH2、-NH(C1-6烷基)和-N(C1-6烷基)2的取代基取代；
或者，任意2个R2与它们连接的原子一起形成5-10元烃环、5-10元杂环、5-6元杂芳环或苯环，其中所述烃环、杂环、杂芳环和苯环各自任选地被一个或多个选自-NH2、-NH(C1-6烷基)、-N(C1-6烷基)2、卤素、-CN、＝O、-OH、-OC1-6烷基、卤代C1-6烷基和C1-6烷基的取代基取代；
或者，当X为NH或CH2时，任意一个R2和X与它们连接的原子一起形成5-10元烃环、5-10元杂环、5-6元杂芳环或苯环，其中所述烃环、杂环、杂芳环和苯环各自任选地被一个或多个选自-NH2、-NH(C1-6烷基)、-N(C1-6烷基)2、卤素、-CN、＝O、-OH、-OC1-6烷基、卤代C1-6烷基和C1-6烷基的取代基取代；
R4a、R4b、R5a、R5b、R6a、R6b、R7a和R7b各自独立地选自H、卤素、＝O、-CN、-OH、-COOH、-CONH2、-C(O)O-(C1-6烷基)、C1-6烷基、C3-6环烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、-S(＝O)g-(C1-6烷基)、3-6元杂环基、C6-10芳基和5-10元杂芳基，其中所述的烷基、环烷基、烯基、炔基、杂环基、芳基、杂芳基任选地被一个或多个选自-NH2、-OH、＝O、卤素、-CN、-OC1-4烷基、-NH(C1-6烷基)和-N(C1-6烷基)2的取代基取代，优选被一个或多个选自-NH2、-OH、卤素、-CN、-OC1-4烷基、-NH(C1-6烷基)和-N(C1-6烷基)2的取代基取代；
或者，R4a、R4b、R5a、R5b、R6a、R6b、R7a和R7b中任意两个与它们连接的原子(或直接键)一起形成C3-10烃环或4-12元杂环；
或者，R4a、R7a和R3与它们连接的原子一起形成氮杂金刚烷，任选地被一个或多个选自F、Cl、Br、-OH、＝O、-CN、-C(O)O(C1-6烷基)和C1-6烷基的取代基取代；
R8a、R8b各自独立选自H、卤素、C1-6烷基、C3-6环烷基、3-12元杂环基、C2-6烯基、C2-6炔基、C6-12芳基和5-12元的杂芳基，其中所述的烷基、环烷基、烯基、炔基、杂环基、杂芳基和芳基各自任选地被一个或多个选自-N(Rz)2、-NH2、卤素、-CN、-OH、＝O、-OC1-6烷基、C1-6烷基、卤代C1-6烷基、C3-6环烷基、3-12元杂环基、C6-10芳基和5-10元杂芳基的取代基取代；优选的，所述的烷基、环烷基、烯基、炔基、杂环基、杂芳基和芳基各自任选地被一个或多个选自-N(Rz)2、-NH2、卤素、-CN、-OH、＝O、-OC1-6烷基、C1-6烷基、C3-6环烷基、3-12元杂环基、C6-10芳基和5-10元杂芳基的取代基取代；
或者R8a和R8b与连接的原子(或直接键)一起形成C3-8烃环或3-12元杂环，其中所述的烃环和杂环各自任选地被一个或多个选自-N(Rz)2、-NH2、卤素、-CN、＝O、-OH、-OC1-6烷基、C1-6烷基、C3-6环烷基、3-12元杂环基、C6-10芳基、5-10元杂芳基的取代基取代；
当Y为直接键或
Figure BDA0003458890760000072
且R8a和R8b同时为H时，R3选自-CN、-C1-6亚烷基-Rz、-C1-6亚烷基-ORz、C3-6环烷基、C2-6烯基、C2-6炔基和苯基，其中所述的亚烷基、环烷基、烯基、炔基和苯基各自任选地被一个或多个选自卤素、-CN、＝O、-ORz、-OH、-N(Rz)2、-NH2、C1-6烷基、C3-6环烷基、3-6元杂环基、苯基和5-6元杂芳基的取代基取代；
当Y为
Figure BDA0003458890760000073
且R8a、R8b不同时为H时，R3选自H、卤素、-ORz、-OH、-CN、-C(O)ORz、-COOH、-CON(Rz)2、-CONH2、-C1-6烷基、-C1-6亚烷基-Rz、-C1-6亚烷基-ORz、-C1-6亚烷基-OH、-C1-6亚烷基-N(Rz)2、C3-6环烷基、3-12元的杂环基、C2-6烯基、C2-6炔基、C6-12芳基、5-12元的杂芳基、-S(＝O)g-(C1-6烷基)、-NH2和-N(Rz)2，其中所述的烷基、亚烷基、环烷基、杂环基、烯基、炔基、杂芳基和芳基各自任选地被一个或多个选自卤素、-CN、＝O、-ORz、-OH、-N(Rz)2、-NHRz、-NH2、C1-6烷基、C3-6环烷基、3-12元杂环基、C6-10芳基、5-10元杂芳基、-C(O)ORz、-COOH、-C(O)N(Rz)2、-C(O)NH2和-NO2的取代基取代，优选的，其中所述的烷基、亚烷基、环烷基、杂环基、烯基、炔基、杂芳基和芳基各自任选地被一个或多个选自卤素、-CN、＝O、-ORz、-OH、-N(Rz)2、-NH2、C1-6烷基、C3-6环烷基、3-12元杂环基、C6-10芳基、5-10元杂芳基、-C(O)ORz、-C(O)N(Rz)2、-C(O)NH2和-NO2的取代基取代；
Rz在每次出现时任选自-CN、-NH-C1-6烷基、C1-6烷基、C3-6环烷基、3-12元杂环基、C2-6烯基、C2-6炔基、C6-12芳基和5-12元杂芳基，其中所述的烷基、环烷基、烯基、炔基、杂环基、杂芳基和芳基各自任选地被一个或多个选自-NH2、卤素、-CN、＝O、-NO2、-OH、-OC1-6烷基、C1-6烷基、卤代C1-6烷基、C3-6环烷基、3-12元杂环基、C6-10芳基和5-10元杂芳基的取代基取代；优选的，Rz在每次出现时任选自-CN、C1-6烷基、C3-6环烷基、3-12元杂环基、C2-6烯基、C2-6炔基、C6-12芳基和5-12元杂芳基，其中所述的烷基、环烷基、烯基、炔基、杂环基、杂芳基和芳基各自任选地被一个或多个选自-NH2、卤素、-CN、＝O、-NO2、-OH、-OC1-6烷基、C1-6烷基、C3-6环烷基、3-12元杂环基、C6-10芳基和5-10元杂芳基的取代基取代；
g为0、1或2；
n为0、1、2、3、4或5。
在一些实施方案中，R1选自H、-OH、-NH2、C1-3烷基和C3-6环烷基；在一些优选的实施方案中，R1选自H、-NH2、-CH3和环丙基；在一些更优选的实施方案中，R1选自-CH3和环丙基；在进一步优选的实施方案中，R1选自-CH3。
在一些实施方案中，X选自直接键和S；在一些优选的实施方案中，X为直接键。
在一些实施方案中，W3为CH，W1和W2各自独立选自CH和N；在一些优选的实施方案中，
Figure BDA0003458890760000081
选自/>
Figure BDA0003458890760000082
在一些更优选的实施方案中，/>
Figure BDA0003458890760000083
选自/>
Figure BDA0003458890760000084
在一些实施方案中，R2在每次出现时各自独立地选自H、卤素、-OH、-OC1-6烷基、-O-卤代C1-6烷基、-O-C3-6环烷基、-CN、C1-3烷基、C3-6环烷基、3-6元杂环基、卤代C1-3烷基、-NH2、-NH(C1-3烷基)、-N(C1-3烷基)2、-S(＝O)g-(C1-3烷基)和-S(＝O)gNH2；优选的，R2在每次出现时各自独立地选自H、卤素、-OH、-OC1-6烷基、-CN、C1-3烷基、C3-6环烷基、3-6元杂环基、卤代C1-3烷基和-NH2；在一些优选的实施方案中，R2在每次出现时各自独立地选自H、F、Cl、Br、-OH、-CN、C1-3烷基、-OCH3、-OCHF2、-OCF3、-O-环丙基、-CF3、-CHF2、环丙基、羟基取代的氮杂环丁烷基、吡咯基、吗啉基、-NHCH3、-N(CH3)2、-CH2CN、-NH2、-S-CH3、-S(＝O)2CH3和-S(＝O)2NH2；优选的，R2在每次出现时各自独立地选自H、F、Cl、Br、-OH、C1-3烷基、-OCHF2、-CF3、-CHF2、环丙基、羟基取代的氮杂环丁烷基、吡咯基、吗啉基、-NHCH3、-N(CH3)2、-CH2CN和-NH2；优选的，R2在每次出现时各自独立地选自H、F、Cl、Br、-OH、-CN、C1-3烷基、-OCH3、-OCHF2、-OCF3、-O-环丙基、-CF3、-CHF2、环丙基、吡咯基、吗啉基、-NHCH3、-N(CH3)2、-CH2CN、-NH2、-S-CH3、-S(＝O)2CH3和-S(＝O)2NH2；优选的，R2在每次出现时各自独立地选自H、F、Cl、Br、-OH、C1-3烷基、-OCHF2、-CF3、-CHF2、环丙基、吡咯基、吗啉基、-NHCH3、-N(CH3)2、-CH2CN和-NH2；
在进一步优选的实施方案中，R2在每次出现时各自独立地选自F、Cl、Br、-OH、-OCH3、-OCHF2、-OCF3、-O-环丙基、-CH3、-CF3、-CN、-NH2、-NHCH3、-N(CH3)2、-S-CH3、-S(＝O)2CH3、-S(＝O)2NH2和
Figure BDA0003458890760000085
进一步优选的，R2在每次出现时各自独立地选自F、Cl、Br、-CH3、-CF3、-CN、-NH2和/>
Figure BDA0003458890760000086
进一步优选的，R2在每次出现时各自独立地选自F、Cl、Br、-OH、-OCH3、-OCHF2、-OCF3、-O-环丙基、-CH3、-CF3、-CN、-NH2、-NHCH3、-N(CH3)2、-S-CH3、-S(＝O)2CH3和-S(＝O)2NH2；进一步优选的，R2在每次出现时各自独立地选自F、Cl、Br、-CH3、-CF3、-CN和-NH2。
在一些实施方案中，
Figure BDA0003458890760000087
选自/>
Figure BDA0003458890760000088
R2在每次出现时各自独立地选自F、Cl、Br、-OH、-OCH3、-OCHF2、-OCF3、-O-环丙基、-CH3、-CF3、-CN、-NH2、-NHCH3、-N(CH3)2、-S-CH3、-S(＝O)2CH3和-S(＝O)2NH2，n为1、2或3。在一些优选的实施方案中，/>
Figure BDA0003458890760000091
选自/>
Figure BDA0003458890760000092
/>
Figure BDA0003458890760000093
在一些实施方案中，任意2个R2与它们连接的原子一起形成5-7元烃环、5-7元杂环或5-6元杂芳环，其中所述烃环和杂环各自任选地被一个或多个选自-NH2、F、Cl、-CN、＝O、-OH、-OC1-3烷基、卤代C1-3烷基和C1-3烷基的取代基取代；在一些实施方案中，任意2个R2与它们连接的原子一起形成5-7元烃环或5-7元杂环，其中所述烃环和杂环各自任选地被一个或多个选自-NH2、F、Cl、-CN、＝O、-OH、-OC1-3烷基、卤代C1-3烷基和C1-3烷基的取代基取代；
在一些优选的实施方案中，任意2个R2与它们连接的原子一起形成5-6元烃环、5-6元杂环或5元杂芳环，其中所述烃环和杂环各自任选地被一个或多个选自-NH2、F、Cl、＝O、-OH、-OCH3和-CH3的取代基取代；在一些优选的实施方案中，任意2个R2与它们连接的原子一起形成5-6元烃环或5-6元杂环，其中所述烃环和杂环各自任选地被一个或多个选自-NH2、F、Cl、＝O、-OH、-OCH3和-CH3的取代基取代。
在一些实施方案中，当X为NH或CH2时，任意一个R2和X与它们连接的原子一起形成5-7元烃环或5-7元杂环，其中所述烃环和杂环各自任选地被一个或多个选自-NH2、F、Cl、-CN、＝O、-OH、-OC1-3烷基、卤代C1-3烷基和C1-3烷基的取代基取代；在一些优选的实施方案中，当X为NH或CH2时，任意一个R2和X与它们连接的原子一起形成5-6元烃环或5-6元杂环，其中所述烃环和杂环各自任选地被一个或多个选自-NH2、F、Cl、＝O、-OH、-OCH3和-CH3的取代基取代；在一些实施方案中，当X为NH时，任意一个R2和X与它们连接的原子一起形成吗啉环。
在一些实施方案中，R4a、R4b、R5a、R5b、R6a、R6b、R7a和R7b各自独立地选自H、F、Cl、＝O、-CN、-C(O)O(C1-4烷基)、C1-3烷基，其中所述烷基任选地被一个或多个选自卤素、＝O、-OH和-NH2的取代基取代；在一些优选的实施方案中，R4a、R4b、R5a、R5b、R6a、R6b、R7a和R7b各自独立地选自H、F、Cl、-CH3和-C(O)O(C1-3烷基)；在一些更优选的实施方案中，R4a、R4b、R5a、R5b、R6a、R6b、R7a和R7b各自独立地选自H、-CH3和-C(O)OCH3；在进一步优选的实施方案中，R4a、R4b、R5a、R5b、R6a、R6b、R7a和R7b都为H。
在一些实施方案中，R4a、R4b、R5a、R5b、R6a、R6b、R7a、R7b中任意2个与它们连接的原子(或直接键)一起形成C4-8烃环或4-8元杂环；在一些优选的实施方案中，R4a、R5a、R6a、R7a中任意2个与它们连接的原子一起形成C4-8烃环或4-8元杂环；在进一步优选的实施方案中，R4a和R7a与它们连接的原子一起形成4-6元含氮杂环，或者R5a和R6a与它们连接的原子一起形成C4-6烃环；在进一步优选的实施方案中，R5a和R6a与它们连接的原子一起形成环戊环，且R4a、R4b、R5b、R6a、R7a、R7b均为H。
在一些实施方案中，R4a、R7a和R3与它们连接的原子一起形成氮杂金刚烷；在一些优选的实施方案中，R4a、R7a和R3与它们连接的原子一起形成氮杂金刚烷，且R4b、R5a、R5b、R6a、R6b、R7b均为H。
在一些实施方案中，当Y为直接键或
Figure BDA0003458890760000101
且R8a和R8b同时为H时，R3选自-CN、-C1-3亚烷基-Rz、-C1-3亚烷基-ORz、C3-6环烷基、C2-4烯基、C2-4炔基和苯基，其中所述的亚烷基、环烷基、烯基、炔基和苯基各自任选地被一个或多个选自F、Cl、-CN、＝O、-ORz、-OH、-N(Rz)2、-NH2、C1-4烷基、C3-6环烷基、4-6元杂环基、苯基和5-6元杂芳基的取代基取代；在一些优选的实施方案中，当Y为直接键或/>
Figure BDA0003458890760000102
且R8a和R8b同时为H时，R3选自-CH2CH＝CH2、-CH＝CH2、-CH2C≡CH、-C≡CH、-CH2Rz、-CH2-ORz、-CN、环丙基、环丁基、环丁烯基、环戊基、环己基和苯基，其中所述苯基任选地被一个或两个选自F、Cl、-CN、-OH、-OCH3、-N(CH3)2、-NH(CH3)、-NH2和吡唑基的取代基取代；优选地，当Y为直接键或/>
Figure BDA0003458890760000103
且R8a和R8b同时为H时，R3选自-CH2CH＝CH2、-CH＝CH2、-CH2C≡CH、-C≡CH、-CH2Rz、-CH2-ORz、-CN、环丙基、环丁基、环戊基、环己基和苯基，其中所述苯基任选地被一个或两个选自F、Cl、-CN、-OH、-OCH3、-N(CH3)2、-NH(CH3)、-NH2和吡唑基的取代基取代。
在一些实施方案中，当Y为
Figure BDA0003458890760000104
且R8a、R8b不同时为H时，R3选自H、F、Cl、Br、-ORz、-OH、-CN、C1-6烷基、-C1-4亚烷基-Rz、-C1-4亚烷基-ORz、C3-6环烷基、C2-4烯基、C2-4炔基、苯基、3-8元的杂环基(例如3-6元的杂环基)和5-6元杂芳基，其中所述的烷基、亚烷基、环烷基、烯基、炔基、苯基、杂环基和杂芳基各自任选地被一个或多个选自F、Cl、-CN、＝O、-ORz、-OH、-N(Rz)2、-NHRz、-NH2、C1-4烷基、C3-6环烷基、3-6元杂环基、苯基、5-6元杂芳基的取代基取代；在一些优选的实施方案中，当Y为/>
Figure BDA0003458890760000105
且R8a、R8b不同时为H时，R3选自H、F、Cl、-CF3、-CHF2、-CH2F、-OH、-OCH3、-CH2CH＝CH2、-CH＝CH2、-CH2C≡CH、-C≡CH、-CH3、-CH2CH3、-CH2NHCH3、-CH2Rz、-CH2-ORz、-CH2-OH、-CN、环丙基、环丁基、环戊基、氧杂环丁烷基、/>
Figure BDA0003458890760000106
吗啉基、四氢吡喃基、吡啶基、嘧啶基、噁唑基、噻唑基、吡唑基、噻吩基和苯基，其中所述吡啶基、嘧啶基、噁唑基、噻唑基、吡唑基、噻吩基和苯基任选地被一个或两个选自F、Cl、-CN、-OH、-OCH3、-N(CH3)2、-NH(CH3)、-NH2和吡唑基的取代基取代；优选的，R3选自H、F、Cl、-CF3、-CHF2、-OH、-OCH3、-CH2CH＝CH2、-CH＝CH2、-CH2C≡CH、-C≡CH、-CH3、-CH2Rz、-CH2-ORz、-CH2-OH、-CN、环丙基、环丁基、环戊基、吗啉基、四氢吡喃基、吡啶基、嘧啶基、噻唑基、吡唑基、噻吩基和苯基，其中所述吡啶基、嘧啶基、噻唑基、吡唑基、噻吩基和苯基任选地被一个或两个选自F、Cl、-CN、-OH、-OCH3、-N(CH3)2、-NH(CH3)、-NH2和吡唑基的取代基取代。
在一些实施方案中，Rz在每次出现时任选自-CN、-NH-C1-4烷基、C1-4烷基、-NH-C1-4烷基、C3-6环烷基、3-6元杂环基、苯基和5-6元杂芳基，其中所述的烷基、环烷基、杂环基、苯基和杂芳基各自任选地被一个或多个选自-NH2、F、Cl、-CN、-CH3、-CH2CH3、＝O、-OH、-OC1-3烷基、-CF3、-CHF2、苯基和C3-6环烷基的取代基取代；优选地，Rz在每次出现时任选自-CN、C1-4烷基、C3-6环烷基、3-6元杂环基、苯基和5-6元杂芳基，其中所述的烷基、环烷基、杂环基、苯基和杂芳基各自任选地被一个或多个选自-NH2、F、Cl、-CN、-CH3、-CH2CH3、＝O、-OH、-OC1-3烷基、-CF3、-CHF2、苯基和C3-6环烷基的取代基取代；在一些优选的实施方案中，Rz在每次出现时任选自-CN、-CH3、-CH2CH3、-NHCH3、异丙基、苄基、-CF3、-CHF2、环丙基、环丁基、环戊基、环己基、吗啉基、哌嗪基、氧杂环丁烷基、四氢呋喃基、四氢吡喃基、吡咯烷基、氮杂环丁烷基、吡唑基、噻吩基、噻唑基、噁唑基、咪唑基、三氮唑基、呋喃基、吡嗪基、嘧啶基、吡啶基和苯基，其中所述的哌嗪基、氮杂环丁烷基、吡唑基、噻吩基、噻唑基、噁唑基、咪唑基、三氮唑基、呋喃基、吡嗪基、嘧啶基、吡啶基和苯基各自任选地被一个或两个选自F、Cl、-CN、-CH3、-CH2CH3、-OH和-OCH3的取代基取代；优选的，Rz在每次出现时任选自-CN、-CH3、-CH2CH3、异丙基、苄基、-CF3、-CHF2、环丙基、环丁基、环戊基、环己基、吗啉基、哌嗪基、氧杂环丁基、四氢吡喃基、吡咯烷基、氮杂环丁烷基、吡唑基、噻吩基、噻唑基、噁唑基、咪唑基、三氮唑基、呋喃基、吡嗪基、嘧啶基、吡啶基和苯基，其中所述的哌嗪基、氮杂环丁烷基、吡唑基、噻吩基、噻唑基、噁唑基、咪唑基、三氮唑基、呋喃基、吡嗪基、嘧啶基、吡啶基和苯基各自任选地被一个或两个选自F、Cl、-CN、-CH3、-CH2CH3、-OH和-OCH3的取代基取代。
在一些实施方案中，R8a、R8b各自独立选自H、C1-3烷基、C3-6环烷基、3-6元杂环基、苯环和5-6元的杂芳基，其中所述的烷基、环烷基、杂环基、杂芳基和苯环各自任选地被一个或多个选自-NH2、F、Cl、-CN、-CH3、-CH2CH3、＝O、-OH、-OC1-3烷基、-CF3、-CHF2和C3-6环烷基的取代基取代；在一些优选的实施方案中，R8a、R8b各自独立选自H、-CH3、-CH2CH3、-CH2OCH3、-CF3、-CHF2、-CH2F、异丙基、环丙基、环丁基、环氧乙烷基、氧杂环丁基、苯基、吡啶基、哒嗪基、噻吩基、噻唑基、噁唑基、呋喃基、吡唑基、咪唑基、吡咯基和嘧啶基，其中所述苯基、吡啶基、哒嗪基、噻吩基、噻唑基、噁唑基、呋喃基、吡唑基、咪唑基、吡咯基和嘧啶基各自任选地被一个或多个选自-NH2、F、Cl、-CN、-CH3、-CH2CH3、-OH、-OC1-3烷基、-CF3和-CHF2的取代基取代；优选的，R8a、R8b各自独立选自H、-CH3、-CH2CH3、-CF3、-CHF2、异丙基、环丙基、环丁基、环氧乙烷基、氧杂环丁基、苯基、吡啶基、哒嗪基、噻吩基、噻唑基、噁唑基、呋喃基、吡唑基、咪唑基、吡咯基，其中所述苯基、吡啶基、哒嗪基、噻吩基、噻唑基、噁唑基、呋喃基、吡唑基、咪唑基、吡咯基各自任选地被一个或多个选自-NH2、F、Cl、-CN、-CH3、-CH2CH3、-OH、-OC1-3烷基、-CF3和-CHF2的取代基取代；在更优选的实施方案中，R8a、R8b各自独立选自H、-CH3、-CH2CH3、异丙基、环丙基、-CH2OCH3、-CF3、-CH2F、-CHF2、2-甲基呋喃基、噻唑基、吡啶基和嘧啶基，优选地，R8a、R8b各自独立选自H、-CH3、异丙基、环丙基、-CF3、2-甲基呋喃基、噻唑基、吡啶基和嘧啶基；在进一步优选的实施方案中，R8a、R8b各自独立选自H、-CH3、异丙基和环丙基。
在一些实施方案中，当Y为直接键或
Figure BDA0003458890760000111
且R8a和R8b同时为H时，R3选自-CH2CH＝CH2、-CH＝CH2、-CH2C≡CH、-C≡CH、-CH2Rz、-CH2-ORz、-CN、环丙基、环丁基、环丁烯基、环戊基、环己基和苯基，其中所述苯基任选地被一个或两个选自F、Cl、-CN、-OH、-OCH3、-N(CH3)2、-NH(CH3)、-NH2和吡唑基的取代基取代，Rz在每次出现时任选自-CN、-CH3、-CH2CH3、-NHCH3、异丙基、苄基、-CF3、-CHF2、环丙基、环丁基、环戊基、环己基、吗啉基、哌嗪基、氧杂环丁烷基、四氢呋喃基、四氢吡喃基、吡咯烷基、氮杂环丁烷基、吡唑基、噻吩基、噻唑基、噁唑基、咪唑基、三氮唑基、呋喃基、吡嗪基、嘧啶基、吡啶基和苯基，其中所述的哌嗪基、氮杂环丁烷基、吡唑基、噻吩基、噻唑基、噁唑基、咪唑基、三氮唑基、呋喃基、吡嗪基、嘧啶基、吡啶基和苯基各自任选地被一个或两个选自F、Cl、-CN、-CH3、-CH2CH3、-OH和-OCH3的取代基取代。在一些优选的实施方案中，当Y为直接键或/>
Figure BDA0003458890760000112
且R8a和R8b同时为H时，R3选自-CH2CH＝CH2、-CH＝CH2、-CH2C≡CH、-C≡CH、-CH2-O-苄基、-CH2OCH3、-CH2OC2H5、-CH2-O-CH(CH3)2、-CH2OCHF2、-CH2-环丙基、-CH2-环丁基、-CH2-环戊基、-CH2-环己基、-CH2-O-异丙基、-CN、-CH(NH2)-CH3、-CH2-NH-CH3、环丙基、环丁基、环丁烯基、环戊基、环己基、苯基、苄基、
Figure BDA0003458890760000113
Figure BDA0003458890760000114
Figure BDA0003458890760000121
在一些实施方案中，Y为
Figure BDA0003458890760000122
且R8a为H，R8b选自-CH3、-CH2CH3、异丙基、环丙基、-CH2OCH3、-CF3、-CH2F、-CHF2、2-甲基呋喃基、噻唑基、吡啶基和嘧啶基，R3选自H、F、Cl、-CF3、-CHF2、-CH2F、-OH、-OCH3、-CH2CH＝CH2、-CH＝CH2、-CH2C≡CH、-C≡CH、-CH3、-CH2CH3、-CH2NHCH3、-CH2Rz、-CH2-ORz、-CH2-OH、-CN、环丙基、环丁基、环戊基、氧杂环丁烷基、/>
