CN114072145A

CN114072145A - 特异性识别假单胞菌pcrv的抗体及其用途

Info

Publication number: CN114072145A
Application number: CN202180001864.3A
Authority: CN
Inventors: 于茂荣; 李忠; 王超
Original assignee: Staidson Beijing Biopharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Beijing Solobio Genetechnology Co Ltd
Priority date: 2020-06-01
Filing date: 2021-05-28
Publication date: 2022-02-18
Also published as: TW202204399A; WO2021244421A1; CN114072145A9

Abstract

本发明提供了特异性识别假单胞菌PcrV的抗体，包括其抗原结合片段，还提供了其制备方法与用途。

Description

特异性识别假单胞菌PCRV的抗体及其用途

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技术领域

本申请涉及特异性识别铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa，PA) PcrV的抗体，及其制备方法和用途，包括用其治疗和预防假单胞菌感染的方法。

背景技术

铜绿假单胞菌是一种广泛存在于自然界的专性需氧性革兰氏阴性杆菌。尽管其致病性通常很低，但它却是一种会引起机会性感染的病原菌，这种感染经常发生在患有癌症、糖尿病、免疫缺陷病等各种基础病和服用具有免疫抑制作用药物的患者中。在有皮肤黏膜破裂的患者中容易发生铜绿假单胞菌感染，患有慢性结构性肺病(如慢性阻塞性肺病或囊性纤维化)的患者也有相当大的感染风险。铜绿假单胞菌会引起肺炎、尿路感染、败血症等病症，并且常常导致严重的后果。高达10％的医院内感染由铜绿假单胞菌引起，铜绿假单胞菌菌血症患者的死亡率接近40％。临床上，铜绿假单胞菌感染被认为是最难治疗的感染之一，不仅因为铜绿假单胞菌本身对现有的抗生素敏感性低，还因为其很容易对多种抗生素产生耐药性。因此，开发抗生素的策略在对抗铜绿假单胞菌感染方面的优势有限。

铜绿假单胞菌是医院获得性感染的主要原因之一，特别是机械通气的患者，而且它是导致囊性纤维化患者死亡的主要原因。铜绿假单胞菌III分泌系统 (T3SS)是与严重疾病相关的主要毒力因子，其可将细菌毒素直接注入宿主细胞的细胞质中。铜绿假单胞菌通过III型外毒素分泌系统(T3SS)将毒素注入真核细胞来发挥其高细胞毒性。PcrV是构成III型外毒素分泌系统的一个蛋白，由294个残基(NCBI登录号：AAC45935，序列号：80)组成，并且编码所述蛋白的操纵子序列对公众是公开的(US 6,551,795,Yahr,T.L.et al.,J. Bacteriol.,1997,vol.179,p.7165)。PcrV蛋白位于T3SS注射体复合物的顶

本文提及的所有出版物、专利、专利申请和已公开的专利申请中披露的内容，以引用方式全部并入本文中。

申请概述

本申请提供一种分离的能够特异性地与假单胞菌PcrV表位结合的抗PcrV 抗体，及其用于治疗假单胞菌感染的方法。

在一方面，本申请提供了一种分离的抗PcrV抗体，其中抗PcrV抗体包含重链可变域(V_H)，所述V_H包括：一个重链互补决定区(HC-CDR)1，包含 SYWMH(SEQ ID NO:1)，或其包含至多3个氨基酸取代的变体；一个HC- CDR2，包含RINEX₁EX₂SX₃SYADSVKG(SEQ ID NO:50)，或其包含至多3个氨基酸取代的变体，其中X₁为D、T、N、L、I、S、V、A或H，X₂为S、T、 N、D、G或R，X₃为I或T；和一个HC-CDR3，包含DGX₁X₂X₃X₄X₅DX₆ (SEQ ID NO:51)，或其包含至多3个氨基酸取代的变体，其中X₁为P、Y或 A，X₂为Y或W，X₃为D、T或N，X₄为S、T或A，X₅为L、F或M，X₆为 I、V、A、S、L或W；以及轻链可变域(V_L)，所述V_L包括：一个轻链互补决定区(LC-CDR)1，包含RASQX₁VX₂X₃NLA(SEQ ID NO:47)，或其包含至多3 个氨基酸取代的变体，其中X₁为S、N、D或G，X₂为S、K、N、R或T，X₃为N、S、D或G；一个LC-CDR2，包含X₁ASSRAT(SEQ ID NO:85)，或其包含至多3个氨基酸取代的变体，其中X₁为D、N、H、A或S；和一个LC- CDR3，包含QQYGX₁X₂PX₃T(SEQID NO:86)，或其包含至多3个氨基酸取代的变体，其中X₁为S、A、T、E、D、H、N、Q、G、L、Y、M、R或V，X₂为S、Q、V、E、T、D、M、Y、G、H、L、N、A、F或P，X₃为I、L或 V。

在一些实施例中，提供了一种分离的抗PcrV抗体，所述分离的抗PcrV抗体包括重链可变域(V_H)，所述V_H包含：一个HC-CDR1，包含SYWMH(SEQ ID NO:1)，或其包含至多3个氨基酸取代的变体；一个HC-CDR2，包含 RINEX1EX2SISYADSVKG(SEQ ID NO:45)，或其包含至多3个氨基酸取代的变体，其中X1为D、N、I、L或V，X2为S、T、R、G或N；和一个HC- CDR3，包括DGPYDX1X2DI(SEQ ID NO:46)，或其包含至多3个氨基酸取代的变体，其中X1为S、A或T，X2为F或L；以及V_L，所述V_L包括：一个 LC-CDR1，包含RASQX1VX2X3NLA(SEQ ID NO:47)，或其包含至多3个氨基酸取代的变体，其中X1为N、G、D或S，X2为K、R、S、N或T，X3 为N、G、S或D；一个LC-CDR2，包含X1ASSRAT(SEQ ID NO:48)，或其包含至多3个氨基酸取代的变体，其中X1为D、N、H或A；和一个LC- CDR3，包含QQYGX1X2PX3T(SEQ ID NO:49)，或其包含至多3个氨基酸取代的变体，其中X1为S、T、E、H、N、A、D、M或L，X2为S、Q、E、 T、D、G、H、L、N、V或Y，和X3为I、L或V。

在一些实施例中，提供了一种分离的抗PcrV抗体，其中抗PcrV抗体与假单胞菌PcrV结合的Kd值约为0.1pM至1nM。在一些实施例中，提供了一种分离的抗PcrV抗体，包括V_H，其包含具有SEQ ID NOs:52-64中任一氨基酸序列的V_H中的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及V_L，其包含具有SEQ ID NOs:65-79中任一氨基酸序列的V_L中的LC-CDR1、LC-CDR2和LC- CDR3。

在一些实施例中，如上所述任一种分离的抗PcrV抗体，所述分离的抗 PcrV抗体包括：V_H，所述V_H包括：一个HC-CDR1，包含氨基酸序列SEQ ID NO:1或其包含至多3个氨基酸取代的变体；一个HC-CDR2，包含SEQ ID NOs:2-9中任一氨基酸序列或其包含至多3个氨基酸取代的变体；和一个HC- CDR3，包含SEQ ID NOs:10-13中任一氨基酸序列或其包含至多3个氨基酸取代的变体；以及V_L，所述V_L包括：一个LC-CDR1，包含SEQ ID NOs:14-25 中任一氨基酸序列或其包含至多3个氨基酸取代的变体；一个LC-CDR2，包含 SEQ ID NOs:26-29中任一氨基酸序列或其包含至多3个氨基酸取代的变体；一个LC-CDR3，包含SEQ ID NOs:30-44中任一氨基酸序列或其包含至多3个氨基酸取代的变体。

在一些实施例中，如上所述任一种分离的抗PcrV抗体，所述分离的抗 PcrV抗体包括：(i)V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:1的 HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:2的HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:10的HC-CDR3；或者在HC-CDRs中包含至多5个氨基酸取代的V_H变体；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ IDNO:14 的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:26的LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:30的LC-CDR3，或者在LC-CDRs中包含至多5个氨基酸取代的V_L变体；(ii)V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO: 1的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:2的HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:11的HC-CDR3；或者在HC-CDRs中包含至多5个氨基酸取代的V_H变体；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:14的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:26的LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:30的LC-CDR3，或者在LC-CDRs中包含至多 5个氨基酸取代的V_L变体；(iii)V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:1的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:3的HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:11的HC-CDR3；或者在HC-CDRs中包含至多 5个氨基酸取代的V_H变体；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:15的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:27的LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:31的LC-CDR3，或者在LC-CDRs中包含至多5个氨基酸取代的V_L变体；(iv)V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列 SEQ ID NO:1的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:7的HC- CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:13的HC-CDR3；或者在HC-CDRs 中包含至多5个氨基酸取代的V_H变体；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:23的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:27的 LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:39的LC-CDR3，或者在LC- CDRs中包含至多5个氨基酸取代的V_L变体；(v)V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:1的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:4的 HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:11的HC-CDR3；或者在HC- CDRs中包含至多5个氨基酸取代的V_H变体；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:16的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQID NO: 28的LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:32的LC-CDR3，或者在 LC-CDRs中包含至多5个氨基酸取代的V_L变体；(vi)V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:1的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO: 5的HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ IDNO:11的HC-CDR3；或者在 HC-CDRs中包含至多5个氨基酸取代的V_H变体；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:17的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:27的LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:33的LC-CDR3，或者在LC-CDRs中包含至多5个氨基酸取代的V_L变体；(vii)V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:1的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列 SEQ ID NO:2的HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:11的HC-CDR3；或者在HC-CDRs中包含至多5个氨基酸取代的V_H变体；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:18的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:28的LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:34的 LC-CDR3，或者在LC-CDRs中包含至多5个氨基酸取代的V_L变体；(viii) V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:1的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:9的HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO: 13的HC-CDR3；或者在HC-CDRs中包含至多5个氨基酸取代的V_H变体；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:17的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:27的LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:43的LC-CDR3，或者在LC-CDRs中包含至多5个氨基酸取代的V_L变体；(ix)V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:1的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:2的HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:11的HC-CDR3；或者在HC-CDRs中包含至多5个氨基酸取代的V_H变体；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ IDNO:19的LC- CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:28的LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:35的LC-CDR3，或者在LC-CDRs中包含至多5个氨基酸取代的V_L变体；(x)V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:1的 HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:6的HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:11的HC-CDR3；或者在HC-CDRs中包含至多5个氨基酸取代的V_H变体；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:20 的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:27的LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:36的LC-CDR3，或者在LC-CDRs中包含至多5个氨基酸取代的V_L变体；(xi)V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO: 1的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:4的HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:11的HC-CDR3；或者在HC-CDRs中包含至多5个氨基酸取代的V_H变体；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:21的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:28的LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:37的LC-CDR3，或者在LC-CDRs中包含至多 5个氨基酸取代的V_L变体；(xii)V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:1的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:2的HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:11的HC-CDR3；或者在HC-CDRs中包含至多 5个氨基酸取代的V_H变体；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:22的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:28的LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:38的LC-CDR3，或者在LC-CDRs中包含至多5个氨基酸取代的V_L变体；(xiii)V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQID NO:1的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:7的HC- CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:11的HC-CDR3；或者在HC-CDRs 中包含至多5个氨基酸取代的V_H变体；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:23的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ IDNO:27的 LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:39的LC-CDR3，或者在LC- CDRs中包含至多5个氨基酸取代的V_L变体；(xiv)V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:1的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:8 的HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ IDNO:11的HC-CDR3；或者在 HC-CDRs中包含至多5个氨基酸取代的V_H变体；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:21的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:28的LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:40的LC-CDR3，或者在LC-CDRs中包含至多5个氨基酸取代的V_L变体；(xv)V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:1的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列 SEQ ID NO:6的HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:11的HC-CDR3；或者在HC-CDRs中包含至多5个氨基酸取代的V_H变体；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:24的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:28的LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:41的 LC-CDR3，或者在LC-CDRs中包含至多5个氨基酸取代的V_L变体；(xvi) V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:1的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:9的HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO: 11的HC-CDR3；或者在HC-CDRs中包含至多5个氨基酸取代的V_H变体；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:25的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:29的LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:42的LC-CDR3，或者在LC-CDRs中包含至多5个氨基酸取代的V_L变体；(xvii)V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:1的HC- CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:9的HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:11的HC-CDR3；或者在HC-CDRs中包含至多5个氨基酸取代的V_H变体；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ IDNO:17的 LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:27的LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:43的LC-CDR3，或者在LC-CDRs中包含至多5个氨基酸取代的V_L变体；(xviii)V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:1 的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ IDNO:2的HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:11的HC-CDR3；或者在HC-CDRs中包含至多5个氨基酸取代的V_H变体；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO: 17的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:27的LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ IDNO:44的LC-CDR3，或者在LC-CDRs中包含至多5个氨基酸取代的V_L变体；(xix)V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:1的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:7的HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:12的HC-CDR3；或者在HC-CDRs中包含至多5 个氨基酸取代的V_H变体；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:23的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:27的LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:39的LC-CDR3，或者在LC-CDRs中包含至多5个氨基酸取代的V_L变体；或者(xx)V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:1的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:9的HC- CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:12的HC-CDR3；或者在HC-CDRs 中包含至多5个氨基酸取代的V_H变体；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:17的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:27的 LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:43的LC-CDR3，或者在LC- CDRs中包含至多5个氨基酸取代的V_L变体。

