CN111484491B - 取代吡啶并环化合物、其制备方法和用途 - Google Patents
取代吡啶并环化合物、其制备方法和用途 Download PDFInfo
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Abstract
本发明涉及取代吡啶并环化合物、其制备方法和用途。具体地，本发明涉及式(I)的化合物或其药学上可接受的盐、酯、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N‑氧化物、同位素标记的化合物、代谢物或前药、其制备方法、包含其的药物组合物及其在预防和治疗SHP2相关疾病中的用途。
Description
技术领域
本发明属于药物化学领域，并且具体地涉及用作SHP2抑制剂的取代吡啶并环化合物、其制备方法、包含其的药物组合物及其在预防和治疗SHP2酶相关疾病中的用途。
背景技术
SHP2(src homology 2domain containing phosphotyrosine phosphatase 2)是一种由基因PTPN11编码的蛋白酪氨酸磷酸酶，结构上含有两个N末端的SH2(Src homology2)结构域、一个蛋白酪氨酸磷酸酶(PTP)催化功能域和一个富含脯氨酸基团和酪氨酸磷酸化位点的C-末端尾巴。在基础状态下，SHP2采用一种自抑制的构型，N-SH2结构域在空间上阻止底物接触到活性位点。当含有磷酸化酪氨酸残基的配体与N-SH2结构域特异性结合后，SHP2的构型发生改变，暴露PTP结构域的催化活性位点，使自身的抑制消除，从而引发由酪氨酸磷酸化所启动的信号传导级联反应。
SHP2参与多种生长因子、细胞因子和整联蛋白受体下游信号的信号传导，促进增殖、分化、细胞周期维持和迁移等细胞功能。研究表明，SHP2的激活突变与努南综合征、豹班综合征、幼年稚型粒单核细胞白血病(JMML)、黑色素瘤和实体瘤等发病有密切的关系。SHP2的过表达会增加慢性粒细胞白血病、肥大细胞增多症、恶性胶质瘤、肺癌和乳腺癌等癌症的风险，提示SHP2在不同类型癌症及癌症的不同发展阶段中有广泛的作用。目前已发现嘧啶酮类、吡嗪类、羧酸类、醌类、喹啉类和吲哚类等化合物具有抑制SHP2活性的功能(例如，见WO2015107493A1)，但本领域仍然亟需新的SHP2抑制剂，特别是具有高活性以及其他优异性质的SHP2抑制剂。我们惊喜地发现一类吡啶并环化合物具有较高的SHP2抑制活性，并且具有较好的心脏安全性和较低的药物-药物相互作用，展示出良好的应用前景。
发明内容
在一方面，本发明提供式(I)的化合物或其药学上可接受的盐、酯、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、同位素标记的化合物、代谢物或前药：
其中：
Q1、Q2和Q3各自独立地选自N、NH、O、C和CH，且不同时为C或CH(即，Q1、Q2和Q3中至少一个为N、NH或O)；
W1、W2和W3各自独立地选自CH和N；
环A选自4-10元杂环和4-10元烃环；
R1选自-C(＝O)-Rz、-C(＝O)-ORz、-C(＝O)-N(Rz)2、-C(＝O)NH-ORz、-ORz、-OC1-6亚烷基-ORz、-OC(＝O)-Rz、-OC(＝O)-ORz、-OC(＝O)-N(Rz)2、-N(Rz)2、-NH-C(＝O)-Rz、-NH-C(＝O)-ORz、-CN、卤素、-NH-ORz和Rz，并且R1不为-OH；Rz在每次出现时各自独立地选自-H、-C1-6烷基、-C3-6环烷基、-C2-6烯基、苯基、3-7元杂环基和5-6元杂芳基，其中所述烷基、环烷基、烯基、苯基、杂环基和杂芳基各自任选地被一个或多个选自卤素、＝O、-OH、-OC1-6烷基、-COOH、-CN、-C1-6烷基、-NH2、-NH(C1-6烷基)、-N(C1-6烷基)2、3-7元杂环基和5-6元杂芳基的取代基取代；
R2在每次出现时各自独立地选自-卤素、-OH、-OC1-6烷基、-CN、-C1-6烷基、-C3-6环烷基、-C2-6烯基、-S(＝O)g-(C1-6烷基)、-NH2、-NH(C1-6烷基)、-N(C1-6烷基)2、-NH(C3-6环烷基)、3-10元杂环基、-C6-10芳基和5-10元杂芳基，其中所述烷基、环烷基、烯基、杂环基、芳基和杂芳基各自任选地被一个或多个选自卤素、＝O、-OH、-OC1-6烷基、-O(卤代C1-6烷基)、-CN、-C1-6烷基、卤代C1-6烷基、-NH2、-NH(C1-6烷基)和-N(C1-6烷基)2的取代基取代；
R3选自-H、卤素、-CN、-OH、-COOH、-C(＝O)NH2、-OC1-6烷基和-C1-6烷基，其中所述烷基任选地被一个或多个选自卤素、-OH、＝O、-OC1-6烷基、-CN和-NH2的取代基取代；
R4在每次出现时各自独立地选自卤素、＝O、-OH、-OC1-6烷基、-CN、-C1-6烷基、-NH2、-NH(C1-6烷基)和-N(C1-6烷基)2；
R5a和R5b是位于同一碳原子上的取代基并且各自独立地选自-H、卤素、-OH、-OC1-6烷基、-O(卤代C1-6烷基)、-C1-6亚烷基-OH、-CN、卤代C1-6烷基、-C1-6烷基、-C3-6环烷基、-C2-6烯基、-S(＝O)g-(C1-6烷基)、-NH2、-NH(C1-6烷基)、-N(C1-6烷基)2和-C1-6亚烷基-NH2，并且R5a和R5b不同时为H；或者R5a和R5b与它们连接的原子一起形成3-8元烃环或3-8元杂环，其中所述烃环和杂环各自任选地被一个或多个选自-H、卤素、＝O、-OH、-OC1-6烷基、-O(卤代C1-6烷基)、-C1-6亚烷基-OH、-CN、卤代C1-6烷基、-C1-6烷基、-C3-6环烷基、-C2-6烯基、-S(＝O)g-(C1-6烷基)、-NH2、-NH(C1-6烷基)、-N(C1-6烷基)2和-C1-6亚烷基-NH2的取代基取代；
g为0、1或2；
m为0、1、2、3或4；并且
n为0、1、2、3或4。
在另一方面，本发明提供一种药物组合物，其包含式(I)的化合物或其药学上可接受的盐、酯、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、同位素标记的化合物、代谢物或前药以及一种或多种药学上可接受的载体。
在又一方面，本发明提供式(I)的化合物或其药学上可接受的盐、酯、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、同位素标记的化合物、代谢物或前药或者本发明的药物组合物在制备用于预防或治疗SHP2相关疾病的药物中的用途。
在进一步的方面，本发明提供一种用于预防或治疗SHP2相关疾病的方法，所述方法包括向有此需要的个体给药式(I)的化合物或其药学上可接受的盐、酯、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、同位素标记的化合物、代谢物或前药或者本发明的药物组合物。
在另一方面，本发明提供式(I)的化合物或其药学上可接受的盐、酯、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、同位素标记的化合物、代谢物或前药或者本发明的药物组合物，用于预防或治疗SHP2相关疾病。
在一个实施方案中，所述SHP2相关疾病为对SHP2抑制敏感或有响应的疾病。在进一步的实施方案中，所述SHP2相关疾病为肿瘤类病症，包括但不限于实体和血液恶性肿瘤。
在另一个方面，本发明进一步提供式(I)的化合物或其药学上可接受的盐、酯、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、同位素标记的化合物、代谢物或前药或者本发明的药物组合物与另外的治疗方法组合用于预防或治疗SHP2相关疾病的方法，所述另外的治疗方法包括但不限于：放射疗法、化疗疗法、免疫疗法或其组合。
在再一方面，本发明提供式(I)的化合物的制备方法，所述方法包括以下步骤：
1.使式S-1的化合物与式S-2的化合物反应以生成式IM-1的化合物：
2.使式IM-1的化合物与式S-3的化合物反应以生成式IM-2的化合物：
3.使式IM-2的化合物进行功能基团转化以生成式(I)的化合物：
其中，LG1和LG2各自独立地表示卤素离去基团，或者任选地被卤素取代的C1-6烷基磺酸酯基离去基团(例如三氟甲磺酸酯基离去基团)；
Rc和Rd各自独立地表示-H或离去基团；
R1f与R1相同，或者表示通过一步或多步反应可以转化为R1的功能基团；
R3f与R3相同，或者表示通过一步或多步反应可以转化为R3的功能基团；
其余各基团如上文对式(I)所定义。
发明详述
化合物
在一个方面，本发明提供式(I)的化合物或其药学上可接受的盐、酯、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、同位素标记的化合物、代谢物或前药：
其中：
Q1、Q2和Q3各自独立地选自N、NH、O、C和CH，且不同时为C或CH(即，Q1、Q2和Q3中至少一个为N、NH或O)；
W1、W2和W3各自独立地选自CH和N；
环A选自4-10元杂环和4-10元烃环；
R1选自-C(＝O)-Rz、-C(＝O)-ORz、-C(＝O)-N(Rz)2、-C(＝O)NH-ORz、-ORz、-OC1-6亚烷基-ORz、-OC(＝O)-Rz、-OC(＝O)-ORz、-OC(＝O)-N(Rz)2、-N(Rz)2、-NH-C(＝O)-Rz、-NH-C(＝O)-ORz、-CN、卤素、-NH-ORz和Rz，并且R1不为-OH；Rz在每次出现时各自独立地选自-H、-C1-6烷基、-C3-6环烷基、-C2-6烯基、苯基、3-7元杂环基和5-6元杂芳基，其中所述烷基、环烷基、烯基、苯基、杂环基和杂芳基各自任选地被一个或多个选自卤素、＝O、-OH、-OC1-6烷基、-COOH、-CN、-C1-6烷基、-NH2、-NH(C1-6烷基)、-N(C1-6烷基)2、3-7元杂环基和5-6元杂芳基的取代基取代；
R2在每次出现时各自独立地选自卤素、-OH、-OC1-6烷基、-CN、-C1-6烷基、-C3-6环烷基、-C2-6烯基、-S(＝O)g-(C1-6烷基)、-NH2、-NH(C1-6烷基)、-N(C1-6烷基)2、-NH(C3-6环烷基)、3-10元杂环基、-C6-10芳基和5-10元杂芳基，其中所述烷基、环烷基、烯基、杂环基、芳基和杂芳基各自任选地被一个或多个选自卤素、＝O、-OH、-OC1-6烷基、-O(卤代C1-6烷基)、-CN、-C1-6烷基、卤代C1-6烷基、-NH2、-NH(C1-6烷基)和-N(C1-6烷基)2的取代基取代；
R3选自-H、卤素、-CN、-OH、-COOH、-C(＝O)NH2、-OC1-6烷基和-C1-6烷基，其中所述烷基任选地被一个或多个选自卤素、-OH、＝O、-OC1-6烷基、-CN和-NH2的取代基取代；
R4在每次出现时各自独立地选自卤素、＝O、-OH、-OC1-6烷基、-CN、-C1-6烷基、-NH2、-NH(C1-6烷基)和-N(C1-6烷基)2；
R5a和R5b是位于同一碳原子上的取代基并且各自独立地选自-H、卤素、-OH、-OC1-6烷基、-O(卤代C1-6烷基)、-C1-6亚烷基-OH、-CN、卤代C1-6烷基、-C1-6烷基、-C3-6环烷基、-C2-6烯基、-S(＝O)g-(C1-6烷基)、-NH2、-NH(C1-6烷基)、-N(C1-6烷基)2和-C1-6亚烷基-NH2，并且R5a和R5b不同时为H；或者R5a和R5b与它们连接的原子一起形成3-8元烃环或3-8元杂环，其中所述烃环和杂环各自任选地被一个或多个选自-H、卤素、＝O、-OH、-OC1-6烷基、-O(卤代C1-6烷基)、-C1-6亚烷基-OH、-CN、卤代C1-6烷基、-C1-6烷基、-C3-6环烷基、-C2-6烯基、-S(＝O)g-(C1-6烷基)、-NH2、-NH(C1-6烷基)、-N(C1-6烷基)2和-C1-6亚烷基-NH2的取代基取代；
g为0、1或2；
m为0、1、2、3或4；并且
n为0、1、2、3或4。
在部分实施方案中，
选自
在优选的实施方案中，
选自
在更优选的实施方案中，
选自
在更优选的实施方案中，
为
在部分实施方案中，W1为CH，且W2和W3各自独立选自CH和N。在优选的实施方案中，W1和W3都为CH，W2选自CH和N。在进一步优选的实施方案中，W1和W3都为CH，W2为N。