Figure BDA0003458890760000123
吗啉基、四氢吡喃基、吡啶基、嘧啶基、噁唑基、噻唑基、吡唑基、噻吩基和苯基，Rz在每次出现时任选自-CN、-CH3、-CH2CH3、-NHCH3、异丙基、苄基、-CF3、-CHF2、环丙基、环丁基、环戊基、环己基、吗啉基、哌嗪基、氧杂环丁烷基、四氢呋喃基、四氢吡喃基、吡咯烷基、氮杂环丁烷基、吡唑基、噻吩基、噻唑基、噁唑基、咪唑基、三氮唑基、呋喃基、吡嗪基、嘧啶基、吡啶基和苯基，其中所述的哌嗪基、氮杂环丁烷基、吡唑基、噻吩基、噻唑基、噁唑基、咪唑基、三氮唑基、呋喃基、吡嗪基、嘧啶基、吡啶基和苯基各自任选地被一个或两个选自F、Cl、-CN、-CH3、-CH2CH3、-OH和-OCH3的取代基取代。在一些优选的实施方案中，Y为/>
Figure BDA0003458890760000124
且R8a为H，R8b选自-CH3、-CH2CH3、异丙基、环丙基、-CH2OCH3、-CF3、-CH2F、-CHF2、2-甲基呋喃-5-基、噻唑-2-基、吡啶-3-基、嘧啶-2-基和嘧啶-5-基，R3选自H、F、Cl、-CF3、-CHF2、-CH2F、-OH、-OCH3、-CH2CH＝CH2、-CH＝CH2、-CH2C≡CH、-C≡CH、-CH3、-CH2CH3、-CH2NHCH3、-CH2-OH、-CN、环丙基、环丁基、环戊基、/>
Figure BDA0003458890760000125
在一些实施方案中，R8a、R8b与它们连接的原子(或直接键)一起形成C3-8烃环和3-6元杂环，其中所述的烃环和杂环各自任选地被一个或多个选自-NH2、F、Cl、-CN、-CH3、-CH2CH3、＝O、-OH、-OC1-3烷基、-CF3和-CHF2的取代基取代；在一些优选的实施方案中，R8a和R8b与它们连接的原子(或直接键)一起形成环丙烷、环丁烷、环戊烷或3-6元杂环；在一些更优选的实施方案中，R8a和R8b与它们连接的原子(或直接键)一起形成环丙烷、环丁烷、环戊烷或氧杂环丁烷。
在一些实施方案中，g为0或2。
在一些实施方案中，n为0、1、2或3；在一些优选的实施方案中，n为2或3；在一些更优选的实施方案中，n为2。
在一些实施方案中，本发明的式(I)化合物具有式(II)的结构：
Figure BDA0003458890760000126
其中，各基团如上文所定义。
在一些优选的实施方案中，本发明的式(I)化合物具有式(III)的结构：
Figure BDA0003458890760000131
其中，各基团如上文所定义。
本领域技术人员应当理解，本发明涵盖对各个实施方案进行任意组合所得的化合物。由一个实施方案中的技术特征或优选技术特征与另外的实施方案中的技术特征或优选技术特征组合得到的实施方案也包括在本发明的范围内。
在一些优选的实施方案中，本发明提供化合物或其药学上可接受的盐、酯、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、同位素标记的化合物、代谢物或前药，其中所述化合物选自：
Figure BDA0003458890760000132
/>
Figure BDA0003458890760000141
/>
Figure BDA0003458890760000151
/>
Figure BDA0003458890760000161
/>
Figure BDA0003458890760000171
/>
Figure BDA0003458890760000181
/>
Figure BDA0003458890760000191
/>
Figure BDA0003458890760000201
/>
Figure BDA0003458890760000211
/>
Figure BDA0003458890760000221
/>
Figure BDA0003458890760000231
/>
Figure BDA0003458890760000241
/>
Figure BDA0003458890760000251
在另一方面，本发明提供一种药物组合物，其包含式(I)-(III)(即式(I)、(II)或(III)，下同)的化合物或其药学上可接受的盐、酯、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、同位素标记的化合物、代谢物或前药以及一种或多种药学上可接受的载体。
在又一方面，本发明提供式(I)-(III)的化合物或其药学上可接受的盐、酯、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、同位素标记的化合物、代谢物或前药或者本发明的药物组合物在制备用于预防或治疗SHP2磷酸酶相关疾病的药物中的用途。
在进一步的方面，本发明提供一种用于预防或治疗SHP2磷酸酶相关疾病的方法，所述方法包括向有此需要的个体给予式(I)-(III)的化合物或其药学上可接受的盐、酯、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、同位素标记的化合物、代谢物或前药或者本发明的药物组合物。
在另一方面，本发明提供式(I)-(III)的化合物或其药学上可接受的盐、酯、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、同位素标记的化合物、代谢物或前药或者本发明的药物组合物，用于预防或治疗SHP2磷酸酶相关疾病。
在一些实施方案中，所述SHP2磷酸酶相关疾病为对SHP2磷酸酶抑制敏感或有响应的疾病。在进一步的实施方案中，所述SHP2磷酸酶相关疾病为肿瘤类病症，包括但不限于实体和血液恶性肿瘤。
在另一个方面，本发明进一步提供式(I)-(III)的化合物或其药学上可接受的盐、酯、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、同位素标记的化合物、代谢物或前药或者本发明的药物组合物与另外的治疗方法组合用于预防或治疗SHP2磷酸酶相关疾病的方法，所述另外的治疗方法包括但不限于：放射疗法、化疗疗法，免疫疗法或其组合。
本发明的制备方法
本发明的又一方面还涉及本发明的化合物的制备方法，所述方法包括：
1.使式S-1的化合物与式S-2的化合物反应以生成M-1的化合物；
Figure BDA0003458890760000252
2.使式M-1的化合物与式S-3的化合物反应以生成式M-2的化合物；
Figure BDA0003458890760000261
3.使式M-2的化合物进行脱保护和功能基团转化生成式(I)的化合物；
Figure BDA0003458890760000262
其中，LG1和LG2各自独立地表示卤素离去基团，或者任选地被卤素取代的C1-6烷基磺酸酯基离去基团(例如三氟甲磺酸酯基离去基团)；另外，LG2也可以为羟基；
Rc表示H或离去基团；
Rf为羟甲基或者表示通过一步或多步反应可以转化为羟甲基的功能基团；
PG1表示H或氨基的保护基团(例如甲基、叔丁氧羰基、叔丁基二甲基硅基、三异丙基硅基、苄基和甲氧甲基)；
其余各基团如上文所定义。
在一些优选的实施方案中，LG1表示卤素，如碘或溴；
在一些优选的实施方案中，LG2表示卤素(如溴或氯)或者羟基；
在一些优选的实施方案中，Rc选自H、卤素、硼酸基、硼酸酯基、取代的硅基、取代的金属基团或任选地被卤素取代的C1-6烷基磺酸酯基。在更优选的实施方案中，Rc为硼酸基或硼酸酯基。
在一些优选的实施方案中，Rf表示H、F、Cl、Br、I、保护或未保护的羟甲基或酯基(例如-COOC2H5)；
在步骤1中，反应在金属催化剂的存在下进行。在一些优选实施方案中，金属催化剂为金属钯催化剂或铜催化剂，例如四(三苯基膦)钯、醋酸钯、三(二亚苄基丙酮)二钯、[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯、1,2-双(二苯基膦乙烷)二氯化钯和双(三苯基膦)二氯化钯或碘化亚铜等。
在步骤2中，反应在碱和/或金属催化剂的存在下进行。在一些优选实施方案中，碱为无机碱类，例如磷酸钾。在另一些优选实施方案中，金属催化剂为金属钯催化剂，例如四三苯基膦钯、醋酸钯、三(二亚苄基丙酮)二钯、1,1'-双(二苯基瞵)二氯二茂铁钯、1,2-双二苯基膦乙烷氯化钯和双(三苯基膦)二氯化钯等。
或者，反应在缩合试剂和碱存在下进行。在一些优选实施方案中，碱为有机碱类，例如DBU。在另一些优选实施方案中，缩合试剂为BOP、HATU或PyBOP等，优选为BOP。
在步骤3中，功能基团转化的方法包括但不限于以下反应：1)还原反应(所使用的试剂例如LiBH4、DIBAL-H)；2)金属催化的偶联反应；3)水解反应；脱保护反应可以在酸或催化氢解的条件下进行。在一些优选实施方案中，酸为有机酸类，优选三氟甲酸。在另一些优选的实施方案中，方法2)中采用的金属催化剂为钯碳或氢氧化钯碳。
本发明制备方法的起始原料可来自商业来源或可按照已知方法制备。
本领域技术人员应当理解，根据期望获得的产物结构，可省略以上路线中的一个或多个步骤。本领域技术人员也可根据需要适当地调整反应步骤的顺序，以及增加或省略保护/脱保护反应步骤。
本发明的式(II)和式(III)化合物等均可参考上述实施方案通过类似的方法合成。
药物组合物、制剂和试剂盒
本发明还提供一种药物组合物，其包含式(I)-(III)的化合物或其药学上可接受的盐、酯、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物(例如水合物)、同位素标记的化合物、代谢物或前药以及一种或多种药学上可接受的载体，并可以任选地进一步包含一种或多种用于治疗SHP2磷酸酶相关疾病的第二治疗剂。
本发明的进一步的目的在于提供一种制备本发明的药物组合物的方法，所述方法包括将式(I)-(III)的化合物或其药学上可接受的盐、酯、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、同位素标记的化合物、代谢物或前药、或者它们的混合物与一种或多种药学上可接受的载体组合。该方法还可以进一步包括混合一种或多种用于治疗SHP2磷酸酶相关疾病的第二治疗剂。
在本发明的药物组合物中可使用的药学上可接受的载体包括但不限于无菌液体，例如水和油，包括那些石油、动物、植物或合成来源的油，例如花生油、大豆油、矿物油、芝麻油等。当所述药物组合物通过静脉内给药时，水是示例性载体。还可以使用生理盐水和葡萄糖及甘油水溶液作为液体载体，特别是用于注射液。药学上可接受的载体包括药物赋形剂。适合的药物赋形剂包括但不限于淀粉、葡萄糖、乳糖、蔗糖、明胶、麦芽糖、白垩、硅胶、硬脂酸钠、单硬脂酸甘油酯、滑石、氯化钠、脱脂奶粉、甘油、丙二醇、水、乙醇等。所述组合物还可以视需要包含少量的湿润剂、乳化剂、润滑剂、稳定剂或pH缓冲剂等。口服制剂可以包含标准载体，如药物级的甘露醇、乳糖、淀粉、硬脂酸镁、糖精钠、纤维素、碳酸镁等。适合的药学上可接受的载体的实例如在Remington’s Pharmaceutical Sciences(2005)中所述。
药物组合物可以以任意形式施用，只要其实现预防、减轻、防止或者治愈人类或动物患者的症状。例如，可根据给药途径制成各种适宜的剂型。
当口服用药时，所述药物组合物可制成任意口服可接受的制剂形式，包括但不限于片剂、胶囊剂、颗粒剂、丸剂、糖浆剂、口服溶液剂、口服混悬剂和口服乳剂等。当经皮或局部施用时，所述药物组合物可制成适当的软膏、洗剂或搽剂形式，其中活性成分可以悬混或溶解于一种或多种载体中。
所述药物组合物还可以注射剂形式用药，包括注射液、注射用无菌粉末与注射用浓溶液。
在另一些实施方案中，本发明的化合物或药物组合物的施用可以与另外的治疗方法组合。所述另外的治疗方法可以选自，但不限于：放射疗法、化疗疗法、免疫疗法，或其组合。可以是在另外的治疗方法实施前、实施期间或实施后施用本发明的化合物或药物组合物。另外的治疗方法的实施与本发明的化合物或药物组合物的施用可以同时进行，也可以前后紧密连接地进行，也可以相隔一段时间进行，其施用的方式与顺序可以根据具体治疗情况进行选择和调整。
本发明的另一方面还涉及一种药物制剂，其包含式(I)-(III)的化合物、其药学上可接受的盐、酯、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、同位素标记的化合物、代谢物或前药、或它们的混合物作为活性成分，或者本发明的药物组合物。在一些实施方案中，所述制剂的形式为固体制剂、半固体制剂、液体制剂或气态制剂。
本发明的进一步的目的在于提供一种制品，例如以试剂盒形式提供。本文所用的制品意图包括但不限于药盒和包装。本发明的制品包含：(a)第一容器；(b)位于第一容器中的药物组合物，其中所述组合物包含：第一治疗剂，包括：式(I)-(III)的化合物或其药学上可接受的盐、酯、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、同位素标记的化合物、代谢物或前药、或者它们的混合物；和(c)任选存在的包装说明书，其说明所述药物组合物可用于治疗肿瘤病症(如前文所定义)。在另一些实施方案中，所述包装说明书说明所述药物组合物可与第二治疗剂联用以治疗肿瘤病症。
所述包装说明书为商标、标签、标示等，其列举了与位于所述第一容器内的药物组合物相关的信息。所列出的信息通常由管辖待销售所述制品的区域的管理机构(例如美国食品与药品管理局)决定。优选所述包装说明书具体列出了所述药物组合物获准用于的适应症。所述包装说明书可由任何材料制成，可从所述材料上读取包含于其中或其上的信息。优选所述包装说明书为可印刷材料(例如纸、塑料、卡纸板、箔、胶粘纸或塑料等)，其上可形成(例如印刷或施涂)所需信息。
治疗方法和用途
本发明的另一目的在于提供一种预防或治疗SHP2磷酸酶相关疾病的方法，所述方法包括向有此需要的个体给药有效量的式(I)-(III)的化合物或其药学可接受的盐、酯、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、代谢物或前药、或者它们的混合物，或者本发明的药物组合物。
根据本发明的一些实施方案，所述的SHP2磷酸酶相关疾病为对SHP2磷酸酶抑制敏感或有响应的疾病。在进一步的实施方案中，所述SHP2磷酸酶相关疾病为肿瘤类病症，包括但不限于实体和血液恶性肿瘤。在进一步的实施方案中，所述肿瘤类病症包括但不限于乳腺癌、结肠直肠癌、结肠癌、肺癌(包括小细胞肺癌、非小细胞肺癌和细支气管肺泡癌)和前列腺癌，以及胆管癌、骨癌、膀胱癌、头颈癌、肾癌、肝癌、胃肠组织癌、食道癌、卵巢癌、胰腺癌、皮肤癌、睾丸癌、甲状腺癌、子宫癌、宫颈癌和外阴癌，以及白血病(包括慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)和慢性骨髓性白血病(CML))、多发性骨髓瘤和淋巴瘤。
在一些优选的实施方案中，所述疾病为实体肿瘤，例如乳腺癌、结肠直肠癌、结肠癌、肺癌(包括小细胞肺癌、非小细胞肺癌和细支气管肺泡癌)和前列腺癌，以及胆管癌、骨癌、膀胱癌、头颈癌、肾癌、肝癌、胃肠组织癌、食道癌、卵巢癌、胰腺癌、皮肤癌、睾丸癌、甲状腺癌、子宫癌、宫颈癌和外阴癌。在进一步优选的实施方案中，本发明的化合物可以与放化疗或免疫疗法联用以预防或治疗癌症。
可调整给药方案以提供最佳所需响应。例如，以注射剂形式用药时，可给药单次推注、团注和/或连续输注，等等。例如，可随时间给药数个分剂量，或可如治疗情况的急需所表明而按比例减少或增加剂量。要注意，剂量值可随要减轻的病况的类型及严重性而变化，且可包括单次或多次剂量。一般地，治疗的剂量是变化的，这取决于所考虑的事项，例如：待治疗患者的年龄、性别和一般健康状况；治疗的频率和想要的效果的性质；组织损伤的程度；症状的持续时间；以及可由各个医师调整的其它变量。要进一步理解，对于任何特定个体，具体的给药方案应根据个体需要及给药组合物或监督组合物的给药的人员的专业判断来随时间调整。可以通过临床领域的普通技术人员容易地确定所述药物组合物的施用量和施用方案。例如，本发明的组合物或化合物可以以分剂量每天4次至每3天给药1次，给药量可以是例如0.01～1000mg/次。可以以一次或多次施用需要的剂量，以获得需要达到的结果。也可以以单位剂量形式提供根据本发明的药物组合物。
有益效果
本发明提供一类新型的高活性SHP2抑制剂，能够实现下述至少一种技术效果：
(1)对SHP2磷酸酶的高抑制活性。
(2)优异的物理化学性质(例如溶解度、物理和/或化学稳定性)。
(3)优异的药物代谢动力学性质(例如良好的生物利用度、合适的半衰期和作用持续时间)。
(4)优异的安全性(较低的毒性和/或较少的副作用，较宽的治疗窗)等。
具体实施方式
实施例
以下列举实施例和试验例，进而详细地说明本发明，但它们不限制本发明的范围，另外在不脱离本发明的范围下可进行变化。
质谱(MS)的测定使用Agilent(ESI)质谱仪，生产商：Agilent，型号：Agilent6120B。
制备高效液相色谱法(HPLC)使用岛津LC-8A制备液相色谱仪(YMC,ODS,250×20mm色谱柱)。
薄层色谱法纯化采用烟台产GF 254(0.4～0.5nm)硅胶板。
反应的监测采用薄层色谱法(TLC)或液相色谱质谱联用(LC-MS)，使用的展开剂体系包括但不限于：二氯甲烷和甲醇体系、正己烷和乙酸乙酯体系和石油醚和乙酸乙酯体系，溶剂的体积比根据化合物的极性不同而进行调节，或者加入三乙胺等进行调节。
柱色谱法一般使用青岛海洋200～300目硅胶为固定相。洗脱剂体系包括但不限于二氯甲烷和甲醇体系以及正己烷和乙酸乙酯体系，溶剂的体积比根据化合物的极性不同而进行调节，也可以加入少量的三乙胺等进行调节。
如实施例中无特殊说明，则反应的温度为室温(20℃～30℃)。
除非特别指明，实施例中所使用的试剂购自Acros Organics、Aldrich ChemicalCompany、南京药石科技或者上海书亚医药科技等公司。
本文中所使用的缩写具有以下含义：
Figure BDA0003458890760000281
Figure BDA0003458890760000291
实施例1：6-(2,3-二氯苯基)-3-羟基-5-甲基吡嗪-2-羧酸乙酯(IM-1)的制备
Figure BDA0003458890760000292
第一步：3-羟基-5-甲基吡嗪-2-羧酸乙酯(1-2)的制备
将1,2-丙二胺(23.4g,315mmol)溶于乙醇(500mL)中，冷却至0℃，随后缓慢滴加羰基丙二酸二乙酯(50g,287mmol)，30min内加完。在该温度下搅拌1小时，随后升温至85℃反应24小时。反应完毕后，浓缩，硅胶柱层析纯化(乙酸乙酯/石油醚＝0～50％)得到固体，该固体用MTBE(100mL)打浆，过滤得化合物1-2(14g，收率27％)。
第二步：6-溴-3-羟基-5-甲基吡嗪-2-羧酸乙酯(1-3)的制备
将1-2(18.0g,98.8mmol)溶于二氯甲烷(150mL)中，冰浴条件下缓慢加入N-溴代丁二酰亚胺(17.6g,98.8mmol)，移至室温反应2小时。反应结束后，浓缩，经硅胶柱层析纯化(二氯甲烷/石油醚＝0-50％)得标题化合物(21.2g，收率82％)。
第三步：6-(2,3-二氯苯基)-3-羟基-5-甲基吡嗪-2-羧酸乙酯(IM-1)的制备
将1-3(4.1g,15.3mmol)、2,3-二氯苯硼酸(4.39g,22.9mmol)、碳酸钾(10.6g,76.6mmol)和双三苯基磷二氯化钯(1.08g,1.53mmol)加入到甲苯(120mL)和乙醇(180mL)的混合溶剂中，抽真空，氮气置换三次，体系升温至90℃反应18小时。原料反应完后，冷却至室温，浓缩，除去大量的乙醇和甲苯，加水，用3N HCl调节体系pH约为2。将反应液垫硅藻土过滤，乙酸乙酯萃取，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，硅胶柱层析纯化(乙酸乙酯/石油醚＝0-30％)得标题化合物(2.9g，收率57％)。
实施例2：(R)-4-(1-氨乙基)-1-(5-(2,3-二氯苯基)-3-(羟甲基)-6-甲基吡嗪-2-基)哌啶-4-腈(TM1)的制备
Figure BDA0003458890760000301
第一步：(S,E)-N-亚乙基-2-甲基丙基-2-亚磺酰胺(2-2)的制备
将(S)-叔丁基亚磺酰胺(0.50g,4.13mmol)溶于干燥的THF(15mL)中，加入乙醛(363mg,8.25mmol,1.6mL)和钛酸四异丙酯(2.34g,8.25mmol,2.4mL)，氮气置换三次，25℃反应18小时。反应结束后，加水淬灭反应，乙酸乙酯萃取三次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，硅胶柱层析纯化(乙酸乙酯/石油醚＝0-30％)得标题化合物(0.50g，收率82％)。
第二步：4-氰基-4-((R)-1-((S)-1,1-二甲基乙基亚磺酰氨基)乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(2-3)的制备
将4-氰基哌啶-1-羧酸叔丁酯(3.86g,18.3mmol)溶于THF(15mL)中，氮气保护，冷却至-78℃，滴加LiHMDS(3.38g,20.2mmol,20mL)，在该温度下反应30分钟，再加入2-2(0.90g,6.11mmol)，在该温度下继续反应2小时，然后缓慢升至室温反应5小时。反应结束后，加饱和氯化铵淬灭反应，乙酸乙酯萃取三次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，硅胶柱层析纯化(乙酸乙酯/石油醚＝0-50％)得标题化合物(1.00g，收率46％)。
第三步：(R)-4-(1-氨基乙基)哌啶-4-腈盐酸盐(2-4)的制备
将2-3(0.90g,2.52mmol)溶于HCl(1,4-二氧六环中4M，5mL)中，25℃反应2小时。反应结束后，直接浓缩，得标题化合物(0.45g，收率94％)。
第四步：(R)-3-(4-(1-氨乙基)-4-氰基哌啶-1-基)-6-(2,3-二氯苯基)-5-甲基吡嗪-2-羧酸乙酯(2-5)的制备
将IM-1(100mg,0.31mmol)溶于DMF(3mL)中，依次加入2-4(56.2mg,0.37mmol)、卡特缩合剂(274.4mg,0.62mmol)和DBU(232.9mg,1.53mmol)，氮气置换三次，加热至25℃反应2小时。反应结束后，浓缩，硅胶柱层析纯化(乙酸乙酯/石油醚＝0-50％)得标题化合物(50mg，收率35％)。
第五步：(R)-4-(1-氨乙基)-1-(5-(2,3-二氯苯基)-3-(羟甲基)-6-甲基吡嗪-2-基)哌啶-4-腈(TM1)的制备
将2-5(50.0mg,0.11mmol)溶于THF(3mL)中，氮气保护，0℃加入LiBH4(1.62mmol,0.5mL)，移至室温反应1小时。反应结束后，加2N稀盐酸淬灭反应，浓缩，粗产品经反相HPLC(流动相A：乙腈，流动相B：0.05％甲酸水溶液)制备得标题化合物(24.1mg,收率52％)。
MS m/z(ESI):420.1[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.16(s,1H),7.74(m,1H),7.57–7.30(m,2H),5.36(s,1H),4.51(s,2H),3.99–3.84(m,2H),3.07–2.86(m,3H),2.21(s,3H),2.17–2.09(m,1H),1.97–1.87(m,1H),1.83–1.65(m,2H),1.25–1.12(d,J＝6.0Hz,3H).