在一些实施例中，如上所述任一种分离的抗PcrV抗体，所述分离的抗 PcrV抗体包括：V_H，所述V_H包含SEQ ID NOs:52-64中任一氨基酸序列，或包含与SEQ ID NOs:52-64中任一氨基酸序列具有至少90％序列同源性的变体序列；以及一个V_L，所述V_L包含SEQ ID NOs:65-79中任一氨基酸序列，或包含与SEQ ID NOs:65-79中任一氨基酸序列具有至少90％序列同源性的变体序列。在一些实施例中，所述分离的PcrV抗体包括：(i)包含氨基酸序列SEQ ID NO:52的V_H和包含氨基酸序列SEQ ID NO:65的V_L；(ii)包含氨基酸序列 SEQ ID NO:56的V_H和包含氨基酸序列SEQ ID NO:65的V_L；(iii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:53的V_H和一个氨基酸序列SEQ ID NO:66的V_L；(iv)包含氨基酸序列SEQ ID NO:62的V_H和包含氨基酸序列SEQ ID NO:74的V_L； (v)包含氨基酸序列SEQ ID NO:54的V_H和包含氨基酸序列SEQ IDNO:67的 V_L；(vi)包含氨基酸序列SEQ ID NO:55的V_H和包含氨基酸序列SEQ ID NO: 68的V_L；(vii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:56的V_H和包含氨基酸序列SEQ ID NO:69的V_L；(viii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:64的V_H和包含氨基酸序列SEQ ID NO:78的V_L；(ix)包含氨基酸序列SEQ ID NO:56的V_H和包含氨基酸序列SEQ ID NO:70的V_L；(x)包含氨基酸序列SEQ IDNO:57的V_H和包含氨基酸序列SEQ ID NO:71的V_L；(xi)包含氨基酸序列SEQ ID NO:54的 V_H和包含氨基酸序列SEQ ID NO:72的V_L；(xii)包含氨基酸序列SEQ ID NO: 56的V_H和包含氨基酸序列SEQ ID NO:73的V_L；(xiii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:58的V_H和包含氨基酸序列SEQ ID NO:74的V_L；(xiv)包含氨基酸序列SEQ ID NO:59的V_H和包含氨基酸序列SEQ IDNO:75的V_L；(xv)包含氨基酸序列SEQ ID NO:57的V_H和包含氨基酸序列SEQ ID NO:76的V_L；(xvi) 包含氨基酸序列SEQ ID NO:60的V_H和包含氨基酸序列SEQ ID NO:77的 V_L；(xvii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:60的V_H和包含氨基酸序列SEQ ID NO:78的V_L；(xviii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:56的V_H和包含氨基酸序列 SEQ ID NO:79的V_L；(xix)包含氨基酸序列SEQID NO:61的V_H和包含氨基酸序列SEQ ID NO:74的V_L；或者(xx)包含氨基酸序列SEQ ID NO:63的V_H和包含氨基酸序列SEQ ID NO:78的V_L。

在一些实施例中，提供例如一种分离的特异性结合PcrV的抗PcrV抗体，其与如上所述的任一种分离的抗PcrV抗体竞争性地结合PcrV。在一些实施例中，提供了一种分离的抗PcrV抗体，其与如上所述的任一种分离的抗PcrV抗体特异地结合相同的表位。

在一些实施例中，如上所述任一种分离的抗PcrV抗体，所述抗PcrV抗体包含Fc片段。在一些实施例中，所述抗PcrV抗体是全长的IgG抗体。在一些实施例中，所述抗PcrV抗体是全长的IgG1或IgG4抗体。在一些实施例中，所述抗PcrV抗体是嵌合的、全人或人源化的。在一些实施例中，所述抗PcrV 抗体是一种抗原结合片段，其选自由Fab、Fab’、F(ab)’2、Fab’-SH、单链抗体(scFv)、Fv片段、dAb、Fd或双链抗体(diabody)组成的组中。

在一些实施例中，提供了一种分离的核酸分子，所述核酸分子编码如上所述的任一抗PcrV抗体。在一些实施例中，提供了一种载体，所述载体包含如上所述的任一核酸分子。在一些实施例中，提供了一种宿主细胞，所述宿主细胞包含如上所述的任一抗PcrV抗体、任一核酸分子或任一载体。在一些实施例中，提供了一种制备抗PcrV抗体的方法，包括：a)在有效表达抗PcrV抗体的条件下培养如上所述的任一宿主细胞；并且b)在宿主细胞中获得表达的抗 PcrV抗体。

在一些实施例中，提供了一种治疗有需要的个体疾病或病症的方法，包括向所述个体施用有效量的如上所述的任一抗PcrV抗体，或者包含如上所述的任一抗PcrV抗体的药用组合物。在一些实施例中，提供了如上所述的任一抗 PcrV抗体，或者包含如上所述的任一抗PcrV抗体的药用组合物在制备用于治疗疾病或病症的药物中的用途。在一些实施例中，疾病或病症是病原菌感染。在一些实施例中，感染是一种革兰氏阴性菌感染。在一些实施例中，所述细菌是铜绿假单胞菌。在一些实施例中，疾病或病症包含由铜绿假单胞菌感染引起的一种或多种症状。在一些实施例中，症状包括发热、寒战、疲劳、肌肉和关节疼痛、关节肿胀、头痛、腹泻、皮疹、伤口流脓、菌血症、急性肺炎或腹腔内感染中的一种或多种。

在一些实施例中，如上所述任一治疗方法，所述方法进一步包括施用一种或多种治疗药物。在一些实施例中，至少一种治疗药物是抗生素。在一些实施例中，抗生素是亚胺培南、妥布霉素、环丙沙星、美罗培南或阿曲南中的一种或多种。

还提供包含如上所述的任何一种抗PcrV抗体、核酸、载体、分离的宿主细胞的药物组合物、试剂盒和制品。

附图说明

图1A-1B所示结果为先导优化抗体抑制RBC裂解的能力，与亲本PA49单克隆抗体和对照抗体V2L2-MD进行了对比。

图2A所示结果为先导优化抗体抑制A549细胞裂解的能力，图2B所示结果为先导优化抗体抑制U937细胞裂解的能力。

图3所示结果为用ELISA检测的先导优化抗体对BV粒子的交叉反应，与对照抗体V2L2-MD进行了对比。

图4A-4C所示结果为用FACS检测的优化抗体5F3、9C7或对照抗体 V2L2-MD与PcrV阴性的HEK293细胞的交叉反应。

图5A所示结果为优化抗体11E9、9C7、5F3或7H5对O1-52/66引起的 RBC裂解的抑制能力；图5B所示结果为优化抗体5B4、4A2、2A5或11E9对 O11-PA103引起的RBC裂解的抑制能力；图5C所示结果为优化抗体9C7、 5F3、7H5或对照抗体V2L2-MD对O6-57/66引起的RBC裂解的抑制能力。

图6A-6C所示结果为亲本PA49单克隆抗体与优化抗体6G12、4A2、 10D8、7H5、11E9、6G4、2A5、9C7或5F3在小鼠急性肺炎模型中预防性地提高存活率的能力。图6A所示结果为当铜绿假单胞菌(PA103菌株)接种量为 2*LD90(～1.6×10⁶CFU)时，PA49或6G12在小鼠急性肺炎模型中预防性地提高存活率的能力；图6B所示结果为当铜绿假单胞菌(PA103菌株)接种量为 1*LD90(～8×10⁵CFU)时，4A2、10D8、7H5或11E9在小鼠急性肺炎模型中预防性地提高存活率的能力；图6C所示结果为当铜绿假单胞菌(PA103菌株)接种量为2*LD90(～1.6×10⁶CFU)时，6G4、2A5、9C7或5F3在小鼠急性肺炎模型中预防性地提高存活率的能力。

图7所示结果为优化抗体4A2、9C7、11E9、5F3、7H5或2A5在小鼠急性肺炎模型中预防性地减少器官负荷的能力。

图8所示结果为当铜绿假单胞菌(57/66)接种量为4*LD90时，优化的抗 PcrV抗体6G4或10D8在小鼠腹腔内感染模型中预防性地提高存活率的能力。

图9所示结果为当铜绿假单胞菌(PA103)接种量为1*LD90时，优化的抗PcrV抗体4A2、2A5、9C7、6G12或PA49在小鼠急性肺炎模型中治疗性地提高存活率的能力。

图10所示结果为当铜绿假单胞菌(57/66)接种量为3*LD90时，优化的抗PcrV抗体9C7或4A2在单独用药或与美罗培南(MEM)联合用药时在小鼠腹腔内感染模型中预防性地提高存活率的能力。

图11A-11B所示结果分别为静脉给药量为3mg/kg或30mg/kg时，优化的抗体5F3、9C7、7H5或对照抗体V2L2-MD在大鼠中的药动学。

图12A-12B所示结果为抗PcrV抗体可变结构域序列的序列比对。标出了互补决定区(Kabat定义方式)。图12A所示结果为重链可变域序列的序列比对。图12B所示结果为轻链可变域序列的序列比对。

本申请的详细描述

本申请一方面提供抗PcrV抗体。通过scFv噬菌体库筛选、亲和力成熟以及适当设计的生物化学及生物学实验的结合，我们已经鉴定出能够结合PcrV的高效抗体分子，所述抗体可抑制RBC、A549细胞与U937细胞的裂解，也可在体内提供对铜绿假单胞菌的治疗性和预防性保护。本文给出的结果表明，与已知的抗PcrV抗体V2L2-MD相比，我们的抗体结合PcrV的不同区域或表位，并且令人惊讶的是，在各种生物学检测中证明了它们比已知的抗PcrV抗体更有效。

本申请所提供的抗PcrV抗体包括，例如，全长抗PcrV抗体、抗PcrV单链抗体(scFvs)、抗PcrV Fc融合蛋白、多特异性(如双特异性)抗PcrV抗体、抗PcrV免疫偶联物以及诸如此类的。

同时还提供具有特定序列的抗PcrV抗体，以及与这些抗体竞争或结合相同抗原表位的抗体。

同时还提供编码抗PcrV抗体的核酸，包含抗PcrV抗体的组合物，以及制备和使用抗PcrV抗体的方法。

定义

如本文所述，“治疗(treatment)”或“治疗(treating)”是一种获得有益的或期望的结果的方法，包括临床结果。鉴于本申请的目的，所述有益的或期望的临床结果，包括但不限于以下一种或多种：缓解由疾病引起的一种或多种症状，减轻疾病程度，稳定疾病(例如，预防或延迟疾病恶化)，预防或延迟疾病的扩散(例如，病原菌全身扩散)，预防或延迟疾病复发，延迟或减缓疾病进展，改善疾病状态，缓解疾病(部分或全部)，减少治疗疾病所需的一种或多种其他药物的剂量，延迟疾病进展，改善或提高生活质量，增加体重，和/或延长生存期。同时，“治疗”还包括感染病理结果的减少(例如，宿主细胞裂解或坏死)。本申请的方法考虑了这些治疗的任何一个或多个方面。

术语“预防(prevent)”以及类似的词，如“预防(prevented)”、“预防(preventing)”、“预防(prevention)”等，表示一种预防、抑制或减少疾病或病症(如病原体感染)发生或复发可能性的方法。它还指延缓一种疾病或病症的发生或复发，或延缓一种疾病或病症的症状的发生或复发。正如在此所使用的，“预防(prevention)”和类似的词还包括在疾病或病症发生或复发之前减轻其强度、影响、症状和/或负担。正如在此所使用的，“预防 (prevention)”和类似的词还包括减少疾病或病症发生或复发的风险和易感性，例如病原体感染。

术语“抗体”包括全长抗体及其抗原结合片段。全长抗体包括两条重链和两条轻链。轻链和重链的可变区负责抗原的结合。两条链中的可变区通常包括 3个高变的环，被称为互补决定区(CDRs)(轻链(LC)CDRs包括LC-CDR1、 LC-CDR2和LC-CDR3，重链(HC)CDRs包括HC-CDR1、HC-CDR2和HC- CDR3)。本文所披露的抗体或抗原结合片段的CDR边界可通过Kabat,Chothia 或Al-Lazikani惯例来定义或识别(Al-Lazikani 1997；Chothia 1985；Chothia 1987； Chothia 1989；Kabat 1987；Kabat 1991)。重链或轻链的3个CDR区插入到被称为框架区(FRs)的侧翼区段之间，所述框架区比CDR区具有更高的保守性，并形成支撑高变环的支架。重链和轻链的恒定区并不参与抗原结合，但展示出多种效应功能。抗体是基于它们重链恒定区的氨基酸序列进行分类的。抗体的五种主要类别或同种型是IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，其特征在于分别具有 α、δ、ε、γ和μ型重链。几种主要的抗体类别被分为亚类，如IgG1(γ1重链)、IgG2(γ2重链)、IgG3(γ3重链)、IgG4(γ4重链)、IgA1(α1重链n)或 IgA2(α2重链)。

如本文所述，术语“抗原结合片段”是指一种抗体片段，包括，例如，双链抗体(diabody)、Fab、Fab’、F(ab’)2、Fv片段、二硫键稳定的Fv片段 (dsFv)、(dsFv)₂、双特异性dsFv(dsFv-dsFv’)、二硫键稳定的双链抗体(ds 双链抗体)、单链抗体(scFv)、scFv二聚体(二价双链抗体)，由包含一个或多个 CDRs的抗体片段组成的多特异性抗体、单域抗体、纳米抗体、域抗体、二价域抗体或者能够与抗原结合但不包含完整抗体结构的任何其他抗体片段。抗原结合片段能够与亲本抗体或亲本抗体片段(如亲本scFv)结合相同的抗原。在一些实施例中，抗原结合片段可能包括来自特定人抗体的一个或多个CDRs，该CDRs被移植到来自一个或多个不同人抗体的框架区。

