CN114099772A - 一种用于面部塑形填充的材料及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于医用材料技术领域,具体涉及一种用于面部塑形填充的材料及其制备方法,由以下重量份数的原料制成:左旋聚乳酸微球20‑300份,外泌体100‑960份,交联葡聚糖微球5‑200份,透明质酸钠0.2‑30份,生理盐水10‑150份;可以解决外泌体存储及运输导致活性降低问题,植入皮肤中可实现即时填充与长久填充效果,组织相容性更好,维持时间更长,效果更自然,术后反应轻微,可达到持久的填充效果。
Description
技术领域
本发明属于医用材料技术领域,具体涉及一种用于面部塑形填充的材料及其制备方法。
背景技术
随着岁月流逝,皮肤会自然松弛和生成皱纹,尤其是面部轮廓性衰老会日渐加重,包括可见的皮肤皱纹、深鼻唇沟、皱眉纹、木偶纹、颊接合纹、口围皱纹、颞部塌陷等。同样,因为先天或者外伤导致的鼻梁塌陷以及眉骨、下颏不端正等都给人们带来了烦恼痛苦。美丽是人类永恒的话题和追求的目标,如何有效延缓皮肤衰老,美化容颜仍是人们不断探求和解决的问题。
注射美容是非手术整形美容的一种,利用注射的方法将生物材料或人工合成的生物相容性好的材料注射入真皮层或皮下,通过不同的作用机理从而达到减少皮肤褶皱或塑性的一类整形美容的方法。这类面部填充剂根据作用机理分为以下两类:一类面部填充剂用于直接增大组织体积从而达到扩增组织的目的;另一类面部填充剂在注射后一定时间内引起自体的免疫反应,从而长期诱导自体胶原蛋白的产生。但是现有的面部填充剂中,很多人注射后出现面部僵硬,面部填充过多或效果不明显,维持时间较短,术后反应强烈等情况。例如使用牛胶原作为填充剂进行直接填充时,需要预先做致敏检测,并不适用于所有人,且直接注射异体胶原在术后可能会出现面部僵硬、表情不自然的情况;使用透明质酸进行填充时,可能会出现栓塞等情况,严重者会导致失明,且透明质酸维持时间较短。单独使用聚乳酸等刺激自体成纤维细胞形成胶原的填充剂,在短时间内没有很好的填充效果,且效果因人而异,相同的注射量可能导致与预期效果差别过大,且注射量过大后可能会导致强烈的炎症反应,形成组织囊肿。
自体脂肪填充的自体脂肪是指从人体自身某些部位吸取多余的皮下脂肪细胞,然后将吸出的混合物通过净化处理、注入药物得到复合脂肪颗粒,选择完整的颗粒脂肪细胞通过注射的方式再移植到自己需要进行脂肪填充的部位。自体脂肪填充因其供区损伤小、易于获得、组织相容性好、移植后无排斥反应且感染几率小、移植成活后修复区域形态自然、无异物感而被广泛应用于面部填充手术,但脂肪填充容易出现脂肪结节、脂肪液化、矫正过度或矫正不足、脂肪栓塞、脂肪生存率低等缺点,因此脂肪干细胞填充技术随之被更多消费者喜爱。移植后的脂肪干细胞填充能力强、具有局部血液重建能力、乏氧耐受能力强、可生成VEGF等细胞因子诱导血管分化,并加速受区的创面愈合。但移植后脂肪干细胞的分化方向并不受控制,且成活率较低,无法成活的脂肪有一部分会随着代谢排出体外,剩余的有可能发生液化,患者的皮肤会凹陷,还有可能有流液、流脓并会感到疼痛、局部红肿。
综上所述,目前面部填充材料均存在缺陷,性能更好的面部填充材料仍需要进行深入研究。
发明内容
为了解决上述技术问题,本发明提供了一种用于面部塑形填充的材料及其制备方法。
本发明具体是通过如下技术方案来实现的。
本发明的第一个目的是提供一种用于面部塑形填充的材料,由以下重量份数的原料制成:左旋聚乳酸微球20-300份,外泌体100-960份,交联葡聚糖微球5-200份,透明质酸钠0.2-30份,生理盐水10-150份。
优选的,所述左旋聚乳酸微球直径为30-60um。
优选的,所述外泌体为干细胞来源。
优选的,所述交联葡聚糖微球的分子量为1万-500万。