实施例3：(3-(4-(氨基甲基)-4-((苄氧基)甲基)哌啶-1-基)-6-(2,3-二氯苯基)-5-甲基吡嗪-2-基)甲醇(TM2)的制备
Figure BDA0003458890760000311
第一步：4-((苄氧基)甲基)-4-氰基哌啶-1-羧酸叔丁基酯(3-2)的合成
将4-氰基哌啶-1-羧酸叔丁酯(8.73g,41.5mmol)溶于干燥的THF(150mL)中，氮气保护下冷却到-78℃，慢慢加入LDA(THF中2M,21mL)，加完后在该温度下反应1小时。将苄基氯甲基醚(5g,31.9mmol)溶于干燥的THF(20mL)后，慢慢加入到该溶液中，加完后升温到室温反应2小时。反应完成后，加入100mL饱和碳酸氢钠溶液淬灭反应，用二氯甲烷(100mL x3)萃取，合并有机相用饱和食盐水洗涤(100mL×2)，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸干溶剂得粗品，粗品经硅胶柱色谱法纯化得化合物3-2(6g,收率86％)。
第二步：4-((苄氧基)甲基)哌啶-4-腈(3-3)的合成
将3-2(100mg,0.30mmol)溶于二氯甲烷(10mL)中，加入TFA(10mL)，室温下搅拌2小时。反应完成后减压蒸干溶剂得化合物3-3的三氟乙酸盐(65mg,收率62％)。
第三步：3-(4-((苄氧基)甲基)-4-氰基哌啶-1-基)-6-(2,3-二氯苯基)-5-甲基吡嗪-2-羧酸乙酯(3-4)的合成
除在本步骤中使用3-3代替实施例2中第四步的2-4外，采用与实施例2中第四步所描述的类似方法合成3-4。
第四步：(3-(4-(氨基甲基)-4-((苄氧基)甲基)哌啶-1-基)-6-(2,3-二氯苯基)-5-甲基吡嗪-2-基)甲醇(TM2)的合成
将3-4(20.1mg,0.037μmol)溶于二氯甲烷(10mL)中，冰浴条件下慢慢加入DIBAL-H(己烷中1M,0.5mL)，加完后慢慢升温到室温反应1小时。反应完成后向反应液中加入饱和碳酸氢钠溶液(10mL)，充分搅拌后有固体析出，过滤，滤液分液。水相用二氯甲烷(10mL×3)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸干溶剂得粗品，粗品经反相HPLC(流动相A：乙腈，流动相B：0.05％甲酸水溶液)制备得标题化合物(3.24mg,收率17％)。
MS m/z(ESI):501.1[M+H]+
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.54(s,1H),7.63(dd,J＝7.6,1.5Hz,1H),7.44–7.28(m,7H),4.64(s,2H),4.58(s,2H),3.57(s,2H),3.43–3.38(m,2H),3.29–3.21(m,2H),2.92(s,2H),2.24(s,3H),1.78–1.66(m,4H).
实施例4：(3-(4-(氨基甲基)-4-(甲氧基甲基)哌啶-1-基)-6-(2,3-二氯苯基)-5-甲基吡嗪-2-基)甲醇(TM3)的制备
Figure BDA0003458890760000312
第一步：4-氰基-4-(羟甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(4-1)的合成
将3-2(2g,6.05mmol)溶于EtOH(50mL)中，加入10％的钯碳(400mg)，在氢气环境中常压加热到70℃反应6小时。反应完成后过滤，浓缩滤液，减压蒸干溶剂得粗品，粗品经硅胶柱色谱法纯化得化合物4-1(550mg,收率38％)。
第二步：4-氰基-4-(甲氧基甲基)哌啶-1-羧酸叔丁基酯(4-2)的合成
将4-1(200mg,0.83mmol)溶于干燥的THF(10mL)中，冰浴下加入NaH(166mg,4.16mmol,60％)，并在该温度下搅拌1小时，然后加入碘甲烷(236mg,1.66mmol)，加完后升温到室温反应2小时。反应完成后用10mL的水淬灭反应，用二氯甲烷(10mL×3)萃取，合并有机相用饱和食盐水洗涤(10mL×2)，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸干溶剂得化合物4-2(110mg,收率52％)。
第三步至第五步：(3-(4-(氨基甲基)-4-(甲氧基甲基)哌啶-1-基)-6-(2,3-二氯苯基)-5-甲基吡嗪-2-基)甲醇(TM3)的合成
除在第三步中使用4-2代替实施例3中第二步的3-2外，采用与实施例3中第二步至第四步所描述的类似方法合成TM3。
MS m/z(ESI):425.1[M+H]+
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.55(s,1H),7.63(dd,J＝7.6,1.2Hz,1H),7.41(t,J＝7.6Hz,1H),7.34(dd,J＝7.6,1.2Hz,1H),4.66(s,2H),3.52(s,2H),3.48–3.39(m,5H),3.40–3.33(m,2H),2.96(s,2H),2.25(s,3H),1.84–1.61(m,4H).
实施例5：(3-(4-(氨基甲基)-4-(乙氧基甲基)哌啶-1-基)-6-(2,3-二氯苯基)-5-甲基吡嗪-2-基)甲醇(TM4)的制备
Figure BDA0003458890760000321
除在本实施例第一步中使用碘乙烷代替实施例4中第二步的碘甲烷外，采用与实施例4中第二步至第五步所描述的类似方法合成TM4。
MS m/z(ESI):439.1[M+H]+
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.54(s,1H),7.64(dd,J＝7.6,1.2Hz,1H),7.42(t,J＝7.6Hz,1H),7.34(dd,J＝7.6,1.2Hz,1H),4.66(s,2H),3.60–3.56(m,4H),3.51–3.43(m,2H),3.40–3.33(m,2H),3.05(s,2H),2.25(s,3H),1.82–1.69(m,4H),1.24(t,J＝6.8Hz,3H).
实施例6：(3-(4-(氨基甲基)-4-((2-氯噻唑-4-基)甲基)哌啶-1-基)-6-(2,3-二氯苯基)-5-甲基吡嗪-2-基)甲醇(TM5)的制备
Figure BDA0003458890760000322
第一步：(2-氯噻唑-4-基)甲醇(6-2)的制备
将2-氯噻唑-4-甲酸乙酯(2.0g,10.4mmol)溶于二氯甲烷(50mL)，冷却到0℃后慢慢加入DIBAL-H(己烷中2M,10mL)，加完后在该温度下反应30分钟。反应完成后慢慢向反应液中加入饱和碳酸氢钠溶液(100mL)淬灭反应，用二氯甲烷(100mL×3)萃取，合并有机相并用饱和氯化钠溶液洗涤(100mL×2)，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸干溶剂得6-2(1.2g,收率77％)。
第二步：(2-氯噻唑-4-基)甲基甲磺酸酯(6-3)的制备
将6-2(1.2g,8.02mmol)溶于二氯甲烷(20mL)中，加入三乙胺(0.81g,8.02mmol)，搅拌条件下慢慢加入甲磺酰氯(0.92g,8.02mmol)，加完后室温搅拌30分钟，反应完成后，向反应液中加入水(20mL)淬灭反应，充分搅拌后分液，有机相用无水硫酸钠干燥后过滤，减压蒸干溶剂得粗品，粗品经硅胶柱色谱法纯化得化合物6-3(1.3g,收率71％)。
第三步：1-叔丁基4-乙基4-((2-氯噻唑-4-基)甲基)哌啶-1,4-二羧酸酯(6-4)的制备
在氮气保护下，将N-叔丁氧羰基-4-哌啶甲酸乙酯(0.28g,1.09mmol)溶于无水THF(20mL)中，冷却至-78℃，慢慢加入LDA(0.6mL,THF中2M)，加完后保温搅拌0.5小时。往反应液中慢慢加入6-3(0.19g,1.12mmol)，加完后自然升温到室温反应4小时。反应完全后向反应液中加入饱和氯化铵溶液，充分搅拌后，加入适量的DCM，充分搅拌后分液，有机相干燥浓缩后柱层析纯化得到化合物6-4(0.21g,收率50％)。
第四步：1-(叔丁氧羰基)-4-((2-氯噻唑-4-基)甲基)哌啶-4-羧酸(6-5)的制备
将6-4(0.15g,0.38mmol)溶于10mL甲醇中，加入氢氧化钠水溶液(5mL,1M)，加热至60℃反应4小时。反应完成后冷至0℃，用2M稀盐酸调节pH至4～5，然后加入DCM萃取，有机相用无水硫酸钠干燥后过滤，滤液浓缩并经用柱层析纯化得化合物6-5(100mg,收率72％)。
第五步：4-氨基甲酰基-4-((2-氯噻唑-4-基)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(6-6)的制备
将6-5(100mg,0.28mmol)、氯化铵(29.7mg,0.55mmol)、EDCI(63.8mg,0.33mmol)和HOBT(44.9mg,0.33mmol)溶于二氯甲烷(10mL)中，再加入DIPEA(107.4mg,0.83mmol)，加完后室温搅拌4小时。反应完成后加入水(20mL)，充分搅拌后分液，水相用二氯甲烷(20mL)萃取，合并有机相用饱和食盐水洗涤(20mL)，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸干溶剂得粗品，粗品经硅胶柱色谱法纯化得化合物6-6(80mg,收率80％)。
第六步：4-((2-氯噻唑-4-基)甲基)-4-氰基哌啶-1-羧酸叔丁酯(6-7)的制备
将6-6(40.1mg,0.11mmol)加入到二氯甲烷(10mL)中，加入TEA(45.0mg,444.60μmol)，然后慢慢加入TFAA(70.04mg,333.45μmol)，室温下反应1小时。反应完成后加入水(20mL)，充分搅拌后分液，水相用二氯甲烷(20mL)萃取，合并有机相用饱和食盐水洗涤(20mL)，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸干溶剂得粗品，粗品经硅胶柱色谱法纯化得化合物6-7(30mg,收率78％)。
第七步至第九步：(3-(4-(氨基甲基)-4-((2-氯噻唑-4-基)甲基)哌啶-1-基)-6-(2,3-二氯苯基)-5-甲基吡嗪-2-基)甲醇(TM5)的制备
除在第七步中使用6-7代替实施例3中第二步的3-2外，采用与实施例3中第二步至第四步所描述的类似方法合成TM5。
MS m/z(ESI):512.1[M+H]+
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.63(dd,J＝7.6,1.2Hz,1H),7.41(t,J＝7.6Hz,1H),7.35(dd,J＝7.6,1.2Hz,1H),7.28(s,1H),4.66(s,2H),3.45–3.42(m,4H),2.93(s,2H),2.68(s,2H),2.25(s,3H),1.68–1.64(m,4H).
实施例7：4-(氨基甲基)-1-(5-(2,3-二氯苯基)-3-(羟甲基)-6-甲基吡嗪-2-基)哌啶-4-腈(TM6)的制备
Figure BDA0003458890760000331
第一步：4-(氨基甲基)-4-氰基哌啶-1-羧酸苄酯(7-1)的制备
将4-氰基哌啶-1-羧酸苄酯(7-0)(2g,8.19mmol)溶于四氢呋喃(30mL)，降温至-78℃，滴加入LiHMDS(THF中1M,13.10mL)，-78℃反应1小时后加入多聚甲醛(516.30mg,17.2mmol)，自然升温至25℃反应16小时，LC-MS检测反应完全后加入饱和氯化铵溶液，乙酸乙酯萃取，有机相合并干燥浓缩，经HPLC(流动相A：乙腈，流动相B：0.05％甲酸水溶液)制备得7-1(1.4g,收率62％)。
第二步：4-(((叔丁氧基羰基)氨基)甲基)-4-氰基哌啶-1-羧酸苄酯(7-2)的制备
将7-1(5.58g,20.4mmol)溶于二氯甲烷(100mL)，加入二碳酸二叔丁酯(6.68g,30.6mmol)和三乙胺(4.13g,40.8mmol)，25℃反应1.5小时，LC-MS检测反应完全后向反应液中加入水，二氯甲烷萃取，有机相合并干燥浓缩，得7-2(7.6g,收率99％)，直接用于下一步反应。
第三步：((4-氰基哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(7-3)的制备
将7-2(1g,2.68mmol)溶于甲醇(70mL)，加入10％Pd/C(0.2g)，氢气置换后在氢气球保护下，25℃反应30分钟，LC-MS检测反应完全后将反应液垫硅藻土过滤，滤液浓缩，得7-3(0.64g,收率99％)，直接用于下一步反应。
第四步：3-(4-(((叔丁氧羰基)氨基)甲基)-4-氰基哌啶-1-基)-6-(2,3-二氯苯基)-5-甲基吡嗪-2-羧酸乙酯(7-4)的制备
将IM-1(200mg,0.61mmol)溶于DMF(6mL)，加入7-3(175mg,0.73mmol)、BOP(407mg,0.92mmol)和DBU(196mg,1.22mmol)，25℃反应1小时，LC-MS检测反应完全后向反应液加入水，乙酸乙酯萃取，有机相合并干燥浓缩，经制备型TLC(二氯甲烷:甲醇＝20:1)纯化得固体7-4(120mg,收率36％)。
第五步：3-(4-(氨基甲基)-4-氰基哌啶-1-基)-6-(2,3-二氯苯基)-5-甲基吡嗪-2-羧酸乙酯(7-5)的制备
将7-4(150mg,0.27mmol)溶于二氯甲烷(4mL)，加入三氟乙酸(2mL)，25℃反应1小时，LC-MS检测反应完全后将反应液浓缩，得7-5的三氟乙酸盐(150mg,收率98％)，直接用于下一步反应。
第六步：4-(氨基甲基)-1-(5-(2,3-二氯苯基)-3-(羟甲基)-6-甲基吡嗪-2-基)哌啶-4-腈(TM6)的制备
将7-5(70mg,0.12mmol)溶于干燥四氢呋喃(3mL)，降温至0℃，滴加入LiBH4(2M,0.31mL)，0℃反应10分钟，LC-MS检测反应完全后将反应液浓缩，经HPLC(流动相A：乙腈，流动相B：0.05％甲酸水溶液)纯化得标题化合物(6mg,收率12％)。
MS m/z(ESI):405.8[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.74(dd,J＝7.6,1.2Hz,1H),7.48(t,J＝7.6Hz,1H),7.42(dd,J＝7.6,1.2Hz,1H),5.35(s,1H),4.51(d,J＝4.0Hz,2H),3.89(d,J＝13.6Hz,2H),3.03(t,J＝12.4Hz,2H),2.84(s,2H),2.21(s,3H),2.00(d,J＝13.6Hz,1H),1.74–1.64(m,2H).
实施例8：4-(氨基甲基)-1-(5-((2,3-二氯苯基)硫基)-3-(羟甲基)-6-甲基吡嗪-2-基)哌啶-4-腈(TM7)的制备
Figure BDA0003458890760000341
第一步：6-溴-3-(4-(((叔丁氧基羰基)氨基)甲基)-4-氰基哌啶-1-基)-5-甲基吡嗪-2-羧酸乙酯(8-1)的制备
将1-3(0.75g,2.87mmol)溶于DMF(10mL)，加入8-0(0.82g,3.42mmol)、BOP(1.65g,3.73mmol)和DBU(0.66g,4.31mmol)，25℃反应1小时，LC-MS检测反应完全后向反应液中加入水，乙酸乙酯萃取，有机相合并干燥浓缩，经制备型TLC(石油醚:乙酸乙酯＝1:1)纯化得固体8-1(194mg,收率14％)。
第二步：3-(4-(((叔丁氧基羰基)氨基)甲基)-4-氰基哌啶-1-基)-6-((2,3-二氯苯基)硫基)-5-甲基吡嗪-2-羧酸乙酯(8-2)的制备
将8-1(50mg,0.10mmol)溶于二氧六环(8mL)，加入2,3-二氯苯硫酚(22.3mg,0.12mmol)、磷酸钾(66.0mg,0.31mmol)、碘化亚铜(19.7mg,0.11mmol)和1,10-菲罗啉(18.9mg,0.10mmol)，氮气置换后加热至100℃反应12小时，LC-MS检测反应完全后将反应液过滤，滤液浓缩，经制备型TLC(石油醚:乙酸乙酯＝3:1(V:V))纯化得固体8-2(55mg,收率91％)。
第三步：4-(氨基甲基)-1-(5-((2,3-二氯苯基)硫基)-3-(羟甲基)-6-甲基吡嗪-2-基)哌啶-4-腈(TM7)的制备
将8-2(45mg,77.52μmol)溶于四氢呋喃(8mL)，降温至0℃，滴加入LiBH4(2M,0.58mL)，0℃反应30分钟后升温至25℃反应30分钟，LC-MS检测反应完全后将反应液滴加入3M盐酸中，25℃搅拌30分钟，LC-MS检测移除Boc的反应完全，将反应液经HPLC(流动相A：乙腈，流动相B：0.05％三氟乙酸水溶液)纯化得标题化合物的三氟乙酸盐(5mg,收率12％)。
MS m/z(ESI):437.8[M+H]+
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.43(dd,J＝7.6,1.2Hz,1H),7.19(t,J＝7.6Hz,1H),7.01(dd,J＝7.6,1.2Hz,1H),4.59(s,2H),3.99(d,J＝13.6Hz,2H),3.31–3.21(m,4H),2.51(s,3H),2.14–2.04(m,2H),1.94–1.84(m,2H).
实施例9：4-(氨基甲基)-1-(5-(2,3-二氯吡啶-4-基)-3-(羟甲基)-6-甲基吡嗪-2-基)哌啶-4-腈(TM8)的制备
Figure BDA0003458890760000351
第一步：3-(4-(((叔丁氧羰基)氨基)甲基)-4-氰基哌啶-1-基)-6-(2,3-二氯吡啶-4-基)-5-甲基吡嗪-2-羧酸乙酯(9-1)的制备
将8-1(80.1mg,0.17mmol)溶于二氧六环(10mL)，加入(2,3-二氯吡啶-4-基)硼酸(63.6mg,0.33mmol)、碳酸钾(114.6mg,0.83mmol)和双三苯基磷二氯化钯(11.6mg,0.17mmol)，氮气置换后加热至90℃反应2小时，LC-MS检测反应完全后将反应液浓缩，经制备型TLC(石油醚:乙酸乙酯＝2:1(V:V))纯化得固体9-1(48mg,收率53％)。
第二步：4-(氨基甲基)-1-(5-(2,3-二氯吡啶-4-基)-3-(羟甲基)-6-甲基吡嗪-2-基)哌啶-4-腈(TM8)的制备
将9-1(48.1mg,0.0875mmol)溶于四氢呋喃(8mL)，降温至0℃，滴加入LiBH4(THF中2M,0.91mL)，升温至25℃反应30分钟，LC-MS检测反应完全后将反应液滴加入3M盐酸中，25℃搅拌30分钟，LC-MS检测反应完全后，反应液经HPLC(流动相A：乙腈，流动相B：0.05％三氟乙酸水溶液)纯化得标题化合物的三氟乙酸盐(3mg,收率6％)。
MS m/z(ESI):406.8[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.51(d,J＝4.8Hz,1H),8.28(s,3H),7.57(d,J＝4.8Hz,1H),5.48(s,1H),4.54(s,2H),4.02(d,J＝13.6Hz,2H),3.27(s,2H),3.07(t,J＝12.4Hz,2H),2.25(s,3H),2.12(d,J＝13.6Hz,2H),1.88–1.78(m,2H).
实施例10：(3-(4-(氨甲基)-4-(环丙基甲基)哌啶-1-基)-6-(2,3-二氯苯基)-5-甲基吡嗪-2-基)甲醇(TM9)的制备
Figure BDA0003458890760000352
除在本实施例中第一步中使用溴甲基环丙烷代替实施例3中第一步的苄基氯甲基醚外，采用与实施例3中所描述的类似方法合成TM9的粗品。粗品经反相HPLC(流动相A：乙腈，流动相B：0.05％甲酸水溶液)纯化得化合物TM9。
MS m/z(ESI):434.9[M+H]+
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.63(dd,J＝8.0,1.6Hz,1H),7.42(t,J＝8.0Hz,1H),7.34(dd,J＝8.0,1.6Hz,1H),4.66(s,2H),4.62(br,2H),3.50–3.34(m,4H),3.06(s,2H),2.22(s,3H),1.85–1.76(m,2H),1.76–1.66(m,2H),1.50(d,J＝6.8Hz,2H),0.78–0.68(m,1H),0.61–0.53(m,2H),0.19–0.11(m,2H).