如本文所述，术语“表位”是指抗体或抗体部分结合的抗原上特定的原子或氨基酸组。如果两种抗体或抗体部分表现出与某抗原竞争性结合，则它们可能结合抗原上相同表位。

如本文所述，当第一抗体在等摩尔浓度下抑制第二抗体与PcrV靶标结合至少50％(例如至少55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、 98％或99％)时，第一抗体与第二抗体“竞争”结合PcrV靶标，反之亦然。PCT 出版物WO 03/48731描述了基于交叉竞争的高通量抗体“表位归类”方法。

如本文所述，术语“特异性地结合”、“特异性地识别”或“对..来说是特异性的”是指可测量的和可再现的相互作用，例如抗体与靶标的结合可以确定在异质分子群，包括生物分子中存在该靶标。例如，抗体能够特异性地识别某靶标(可以是表位)是指，与其它靶标结合相比，该抗体与该靶标的结合具有更高的亲和力，亲合力，更容易和/或更持久。在一些实施例中，特异性地识别抗原的抗体与抗原的一个或多个抗原决定簇反应，其结合亲和力是其与其它靶标结合亲和力的至少10倍。

如本文所述，一种“分离的”抗PcrV抗体是指一种抗PcrV抗体，其 (1)与天然存在的蛋白无关，(2)不含相同来源的其他蛋白，(3)由不同种属的细胞所表达，或(4)自然界中不存在。

如本文所述，术语“分离的核酸”，是指基因组、cDNA或合成来源的核酸或其组合。根据其来源，所述“分离的核酸”(1)与自然界中发现的“分离的核酸”中的全部或部分多核苷酸无关，(2)可与自然状态下不与之相连的多核苷酸可操作性地连接，或(3)在自然界中不作为较长序列的一部分而存在。

如本文所述，术语“CDR”或“互补决定区”是指重链和轻链多肽的可变域内发现的非连续抗原结合位点。在文献Kabat et al.,J.Biol.Chem.252:6609-6616 (1977)；Kabatet al.,U.S.Dept.of Health and Human Services,“Sequences of proteins ofimmunological interest”(1991)；Chothia et al.,J.Mol.Biol.196:901-917 (1987)；Al-Lazikani B.et al.,J.Mol.Biol.,273:927-948(1997)；MacCallum et al.,J.Mol.Biol.262:732-745(1996)；Abhinandan and Martin,Mol.Immunol.,45:3832- 3839(2008)；Lefranc M.P.et al.,Dev.Comp.Immunol.,27:55-77(2003)；和 Honegger and Plückthun,J.Mol.Biol.,309:657-670(2001)中已经描述这些特殊的区域，其中当彼此之间互相比较时，这些定义包括氨基酸残基的重合或子集。然而，采用任何一种定义方式来指示抗体或移植抗体或其变体的CDR，均包括在本文所定义和使用的术语范围之内。表1中列了由上述引用的各篇参考文献所定义的CDR所包括的氨基酸残基的位置，以示比较。CDR预测的算法和结合界面在本领域是已知的，包括，例如Abhinandan and Martin,Mol.Immunol., 45:3832-3839(2008)；Ehrenmann F.et al.,Nucleic Acids Res.,38:D301-D307 (2010)；和Adolf-Bryfogle J.et al.,Nucleic Acids Res.,43:D432-D438(2015)中均有描述。本段中所引用的参考文献的内容以其整体引用并入本文中，以用于本申请和可能包含在本文中的一个或多个权利要求中。

表1:CDR定义

	Kabat<sup>1</sup>	Chothia<sup>2</sup>	MacCallum<sup>3</sup>	IMGT<sup>4</sup>	AHo<sup>5</sup>
						V<sub>H</sub> CDR1	31-35	26-32	30-35	27-38	25-40
V<sub>H</sub> CDR2	50-65	53-55	47-58	56-65	58-77
						V<sub>H</sub> CDR3	95-102	96-101	93-101	105-117	109-137
V<sub>L</sub> CDR1	24-34	26-32	30-36	27-38	25-40
						V<sub>L</sub> CDR2	50-56	50-52	46-55	56-65	58-77
V<sub>L</sub> CDR3	89-97	91-96	89-96	105-117	109-137

¹氨基酸残基编号参照上述Kabat et al.中的命名方法

²氨基酸残基编号参照上述Chothia et al.中的命名方法

³氨基酸残基编号参照上述MacCallum et al.中的命名方法

⁴氨基酸残基编号参照上述Lefranc et al.中的命名方法

⁵氨基酸残基编号参照上述Honegger and Plückthun中的命名方法

术语“嵌合抗体”是指重链和/或轻链的一部分与来自特定种属或属于特定抗体种类或亚类的抗体中的相应序列一致或具有同源性，而这个(些)链的剩余部分与来自另一种属或属于其它抗体种类或亚类的抗体中的相应序列一致或具有同源性的抗体，以及此类抗体的片段，只要其具有本申请中的生物学活性(见U.S.Patent No.4,816,567；andMorrison et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA, 81:6851-6855(1984))。

“Fv”是包含完整抗原识别及结合位点的最小抗体片段。该片段是由一个重链可变域和一个轻链可变域紧密非共价连接形成的二聚体。通过这两个域的折叠衍生出6个高变环(轻链和重链中各3个环)，所述高变环为抗体提供了用于结合抗原的氨基酸残基，并且赋予抗体与抗原结合的特异性。然而，即使单个可变域(或Fv片段的一半，其仅包含对抗原具有特异性的3个CDRs)也具有识别和结合抗原的能力，尽管其亲和力低于完整的结合位点。

“单链Fv”，也可简写成“sFv”或“scFv”，是包含被连接成单一多肽链的V_H和V_L抗体域的抗体片段。在一些实施例中，scFv多肽进一步包括V_H和 V_L域之间的连接多肽，该连接多肽使得scFv形成抗原结合的理想结构。关于 scFv的概述，见Pluckthun in ThePharmacology of Monoclonal Antibodies,vol. 113,Rosenburg and Moore eds.,Springer-Verlag,New York,pp.269-315(1994)。

术语“双链抗体(diabodies)”是指，在V_H和V_L域之间采用短接头(例如5～10个残基)构建scFv片段(见上段内容)制备而成的一种小抗体片段，这样就使得可变域在链间而不是链内进行配对，产生一个双价片段，即具有两个抗原结合位点的片段。双特异性的双链抗体是两个“交叉”scFv片段的异二聚体，其中两个抗体的V_H和V_L域位于不同的多肽链上。在EP 404,097；WO 93/11161；Hollinger et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,90:6444-6448(1993)中全面描述了双链抗体。

非人源(如啮齿类)抗体的“人源化”形式是嵌合抗体，其包括最少的来自非人源抗体的序列。大多数情况下，人源化抗体是人源免疫球蛋白(受体抗体)，其中受体抗体的高变区(HVR)残基被来自非人源种属例如小鼠、大鼠、兔或非人类灵长类动物的且具有理想的抗体特异性，亲和力和性能的高变区残基所取代(供体抗体)。在某些情况下，人源免疫球蛋白框架区(FR)中的残基被相应的非人源残基所取代。另外，人源化抗体可以包括在受体抗体或供体抗体中均不存在的残基。这些修饰能够进一步改善抗体的性能。通常，人源化抗体会包含基本上所有，至少一个，通常两个可变域，其中所有或基本上所有的高变环均与非人免疫球蛋白的高变环相对应，以及所有或基本上所有的框架区均是人免疫球蛋白序列。人源抗体任选地也还包括免疫球蛋白恒定区 (Fc)的至少一部分，通常是人免疫球蛋白的恒定区。具体细节可以参考Jones et al.,Nature 321:522-525(1986)；Riechmann et al.,Nature 332:323-329(1988)；和 Presta,Curr.Op.Struct.Biol.2:593-596(1992)。

本文所鉴定的多肽和抗体序列的“氨基酸序列同一性百分比(％)”或“同源性”被定义为：在认为保守性取代属于序列同一性的一部分的情况下进行序列对比，候选序列与待比较多肽序列中相同氨基酸残基所占的百分比。可以通过本领域技术范围内的多种比对方式来确定氨基酸序列同一性百分比，例如，使用如BLAST、BLAST-2、ALIGN、Megalign(DNASTAR)、或MUSCLE软件等可公开获得的计算机软件。本领域技术人员可以确定用于测量比对的合适的参数，包括在所比较序列的全长上实现最大化比对所需的任何算法。然而，为了本文的目的，氨基酸序列同一性百分比数值是使用序列比对电脑程序MUSCLE(Edgar,R.C.,Nucleic Acids Research 32(5):1792-1797,2004；Edgar,R.C.,BMCBioinformatics 5(1):113,2004)生成的。

术语“Fc受体”或“FcR”用于描述结合抗体Fc区的受体。在一些实施例中，本申请所述的FcR是结合IgG抗体(一种γ受体)的FcR，包括FcγRI、FcγRII 和FcγRIII亚类的受体，包括这些受体的等位基因变体和可变剪接形式。

FcγRII受体包括FcγRIIA(“激活受体”)和FcγRIIB(“抑制受体”)，它们具有相似的氨基酸序列，主要在细胞质结构域有所不同。激活受体FcγRIIA的胞质结构域中含有免疫受体酪氨酸活化基序(ITAM)。抑制受体FcγRIIB的胞质结构域中含有免疫受体酪氨酸抑制基序(ITIM)(见M.in

Annu.Rev. Immunol.15:203-234(1997))。所述术语还包括同种异型，例如FcγRIIIA同种异型:FcγRIIIA-Phe158、FcγRIIIA-Val158、FcγRIIA-R131和/或FcγRIIA- H131。在Ravetch and Kinet,Annu.Rev.Immunol 9:457-92(1991)和Capel et al., Immunomethods 4:25-34(1994)；and de Haas et al.,J.Lab.Clin.Med.126:330-41 (1995)中对FcRs进行了描述。本申请中术语FcR涵盖其他类型的FcRs，包括将来鉴定的FcRs。术语FcR同时还包括新生儿受体FcRn，其负责向新生儿转移母体IgGs(Guyer et al.,J.Immunol.117:587(1976)and Kim et al.,J.Immunol. 24:249(1994))。

术语“FcRn”指新生儿Fc受体(FcRn)。FcRn与主要组织相容性复合体 (MHC)在结构上相似，由α链非共价结合到β2微球蛋白上组成。新生儿Fc 受体FcRn的多种功能在Ghetieand Ward(2000)Annu.Rev.Immunol.18,739- 766.中进行了描述。FcRn在免疫球蛋白IgGs从母体向新生儿的被动转运和调控血清IgG水平中起到重要作用。FcRn作为一种救助受体，可以在细胞内和细胞间以完整的形式结合和运输胞吞化的IgG，并使它们免于经受默认的降解途径。

人IgG Fc区的“CH1结构域”通常从118位氨基酸延伸到215位氨基酸 (EU编号系统)。

“铰链区”通常被定义为从人IgG1的216位Glu延伸到230位Pro (Burton,Molec.Immunol.22:161-206(1985))。通过将形成重链间二硫键的第一个和最后一个半胱氨酸残基置于与IgG1相同位置后，可以使得其他IgG同种型的铰链区与IgG1序列比对。

人IgG Fc区的“CH2结构域”通常从231位氨基酸延伸到340位氨基酸。 CH2结构域的独特之处在于，它不会与另一个区域紧密配对，而是在完整的天然IgG分子的两个CH2结构域之间插入了两条N端连接的支链糖链。据推测，糖类可能作为域与域间配对的替代，有助于保持CH2结构域稳定。Burton, Molec Immunol.22:161-206(1985)。

“CH3”结构域包括在Fc区内从C末端残基延伸到CH2结构域(从341 位氨基酸到抗体序列的C末端，通常为IgG的第446或447位氨基酸残基)。

“功能性Fc片段”具有天然Fc区序列所具有的“效应功能”。示例性的 “效应功能”包括C1q结合；补体依赖的细胞毒作用(CDC)；Fc受体结合；抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用(ADCC)；吞噬作用；细胞表面受体的下调(如B细胞受体；BCR)等。这类效应功能通常需要Fc区与结合结构域(如抗体可变区)结合，并且可以使用本领域公知的多种实验方法进行评估。

具有“改变的”FcR结合亲和力或ADCC活性的IgG Fc变体的抗体，与亲本多肽或包含天然Fc序列的多肽相比，其FcR结合活性和/或ADCC活性增强或减弱。表现出与FcR“结合增强”的Fc变体与亲本多肽或包含天然IgG Fc 序列的多肽相比，其与至少一种FcR具有更高的结合亲和力(例如更低的表观Kd或IC50值)。在一些实施例中，与亲本多肽相比，结合能力增强3倍，例如5、10、25、50、60、100、150、200，甚至高达500倍或结合力提高25％到1000％。表现出与FcR“结合降低”的Fc变体，与亲本多肽相比，其与至少一种FcR具有更低的亲和力(例如更高的表观Kd或IC50值)。与亲本多肽相比，其结合能力下降40％或更多。

“抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用”或“ADCC”是一种细胞毒性形式，指分泌型的Ig与存在于某些细胞毒性细胞(例如自然杀伤细胞(NK)、中性粒细胞和巨噬细胞)上的Fc受体(FcRs)结合，使这些细胞毒性效应细胞能够特异性结合携带抗原的靶细胞，随后使用细胞毒素杀死靶细胞。抗体“武装”细胞毒性细胞并且是这种杀伤所必需的。介导ADCC的主要细胞类型中， NK细胞只表达FcγRIII，而单核细胞表达FcγRI、FcγRII和FcγRIII。在 Ravetch and Kinet,Annu.Rev.Immunol 9:457-92(1991)第464页的Table 3中总结了在造血细胞上FcR的表达。评估目标分子的ADCC活性，可以进行体外 ADCC实验，在美国专利No.5,500,362或5,821,337中进行了描述。适用于此类实验的效应细胞包括外周血单核细胞(PBMC)和自然杀伤性细胞(NK)。可选地，或者此外，目标分子的ADCC活性也可以在体内进行评估，例如在如 Clynes et al.PNAS(USA)95:652-656(1998)中所公开的动物模型中进行了描述。

包含Fc区变体的多肽与包含野生型IgG Fc多肽或亲本多肽相比，在人体效应细胞存在下表现出“增强的ADCC活性”或能够更有效的介导ADCC效应，所述包含Fc区变体的多肽在实验时与包含野生型IgG Fc多肽(或亲本多肽)数量上基本相同时，无论在体外或体内均能更有效的介导ADCC。通常采用本领域已知的任何体外ADCC实验方法来鉴定此类变体，例如用于鉴定 ADCC活性的实验或方法，例如在动物模型中等。在一些实施例中，此类变体与野生型Fc(或亲代多肽)相比，介导ADCC的效率提高5到100倍，例如 25到50倍。

“补体依赖的细胞毒作用”或“CDC”是指在补体存在的情况下裂解靶细胞。经典的补体途径的激活是由补体系统第一组分(C1q)与结合同源抗原的抗体(具有适宜结构的亚类)相结合而启动的。为了评估补体激活，可以进行CDC实验，如Gazzano-Santoro et al.,J.Immunol.Methods 202:163(1996)中所描述的。在美国专利No.6,194,551B1和WO99/51642中描述了具有改变的Fc区氨基酸序列并增加或降低的C1q结合能力的多肽变体。这些专利出版物的内容通过引用明确地并入本文中。另见Idusogie et al.J.Immunol.164:4178-4184 (2000)。

除非另有说明，一种“编码氨基酸序列的核苷酸序列”包括相互之间互为简并形式且编码相同氨基酸序列的所有核苷酸序列。编码蛋白质或RNA的核苷酸序列也可包括内含子，例如编码蛋白质的核苷酸序列在某些形式中包含内含子。

术语“可操作性地连接”是指调控序列与异源核苷酸序列之间的功能性连接，从而使后者表达。例如，当第一个核苷酸序列与第二个核苷酸序列处于功能性关系时，第一个核苷酸序列与第二个核苷酸序列为可操作性地连接。例如，如果启动子影响编码序列的转录或表达，该启动子与编码序列为可操作性地连接。通常，可操作性连接的DNA序列是连续的，并且在必要时，可以在同一个阅读框中连接两个蛋白质编码区。

“同源”是指两个多肽之间或两个核酸分子之间的序列相似性或序列同一性。如果两个比较序列的同一位置为相同的碱基或氨基酸单体亚基时，例如两个DNA分子的同一位置均为腺嘌呤，则这两个DNA分子在该位置是同源的。两个序列间的同源百分比是指两个序列中共有的匹配或同源位置的数量与位置总数之比再乘以100所得函数。例如，两个序列中如果10个位置中有6个位置是相匹配或同源的，则这两个序列的同源性为60％。举例来说，DNA序列 ATTGCC和TATGGC具有50％的同源性。通常来说，在比对两个序列时，以得到最大同源性为目的来进行对比。

本文所公开的抗PcrV抗体或组合物的“有效量”是指足以实现特定目的的量。“有效量”可以凭经验和通过已知的与所述目的相关的方法确定。

术语“治疗有效量”是指本文所述抗PcrV抗体或组合物的量，对“治疗” 个体的疾病或病症有效。在铜绿假单胞菌感染的情况下，本文公开的抗PcrV抗体或组合物的治疗有效量可以减少感染细胞的数量，抑制(即在一定程度上减缓并最好停止)感染的传播，并/或在一定程度上缓解与感染相关的一种或多种症状。在感染时，本文公开的抗PcrV抗体或组合物能够抑制铜绿假单胞菌生长和/或杀死铜绿假单胞菌，抗PcrV抗体可以是抑制细胞的和/或具有细胞毒性的。在一些实施例中，治疗有效量是指在患者中抑制感染的量。在一些实施例中，治疗有效量是指在患者中完全清除感染的量。

如本文所用的，“药学上可接受的”或“药理学上相容的”是指无生物学活性或者其它不期望性质的材料，例如该材料能够加入到给予患者的药物组合物中，而不会引起显著的不良生物反应，或者，不与组合物中包含的任何其它组分以有害的方式相互作用。药学上可接受的载体或赋形剂优选满足毒理学或制造检测的所需标准和/或包含在美国食品和药品管理局编制的非活性成分指南中。

本文中描述的本申请的实施例应理解为包含“由……组成”和/或“基本上由……组成”的实施例。

本文中提及“约”为一个数值或参数，包含(和描述)针对该值或参数本身的变体。例如，涉及“约X”的描述，包括“X”的描述。

如本文所用的，提及“不是(not)”一个数值或参数，通常表示并描述 “除了(otherthan)”某一数值或参数之外。例如，该方法不能用于治疗X型感染，意味着该方法通常用于治疗除X型感染之外的其他类型。

除非上下文另有明确说明，本文和所述权利要求中所采用的单数形式 “一”，“一个”和“该”包括复数对象。

抗PcrV抗体

一方面，本申请提供特异性结合PcrV的抗PcrV抗体。所述抗PcrV抗体包括，但不限于，人源化抗体，嵌合抗体，小鼠抗体人抗体，以及本文所述的包含重链和/或轻链CDRs的抗体分子。一方面，本申请提供与PcrV结合的分离的抗体。预期的抗PcrV抗体包括，例如，全长抗PcrV抗体(如全长IgG1、 IgG2或IgG4)，抗PcrV单链抗体，多特异性(如双特异性)抗PcrV抗体，抗PcrV免疫偶联物，以及诸如此类。在一些实施例中，抗PcrV抗体是Fab、Fab’、F(ab)’2、Fab’-SH、单链抗体(scFv)、Fv片段、dAb、Fd、纳米抗体、双链抗体(diabody)或线性抗体。在一些实施例中，特异性结合PcrV的抗体是指抗体与PcrV结合的亲和力至少是与非靶标结合亲和力的10倍以上(包括例如10、10²、10³、10⁴、10⁵、10⁶、或10⁷倍)。在一些实施例中，非靶标是指不是PcrV的抗原。结合亲和力可通过本领域已知的方法来测定，如ELISA，荧光激活细胞分选(FACS)分析或放射免疫沉淀分析(RIA)。Kd值可以通过本领域已知的方法来测定，如表面等离子共振(SPR)技术或生物层干涉技术(BLI)。

在一些实施例中，所述特异性与铜绿假单胞菌PcrV结合的抗PcrV抗体或抗原结合片段(a)促进、介导或增强假单胞菌的调理吞噬杀伤(OPK)，和/或 (b)破坏III型毒素分泌系统的活性。

尽管本文广泛地讨论了包含人序列的抗PcrV抗体(例如，包含人CDR序列的人重链和轻链可变域)，但同时也考虑了非人抗PcrV抗体。在一些实施例中，非人抗PcrV抗体包括本文所述的抗PcrV抗体的人CDR序列和非人框架区序列，在一些实施例中，非人框架区序列包括任何的用于使用如本文所述的一种或多种人CDR序列产生重链和/或轻链可变域的序列，包括例如哺乳动物，例如小鼠、大鼠、兔子、猪、牛(例如，牛、公牛、水牛)、鹿、绵羊、山羊、鸡、猫、狗、雪貂、灵长类(例如，狨猴，猕猴)等。在一些实施例中，非人抗PcrV抗体包括将一种或多种本文所述的人CDR序列移植到非人框架区中(例如，鼠或鸡的框架区序列)所产生的抗PcrV抗体。

一个示例性PcrV蛋白的完整氨基酸序列包括或由氨基酸序列SEQ ID NO: 80组成。在一些实施例中，本文所述的抗PcrV抗体特异性地识别假单胞菌 PcrV中的一个表位。在一些实施例中，所述抗PcrV抗体是假单胞菌PcrV特异性的，并且不与其他种属或其它类型的非假单胞菌蛋白发生交叉反应。

在一些实施例中，所述抗PcrV抗体包括抗体重链恒定区和抗体轻链恒定区。在一些实施例中，所述抗PcrV抗体包括IgG1型重链恒定区。在一些实施例中，所述抗PcrV抗体包括IgG2型重链恒定区。在一些实施例中，所述抗 PcrV抗体包括IgG3型重链恒定区。在一些实施例中，所述抗PcrV抗体包括 IgG4型重链恒定区。在一些实施例中，所述IgG指的是人IgG。在一些实施例中，所述重链恒定区包含或由氨基酸序列SEQ ID NO:82组成。在一些实施例中，所述重链恒定区包含或由氨基酸序列SEQ ID NO:83组成。在一些实施例中，所述抗PcrV抗体包含λ轻链恒定区。在一些实施例中，所述抗PcrV抗体包含κ轻链恒定区。在一些实施例中，所述轻链恒定区包含或由氨基酸序列 SEQ ID NO:81组成。在一些实施例中，所述抗PcrV抗体包括抗体重链可变域和抗体轻链可变域。

在一些实施例中，如上所述任一种分离的抗PcrV抗体，所述分离的抗 PcrV抗体包括重链可变域(V_H)，所述V_H包括：一个重链互补决定区(HC- CDR)1，包含SYWMH(SEQ ID NO:1)或其包含至多3个氨基酸取代的变体；一个HC-CDR2，包含RINEX₁EX₂SX₃SYADSVKG(SEQ IDNO:50)，或其包含至多3个氨基酸取代的变体，其中X₁为D、T、N、L、I、S、V、A或H，X₂为S、T、N、D、G或R，X₃为I或T；和一个HC-CDR3，包含 DGX₁X₂X₃X₄X₅DX₆(SEQ ID NO:51)，或其包含至多3个氨基酸取代的变体，其中X₁为P、Y或A，X₂为Y或W，X₃为D、T或N，X₄为S、T或A，X₅为L、F或M，X₆为I、V、A、S、L或W；以及轻链可变域(V_L)，所述V_L包括：一个轻链互补决定区(LC-CDR)1，包含RASQX₁VX₂X₃NLA(SEQ ID NO: 47)，或其包含至多3个氨基酸取代的变体，其中X₁为S、N、D或G，X₂为 S、K、N、R或T，X₃为N、S、D或G；一个LC-CDR2，包含X₁ASSRAT (SEQ ID NO:85)，或其包含至多3个氨基酸取代的变体，其中X₁为D、N、 H、A或S；和一个LC-CDR3，包含QQYGX₁X₂PX₃T(SEQ ID NO:86)，或其包含至多3个氨基酸取代的变体，其中X₁为S、A、T、E、D、H、N、Q、 G、L、Y、M、R或V，X₂为S、Q、V、E、T、D、M、Y、G、H、L、N、 A、F或P，X₃为I、L或V。

在一些实施例中，如上所述任一种分离的抗PcrV抗体，所述分离的抗 PcrV抗体包括重链可变域(V_H)，所述V_H包括：一个HC-CDR1，包含 SYWMH(SEQ ID NO:1)，或其包含至多3个氨基酸取代的变体；一个HC- CDR2，包含RINEX1EX2SISYADSVKG(SEQ ID NO:45)，或其包含至多3个氨基酸取代的变体，其中X1为D、N、I、L或V，X2为S、T、R、G或N；和一个HC-CDR3，包括DGPYDX1X2DI(SEQ ID NO:46)，或其包含至多3个氨基酸取代的变体，其中X1为S、A或T，X2为F或L；以及V_L，所述V_L包括：一个LC-CDR1，包含RASQX1VX2X3NLA(SEQ ID NO:47)，或其包含至多3个氨基酸取代的变体，其中X1为N、G、D或S，X2为K、R、S、N 或T，X3为N、G、S或D；一个LC-CDR2，包含X1ASSRAT(SEQ ID NO: 48)，或其包含至多3个氨基酸取代的变体，其中X1为D、N、H或A；和一个LC-CDR3，包含QQYGX1X2PX3T(SEQ ID NO:49)，或其包含至多3个氨基酸取代的变体，其中X1为S、T、E、H、N、A、D、M或L，X2为S、 Q、E、T、D、G、H、L、N、V或Y，和X3为I、L或V。

在一些实施例中，所述抗PcrV抗体包括V_H，所述V_H包含：一个HC- CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:1或者包含至多3个(例如1、2或3 个)氨基酸取代的变体；一个HC-CDR2，其包含SEQ ID NOs:2-9中任一氨基酸序列或者包含至多3个(例如1、2或3个)氨基酸取代的变体；一个HC- CDR3，其包含SEQ ID NOs:10-13中任一氨基酸序列或者包含至多3个(例如 1、2或3个)氨基酸取代的变体；以及V_L，所述V_L包含：一个LC-CDR1，其包含SEQ ID NOs:14-25中任一氨基酸序列或者包含至多3个(例如1、2或3 个)氨基酸取代的变体；一个LC-CDR2，其包含SEQ ID NOs:26-29中任一氨基酸序列或者包含至多3个(例如1、2或3个)氨基酸取代的变体；一个LC- CDR3，其包含SEQ ID NOs:30-44中任一氨基酸序列或者包含至多3个(例如 1、2或3个)氨基酸取代的变体。