在部分实施方案中，W3为CH，且W1和W2各自独立地选自CH和N。在优选的实施方案中，
选自
在部分实施方案中，环A选自5-6元杂环和5-6元烃环。在优选的实施方案中，环A选自6元含氮杂环和6元烃环。在更优选的实施方案中，环A选自哌啶环和环己烯环。在进一步优选的实施方案中，环A为哌啶子基。
在部分实施方案中，R1选自-C(＝O)-ORz、-C(＝O)-N(Rz)2、-C(＝O)NH-ORz、-ORz、-OC1-4亚烷基-ORz、-OC(＝O)-Rz、-OC(＝O)-N(Rz)2、-N(Rz)2、-NH-C(＝O)-Rz、-NH-C(＝O)-ORz、-CN、卤素、-NH-ORz和Rz，并且R1不为-OH；Rz在每次出现时各自独立地选自-H、-C1-4烷基、-C3-6环烷基、-C2-4烯基、4-6元杂环基和5-6元杂芳基，其中所述烷基、环烷基、烯基、杂环基和杂芳基各自任选地被一个或多个选自卤素、＝O、-OH、-OC1-4烷基、-COOH、-CN、-C1-4烷基、-NH2、-NH(C1-4烷基)、-N(C1-4烷基)2、4-6元杂环基和5-6元杂芳基的取代基取代。
在优选的实施方案中，R1选自-H、-COOH、-C(＝O)-OC1-3烷基、-C(＝O)NH2、-C(＝O)NH-C1-3烷基、-C(＝O)NH-C3-6环烷基、-C(＝O)NH-C2-4烯基、-C(＝O)NHOH、-C(＝O)NH-OC1-3烷基、-O-(4-6元杂环基)、-O-(5-6元杂芳基)、-OC1-3亚烷基-OH、-OC(＝O)-C1-3烷基、-OC(＝O)-C3-6环烷基、-OC(＝O)-C2-4烯基、-OC(＝O)-N(C1-3烷基)2、-NH2、-NH-(C1-3烷基)、-NH-(C3-6环烷基)、-NH-(C2-4烯基)、-NH-(4-6元杂环基)、-NH-(5-6元杂芳基)、-NH-C(＝O)-C1-3烷基、NH-C(＝O)-OC1-4烷基、-CN、-F、-Cl、-NH-OH、-NH-OC1-3烷基、-C1-3烷基、-C3-6环烷基、-C2-4烯基、4-6元杂环基和5-6元杂芳基，其中所述烷基、环烷基、烯基、杂环基和杂芳基各自任选地被一个或多个选自-F、-Cl、＝O、-OH、-OC1-3烷基、-COOH、-CN、-C1-3烷基、-NH2、-NH(C1-3烷基)、-N(C1-3烷基)2、4-6元杂环基和5-6元杂芳基的取代基取代。
在更优选的实施方案中，R1选自-H、-COOH、-C(＝O)-OC1-3烷基、-C(＝O)NH2、-C(＝O)NH-C1-3烷基、-C(＝O)NHOH、-OC1-3亚烷基-OH、-OC(＝O)-C1-3烷基、-NH2、-NH-C(＝O)-OC1-3烷基、-CN、-F、-Cl、-NH-OH、-C1-3烷基、5元杂环基和5元杂芳基，其中所述烷基、杂环基和杂芳基各自任选地被一个或多个选自-F、-Cl、＝O、-OH、-COOH、-CN、-C1-3烷基和-NH2的取代基取代。
在进一步优选的实施方案中，R1选自-H、-F、-Cl、-CN、-CH3、-CHF2、-CH2OH、-O(CH2)2OH、-OC(＝O)CH2CN、-COOH、-C(＝O)OCH3、-C(＝O)OCH2CH3、-C(＝O)NH2、-C(＝O)NHOH、-NH2、-NHC(＝O)OCH3、-NH-OH、-C(＝O)NHCH3、吡咯基、咪唑基、吡唑基、被＝O取代的吡唑烷基、三唑基和四唑基。
在部分实施方案中，R2在每次出现时各自独立地选自卤素、-OH、-OC1-3烷基、-O(卤代C1-3烷基)、-CN、-C1-3烷基、卤代C1-3烷基、-NH2、-NH(C1-3烷基)和-NH(C3-6环烷基)。在优选的实施方案中，R2在每次出现时各自独立地选自-F、-Cl、-Br、-OH、-CH3、-CH2CH3、-CHF2、-CF3、-OCH3、-OCHF2、-OCF3、-NH2、-NH(C1-3烷基)和-NH(C3-6环烷基)。在进一步优选的实施方案中，R2在每次出现时各自独立地选自-F、-Cl、-Br、-CH3、-CF3、-NH2、-OCH3、-NHCH3和
在部分实施方案中，R3选自-H、-NH2、卤素、-CN、-OH、-C(＝O)NH2、C1-4烷基和-COOH，其中所述烷基任选地被一个或多个选自卤素、＝O、-OH和-NH2的取代基取代。在优选的实施方案中，R3选自-H、-NH2、-F、-Cl、-CN、-OH、-CH3、-CF3、-CH2CH3、-CH2F、-CHF2、-CH2OH、-CH2CH2OH、-C(＝O)NH2、-CH2NH2、-CH2CH2NH2和-COOH。在进一步优选的实施方案中，R3选自-H、-F、-Cl、-CN、-CH2OH和-COOH。在进一步优选的实施方案中，R3选自H、F、-CN和-CH2OH。
在部分实施方案中，R4在每次出现时各自独立地选自-F、-Cl、＝O、-OH、-OC1-3烷基、-CN、C1-3烷基和-NH2。在优选的实施方案中，R4在每次出现时各自独立地选自-F、-Cl、-OH、-CH3和-NH2。在进一步优选的实施方案中，R4在每次出现时各自独立地为-CH3。
在部分实施方案中，R5a和R5b各自独立地选自-H、C1-3烷基、-NH2、-C1-3亚烷基-OH和-C1-3亚烷基-NH2，并且R5a和R5b不同时为H；或者R5a和R5b与它们连接的原子一起形成5-6元烃环或5-6元杂环，其中所述烃环和杂环各自任选地被一个或多个选自-H、-F、-Cl、-C1-3烷基、＝O、-NH2、-OH、-C1-3亚烷基-OH和-C1-3亚烷基-NH2的取代基取代。
在优选的实施方案中，R5a和R5b各自独立地选自-H、-CH3、-CH2CH3、-NH2和-CH2NH2，并且R5a和R5b不同时为H；或者R5a和R5b与它们连接的原子一起形成环戊烷、氧杂环戊烷或二氢噁唑，其中所述环戊烷、氧杂环戊烷或二氢噁唑各自任选地被一个或多个选自-CH3和-NH2的取代基取代。
在更优选的实施方案中，R5a和R5b各自独立地选自-CH3和-NH2；或者R5a和R5b与它们连接的原子一起形成环戊烷或氧杂环戊烷，其中所述环戊烷或氧杂环戊烷各自任选地被一个或两个选自-CH3和-NH2的取代基取代。
在部分实施方案中，g为0或2。
在部分实施方案中，m为0、1或2。在优选的实施方案中，m为0。
在部分实施方案中，n为0、1、2或3。在优选的实施方案中，n为1、2或3。
在部分实施方案中，本发明提供式(II)或式(II’)的化合物或其药学上可接受的盐、酯、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、同位素标记的化合物、代谢物或前药：
其中，
表示单键或双键；U选自N和C；并且Q1、Q2、Q3、R1、R2、R3、R4、R5a、R5b、W1、W2、m和n如上文对式(I)所定义。
在部分实施方案中，本发明提供式(II)或式(II’)的化合物或其药学上可接受的盐、酯、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、同位素标记的化合物、代谢物或前药：
其中，
表示单键或双键；U选自N、C和CH；并且Q1、Q2、Q3、R1、R2、R3、R4、R5a、R5b、W1、W2、m和n如对式(I)所定义。
在部分实施方案中，本发明提供式(III)、式(IV)或式(V)的化合物或其药学上可接受的盐、酯、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、同位素标记的化合物、代谢物或前药：
其中，Q1、Q2、R1、R2、R3、R5a、R5b和n如上文对式(I)所定义。
在部分实施方案中，本发明提供式(VI)的化合物或其药学上可接受的盐、酯、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、同位素标记的化合物、代谢物或前药：
其中，R1、R2、R3、R5a、R5b、W1、W2和n如上文对式(I)所定义。
在部分实施方案中，本发明提供式式(VII)、式(VIII)或式(IX)的化合物或其药学上可接受的盐、酯、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、同位素标记的化合物、代谢物或前药：
其中，R1、R2、R3、R5a、R5b和n如上文对式(I)所定义。
本领域技术人员应当理解，本发明涵盖对各个实施方案中的技术特征进行任意组合所得的化合物。由一个实施方案中的技术特征或优选技术特征与另外的实施方案中的技术特征或优选技术特征组合得到的实施方案也包括在本发明的范围内。
在优选的实施方案中，本发明提供化合物或其药学上可接受的盐、酯、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、同位素标记的化合物、代谢物或前药，其中所述化合物选自：
制备方法
在另一方面，本发明提供上文定义的式(I)的化合物的制备方法，所述方法包括以下步骤：
(1)使式S-1的化合物与式S-2的化合物反应以生成式IM-1的化合物：
(2)使式IM-1的化合物与式S-3的化合物反应以生成式IM-2的化合物：
(3)使式IM-2的化合物进行功能基团转化以生成式(I)的化合物：
其中，LG1和LG2各自独立地表示卤素离去基团，或者任选地被卤素取代的C1-6烷基磺酸酯基离去基团(例如三氟甲磺酸酯基离去基团)；
Rc和Rd各自独立地表示-H或离去基团；
R1f与R1相同，或者表示通过一步或多步反应可以转化为R1的功能基团；
R3f与R3相同，或者表示通过一步或多步反应可以转化为R3的功能基团；
其余各基团如上文对式(I)所定义。
其中，当R1f与R1相同且R3f与R3相同时，可不进行第三步反应步骤。
在优选的实施方案中，LG1和LG2各自独立地表示卤素，如碘或氯。
在优选的实施方案中，Rc和Rd各自独立地选自-H、卤素、硼酸基、硼酸酯基、取代的硅基、取代的金属基团或任选地被卤素取代的C1-6烷基磺酸酯基。在更优选的实施方案中，Rc为硼酸基或硼酸酯基，并且Rd为H、硼酸基或硼酸酯基。
在优选的实施方案中，R1f表示-F、-Cl、-Br、-I、酯基、被保护的氨基或被保护的羟基。
在优选的实施方案中，R3f表示-H、-F、-Cl、-Br、-I、酯基、被保护的氨基或被保护的羟基。
在步骤1中，反应可以在碱和/或金属催化剂的存在下进行。在优选的实施方案中，碱为无机碱类，例如磷酸钾。在其它优选的实施方案中，金属催化剂为金属钯催化剂，例如四(三苯基膦)钯、醋酸钯、三(二亚苄基丙酮)二钯、[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯、1,2-双(二苯基膦乙烷)二氯化钯和双(三苯基膦)二氯化钯等。
在步骤2中，反应可以在金属催化剂的存在下进行。在优选的实施方案中，金属催化剂为金属钯催化剂，例如四(三苯基膦)钯、醋酸钯、三(二亚苄基丙酮)二钯、[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯、1,2-双(二苯基膦乙烷)二氯化钯和双(三苯基膦)二氯化钯等。
在步骤3中，功能基团转化的方法包括但不限于以下反应：1)取代反应；2)Curtius重排反应；3)还原反应；4)金属催化的偶联反应，例如Suzuki反应和Ullmann反应等；5)缩合反应，例如酸和胺在HATU、EDCI等缩合剂的存在下进行的缩合反应；和6)水解反应，例如在NaOH、LiOH等作用下进行的酯水解反应。
本发明制备方法的起始原料可来自商业来源或可按照已知方法制备。
本领域技术人员应当理解，根据期望获得的产物结构，可省略以上路线中的一个或多个步骤。本领域技术人员也可根据需要适当地调整反应步骤的顺序，以及增加或省略保护/脱保护反应步骤。
本发明的式(II)、式(III)、式(IV)、式(V)、式(VI)、式(VII)和式(VIII)的化合物等均可参考上述实施方案通过类似的方法合成。
药物组合物、制剂和试剂盒
本发明还提供一种药物组合物，其包含上文定义的任意化合物或其药学上可接受的盐、酯、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物(例如水合物)、N-氧化物、同位素标记的化合物、代谢物或前药以及一种或多种药学上可接受的载体，并可以任选地进一步包含一种或多种用于治疗SHP2相关疾病的第二治疗剂。