实施例11：(3-(4-(氨甲基)-4-(丙-2-炔-1-基)哌啶-1-基)-6-(2,3-二氯苯基)-5-甲基吡嗪-2-基)甲醇(TM10)的制备
Figure BDA0003458890760000353
除在本实施例中第一步使用3-溴丙炔代替实施例3中第一步的苄基氯甲基醚外，采用与实施例3中所描述的类似方法合成TM10的粗品。粗品经反相HPLC(流动相A：乙腈，流动相B：0.05％甲酸水溶液)纯化得化合物TM10。
MS m/z(ESI):418.9[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.55(br,1H),7.63(dd,J＝7.6,1.2Hz,1H),7.42(t,J＝7.6Hz,1H),7.34(d,J＝7.6,1.2Hz,1H),4.66(s,2H),3.56–3.45(m,2H),3.38–3.31(m,2H),3.10(s,2H),2.54(s,2H),2.25(s,3H),1.88–1.68(m,4H).
实施例12：(3-(4-(氨甲基)-4-(环丁-1-烯-1-基)哌啶-1-基)-6-(2,3-二氯苯基)-5-甲基吡嗪-2-基)甲醇(TM11)的制备
Figure BDA0003458890760000361
第一步：4-氰基-4-(1-羟基环丁基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(12-2)的制备
将3-1(4g,19.0mmol)溶于THF(100mL)，冷至-78℃后，滴加LDA(26.6mmol,13.3mL，THF中2M)，-78℃搅拌30分钟后，滴加环丁酮(2.13g,30.4mmol)，然后自然升温搅拌。TLC监测显示反应完成之后，加饱和碳酸氢钠溶液(50mL)淬灭反应，乙酸乙酯(20mL x 3)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，抽滤，浓缩，所得粗品经柱层析(乙酸乙酯:石油醚＝1:3)纯化得固体化合物12-2(5.10g,收率95％)。
第二步：4-氰基-4-(环丁-1-烯-1-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(12-3)的制备
将12-2(1.5g,5.35mmol)溶于吡啶(16mL)，加入POCl3(4mL)，加热至80℃搅拌。TLC监测显示反应完成之后，将体系冷至室温，加乙酸乙酯(100mL)稀释，有机相用依次用1NHCl(20mL x 2)和饱和氯化钠溶液(20mL)洗涤。将有机相用无水硫酸钠干燥，抽滤，浓缩，所得粗品化合物12-3(1.0g,收率71％)，未经进一步纯化，直接用于下一步反应。
第三步至第五步：(3-(4-(氨甲基)-4-(环丁-1-烯-1-基)哌啶-1-基)-6-(2,3-二氯苯基)-5-甲基吡嗪-2-基)甲醇(TM11)的合成
除在第三步中使用12-3代替实施例3中第二步的3-2外，采用与实施例3中第二步至第四步所描述的类似方法合成TM11的粗品。粗品经反相HPLC(流动相A：乙腈，流动相B：0.05％三氟乙酸水溶液)纯化得标题化合物的三氟乙酸盐。
MS m/z(ESI):432.9[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.74(dd,J＝7.6,1.2Hz,1H),7.68(br,3H),7.48(t,J＝7.6Hz,1H),7.41(dd,J＝7.6,1.2Hz,1H),6.09(s,1H),4.51(s,1H),4.50(s,2H),3.70–3.59(m,2H),3.12–3.00(m,2H),2.90–2.80(m,2H),2.47–2.41(m,2H),2.38–2.30(m,2H),2.18(s,3H),1.92–1.82(m,2H),1.70–1.57(m,2H).
实施例13：(3-(4-(氨甲基)-4-环丁基哌啶-1-基)-6-(2,3-二氯苯基)-5-甲基吡嗪-2-基)甲醇(TM12)的制备
Figure BDA0003458890760000371
第一步：4-氰基-4-环丁基哌啶-1-羧酸叔丁酯(13-1)的制备
将12-3(500mg,1.91mmol)溶于MeOH(5mL)，加入10％Pd/C(201mg)，氢气置换三次后，室温搅拌。TLC监测显示反应完成之后，垫硅藻土抽滤，浓缩，所得粗品化合物13-1(250mg,收率50％)未进一步纯化，直接用于下一步。
第二步至第四步：(3-(4-(氨甲基)-4-环丁基哌啶-1-基)-6-(2,3-二氯苯基)-5-甲基吡嗪-2-基)甲醇(TM12)的合成
除在第二步中使用13-1代替实施例3中第二步的3-2外，采用与实施例3中第二步至第四步所描述的类似方法合成TM12的粗品。粗品经反相HPLC(流动相A：乙腈，流动相B：0.05％三氟乙酸水溶液)纯化得标题化合物的三氟乙酸盐。
MS m/z(ESI):434.9[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.76(dd,J＝8.0,1.6Hz,1H),7.61(br,3H),7.50(t,J＝8.0Hz,1H),7.76(dd,J＝7.6,1.2Hz,1H),5.36(s,1H),4.52(d,J＝4.4Hz,2H),3.71–3.58(m,2H),3.21–3.04(m,2H),2.98–2.84(m,2H),2.64–2.55(m,1H),2.20(s,3H),1.97–1.72(m,5H),1.72–1.56(m,3H),1.56–1.44(m,2H).
实施例14：(3-(4-(氨基甲基)-4-苄基哌啶-1-基)-6-(2,3-二氯苯基)-5-甲基吡嗪-2-基)甲醇(TM13)制备
Figure BDA0003458890760000372
第一步：4-苄基-4-氰基哌啶-1-羧酸叔丁酯(14-2)的制备
除在本步骤中使用溴化苄代替实施例3中第一步的苄基氯甲基醚外，采用与实施例3中第一步所描述的类似方法合成14-2。
第二步：4-(氨甲基)-4-苄基哌啶-1-羧酸叔丁酯(14-3)的制备
冰水浴下，将14-2(0.50g,1.66mmol)溶于MeOH(10mL)，加入六水合氯化钴(0.79g,3.33mmol)和硼氢化钠(0.25g,6.66mmol)，搅拌反应1小时。LC-MS显示反应完全。先将反应体系调至酸性，再用碳酸钾水溶液调节体系pH至10，二氯甲烷萃取，硫酸钠干燥，浓缩至干，得化合物14-3(0.40g,收率79％)，直接用于下一步反应。
第三步：(4-苄基哌啶-4-基)甲胺盐酸盐(14-4)的制备
将14-3(0.40g,1.31mmol)溶于HCl(4mL,1,4-二氧六环中4N)，室温搅拌反应2小时。TLC显示反应完全。减压浓缩得标题化合物(0.28g,收率89％)。
第四步至第五步：(3-(4-(氨基甲基)-4-苄基哌啶-1-基)-6-(2,3-二氯苯基)-5-甲基吡嗪-2-基)甲醇(TM13)的制备
除在第四步中使用14-4代替实施例3中第三步的3-3外，采用与实施例3中第三步至第四步所描述的类似方法合成TM13的粗品。粗品经反相HPLC(流动相A：乙腈，流动相B：0.05％三氟乙酸水溶液)纯化得标题化合物的三氟乙酸盐。
MS m/z(ESI):471.1[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.87(br,3H),7.76-7.71(dd,J＝7.6,1.2Hz,1H),7.48(t,J＝7.6Hz,1H),7.44-7.38(dd,J＝7.6,1.2Hz,1H),7.37-7.31(m,2H),7.30-7.19(m,3H),4.47(s,2H),3.58-3.46(m,2H),3.42-3.30(m,2H),2.90-2.75(m,4H),2.18(s,3H),1.65-1.45(m,4H).
实施例15：(3-(4-(氨基甲基)-4-苯基哌啶-1-基)-6-(2,3-二氯苯基)-5-甲基吡嗪-2-基)甲醇(TM14)的制备
Figure BDA0003458890760000381
第一步：4-(2-溴苯基)-4-氰基哌啶-1-羧酸叔丁酯(15-2)的合成
2-(2-溴苯基)乙腈(2.12g,10.8mmol)溶于DMF(40mL)，冷却至0℃，加入NaH(0.86g,21.6mmol,60％)，移至室温25℃反应15分钟，加入N,N-双(2-氯乙基)氨基甲酸叔丁酯(2.75g,11.4mmol)，80℃反应15小时。反应完成后，加入10mL水淬灭反应，用乙酸乙酯(60mL x 3)萃取，合并有机相用饱和食盐水洗涤(60mL x 2)，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸干溶剂得粗品，粗品经硅胶柱色谱法纯化得化合物15-2(470mg,收率12％)。
第二步：4-(氨基甲基)-4-苯基哌啶-1-羧酸叔丁酯(15-3)的合成
将15-2(300mg,0.82mmol)溶于NH3/MeOH(10mL)，加入Raney Ni(241mg)，H2置换3次，25℃反应14小时。反应完成后减压蒸干溶剂得粗品化合物15-3(200mg)，直接用于下一步反应。
第三步：(4-苯基哌啶-4-基)甲胺(15-4)的合成
将15-3(200mg,0.69mmol)溶于二氯甲烷(5ml)和三氟乙酸(3mL)中，25℃反应1小时。反应结束后，直接浓缩，得15-4的三氟乙酸盐(130mg，收率62％)。
第四步：3-(4-(氨基甲基)-4-苯基哌啶-1-基)-6-(2,3-二氯苯基)-5-甲基吡嗪-2-羧酸乙酯(15-5)的合成
将IM-1(90.1mg,0.28mmol)溶于DMF(3mL)中，依次加入15-4的三氟乙酸盐(52.4mg,0.17mmol)、卡特缩合剂(243.2mg,0.55mmol)和DBU(346.4mg,2.28mmol)，25℃反应小时。反应结束后，浓缩，得粗品15-5(100mg)，粗品未经进一步纯化，直接用于下一步反应。
第五步：(3-(4-(氨基甲基)-4-苯基哌啶-1-基)-6-(2,3-二氯苯基)-5-甲基吡嗪-2-基)甲醇(TM14)的合成
将15-5(100.0mg,0.20mmol)溶于二氯甲烷(5mL)中，0℃加入DIBAL-H(己烷中1M,1.5mL)，继续反应1小时。反应结束后，加三氟乙酸淬灭反应，浓缩，粗产品经反相HPLC(流动相A：乙腈，流动相B：0.05％三氟乙酸水溶液)纯化得标题化合物的三氟乙酸盐(3.8mg,收率3.3％)。
MS m/z(ESI):457.2[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.73(dd,J＝7.6,1.2Hz,1H),7.59–7.31(m,10H),5.36(s,1H),4.51(s,2H),3.64–3.44(m,2H),3.14–3.01(m,4H),2.43–2.26(m,2H),2.16(s,3H),2.10–1.88(m,2H).
实施例16：(3-(4-(氨基甲基)-4-(环己基甲基)哌啶-1-基)-6-(2,3-二氯苯基)-5-甲基吡嗪-2-基)甲醇(TM15)的制备
Figure BDA0003458890760000391
第一步：4-氰基-4-(环己基甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(16-2)的合成
在三口瓶中将4-氰基哌啶-1-羧酸叔丁酯(1.2g,5.71mmol)溶解在THF(25mL)里，氮气置换保护，降温至-78℃，缓慢滴加LDA(THF中2M,5.71mL)，-78℃下搅拌0.5小时。将溴甲基环己烷(1.01g,5.71mmol)溶解在THF(25mL)中，缓慢加入反应体系中。升至室温反应2小时。反应完成后，加入20mL饱和NH4Cl水溶液淬灭反应，用乙酸乙酯(60mL×3)萃取，合并有机相用饱和食盐水洗涤(60mL×2)，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸干溶剂得粗品，粗品经硅胶柱色谱法纯化得化合物16-2(1.5g,收率86％)。
第二步：4-(氨基甲基)-4-(环己基甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(16-3)的合成
将16-2(331mg,1.08mmol)溶于MeOH(8mL)，加入六水合氯化钴(179mg,0.76mmol)，缓慢加入NaBH4(288mg,7.61mmol)，室温25℃反应2小时。反应完成后硅藻土抽滤，滤液减压蒸干溶剂得化合物16-3(230mg)，不经纯化直接用于下一步反应。
第三步：(4-(环己基甲基)哌啶-4-基)甲胺(16-4)的合成
将16-3(230mg,0.74mmol)溶于HCl(1,4-二氧六环中4M,4mL)中，25℃反应小时。反应结束后，直接浓缩，得16-4的盐酸盐(130mg，收率71％)。
第四步：3-(4-(氨基甲基)-4-(环己基甲基)哌啶-1-基)-6-(2,3-二氯苯基)-5-甲基吡嗪-2-羧酸乙酯(16-5)的合成
将IM-1(60.1mg,0.18mmol)溶于DMF(3mL)中，依次加入16-4盐酸盐(45.3mg,0.18mmol)、卡特缩合剂(162.1mg,0.37mmol)和DBU(230.9mg,1.52mmol)，25℃反应2小时。反应结束后，浓缩，经反相HPLC(流动相A：乙腈，流动相B：0.05％三氟乙酸水溶液)纯化得16-5(18.2mg,收率19％)。
第五步：(3-(4-(氨基甲基)-4-(环己基甲基)哌啶-1-基)-6-(2,3-二氯苯基)-5-甲基吡嗪-2-基)甲醇(TM15)的合成
将16-5(18.2mg,0.035mmol)溶于二氯甲烷(6mL)，置于0℃冰水浴中，加入DIBAL-H(己烷中1M,0.7mL)，继续反应1小时。反应结束后，加三氟乙酸淬灭反应，浓缩，粗产品经反相HPLC(流动相A：乙腈，流动相B：0.05％三氟乙酸水溶液)纯化得标题化合物的三氟乙酸盐(1.41mg,收率6.8％)。
MS m/z(ESI):477.2[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.78–7.65(m,4H),7.49(t,J＝7.6Hz,1H),7.41(dd,J＝7.6,1.2Hz,1H),4.50(s,2H),3.59–3.48(m,4H),2.92(d,J＝5.7Hz,2H),2.19(s,3H),1.78–1.55(m,9H),1.30–1.19(m,3H),1.18-1.08(m,2H),1.08–0.90(m,3H).
实施例17：(3-(4-(氨基甲基)-4-((二氟甲氧基)甲基)哌啶-1-基)-6-(2,3-二氯苯基)-5-甲基吡嗪-2-基)甲醇(TM40)的制备
Figure BDA0003458890760000401
第一步：1-苄基4-甲基4-氰基哌啶-1,4-二羧酸酯(17-1)的制备
在氮气保护下，将4-氰基哌啶-1-羧酸苄酯(7-0)(2.78g,11.38mmol)溶于THF(20mL)中，冷却到-78℃，慢慢加入LiHMDS(23mmol，23mL,THF中1M)，加完后在该温度小搅拌0.5小时，然后慢慢加入氯甲酸甲酯(2.15g,22.76mmol)，加完后自然升温到25℃反应4小时。反应完成后，向反应液中加入饱和氯化铵溶液，充分搅拌后，加入DCM(20mL)，搅拌后分液，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸干溶剂得粗品，粗品经硅胶柱层析纯化得化合物17-1(1.7g,收率49％)。
第二步：4-氰基-4-(羟甲基)哌啶-1-羧酸苄酯(17-2)的制备
将17-1(1.5g,4.96mmol)溶于THF(10mL)中，冷却到0℃，慢慢加入NaBH4(0.9g,24.81mmol)，加完后在0℃搅拌1小时反应完成后，向反应液中加入DCM和适量的水，充分搅拌后过滤，滤饼用DCM洗涤两次，滤液分液，水相用DCM萃取三次，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸干溶剂得粗品17-2(0.2g)，直接用于下一步。
第三步：4-氰基-4-((二氟甲氧基)甲基)哌啶-1-羧酸苄酯(17-3)的制备
将17-2(200mg,0.73mmol)溶于乙腈(10mL)中，加入CuI(28mg,0.15mmol)，加热到50℃，慢慢加入2-氟磺酰基二氟乙酸(260mg,1.46mmol)，在该温度下反应过夜，反应完成后，浓缩反应液，加入DCM(10mL)和饱和碳酸氢钠溶液(10mL)，充分搅拌后分液，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸干溶剂得粗品，粗品经硅胶柱层析纯化得17-3(200mg,收率85％)。
第四步：4-((二氟甲氧基)甲基)哌啶-4-腈(17-4)的制备
将17-3(200mg,0.62mmol)溶于MeOH(30mL)，加入10％的Pd/C(75mg)，氢气中25℃反应1小时，反应液垫硅藻土过滤，滤液浓缩，得粗品17-4(80mg，收率68％)，直接用于下一步反应。
第五步至第六步：(3-(4-(氨基甲基)-4-((二氟甲氧基)甲基)哌啶-1-基)-6-(2,3-二氯苯基)-5-甲基吡嗪-2-基)甲醇(TM40)的制备
除在第五步中使用17-4代替实施例3中第三步的3-3外，采用与实施例3中第三步至第四步所描述的类似方法合成TM40的粗品，粗品经反相HPLC(流动相A：乙腈，流动相B：0.05％三氟乙酸水溶液)纯化得标题化合物的三氟乙酸盐。
MS m/z(ESI):461.1[M+H]+
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.54(s,1H),7.64(dd,J＝7.8,1.6Hz,1H),7.42(t,J＝7.8Hz,1H),7.34(dd,J＝7.8,1.6Hz,1H),6.48(t,J＝74.8Hz,1H),4.67(s,2H),4.01(s,2H),3.48–3.30(m,2H),3.41–3.33(m,2H),3.04(s,2H),2.24(s,3H),1.86–1.70(m,4H).
实施例18：1-(4-(氨甲基)-1-(5-(2,3-二氯苯基)-3-(羟甲基)-6-甲基吡嗪-2-基)哌啶-4-基)环丁醇(TM85)的制备
Figure BDA0003458890760000402
除在本实施例中使用12-2代替实施例13中第二步的13-1外，采用与实施例13中第二步至第四步所描述的类似方法合成TM85的粗品。粗品经反相HPLC(流动相A：乙腈，流动相B：0.05％三氟乙酸水溶液)纯化得标题化合物的三氟乙酸盐。
MS m/z(ESI):451.2[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.74(dd,J＝8.0,1.6Hz,1H),7.63(br,3H),7.49(t,J＝8.0Hz,1H),7.43(dd,J＝8.0,1.6Hz,1H),6.14(s,1H),4.52(s,2H),3.82–3.68(m,2H),3.09–2.93(m,4H),2.42–2.29(m,2H),2.20(s,3H),2.01–1.88(m,2H),1.89–1.77(m,1H),1.77–1.55(m,4H),1.51–1.36(m,1H).
实施例19：(3-(4-(氨基甲基)-4-环丙基哌啶-1-基)-6-(2,3-二氯苯基)-5-甲基吡嗪-2-基)甲醇(TM20)的制备
Figure BDA0003458890760000411
第一步：1-苄基-4-环丙基哌啶-4-腈(19-2)的制备
将19-1(2.10g,9.05mmol)和环丙乙腈(0.92g,11.31mmol)溶于THF(50mL)中，氮气保护，冷却至0℃，滴加NaHMDS(THF中2M,31.86mmol,15.93mL)，滴加完毕后，自然升温反应24h。反应结束后，加饱和氯化铵淬灭反应，乙酸乙酯萃取三次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，粗品经硅胶柱层析得19-2(0.46g，收率21％)。
第二步：((1-苄基-4-环丙基哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(19-3)的制备
将19-2(0.40g,1.66mmol)溶于甲醇(10mL)，加入六水合氯化钴(0.79g,3.33mmol)，冷却至0℃，将硼氢化钠(0.31g,8.32mmol)加至反应体系中，自然升温至25℃反应4h。先用1N稀盐酸淬灭反应体系，再用碳酸钾水溶液调节pH约为10。随后向反应体系中加入二碳酸二叔丁酯(0.36g,1.66mmol)，25℃反应2h。反应完全后加入20mL水，二氯甲烷萃取。有机相经饱和食盐水洗涤，硫酸钠干燥后过滤浓缩，粗品经硅胶柱层析得19-3(0.34g，收率59％)。
第三步：((4-环丙基哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(19-4)的制备
高压釜中加入19-3(240mg,0.70mmol)、异丙醇(9mL)、水(3mL)、醋酸(1mL)及10％的氢氧化钯/炭(48mg)，密封，氢气置换3次，将体系压力升至1Mpa，75℃反应4h。反应结束后，垫硅藻土过滤，浓缩滤液得到粗品，粗品用碳酸钾水溶液调节pH约为10，DCM萃取，浓缩得粗品，经制备板纯化得19-4(75mg，收率42％)。
第四步至第六步：(3-(4-(氨基甲基)-4-环丙基哌啶-1-基)-6-(2,3-二氯苯基)-5-甲基吡嗪-2-基)甲醇(TM20)的制备
除在第四步中使用19-4代替实施例7中第四步的7-3外，采用与实施例7中第四步至第六步所描述的类似方法合成TM20的粗品。粗品经反相HPLC(流动相A：乙腈，流动相B：0.05％三氟乙酸水溶液)纯化得标题化合物的三氟乙酸盐。
MS m/z(ESI):421.3[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.80–7.70(m,4H),7.48(t,J＝7.6Hz,1H),7.40(dd,J＝7.6,1.2Hz,1H),5.33(s,1H),4.49(s,2H),3.65–3.55(m,2H),3.18–3.06(m,2H),3.07–2.95(m,2H),2.18(s,3H),1.60–1.35(m,4H),0.95–0.80(m,1H),0.45–0.35(m,4H).
实施例20：(3-(4-(氨甲基)-4-环戊基哌啶-1-基)-6-(2,3-二氯苯基)-5-甲基吡嗪-2-基)甲醇(TM21)的制备
Figure BDA0003458890760000412
第一步至第二步：4-氰基-4-(环戊-1-烯-1-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(20-2)的制备
除在第一步中使用环戊酮代替实施例12中第一步的环丁酮外，采用与实施例12中第一步至第二步所描述的类似方法合成20-2。
第三步至第六步：(3-(4-(氨甲基)-4-环戊基哌啶-1-基)-6-(2,3-二氯苯基)-5-甲基吡嗪-2-基)甲醇(TM21)的合成
除在第三步中使用20-2代替实施例13中第一步的12-3，采用与实施例13中第一步至第四步所描述的类似方法合成TM21的粗品。粗品经反相HPLC(流动相A：乙腈，流动相B：0.05％三氟乙酸水溶液)纯化得标题化合物的三氟乙酸盐。
MS m/z(ESI):449.2[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.85–7.70(m,4H),7.49(t,J＝7.6Hz,1H),7.43–7.39(m,1H),4.50(s,2H),3.65–3.55(m,2H),3.23–3.10(m,2H),3.03–2.95(m,2H),2.19(s,3H),2.15–2.04(m,1H),1.75–1.45(m,10H),1.35–1.20(m,2H).