在一些实施例中，所述抗PcrV抗体，所述分离的抗PcrV抗体包括：V_H，所述V_H包括：一个HC-CDR1，包含氨基酸序列SEQ ID NO:1；一个HC- CDR2，包含SEQ ID NOs:2-9中任一氨基酸序列；和一个HC-CDR3，包含 SEQ ID NOs:10-13中任一氨基酸序列；以及V_L，所述V_L包括：一个LC- CDR1，包含SEQ ID NOs:14-25中任一氨基酸序列；一个LC-CDR2，包含 SEQ IDNOs:26-29中任一氨基酸序列；一个LC-CDR3，包含SEQ ID NOs:30- 44中任一氨基酸序列。

在一些实施例中，所述抗PcrV抗体，包括：V_H，其包含具有SEQ ID NOs: 52-64中任一氨基酸序列的V_H中的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及 V_L，其包含具有SEQ ID NOs:65-79中任一氨基酸序列的V_L中的LC-CDR1、 LC-CDR2和LC-CDR3。

在一些实施例中，所述抗PcrV抗体包括V_H，所述V_H包含SEQ ID NOs: 52-64中任一氨基酸序列，或包含与SEQ ID NOs:52-64中任一氨基酸序列具有至少90％(例如至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或 99％)序列同源性的变体序列，以及V_L，所述V_L包含SEQ ID NOs:65-79中任一氨基酸序列，或包含与SEQ ID NOs:65-79中任一氨基酸序列具有至少90％序列同源性的变体序列。在一些实施例中，所述抗PcrV抗体包括V_H，所述V_H包含SEQ ID NOs:52-64中任一氨基酸序列，以及V_L，所述V_L包含SEQ ID NOs:65-79中任一氨基酸序列。

在一些实施例中，所述抗PcrV抗体是全长抗体。在一些实施例中，所述抗 PcrV抗体包含IgG1恒定区。在一些实施例中，所述IgG1指的是人IgG1。在一些实施例中，所述抗PcrV抗体包含IgG4恒定区。在一些实施例中，所述 IgG4指的是人IgG4。在一些实施例中，所述抗PcrV抗体重链恒定区包含或由氨基酸序列SEQ ID NO:82组成。在一些实施例中，所述抗PcrV抗体重链恒定区包含或由氨基酸序列SEQ ID NO:83组成。在一些实施例中，所述抗PcrV抗体轻链恒定区包含或由氨基酸序列SEQ ID NO:81组成。

在一些实施例中，所述抗PcrV抗体包括：V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQID NO:1的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:2的 HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:10的HC-CDR3；或者在HC- CDRs中包含至多5个氨基酸取代的V_H变体；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:14的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ IDNO: 26的LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:30的LC-CDR3，或者在 LC-CDRs中包含至多5个氨基酸取代的V_L变体。

在一些实施例中，所述抗PcrV抗体包括：V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQID NO:1的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:2的 HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:10的HC-CDR3；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:14的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:26的LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:30的 LC-CDR3。在一些实施例中，提供了一种可特异性与抗体竞争的抗PcrV抗体，所述抗体包括：V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:1的 HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:2的HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:10的HC-CDR3；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:14的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:26的LC- CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:30的LC-CDR3。在一些实施例中，提供了一种与抗体结合在相同表位的抗PcrV抗体，所述抗体包括：V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:1的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:2的HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:10的 HC-CDR3；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ IDNO:14的 LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:26的LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:30的LC-CDR3。

在一些实施例中，所述抗PcrV抗体包括V_H，所述V_H包含氨基酸序列 SEQ ID NO:52，或包含与氨基酸序列SEQ ID NO:52具有至少90％(例如至少 91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％)序列同源性的变体序列，以及V_L，所述V_L包含氨基酸序列SEQ IDNO:65，或包含与氨基酸序列 SEQ ID NO:65具有至少90％序列同源性的变体序列。在一些实施例中，所述抗PcrV抗体包括包含氨基酸序列SEQ ID NO:52的V_H以及包含氨基酸序列SEQ ID NO:65的V_L。在一些实施例中，所述抗PcrV抗体包括V_H，其包含具有氨基酸序列SEQID NO:52的V_H中的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及V_L，其包含具有氨基酸序列SEQ IDNO:65的V_L中的HC-CDR1、HC- CDR2和HC-CDR3。

在一些实施例中，所述抗PcrV抗体包括：V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQID NO:1的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:2的 HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:11的HC-CDR3，或者在HC- CDRs中包含至多5个氨基酸取代的V_H变体；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:14的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ IDNO: 26的LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:30的LC-CDR3，或者在 LC-CDRs中包含至多5个氨基酸取代的V_L变体。

在一些实施例中，所述抗PcrV抗体包括：V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQID NO:1的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:2的 HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:11的HC-CDR3；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:14的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:26的LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:30的 LC-CDR3。在一些实施例中，提供了一种可特异性与如下抗体竞争的抗PcrV 抗体，所述抗体包括：V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:1 的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:2的HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:11的HC-CDR3；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:14的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ IDNO:26的 LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:30的LC-CDR3。在一些实施例中，提供了一种与如下抗体结合相同表位的抗PcrV抗体，所述抗体包括： V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:1的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:2的HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO: 11的HC-CDR3；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQID NO:14 的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:26的LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:30的LC-CDR3。

在一些实施例中，所述抗PcrV抗体包括V_H，所述V_H包含氨基酸序列 SEQ ID NO:56，或包含与氨基酸序列SEQ ID NO:56具有至少90％(例如至少 91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％)序列同源性的变体序列，以及V_L，所述V_L包含氨基酸序列SEQ IDNO:65，或包含与氨基酸序列 SEQ ID NO:65具有至少90％序列同源性的变体序列。在一些实施例中，所述抗PcrV抗体包括包含氨基酸序列SEQ ID NO:56的V_H和包含氨基酸序列SEQID NO:65的V_L。在一些实施例中，所述抗PcrV抗体包括V_H，其包含具有氨基酸序列SEQ IDNO:56的V_H中的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及 V_L，其包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:65的V_L中的HC-CDR1、HC-CDR2 和HC-CDR3。

在一些实施例中，所述抗PcrV抗体包括：V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQID NO:1的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:3的 HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:11的HC-CDR3，或者在HC- CDRs中包含至多5个氨基酸取代的V_H变体；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:15的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ IDNO: 27的LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:31的LC-CDR3，或者在 LC-CDRs中包含至多5个氨基酸取代的V_L变体。

在一些实施例中，所述抗PcrV抗体包括：V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQID NO:1的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:3的 HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:11的HC-CDR3；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:15的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:27的LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:31的 LC-CDR3。在一些实施例中，提供了一种可特异性与如下抗体竞争的抗PcrV 抗体，所述抗体包括：V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:1 的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:3的HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:11的HC-CDR3；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:15的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ IDNO:27的 LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:31的LC-CDR3。在一些实施例中，提供了一种与如下抗体结合相同表位的抗PcrV抗体，所述抗体包括： V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:1的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:3的HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO: 11的HC-CDR3；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQID NO:15 的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:27的LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:31的LC-CDR3。

在一些实施例中，所述抗PcrV抗体包括V_H，所述V_H包含氨基酸序列 SEQ ID NO:53，或包含与氨基酸序列SEQ ID NO:53具有至少90％(例如至少 91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％)序列同源性的变体序列，以及V_L，所述V_L包含氨基酸序列SEQ IDNO:66，或包含与氨基酸序列 SEQ ID NO:66具有至少90％序列同源性的变体序列。在一些实施例中，所述抗PcrV抗体包括包含氨基酸序列SEQ ID NO:53的V_H以及包含氨基酸序列SEQ ID NO:66的V_L。在一些实施例中，所述抗PcrV抗体包括V_H，其包具有氨基酸序列SEQ IDNO:53的V_H中的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及V_L，其包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:66的V_L中的HC-CDR1、HC- CDR2和HC-CDR3。

在一些实施例中，所述抗PcrV抗体包括：V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQID NO:1的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:7的 HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:13的HC-CDR3，或者在HC- CDRs中包含至多5个氨基酸取代的V_H变体；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:23的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ IDNO: 27的LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:39的LC-CDR3，或者在 LC-CDRs中包含至多5个氨基酸取代的V_L变体。

在一些实施例中，所述抗PcrV抗体包括：V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQID NO:1的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:7的 HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:13的HC-CDR3；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:23的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:27的LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:39的 LC-CDR3。在一些实施例中，提供了一种可特异性与如下抗体竞争的抗PcrV 抗体，所述抗体包括：V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:1 的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:7的HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:13的HC-CDR3；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:23的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ IDNO:27的 LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:39的LC-CDR3。在一些实施例中，提供了一种与如下抗体结合相同表位的抗PcrV抗体，所述抗体包括： V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:1的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:7的HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO: 13的HC-CDR3；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQID NO:23 的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:27的LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:39的LC-CDR3。

在一些实施例中，所述抗PcrV抗体包括V_H，所述V_H包含氨基酸序列 SEQ ID NO:62，或包含与氨基酸序列SEQ ID NO:62具有至少90％(例如至少 91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％)序列同源性的变体序列，以及V_L，所述V_L包含氨基酸序列SEQ IDNO:74，或包含与氨基酸序列 SEQ ID NO:74具有至少90％序列同源性的变体序列。在一些实施例中，所述抗PcrV抗体包括包含氨基酸序列SEQ ID NO:62的V_H以及包含氨基酸序列SEQ ID NO:74的V_L。在一些实施例中，所述抗PcrV抗体包括V_H，其包具有氨基酸序列SEQ IDNO:62的V_H中的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及V_L，其包具有氨基酸序列SEQ ID NO:74的V_L中的HC-CDR1、HC-CDR2 和HC-CDR3。

在一些实施例中，所述抗PcrV抗体包括：V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQID NO:1的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:4的 HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:11的HC-CDR3，或者在HC- CDRs中包含至多5个氨基酸取代的V_H变体；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:16的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ IDNO: 28的LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:32的LC-CDR3，或者在 LC-CDRs中包含至多5个氨基酸取代的V_L变体。

在一些实施例中，所述抗PcrV抗体包括：V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQID NO:1的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:4的 HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:11的HC-CDR3；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:16的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:28的LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:32的 LC-CDR3。在一些实施例中，提供了一种可特异性与如下抗体竞争的抗PcrV 抗体，所述抗体包括：V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:1 的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:4的HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:11的HC-CDR3；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:16的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ IDNO:28的 LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:32的LC-CDR3。在一些实施例中，提供了一种与如下抗体结合相同表位的抗PcrV抗体，所述抗体包括： V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:1的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:4的HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO: 11的HC-CDR3；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQID NO:16 的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:28的LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:32的LC-CDR3。

在一些实施例中，所述抗PcrV抗体包括V_H，所述V_H包含氨基酸序列 SEQ ID NO:54，或包含与氨基酸序列SEQ ID NO:54具有至少90％(例如至少 91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％)序列同源性的变体序列，以及V_L，所述V_L包含氨基酸序列SEQ IDNO:67，或包含与氨基酸序列 SEQ ID NO:67具有至少90％序列同源性的变体序列。在一些实施例中，所述抗PcrV抗体包括包含氨基酸序列SEQ ID NO:54的V_H以及包含氨基酸序列SEQ ID NO:67的V_L。在一些实施例中，所述抗PcrV抗体包括V_H，其包具有氨基酸序列SEQ IDNO:54的V_H中的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及V_L，其包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:67的V_L中的HC-CDR1、HC- CDR2和HC-CDR3。

在一些实施例中，所述抗PcrV抗体包括：V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQID NO:1的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:5的 HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:11的HC-CDR3，或者在HC- CDRs中包含至多5个氨基酸取代的V_H变体；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:17的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ IDNO: 27的LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:33的LC-CDR3，或者在 LC-CDRs中包含至多5个氨基酸取代的V_L变体。

在一些实施例中，所述抗PcrV抗体包括：V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQID NO:1的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:5的 HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:11的HC-CDR3；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:17的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:27的LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:33的 LC-CDR3。在一些实施例中，提供了一种可特异性与如下抗体竞争的抗PcrV 抗体，所述抗体包括：V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:1 的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:5的HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:11的HC-CDR3；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:17的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ IDNO:27的 LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:33的LC-CDR3。在一些实施例中，提供了一种与如下抗体结合相同表位的抗PcrV抗体，所述抗体包括：V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:1的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:5的HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO: 11的HC-CDR3；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQID NO:17 的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:27的LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:33的LC-CDR3。

在一些实施例中，所述抗PcrV抗体包括V_H，所述V_H包含氨基酸序列 SEQ ID NO:55，或包含与氨基酸序列SEQ ID NO:55具有至少90％(例如至少 91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％)序列同源性的变体序列，以及V_L，所述V_L包含氨基酸序列SEQ IDNO:68，或包含与氨基酸序列 SEQ ID NO:68具有至少90％序列同源性的变体序列。在一些实施例中，所述抗PcrV抗体包括包含氨基酸序列SEQ ID NO:55的V_H以及包含氨基酸序列SEQ ID NO:68的V_L。在一些实施例中，所述抗PcrV抗体包括V_H，其包含具有氨基酸序列SEQID NO:55的V_H中的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及V_L，其包含具有氨基酸序列SEQ IDNO:68的V_L中的HC-CDR1、HC- CDR2和HC-CDR3。

在一些实施例中，所述抗PcrV抗体包括：V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQID NO:1的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:2的 HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:11的HC-CDR3，或者在HC- CDRs中包含至多5个氨基酸取代的V_H变体；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:18的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ IDNO: 28的LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:34的LC-CDR3，或者在 LC-CDRs中包含至多5个氨基酸取代的V_L变体。