本发明的进一步的目的在于提供一种制备本发明的药物组合物的方法，所述方法包括将上文定义的任意化合物或其药学上可接受的盐、酯、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、同位素标记的化合物、代谢物或前药或者它们的混合物与一种或多种药学上可接受的载体组合。该方法还可以进一步包括混合一种或多种用于治疗SHP2相关疾病的第二治疗剂。
在本发明的药物组合物中可使用的药学上可接受的载体包括但不限于无菌液体，例如水和油，包括那些石油、动物、植物或合成来源的油。适合的药学上可接受的载体的实例如在Remington’s Pharmaceutical Sciences(2005)中所述。
药物组合物可以以任意形式施用，只要其实现预防、减轻、防止或者治愈人类或动物患者的症状。例如，可根据给药途径制成各种适宜的剂型。
当口服用药时，所述药物组合物可制成任意口服可接受的制剂形式，包括但不限于片剂、胶囊剂、颗粒剂、丸剂、糖浆剂、口服溶液剂、口服混悬剂和口服乳剂等。
当经皮或局部施用时，所述药物组合物可制成适当的软膏、洗剂或搽剂形式，其中活性成分可以悬混或溶解于一种或多种载体中。
所述药物组合物还可以注射剂形式用药，包括注射液、注射用无菌粉末与注射用浓溶液。其中，可使用的载体和溶剂包括水、林格氏溶液和等渗氯化钠溶液。另外，灭菌的非挥发油也可用作溶剂或悬浮介质，如单甘油酯或二甘油酯。
在另一实施方案中，本发明的化合物或药物组合物的施用可以与另外的治疗方法组合。所述另外的治疗方法可以选自，但不限于：放射疗法、化疗疗法、免疫疗法，或其组合。可以是在另外的治疗方法实施前、实施期间或实施后施用本发明的化合物或药物组合物。另外的治疗方法的实施与本发明的化合物或药物组合物的施用可以同时进行，也可以前后紧密连接地进行，也可以相隔一段时间进行，其施用的方式与顺序可以根据具体治疗情况进行选择和调整。
本发明的另一方面还涉及一种药物制剂，其包含上文定义的任意化合物、其药学上可接受的盐、酯、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、同位素标记的化合物、代谢物或前药或者它们的混合物作为活性成分，或者本发明的药物组合物。在一实施方案中，所述制剂的形式为固体制剂、半固体制剂、液体制剂或气态制剂。
本发明的进一步的目的在于提供一种制品，例如以药盒形式提供。本文所用的制品意图包括但不限于药盒和包装。本发明的制品包含：(a)第一容器；(b)位于第一容器中的药物组合物，其中所述组合物包含：第一治疗剂，包括：上文定义的任意化合物或其药学上可接受的盐、酯、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、同位素标记的化合物、代谢物或前药或者它们的混合物；和(c)包装说明书，其说明所述药物组合物可用于治疗肿瘤病症(如前文所定义)。在另一实施方案中，所述包装说明书说明所述药物组合物可与第二治疗剂联用以治疗肿瘤病症。所述制品可进一步包含：(d)第二容器，其中组分(a)和(b)位于所述第二容器内，而组分(c)位于所述第二容器之内或之外。位于第一和第二容器内意味着各容器将物品保留在其边界之内。
所述第一容器为用于容纳药物组合物的容器。此容器可用于制备、储存、运输和/或独立/批量销售。第一容器意图涵盖瓶、罐、小瓶、烧瓶、注射器、管(例如用于乳膏制品)，或者用于制备、容纳、储存或分配药物产品的任何其它容器。
所述第二容器为用于容纳所述第一容器和任选包装说明书的容器。所述第二容器的实例包括但不限于盒(例如纸盒或塑料盒)、箱、纸箱、袋(例如纸袋或塑料袋)、小袋和粗布袋。所述包装说明书可经由扎带、胶水、U形钉或别的粘附方式物理粘附于所述第一容器的外部，或者其可放在所述第二容器的内部，而无需与所述第一容器粘附的任何物理工具。或者，所述包装说明书位于所述第二容器的外面。当位于所述第二容器的外面时，优选的是所述包装说明书经由扎带、胶水、U形钉或别的粘附方式物理粘附。或者，其可邻接或接触所述第二容器的外部，而无需物理粘附。
所述包装说明书为商标、标签、标示等，其列举了与位于所述第一容器内的药物组合物相关的信息。所列出的信息通常由管辖待销售所述制品的区域的管理机构(例如美国食品与药品管理局)决定。优选所述包装说明书具体列出了所述药物组合物获准用于的适应症。所述包装说明书可由任何材料制成，可从所述材料上读取包含于其中或其上的信息。优选所述包装说明书为可印刷材料(例如纸、塑料、卡纸板、箔、胶粘纸或塑料等)，其上可形成(例如印刷或施涂)所需信息。
治疗方法和用途
在一些实施方案中，本发明提供本发明的化合物或其药学上可接受的盐、酯、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、同位素标记的化合物、代谢物或前药或者本发明的药物组合物在制备用于预防或治疗SHP2相关疾病的药物中的用途。
本发明的另一目的在于提供一种预防或治疗SHP2相关疾病的方法，所述方法包括向有此需要的个体给药有效量的上文定义的任意化合物或其药学可接受的盐、酯、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、代谢物或前药或者它们的混合物，或者本发明的药物组合物。
根据本发明的一个实施方案，可使用本发明的化合物进行预防或治疗的SHP2相关疾病为对SHP2抑制敏感或有响应的疾病。
在进一步的实施方案中，所述SHP2相关疾病为肿瘤类病症，包括但不限于实体和血液恶性肿瘤。在进一步的实施方案中，所述肿瘤类病症包括但不限于乳腺癌、结肠直肠癌、结肠癌、肺癌(包括小细胞肺癌、非小细胞肺癌和细支气管肺泡癌)和前列腺癌，以及胆管癌、骨癌、膀胱癌、头和颈癌、肾癌、肝癌、胃肠组织癌、黑色素瘤、口腔癌、食道癌、卵巢癌、胰腺癌、皮肤癌、睾丸癌、甲状腺癌、子宫癌、宫颈癌和外阴癌，以及白血病(包括慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)、幼稚型粒单核细胞白血病(JMML)和慢性骨髓性白血病(CML))、多发性骨髓瘤和淋巴瘤。
在优选的实施方案中，所述疾病为癌症。在更优选的实施方案中，本发明的化合物可以与放化疗或免疫疗法联用以预防或治疗癌症。
可调整给药方案以提供最佳所需响应。例如，以注射剂形式用药时，可通过单次推注、团注和/或连续输注等等来给药。例如，可随时间给药数个分剂量，或可如治疗情况的急需所表明而按比例减少或增加剂量。要注意，剂量值可随要减轻的病况的类型及严重性而变化，且可包括单次或多次剂量。一般地，治疗的剂量是变化的，这取决于所考虑的事项，例如：待治疗患者的年龄、性别和一般健康状况；治疗的频率和想要的效果的性质；组织损伤的程度；症状的持续时间；以及可由各个医师调整的其它变量。要进一步理解，对于任何特定个体，具体的给药方案应根据个体需要及给药组合物或监督组合物的给药的人员的专业判断来随时间调整。可以通过临床领域的普通技术人员容易地确定所述药物组合物的施用量和施用方案。例如，本发明的组合物或化合物可以以分剂量每天四次至每3天给药一次，给药量可以是例如0.01～1000mg/次。可以以一次或多次施用需要的剂量，以获得需要达到的结果。也可以以单位剂量形式提供根据本发明的药物组合物。
有益效果
本发明提供一类新型的高活性SHP2抑制剂，能够实现下述至少一种技术效果：
(1)对SHP2的高抑制活性。
(2)优异的物理化学性质(例如溶解度、物理和/或化学稳定性)。
(3)优异的药物代谢动力学性质(例如良好的生物利用度、合适的半衰期和作用持续时间)。
(4)优异的安全性(较低的毒性和/或较少的副作用、较宽的治疗窗)等。
一般术语和定义
除非在下文中另有定义，本文中所用的所有技术术语和科学术语的含义意图与本领域技术人员通常所理解的相同。提及本文中使用的技术意图指在本领域中通常所理解的技术，包括那些对本领域技术人员显而易见的技术的变化或等效技术的替换。虽然相信以下术语对于本领域技术人员很好理解，但仍然阐述以下定义以更好地解释本发明。
术语“包括”、“包含”、“具有”、“含有”或“涉及”及其在本文中的其它变体形式为包含性的或开放式的，且不排除其它未列举的元素或方法步骤。本领域技术人员应当理解，上述术语如“包括”涵盖“由…组成”的含义。
术语“约”是指在所述数值的±10％范围内，优选±5％范围内，更优选±2％范围内。
除非另有声明，比例(包括百分比)以摩尔量计。
术语“一个(种)或多个(种)”或者类似的表述“至少一个(种)”可以表示例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10个(种)或更多个(种)。
当公开了数值范围的下限和上限时，落入该范围中的任何数值和任何包括的范围都被具体公开。特别地，本文公开的值的每个取值范围(以形式“约a至b”，或同等的，“大约a至b”，或同等的，“约a-b”)，应理解为表示涵盖于较宽范围中的每个数值和范围。
例如，表述“C1-C6”应理解为涵盖其中的任意亚范围以及每个点值，例如C2-C5、C3-C4、C1-C2、C1-C3、C1-C4、C1-C5等，以及C1、C2、C3、C4、C5、C6等。例如，表述“C3-C10”也应当以类似的方式理解，例如可以涵盖包含于其中的任意亚范围和点值，例如C3-C9、C6-C9、C6-C8、C6-C7、C7-C10、C7-C9、C7-C8、C8-C9等以及C3、C4、C5、C6、C7、C8、C9、C10等。又例如，表述“3-10元”应理解为涵盖其中的任意亚范围以及每个点值，例如3-4元、3-5元、3-6元、3-7元、3-8元、3-9元、4-5元、4-6元、4-7元、4-8元、5-7元、5-8元、6-7元等以及3、4、5、6、7、8、9、10元等。还例如，表述“5-10元”也应当以类似的方式理解，例如可以涵盖包含于其中的任意亚范围和点值，例如5-6元、5-7元、5-8元、5-9元、5-10元、6-7元、6-8元、6-9元、6-10元、7-8元等以及5、6、7、8、9、10元等。
术语“烷基”，在本文中单独或与其他基团组合使用时，指饱和的直链或支链烃基。如本文中所使用，术语“C1-6烷基”指具有1-6个碳原子(例如1、2、3、4、5或6个碳原子)的饱和直链或支链烃基。例如“C1-6烷基”可以是甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、异戊基、新戊基或正己基等。
如本文中所使用，术语“亚烷基”指饱和的直链或支链的二价烃基。例如，如本文中所使用，术语“C1-6亚烷基”指具有1-6个碳原子饱和的直链或支链的二价烃基。例如亚甲基、亚乙基、亚丙基或亚丁基等。
术语“环烷基”，在本文中单独或与其他基团组合使用时，指饱和的非芳族单环或多环(诸如双环)烃环(例如单环，如环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基、环壬基；或双环，包括螺环、稠合或桥连系统(诸如双环[1.1.1]戊基、双环[2.2.1]庚基、双环[3.2.1]辛基或双环[5.2.0]壬基、十氢化萘基等)。环烷基包括C3-10环烷基，例如C3-6环烷基或C5-6环烷基。例如，术语“C3-10环烷基”指具有3-10个环碳原子(如3、4、5、6、7、8、9或10个)的环烷基。
术语“烃环”，在本文中单独或与其他基团组合使用时，指具有例如3-10个(例如4-10个、5-10个、6-10个、5-8个或5-6个)环碳原子的饱和或部分不饱和的(即在环内具有一个或多个双键和/或三键，但未形成芳香环体系)单环或多环烃环，其包括但不限于环丙基环、环丁基环、环戊基环、环己基环、环庚基环、环辛基环、环壬基环、环己烯基环等。
术语“卤代”或“卤素”基团，在本文中单独或与其他基团组合使用时，表示-F、-Cl、-Br或-I。
术语“卤代烷基”，在本文中单独或与其他基团组合使用时，指上文所述的烷基，其中一个或多个氢原子被卤素代替。例如，术语“卤代C1-6烷基”指任选地被一个或多个(如1-3个)卤素取代的C1-6烷基。本领域技术人员应当理解，当卤素取代基多于一个时，卤素可以相同也可以不同，并且可以位于相同或不同的C原子上。卤代烷基的实例有例如-CH2F、-CHF2、-CF3、-CCl3、-C2F5、-C2Cl5、-CH2CF3、-CH2Cl或-CH2CH2CF3等。