实施例21：(3-(4-(1-氨基乙基)-4-甲基哌啶-1-基)-6-(2,3-二氯苯基)-5-甲基吡嗪-2-基)甲醇(TM131)的制备
Figure BDA0003458890760000421
第一步：4-(甲氧基(甲基)氨基甲酰基)-4-甲基哌啶-1-羧酸叔丁酯(21-2)的制备
将21-1(25.0g,102.75mmol)、HATU(46.9g,123.31mmol)和DIPEA(66.4g,513.77mmol)溶解在DMF(250mL)中，25℃反应30分钟。随后加入二甲羟胺盐酸盐(12.0g,123.31mmol)，25℃反应15小时。反应完毕后加入饱和氯化铵淬灭，加入乙酸乙酯萃取。有机相合并干燥浓缩得到粗品，粗品经硅胶柱色谱法纯化得到21-2(25.0g,收率85％)。
第二步：4-乙酰基-4-甲基哌啶-1-羧酸叔丁酯(21-3)的制备
将21-2(20.0g,69.8mmol)溶解在THF(250mL)中，降温至0℃，半小时内缓慢滴加甲基溴化镁(93mL,279.0mmol,THF中3N)。加完后缓慢升至25℃反应16小时。反应完毕，将反应液缓慢滴加到冰的饱和氯化铵水溶液中，加入乙酸乙酯萃取。有机相合并干燥浓缩得到粗品。粗品经硅胶柱色谱法纯化得到21-3(10.6g,收率63％)。
第三步：4-(1-(1,1-二甲基乙基亚磺酰氨基)乙基)-4-甲基哌啶-1-羧酸叔丁酯(21-4)的制备
将21-3(5.10g,21.13mmol)溶于钛酸四异丙酯(51mL)，加入叔丁基亚磺酰胺(5.12g,42.27mmol)，氮气置换后升温至90℃反应16小时，冷却至室温后加入饱和氯化钠溶液，乙酸乙酯萃取，有机相合并，干燥后减压浓缩。残留物溶于甲醇(70mL)，冰浴下缓慢加入硼氢化钠(2.3g,60.96mmol)，升温至25℃反应2小时。反应完成后降温至0℃，加入饱和氯化铵淬灭反应，乙酸乙酯萃取，有机干燥，减压浓缩后经柱层析得21-4(4.3g,收率59％)。
第四步：1-(4-甲基哌啶-4-基)乙-1-胺盐酸盐(21-5)的制备
将21-4(4.3g,12.35mmol)溶于盐酸二氧六环溶液(4M,70mL)，25℃反应2小时。反应液浓缩得粗品固体21-5(2.65g,收率99％)，直接用于下一步反应。
第五步至第六步：(3-(4-(1-氨基乙基)-4-甲基哌啶-1-基)-6-(2,3-二氯苯基)-5-甲基吡嗪-2-基)甲醇(TM131)的制备
除在第五步中使用21-5代替实施例3中第三步的3-3外，采用与实施例3中第三步至第四步所描述的类似方法合成TM131的粗品。粗品经反相HPLC(流动相A：乙腈，流动相B：0.05％三氟乙酸水溶液)纯化得标题化合物的三氟乙酸盐。
MS m/z(ESI):409.1[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.80–7.65(m,4H),7.49(t,J＝7.6Hz,1H),7.44–7.39(m,1H),5.36(s,1H),4.50(s,2H),3.75–3.60(m,2H),3.20–3.02(m,3H),2.19(s,3H),1.75–1.40(m,4H),1.16(d,J＝4.0Hz,3H),1.00(s,3H).
实施例22：(3-(4-(氨基甲基)-4-((四氢呋喃-3-基)甲基)哌啶-1-基)-6-(2,3-二氯苯基)-5-甲基吡嗪-2-基)甲醇(TM86)的制备
Figure BDA0003458890760000431
除在本实施例第一步中使用3-(碘甲基)四氢呋喃代替实施例3中第一步的苄基氯甲基醚外，采用与实施例3所描述的类似方法合成目标化合物的三氟乙酸盐。
MS m/z(ESI):465.1[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.84–7.66(m,4H),7.49(t,J＝7.6Hz,1H),7.41(dd,J＝7.6,1.2Hz,1H),5.33(s,1H),4.50(s,2H),3.93(t,J＝7.6Hz,1H),3.79–3.69(m,1H),3.69–3.59(m,2H),3.41–3.31(m,3H),3.14(t,J＝8.2Hz,1H),2.95(d,J＝5.1Hz,2H),2.19(s,3H),2.16–2.04(m,2H),1.69–1.41(m,7H).
实施例23：(3-(4-(氨基甲基)-4-(吡嗪-2-基甲基)哌啶-1-基)-6-(2,3-二氯苯基)-5-甲基吡嗪-2-基)甲醇(TM82)的制备
Figure BDA0003458890760000432
除在本实施例第一步中使用2-(氯甲基)吡嗪代替实施例3中第一步的苄基氯甲基醚外，采用与实施例3所描述的类似方法合成标题化合物的三氟乙酸盐。
MS m/z(ESI):473.1[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.71–8.63(m,2H),8.59(d,J＝2.4Hz,1H),7.95(s,3H),7.75(dd,J＝7.6,1.2Hz,1H),7.49(t,J＝7.6Hz,1H),7.42(dd,J＝7.6,1.2Hz,1H),5.38(s,1H),4.49(s,2H),3.49–3.39(m,4H),3.08(s,2H),2.95–2.89(m,2H),2.19(s,3H),1.66–1.56(m,4H).
实施例24：(3-(4-(氨基甲基)-4-(嘧啶-2-基甲基)哌啶-1-基)-6-(2,3-二氯苯基)-5-甲基吡嗪-2-基)甲醇(TM84)的制备
Figure BDA0003458890760000433
除在本实施例第一步中使用2-(氯甲基)嘧啶代替实施例3中第一步的苄基氯甲基醚外，采用与实施例3所描述的类似方法合成标题化合物的三氟乙酸盐。
MS m/z(ESI):473.2[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.82(d,J＝4.8Hz,2H),7.96(s,3H),7.75(dd,J＝7.6,1.2Hz,1H),7.52–7.46(m,2H),7.45–7.40(m,1H),5.30(s,1H),4.49(s,3H),3.48–3.42(m,5H),2.99-2.92(m,2H),2.19(s,3H),1.68–1.55(m,4H).
实施例25：(3-(4-(1-氨基乙基)-4-甲基哌啶-1-基)-6-(2,3-二氯吡啶-4-基)-5-甲基吡嗪-2-基)甲醇(TM87)的制备
Figure BDA0003458890760000434
第一步：6-溴-3-(4-(1-((叔丁氧羰基)氨基)乙基)-4-甲基哌啶-1-基)-5-甲基吡嗪-2-羧酸乙酯(25-1)的制备
将1-3(2.66g,10.19mmol)溶于DMF(40mL)，依次加入21-5(2.63g,12.23mmol)、DIPEA(8.42mL,50.94mmol)和卡特缩合剂(6.76g,15.28mmol)，升温至60℃反应1小时。反应完成后加入二碳酸二叔丁酯(3.34g,15.28mmol)，继续搅拌2小时，反应完全后加入水，乙酸乙酯萃取，有机相合并干燥浓缩，粗品经柱层析纯化得25-1(3.30g,收率67％)。
第二步：3-(4-(1-((叔丁氧羰基)氨基)乙基)-4-甲基哌啶-1-基)-6-(2,3-二氯吡啶-4-基)-5-甲基吡嗪-2-羧酸乙酯(25-2)的制备
将25-1(5.20g,10.71mmol)溶于1,4-二氧六环(100mL)和水(20mL)，依次加入(2,3-二氯吡啶-4-基)硼酸(3.08g,16.07mmol)、碳酸钾(7.40g,53.56mmol)，[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷络合物(0.87g,1.07mmol)，氮气置换后升温至90℃反应3小时，反应完全后加入水，乙酸乙酯萃取，有机相合并干燥浓缩，经柱层析纯化得25-2(3.59g,收率61％)。
第三步：(3-(4-(1-氨基乙基)-4-甲基哌啶-1-基)-6-(2,3-二氯吡啶-4-基)-5-甲基吡嗪-2-基)甲醇(TM87)的制备
将25-2(40mg,0.072mmol)溶于氯化氢二氧六环溶液(1mL,4M)，25℃反应1小时，反应完全后将反应液浓缩得固体。该固体溶于二氯甲烷(5mL)，降温至0℃，滴加入DIBAL-H(己烷中1M,0.288mL)，0℃反应10分钟，LC-MS检测反应完全后加入甲醇淬灭反应，浓缩干后，粗品经反相HPLC(流动相A：乙腈，流动相B：0.05％甲酸水溶液)制备得标题化合物(4mg,收率13％)。
MS m/z(ESI):410.2[M+H]+
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.53(s,1H),8.41(d,J＝4.8Hz,1H),7.45(d,J＝4.8Hz,1H),4.66(s,2H),3.77–3.71(m,2H),3.26–3.16(m,3H),2.27(s,3H),1.78–1.53(m,4H),1.29(d,J＝6.8Hz,3H),1.12(s,3H).
实施例26：(3-(4-(1-氨基乙基)-4-甲基哌啶-1-基)-6-(4,5-二氯吡啶-3-基)-5-甲基吡嗪-2-基)甲醇(TM88)的制备
Figure BDA0003458890760000441
第一步：3-(4-(1-((叔丁氧羰基)氨基)乙基)-4-甲基哌啶-1-基)-6-(4,5-二氯吡啶-3-基)-5-甲基吡嗪-2-羧酸乙酯(26-2)的制备
将26-1(112.8mg,0.41mmol)溶于水(1mL)和1,4-二氧六环(5mL)中，加入碳酸钠(109.2mg,1.03mmol)和双三苯基磷二氯化钯(28.9mg,41.20umol)，再加入25-1(100.0mg,0.21mmol)，氮气保护下，在95℃反应14小时。反应完全后反应液浓缩后经柱层析纯化得26-2(80mg,70％)。
第二步：(3-(4-(1-氨基乙基)-4-甲基哌啶-1-基)-6-(4,5-二氯吡啶-3-基)-5-甲基吡嗪-2-基)甲醇(TM88)的制备
除在本实施例中使用26-2代替实施例25中第三步的25-2外，采用与实施例25第三步所描述的类似方法合成TM88的粗品。粗品经反相HPLC(流动相A：乙腈，流动相B：0.05％三氟乙酸水溶液)纯化得标题化合物的三氟乙酸盐。
MS m/z(ESI):410.2[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.87(s,1H),8.59(s,1H),7.71(s,3H),5.39(s,1H),4.51(s,2H),3.79–3.66(m,2H),3.20–3.08(m,3H),2.23(s,3H),1.69–1.53(m,3H),1.50–1.41(m,1H),1.16(d,J＝6.8Hz,3H),1.01(s,3H).
实施例27：(3-(4-(1-氨基乙基)-4-甲基哌啶-1-基)-6-(2-溴-3-氯吡啶-4-基)-5-甲基吡嗪-2-基)甲醇(TM89)的制备
Figure BDA0003458890760000451
第一步：3-(4-(1-氨基乙基)-4-甲基哌啶-1-基)-6-(2-溴-3-氯吡啶-4-基)-5-甲基吡嗪-2-羧酸乙酯
将25-2(45mg,0.08mmol)溶于氢溴酸的乙酸溶液(33％wt，5mL)，升温至70℃反应16小时，LC-MS检测反应完全后将反应液浓缩得27-1，直接用于下一步反应。
第二步：(3-(4-(1-氨基乙基)-4-甲基哌啶-1-基)-6-(2-溴-3-氯吡啶-4-基)-5-甲基吡嗪-2-基)甲醇(TM89)的制备
将27-1溶于二氯甲烷(5mL)，降温至0℃，滴加入DIBAL-H(己烷中1M,0.32mL)，0℃反应10分钟。LC-MS检测反应完全后加入甲醇淬灭反应，浓缩干后，粗品经反相HPLC(流动相A：乙腈，流动相B：0.05％甲酸水溶液)纯化得标题化合物(6mg,收率16％)。
MS m/z(ESI):454.1[M+H]+
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.47(d,J＝4.8Hz,1H),8.37(s,1H),7.58(d,J＝4.8Hz,1H),4.49(s,2H),3.77–3.62(m,2H),3.17–3.03(m,2H),2.91(dd,J＝13.2,6.4Hz,1H),2.21(s,3H),1.66–1.49(m,3H),1.44–1.33(m,1H),1.07(d,J＝6.8Hz,3H),0.96(s,3H).
实施例28：(3-(4-(1-氨基乙基)-4-甲基哌啶-1-基)-6-(3-氯-2-甲氧基吡啶-4-基)-5-甲基吡嗪-2-基)甲醇(TM90)的制备
Figure BDA0003458890760000452
除在本实施例第一步中使用28-1代替实施例25中第二步的(2,3-二氯吡啶-4-基)硼酸外，采用与实施例25第二步至第三步所描述的类似方法合成TM90的粗品。粗品经反相HPLC(流动相A：乙腈，流动相B：0.05％三氟乙酸水溶液)纯化得标题化合物的三氟乙酸盐。
MS m/z(ESI):406.2[M+H]+
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.15(d,J＝5.2Hz,1H),6.99(d,J＝5.2Hz,1H),4.66(s,2H),4.04(s,3H),3.77–3.62(m,2H),3.26–3.13(m,3H),2.27(s,3H),1.78–1.49(m,4H),1.30(d,J＝6.8Hz,3H),1.12(s,3H).
实施例29：(6-(6-氨基-2,3-二氯吡啶-4-基)-3-(4-(1-氨基乙基)-4-甲基哌啶-1-基)-5-甲基吡嗪-2-基)甲醇(TM91)的制备
Figure BDA0003458890760000453
除在本实施例第一步中使用29-1代替实施例25中第二步的(2,3-二氯吡啶-4-基)硼酸外，采用与实施例25第二步至第三步所描述的类似方法合成标题化合物。
MS m/z(ESI):425.3[M+H]+
1H NMR (400MHz,CD3OD)δ8.38(s,1H),6.72(s,2H),6.42(s,1H),4.48(s,2H),3.72–3.60(m,2H),3.15–3.01(m,2H),2.87(q,J＝6.4Hz,1H),2.22(s,3H),1.66–1.48(m,3H),1.45–1.32(m,1H),1.05(d,J＝6.8Hz,3H),0.94(s,3H).
实施例30：(3-(4-(氨基甲基)-4-(吡啶-3-基甲基)哌啶-1-基)-6-(2,3-二氯苯基)-5-甲基吡嗪-2-基)甲醇(TM23)的制备
Figure BDA0003458890760000461
除在本实施例第一步中使用3-溴甲基吡啶代替实施例3中第一步的苄基氯甲基醚外，采用与实施例3中所描述的类似方法合成TM23的粗品。粗品经反相HPLC(流动相A：乙腈，流动相B：0.05％三氟乙酸水溶液)纯化得标题化合物的三氟乙酸盐。
MS m/z(ESI):472.1[M+H]+
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.69–8.60(m,2H),8.25(d,J＝7.6Hz,1H),7.91–7.80(m,1H),7.64(dd,J＝7.6,1.2Hz,1H),7.42(t,J＝7.6Hz,1H),7.33(dd,J＝7.6,1.2Hz,1H),4.63(s,2H),3.67–3.54(m,2H),3.47–3.41(m,2H),3.09(s,2H),3.07(s,2H),2.24(s,3H),1.78–1.69(m,4H).
实施例31：(3-(4-烯丙基-4-(氨基甲基)哌啶-1-基)-6-(2,3-二氯苯基)-5-甲基吡嗪-2-基)甲醇(TM18)的制备
Figure BDA0003458890760000462
除在本实施例第一步中使用3-溴丙烯代替实施例3中第一步的苄基氯甲基醚外，采用与实施例3中所描述的类似方法合成TM18的粗品。粗品经反相HPLC(流动相A：乙腈，流动相B：0.05％三氟乙酸水溶液)纯化得标题化合物的三氟乙酸盐。
MS m/z(ESI):421.1[M+H]+
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.64(dd,J＝7.6,1.2Hz,1H),7.42(t,J＝7.6Hz,1H),7.34(dd,J＝7.6,1.2Hz,1H),5.95–5.84(m,1H),5.26(d,J＝3.6Hz,1H),5.23(s,1H),4.66(s,2H),3.53–3.35(m,4H),2.99(s,2H),2.37(d,J＝7.6Hz,2H),2.25(s,3H),1.76–1.67(m,4H).
实施例32：(4-(1-氨基乙基)-1-(5-(2,3-二氯苯基)-3-(羟甲基)-6-甲基吡嗪-2-基)哌啶-4-基)甲醇(TM92)的制备
Figure BDA0003458890760000463
第一步：(E)-N-亚乙基-2-甲基丙基-2-亚磺酰胺(32-2)的制备
除在本实施例第一步中使用32-1代替实施例2中第一步的2-1外，采用与实施例2中第一步所描述的类似方法合成32-2。
第二步：1-叔丁基4-乙基4-(1-(1,1-二甲基乙基亚磺酰氨基)乙基)哌啶-1,4-二羧酸酯(32-3)的制备
将N-叔丁氧羰基-4-哌啶甲酸乙酯(1.70g,6.61mmol)溶于THF(15mL)中，氮气保护，冷却至-78℃，滴加LDA(THF中2M,4.29mL)，在该温度下反应30分钟，再加入32-2(1.26g,8.59mmol)，在该温度下继续反应2小时，然后缓慢升至室温反应5小时。反应结束后，加饱和氯化铵淬灭反应，乙酸乙酯萃取三次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，硅胶柱层析纯化得32-3(0.75g，收率28％)。
第三步至第五步：(4-(1-氨基乙基)-1-(5-(2,3-二氯苯基)-3-(羟甲基)-6-甲基吡嗪-2-基)哌啶-4-基)甲醇(TM92)的制备
除在第三步中使用32-3代替实施例2中第三步的2-3外，采用与实施例2中第三步至第五步所描述的类似方法合成TM92的粗品。粗品经反相HPLC(流动相A：乙腈，流动相B：0.05％三氟乙酸水溶液)纯化得标题化合物的三氟乙酸盐。
MS m/z(ESI):425.1[M+H]+
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.64(dd,J＝7.6,1.2Hz,1H),7.42(t,J＝7.6Hz,1H),7.34(dd,J＝7.6,1.2Hz,1H),4.66(s,2H),3.92–3.84(m,2H),3.72–3.55(m,2H),3.26–3.24(m,2H),3.16–3.09(m,1H),2.25(s,3H),2.01–1.97(m,1H),1.85–1.73(m,1H),1.66–1.59(m,2H),1.40(d,J＝6.8Hz,3H).
实施例33：(3-(4-(1-氨基乙基)-4-(氨基甲基)哌啶-1-基)-6-(2,3-二氯苯基)-5-甲基吡嗪-2-基)甲醇(TM93)的制备
Figure BDA0003458890760000471
除在本实施例第一步中使用33-1代替实施例3第三步中的3-3，采用与实施例3中第三步至第四步所描述的类似方法合成TM93的粗品。粗品经反相HPLC(流动相A：乙腈，流动相B：0.05％三氟乙酸水溶液)纯化得标题化合物的三氟乙酸盐。
MS m/z(ESI):424.3[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.95(brs,6H),7.75(dd,J＝7.6,1.2Hz,1H),7.49(t,J＝7.6Hz,1H),7.42(dd,J＝7.6,1.2Hz,1H),5.43(s,1H),4.52(s,2H),3.63–3.54(m,3H),3.29–3.21(m,3H),3.10–3.07(m,1H),2.20(s,3H),1.84–1.77(m,2H),1.64–1.58(m,2H),1.21(d,J＝6.8Hz,3H).
实施例34：(3-(4-(1-氨基丙基)-4-甲基哌啶-1-基)-6-(2,3-二氯苯基)-5-甲基吡嗪-2-基)甲醇(TM94)的制备
Figure BDA0003458890760000472
除在本实施例第一步中使用乙基溴化镁代替实施例21第二步中的甲基溴化镁外，采用与实施例21中第二步至第六步所描述的类似方法合成TM94的粗品。粗品经反相HPLC(流动相A：乙腈，流动相B：0.05％三氟乙酸水溶液)纯化得标题化合物的三氟乙酸盐。
MS m/z(ESI):423.3[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.74(dd,J＝7.6,1.2Hz,1H),7.69(s,3H),7.49(t,J＝7.6Hz,1H),7.41(dd,J＝7.6,1.2Hz,1H),5.34(brs,1H),4.50(s,2H),3.68–3.62(m,2H),3.20–3.01(m,2H),2.92–2.83(m,1H),2.19(s,3H),1.79–1.69(m,1H),1.64–1.60(m,3H),1.54–1.47(m,1H),1.44–1.34(m,1H),1.05–1.00(m,6H).
实施例35：(3-(4-(氨基甲基)-4-(吡啶-2-基甲基)哌啶-1-基)-6-(2,3-二氯苯基)-5-甲基吡嗪-2-基)甲醇(TM22)的制备
Figure BDA0003458890760000481
除在本实施例第一步中使用2-氯甲基吡啶代替实施例3中第一步的苄基氯甲基醚外，采用与实施例3中所描述的类似方法合成TM22的粗品。粗品经反相HPLC(流动相A：乙腈，流动相B：0.05％三氟乙酸水溶液)纯化得标题化合物的三氟乙酸盐。
MS m/z(ESI):472.1[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.58(d,J＝4.4Hz,1H),8.08(s,3H),7.87-7.79(m,1H),7.74(dd,J＝7.6,1.2Hz,1H),7.49(t,J＝7.6Hz,1H),7.45–7.40(m,2H),7.38–7.33(m,1H),4.49(s,2H),3.44–3.38(m,4H),3.04(s,2H),2.88(d,J＝5.2Hz,2H),2.19(s,3H),1.65-1.55(m,4H).
实施例36：(3-(4-(氨基甲基)-4-(噻唑-5-基甲基)哌啶-1-基)-6-(2,3-二氯苯基)-5-甲基吡嗪-2-基)甲醇(TM95)的制备
Figure BDA0003458890760000482
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除在本实施例第一步中使用2-溴-5-(溴甲基)噻唑代替实施例3中第一步的苄基氯甲基醚外，采用与实施例3中所描述的类似方法合成TM95的粗品。粗品经反相HPLC(流动相A：乙腈，流动相B：0.05％三氟乙酸水溶液)纯化得标题化合物的三氟乙酸盐。
MS m/z(ESI):478.1[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.05(s,1H),7.87(s,3H),7.78(s,1H),7.75(dd,J＝7.6,1.2Hz,1H),7.49(t,J＝7.6Hz,1H),7.42(dd,J＝7.6,1.2Hz,1H),5.37(s,1H),4.49(s,2H),3.56–3.42(m,4H),3.16(s,2H),2.91–2.79(m,2H),2.19(s,3H),1.73–1.63(m,2H),1.62–1.52(m,2H).
实施例37：(3-(4-(氨基甲基)-4-((1,6-二氢嘧啶-4-基)甲基)哌啶-1-基)-6-(2,3-二氯苯基)-5-甲基吡嗪-2-基)甲醇(TM96)的制备
Figure BDA0003458890760000483
除在本实施例第一步中使用4-(氯甲基)嘧啶代替实施例3中第一步的苄基氯甲基醚外，采用与实施例3中所描述的类似方法合成TM96的粗品。粗品经反相HPLC(流动相A：乙腈，流动相B：0.05％三氟乙酸水溶液)纯化得标题化合物的三氟乙酸盐。
MS m/z(ESI):475.3[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6+D2O)δ7.99(s,1H),7.73(dd,J＝7.6,1.2Hz,1H),7.48(d,J＝7.6Hz,1H),7.39(dd,J＝7.6,1.2Hz,1H),4.98(s,1H),4.54-4.47(m,2H),4.21-4.12(m,2H),3.52–3.44(m,2H),3.33–3.21(m,2H),3.00(s,2H),2.30-2.22(m,2H),2.19(s,3H),1.72-1.58(m,4H).