优选的,所述生理盐水的浓度为0.8wt%-1.0wt%。
优选的,所述透明质酸钠的分子量为1万-300万。
本发明的第二个目的是提供上述用于面部塑形填充的材料的制备方法,按照以下步骤制备:
(1)分别称取以下重量份的原料:左旋聚乳酸微球20-300份,外泌体100-960份,交联葡聚糖微球5-200份,透明质酸钠0.2-30份,生理盐水10-150份;
(2)将交联葡聚糖微球配成水溶液,之后加入透明质酸钠和左旋聚乳酸微球,搅拌均匀,并灭菌,制备混合物;
(3)在步骤(2)混合物中加入外泌体和生理盐水,混合均匀后,即制得所述用于面部塑形填充的材料。
优选的,步骤(2)中,搅拌条件下,将交联葡聚糖微球加入蒸馏水中,搅拌1-3h,配成水溶液,所述交联葡聚糖微球:水的用量比为1g:5-20mL。
优选的,步骤(2)中,在100-180℃下灭菌5-60min。
优选的,整个制备过程全程应保证无菌环境。
本发明与现有技术相比具有如下有益效果:
1、本发明提供的用于面部塑性填充材料,由左旋聚乳酸、外泌体、交联葡聚糖、透明质酸钠、注射用生理盐水制成,植入皮肤中可实现即时填充与长久填充效果,组织相容性更好,维持时间更长,效果更自然,术后反应轻微,可达到持久的填充效果;
2、上述各成分存在协同作用,具体为:
外泌体富含多种胞外基质蛋白、mRNA信使核糖核酸和多重生长因子,移植后调控脂肪干细胞/间充质干细胞及成纤维细胞等增殖、分化,可诱导脂肪干细胞的成脂分化,进而保证填充效果的持久且自然;外泌体内含VEGF等细胞因子诱导血管分化,具有局部血液重建能力、为成纤维细胞增殖及胶原蛋白的生成提供营养并加速受区的创面愈合;外泌体无免疫风险,组织相容性好;交联葡聚糖、左旋聚乳酸作为主要填充材料,组织相容性好,无细胞毒性,可被完全降解,材料性质柔软,触感与人体类似,交联葡聚糖和左旋聚乳酸微球状结构保证手术风险低;由于交联葡聚糖带有富孔状三维结构,使富有微孔的交联葡聚糖和左旋聚乳酸可与组织液充分结合,使外泌体的生存环境与之前保持一致,可以解决外泌体存储及运输导致活性降低问题;同时,交联葡聚糖和左旋聚乳酸的微孔结构可吸附更多外泌体,植入皮肤内可起到缓释作用;填充材料被注入体内作为植入物,逐渐被机体自身的结缔组织包围,交联葡聚糖和左旋聚乳酸微球能促进微球间成纤维细胞产生胶原蛋白,进而稳定植入物,达到持久的填充效果;透明质酸钠对凝胶起到润滑,使得注射填充剂时,针头的阻力更小,造成的皮肤创面也更小;同时透明质酸钠可以保证外泌体在使用过程中活性;生理盐水调节细胞内外与组织之间的渗透压,可以保证外泌体的活性,也避免填充材料植入皮肤中因为渗透压而出现的水肿、热、痛等副作用。
具体实施方式
为了使本领域技术人员更好地理解本发明的技术方案能予以实施,下面结合具体实施例和数据对本发明作进一步说明,但所举实施例不作为对本发明的限定。
下述各实施例中所述实验方法和检测方法,如无特殊说明,均为常规方法;所述试剂和材料,如无特殊说明,均可在市场上购买得到。
本发明提供一种用于面部塑形填充的材料,由以下重量份数的原料制成:左旋聚乳酸微球20-300份,外泌体100-960份,交联葡聚糖微球5-200份,透明质酸钠0.2-30份,生理盐水10-150份。
其中,左旋聚乳酸微球直径为30-60um,外泌体为干细胞来源,交联葡聚糖微球的分子量为1万-500万,生理盐水的浓度为0.8wt%-1.0wt%,为注射用生理盐水,透明质酸钠的分子量为1万-300万,
上述用于面部塑形填充的材料的制备方法,按照以下步骤制备:
(1)将5-200份交联葡聚糖边搅拌边缓慢的加入适量体积(1g:5-20mL)的蒸馏水中,搅拌1-3h;
(2)将步骤(1)得到的混合物中加入0.2-30份透明质酸钠及20-300份左旋聚乳酸微球,搅拌1-3h,在100-180℃下灭菌5-60min;