术语“烯基”，如本文中单独或与其他基团组合使用时，指具有一个或多个碳碳双键的直链或支链烃基。例如，如本文中所使用，术语“C2-6烯基”指具有2-6个碳原子以及一个、两个或三个碳碳双键的直链或支链烃基，例如含有一个碳碳双键的C2-6烯基。例如乙烯基、1-丙烯基、2-丙烯基、2-丁烯基、3-丁烯基、2-戊烯基、3-戊烯基、4-戊烯基、2-己烯基、3-己烯基、4-己烯基、5-己烯基、2-甲基-2-丙烯基和4-甲基-3-戊烯基等。
术语“杂环”，在本文中单独或与其他基团组合使用时，指具有例如3-10个(例如4-10个、5-10个、6-10个、3-8个、3-6个或5-6个)环原子的单环或双环的非芳香环体系(即3-10元、4-10元、5-10元、6-10元、3-8元、3-6元或5-6元杂环)，其中至少一个环原子(例如1、2或3个)是选自N、O和S的杂原子，且其余环原子是C。该环体系可以是饱和(也可以理解为相应的“饱和杂环烷”)或不饱和的(即在环内具有一个或多个双键和/或三键)。该术语还涵盖这样的情况，其中的C原子可以被(＝O)取代和/或环上的S原子可以被1个或2个(＝O)取代。杂环基是通过去除一个氢原子由杂环衍生的基团，其实例包括但不限于：环氧乙烷基、环硫乙烷基、环氮乙烷基、氮杂环丁基、氧杂环丁基、硫杂环丁基、四氢呋喃基、四氢噻吩基、二氧杂环戊烯基、吡咯烷基、吡咯烷酮基、咪唑烷基、吡唑烷基、吡咯啉基、四氢吡喃基、哌啶基(如哌啶子基)、吗啉基、1,4-噻噁烷基、1,4-二氧六环基、二噻烷基、四氢吡啶基、硫吗啉基、哌嗪基或三噻烷基等。
术语“芳环”，在本文中单独或与其他基团组合使用时，指具有共轭π电子系统的全碳单环或稠合环多环(如双环)芳族环。芳基是通过去除一个氢原子由芳环衍生的基团。如本文中所使用，术语“C6-10芳基”指从含有6-10个碳原子的芳环衍生的芳族基团。芳基的实例包括但不限于苯基和萘基等。
术语“杂芳环”，在本文中单独或与其他基团组合使用时，指这样的芳族环，其中一个或多个(如1、2或3个)环原子是选自N、O和S的杂原子，其余的环原子为C。杂芳基是通过去除一个氢原子由杂芳环衍生的基团。杂芳基或杂芳环可以用环原子的数目表征。例如，5-10元杂芳基可以含有5-10个环原子(例如5、6、7、8、9或10个)环原子，特别是含有5、6、9、10个环原子，5-6元杂芳基可以含有例如5或6个环原子。并且在每一种情况下，杂芳基或杂芳环可任选为进一步苯并稠合的。例如，杂芳基的实例有噻吩基、呋喃基、吡咯基、噁唑基、噻唑基、咪唑基、吡唑基、吡嗪基、异噁唑基、异噻唑基、噁二唑基、三唑基、噻二唑基等，以及它们的苯并衍生物；或吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、三嗪基、喹啉基、异喹啉基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、吲哚基、异吲哚基等，以及它们的苯并衍生物。
术语“羟基”表示-OH。
术语“氰基”表示-CN。
术语“硝基”表示-NO2。
术语“氨基”表示-NH2。
术语“取代”和“取代的”指所指定的原子上的一个或多个(例如一个、两个、三个或四个)氢被从所指出的基团的选择代替，条件是未超过所指定的原子在当前情况下的正常原子价并且所述取代形成稳定的化合物。取代基和/或变量的组合仅仅当这种组合形成稳定的化合物时才是允许的。
如果取代基被描述为“任选地…被取代”，则取代基可(1)未被取代，或(2)被取代。如果某个原子或基团被描述为任选地被取代基列表中的一个或多个取代，则该原子或基团上的一个或多个氢可被独立地选择的、任选的取代基替代。如果取代基被描述为“独立地选自”或“各自独立地为”，则各取代基互相独立地加以选择。因此，各取代基可与另一(其他)取代基相同或不同。例如，某个取代基或取代位置或者不同的取代基或取代位置具有可能相同或不同符号指代的R基团(例如但不限于R1、R2、R3、R4、R5和/或Rz)的选择时，各个R之间独立地加以选择，即可以相同也可以不同。关于数值如g、m、n的选择也是如此。
除非指明，否则如本文中所使用，取代基的连接点可来自取代基的任意适宜位置。
当取代基的键显示为穿过环中连接两个原子的键时，则这样的取代基可键连至该可取代的环中的任一成环原子。
本发明还包括所有药学上可接受的同位素标记的化合物，其与本发明的化合物相同，除了一个或多个原子被具有相同原子序数但原子质量或质量数不同于在自然界中占优势的原子质量或质量数的原子替代。适合包含入本发明的化合物中的同位素的实例包括(但不限于)氢的同位素(例如氘(2H)、氚(3H))；碳的同位素(例如13C及14C)；氯的同位素(例如37Cl)；碘的同位素(例如125I)；氮的同位素(例如13N及15N)；氧的同位素(例如17O及18O)；磷的同位素(例如32P)；及硫的同位素(例如34S)。
术语“立体异构体”表示由于至少一个不对称中心形成的异构体。在具有一个或多个(例如一个、两个、三个或四个)不对称中心的化合物中，其可产生外消旋混合物、单一对映异构体、非对映异构体混合物和单独的非对映异构体。特定个别分子也可以几何异构体(顺式/反式)存在。类似地，本发明的化合物可以两种或更多种处于快速平衡的结构不同的形式的混合物(通常称作互变异构体)存在。互变异构体的代表性实例包括酮-烯醇互变异构体、苯酚-酮互变异构体、亚硝基-肟互变异构体、亚胺-烯胺互变异构体等。要理解，本发明的范围涵盖所有这样的以任意比例(例如60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％)的异构体或其混合物。
本文中可使用实线
实楔形
或虚楔形
描绘本发明的化合物的碳-碳键。使用实线以描绘键连至不对称碳原子的键欲表明，包括该碳原子处的所有可能的立体异构体(例如，特定的对映异构体、外消旋混合物等)。使用实或虚楔形以描绘键连至不对称碳原子的键欲表明，存在所示的立体异构体。当存在于外消旋混合物中时，使用实及虚楔形以定义相对立体化学，而非绝对立体化学。除非另外指明，否则本发明的化合物可以以立体异构体(其包括顺式及反式异构体、光学异构体(例如R及S对映异构体)、非对映异构体、几何异构体、旋转异构体、构象异构体、阻转异构体及其混合物)的形式存在。本发明的化合物可表现一种以上类型的异构现象，且由其混合物(例如外消旋混合物及非对映异构体对)组成。
本发明还涵盖本发明的化合物的所有可能的结晶形式或多晶型物，其可为单一多晶型物或多于一种多晶型物的任意比例的混合物。
还应当理解，本发明的某些化合物可以游离形式存在，或适当时，以其药学上可接受的衍生物形式存在。在本发明中，药学上可接受的衍生物包括但不限于，药学上可接受的盐、酯、溶剂合物、N-氧化物、代谢物或前药，在将它们向需要其的患者给药后，能够直接或间接提供上文定义的任意化合物或其代谢物。因此，当在本文中提及“本发明的化合物”时，也意在涵盖化合物的上述各种衍生物形式。
本发明的化合物的药学上可接受的盐包括其酸加成盐及碱加成盐。适合的酸加成盐由形成药学可接受盐的酸来形成。实例包括盐酸盐、乙酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、碳酸氢盐/碳酸盐、葡庚糖酸盐、葡糖酸盐、硝酸盐、乳清酸盐、棕榈酸盐、甲酸盐、三氟乙酸盐及其它类似的盐。适合的碱加成盐由形成药学可接受盐的碱来形成。实例包括铝盐、精氨酸盐、胆碱盐、镁盐及其它类似的盐。适合的盐的综述参见例如“Remington′sPharmaceutical Sciences”，Mack Publishing Company,Easton,Pa.,(2005)；和“药用盐手册：性质、选择和应用”(Handbook of Pharmaceutical Salts：Properties,Selection,and Use)，Stahl and Wermuth(Wiley-VCH,Weinheim,Germany,2002)。用于制备本发明的化合物的药学上可接受的盐的方法为本领域技术人员已知的。
如本文中所使用，术语“酯”意指衍生自本文所描述的化合物的酯，其包括生理上可水解的酯(可在生理条件下水解以释放游离酸或醇形式的本发明的化合物)。本发明的化合物本身也可以是酯。
本发明的化合物可以溶剂合物(例如水合物)的形式存在，其中本发明的化合物包含作为所述化合物晶格的结构要素的极性溶剂，特别是例如水、甲醇或乙醇。极性溶剂特别是水的量可以化学计量比或非化学计量比存在。
本领域技术人员会理解，由于氮需要可用的孤对电子来氧化成氧化物，因此并非所有的含氮杂环都能够形成N-氧化物。本领域技术人员会识别能够形成N-氧化物的含氮杂环。本领域技术人员还会认识到叔胺能够形成N-氧化物。用于制备杂环和叔胺的N-氧化物的合成方法是本领域技术人员熟知的，包括用过氧酸如过氧乙酸和间氯过氧苯甲酸(mCPBA)、过氧化氢、烷基过氧化氢如叔丁基过氧化氢、过硼酸钠和双环氧乙烷(dioxirane)如二甲基双环氧乙烷来氧化杂环和叔胺。这些用于制备N-氧化物的方法已在文献中得到广泛描述和综述，参见例如：T.L.Gilchrist,Comprehensive Organic Synthesis,vol.7,pp748-750(A.R.Katritzky和A.J.Boulton,Eds.,Academic Press)；以及G.W.H.Cheeseman和E.S.G.Werstiuk，Advances in Heterocyclic Chemistry,vol.22,pp 390-392(A.R.Katritzky和A.J.Boulton,Eds.,Academic Press)。
在本发明的范围内还包括本发明的化合物的代谢物，即在给药本发明的化合物时体内形成的物质。化合物的代谢产物可以通过所属领域公知的技术来进行鉴定，其活性可以通过试验的方法进行表征。这样的产物可由例如被给药的化合物的氧化、还原、水解、酰胺化、脱酰胺化、酯化、酶解等产生。因此，本发明包括本发明的化合物的代谢物，包括通过使本发明的化合物与哺乳动物接触足以产生其代谢产物的时间的方法制得的化合物。
本发明在其范围内进一步包括本发明的化合物的前药，其为自身可具有较小药理学活性或无药理学活性的本发明的化合物的某些衍生物，当被给药至身体中或其上时可通过例如水解裂解转化成具有期望活性的本发明的化合物。通常这样的前药会是所述化合物的官能团衍生物，其易于在体内转化成期望的治疗活性化合物。关于前药的使用的其他信息可参见“Pro-drugs as Novel Delivery Systems”，第14卷，ACS Symposium Series(T.Higuchi及V.Stella)。本发明的前药可例如通过用本领域技术人员已知作为“前-部分(pro-moiety)(例如“Design of Prodrugs”，H.Bundgaard(Elsevier,1985)中所述)”的某些部分替代本发明的化合物中存在的适当官能团来制备。
本发明还涵盖含有保护基的本发明的化合物。在制备本发明的化合物的任何过程中，保护在任何有关分子上的敏感基团或反应基团可能是必需的和/或期望的，由此形成本发明的化合物的化学保护的形式。这可以通过常规的保护基实现，例如，在T.W.Greene&P.G.M.Wuts,Protective Groups in Organic Synthesis,John Wiley&Sons,2006中所述的那些保护基，这些参考文献通过援引加入本文。使用本领域已知的方法，在适当的后续阶段可以移除保护基。
本发明还涵盖本文所述化合物的制备方法。应当理解，本发明的化合物可使用本文中描述的方法以及合成有机化学领域中已知的合成方法或本领域技术人员所了解的其变化形式来合成。本文所述化合物的制备方法包括(但不限于)下文所述那些。反应可在适于所使用的试剂和材料且适合于实现转化的溶剂或溶剂混合物中进行。
本发明中“药学上可接受的载体”是指与活性成分一同给药的稀释剂、辅剂、赋形剂或媒介物，并且其在合理的医学判断的范围内适于接触人类和/或其它动物的组织而没有过度的毒性、刺激、过敏反应或与合理的益处/风险比相应的其它问题或并发症。术语“活性成分”、“治疗剂”，“活性物质”或“活性剂”是指一种化学实体，它可以有效地治疗目标病症或病况的一种或多种症状。
如本文中所使用的术语“有效量”(例如“治疗有效量”或“预防有效量”)指给药后会在一定程度上实现预期效果的活性成分的量，例如缓解所治疗病症的一种或多种症状或预防病症或其症状的出现。