实施例38：3-(4-(1-氨基乙基)-4-甲基哌啶-1-基)-6-(2,3-二氯-4-甲氧基苯基)-5-甲基吡嗪-2-基)甲醇(TM97)的制备
Figure BDA0003458890760000484
除在本实施例第一步中使用38-1代替实施例25中第二步的(2,3-二氯吡啶-4-基)硼酸外，采用与实施例25第二步至第三步所描述的类似方法合成TM97的粗品。粗品经反相HPLC(流动相A：乙腈，流动相B：0.05％三氟乙酸水溶液)纯化得标题化合物的三氟乙酸盐。
MS m/z(ESI):439.2[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.69(s,3H),7.38(d,J＝8.4Hz,1H),7.26(d,J＝8.4Hz,1H),5.31(s,1H),4.49(s,2H),3.95(s,3H),3.76–3.57(m,2H),3.21–3.17(m,1H),3.16–2.98(m,2H),2.18(s,3H),1.69–1.39(m,4H),1.16(d,J＝6.4Hz,3H),1.00(s,3H).
实施例39：(3-(4-(1-氨基乙基)-4-甲基哌啶-1-基)-6-(3-氯-2-氟吡啶-4-基)-5-甲基吡嗪-2-基)甲醇(TM98)的制备
Figure BDA0003458890760000491
第一步：3-(4-(1-((叔丁氧羰基)氨基)乙基)-4-甲基哌啶-1-基)-6-(3-氯-2-氟吡啶-4-基)-5-甲基吡嗪-2-羧酸乙酯(39-2)的制备
除在本步骤中使用39-1代替实施例25第二步中的(2,3-二氯吡啶-4-基)硼酸外，采用与实施例25中第二步所描述的类似方法合成39-2。
第二步：(3-(4-(1-氨基乙基)-4-甲基哌啶-1-基)-6-(3-氯-2-氟吡啶-4-基)-5-甲基吡嗪-2-基)甲醇(TM98)的制备
将39-2(40mg,74.62μmol)、二氯甲烷(5mL)加入反应瓶中，冰水降温至0～5℃，滴入DIBAL-H(己烷中1M,0.45mL)，保温5～10℃反应2小时。反应完全后滴入甲醇(1mL)，加入二氯甲烷(10mL)、水(2mL)，萃取分出有机相，干燥浓缩干。残留物溶于二氯甲烷(1mL)加入反应瓶中，滴入TFA(1mL)，25℃反应1小时。反应完成后将反应液浓缩干，粗品经反相HPLC(流动相A：乙腈，流动相B：0.05％三氟乙酸水溶液)纯化得标题化合物的三氟乙酸盐(10.8mg,收率28％)。
MS m/z(ESI):394.3[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.30(d,J＝5.2Hz,1H),7.74(br,3H),7.51(d,J＝5.2Hz,1H),5.42(s,1H),4.51(s,2H),3.85–3.70(m,2H),3.20–3.09(m,3H),2.24(s,3H),1.71–1.45(m,4H),1.16(d,J＝6.8Hz,3H),1.01(s,3H).
实施例40：4-(1-氨基乙基)-1-(5-(2,3-二氯苯基)-3-(羟甲基)-6-甲基吡嗪-2-基)哌啶-4-醇(TM99)的制备
Figure BDA0003458890760000492
第一步：4-亚乙基哌啶-1-羧酸叔丁酯(40-2)的制备
将乙基三苯基溴化磷(19.6g,52.7mmol)、THF(250mL)加入反应瓶中，降温至-78℃，滴入n-BuLi(己烷中2.5M,22mL)，加完后保温反应1小时后升温至-20℃，滴入N-叔丁氧羰基-4-哌啶酮(10.0g,50.2mmol)的THF(50mL)溶液，保温反应2小时。反应完全后加入水，石油醚萃取分液，有机相干燥后浓缩，粗品经柱层析纯化得40-2(5.60g,收率50％)。
第二步：2-甲基-1-氧杂-6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-羧酸叔丁酯(40-3)的制备
将40-2(5.20g,24.61mmol)、二氯甲烷(120mL)加入反应瓶中，25℃分批加入间氯过氧苯甲酸(6.37g,36.91mmol)，室温反应3小时。反应完成后加入饱和亚硫酸钠(40ml)淬灭反应，分液，有机相用饱和碳酸氢钠洗涤，分出DCM相，盐水洗，干燥后浓缩得到40-3(5.40g,收率96％)，直接用于下一步反应。
第三步：4-(1-叠氮乙基)-4-羟基哌啶-1-羧酸叔丁酯(40-4)的制备
将40-3(2.00g,8.80mmol)、DMF(20mL)、NH4Cl(0.71g,13.20mmol)、NaN3(0.74g,11.38mmol)加入反应瓶中，升温至100℃反应6小时。反应完全后冷至室温，加入水，甲基叔丁基醚萃取，有机相水洗2次后干燥浓缩至干得到粗品40-4(2.20g,收率92％)，直接用于下一步反应。
第四步：4-(1-氨基乙基)-4-羟基哌啶-1-羧酸叔丁酯(40-5)的制备
将40-4(2.00g,7.40mmol)、MeOH(60mL)、10％的Pd/C(270mg)加入高压釜中，氮气置换空气后，通入氢气到压力0.5MPa，升温至40℃反应约12小时。反应完全后滤除钯碳，滤液浓缩至干得40-5(1.28g,收率71％)。
第五步至第七步：4-(1-氨基乙基)-1-(5-(2,3-二氯苯基)-3-(羟甲基)-6-甲基吡嗪-2-基)哌啶-4-醇(TM99)的制备
除在第五步中使用40-5代替实施例3中第二步的3-2外，采用与实施例3中第二步至第四步所描述的类似方法合成TM99的粗品。粗品经反相HPLC(流动相A：乙腈，流动相B：0.05％三氟乙酸水溶液)纯化得标题化合物的三氟乙酸盐。
MS m/z(ESI):411.3[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.74(dd,J＝7.6,1.2Hz,1H),7.68(s,3H),7.51–7.40(m,2H),5.34(s,1H),5.15(s,1H),4.50(s,2H),3.78–3.67(m,2H),3.24–3.13(m,3H),2.19(s,3H),1.78–1.57(m,4H),1.17(d,J＝6.8Hz,3H).
实施例41：(3-(4-(1-氨基乙基)-4-甲氧基哌啶-1-基)-6-(2,3-二氯苯基)-5-甲基吡嗪-2-基)甲醇(TM100)的制备
Figure BDA0003458890760000501
第一步：4-(1-叠氮乙基)-4-甲氧基哌啶-1-羧酸叔丁酯(41-1)的制备
将40-4(1.80g,6.66mmol)、DMF(5mL)加入反应瓶中，降温至0℃，分批加入NaH(0.66g,16.65mmol,60％)，搅拌10分钟。滴加碘甲烷(2.36g,16.65mmol)，室温反应2小时。反应完全后降温至0℃，加入饱和氯化铵淬灭反应，甲基叔丁基醚萃取，有机相水洗，干燥浓缩后得到粗品41-1(1.80g,收率95％)，直接用于下一步反应。
第二步至第五步：(3-(4-(1-氨基乙基)-4-甲氧基哌啶-1-基)-6-(2,3-二氯苯基)-5-甲基吡嗪-2-基)甲醇(TM100)的制备
除在第二步中使用41-1代替实施例40中第四步的40-4外，采用与实施例40中第四步至第七步所描述的类似方法合成TM100的粗品。粗品经反相HPLC(流动相A：乙腈，流动相B：0.05％三氟乙酸水溶液)纯化得标题化合物的三氟乙酸盐。
MS m/z(ESI):425.3[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.80–7.67(m,4H),7.48(t,J＝7.6Hz,1H),7.42(dd,J＝7.6Hz,1H),5.36(s,1H),4.52(s,2H),3.75–3.58(m,3H),3.21(s,3H),3.19–3.05(m,2H),2.19(s,3H),1.91–1.61(m,4H),1.17(d,J＝6.8Hz,3H).
实施例42：(3-(4-(氨基甲基)-4-(噁唑-4-基甲基)哌啶-1-基)-6-(2,3-二氯苯基)-5-甲基吡嗪-2-基)甲醇(TM149)的制备
Figure BDA0003458890760000502
第一步：噁唑-4-基甲基甲磺酸酯(42-2)的制备
将噁唑-4-基甲醇(1.30g,13.12mmol)溶于DCM(20mL)中，冷却到0℃，加入三乙胺(1.99g,19.68mmol)，然后慢慢加入甲基磺酰氯(1.65g,14.43mmol)，加完后再0℃搅拌10分钟，然后慢慢升温到室温反应1小时。反应完成后，向反应液中加入水(20mL)，充分搅拌后分液，有机相用无水硫酸钠干燥后过滤，浓缩滤液，硅胶柱层析纯化得42-2(1.10g)。
第二步：4-氰基-4-(噁唑-4-基甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(42-3)的制备
在氮气保护下，将N-叔丁氧羰基-4-氰基哌啶(650mg,3.09mmol)溶于THF(20mL)中，冷却到-78℃，慢慢加入LDA(THF中2M,3.7mL)，加完后在该温度下搅拌0.5小时，然后慢慢加入42-2(500mg,2.82mmol)，加完后自然升温到室温反应4小时。反应完成后，向反应液中加入饱和氯化铵溶液(20mL)，充分搅拌后，加入DCM(40mL)，再次充分搅拌后分液，有机相用无水硫酸钠干燥后过滤，浓缩滤液，硅胶柱层析纯化得42-3(310mg)。
第三步至第五步：(3-(4-(氨基甲基)-4-(噁唑-4-基甲基)哌啶-1-基)-6-(2,3-二氯苯基)-5-甲基吡嗪-2-基)甲醇(TM149)的制备
除在第三步中使用42-3代替实施例3中第二步的3-2外，采用与实施例3中第二步至第四步所描述的类似方法合成TM149粗品，粗品经反相HPLC(流动相A：乙腈，流动相B：0.05％甲酸水溶液)纯化得标题化合物。
MS m/z(ESI):462.2[M+H]+
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.54(s,1H),8.20(s,1H),7.87(s,1H),7.64(dd,J＝7.6,1.2Hz,1H),7.42(t,J＝7.6Hz,1H),7.34(dd,J＝7.6,1.6Hz,1H),4.66(s,2H),3.54–3.37(m,4H),2.99(s,2H),2.87(s,2H),2.25(s,3H),1.72–1.69(m,4H).
实施例43：(3-(4-(1-氨基乙基)-4-甲基哌啶-1-基)-6-((2,3-二氯吡啶-4-基)硫基)-5-甲基吡嗪-2-基)甲醇(TM114)的制备
Figure BDA0003458890760000511
第一步：3-(4-(1-((叔丁氧羰基)氨基)乙基)-4-甲基哌啶-1-基)-6-((2,3-二氯吡啶-4-基)硫基)-5-甲基吡嗪-2-羧酸乙酯(43-2)的制备
将43-1(83.4mg,0.46mmol)加入到1,4-二氧六环(5mL)中，加入磷酸钾(196.8mg,0.93mmol)、碘化亚铜(59.0mg,0.31mmol)、1,10-菲啰啉(55.7mg,0.31mmol)，再加入25-1(150mg,0.31mmol)，氮气保护下，在98℃反应16hr，过滤，将滤液浓缩，经硅胶柱层析分离(石油醚:乙酸乙酯＝3:1)得固体43-2(90mg,收率50％)。
第二步：(3-(4-(1-氨基乙基)-4-甲基哌啶-1-基)-6-((2,3-二氯吡啶-4-基)硫基)-5-甲基吡嗪-2-基)甲醇(TM114)的制备
除在本实施例第二步中使用43-2代替实施例25中第三步的25-2外，采用与实施例25第三步所描述的类似方法合成TM114的粗品。粗品经反相HPLC(流动相A：乙腈，流动相B：0.05％三氟乙酸水溶液)纯化得标题化合物的三氟乙酸盐。
MS m/z(ESI):442.1[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.11(d,J＝5.4Hz,1H),7.68(s,3H),6.67(d,J＝5.4Hz,1H),5.53(s,1H),4.47(s,2H),3.89(t,J＝14.0Hz,2H),3.27–3.05(m,3H),2.42(s,3H),1.62–1.40(m,4H),1.14(d,J＝6.8Hz,3H),1.01(s,3H).
实施例44：(3-(4-(氨基甲基)-4-((甲基氨基)甲基)哌啶-1-基)-6-(2,3-二氯苯基)-5-甲基吡嗪-2-基)甲醇(TM173)的制备
Figure BDA0003458890760000521
第一步：4-(((叔丁氧羰基)(甲基)氨基)甲基)-4-氰基哌啶-1-羧酸苄酯(44-1)的制备
将7-2(0.5g,1.33mmol)溶于无水四氢呋喃(5mL)中，冷却到0℃，加入NaH(0.11g,2.66mmol,60％)，搅拌10min后，加入碘甲烷(0.38g,2.66mmol)，加完后再0℃搅拌10分钟，然后慢慢升温到室温反应1小时。反应完成后，向反应液中加入水(15mL)及乙酸乙酯(15mL)，充分搅拌后分液，有机相用无水硫酸钠干燥后过滤，浓缩滤液得粗品44-1(0.5g)，直接用于下一步反应。
第二步至第四步：3-(4-氰基-4-((甲基氨基)甲基)哌啶-1-基)-6-(2,3-二氯苯基)-5-甲基吡嗪-2-羧酸乙酯(44-4)的制备
除在本实施例第二步中使用44-1代替实施例7中第三步的7-2外，采用与实施例7第三步至第五步所描述的类似方法合成44-4。
第五步：(3-(4-(氨基甲基)-4-((甲基氨基)甲基)哌啶-1-基)-6-(2,3-二氯苯基)-5-甲基吡嗪-2-基)甲醇(TM173)的制备
除在本实施例第五步中使用44-4代替实施例3中第四步的3-4外，采用与实施例3第四步所描述的类似方法合成TM173的粗品，粗品经反相HPLC(流动相A：乙腈，流动相B：0.05％三氟乙酸水溶液)纯化得标题化合物的三氟乙酸盐。
MS m/z(ESI):424.3[M+H]+
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.63(dd,J＝7.6,1.2Hz,1H),7.41(t,J＝7.6Hz,1H),7.33(dd,J＝7.6,1.6Hz,1H),4.68(s,2H),3.55–3.39(m,4H),3.30(s,2H),3.26(s,2H),2.64(s,3H),2.09(s,3H),1.69–1.64(m,4H).
实施例45：(6-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫基)-3-(4-(1-氨基乙基)-4-甲基哌啶-1-基)吡嗪-2-基)甲醇(TM174)的制备
Figure BDA0003458890760000522
第一步：6-溴-3-(4-(1-((叔丁氧羰基)氨基)乙基)-4-甲基哌啶-1-基)吡嗪-2-羧酸甲酯(45-2)的制备
将化合物45-1(3.7g,12.50mmol)、化合物21-5(2.35g,13.13mmol)和DIPEA(8.08g,62.50mmol)加到NMP(52.5mL)中，在25℃下反应3hr。LC-MS监控反应完全。然后向反应液中加入二碳酸二叔丁酯(3g,13.75mol)，于25℃继续反应2小时。加入水和乙酸乙酯，萃取产品，有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，得到粗品，粗品经薄层色谱法纯化，得到化合物45-2(2.5g,收率44％)。
第二步至第三步：(6-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫基)-3-(4-(1-氨基乙基)-4-甲基哌啶-1-基)吡嗪-2-基)甲醇(TM174)的制备
除在本实施例第二步中采用2-氨基-3-氯吡啶-4-硫酚钠替代实施例43中第一步的2,3-二氯吡啶-4-硫酚(43-1)外，采用与实施例43中第一步至第二步所描述的类似的方法合成TM174的粗品，粗品经反相HPLC(流动相A：乙腈，流动相B：0.05％甲酸水溶液)制备得标题化合物。
MS m/z(ESI):409.1[M+H]+
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.51(s,1H),8.30(s,1H),7.60(d,J＝5.6Hz,1H),6.04(d,J＝5.6Hz,1H),4.66(s,2H),3.87–3.76(m,2H),3.28–3.15(m,3H),1.79–1.51(m,4H),1.29(d,J＝6.8Hz,3H),1.12(s,3H).
实施例46：(3-(4-(1-氨基-2-氟乙基)-4-甲基哌啶-1-基)-6-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫基)-5-甲基吡嗪-2-基)甲醇(TM164)的制备
Figure BDA0003458890760000531
第一步：4-(2-溴乙酰基)-4-甲基哌啶-1-羧酸叔丁酯(46-1)的制备
氮气保护下，将21-3(5.00g,20.72mmol)加入THF(50mL)中，降温至-78℃，滴入LDA(四氢呋喃中2M,34.19mL)，滴完维持该温度搅拌10分钟。然后向体系中滴入TMSCl(7.43g,68.37mmol)，控温-78℃，滴完后搅拌1小时。将反应液倒入饱和碳酸氢钠水溶液中，甲基叔丁基醚萃取2次，合并有机相，饱和盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩干得到油状物。将该油状物溶于THF(25mL)中，加入碳酸钠(4.39g,41.44mmol)，降温至0℃，分批加入NBS(4.06g,22.79mmol)，随后升温至25℃反应4小时。反应完成后向反应液中加入甲基叔丁基醚及10％碳酸钠水溶液，搅拌后分液，有机相用食盐水洗涤1次，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩后经柱层析纯化得到46-1(6.60g,收率99％)。
第二步：4-(2-氟乙酰基)-4-甲基哌啶-1-羧酸叔丁酯(46-2)的制备
将46-1(6.60g,20.61mmol)、18-冠-6(6.86g,25.97mmol)、无水氟化钾(3.23g,55.65mmol)加入甲苯(100mL)中，升温至85℃反应6小时。反应完成后冷至室温，向体系中加入水，分出有机相，食盐水洗涤1次，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩干得粗品46-2(4.68g)，直接用于下一步反应。
第三步至第四步：2-氟-1-(4-甲基哌啶-4-基)乙-1-胺盐酸盐(46-4)的制备
除在第三步中使用46-2代替实施例21中第三步的21-3外，采用与实施例21中第三步至第四步所描述的类似方法合成46-4。
第五步：6-溴-3-(4-(1-((叔丁氧羰基)氨基)-2-氟乙基)-4-甲基哌啶-1-基)-5-甲基吡嗪-2-羧酸乙酯(46-5)的制备
除在本步骤中使用46-4代替实施例25中第一步的21-5外，采用与实施例25中第一步所描述的类似方法合成46-5。
第六步至第七步：(3-(4-(1-氨基-2-氟乙基)-4-甲基哌啶-1-基)-6-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫基)-5-甲基吡嗪-2-基)甲醇(TM164)的制备
除在本实施例第六步中采用2-氨基-3-氯吡啶-4-硫酚钠替代实施例43中第一步的2,3-二氯吡啶-4-硫酚(43-1)外，采用与实施例43中第一步至第二步所描述的类似的方法合成TM164的粗品，粗品经反相HPLC(流动相A：乙腈，流动相B：0.05％三氟乙酸水溶液)纯化得标题化合物的三氟乙酸盐。
MS m/z(ESI):441.0[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.11(s,3H),7.67(d,J＝5.6Hz,1H),6.82(s,2H),5.81(d,J＝5.6Hz,1H),4.86–4.76(m,1H),4.69-4.64(m,1H),4.47(s,2H),3.85-3.83(m,2H),3.44-3.38(m,1H),3.21(m,2H),2.41(s,3H),1.72-1.67(m,2H),1.58-1.50(m,2H),1.09(s,3H).
实施例47：(3-(4-(1-氨基-2-氟乙基)-4-甲基哌啶-1-基)-6-(2,3-二氯苯基)-5-甲基吡嗪-2-基)甲醇(TM175)的制备
Figure BDA0003458890760000541
除在本实施例第一步中采用46-5、2,3-二氯苯硼酸分别替代实施例25中第二步的25-1、(2,3-二氯吡啶-4-基)硼酸代替外，采用与实施例25中第二步至第三步所描述的类似的方法合成TM175的粗品，粗品经反相HPLC(流动相A：乙腈，流动相B：0.05％三氟乙酸水溶液)纯化得标题化合物的三氟乙酸盐。
MS m/z(ESI):426.9[M+H]+
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.64(dd,J＝7.8,1.6Hz,1H),7.42(t,J＝7.8Hz,1H),7.34(dd,J＝7.8,1.6Hz,1H),4.85–4.69(m,2H),4.66(s,2H),3.73–3.62(m,2H),3.49–3.39(m,1H),3.22(m,2H),2.25(s,3H),1.88-1.79(m,2H),1.65(m,2H),1.20(s,3H).
实施例48：(3-(4-(1-氨基乙基)-4-甲基哌啶-1-基)-6-((2-氯吡啶-3-基)硫基)-5-甲基吡嗪-2-基)甲醇(TM151)的制备
Figure BDA0003458890760000542
除在本实施例第一步中使用2-氯吡啶-3-硫酚钠代替实施例43中第一步中的43-1外，采用与实施例43第一步至第二步所描述的类似方法合成TM151的粗品。粗品经反相HPLC(流动相A：乙腈，流动相B：0.05％三氟乙酸水溶液)纯化得标题化合物的三氟乙酸盐。
MS m/z(ESI):408.0[M+H]+
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.22(dd,J＝4.8,1.6Hz,1H),7.49(dd,J＝7.8,1.6Hz,1H),7.27(dd,J＝7.8,4.8Hz,1H),4.56(s,2H),3.81–3.66(m,2H),3.25–3.13(m,3H),2.50(s,3H),1.76–1.49(m,4H),1.28(d,J＝7.2Hz,3H),1.11(s,3H).
实施例49：(3-(4-(1-氨基乙基)-4-甲基哌啶-1-基)-5-甲基-6-((2-(三氟甲基)吡啶-3-基)硫基)吡嗪-2-基)甲醇(TM152)的制备
Figure BDA0003458890760000543
除在本实施例第一步中使用2-(三氟甲基)吡啶-3-硫酚钠代替实施例43中第一步的43-1外，采用与实施例43第一步至第二步所描述的类似方法合成TM152的粗品。粗品经反相HPLC(流动相A：乙腈，流动相B：0.05％碳酸氢钠水溶液)纯化得标题化合物。
MS m/z(ESI):442.1[M+H]+
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.48(d,J＝4.8Hz,1H),7.69(d,J＝4.8Hz,1H),7.49(d,J＝4.8，4.8Hz,1H),4.55(s,2H),3.68–3.66(m,2H),3.18–3.12(m,2H),2.84–2.19(m,1H),2.47(s,3H),1.68–1.46(m,4H),1.12(d,J＝6.8Hz,3H),1.01(s,3H).