(3)将步骤(2)得到的混合物加入100-960份外泌体和10-150份份注射用生理盐水混合均匀后即得到面部填充剂。
整个制备过程全程应保证无菌环境。
下面通过实施例对上述内容进行具体说明。
实施例1
一种用于面部塑形填充的材料,由以下重量份数的原料制成:左旋聚乳酸微球20份,外泌体100份,交联葡聚糖微球5份,透明质酸钠0.2份,注射用生理盐水10份;左旋聚乳酸微球直径为30um;外泌体为干细胞来源;交联葡聚糖微球的分子量为1万;注射用生理盐水的浓度为0.8wt%;透明质酸钠的分子量为1万;
上述用于面部塑形填充的材料的制备方法,按照以下步骤制备:
(1)将5份交联葡聚糖边搅拌边缓慢的加入的蒸馏水中(两者用量比1g:5mL),搅拌1h;
(2)将步骤(1)得到的混合物中加入0.2份透明质酸钠及20份左旋聚乳酸微球,搅拌1h,在100℃下灭菌5min;
(3)将步骤(2)得到的混合物加入100份外泌体和10份注射用生理盐水混合均匀后即得到面部填充剂。
实施例2
一种用于面部塑形填充的材料,由以下重量份数的原料制成:左旋聚乳酸微球300份,外泌体960份,交联葡聚糖微球200份,透明质酸钠30份,注射用生理盐水150份;左旋聚乳酸微球直径为60um;外泌体为干细胞来源;交联葡聚糖微球的分子量为500万;注射用生理盐水的浓度为1.0wt%;透明质酸钠的分子量为300万;
上述用于面部塑形填充的材料的制备方法,按照以下步骤制备:
(1)将200份交联葡聚糖边搅拌边缓慢的加入蒸馏水(两者用量比1g:20mL)中,搅拌3h;
(2)将步骤(1)得到的混合物中加入30份透明质酸钠及300份左旋聚乳酸微球,搅拌3h,在180℃下灭菌60min;
(3)将步骤(2)得到的混合物加入960份外泌体和150份注射用生理盐水混合均匀后即得到面部填充剂。
实施例3
一种用于面部塑形填充的材料,由以下重量份数的原料制成:左旋聚乳酸微球150份,外泌体500份,交联葡聚糖微球100份,透明质酸钠15份,注射用生理盐水75份;左旋聚乳酸微球直径为50um;外泌体为干细胞来源;交联葡聚糖微球的分子量为100万;注射用生理盐水的浓度为0.9wt%;透明质酸钠的分子量为100万;
上述用于面部塑形填充的材料的制备方法,按照以下步骤制备:
(1)将100份交联葡聚糖边搅拌边缓慢的加入蒸馏水(两者用量比1g:10mL)中,搅拌2h;
(2)将步骤(1)得到的混合物中加入15份透明质酸钠及150份左旋聚乳酸微球,搅拌2h,在150℃下灭菌30min;
(3)将步骤(2)得到的混合物加入500份外泌体和75份注射用生理盐水混合均匀后即得到面部填充剂。
对比例1
与实施例1的区别在于不含交联葡聚糖微球、左旋聚乳酸微球。
对比例2
与实施例1的区别在于不含透明质酸钠。
对比例3
与实施例1的区别在于不含生理盐水。
下面对上述材料进行相关性能检测。
试验例1
将鼠抗人抗CD63单克隆抗体用10mmol/L PBS缓冲液稀释到0.22mg/ml,通过微量蛋白打印仪GeSimNano-PlotterTM 2.1打印到蛋白芯片基片上,每个点重复打印4次,最终获得直径约400um的圆形斑点,室温孵育12h即制得CD63抗体芯片。
分别在第0、1、6、12月取出保存的实施例3产品,使用制得的CD63抗体芯片检测产品中外泌体CD63蛋白免疫活性,用生物芯片阅读仪扫描后获得16位灰度图像。用MidaScanSoftware软件分析该图像。每个点的荧光强度通过所选区域总荧光强度除以面积获得。CD63蛋白活性与所获图像上的荧光强度正相关。产品中外泌体CD63蛋白的检测结果如表1所示。
表1不同保存时间产品中外泌体CD63蛋白检测荧光强度
由表1可以看出,产品对外泌体的活性具有保护作用,在12个月后仍具有较高活性。
分别在第0、1、6、12月取出保存在25℃的实施例1-3和对比例1-3产品,使用制得的CD63抗体芯片检测产品中外泌体CD63蛋白免疫活性,产品中外泌体CD63蛋白的检测结果如表2所示。