除非另外说明，否则如本文中所使用，术语“治疗”意指逆转、减轻、抑制该术语所应用的病症或病况或者所述病症或病况的一种或多种症状的进展，或预防所述病症或病况或者所述病症或病况的一种或多种症状。
SHP2相关疾病为对SHP2抑制敏感或有响应的疾病，包括但不限于实体和血液恶性肿瘤。例如，乳腺癌、结肠直肠癌、结肠癌、肺癌(包括小细胞肺癌、非小细胞肺癌和细支气管肺泡癌)和前列腺癌，以及胆管癌、骨癌、膀胱癌、头和颈癌、肾癌、肝癌、胃肠组织癌、黑色素瘤、口腔癌、食道癌、卵巢癌、胰腺癌、皮肤癌、睾丸癌、甲状腺癌、子宫癌、宫颈癌和外阴癌，以及白血病(包括慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)、幼年型粒单核细胞白血病(JMML)和慢性骨髓性白血病(CML))、多发性骨髓瘤和淋巴瘤。
如本文所使用的“个体”包括人或非人动物。示例性人个体包括患有疾病(例如本文所述的疾病)的人个体(称为患者)或正常个体。本发明中“非人动物”包括所有脊椎动物，例如非哺乳动物(例如鸟类、两栖动物、爬行动物)和哺乳动物，例如非人灵长类、家畜和/或驯化动物(例如绵羊、犬、猫、奶牛、猪等)。
具体实施方式
实施例
以下列举实施例和试验例，进一步详细地说明本发明，但它们不限制本发明的范围，并且在不脱离本发明的范围下可进行变化。
以下的实施例中记载的化合物的结构通过核磁共振(1HNMR)或质谱(MS)来确定。
1HNMR的测定使用JEOL Eclipse 400核磁仪进行，测定溶剂为氘代甲醇(CD3OD)、氘代氯仿(CDCl3)或六氘代二甲基亚砜(DMSO-d6)，内标为四甲基硅烷(TMS)，并且化学位移(δ)以百万分之一(ppm)作为单位给出。
实施例中使用的核磁共振(NMR)数据中的缩写含义如下：
s：单峰、d：二重峰、t：三重峰、q：四重峰、dd：双二重峰、qd：四二重峰、ddd：双双二重峰、ddt：双双三重峰、dddd：双双双二重峰、m：多重峰、br：宽峰(broad)、J：偶合常数、Hz：赫兹。
MS的测定使用Agilent(ESI)质谱仪(生产商：Agilent，型号：Agilent 6120B)。
制备高效液相色谱法使用岛津Agilent 1260制备液相色谱仪(OBD,150×19mm色谱柱)。
反应的监测采用薄层色谱法(TLC)或LC-MS进行。
薄层色谱法纯化采用烟台产GF 254(0.4～0.5nm)硅胶板，展开剂体系包括但不限于体系C(二氯甲烷和甲醇体系)、体系D(石油醚和乙酸乙酯体系)以及体系E(正己烷和乙酸乙酯体系)，溶剂的体积比根据化合物的极性不同而进行调节，也可以加入少量的三乙胺等进行调节。
柱色谱法一般使用青岛海洋200～300目硅胶为固定相。洗脱剂体系包括但不限于体系C(二氯甲烷和甲醇体系)以及体系D(石油醚和乙酸乙酯体系)，溶剂的体积比根据化合物的极性不同而进行调节，也可以加入少量的三乙胺等进行调节。
如实施例中无特殊说明，则反应的温度为室温(20℃～30℃)。
除非特别指明，实施例中所使用的试剂购自Acros Organics、Aldrich ChemicalCompany、南京药石科技或者上海书亚医药科技等公司。
本文中所使用的缩写具有以下含义：
制备实施例
实施例A：6-氯-3-碘-1-((2-(三甲基硅基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-羧酸乙酯(A-5)的制备
第一步：6-羟基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-羧酸乙酯(A-2)的制备
500mL反应瓶中加入3-氨基吡唑(A-1)(15.0g,180.5mmol)及水(67mL)。25℃下搅拌至溶解。再依次加入草酰乙酸二乙酯钠盐(38.0g,180.5mmol)的水(67mL)溶液。搅拌15分钟后，加入醋酸(53mL)，升温至85℃反应15小时，有大量固体析出。降温至25℃，过滤，滤饼用水(50mL)洗涤三次并真空干燥，得到化合物A-2(10.0g,收率27％)。
第二步：6-氯-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-羧酸乙酯(A-3)的制备
250mL反应瓶中加入化合物A-2(4.2g,20.2mmol)、DBU(6.1g,24.2mmol)及甲苯(60mL)。室温下搅拌10分钟。缓慢加入三氯氧磷(3.4g,22.2mmol)的甲苯(30mL)溶液，20分钟加完，随后升温至110℃反应5小时。反应液冷却至25℃，剧烈搅拌下加入饱和醋酸钾水溶液(100mL)。搅拌15分钟后静置分液，水相用乙酸乙酯(60mL)反萃一次。合并有机相，饱和食盐水(150mL)洗涤一次。有机相用无水硫酸钠干燥，硅藻土过滤，滤液浓缩，得到化合物A-3(3.4g,收率75％)。
第三步：6-氯-3-碘-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-羧酸乙酯(A-4)的制备
250mL反应瓶中加入化合物A-3(3.40g,15.07mmol)及1,4-二氧六环(50mL)。25℃下搅拌溶解后，加入饱和碳酸氢钠水溶液(0.5M,118mL)及碘(5.11g,20.10mmol)，并继续搅拌24小时。随后补加碘(15.32g,60.39mmol)。继续搅拌48小时后，加入0.9M的硫代硫酸钠水溶液至溶液颜色不变。降温至0℃，加入6N盐酸调节溶液pH至2，析出大量固体。过滤，滤饼用水洗涤后真空干燥，得到化合物A-4(4.18g,收率80％)。
第四步：6-氯-3-碘-1-((2-(三甲基硅基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-羧酸乙酯(A-5)的制备
100mL三口瓶中加入化合物A-4(4.18g,11.88mmol)及DMAc(20mL)。氮气保护下降温至0℃。加入NaH(0.55g,14.26mmol，60％(重量比)，分散于矿物油中)到反应液中，并保温搅拌0.5小时。随后加入SEMCl(2.97g，17.82mmol)。继续搅拌10分钟，然后转至室温反应1小时。向反应液缓慢加入饱和氯化铵(60mL)淬灭反应。乙酸乙酯萃取两次(35mL x 2)，合并有机相。有机相用饱和食盐水(50mL)洗涤一次，无水硫酸钠干燥，真空浓缩。粗产品经硅胶柱色谱法纯化(流动相为体系D)，得到化合物A-5(4.00g,收率70％)。
实施例1：6-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯吡啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-羧酸乙酯(TM1)的制备
第一步：6-(4-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-甲基哌啶-1-基)-3-碘-1-((2-(三甲基硅基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-羧酸乙酯(1-1)的制备
25mL反应瓶中加入化合物A-5(1.00g,2.08mmol)、叔丁基(4-甲基哌啶-4-基)氨基甲酸酯(0.89g,4.16mmol)、DIPEA(0.81g,6.23mmol)及NMP(8mL)。加热至60℃反应4小时。反应完毕后降温至25℃，加入水(25mL)。乙酸乙酯(20mL)萃取一次，饱和食盐水(20mL)洗涤一次。有机相用无水硫酸钠干燥，减压浓缩。粗产品经硅胶柱色谱法纯化(流动相为体系D)，得到化合物1-1(1.10g,收率80％)。
第二步：6-(4-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-甲基哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯吡啶-4-基)-1-((2-三甲基硅基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-羧酸乙酯(1-2)的制备
50mL反应瓶中加入化合物1-1(1.00g,1.52mmol)、2,3-二氯-4-吡啶硼酸频哪醇酯(0.42g,1.52mmol)、双(三苯基膦)二氯化钯(0.11g,0.15mmol)、碳酸钠(0.32g,3.03mmol)、水(2mL)及1,4-二氧六环(10mL)。氮气保护下在85℃下反应12小时。反应完毕后降温至25℃，加入水(30mL)。乙酸乙酯萃取两次(20mL x 2)。有机相经饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩。粗产品经硅胶柱色谱法纯化(流动相为体系D)，得到化合物1-2(0.70g,收率68％)。
第三步：6-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯吡啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-羧酸乙酯(TM1)的制备
10mL反应瓶中加入化合物1-2(0.12g,0.18mmol)及三氟乙酸(5mL)。加热至60℃反应12小时。反应完毕后降温至25℃，减压浓缩至干。粗产品经反向HPLC(流动相A：乙腈，流动相B：0.05％三氟乙酸水溶液(体积比))，得到化合物TM1的三氟乙酸盐(13mg,收率14％)。
MS m/z(ESI):449.1[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.78(s,1H),8.49(d,J＝4.8Hz,1H),7.93(s,3H),7.62(d,J＝4.8Hz,1H),7.30(s,1H),4.19-4.15(m,2H),3.96(q,J＝6.8Hz,2H),3.46-3.40(m,2H),1.77-1.74(m,4H),1.40(s,3H),0.89(t,J＝6.8Hz,3H).
实施例2：6-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯吡啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-羧酸(TM2)的制备
第一步：6-(4-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-甲基哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯吡啶-4-基)-1-((2-三甲基硅基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-羧酸(2-1)的制备
25mL反应瓶中加入化合物1-2(0.20g,0.30mmol)、NaOH(0.12g,3.0mmol)、甲醇(3mL)及水(3mL)，并在25℃下搅拌12小时。反应液用1N盐酸调节pH至5，加乙酸乙酯萃取两次(10mL x 2)。有机相经饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到化合物2-1(0.18g,收率94％)。
第二步：6-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯吡啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-羧酸(TM2)的制备
10mL反应瓶中加入化合物2-1(0.18g,0.28mmol)及三氟乙酸(5mL)。加热至60℃反应12小时。反应完毕后降温至25℃，减压浓缩至干。粗产品经反向HPLC(流动相A：乙腈，流动相B：0.03％甲酸水溶液(体积比))，得到化合物TM2(36mg,收率31％)。
MS m/z(ESI):421.1[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.67(s,1H),8.41(d,J＝4.8Hz,1H),7.95(s,3H),7.56(d,J＝4.8Hz,1H),7.28(s,1H),4.19-4.16(m,2H),3.71-3.52(m,2H),1.75-1.61(m,4H),1.56(s,3H).