实施例50：(3-(4-(1-氨基乙基)-4-(氟甲基)哌啶-1-基)-6-(2,3-二氯苯基)-5-甲基吡嗪-2-基)甲醇(TM109)的制备
Figure BDA0003458890760000551
第一步：1-(叔丁基)4-乙基4-(氟甲基)哌啶-1,4-二羧酸酯(50-2)的制备
将N-Boc-4-哌啶甲酸乙酯(5.0g,19.43mmol)溶于THF(40mL)，降温至-78℃，滴加入LDA(四氢呋喃中2M,16.5mL)，-78℃反应1小时。随后滴加入氟溴甲烷(2.8g,24.93mmol)，继续维持该温度反应1小时，自然升温至25℃反应1小时。反应完成后向反应液中加入饱和氯化铵溶液，乙酸乙酯萃取三次，有机相合并后经硫酸钠干燥，减压浓缩得粗品，柱层析纯化得50-2(2.1g,收率37％)。
第二步：4-(氟甲基)-4-(羟甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(50-3)的制备
将50-2(2.2g,7.60mmol)溶于THF(20mL)，降温至0℃，缓慢加入氢化铝锂(283.7mg,8.36mmol)，0℃反应1小时。反应完成后向反应液中依次加入水(2mL)、10％NaOH水溶液(2mL)和水(6mL)，通过硅藻土垫过滤，滤液减压浓缩，得粗品50-3(1.8g)，直接用于下一步反应。
第三步：4-(氟甲基)-4-甲酰基哌啶-1-羧酸叔丁酯(50-4)的制备
将50-3(1.18g,4.52mmol)溶于二氯甲烷(20mL)，加入氯铬酸吡啶盐(2.84g,13.55mmol)，20℃反应16小时。反应完成后将反应液减压浓缩得粗品，粗品经柱层析纯化得50-4(0.80g,收率68％)。
第四步：(E)-4-(((叔丁基亚磺酰基)亚氨基)甲基)-4-(氟甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(50-5)的制备
将50-4(0.80g,3.26mmol)溶于二氯甲烷(30mL)，加入碳酸铯(3.19g,9.78mmol)和叔丁基亚磺酰胺(0.59g,4.89mmol)，25℃反应16小时，LC-MS检测反应完成后将反应液过滤，滤液减压浓缩得到粗品，粗品经柱层析纯化得50-5(1.00g,收率87％)。
第五步：4-(1-((叔丁基亚磺酰基)氨基)乙基)-4-(氟甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(50-6)的制备
将50-5(1.0g,2.87mmol)溶于THF(10mL)，降温至-78℃，滴加入甲基锂(四氢呋喃中1M,6.0mL)，-78℃反应15分钟。反应完成后向反应液中加入饱和氯化铵溶液，乙酸乙酯萃取三次，有机相合并后经硫酸钠干燥，减压浓缩得粗品50-6(1.0g)，直接用于下一步反应。
第六步：1-(4-(氟甲基)哌啶-4-基)乙-1-胺(50-7)的制备
将50-6(1.4g,3.84mmol)溶于MeOH(15mL)，加入HCl(乙酸乙酯中2M,15mL)中，25℃反应1小时。反应结束后，减压浓缩，得粗品50-7的盐酸盐(0.6g)，直接用于下一步反应。
第七步至第八步：(3-(4-(1-氨基乙基)-4-(氟甲基)哌啶-1-基)-6-(2,3-二氯苯基)-5-甲基吡嗪-2-基)甲醇(TM109)的制备
除在第七步中使用50-7代替实施例3中第三步的3-3外，采用与实施例3中第三步至第四步所描述的类似方法合成TM109的粗品，粗品经反相HPLC(流动相A：乙腈，流动相B：0.05％碳酸氢钠水溶液)纯化得标题化合物。
MS m/z(ESI):427.0[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.73(dd,J＝8.0,1.6Hz,1H),7.48(t,J＝8.0Hz,1H),7.42(dd,J＝8.0,1.6Hz,1H),5.30(t,J＝6.0Hz,1H),4.71-4.51(m,2H),4.50(d,J＝6.0Hz,2H),3.63–3.53(m,2H),3.23–3.09(m,2H),2.84(m,1H),2.18(s,3H),1.77–1.49(m,4H),1.02(d,J＝6.4Hz,3H).
实施例51：(6-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫基)-3-(4-(1-氨基乙基)-4-(氟甲基)哌啶-1-基)-5-甲基吡嗪-2-基)甲醇(TM167)的制备
Figure BDA0003458890760000561
第一步：6-溴-3-(4-(1-((叔丁氧基羰基)氨基)乙基)-4-(氟甲基)哌啶-1-基)-5-甲基吡嗪-2-羧酸乙酯(51-1)的制备
除在本步骤中使用50-7代替实施例25中第一步的21-5外，采用与实施例25中第一步所描述的类似方法合成51-1。
第二步至第三步：(6-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫基)-3-(4-(1-氨基乙基)-4-(氟甲基)哌啶-1-基)-5-甲基吡嗪-2-基)甲醇(TM167)的制备
除在本实施例第二步中采用2-氨基-3-氯吡啶-4-硫酚钠替代实施例43中第一步的2,3-二氯吡啶-4-硫酚(43-1)外，采用与实施例43中第一步至第二步所描述的类似的方法合成TM167的粗品，粗品经反相HPLC(流动相A：乙腈，流动相B：0.05％碳酸氢钠水溶液)纯化得标题化合物。
MS m/z(ESI):441.1[M+H]+
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.58(d,J＝5.6Hz,1H),5.87(d,J＝5.6Hz,1H),4.73(d,J＝47.6Hz,2H),4.63(s,2H),3.84–3.71(m,2H),3.29–3.21(m,2H),3.01(m,1H),2.48(s,3H),1.85–1.65(m,4H),1.21(d,J＝6.8Hz,3H).
实施例52：(3-(4-(1-氨基乙基)-4-(二氟甲基)哌啶-1-基)-6-(2,3-二氯吡啶-4-基)-5-甲基吡嗪-2-基)甲醇(TM176)的制备
Figure BDA0003458890760000562
第一步：1-(叔丁基)4-乙基4-甲酰基哌啶-1,4-二羧酸酯(52-2)的制备
将52-1(1.0g,2.78mmol)溶于DCM(20mL)，加入PCC(1.7g,8.35mmol)，20℃反应24小时，反应完成后将反应液减压浓缩得粗品，粗品经柱层析纯化得52-2(0.7g,收率89％)。
第二步：1-(叔丁基)4-乙基4-(二氟甲基)哌啶-1,4-二羧酸酯(52-3)的制备
将52-2(4.6g,16.12mmol)溶于二乙胺基三氟化硫(13.09g,80.61mmol)，然后20℃反应18小时。反应完成后将反应液慢滴加至冷的饱和碳酸氢钠溶液中，加入乙酸乙酯稀释分层，水相用乙酸乙酯萃取三次，合并有机相，干燥，减压浓缩，得粗品52-3(4.5g)，直接用于下一步反应。
第三步至第七步：1-(4-(二氟甲基)哌啶-4-基)乙-1-胺(52-8)的制备
除在第三步中使用52-3代替实施例50中第二步的50-2外，采用与实施例50中第二步至第六步所描述的类似方法合成标题化合物52-8的盐酸盐。
第八步至第十步：(3-(4-(1-氨基乙基)-4-(二氟甲基)哌啶-1-基)-6-(2,3-二氯吡啶-4-基)-5-甲基吡嗪-2-基)甲醇(TM176)的制备
除在第八步中使用52-8代替实施例25中第一步的21-5外，采用与实施例25中第一步至第三步所描述的类似方法合成TM176的粗品，粗品经反相HPLC(流动相A：乙腈，流动相B：0.05％三氟乙酸水溶液)纯化得标题化合物的三氟乙酸盐。
MS m/z(ESI):446.0[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.50(d,J＝4.8Hz,1H),7.92(s,3H),7.57(d,J＝4.8Hz,1H),6.41(t,J＝54.4Hz,1H),5.45(s,1H),4.52(s,2H),3.72–3.47(m,5H),2.23(s,3H),1.98–1.73(m,4H),1.30(d,J＝6.9Hz,3H).
实施例53：(3-(4-(1-氨基乙基)-4-(二氟甲基)哌啶-1-基)-6-((2,3-二氯吡啶-4-基)硫基)-5-甲基吡嗪-2-基)甲醇(TM177)的制备
Figure BDA0003458890760000571
除在本实施例中使用52-9代替实施例43中第一步的25-1外，采用与实施例43中第一步至第二步所描述的类似方法合成TM177的粗品，粗品经反相HPLC(流动相A：乙腈，流动相B：0.05％三氟乙酸水溶液)纯化得标题化合物的三氟乙酸盐。
MS m/z(ESI):478.0[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.11(d,J＝5.2Hz,1H),7.92(s,3H),6.67(d,J＝5.2Hz,1H),6.40(t,J＝54Hz,1H),5.54(s,1H),4.50(s,2H),3.78–3.51(m,5H),2.43(s,3H),1.97–1.74(m,4H),1.31(d,J＝6.8Hz,3H).
实施例54：1-(4-((5-(4-(1-氨基乙基)-4-甲基哌啶-1-基)-6-(羟甲基)-3-甲基吡嗪-2-基)硫基)-3-氯吡啶-2-基)氮杂环丁烷-3-醇(TM178)的制备
Figure BDA0003458890760000572
第一步：(1-(1-(5-溴-3-(羟甲基)-6-甲基吡嗪-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(54-1)的制备
将25-1(5.7g,11.74mmol)溶解在二氯甲烷(100mL)中，降温至-78℃，加入DIBAL-H(己烷中1M,35mL)，加完后升至0℃反应15分钟。反应完毕后，降温至-78℃，加入酒石酸钾钠水溶液(20％wt,100mL)淬灭。升至室温后，反应体系剧烈搅拌2小时。二氯甲烷萃取，有机相合并后干燥浓缩得到粗品。粗品经硅胶柱色谱法纯化得到化合物54-1(2.16g,收率39％)。
第二步：(1-(1-(5-((2,3-二氯吡啶-4-基)硫基)-3-(羟甲基)-6-甲基吡嗪-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(54-2)的制备
除在本步骤中使用54-1代替实施例43中第一步的25-1外，采用与实施例43中第一步所描述的类似方法合成化合物54-2。
第三步：(1-(1-(5-((3-氯-2-(3-羟基氮杂环丁烷-1-基)吡啶-4-基)硫基)-3-(羟甲基)-6-甲基吡嗪-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(54-3)的制备
将54-2(30.00mg,55.30umol)溶于异丙醇(2mL)，加入氮杂环丁烷-3-醇(8.08mg,110.59umol)和DIPEA(28.59mg,221.19umol)，于微波反应器中加热至120℃反应2小时，LC-MS检测反应完成后将反应液浓缩，经薄层色谱纯化得到化合物54-3(12mg,收率37％)。
第四步：1-(4-((5-(4-(1-氨基乙基)-4-甲基哌啶-1-基)-6-(羟甲基)-3-甲基吡嗪-2-基)硫基)-3-氯吡啶-2-基)氮杂环丁烷-3-醇(TM178)的制备
将54-3(12mg,20.72umol)溶于DCM(2mL)，加入TFA(0.5mL)，20℃反应0.5小时，LC-MS检测反应完成后将反应液浓缩，粗品经反相HPLC(流动相A：乙腈，流动相B：0.05％甲酸水溶液)纯化得标题化合物的甲酸盐(5mg,收率44％)。
MS m/z(ESI):479.0[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.38(s,1H),7.79(d,J＝5.6Hz,1H),5.90(d,J＝5.2Hz,1H),4.53–4.45(m,1H),4.46(s,2H),4.38–4.31(m,2H),3.90–3.82(m,4H),2.99–2.96(m,2H),2.93(dd,J＝12.4,6.4Hz,1H),2.40(s,3H),1.66–1.32(m,4H),1.08(d,J＝6.8Hz,3H),0.97(s,3H).
实施例55：(3-(4-(1-氨基-2-氟乙基)-4-甲基哌啶-1-基)-6-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫基)吡嗪-2-基)甲醇(TM179)的制备。
Figure BDA0003458890760000581
除在本实施例第一步中采用46-4替代实施例45中第一步的21-5外，采用与实施例45中第一步至第三步所描述的类似的方法合成TM179的粗品，粗品经反相HPLC(流动相A：乙腈，流动相B：0.05％三氟乙酸水溶液)纯化得标题化合物的三氟乙酸盐。
MS m/z(ESI):427.1[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.36(s,1H),8.20(s,3H),7.72(d,J＝6.0Hz,1H),7.30(brs,1H),6.04(d,J＝6.0Hz,1H),4.86–4.76(m,1H),4.75–4.65(m,1H),4.52(s,2H),3.88–3.76(m,2H),3.47–3.33(m,2H),3.23(t,J＝11.6Hz,2H),1.68–1.46(m,4H),1.10(s,3H).
实施例56：(3-(4-(1-氨基-2-甲氧基乙基)-4-甲基哌啶-1-基)-6-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫基)吡嗪-2-基)甲醇(TM180)的制备
Figure BDA0003458890760000582
第一步：4-甲基-4-(环氧乙烷-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(56-2)的制备
氮气保护下，将三甲基碘化亚砜(12.2g,55.4mmol)加入DMSO(50mL)中，冰水降温至0℃；分批加入NaH(1.27g,55.4mmol)，加完保温10～20℃反应0.5小时；一次性加入4-甲酰基-4-甲基哌啶-1-羧酸叔丁酯(7.00g,30.8mmol)保温10～20℃反应4小时。冰水降温至0℃，依次加入水(150ml)、乙酸乙酯(200ml)搅拌10分钟，分出有机相，饱和盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩至干得到化合物56-2粗品(5.37g)，直接用于下一步。
第二步：4-(1-羟基-2-甲氧基乙基)-4-甲基哌啶-1-羧酸叔丁酯(56-3)的制备
将化合物56-2(1.40g,5.80mmol)溶于MeOH(60mL)，加入MeONa(10.44g,58.0mmol，30％的MeOH溶液)，然后40℃搅拌5h。LC-MS显示原料基本消失，冷至室温，加1N HCl淬灭反应，乙酸乙酯萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，抽滤，浓缩，得化合物56-3粗品(1.4g)，直接用于下一步。
第三步：4-(2-甲氧基乙酰基)-4-甲基哌啶-1-羧酸叔丁酯(56-4)的制备
将化合物56-3(300mg,1.10mmol)溶于DCM(20mL)，加入碳酸氢钠(277mg,3.30mmol)和Dess-Martin试剂(710mg,1.65mmol)，然后室温搅拌5h。LC-MS显示原料基本消失，冷至室温，加饱和亚硫酸钠溶液淬灭反应，二氯甲烷萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，抽滤，浓缩，得化合物56-4粗品(250mg)，直接用于下一步。
第四步：(Z)-4-(1-(肟基)-2-甲氧基乙基)-4-甲基哌啶-1-羧酸叔丁酯(56-5)的制备
将化合物56-4(230mg,0.85mmol)溶于EtOH(10mL)，加入羟胺盐酸盐(118mg,1.70mmol)和三乙胺(257mg,2.54mmol)，然后60℃搅拌2h。LC-MS显示原料基本消失，冷至室温，加乙酸乙酯稀释，用1N盐酸溶液洗涤，合并有机相，无水硫酸钠干燥，抽滤，浓缩，得化合物56-5粗品(230mg)，直接用于下一步。
第五步：4-(1-氨基-2-甲氧基乙基)-4-甲基哌啶-1-羧酸叔丁酯(56-6)的制备
将化合物56-5(230mg,0.85mmol)溶于MeOH(10mL)，加入兰尼镍(94mg,1.61mmol)，氢气球置换三次后，室温搅拌10小时。LC-MS显示原料基本消失，通过硅藻土垫抽滤，浓缩，得化合物56-6粗品(200mg)，未进一步纯化，直接用于下一步。
第六步：2-甲氧基-1-(4-甲基哌啶-4-基)乙-1-胺(化合物56-7)的制备
将化合物56-6(200mg,0.73mmol)溶于DCM(10mL)，加入三氟乙酸(3mL)，室温搅拌1小时。LC-MS显示原料基本消失，浓缩，得化合物56-7粗品的三氟乙酸盐(200mg,收率95％)，未进一步纯化，直接用于下一步。
第七至第九步：(3-(4-(1-氨基-2-甲氧基乙基)-4-甲基哌啶-1-基)-6-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫基)吡嗪-2-基)甲醇(TM180)的制备。
除在本实施例第七步中采用56-7的三氟乙酸盐替代实施例45中第一步的21-5外，采用与实施例45中第一步至第三步所描述的类似的方法合成TM180的粗品，粗品经反相HPLC(流动相A：乙腈，流动相B：0.05％三氟乙酸水溶液)纯化得标题化合物的三氟乙酸盐。
MS m/z(ESI):439.1[M+H]+
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.27(s,1H),7.61(d,J＝5.6Hz,1H),6.04(d,J＝5.6Hz,1H),4.65(s,2H),3.77–3.70(m,1H),3.58(dd,J＝9.2,3.2Hz,1H),3.36(s,3H),3.33–3.20(m,4H),2.80(dd,J＝8.8,3.2Hz,1H),1.81–1.66(m,2H),1.61–1.51(m,2H),1.05(s,3H).
实施例57：(3-(4-(1-氨基乙基)-4-甲基哌啶-1-基)-6-((7-氯-1H-吲唑-6-基)硫基)-5-甲基吡嗪-2-基)甲醇(TM181)的制备
Figure BDA0003458890760000591
第一步：3-((7-氯-1H-吲唑-6-基)硫基)丙酸2-乙基己酯(57-2)的制备
将57-1(1.76g,7.61mmol)、3-巯基丙酸2-乙基己酯(2.49g,11.42mmol)、DIPEA(1.97g,15.23mmol)、Xantphos(0.44g,0.76mmol)和三(二亚苄基丙酮)二钯(0.38g,0.38mmol)溶解在1,4-二氧六环(20mL)中，氮气置换三次，加热100℃反应2小时。反应完毕后，浓缩出去溶剂，加乙酸乙酯(50mL)溶解后用饱和食盐水(50mL)洗涤。有机相干燥浓缩得到粗品。粗品经硅胶柱色谱法纯化得到化合物57-2(2.66g,收率85％)。
第二步：7-氯-1H-吲唑-6-硫醇钠(57-3)的制备
将57-2(0.44g,1.20mmol)溶解在四氢呋喃(5mL)中，加入乙醇钠的乙醇溶液(0.8g,2.39mmol,20％wt)，室温搅拌0.5小时。反应结束后加入二氯甲烷(10mL)析出大量固体。过滤得到化合物57-3(0.12g,50％)。
第三步：(1-(1-(5-((7-氯-1H-吲唑-6-基)硫基)-3-(羟甲基)-6-甲基吡嗪-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(57-4)的制备
除在本步骤中使用57-3代替实施例54中第二步的2,3-二氯吡啶-4-硫醇外，采用与实施例54中第二步所描述的类似方法合成化合物57-4。
第四步：(3-(4-(1-氨基乙基)-4-甲基哌啶-1-基)-6-((7-氯-1H-吲唑-6-基)硫基)-5-甲基吡嗪-2-基)甲醇(TM181)的制备
除在本步骤中采用57-4代替实施例54中第四步的54-3外，采用与实施例54中第四步所描述的类似的方法合成TM181的粗品，粗品经反相HPLC(流动相A：乙腈，流动相B：0.05％三氟乙酸水溶液)纯化得标题化合物的三氟乙酸盐。
MS m/z(ESI):447.0[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.60(s,1H),8.16(s,1H),7.65(s,4H),6.73(d,J＝8.2Hz,1H),5.29(s,1H),4.41(s,2H),3.73–3.69(m,2H),3.15–3.09(m,3H),2.51(s,3H),1.56–1.15(m,4H),1.14(d,J＝6.6Hz,3H),0.99(s,3H).
实施例58：(3-(4-(1-氨基乙基)-4-乙基哌啶-1-基)-6-(2,3-二氯吡啶-4-基)-5-甲基吡嗪-2-基)甲醇(TM111)的制备
Figure BDA0003458890760000601
除在本实施例第一步中使用58-1代替实施例25中第一步的21-5外，采用与实施例25第一步至第三步所描述的类似方法合成TM111的粗品，粗品经反相HPLC(流动相A：乙腈，流动相B：0.05％三氟乙酸水溶液)纯化得标题化合物的三氟乙酸盐。
MS m/z(ESI):424.1[M+H]+
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.41(d,J＝4.8Hz,1H),7.45(d,J＝4.8Hz,1H),4.67(s,2H),3.73–3.63(m,2H),3.48–3.42(m,1H),3.28–3.20(m,2H),2.28(s,3H),1.82–1.59(m,6H),1.31(d,J＝6.8Hz,3H),0.95(t,J＝7.6Hz,3H).
实施例59：(3-(4-(1-氨基乙基)-4-甲基哌啶-1-基)-6-((7-氯-1-甲基-1H-吲唑-6-基)硫基)-5-甲基吡嗪-2-基)甲醇以及(3-(4-(1-氨基乙基)-4-甲基哌啶-1-基)-6-((7-氯-2-甲基-2H-吲唑-6-基)硫基)-5-甲基吡嗪-2-基)甲醇(TM182A和TM182B)的制备。
Figure BDA0003458890760000602
第一步：6-溴-7-氯-1-甲基-1H-吲唑以及6-溴-7-氯-2-甲基-2H-吲唑(59-1A和59-1B)的制备
将57-1(1.7g,7.34mmol)溶解在四氢呋喃(20mL)，降温至0℃，加入氢化钠(337.7mg,8.81mmol,60％wt)。搅拌0.5小时后加入碘甲烷(1.6g,11.02mmol)，缓慢升至室温，反应1小时。反应完毕后加入饱和食盐水淬灭。乙酸乙酯萃取，有机相合并后干燥，浓缩得到粗品。粗品经硅胶柱色谱法纯化得到固体产品59-1A及59-1B(0.4g,0.2g,总收率67％)。
第二步至第五步：(3-(4-(1-氨基乙基)-4-甲基哌啶-1-基)-6-((7-氯-1-甲基-1H-吲唑-6-基)硫基)-5-甲基吡嗪-2-基)甲醇以及(3-(4-(1-氨基乙基)-4-甲基哌啶-1-基)-6-((7-氯-2-甲基-2H-吲唑-6-基)硫基)-5-甲基吡嗪-2-基)甲醇(TM182A和TM182B)的制备。
除在本实施例中第二步中使用59-1A以及59-1B分别代替实施例57中第一步的57-1外，采用与实施例57第一步至第四步所描述的类似方法分别合成TM182A及TM182B的粗品。粗品分别经反相HPLC(流动相A：乙腈，流动相B：0.05％碳酸氢铵水溶液)纯化得标题化合物。所得产物的表征数据分别如下。
产物I：
MS m/z(ESI):461.0[M+H]+
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.25(s,1H),7.53(d,J＝8.6Hz,1H),6.78(d,J＝8.6Hz,1H),4.53(s,2H),4.22(s,3H),3.66–3.54(m,2H),3.12(m,2H),2.75(q,J＝6.6Hz,1H),2.45(s,3H),1.67–1.56(m,3H),1.49–1.45(m,1H),1.09(d,J＝6.6Hz,3H),0.99(s,3H).
产物II：
MS m/z(ESI):461.0[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.08(s,1H),7.72(s,3H),7.61(d,J＝8.0Hz,1H),6.65(d,J＝8Hz,1H),5.35(s,1H),4.43(s,2H),4.33(s,3H),3.79–3.72(m,2H),3.16–3.10(m,3H),2.40(s,3H),1.65–1.53(m,3H),1.44–1.40(m,1H),1.15(d,J＝6.8Hz,3H),1.00(s,3H).
实施例60：(3-(4-(1-氨基乙基)-4-甲基哌啶-1-基)-6-((8-氯咪唑并[1,2-a]吡啶-7-基)硫基)吡嗪-2-基)甲醇(TM183)的制备
Figure BDA0003458890760000611
第一步至第二步：8-氯咪唑并[1,2-a]吡啶-7-硫醇钠(60-3)的制备
除在第一步中使用60-1代替实施例57中第一步的57-1外，采用与实施例57中第一步至第二步所描述的类似方法合成化合物60-3。
第三步至第四步：(3-(4-(1-氨基乙基)-4-甲基哌啶-1-基)-6-((8-氯咪唑并[1,2-a]吡啶-7-基)硫基)吡嗪-2-基)甲醇(TM183)的制备
除在第三步中使用60-3代替实施例45中第二步的2-氨基-3-氯吡啶-4-硫酚钠外，采用与实施例45中第二步至第三步所描述的类似方法合成TM183的粗品。粗品经反相HPLC(流动相A：乙腈，流动相B：0.05％三氟乙酸水溶液)纯化得标题化合物的三氟乙酸盐。
MS m/z(ESI):433.1[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.53(d,J＝7.2Hz,1H),8.31(s,1H),8.16(s,1H),7.84–7.76(m,4H),6.76(d,J＝7.2Hz,1H),4.50(s,3H),3.81–3.74(m,2H),3.21–3.12(m,3H),1.65–1.55(m,3H),1.45–1.41(m,1H),1.15(d,J＝6.6Hz,3H),1.01(s,3H).