在一些实施例中，所述抗PcrV抗体包括：V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQID NO:1的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:2的 HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:11的HC-CDR3；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:18的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:28的LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:34的 LC-CDR3。在一些实施例中，提供了一种可特异性与如下抗体竞争的抗PcrV 抗体，所述抗体包括：V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:1 的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:2的HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:11的HC-CDR3；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:18的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ IDNO:28的 LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:34的LC-CDR3。在一些实施例中，提供了一种与如下抗体结合相同表位的抗PcrV抗体，所述抗体包括： V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:1的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:2的HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO: 11的HC-CDR3；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQID NO:18 的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:28的LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:34的LC-CDR3。

在一些实施例中，所述抗PcrV抗体包括V_H，所述V_H包含氨基酸序列 SEQ ID NO:56，或包含与氨基酸序列SEQ ID NO:56具有至少90％(例如至少 91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％)序列同源性的变体序列，以及V_L，所述V_L包含氨基酸序列SEQ IDNO:69，或包含与氨基酸序列 SEQ ID NO:69具有至少90％序列同源性的变体序列。在一些实施例中，所述抗PcrV抗体包括包含氨基酸序列SEQ ID NO:56的V_H以及包含氨基酸序列SEQ ID NO:69的V_L。在一些实施例中，所述抗PcrV抗体包括V_H，其包含具有氨基酸序列SEQID NO:56的V_H中的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及V_L，其包含具有氨基酸序列SEQ IDNO:69的V_L中的HC-CDR1、HC- CDR2和HC-CDR3。

在一些实施例中，所述抗PcrV抗体包括：V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQID NO:1的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:9的 HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:13的HC-CDR3，或者在HC- CDRs中包含至多5个氨基酸取代的V_H变体；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:17的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ IDNO: 27的LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:43的LC-CDR3，或者在 LC-CDRs中包含至多5个氨基酸取代的V_L变体。

在一些实施例中，所述抗PcrV抗体包括：V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQID NO:1的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:9的HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:13的HC-CDR3；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:17的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:27的LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:43的 LC-CDR3。在一些实施例中，提供了一种可特异性与如下抗体竞争的抗PcrV 抗体，所述抗体包括：V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:1 的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:9的HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:13的HC-CDR3；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:17的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ IDNO:27的 LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:43的LC-CDR3。在一些实施例中，提供了一种与如下抗体结合相同表位的抗PcrV抗体，所述抗体包括： V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:1的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:9的HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO: 13的HC-CDR3；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQID NO:17 的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:27的LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:43的LC-CDR3。

在一些实施例中，所述抗PcrV抗体包括V_H，所述V_H包含氨基酸序列 SEQ ID NO:64，或包含与氨基酸序列SEQ ID NO:64具有至少90％(例如至少 91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％)序列同源性的变体序列，以及V_L，所述V_L包含氨基酸序列SEQ IDNO:78，或包含与氨基酸序列 SEQ ID NO:78具有至少90％序列同源性的变体序列。在一些实施例中，所述抗PcrV抗体包括包含氨基酸序列SEQ ID NO:64的V_H以及包含氨基酸序列SEQ ID NO:78的V_L。在一些实施例中，所述抗PcrV抗体包括V_H，其包含具有氨基酸序列SEQID NO:64的V_H中的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及V_L，其包含具有氨基酸序列SEQ IDNO:78的V_L中的HC-CDR1、HC- CDR2和HC-CDR3。

在一些实施例中，所述抗PcrV抗体包括：V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQID NO:1的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:2的 HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:11的HC-CDR3，或者在HC- CDRs中包含至多5个氨基酸取代的V_H变体；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:19的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ IDNO: 28的LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:35的LC-CDR3，或者在 LC-CDRs中包含至多5个氨基酸取代的V_L变体。

在一些实施例中，所述抗PcrV抗体包括：V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQID NO:1的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:9的 HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:11的HC-CDR3；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:19的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:28的LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:35的 LC-CDR3。在一些实施例中，提供了一种可特异性与如下抗体竞争的抗PcrV 抗体，所述抗体包括：V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:1 的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:2的HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:11的HC-CDR3；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:19的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ IDNO:28的 LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:35的LC-CDR3。在一些实施例中，提供了一种与如下抗体结合相同表位的抗PcrV抗体，所述抗体包括： V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:1的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:2的HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO: 11的HC-CDR3；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQID NO:19 的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:28的LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:35的LC-CDR3。

在一些实施例中，所述抗PcrV抗体包括V_H，所述V_H包含氨基酸序列 SEQ ID NO:56，或包含与氨基酸序列SEQ ID NO:56具有至少90％(例如至少 91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％)序列同源性的变体序列，以及V_L，所述V_L包含氨基酸序列SEQ IDNO:70，或包含与氨基酸序列 SEQ ID NO:70具有至少90％序列同源性的变体序列。在一些实施例中，所述抗PcrV抗体包括包含氨基酸序列SEQ ID NO:56的V_H以及包含氨基酸序列SEQ ID NO:70的V_L。在一些实施例中，所述抗PcrV抗体包括V_H，其包含具有氨基酸序列SEQID NO:56的V_H中的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及V_L，其包含具有氨基酸序列SEQ IDNO:70的V_L中的HC-CDR1、HC- CDR2和HC-CDR3。

在一些实施例中，所述抗PcrV抗体包括：V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQID NO:1的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:6的 HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:11的HC-CDR3，或者在HC- CDRs中包含至多5个氨基酸取代的V_H变体；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:20的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ IDNO: 27的LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:36的LC-CDR3，或者在 LC-CDRs中包含至多5个氨基酸取代的V_L变体。

在一些实施例中，所述抗PcrV抗体包括：V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQID NO:1的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:6的 HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:11的HC-CDR3；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:20的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:27的LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:36的 LC-CDR3。在一些实施例中，提供了一种可特异性与如下抗体竞争的抗PcrV 抗体，所述抗体包括：V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:1 的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:6的HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:11的HC-CDR3；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:20的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ IDNO:27的 LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:36的LC-CDR3。在一些实施例中，提供了一种与如下抗体结合相同表位的抗PcrV抗体，所述抗体包括： V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:1的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:6的HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO: 11的HC-CDR3；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQID NO:20 的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:27的LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:36的LC-CDR3。

在一些实施例中，所述抗PcrV抗体包括V_H，所述V_H包含氨基酸序列 SEQ ID NO:57，或包含与氨基酸序列SEQ ID NO:57具有至少90％(例如至少 91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％)序列同源性的变体序列，以及V_L，所述V_L包含氨基酸序列SEQ IDNO:71，或包含与氨基酸序列 SEQ ID NO:71具有至少90％序列同源性的变体序列。在一些实施例中，所述抗PcrV抗体包括包含氨基酸序列SEQ ID NO:57的V_H以及包含氨基酸序列SEQ ID NO:71的V_L。在一些实施例中，所述抗PcrV抗体包括V_H，其包含具有氨基酸序列SEQID NO:57的V_H中的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及V_L，其包含具有氨基酸序列SEQ IDNO:71的V_L中的HC-CDR1、HC- CDR2和HC-CDR3。

在一些实施例中，所述抗PcrV抗体包括：V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQID NO:1的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:4的 HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:11的HC-CDR3，或者在HC- CDRs中包含至多5个氨基酸取代的V_H变体；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:21的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ IDNO: 28的LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:37的LC-CDR3，或者在 LC-CDRs中包含至多5个氨基酸取代的V_L变体。

在一些实施例中，所述抗PcrV抗体包括：V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQID NO:1的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:4的 HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:11的HC-CDR3；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:21的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:28的LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:37的 LC-CDR3。在一些实施例中，提供了一种可特异性与如下抗体竞争的抗PcrV 抗体，所述抗体包括：V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:1 的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:4的HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:11的HC-CDR3；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:21的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ IDNO:28的 LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:37的LC-CDR3。在一些实施例中，提供了一种与如下抗体结合相同表位的抗PcrV抗体，所述抗体包括： V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:1的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:4的HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO: 11的HC-CDR3；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQID NO:21 的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:28的LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:37的LC-CDR3。

在一些实施例中，所述抗PcrV抗体包括V_H，所述V_H包含氨基酸序列 SEQ ID NO:54，或包含与氨基酸序列SEQ ID NO:54具有至少90％(例如至少 91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％)序列同源性的变体序列，以及V_L，所述V_L包含氨基酸序列SEQ IDNO:72，或包含与氨基酸序列 SEQ ID NO:72具有至少90％序列同源性的变体序列。在一些实施例中，所述抗PcrV抗体包括包含氨基酸序列SEQ ID NO:54的V_H以及包含氨基酸序列SEQ ID NO:72的V_L。在一些实施例中，所述抗PcrV抗体包括V_H，其包含具有氨基酸序列SEQID NO:54的V_H中的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及V_L，其包含具有氨基酸序列SEQ IDNO:72的V_L中的HC-CDR1、HC- CDR2和HC-CDR3。

在一些实施例中，所述抗PcrV抗体包括：V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQID NO:1的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:2的 HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:11的HC-CDR3，或者在HC- CDRs中包含至多5个氨基酸取代的V_H变体；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:22的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ IDNO: 28的LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:38的LC-CDR3，或者在 LC-CDRs中包含至多5个氨基酸取代的V_L变体。

在一些实施例中，所述抗PcrV抗体包括：V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQID NO:1的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:2的 HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:11的HC-CDR3；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:22的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:28的LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:38的 LC-CDR3。在一些实施例中，提供了一种可特异性与如下抗体竞争的抗PcrV 抗体，所述抗体包括：V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:1 的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:2的HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:11的HC-CDR3；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:22的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ IDNO:28的LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:38的LC-CDR3。在一些实施例中，提供了一种与如下抗体结合相同表位的抗PcrV抗体，所述抗体包括： V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:1的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:2的HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO: 11的HC-CDR3；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQID NO:22 的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:28的LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:38的LC-CDR3。

在一些实施例中，所述抗PcrV抗体包括V_H，所述V_H包含氨基酸序列 SEQ ID NO:56，或包含与氨基酸序列SEQ ID NO:56具有至少90％(例如至少 91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％)序列同源性的变体序列，以及V_L，所述V_L包含氨基酸序列SEQ IDNO:73，或包含与氨基酸序列 SEQ ID NO:73具有至少90％序列同源性的变体序列。在一些实施例中，所述抗PcrV抗体包括包含氨基酸序列SEQ ID NO:56的V_H以及包含氨基酸序列SEQ ID NO:73的V_L。在一些实施例中，所述抗PcrV抗体包括V_H，其包含具有氨基酸序列SEQID NO:56的V_H中的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及V_L，其包含具有氨基酸序列SEQ IDNO:73的V_L中的HC-CDR1、HC- CDR2和HC-CDR3。

在一些实施例中，所述抗PcrV抗体包括：V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQID NO:1的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:7的 HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:11的HC-CDR3，或者在HC- CDRs中包含至多5个氨基酸取代的V_H变体；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:23的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ IDNO: 27的LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:39的LC-CDR3，或者在 LC-CDRs中包含至多5个氨基酸取代的V_L变体。

在一些实施例中，所述抗PcrV抗体包括：V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQID NO:1的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:7的 HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:11的HC-CDR3；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:23的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:27的LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:39的LC-CDR3。在一些实施例中，提供了一种可特异性与如下抗体竞争的抗PcrV 抗体，所述抗体包括：V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:1 的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:7的HC-CDR2，以及一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:11的HC-CDR3；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:23的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ IDNO:27的 LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:39的LC-CDR3。在一些实施例中，提供了一种与如下抗体结合相同表位的抗PcrV抗体，所述抗体包括： V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:1的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:7的HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO: 11的HC-CDR3；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQID NO:23 的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:27的LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:39的LC-CDR3。

在一些实施例中，所述抗PcrV抗体包括V_H，所述V_H包含氨基酸序列 SEQ ID NO:58，或包含与氨基酸序列SEQ ID NO:58具有至少90％(例如至少 91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％)序列同源性的变体序列，以及V_L，所述V_L包含氨基酸序列SEQ IDNO:74，或包含与氨基酸序列 SEQ ID NO:74具有至少90％序列同源性的变体序列。在一些实施例中，所述抗PcrV抗体包括包含氨基酸序列SEQ ID NO:58的V_H以及包含氨基酸序列SEQ ID NO:74的V_L。在一些实施例中，所述抗PcrV抗体包括V_H，其包含具有氨基酸序列SEQID NO:58的V_H中的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及V_L，其包含具有氨基酸序列SEQ IDNO:74的V_L中的HC-CDR1、HC- CDR2和HC-CDR3。

在一些实施例中，所述抗PcrV抗体包括：V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQID NO:1的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:8的 HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:11的HC-CDR3，或者在HC- CDRs中包含至多5个氨基酸取代的V_H变体；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:21的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ IDNO: 28的LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:40的LC-CDR3，或者在 LC-CDRs中包含至多5个氨基酸取代的V_L变体。

在一些实施例中，所述抗PcrV抗体包括：V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQID NO:1的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:8的 HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:11的HC-CDR3；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:21的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:28的LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:40的 LC-CDR3。在一些实施例中，提供了一种可特异性与如下抗体竞争的抗PcrV 抗体，所述抗体包括：V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:1 的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:8的HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:11的HC-CDR3；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:21的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ IDNO:28的 LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:40的LC-CDR3。在一些实施例中，提供了一种与如下抗体结合相同表位的抗PcrV抗体，所述抗体包括： V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:1的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:8的HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO: 11的HC-CDR3；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQID NO:21 的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:28的LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:40的LC-CDR3。