实施例3：(6-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯吡啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)甲醇(TM3)的制备
第一步：(6-(4-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-甲基哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯吡啶-4-基)-1-((2-三甲基硅基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)甲醇的制备
25mL反应瓶中加入化合物1-2(0.30g,0.44mmol)及二氯甲烷(10mL)。氮气保护下降温至-78℃。维持该温度加入DIBAL-H(2.65mmol,1.77mL)(1.5N的甲苯溶液)。反应0.5小时后自然升温至25℃，再反应2小时。再次降温至-78℃。加入饱和酒石酸钠钾水溶液(10mL)。升温至25℃，搅拌1小时。加二氯甲烷萃取两次(10mL x 2)。有机相经饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩。粗产品经硅胶柱色谱法(流动相为体系D)纯化，得到化合物3-1(0.16g,收率42％)。
第二步：(6-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯吡啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)甲醇(TM3)的制备
除使用化合物3-1代替实施例1中第三步的化合物1-2外，采用与实施例1中第三步所描述的类似方法合成化合物TM3的三氟乙酸盐(收率14％)。
MS m/z(ESI):408.3[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.35(s,1H),8.48(d,J＝4.8Hz,1H),7.92(s,3H),7.58(d,J＝4.8Hz,1H),6.89(s,1H),4.36(s,2H),4.16-4.12(m,2H),3.41-3.33(m,2H),1.75-1.72(m,4H),1.40(s,3H).
实施例4：6-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯吡啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-甲酰胺(TM4)的制备
第一步：6-(4-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-甲基哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯吡啶-4-基)-1-((2-三甲基硅基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-甲酰胺(4-1)的制备
25mL反应瓶中加入化合物2-1(0.30g,0.46mmol)、氯化铵(0.05g,0.92mmol)、HATU(0.35g,0.92mmol)、DIPEA(0.24g,1.84mmol)及DMF(5mL)。升温至45℃反应4小时。反应完毕后降温至25℃，加入水(15mL)。乙酸乙酯萃取两次(10mL x 2)。有机相经饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩。粗产品经硅胶柱色谱法(流动相为体系D)纯化，得到化合物4-1(0.15g,收率77％)。
第二步：6-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯吡啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-甲酰胺(TM4)的制备
除使用化合物4-1代替实施例1中第三步的化合物1-2外，采用与实施例1中第三步所描述的类似方法合成化合物TM4(收率14％)。
MS m/z(ESI):420.1[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.50(s,1H),8.39(d,J＝4.8Hz,1H),8.02(br,2H),7.59(br,2H),7.47(d,J＝4.8Hz,1H),7.10(s,1H),4.15-4.07(m,2H),3.52-3.41(m,2H),1.75-1.66(m,4H),1.36(s,3H).
实施例5：6-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-基)-3-(2-溴-3-氯吡啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-羧酸(TM5)的制备
第一步：6-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-基)-3-碘-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-羧酸乙酯(5-1)的制备
25mL反应瓶中加入化合物A-5(50mg,1mmol)、(3S,4S)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-4-胺盐酸盐(41mg,0.17mmol)及N-甲基吡咯烷酮(2mL)，然后将N,N-二异丙基乙胺(40mg,0.3mmol)加入到反应液中。加热到50℃反应16小时。反应完成后加水(20mL)稀释，并用乙酸乙酯萃取三次(20mL x 3)。合并有机相，并用饱和食盐水洗涤三次(50mL x 3)。有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸干溶剂。粗品经硅胶柱色谱法纯化(流动相为体系D)，得到化合物5-1(30mg,收率47％)。
第二步：6-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-基)-3-(2-溴-3-氯吡啶-4-基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-羧酸乙酯(5-2)的制备
25mL反应瓶中加入化合物5-1(90mg,0.15mmol)、2-溴-3-氯-吡啶-4-硼酸(70mg,0.29mmol)、四(三苯基膦)钯(84mg,0.07mmol)、碳酸铯(71mg,0.22mmol)。氮气置换三次。升温至100℃反应4小时。反应液直接减压蒸干溶剂。粗品用制备薄层色谱纯化(展开剂为体系B)，得到化合物5-2(40mg,收率40％)。
第三步：6-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-基)-3-(2-溴-3-氯吡啶-4-基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-羧酸(5-3)的制备
除使用化合物5-2代替实施例2中第一步的化合物1-2外，采用与实施例2中第一步所描述的类似方法合成化合物5-3(10mg,收率100％)。产物未经进一步纯化而直接用于下一步反应。
第四步：6-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-基)-3-(2-溴-3-氯吡啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-羧酸(TM5)的制备
除使用化合物5-3代替实施例1中第三步的化合物1-2外，采用与实施例1中第三步所描述的类似方法合成化合物TM5(收率23％)。
MS m/z(ESI):521.1[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.60(s,1H),8.40(d,J＝4.6Hz,1H),7.54(d,J＝4.8Hz,1H),7.24(s,1H),4.34-4.13(m,4H),3.92-3.87(m,1H),3.74-3.67(m,1H),3.25-3.14(m,2H),1.91-1.68(m,3H),1.60-1.52(m,1H),1.20(d,J＝5.9Hz,3H).
实施例6：6-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯吡啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-胺(TM6)的制备
第一步：6-(4-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-甲基哌啶-1-基)-3-碘-1-((2-三甲基硅基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-羧酸(6-1)的制备
100mL反应瓶中加入化合物1-1(10.67g,12.13mmol)、EtOH(20mL)及NaOH水溶液(5N)(20mL)。升温至35℃反应2.5小时。然后用3N HCl调节体系pH至2。乙酸乙酯萃取两次(50mL x 2)。有机相经饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到化合物6-1(5.00g,收率65％)。
第二步：(1-(4-氨基-3-碘-1-((2-(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基)-4-甲基哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(6-2)的制备
50mL反应瓶中加入化合物6-1(2.00g,3.17mmol)、DMF(10mL)、叔丁醇(10mL)、DPPA(1.54g,6.33mmol)、TEA(1.60g,15.83mmol)。升温至75℃反应1小时。加入水，并用乙酸乙酯萃取两次(15mL x 2)。有机相经饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩。粗产品经制备薄层色谱纯化(展开剂为体系B)，得到化合物6-2(0.10g,收率5％)。
第三步：(1-(4-氨基-3-(2,3-二氯吡啶-4-基)-1-((2-(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基)-4-甲基哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(6-3)的制备
50mL反应瓶中依次加入化合物6-2(70mg,0.12mmol)、1,4-二氧六环(4mL)、水(1mL)、碳酸铯(97mg,0.30mmol)、2,3-二氯-4-吡啶硼酸频哪醇酯(27mg,0.12mmol)和[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷络合物(24mg,0.03mmol)。抽真空，氮气置换三次。升温至110℃反应1小时。降温至25℃后加入水。乙酸乙酯萃取两次(10mL x 2)。有机相经饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩。粗产品经制备薄层色谱纯化，得到化合物6-3(40mg,收率56％)。
第四步：6-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯吡啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-胺(TM6)的制备
除使用化合物6-3代替实施例1中第三步的化合物1-2外，采用与实施例1中第三步所描述的类似方法合成化合物TM6(收率15％)。
MS m/z(ESI):392.1[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.89(s,1H),8.42(d,J＝5.2Hz,1H),7.47(d,J＝4.8Hz,1H),5.82(s,1H),5.59(s,2H),3.65-3.50(m,4H),1.50-1.35(m,4H),1.09(s.3H).
实施例7：(6-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯吡啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)氨基甲酸甲酯(TM7)的制备
第一步：(1-(3-碘-4-((甲氧基羰基)氨基)-1-((2-(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基)-4-甲基哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(7-1)的制备
50mL反应瓶中加入化合物6-1(0.50g,0.79mmol)、DMF(5mL)、甲醇(5mL)、DPPA(0.39g,1.58mmol)及TEA(0.40g,3.96mmol)。升温至75℃反应40小时。加入适量水，并用乙酸乙酯萃取两次(10mL x 2)。有机相经饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩。粗产品经反向HPLC(流动相A：乙腈，流动相B：0.037％碳酸氢胺水溶液(质量体积比))，得到化合物7-1(40mg,收率8％)。
第二步至第三步：(6-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯吡啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)氨基甲酸甲酯(TM7)的制备
除使用化合物7-1代替实施例6中第二步的化合物6-2外，采用与实施例6中第三步至第四步所描述的类似方法合成化合物TM7(两步收率15％)。
MS m/z(ESI):450.1[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.49(s,1H),9.51(s,1H),8.47(d,J＝4.8Hz,1H),7.52(d,J＝4.8Hz,1H),6.85(s,1H),4.16-4.04(m,2H),3.55-3.30(m,5H),1.85-1.72(m,4H),1.44(s.3H).
实施例8：6-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)-3-(2-溴-3-氯吡啶-4-基)-N-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-甲酰胺(TM8)的制备
第一步：(1-(3-碘-4-(甲基氨甲酰基)-(1-((2-(三甲基硅基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基)-4-甲基哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(8-1)的制备
100mL反应瓶中加入化合物6-1(1000mg,1.58mmol)、甲胺盐酸盐(220mg,3.16mmol)、HATU(1200mg,3.16mmol)和DCM(30mL)，再加入DIPEA(610mg,7.74mmol)。室温下搅拌2小时。加入适量的水淬灭反应，并用适量的DCM萃取两次。合并有机相，用无水硫酸钠干燥后过滤，滤液浓缩。粗产品用硅胶柱色谱法纯化(流动相为体系D)，得到化合物8-1(720mg,收率72％)。
第二步至第三步：6-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)-3-(2-溴-3-氯吡啶-4-基)-N-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-甲酰胺(TM8)的制备
除使用化合物8-1和2-溴-3-氯吡啶-4-硼酸分别代替实施例1中第二步的化合物1-1和2,3-二氯-4-吡啶硼酸频哪醇酯外，采用与实施例1中第二步至第三步所描述的类似方法合成化合物TM8(两步收率21％)。
MS m/z(ESI):478.1[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.47(s,1H),8.45-8.35(m,2H),7.47(d,J＝4.8Hz,1H),6.97(s,1H),3.79-3.71(m,4H),2.56(d,J＝4.6Hz,3H),1.54-3.48(m,4H),1.16(s,3H).
实施例9：6-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯吡啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-甲腈(TM9)的制备
第一步：(1-(4-氨基甲酰基-3-碘-1-((2-(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基)-4-甲基哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(9-1)的制备
除使用氯化铵代替实施例8中第一步的甲胺盐酸盐外，采用与实施例8中第一步所描述的类似方法合成化合物9-1(2.2g,收率68％)。
第二步：(1-(4-氰基-3-碘-1-((2-(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基)-4-甲基哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(9-2)的制备
100mL反应瓶中加入化合物9-1(1.4g,2.22mmol)、DCM(50mL)和三乙胺(0.9g,8.88mmol)，并在搅拌下慢慢滴入TFAA(1.4g,6.66mmol)。室温下搅拌0.5小时。加入适量的水淬灭反应，并用适量的DCM萃取两次。合并有机相，用无水硫酸钠干燥后过滤，滤液浓缩。粗产品用硅胶柱色谱法纯化(流动相为体系D)，得到化合物9-2(1.1g,收率80％)。
第三步至第四步：6-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯吡啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-甲腈(TM9)的制备
除使用化合物9-2代替实施例6中第三步的化合物6-2外，采用与实施例6中第三步至第四步所描述的类似方法合成化合物TM9(两步收率25％)。
MS m/z(ESI):402.1[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.54(d,J＝4.8Hz,1H),7.68(d,J＝4.8Hz,1H),7.61(s,1H),4.13-4.07(m,2H),3.56-3.49(m,2H),1.72-1.69(m,4H),1.35(s,3H).
实施例10：6-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)-3-(2-溴-3-氯吡啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-羧酸(TM10)的制备
第一步：3-(2-溴-3-氯吡啶-4-基)-6-(4-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-甲基哌啶-1-基)-1-((2-三甲基硅基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-羧酸乙酯(10-1)的制备
除使用2-溴-3-氯-4-吡啶硼酸代替实施例1中第二步的2,3-二氯-4-吡啶硼酸频哪醇酯外，采用与实施例1中第二步所描述的类似方法合成化合物10-1(收率50％)。
第二步至三步：6-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)-3-(2-溴-3-氯吡啶-4-基)-1-(羟基甲基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-羧酸(10-3)的制备
除使用化合物10-1代替实施例2中第一步的化合物1-2外，采用与实施例2中第一步至第二步所描述的类似方法合成化合物10-3(两步收率62％)。
第四步：6-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)-3-(2-溴-3-氯吡啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-羧酸(TM10)的制备
将6-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)-3-(2-溴-3-氯吡啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-羧酸(TM10)(40mg,80.68μmol)溶于氨/甲醇溶液(7M)(5mL)中。室温下反应8小时。LCMS监测反应至终点，停止反应，旋干溶剂。粗品经反向HPLC(流动相A：乙腈，流动相B：0.05％(体积比)三氟乙酸水溶液)制备得到化合物TM10的三氟乙酸盐(12mg,收率25％)。
MS m/z(ESI):465.0[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.67(s,1H),8.41(d,J＝4.8Hz,1H),7.95(s,3H),7.56(d,J＝4.8Hz,1H),7.28(s,1H),4.23-4.10(m,2H),3.64-3.51(m,2H),1.85-1.67(m,4H),1.40(s,3H).