实施例61：(3-(4-(1-氨基乙基)-4-甲基哌啶-1-基)-6-((8-氯-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶-7-基)硫基)吡嗪-2-基)甲醇(TM184)的制备
Figure BDA0003458890760000621
第一步至第二步：8-氯-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶-7-硫醇钠(61-3)的制备
除在第一步中使用61-1代替实施例57中第一步的57-1外，采用与实施例57中第一步至第二步所描述的类似方法合成化合物61-3。
第三步至第四步：(3-(4-(1-氨基乙基)-4-甲基哌啶-1-基)-6-((8-氯-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶-7-基)硫基)吡嗪-2-基)甲醇(TM184)的制备
除在第三步中使用61-3代替实施例45中第二步的2-氨基-3-氯吡啶-4-硫酚钠外，采用与实施例45中第二步至第三步所描述的类似方法合成TM184的粗品。粗品经反相HPLC(流动相A：乙腈，流动相B：0.05％三氟乙酸水溶液)纯化得标题化合物的三氟乙酸盐。
MS m/z(ESI):434.1[M+H]+
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ9.17(s,1H),8.34(s,1H),8.31(d,J＝7.8Hz,1H),6.73(d,J＝7.8Hz,1H),4.65(s,2H),3.85–3.72(m,2H),3.35–3.10(m,3H),1.80–1.50(m,4H),1.30(d,J＝7.6Hz,3H),1.13(s,3H).
实施例62：(R)-(3-(4-(1-氨基乙基)-4-甲基哌啶-1-基)-6-(2,3-二氯吡啶-4-基)-5-甲基吡嗪-2-基)甲醇(TR87)以及(S)-(3-(4-(1-氨基乙基)-4-甲基哌啶-1-基)-6-(2,3-二氯吡啶-4-基)-5-甲基吡嗪-2-基)甲醇(TS87)的制备
Figure BDA0003458890760000622
将TM87进行手型拆分得到TR87及TS87，手性纯化色谱条件如下：
色谱柱 CHIRALCEL OZ-H(OZH00CD-VF004)
色谱柱规格 0.46cm I.D.×15cm L
进样量 40ul
流动相 ACN/DEA＝100/0.1(V/V)
流速 1.0ml/min
检测波长 UV 254nm
温度 35℃
HPLC型号： 岛津LC-20AD
拆分得到峰1保留时间8.560min,峰2保留时间：10.306min。
峰1：
MS m/z(ESI):410.2[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.49(d,J＝4.8Hz,1H),7.57(d,J＝4.8Hz,1H),5.33(t,J＝5.6Hz,1H),4.49(d,J＝5.6Hz,2H),3.73–3.68(m,2H),3.19–3.06(m,2H),2.51–2.50(m,2H),2.20(s,3H),1.56–1.26(m,4H),0.92(d,J＝6.8Hz,3H),0.88(s,3H).
峰2：
MS m/z(ESI):410.2[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.49(d,J＝4.8Hz,1H),7.57(d,J＝4.8Hz,1H),5.33(t,J＝5.6Hz,1H)，4.49(d,J＝5.6Hz,2H),3.73–3.68(m,2H),3.19–3.06(m,2H),2.51–2.50(m,2H),2.20(s,3H),1.56–1.26(m,4H),0.92(d,J＝6.8Hz,3H),0.88(s,3H).
实施例63：(3-(4-(1-氨基乙基)-4-甲基哌啶-1-基)-6-((3-氯吡啶-4-基)硫基)-5-甲基吡嗪-2-基)甲醇(TM185)的制备
Figure BDA0003458890760000631
除在本实施例中使用3-氯吡啶-4-硫酚钠代替实施例43中第一步的43-1外，采用与实施例43第一步至第二步所描述的类似方法合成TM185的粗品。粗品经反相HPLC(流动相A：乙腈，流动相B：0.05％碳酸氢钠水溶液)纯化得标题化合物。
MS m/z(ESI):408.1[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.57(s,1H),8.27(d,J＝5.2Hz,1H),7.77(s,3H),6.69(d,J＝5.2Hz,1H),4.48(s,2H),3.94–3.80(m,2H),3.22–3.08(m,3H),2.44(s,3H),1.70–1.35(m,4H),1.16(d,J＝7.6Hz,3H),1.02(s,3H).
实施例64：(3-(4-(1-氨基乙基)-4-环丙基哌啶-1-基)-6-(2,3-二氯吡啶-4-基)-5-甲基吡嗪-2-基)甲醇(TM104)的制备
Figure BDA0003458890760000632
第一步至第三步：1-(4-环丙基哌啶-4-基)乙-1-胺盐酸盐(64-4)的制备
除在本实施例第一步中使用64-1代替实施例50中第四步的50-4外，采用与实施例50第四步至第六步所描述的类似方法合成化合物64-4。
第四步至第六步：3-(4-(1-氨基乙基)-4-环丙基哌啶-1-基)-6-(2,3-二氯吡啶-4-基)-5-甲基吡嗪-2-基)甲醇(TM104)的制备
除在本实施例中使用64-4代替实施例25中第一步的21-5外，采用与实施例25第一步至第三步所描述的类似方法合成TM104的粗品。粗品经反相HPLC(流动相A：乙腈，流动相B：0.05％三氟乙酸水溶液)纯化得标题化合物的三氟乙酸盐。
MS m/z(ESI):436.1[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.50(d,J＝4.8Hz,1H),7.70(s,3H),7.56(d,J＝4.8Hz,1H),5.38(s,1H),4.49(s,2H),3.75–3.68(m,3H),3.25–3.08(m,2H),2.21(s,3H),1.64–1.59(m,2H),1.41–1.18(m,5H),0.85-0.78(m,1H),0.43–0.35(m,4H).
实施例65：(3-(4-(1-氨基乙基)-4-甲基哌啶-1-基)-6-(4-氯-5-甲氧基吡啶-3-基)-5-甲基吡嗪-2-基)甲醇(TM128)的制备
Figure BDA0003458890760000641
除在本实施例第一步中使用65-1代替实施例25中第二步的(2,3-二氯吡啶-4-基)硼酸外，采用与实施例25第二步至第三步所描述的类似方法合成标题化合物的三氟乙酸盐。
MS m/z(ESI):406.1[M+H]+
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.14(d,J＝4.8Hz,1H),6.99(d,J＝4.8Hz,1H),4.66(s,2H),4.04(s,3H),3.72–3.68(m,2H),3.30–3.15(m,3H),2.26(s,3H),1.72–1.55(m,4H),1.29(d,J＝7.6Hz,3H),1.11(s,3H).
实施例66：6-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫基)-(3-(4-(1-氨基乙基)-4-环丙基哌啶-1-基)--5-甲基吡嗪-2-基)甲醇(TM172)的制备
Figure BDA0003458890760000642
除在本实施例第一步中使用2-氨基-3-氯吡啶-4-硫酚钠和化合物64-5分别代替实施例43中第一步的2,3-二氯吡啶-4-硫酚(43-1)以及化合物25-1外，采用与实施例43中第一步至第二步所描述的类似的方法合成TM172的粗品，粗品经反相HPLC(流动相A：乙腈，流动相B：0.05％三氟乙酸水溶液)纯化得标题化合物的三氟乙酸盐。
MS m/z(ESI):449.1[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.72(s,3H),7.66(d,J＝5.2Hz,1H),6.76(brs,2H),5.78(d,J＝5.2Hz,1H),4.46(s,2H),3.82–3.67(m,3H),3.35–3.10(m,2H),2.40(s,3H),1.68–1.55(m,2H),1.36–1.26(m,5H),0.86–0.80(m,1H),0.41–0.34(m,4H).
实施例67：(6-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫基)-3-(4-(1-氨基乙基)-4-甲基哌啶-1-基)-5-甲基吡嗪-2-基)甲醇(TM150)的制备
Figure BDA0003458890760000643
除在本实施例第一步中使用2-氨基-3-氯吡啶-4-硫酚钠代替实施例43中第一步的2,3-二氯吡啶-4-硫酚(43-1)外，采用与实施例43中第一步至第二步所描述的类似的方法合成TM150的粗品，粗品经反相HPLC(流动相A：乙腈，流动相B：0.05％三氟乙酸水溶液)纯化得标题化合物的三氟乙酸盐。
MS m/z(ESI):423.0[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.69(s,3H),7.66(d,J＝5.2Hz,1H),6.87(brs,2H),5.81(d,J＝5.2Hz,1H),5.49(brs,1H),4.47(s,2H),3.86–3.82(m,2H),3.21–3.12(m,3H),2.41(s,3H),1.57–1.41(m,4H),1.15(d,J＝6.4Hz,3H),1.01(s,3H).
实施例68：(3-(4-(1-氨基-2-氟乙基)-4-(氟甲基)哌啶-1-基)-6-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫基)-5-甲基吡嗪-2-基)甲醇(TM186)的制备
Figure BDA0003458890760000651
第一步：4-(氟甲基)-4-(1-羟乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(68-1)的制备
将50-4(1.12g,4.57mmol)溶于THF(20mL)，滴加入甲基溴化镁(2-甲基四氢呋喃中3M,2.30mL)，20℃反应4小时，LC-MS检测反应完成后，向反应液中滴加入饱和氯化铵溶液，乙酸乙酯萃取三次，有机相合并干燥并减压浓缩，得粗品68-1(1.18g)，直接用于下一步反应。
第二步：4-乙酰基-4-(氟甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(68-2)的制备
将68-1(1.18g,4.52mmol)溶于DCM(20mL)，加入PCC(2.84g,13.55mmol)，20℃反应16小时，LC-MS检测反应完成后，将反应液浓缩得粗品，粗品经柱层析纯化得68-2(0.80g,收率68％)。
第三步至第九步：(3-(4-(1-氨基-2-氟乙基)-4-(氟甲基)哌啶-1-基)-6-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫基)-5-甲基吡嗪-2-基)甲醇(TM186)的制备
除在第三步中使用68-2代替实施例46中第一步的21-3外，采用与实施例46中第一步至第七步所描述的类似方法合成TM186的粗品。粗品经反相HPLC(流动相A：乙腈，流动相B：0.05％甲酸水溶液)纯化得标题化合物的甲酸盐。
MS m/z(ESI):458.8[M+H]+
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.46(s,1H),7.58(d,J＝5.6Hz,1H),5.88(d,J＝5.6Hz,1H),4.85–4.65(m,4H),4.63(s,2H),3.87–3.72(m,2H),3.49–3.34(m,3H),2.48(s,3H),1.90–1.78(m,4H).生物学实施例
生物学实施例中使用的对照化合物SHP099和TNO-155的结构如下：
Figure BDA0003458890760000652
试验例1：SHP2(蛋白磷酸酶)体外酶学活性抑制试验试验系统：
激酶：Recombinant full-length human PTPN11(SHP2),Active(SignalChemCatalog:P38-20G)
底物：6,8-Difluoro-4-methylumbelliferyl phosphate(DiFMUP)(InvitrogenCatalog:D6567)
激活肽：IRS1_pY1172(dPEG8)pY1222(BPS Bioscience Catalog:79319-2)
终止试剂：bpv(phen)(Abcam Catalog:ab141436)
试验参数：
SHP2浓度：0.5nM；DiFMUP浓度：200μM；IRS-1浓度：0.5μM；bpv：160μM
缓冲液体系：60mM Hepes pH7.2；75mM NaCl；75mM KCl；0.05％P20；1mM EDTA；5mMDTT
化合物孵育及酶激活时间：室温60分钟
酶与底物反应时间：室温30分钟
酶标仪参数：BMG PHERAstar Fluorescence，激发波长340nm，发射波长450nm
试验步骤：
将待测化合物和磷酸酶SHP2的混合物与激活肽IRS-1在缓冲液体系下室温孵育60分钟，加入底物DiFMUP启动反应，室温孵育30分钟后，加入bpv终止反应，将反应板放入酶标仪中，采用终点法读取板中各孔的荧光值。
数据处理：
以溶媒组(含0.5nM SHP2,200μM DiFMUP,0.5μM IRS-1,160μM bpv,0.05％DMSO)为阴性对照、反应缓冲液组(200μM DiFMUP,0.5μM IRS-1,160μM bpv,0.05％DMSO)为空白对照，计算各浓度组的相对抑制活性，抑制率＝100％-(测试组的荧光值-空白组的荧光值)/(溶媒组的荧光值-空白组的荧光值)*100％。按照四参数模型拟合曲线，计算化合物的半数抑制浓度(IC50)。
试验结果：
按照上述方法测定化合物对SHP2活性的抑制，结果如表1中所示。
表1.SHP2磷酸酶活抑制试验结果
Figure BDA0003458890760000661
Figure BDA0003458890760000671
结论：
在SHP2磷酸酶活抑制试验中，本发明的化合物表现出较强的抑制活性。
试验例2：化合物对KYSE-520细胞(人食管鳞癌细胞)增殖活性抑制试验
试验系统：
细胞名称/制造商：KYSE-520/JCRB Cell Bank
试剂盒名称/制造商：
Figure BDA0003458890760000673
Luminescent Cell Viability Assay,Promega
试验参数：
细胞数量：1500细胞/孔
铺板培养基：KYSE-520:1640+10％FBS
加药培养基：KYSE-520:1640+10％FBS
化合物孵育条件：37℃，5％CO2
孵育时间：5d
检测温度：RT
BMG PHERAstar FS Luminescent
试验步骤：
将细胞培养在含有10％胎牛血清的培养基中，放置在37℃，5％CO2培养条件下进行培养。向96孔板中铺入适量细胞，培养箱中过夜培养，使细胞附着贴壁。次日，移除培养基，加入含有预先稀释化合物的完全培养基，37℃孵育5d。第五天向每孔中加入检测试剂CellTiter-GLo，化学发光检测各孔的相对发光单位(RLU)。
数据处理：
利用不含细胞的培养基的CellTiter-Glo获得背景值。细胞活率＝(样品RLU-背景RLU)/(溶媒RLU-背景RLU)×100％，最大抑制率＝100％-细胞活率最大浓度，按照四参数模型拟合曲线，计算化合物的半数抑制浓度(IC50)。
试验结果：
按照上述方法测定化合物对KYSE-520增殖的抑制活性，结果如表2中所示。
表2.化合物对KYSE-520细胞增殖活性抑制结果
Figure BDA0003458890760000672
/>
Figure BDA0003458890760000681
结论：
本发明的化合物对KYSE-520具有较强的细胞增殖抑制活性。
试验例3：生化hERG抑制试验
试验系统：
试剂盒：PredictorTM hERG Fluorescence Polarization Assay，ThermoFisher，PV5366
试验参数：
hERG浓度：1X
Tracer浓度：1nM
孵育时间：2h
BMG PHERAstar FS FP
试验步骤：
将不同浓度的本发明化合物加入到含有hERG细胞膜的微孔板中，再加入具有高hERG亲和性示踪剂Tracer，将微孔板在25℃孵育2小时后，使用多功能酶标仪检测荧光偏振(激发波长：540；发射波长：590/590)值(mP)的变化。
数据处理：
根据数据比值，计算本发明化合物在不同浓度下对hERG百分比抑制率(％)，判断化合物的半数最大抑制浓度(IC50)的范围。百分比抑制率(％)＝(1-(测试化合物的mP-30μME4031的mP)/(实验缓冲液的mP-30μM E4031的mP))*100
试验结果：
采用上述方法测定化合物对hERG的抑制，结果如表3中所示。
表3.hERG抑制试验结果
Figure BDA0003458890760000682
Figure BDA0003458890760000691
结论：
测试结果表明，本发明化合物与hERG亲和性低，与亲和性示踪剂Tracer竞争的IC50大于或接近10μM。
试验例4：KYSE-520移植瘤模型上对肿瘤的抑制试验
试验目的：通过nu-nu小鼠皮下接种KYSE-520细胞构建CDX移植瘤动物模型，成瘤后每天一次进行口服给药，评价不同受试化合物体内药效。
试验仪器与试剂：
主要试剂：
Figure BDA0003458890760000692
将KYSE-520细胞体外单层培养，培养条件为RPMI 1640培养基中加10％胎牛血清，于37℃、含5％CO2空气的培养箱中培养。2次/周用胰蛋白酶进行消化处理传代。当细胞呈指数生长期时，收集细胞并计数。
将培养至对数生长期的KYSE-520细胞株制备成单细胞悬液(细胞重悬于PBS中，与无酚红基质胶1:1混合，细胞终密度为5×107/ml)每只裸鼠接种0.1ml，接种至裸鼠右侧腋窝皮下后构建食管癌裸鼠移植瘤模型，待肿瘤生长至130mm3时，将裸鼠进行随机分成6组进行给药，给药方案如表1所示(每天口服给药1次，持续20天)，溶媒为5％DMSO+5％Solutol+90％H2O。
每天监测动物的健康状况及死亡情况，例行检查包括观察药物治疗对动物日常行为表现的影响，如行为活动、摄食(水)量、外观体征或其它异常情况，并做好相应记录。
每周2次称量小鼠体重并测量瘤体积，记录数据。肿瘤体积(V)计算公式：V＝1/2×a×b2，其中a和b分别表示长和宽。小鼠移植瘤体积和小鼠体重分别如图1和图2所示。
抗肿瘤药效用肿瘤生长抑制率TGI(％)评价，其中当肿瘤未出现消退时，TGI(％)(瘤体积)＝[1-(TVt-TV0)/(CVt-CV0)]×100％，TV0为分组时受试化合物组的平均瘤体积，TVt为给药后t天受试化合物组的平均瘤体积；CV0为分组时溶媒组的平均瘤体积；CVt为给药后t天溶媒组的平均瘤体积；当肿瘤出现消退时，TGI(％)(瘤体积)＝100％-(TVt-TV0)/TV0×100％。
如果肿瘤比起始体积缩小，即Vt<V0时，即定义为肿瘤部分消退(PR)；如果肿瘤完全消失，即定义为肿瘤完全消退(CR)。
试验结果：
表1.受试化合物对KYSE-520细胞移植瘤模型的疗效(以瘤体积计算)
Figure BDA0003458890760000693
Figure BDA0003458890760000701
注：*P<0.05表示与溶媒组相比有显著差异。
试验结论：
以上数据显示，口服连续给药20天后，本发明的实施例化合物抑瘤效果显著，药效优于以相同剂量给药的阳性化合物SHP099的效果；且小鼠具有较好的耐受性。
试验例5：NCI-H358移植瘤模型上对肿瘤的抑制试验
试验目的：通过将人非小细胞肺癌细胞NCI-H358皮下接种于Balb/c-nu小鼠右侧肩胛处，构建皮下移植瘤小鼠模型，成瘤后每天一次进行口服给药，评价不同受试化合物体内药效。
试验仪器与试剂：
主要试剂：
Figure BDA0003458890760000702
试验操作：
将NCI-H358细胞体外单层培养，培养条件为RPMI1640培养基中加10％胎牛血清，于37℃、5％CO2的培养箱中培养。一周2-3次用胰酶-EDTA进行消化处理传代。当细胞呈指数生长期时，收集细胞，计数，接种。
在肿瘤细胞接种前，试验小鼠用小鼠专用编号耳钉依次进行动物标识。
每只小鼠右侧肩胛皮下接种1×106个NCI-H358细胞(悬浮于0.1ml PBS+基质胶)。预计第七天肿瘤体积均值为～200mm3，根据第7天的测量结果，筛选出30只肿瘤形状规则、体积均一的小鼠，并将其进行随机分为5组，并按试验方案给药(给药方案如表2所示(每天口服给药1次，持续20天))，溶媒为5％DMSO+5％Solutol+90％H2O。
每周3次称量小鼠体重并测量瘤体积，记录数据。肿瘤体积(V)计算公式：V＝1/2×a×b2，其中a和b分别表示长和宽。小鼠移植瘤体积和小鼠体重分别如图3和图4所示。
抗肿瘤药效用肿瘤生长抑制率TGI(％)评价，其中当肿瘤未出现消退时，TGI(％)(瘤体积)＝[1-(TVt-TV0)/(CVt-CV0)]×100％，TV0为分组时受试化合物组的平均瘤体积，TVt为给药后t天受试化合物组的平均瘤体积；CV0为分组时溶媒组的平均瘤体积；CVt为给药后t天溶媒组的平均瘤体积；当肿瘤出现消退时，TGI(％)(瘤体积)＝100％-(TVt-TV0)/TV0×100％。
如果肿瘤比起始体积缩小，即Vt<V0时，即定义为肿瘤部分消退(PR)；如果肿瘤完全消失，即定义为肿瘤完全消退(CR)。
试验结果：
表2：受试化合物对NCI-H358细胞移植瘤模型的疗效(以瘤体积计算)
Figure BDA0003458890760000703
注：*P<0.05表示与溶媒组相比有显著差异。
试验结论：
以上数据显示，口服连续给药20天后，本发明的实施例化合物抑瘤效果显著，药效优于以相同剂量给药的TNO-155，且小鼠耐受性较好。
总之，本发明提供了一系列具有新颖结构的高活性的SHP2磷酸酶抑制剂，在小鼠KYSE-520CDX模型及NCI-H358 CDX模型上体现出了良好的药效，有很大的潜力开发成针对肿瘤类疾病的药物。
上述实施例不以任何方式限定本申请的方案。除本文中描述的那些外，根据前述描述，本发明的多种修改对本领域技术人员而言会是显而易见的。这样的修改也意图落入所附权利要求书的范围内。本申请中所引用的各参考文献(包括所有专利、专利申请、期刊文章、书籍及任何其它公开)均以其整体援引加入本文。

Claims (7)

1.式(II)的化合物或其药学上可接受的盐：
Figure FDA0004170973760000011
其中：
X为直接键或S；
Figure FDA0004170973760000012
R4a、R5a、R6a、和R7a均为H；
R8a、R8b各自独立选自H和C1-3烷基，其中所述的烷基任选地被一个或多个选自F和-OC1-3烷基的取代基取代；且R8a、R8b不同时为H；
R3选自-C1-6烷基，其中所述的烷基任选地被一个或多个F取代。
2.根据权利要求l所述的式(II)的化合物或其药学上可接受的盐，
X为直接键。
3.根据权利要求1-2任一项所述的式(II)的化合物或其药学上可接受的盐，
其中，R3选自-CH2F、-CH3、-CH2CH3。
4.根据权利要求3所述的式(II)的化合物或其药学上可接受的盐，
其中，R8a、R8b各自独立选自H、-CH3、-CH2OCH3、-CH2F。
5.根据权利要求1所述的式(II)的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述化合物选自：
Figure FDA0004170973760000013
/>
Figure FDA0004170973760000021
/>
Figure FDA0004170973760000031
6.一种药物组合物，其包含权利要求1-5中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，以及一种或多种药学上可接受的载体。
7.权利要求1-5中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐或者权利要求6所述的药物组合物在制备用于预防或治疗SHP2磷酸酶相关疾病的药物中的用途。
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