表2实施例1-3和对比例1-3产品中外泌体储存荧光强度
由表2试验可知,与对比例1-3相比,本发明的实施例1到实施例3对外泌体具有很好的常温保存活性,意味着填充效果的持久性良好。
试验例2
推挤力测试:用1ml注射器抽取本发明的实施例1-3材料,加30G针头,采用微机控制电子万用试验机检测该填充材料的推挤力,根据检测结果可知,推挤力平均值在3N-8N。由此可知,采用本实施例的填充材料可实现顺利推挤。
试验例3
细胞增值率测试
MTT法测试过程:
①浸提介质:以体积比计算,89%MEN培养基,10%胎牛血清和1%的青霉素-链霉素溶液;
②试验样品:取试验样品(实施例1-3和对比例1-3制备得到的产品)各两份,于无菌条件下制备浸提液,每份样品中加入6ml浸提介质复溶,再按试验样品原重量以0.3g/ml为浸提比例,向每份样品中加入2.0ml浸提介质,37℃,60rmp震荡提取24小时后,取浸提液进行试验。
③空白对照:取10ml浸提介质于37℃,60rmp震荡提取24小时。
④细胞系选择:小鼠成纤维细胞(NCTC Clone929,L cell,L-929),购于中国科学院典型培养物保藏委员会细胞库。
⑤细胞培养液:使用培养基将小鼠成纤维细胞培养于37℃,5%CO2,饱和湿度条件下。当细胞生产至趋近融合,使用胰蛋白酶消化,收集细胞并调整细胞数量6×105cell/ml进行试验。
⑥样品试验:将上述细胞培养液加入96孔板,每孔100ul,共计6×104个细胞/孔,37℃,5%CO2,饱和湿度条件下,培养24小时。培养结束后,提取细胞,加入2浸提液和3空白对照,每组5孔,培养24小时,取出细胞培养板,弃去培养基,每孔中加入MTT染色剂(VETECTM,V900888-1G)50ul,继续培养2小时。
⑦培养结束后,弃去培养板内液体,每孔加入100ul异丙醇,放入酶标仪,570nm读数。通过空白对照组OD值计算细胞相对增值率,空白对照组记为100%。
经MTT法检测实施例1-3和对比例1-3细胞增殖率见表3。
表3不同样品细胞增值率
表3试验结果表明,按照本发明制备的产品,细胞增值率均比少组分的高,说明本发明的填充材料具有很好的细胞增殖活性,能起到很好的填充有效性及持久性。
应用实施例1
试验动物试验
实验材料
新西兰大白兔,体重2.0kg-2.5kg,年龄10-12个月。
试验注射品:实施例1制备的填充材料。
空白对照:生理盐水
试验方法:取10只大白兔,平均分为2组,各组分别使用试验组所用的注射产品和空白对照组所用的注射产品进行试验。将大白兔剃除脊柱两侧各直径为8cm区域兔毛,每只注入2mL,注射后观察每一只兔子的一般状态,食欲以及体重变化等。
注射后,大白兔均存活,饮食及健康均无不良现象;注射产品组兔子体表无红肿、无渗出、无结节;前三天皮肤鼓起,表面光滑,七天后体液吸收后,鼓起略微减少。
注射对照组所用的注射产品的兔子均存活,食欲正常,状态良好,体重变化不大,无不良现象发生。兔子体表无红肿、无渗出、无结节;前三天皮肤鼓起,表面光滑,七天后体液吸收后,鼓起减少,回复注射前状态。
通过试验表明,实施例1制备的填充材料作为皮肤填充剂具有较好的组织相容性,由于产品中含有透明质酸钠,在体内2-3天会吸收降解,填充鼓起3天后会有所降低,使注射部位看起来更自然。
应用实施例2
皱纹改善试验
试验组:以6名健康的志愿者为试验对象,考察实施例1至实施例3制备的填充材料在试验条件下对皮肤皱纹的影响,分别将2mL实施例1至实施例3制备的填充材料注射到试验对象法令纹上,并肉眼观察注射部位在注射前、注射48h、7天、1个月、3个月、6个月及12个月后的皱纹情况。皱纹评分为1-9分,9分为皱纹等级最高,1分为皱纹等级最低,无皱纹;