在一些实施例中，所述抗PcrV抗体包括V_H，所述V_H包含氨基酸序列 SEQ ID NO:59，或包含与氨基酸序列SEQ ID NO:59具有至少90％(例如至少 91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％)序列同源性的变体序列，以及V_L，所述V_L包含氨基酸序列SEQ IDNO:75，或包含与氨基酸序列 SEQ ID NO:75具有至少90％序列同源性的变体序列。在一些实施例中，所述抗PcrV抗体包括包含氨基酸序列SEQ ID NO:59的V_H以及包含氨基酸序列SEQ ID NO:75的V_L。在一些实施例中，所述抗PcrV抗体包括V_H，其包含具有氨基酸序列SEQID NO:59的V_H中的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及V_L，其包含具有氨基酸序列SEQ IDNO:75的V_L中的HC-CDR1、HC- CDR2和HC-CDR3。

在一些实施例中，所述抗PcrV抗体包括：V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQID NO:1的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:6的HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:11的HC-CDR3，或者在HC- CDRs中包含至多5个氨基酸取代的V_H变体；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:24的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ IDNO: 28的LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:41的LC-CDR3，或者在 LC-CDRs中包含至多5个氨基酸取代的V_L变体。

在一些实施例中，所述抗PcrV抗体包括：V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQID NO:1的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:6的 HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:11的HC-CDR3；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:24的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:28的LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:41的 LC-CDR3。在一些实施例中，提供了一种可特异性与如下抗体竞争的抗PcrV 抗体，所述抗体包括：V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:1 的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:6的HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:11的HC-CDR3；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:24的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ IDNO:28的 LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:41的LC-CDR3。在一些实施例中，提供了一种与如下抗体结合相同表位的抗PcrV抗体，所述抗体包括： V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:1的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:6的HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO: 11的HC-CDR3；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQID NO:24 的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:28的LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:41的LC-CDR3。

在一些实施例中，所述抗PcrV抗体包括V_H，所述V_H包含氨基酸序列 SEQ ID NO:57，或包含与氨基酸序列SEQ ID NO:57具有至少90％(例如至少 91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％)序列同源性的变体序列，以及V_L，所述V_L包含氨基酸序列SEQ IDNO:76，或包含与氨基酸序列 SEQ ID NO:76具有至少90％序列同源性的变体序列。在一些实施例中，所述抗PcrV抗体包括包含氨基酸序列SEQ ID NO:57的V_H以及包含氨基酸序列SEQ ID NO:76的V_L。在一些实施例中，所述抗PcrV抗体包括V_H，其包含具有氨基酸序列SEQID NO:57的V_H中的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及V_L，其包含具有氨基酸序列SEQ IDNO:76的V_L中的HC-CDR1、HC- CDR2和HC-CDR3。

在一些实施例中，所述抗PcrV抗体包括：V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQID NO:1的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:9的 HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:11的HC-CDR3，或者在HC- CDRs中包含至多5个氨基酸取代的V_H变体；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:25的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ IDNO: 29的LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:42的LC-CDR3，或者在 LC-CDRs中包含至多5个氨基酸取代的V_L变体。

在一些实施例中，所述抗PcrV抗体包括：V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQID NO:1的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:9的 HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:11的HC-CDR3；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:25的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:29的LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:42的 LC-CDR3。在一些实施例中，提供了一种可特异性与如下抗体竞争的抗PcrV 抗体，所述抗体包括：V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:1 的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:9的HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:11的HC-CDR3；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:25的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ IDNO:29的 LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:42的LC-CDR3。在一些实施例中，提供了一种与如下抗体结合相同表位的抗PcrV抗体，所述抗体包括： V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:1的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:9的HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO: 11的HC-CDR3；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQID NO:25 的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:29的LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:42的LC-CDR3。

在一些实施例中，所述抗PcrV抗体包括V_H，所述V_H包含氨基酸序列 SEQ ID NO:60，或包含与氨基酸序列SEQ ID NO:60具有至少90％(例如至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％)序列同源性的变体序列，以及V_L，所述V_L包含氨基酸序列SEQ IDNO:77，或包含与氨基酸序列 SEQ ID NO:77具有至少90％序列同源性的变体序列。在一些实施例中，所述抗PcrV抗体包括包含氨基酸序列SEQ ID NO:60的V_H以及包含氨基酸序列SEQ ID NO:77的V_L。在一些实施例中，所述抗PcrV抗体包括V_H，其包含具有氨基酸序列SEQID NO:60的V_H中的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及V_L，其包含具有氨基酸序列SEQ IDNO:77的V_L中的HC-CDR1、HC- CDR2和HC-CDR3。

在一些实施例中，所述抗PcrV抗体包括：V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQID NO:1的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:9的 HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:11的HC-CDR3，或者在HC- CDRs中包含至多5个氨基酸取代的V_H变体；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:17的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ IDNO: 27的LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:43的LC-CDR3，或者在 LC-CDRs中包含至多5个氨基酸取代的V_L变体。

在一些实施例中，所述抗PcrV抗体包括：V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQID NO:1的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:9的 HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:11的HC-CDR3；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:17的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:27的LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:43的 LC-CDR3。在一些实施例中，提供了一种可特异性与如下抗体竞争的抗PcrV 抗体，所述抗体包括：V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:1 的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:9的HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:11的HC-CDR3；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:17的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ IDNO:27的 LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:43的LC-CDR3。在一些实施例中，提供了一种与如下抗体结合相同表位的抗PcrV抗体，所述抗体包括： V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:1的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:9的HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO: 11的HC-CDR3；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQID NO:17 的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:27的LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:43的LC-CDR3。

在一些实施例中，所述抗PcrV抗体包括V_H，所述V_H包含氨基酸序列 SEQ ID NO:60，或包含与氨基酸序列SEQ ID NO:60具有至少90％(例如至少 91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％)序列同源性的变体序列，以及V_L，所述V_L包含氨基酸序列SEQ IDNO:78，或包含与其具有至少 90％序列同源性的变体序列。在一些实施例中，所述抗PcrV抗体包括包含氨基酸序列SEQ ID NO:60的V_H以及包含氨基酸序列SEQ ID NO:78的V_L。在一些实施例中，所述抗PcrV抗体包括V_H，其包含具有氨基酸序列SEQ ID NO: 60的V_H中的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及V_L，其包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:78的V_L中的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3。

在一些实施例中，所述抗PcrV抗体包括：V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQID NO:1的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:2的 HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:11的HC-CDR3，或者在HC- CDRs中包含至多5个氨基酸取代的V_H变体；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:17的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ IDNO: 27的LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:44的LC-CDR3，或者在 LC-CDRs中包含至多5个氨基酸取代的V_L变体。

在一些实施例中，所述抗PcrV抗体包括：V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQID NO:1的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:2的 HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:11的HC-CDR3；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:17的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:27的LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:44的 LC-CDR3。在一些实施例中，提供了一种可特异性与如下抗体竞争的抗PcrV 抗体，所述抗体包括：V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:1 的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:2的HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:11的HC-CDR3；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:17的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ IDNO:27的LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:44的LC-CDR3。在一些实施例中，提供了一种与如下抗体结合相同表位的抗PcrV抗体，所述抗体包括： V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:1的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:2的HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO: 11的HC-CDR3；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQID NO:17 的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:27的LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:44的LC-CDR3。

在一些实施例中，所述抗PcrV抗体包括V_H，所述V_H包含氨基酸序列 SEQ ID NO:56，或包含与其具有至少90％(例如至少91％、92％、93％、 94％、95％、96％、97％、98％或99％)序列同源性的变体序列，以及V_L，所述V_L包含氨基酸序列SEQ ID NO:79，或包含与氨基酸序列SEQ ID NO:79具有至少90％序列同源性的变体序列。在一些实施例中，所述抗PcrV抗体包括包含氨基酸序列SEQ ID NO:56的V_H以及包含氨基酸序列SEQ ID NO:79的V_L。在一些实施例中，所述抗PcrV抗体包括V_H，其包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:56的V_H中的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及V_L，其包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:79的V_L中的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3。

在一些实施例中，所述抗PcrV抗体包括：V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQID NO:1的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:7的 HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:12的HC-CDR3，或者在HC- CDRs中包含至多5个氨基酸取代的V_H变体；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:23的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ IDNO: 27的LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:39的LC-CDR3，或者在 LC-CDRs中包含至多5个氨基酸取代的V_L变体。

在一些实施例中，所述抗PcrV抗体包括：V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQID NO:1的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:7的 HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:12的HC-CDR3；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:23的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:27的LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:39的 LC-CDR3。在一些实施例中，提供了一种可特异性与如下抗体竞争的抗PcrV 抗体，所述抗体包括：V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:1 的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:7的HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:12的HC-CDR3；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:23的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ IDNO:27的 LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:39的LC-CDR3。在一些实施例中，提供了一种与如下抗体结合相同表位的抗PcrV抗体，所述抗体包括： V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:1的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:7的HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO: 12的HC-CDR3；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQID NO:23 的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:27的LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:39的LC-CDR3。

在一些实施例中，所述抗PcrV抗体包括V_H，所述V_H包含氨基酸序列 SEQ ID NO:60，或包含与氨基酸序列SEQ ID NO:60具有至少90％(例如至少 91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％)序列同源性的变体序列，以及V_L，所述V_L包含氨基酸序列SEQ IDNO:74，或包含与氨基酸序列 SEQ ID NO:74具有至少90％序列同源性的变体序列。在一些实施例中，所述抗PcrV抗体包括包含氨基酸序列SEQ ID NO:60的V_H以及包含氨基酸序列SEQ ID NO:74的V_L。在一些实施例中，所述抗PcrV抗体包括V_H，其包含具有氨基酸序列SEQID NO:61的V_H中的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及V_L，其包含具有氨基酸序列SEQ IDNO:74的V_L中的HC-CDR1、HC- CDR2和HC-CDR3。

在一些实施例中，所述抗PcrV抗体包括：V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQID NO:1的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:9的 HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:12的HC-CDR3，或者在HC- CDRs中包含至多5个氨基酸取代的V_H变体；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:17的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ IDNO: 27的LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:43的LC-CDR3，或者在 LC-CDRs中包含至多5个氨基酸取代的V_L变体。

在一些实施例中，所述抗PcrV抗体包括：V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQID NO:1的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:9的 HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:12的HC-CDR3；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:17的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:27的LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:43的 LC-CDR3。在一些实施例中，提供了一种可特异性与如下抗体竞争的抗PcrV 抗体，所述抗体包括：V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:1 的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:9的HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:12的HC-CDR3；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:17的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ IDNO:27的 LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:43的LC-CDR3。在一些实施例中，提供了一种与如下抗体结合相同表位的抗PcrV抗体，所述抗体包括： V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:1的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:9的HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO: 12的HC-CDR3；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQID NO:17 的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:27的LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:43的LC-CDR3。

在一些实施例中，所述抗PcrV抗体包括V_H，所述V_H包含氨基酸序列 SEQ ID NO:63，或包含与氨基酸序列SEQ ID NO:63具有至少90％(例如至少 91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％)序列同源性的变体序列，以及V_L，所述V_L包含氨基酸序列SEQ IDNO:78，或包含与氨基酸序列 SEQ ID NO:78具有至少90％序列同源性的变体序列。在一些实施例中，所述抗PcrV抗体包括包含氨基酸序列SEQ ID NO:63的V_H以及包含氨基酸序列SEQ ID NO:78的V_L。在一些实施例中，所述抗PcrV抗体包括V_H，其包含具有氨基酸序列SEQID NO:63的V_H中的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及V_L，其包含具有氨基酸序列SEQ IDNO:78的V_L中的HC-CDR1、HC- CDR2和HC-CDR3。

在一些实施例中，可以利用竞争实验来鉴定与本文所述的抗PcrV抗体竞争性结合PcrV的单克隆抗体。竞争实验可以通过识别相同的或空间上重叠的表位或者通过一个抗体竞争性抑制另一抗体与抗原结合来确定两个抗体是否结合相同的表位。在某些实施例中，这种竞争性抗体与本文所述的抗体结合相同的表位。一些示例性的竞争实验包括，但不限于如Harlow and Lane(1988) Antibodies:A Laboratory Manual ch.14(ColdSpring Harbor Laboratory，Cold Spring Harbor,N.Y.)中所提到的常规实验。用于解析抗体结合的表位的详细示例性方法如Morris(1996)"Epitope Mapping Protocols，"inMethods in Molecular Biology vol.66(Humana Press,Totowa,N.J.)中所述。在一些实施例中，如果每种抗体阻断另一种抗体结合的50％或更多，则称其结合相同的表位。在一些实施例中，与本文所述的抗PcrV抗体竞争的抗体是嵌合、人源化或全人的抗体。

示例性抗PcrV抗体序列如表2和表3所示。本领域技术人员将认识到有多种已知算法来预测CDR的位置以及界定抗体轻、重链可变区。包含如本文所述抗PcrV抗体的CDRs、V_H和/或V_L序列，但基于预测算法而非下表中所示例的抗体也在本申请的范围内。

结合亲和力

结合亲和力可以采用Kd、Koff、Kon或Ka来表示。如本文所用，术语 “Koff”是指抗体从抗原/抗体复合物中解离的速率常数，通过动力学选择装置测定。术语“Kon”是指抗体与抗原结合形成抗原/抗体复合物的结合速率常数。本文所用的解离常数“Kd”是指特定抗体抗原相互作用时的解离常数，是指在抗体分子溶液中，抗原占据所有抗体结合位点的一半并且达到平衡时所需的抗原浓度，等于Koff/Kon。Kd的测定假设所有的结合分子均在溶液中。抗体与细胞壁连接的情况，例如在酵母表达系统中，相应的解离速率常数采用 EC50来表示，其是Kd的一个良好的近似值。亲和结合常数Ka是解离常数Kd 的倒数。