实施例11：6-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-基)-3-(2,3-二氯吡啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-羧酸(TM11)的制备
第一步：6-((3S,4S)-4-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-基)-3-碘-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-羧酸乙酯(11-1)的制备
25mL反应瓶中加入化合物A-5(300mg,0.6mmol)、(3S,4S)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-4-胺盐酸盐(193mg,0.9mmol)及N-甲基吡咯烷酮(4mL)，然后将N,N-二异丙基乙胺(241mg,1.8mmol)加入到反应液中。加热到50℃反应16小时。反应液降至25℃，向其中加入二碳酸二叔丁酯(408mg,1.8mmol)。25℃反应16小时。反应完成后加水(50mL)稀释。用乙酸乙酯萃取三次(50mL x 3)。合并有机相，用饱和食盐水洗涤三次(50mL x 3)，无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸干溶剂。粗品经硅胶柱色谱法纯化(流动相为体系D)，得到化合物11-1(300mg,收率67％)。
第二步至第四步：6-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-基)-3-(2,3-二氯吡啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-羧酸(TM11)的制备
除使用化合物11-1和2,3-二氯-4-吡啶硼酸频哪醇酯分别代替实施例5中第二步的化合物5-1和2-溴-3-氯-吡啶-4-硼酸外，采用与实施例5中第二步至第四步所描述的类似方法合成。粗品经反向HPLC(流动相A：乙腈，流动相B：0.05％(体积比)三氟乙酸水溶液)，得到化合物TM11(三步收率21％)。
MS m/z(ESI):477.1[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.62(s,1H),8.42(d,J＝4.9Hz,1H),7.54(d,J＝4.8Hz,1H),7.25(s,1H),4.30-4.19(m,3H),3.90(d,J＝8.8Hz,1H),3.73-3.70(J＝8.8Hz,1H),3.24-3.16(m,3H),1.79-1.70(m,3H),1.67-1.50(m,1H),1.20(d,J＝6.5Hz,3H).
实施例12：6-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-基)-3-(2,3-二氯吡啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-甲酰胺(TM72)的制备
除使用化合物11-3代替实施例4中的化合物2-1外，采用与实施例4中第一步至第二步所描述的类似方法合成化合物TM72的三氟乙酸盐(总收率4％)。
MS m/z(ESI):476.1[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.50(s,1H),8.40(d,J＝4.8Hz,1H),8.01(s,1H),7.87(s,3H),7.58(s,1H),7.47(d,J＝4.8Hz,1H),7.11(s,1H),4.30-4.17(m,3H),3.92(d,J＝8.8Hz,1H),3.7(d,J＝8.8Hz,1H),3.41-3.37(m,1H),3.22-3.14(m,2H),1.79-1.67(m,3H),1.62-1.52(m,1H),1.20(d,J＝6.5Hz,3H).
实施例13：6-(4-氨基-4-甲基-哌啶-1-基)-3-(3,4-二氟苯基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-羧酸(TM77)的制备
除使用3,4-二氟苯硼酸代替实施例10中的2-溴-3-氯-吡啶-4-硼酸外，采用与实施例10中第一步至第四步所描述的类似方法合成化合物TM77的三氟乙酸盐(总收率52％)。
MS m/z(ESI):388.2[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.55(s,1H),13.40(s,1H),7.97(s,3H),7.55-7.41(m,2H),7.35-7.26(m,1H),7.10(s,1H),4.22-4.09(m,2H),3.47-3.39(m,2H),1.82-1.67(m,4H),1.40(s,3H).
实施例14：6-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯吡啶-4-基)-N-羟基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-甲酰胺(TM20)的制备
第一步：(1-(3-(2,3-二氯吡啶-4-基)-4-(((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)氨基甲酰)-1-((2-(三甲基硅基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基)-4-甲基哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(20-1)的制备
除使用O-(四氢-2H-吡喃-2-基)羟基胺代替实施例4中第一步的氯化铵外，采用与实施例4中第一步所描述的类似方法合成化合物20-1(收率57％)。
第二步：6-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯吡啶-4-基)-N-羟基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-甲酰胺(TM20)的制备
除使用化合物20-1代替实施例10中第三步的化合物10-2外，采用与实施例10中第三步至第四步所描述的类似方法合成TM20的粗品。粗品经反向HPLC(流动相A：乙腈，流动相B：0.037％碳酸氢胺水溶液(质量体积比))，得到化合物TM20(收率12％)。
MS m/z(ESI):436.1[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.35(br,1H),8.37(d,J＝4.8Hz,1H),7.44(d,J＝4.8Hz,1H),6.94(s,1H),4.41-4.37(m,1H),3.84-3.81(m,2H),3.67-3.58(m,2H),1.47-1.40(m,4H),1.09(s,3H).
实施例15：6-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)-3-(2-甲氧基-3-氯吡啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-甲酸(TM84)的制备
除使用3-氯-2-氟-4-吡啶硼酸代替实施例10中第一步的2-溴-3-氯-4-吡啶硼酸外，采用与实施例10所描述的类似方法合成TM84的粗品。粗品经反向HPLC(流动相A：乙腈，流动相B：0.03％甲酸水溶液(体积比))，得到化合物TM84。加盐酸的1,4-二氧六环溶液(1N，0.1mL)及适量水后冻干，得到化合物TM84的盐酸盐(三步总收率15％)。
MS m/z(ESI):417.2[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.54(s,2H),8.26(s,3H),8.15(d,J＝4.8Hz,1H),7.21(s,1H),7.11(d,J＝4.8Hz,1H),4.14(d,J＝14.0Hz,2H),3.98(s,3H),3.52-3.41(m,2H),1.87-1.70(m,4H),1.40(s,3H).
实施例16：6-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)-3-(3,4-二氟苯基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-甲酰胺(TM78)的制备
除使用化合物77-2代替实施例4中第一步的化合物2-1外，采用与实施例4中第一步至二步所描述的类似方法合成化合物TM78的三氟乙酸盐(两步总收率35％)。
MS m/z(ESI):387.2[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.30(s,1H),7.86-8.03(m,4H),7.72(s,1H),7.58-7.39(m,3H),6.88(s,1H),4.20-4.12(m,2H),3.42-3.34(m,2H),1.80-1.66(m,4H),1.39(s,3H).
实施例17：6-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-羧酸(TM61)的制备
除使用2,3-二氯苯硼酸代替实施例10中第一步的2-溴-3-氯-吡啶-4-硼酸外，采用与实施例10中第一步至第四步所描述的类似方法合成化合物TM61。加盐酸的1,4-二氧六环溶液(1N，0.1mL)及适量水后冻干，得到化合物TM61的盐酸盐(三步收率20％)。
MS m/z(ESI):420.1[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.62-13.10(m,2H),8.16(s,3H),7.66(dd,J＝7.2,2.4Hz,1H),7.46-7.35(m,2H),7.20(s,1H),4.22-4.09(m,2H),3.52-3.38(m,2H),1.92-1.62(m,4H),1.40(s,3H).
实施例18：6-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-甲酰胺(TM80)的制备
除使用化合物61-2代替实施例4中第一步的化合物2-1外，采用与实施例4中第一步至第二步所描述的类似方法合成化合物TM80(两步收率18％)。
MS m/z(ESI):419.1[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.26(s,1H),7.82(s,1H),7.64-7.58(m,1H),7.44(s,1H),7.41-7.34(m,2H),6.97(s,1H),4.06-3.95(m,2H),3.57-3.50(m,2H),1.73-1.58(m,4H),1.30(s,3H).
实施例19：6-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)-3-(2,3-二氟苯基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-羧酸(TM81)的制备
除使用2,3-二氟苯硼酸代替实施例10中第一步的2-溴-3-氯-吡啶-4-硼酸外，采用与实施例10中第一步至第四步所描述的类似方法合成化合物TM81。加盐酸的二氧六环溶液(1N，0.1mL)及适量水后冻干，得到化合物TM81的盐酸盐(三步收率16％)。
MS m/z(ESI):388.0[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.26(s,1H),8.26(s,3H),7.50-7.35(m,2H),7.30-7.20(m,1H),7.20(s,1H),4.20-4.10(m,2H),3.53-3.41(m,2H),1.96-1.70(m,4H),1.41(s,3H).
实施例20：6-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)-3-(2,3-二氟苯基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-甲酰胺(TM82)的制备
除使用化合物81-2代替实施例4中第一步的化合物2-1外，采用与实施例4中第一步至第二步所描述的类似方法合成化合物TM82(两步收率23％)。
MS m/z(ESI):387.0[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.33(s,1H),7.91(s,1H),7.49(s,1H),7.43-7.30(m,2H),7.26-7.18(m,1H),6.95(s,1H),3.85-3.75(m,2H),3.73-3.63(m,2H),1.55-1.40(m,4H),1.12(s,3H).
实施例21：1-(3-(2,3-二氯吡啶-4-基)-4-(1H-四唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基)-4-甲基哌啶-4-胺(TM83)的制备
第一步：(1-(3-(2,3-二氯吡啶-4-基)-4-(1H-四唑-5-基)-1-((2-(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基)-4-甲基哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(83-1)的制备
25mL单口瓶中加入化合物9-3(100mg,158μmol)、叠氮化钠(21mg,323μmol)、氯化铵(17mg,318μmol)和DMF(5mL)。搅拌下加热到99℃反应24小时。反应完成后，向反应液加入适量的水淬灭反应，然后用DCM萃取两次(10mL x 2)。合并有机相，并用饱和食盐水反萃取三次(10mL x 3)。有机相用无水硫酸钠干燥后过滤，滤液减压浓缩至干。粗品经硅胶柱色谱法纯化(流动相为体系D)，得到化合物83-1(60mg,56％)。
第二步：1-(3-(2,3-二氯吡啶-4-基)-4-(1H-四唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基)-4-甲基哌啶-4-胺(TM83)的制备
10mL单口瓶中加入化合物83-1(60mg,89μmol)和三氟乙酸(3mL)。25℃下搅拌1小时。反应完成后，减压浓缩至干。粗产品经反向HPLC(流动相A：乙腈，流动相B：0.05％甲酸水溶液(体积比))，得到化合物TM83(15mg,收率38％)。
MS m/z(ESI):445.1[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.33(s,1H),8.28(d,J＝4.8Hz,1H),7.86(s,3H),7.33(d,J＝4.8Hz,1H),7.29(s,1H),4.19(m,2H),3.40(m,2H),1.75(m,4H),1.41(s,3H).
实施例22：6-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)-3-(2-氯-3-氟苯基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-甲酸(TM85)的制备
除使用2-氯-3-氟苯硼酸代替实施例10中第一步的2-溴-3-氯-吡啶-4-硼酸外，采用与实施例10中第一步至第四步所描述的类似方法合成TM85的粗品。粗品经反向HPLC(流动相A：乙腈，流动相B：0.037％碳酸氢铵水溶液(质量体积比))，得到化合物TM85。加盐酸的1,4-二氧六环溶液(1N，0.1mL)及适量水后冻干，得到化合物TM85的盐酸盐(三步总收率15％)。
MS m/z(ESI):404.2[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.46(br,2H),8.30(s,3H),7.46-7.40(m,2H),7.34-7.28(m,1H),7.20(s,1H),4.22-4.32(m,2H),3.51-3.43(m,2H),1.88-1.69(m,4H),1.41(s,3H).