对照组:以2名健康的志愿者为试验对象,考察对照组所用的注射产品在试验条件下对皮肤皱纹的影响,对照组所用的注射产品为透明质酸钠凝胶(瑞蓝2),将2mL对照组所用的注射产品对照组所用的注射产品注射到法令纹上,并肉眼观察注射部位在注射前、注射48h、7天、1个月、3个月、6个月及12个月后的皱纹情况。皱纹评分为1-9分,9分为皱纹等级最高,1分为皱纹等级最低,无皱纹。皱纹改善情况见表4。
表4皱纹改善记录表
试验 | 48h | 7天 | 1个月 | 3个月 | 6个月 | 12个月 |
实施例1 | 1 | 1 | 2 | 2 | 4 | 5 |
实施例2 | 1 | 1 | 2 | 2 | 5 | 6 |
实施例3 | 1 | 1 | 2 | 2 | 4 | 5 |
对照组 | 1 | 4 | 7 | 7 | 8 | 9 |
从表4可知,注射实施例1至实施例3制备的填充材料后,注射部位的皱纹情况明显减少了,且持续时间长达12月,表明实施例一至实施例三制备的填充材料能够减少皱纹,柔化肌肤,使肌肤焕发活力,保持年轻态。
上述实施方式仅为本发明的优选实施方式,不能以此来限定本发明保护的范围,本领域的技术人员在本发明的基础上所做的任何非实质性的变化及替换均属于本发明所要求保护的范围。
显然,本领域的技术人员可以对本发明进行各种改动和变型而不脱离本发明的精神和范围。这样,倘若本发明的这些修改和变型属于本发明权利要求及其等同技术的范围之内也意图包含这些改动和变型在内。
Claims (10)
1.一种用于面部塑形填充的材料,其特征在于,由以下重量份数的原料制成:左旋聚乳酸微球20-300份,外泌体100-960份,交联葡聚糖微球5-200份,透明质酸钠0.2-30份,生理盐水10-150份。
2.根据权利要求1所述的用于面部塑形填充的材料,其特征在于,所述左旋聚乳酸微球直径为30-60um。
3.根据权利要求1所述的用于面部塑形填充的材料,其特征在于,所述外泌体为干细胞来源。
4.根据权利要求1所述的用于面部塑形填充的材料,其特征在于,所述交联葡聚糖微球的分子量为1万-500万。
5.根据权利要求1所述的用于面部塑形填充的材料,其特征在于,所述生理盐水的浓度为0.8wt%-1.0wt%。
6.根据权利要求1所述的用于面部塑形填充的材料,其特征在于,所述透明质酸钠的分子量为1万-300万。
7.根据权利要求1-6任一项所述的用于面部塑形填充的材料的制备方法,其特征在于,按照以下步骤制备:
(1)分别称取以下重量份的原料:左旋聚乳酸微球20-300份,外泌体100-960份,交联葡聚糖微球5-200份,透明质酸钠0.2-30份,生理盐水10-150份;
(2)将交联葡聚糖微球配成水溶液,之后加入透明质酸钠和左旋聚乳酸微球,搅拌均匀,并灭菌,制备混合物;
(3)在步骤(2)混合物中加入外泌体和生理盐水,混合均匀后,即制得所述用于面部塑形填充的材料。
8.根据权利要求7所述的用于面部塑形填充的材料的制备方法,其特征在于,步骤(2)中,搅拌条件下,将交联葡聚糖微球加入蒸馏水中,搅拌1-3h,配成水溶液,所述交联葡聚糖微球:水的用量比为1g:5-20mL。
9.根据权利要求7所述的用于面部塑形填充的材料的制备方法,其特征在于,步骤(2)中,在100-180℃下灭菌5-60min。
10.根据权利要求7所述的用于面部塑形填充的材料的制备方法,其特征在于,整个制备过程全程应保证无菌环境。
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2021
- 2021-11-29 CN CN202111434225.4A patent/CN114099772A/zh active Pending
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