实施例23：1-(3-(2,3-二氯吡啶-4-基)-4-(二氟甲基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基)-4-甲基哌啶-4-胺(TM86)的制备
第一步：(1-(4-(二氟甲基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基)-4-甲基哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(86-2)的制备
除使用化合物86-1代替实施例1中第一步的化合物A-5外，采用与实施例1中第一步所描述的类似方法合成化合物86-2(收率79％)。
第二步：(1-(4-二氟甲基-3-碘-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基)-4-甲基哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(86-3)的制备
25mL反应瓶中加入化合物86-2(440mg,1.15mmol)、NIS(285mg,1.27mmol)及DMF(3mL)。50℃反应4小时。反应完成后加水稀释。乙酸乙酯萃取三次(10mL x 3)。合并有机相，饱和食盐水洗涤一次。有机相用无水硫酸钠干燥后过滤，滤液减压浓缩至干。粗品经硅胶柱色谱法纯化(流动相为体系D)，得到化合物86-3(381mg，收率65％)。
第三步：(1-(4-二氟甲基-3-碘-1-(4-甲氧基苄基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基)-4-甲基哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(86-4)的制备
25mL反应瓶中加入化合物86-3(178mg,0.35mmol)、碳酸铯(343mg,1.05mmol)、碘化钠(5mg,35.10um)、PMBCl(83mg,0.53mmol)及DMF(2mL)。25℃反应18小时。加水稀释，乙酸乙酯萃取三次(10mL x 3)。合并有机相，饱和食盐水洗涤一次。有机相用无水硫酸钠干燥后过滤，滤液减压浓缩至干。粗品经硅胶柱色谱法纯化(流动相为体系D)，得到化合物86-4(163mg,收率74％)。
第四步至第五步：1-(3-(2,3-二氯吡啶-4-基)-4-(二氟甲基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基)-4-甲基哌啶-4-胺(TM86)的制备
除使用化合物86-4代替实施例1中第二步的化合物1-1外，采用与实施例1中第二步至第三步所描述的类似方法合成化合物TM86的三氟乙酸盐(收率20％)。
MS m/z(ESI):427.1[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.67(s,1H),8.53-8.43(m,1H),7.92(s,3H),7.62-7.51(m,1H),7.15(s,1H),6.87(t,J＝54.8Hz,1H),4.18(d,J＝11.2Hz,2H),3.44(s,2H),1.74(s,4H),1.40(s,3H).
实施例24：1-(3-(2,3-二氯苯基)-4-(二氟甲基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基)-4-甲基哌啶-4-胺(TM87)的制备
除使用化合物86-3和2,3-二氯苯硼酸分别代替实施例1第二步中的化合物1-1和2,3-二氯-4-吡啶硼酸外，采用与实施例1中第二步至第三步所描述的类似方法合成化合物TM87粗品。粗品经反向HPLC(流动相A：乙腈，流动相B：0.05％甲酸水溶液(体积比))，得到化合物TM87(两步总收率9％)。
MS m/z(ESI):426.1[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.42(s,1H),8.37(s,2H),7.77-7.70(m,1H),7.47-7.39(m,2H),7.06(s,1H),6.74(t,J＝54.8Hz,1H),3.93-3.85(m,2H),3.66-3.61(m,2H),1.60(t,J＝5.2Hz,4H),1.24(s,3H).
生物学实施例
试验例1：SHP2(蛋白磷酸酶)体外酶学活性抑制试验
试验系统：
激酶：Recombinant full-length human PTPN11(SHP2),Active(SignalChemCatalog:P38-20G)
底物：6,8-Difluoro-4-methylumbelliferyl phosphate(DiFMUP)(InvitrogenCatalog:D6567)
激活肽：IRS1_pY1172(dPEG8)pY1222(BPS Bioscience Catalog:79319-2)
终止试剂：bpv(phen)(Abcam Catalog:ab141436)
试验参数：
SHP2浓度：0.5nM；DiFMUP浓度：200μM；IRS-1浓度：0.5μM；bpv：160μM
缓冲液体系：60mM Hepes pH7.2；75mM NaCl；75mM KCl；0.05％P-20；1mM EDTA；5mM DTT
化合物孵育及酶激活时间：室温60分钟
酶与底物反应时间：室温30分钟
酶标仪参数：BMG PHERAstar Fluorescence，激发波长340nm，发射波长450nm
试验步骤：
将待测化合物和磷酸酶SHP2的混合物与激活肽IRS-1在缓冲液体系下室温孵育60分钟，加入底物DiFMUP启动反应。室温孵育30分钟后，加入bpv终止反应。将反应板放入酶标仪中，采用终点法读取板中各孔的荧光值。
数据处理：
以溶媒组(含0.5nM SHP2,200μM DiFMUP,0.5μM IRS-1,160μM bpv,0.05％DMSO)为阴性对照、反应缓冲液组(200μM DiFMUP,0.5μM IRS-1,160μM bpv,0.05％DMSO)为空白对照，计算各浓度组的相对抑制活性。抑制率＝100％-(测试组-空白组)/(溶媒组-空白组)*100％。按照四参数模型拟合曲线，计算化合物的半数抑制浓度(IC50)。
试验结果：
按照上述方法测定化合物对SHP2活性的抑制，结果如表1中所示。
表1.SHP2酶活抑制试验结果
结论：
在SHP2酶活抑制试验中，本发明的化合物表现出较强的抑制活性。
试验例2.生化hERG抑制试验
试验系统：
试剂盒：PredictorTM hERG Fluorescence Polarization Assay，ThermoFisher，PV5366
试验参数：
hERG浓度：1x
Tracer浓度：1nM
孵育时间：2h
BMG PHERAstar FS FP
试验步骤：
将不同浓度的本发明化合物加入到含有hERG细胞膜的微孔板中，再加入具有高hERG亲和性示踪剂Tracer。将微孔板在25℃孵育2小时后，使用多功能酶标仪检测荧光偏振(激发波长：540nm；发射波长：590/590nm)值的变化。
数据处理：
根据数据比值，计算本发明化合物在不同浓度下对hERG百分比抑制率(％)，判断化合物的半数最大抑制浓度(IC50)的范围。百分比抑制率(％)＝(1-(测试化合物的mP-30μM浓度下E4031的mP)/(实验缓冲液的mP-30μM浓度下E4031的mP))*100％，其中，E4031为抗心律失常剂，其阻断ATP敏感性钾通道；mP为荧光偏振值。
试验结果：
采用上述方法测定化合物对hERG的抑制，结果如表2中所示。
表2.hERG抑制试验结果
结论：
测试结果表明，本发明化合物与hERG亲和性低，与亲和性示踪剂Tracer竞争的IC50均＞10μM，表明化合物具有良好的心脏安全性。
试验例3：生化CYP酶抑制试验
试验系统：
P450-GloTM CYP1A2 Screening System，生产厂家：Promega，货号：V9770
P450-GloTM CYP2D6 Screening System，生产厂家：Promega，货号：P9890
P450-GloTM CYP3A4 Screening System，生产厂家：Promega，货号：V9920
酶标仪参数：
BMG PHERAstar FS Luminescent
试验步骤：
对CYP1A2的抑制：
将不同浓度的本发明的化合物加入到微孔板中，加入荧光素酶底物Luciferin-ME(100μM)、K3PO4(100μM)、CYP1A2(0.01pmol/μL)或Membrance(0.01pmol/μL)，并在室温下预孵育10min。随后加入NADPH再生系统，并在室温下反应30min。最后加入等体积的检测缓冲液，并在室温下孵育20min，然后进行化学发光检测。
对CYP2D6的抑制：
将不同浓度的本发明的化合物加入到微孔板中，加入荧光素酶底物Luciferin-MEEGE(30μM)、K3PO4(100mM)、CYP2D6(5nM)或Membrance(5nM)，并在室温下预孵育10min。随后加入NADPH再生系统，并在温度为37℃下反应30min。最后加入等体积的检测缓冲液，并在温度为25℃下孵育20min，然后进行化学发光检测。
对CYP3A4的抑制：
将不同浓度的本发明的化合物加入到微孔板中，加入荧光素酶底物Luciferin-IPA(3μM)、K3PO4(100mM)、CYP3A4(2nM)或Membrance(2nM)，并在室温下预孵育10min。随后加入NADPH再生系统，并在室温下反应30min。最后加入等体积的检测缓冲液，并在室温下孵育20min，然后进行化学发光检测。
数据处理：
以溶媒组(DMSO)为阴性对照、Membrance(无活性的酶)为空白对照计算抑制率。抑制率(％)＝(1-(各化合物浓度组信号-空白组信号)/(阴性对照信号-空白组信号))*100％。根据不同浓度下化合物对P450酶的抑制率，估算化合物的半数抑制浓度(IC50)或范围。IC50＝X*(1-百分比抑制率(％))/百分比抑制率(％)，其中X为化合物测试浓度。
试验结果：
按照上述方法测定化合物对三种CYPs的抑制，结果表中所示。
表3.CYPs抑制试验结果
结论：
上述结果表明，化合物对3种主要CYP亚型均无明显抑制作用，表明其潜在的药物相互作用可能性相对较低，具有较好的成药性质。
Claims (14)
1.式(VI)的化合物或其药学上可接受的盐：
其中：
R1选自-COOH、-C(＝O)-OC1-3烷基、-C(＝O)NH2、-C(＝O)NH-C1-3烷基、-NH2、-NH-C(＝O)-OC1-3烷基、-CN、-C1-3烷基、四唑基，其中所述烷基任选地被一个或多个-OH取代；
R2在每次出现时各自独立地选自卤素、-OC1-3烷基、-C1-3烷基、卤代C1-3烷基、-NH2和-NH(C1-3烷基)；
R3选自-H、卤素、-CN、和-C1-6烷基，其中所述烷基任选地被一个或多个选自-OH取代；
R5a和R5b各自独立地选自-CH3和-NH2；或者R5a和R5b与它们连接的原子一起形成氧杂环戊烷，其中所述氧杂环戊烷任选地被一个或两个选自-CH3和-NH2的取代基取代；
n为0、1、2、3或4。
2.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，
3.根据权利要求1或2所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，
R1选自-CN、-CH2OH、-COOH、-C(＝O)OCH2CH3、-C(＝O)NH2、-NH2、-NHC(＝O)OCH3、-C(＝O)NHCH3和四唑基。
4.根据权利要求1或2所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，
R2在每次出现时各自独立地选自-F、-Cl、-Br、-CH3、-CF3、-OCH3和-NHCH3。
5.根据权利要求1或2所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，
R3选自-H、-F、-Cl、-CN和-CH2OH。
6.根据权利要求1或2所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，n为1、2或3。
7.根据权利要求1或2所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述化合物选自：
8.一种药物组合物，其包含权利要求1-7中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，以及一种或多种药学上可接受的载体。
9.权利要求1-7中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐或者权利要求8所述的药物组合物在制备用于预防或治疗SHP2相关疾病的药物中的用途。
10.用于制备式(I)的化合物的方法
所述方法包括以下步骤：
(1)使式S-1的化合物与式S-2的化合物反应以生成式IM-1的化合物：
所述反应在碱和/或金属催化剂的存在下进行，所述碱为无机碱，所述金属催化剂为金属钯催化剂；
(2)使式IM-1的化合物与式S-3的化合物反应以生成式IM-2的化合物：
所述反应在金属催化剂的存在下进行，所述金属催化剂为金属钯催化剂；
其中：
W1、W2、W3、R1、R2、R3、R5a、R5b和n如权利要求1-7中任一项所定义；
LG1和LG2各自独立地表示离去基团，其选自卤素和任选被卤素取代的C1-6烷基磺酸酯基；
Rc和Rd各自独立地表示-H或离去基团，所述离去基团选自卤素、硼酸基、硼酸酯基或任选地被卤素取代的C1-6烷基磺酸酯基；
R1f与R1相同；并且
R3f与R3相同。
11.权利要求10所述的制备式(I)的化合物的方法，其中，步骤(1)中，所述无机碱为磷酸钾。
12.权利要求10所述的制备式(I)的化合物的方法，其中，步骤(1)或步骤(2)中所述金属钯催化剂选自四(三苯基膦)钯、醋酸钯、三(二亚苄基丙酮)二钯、[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯、1,2-双(二苯基膦乙烷)二氯化钯和双(三苯基膦)二氯化钯。
13.权利要求10所述的制备式(I)的化合物的方法，其中，LG1和LG2各自独立地选自碘、氯和三氟甲磺酸酯基。
14.权利要求10所述的制备式(I)的化合物的方法，其中，Rc为硼酸基或硼酸酯基，且Rd为-H、硼酸基或硼酸酯基。
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