平衡解离常数(Kd)可以作为反应抗体部分与抗原亲和力的指标。例如，可以通过Scatchard方法使用标记有各种标记物的抗体，和Biacore仪器(由 Amersham Biosciences制造)进行简单分析，根据用户手册或附带试剂盒，通过表面等离子体共振来分析生物分子间的相互作用。使用这些方法得到的Kd 值，用单位M来表示。与靶标特异性结合的抗体可能具有，例如≤10^-7M、≤ 10^-8M、≤10^-9M、≤10^-10M、≤10^-11M、≤10^-12M或≤10^-13M的Kd值。

抗体的结合特异性可以通过本领域已知的方法进行实验测定。这些方法包括，但不限于Western blots、ELISA-、RIA-、ECL-、IRMA-、EIA-、BIAcore 测试和肽扫描等。

在一些实施例中，所述抗PcrV抗体特异性结合PcrV靶标，其Kd值为10^-7M至10^-13M(例如10^-7M至10^-13M、10^-8M至10^-13M、10^-9M至10^-13M或 10^-10M至10^-12M)。因此，在一些实施例中，抗PcrV抗体与PcrV之间结合的Kd值为10^-7M至10^-13M、1×10^-7M至5×10^-13M、10^-7M至10^- ¹²M、 10^-7M至10^-11M、10^-7M至10^-10M、10^-7M至10^-9M、10^-8M至10^-13M、 1×10^-8M至5×10^-13M、10^-8M至10^-12M、10^-8M至10^-11M、10^-8M至 10^-10M、10^-8M至10^-9M、5×10^-9M至1×10^-13M、5×10^-9M至1×10^-12M、 5×10^-9M至1×10^-11M、5×10^-9M-1×10^-10M、10^-9M至10^-13M、10^-9M至 10^-12M、10^-9M至10^-11M、10^-9M至10^-10M、5×10^-10M至1×10^-13M、 5×10^-10M至1×10^-12M、5×10^-10M至1×10^-11M、10^-10M至10^-13M、1×10^-10M 至5×10^-13M、1×10^-10M至1×10^-12M、1×10^-10M至5×10^-12M、1×10^-10M至 1×10^-11M、10^-11M至10^-13M、1×10^-11M至5×10^-13M、10^-11M至10^-12M、 10^-12M至10^-13M。在一些实施例中，抗PcrV抗体与PcrV之间结合的Kd值为10^-7M至10^-13M。

在一些实施例中，抗PcrV抗体与非靶标之间结合的Kd值高于抗PcrV抗体与靶标的Kd值，并且本文中引用的一些实施例中，抗PcrV抗体与靶标(例如，PcrV)的结合亲和力高于PcrV抗体与非靶标的结合亲和力。一些实施例中，非靶标是指非PcrV抗原。在一些实施例中，抗PcrV抗体(针对PcrV)与非PcrV靶标结合的Kd值是抗PcrV抗体和靶标PcrV之间结合的Kd的至少10 倍，例如10-100倍、100-1000倍、10³-10⁴倍、10⁴-10⁵倍、10⁵-10⁶倍、10⁶-10⁷倍、10⁷-10⁸倍、10⁸-10⁹倍、10⁹-10¹⁰倍、10¹⁰-10¹¹倍、10¹¹-10¹²倍。

核酸

编码抗PcrV抗体的核酸分子也被考虑在内。在一些实施例中，提供一种 (或一组)编码全长抗PcrV抗体的核酸，包括本文所述的任一种全长抗PcrV 抗体。在一些实施例中，本文所述的抗PcrV抗体的核酸(或一组核酸)还可以包括编码多肽标签的核酸序列(例如蛋白纯化标签，His-标签、HA标签)。

同时本文还考虑了包含抗PcrV抗体的分离的宿主细胞，编码抗PcrV抗体多肽组分的分离的核酸，或者包含编码本文所述的抗PcrV抗体多肽组分的核酸的载体。

本申请还包括这些核酸序列的变体。例如，变体包括至少在中等严格杂交条件下与编码本申请的抗PcrV抗体的核酸序列杂交的核苷酸序列。

本申请同时还提供可将本申请中核酸序列插入到其中的载体。

简言之，将编码抗PcrV抗体的天然或合成的核酸插入到合适的表达载体中，使得核酸可操作性的连接到5’和3’端调控元件，例如包括启动子(例如淋巴细胞特异性启动子)和3’非翻译区(UTR)，可表达抗PcrV抗体(例如全长的抗PcrV抗体)。所述载体可适用于在真核宿主细胞中复制和整合。典型的克隆与表达载体包含调控目标核酸序列的表达的转录和翻译终止子、起始序列和启动子。

本申请所述的核酸也可以通过使用标准的基因递送方案，用于核酸免疫和基因治疗。核酸递送方法是本领域已知的。例如参见U.S.Pat.Nos.5,399,346、 5,580,859、5,589,466，通过引用其全部内容并入本文。在一些实施例中，本申请还提供基因治疗载体。

可以将核酸克隆到许多类型的载体中。例如，可以将核酸克隆到载体中，所述载体包括，但不限于，质粒、噬菌粒、噬菌体衍生物、动物病毒和柯斯质粒。特别感兴趣的载体包括表达载体、复制载体、探针生成载体和测序载体。

此外，表达载体可以以病毒载体的形式提供给细胞。病毒载体技术是本领域熟知的，并且描述于例如Green and Sambrook(2013,Molecular Cloning:A LaboratoryManual,Cold Spring Harbor Laboratory,New York)，以及其它病毒学或分子生物学手册中。可用作载体的病毒包括，但不限于，逆转录病毒、腺病毒、腺相关病毒、疱疹病毒和慢病毒。通常，合适的载体包括一个在至少一种生物体中起作用的复制起点、启动子序列、方便的限制性内切酶位点以及一个或多个选择标记物(参见例如，WO 01/96584；WO 01/29058；和U.S.Pat.No. 6,326,193)

已经开发了许多基于病毒的系统，用于将基因转移到哺乳动物细胞中。例如，逆转录病毒为基因递送系统提供了便利的平台。可以应用本领域已知的技术，将选择的基因插入载体中并包装在逆转录病毒颗粒中。然后分离重组病毒，在体内或体外递送至受试者的细胞中。许多逆转录病毒系统在本领域中是已知的。在一些实施例中，使用腺病毒载体。许多腺病毒载体在本领域中是已知的。在一些实施例中，使用慢病毒载体。衍生自逆转录病毒的载体，例如慢病毒，是实现长期基因转移的合适工具，因为它们使得转基因长期稳定的整合以及在子代细胞中繁殖。慢病毒载体相对于衍生自肿瘤的逆转录病毒例如小鼠白血病病毒具有额外的优势，因为它们可以转导非分裂细胞，例如肝细胞。同时，其还具有低免疫原性的额外优势。

其它的启动子元件，例如，增强子，调控转录起始频率。通常它们位于起始位点上游30-110bp处，虽然最近发现很多启动子也包含起始位点下游的功能元件。启动子元件之间的间隔通常是灵活的，所以当元件彼此之间位置互换或移动时仍保持启动子的功能。在胸苷激酶(tk)启动子中，启动子元件之间的间隔增加到50bp，活性才会开始下降。

合适启动子的一个示例是即时早期巨细胞病毒(CMV)启动子序列。该启动子序列是一个很强的组成型启动子序列，可以驱动任何与其可操作性连接的多核苷酸序列高水平表达。合适启动子的另一个示例是延伸因子1α(EF-1α) 启动子。然而，也可以使用其它组成型启动子，包括但不限于，猿猴病毒40 (SV40)早期启动子、小鼠乳腺肿瘤病毒(MMTV)、人免病缺陷病毒长末端重复序列(HIV-LTR)启动子、MoMuLV启动子、禽类白血病病毒启动子、Epstein-Barr病毒即刻早期启动子、劳斯氏肉瘤病毒启动子以及人类基因启动子，例如包括但不限于，肌动蛋白启动子、肌球蛋白启动子、血红蛋白启动子和肌酸激酶启动子。此外，不应将本申请局限在仅使用组成型启动子。诱导型启动子也是本申请考虑的部分。诱导型启动子的使用提供了一种分子开关，当需要这种表达时，能启动其与之可操作性连接的多核苷酸序列表达，当不需要时，则关闭表达。诱导型启动子，包含但不局限于，金属硫蛋白启动子、糖皮质激素启动子、孕酮启动子和四环素启动子。

在一些实施例中，抗PcrV抗体的表达是可诱导的。在一些实施例中，编码抗PcrV抗体的核酸序列可操作的连接到诱导型启动子上，包括本文所述的任一诱导型启动子。

诱导型启动子

诱导型启动子的使用提供了一种分子开关，当需要表达时，可启动与之可操作性连接的多核苷酸序列表达，而在不需要表达时，则关闭表达。真核细胞中适用的示例性诱导型启动子，包括但不限于，激素调节元件(例如，参见 Mader,S.and White,J.H.(1993)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90:5603-5607)、合成配体调节元件(参见Spencer,D.M.et al(1993)Science 262:1019-1024)以及电离辐射调控元件(参见Manome,Y.et al.(1993)Biochemistry 32:10607-10613； Datta,R.et al.(1992)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 89:1014-10153)。其它适用于体内或体外哺乳动物系统的示例性诱导型启动子参见Gingrichet al.(1998) Annual Rev.Neurosci 21:377-405。在一些实施例中，用于表达抗PcrV抗体的诱导型启动子系统为Tet系统。在一些实施例中，表达抗PcrV抗体的诱导型启动子系统为大肠杆菌lac抑制系统。

本申请所采用的一个示例性诱导型启动子系统为Tet系统。该系统是基于 Gossen等(1993)描述的Tet系统。在一个示例性实施例中，目标多核苷酸由包含一个或多个Tet操纵子(TetO)位点的启动子控制。在非激活状态，Tet阻遏物(TetR)与TetO位点结合并抑制启动子的转录。在激活状态，例如，在存在诱导剂如四环素(Tc)、无水四环素、多西环素(Dox)或其活性类似物的情况下，诱导剂会使TetR从TetO上释放，从而导致转录发生。多西环素是四环素抗生素家族中的一员，其化学名为1-二甲氨基-2,4a,5,7-五羟基-11-甲基-4,6-二氧基- 1,4a,11,11a,12,12a-六氢四烯-3-甲酰胺。

在一个实施例中，TetR经密码子优化适用于在哺乳动物细胞中表达，例如小鼠或人类细胞。由于遗传密码的简并性，大多数氨基酸由不止一个密码子编码，从而使得给定核酸的序列具有大量的变体，而其编码的氨基酸序列没有任何改变。然而，许多生物体在密码子使用方面存在差异，也称为“密码子偏好”(即，给定氨基酸使用特定密码子的偏好)。密码子偏好通常与特定密码子的优势tRNA种类的存在有关，反过来又提高了mRNA翻译的效率。因此可以通过密码子优化来定制源自特定物种的编码序列(例如，原核生物)，以提高其在不同物种(例如，真核生物)中的表达。

Tet系统的其它具体变体，包括以下的“Tet-Off”和“Tet-On”系统。在 Tet-off系统中，转录在Tc或Dox存在下是失活的。在该系统中，由TetR与单纯疱疹病毒VP16强转录激活结构域融合组成的四环素调控的转录激活蛋白 (tTA)，在四环素反应启动子元件(TRE)转录控制下调控靶核酸的表达。TRE元件由TetO序列串联与启动子(通常是来源于人巨细胞病毒即刻早期启动子的最小启动子序列)融合组成。在不存在Tc或Dox的情况下，tTA结合TRE并激活靶基因的转录。在存在Tc或Dox的情况下，tTA不能结合TRE，靶基因不能表达。

相反，在Tet-On系统中，转录在Tc或Dox存在下是激活的。Tet-On系统是基于反向四环素调控的转录激活因子rtTA。与tTA一样，rtTA是由TetR阻遏物与VP16反式激活域组成的融合蛋白。然而，TetR的DNA结合区中4个氨基酸的变化改变了rtTA的结合特性，使其在存在Dox的情况下只能识别靶转基因TRE上的tetO序列。所以在Tet-On系统中，只有在存在Dox的情况下，rtTA才能激活TRE调控的靶基因的转录。

另一种诱导型启动子系统是大肠杆菌的lac阻遏物系统(参见Brown et al.,Cell 49:603-612(1987))。Lac阻遏物系统通过调控与包含lac操纵子(lacO)的启动子可操作性连接的目标多核苷酸的转录发挥功能。Lac阻遏物(lacR)与 LacO结合，进而阻止目标多核苷酸的转录。通过合适的诱导剂来诱导目标多核苷酸的表达，例如，异丙基-β-D硫代半乳糖吡喃苷(IPTG)。

为了评估多肽或其部分的表达，待导入细胞的表达载体还可包含选择标记基因或报告基因或二者都有，以便于从病毒载体转染或感染的细胞群体中识别和选择表达细胞。在其他方面，选择标记可以携带在单独的DNA片段上并在共转染实验中使用。选择标记基因或报告基因都可侧接于合适的调控序列，使其在宿主细胞中能够表达。有用的选择标记包括，例如，抗生素耐药基因，如 neo以及类似基因。

报告基因可用于鉴定潜在的转染细胞和评价调控序列的功能。通常，报告基因是不存在于受体生物体或组织中或不由受体生物体或组织表达的基因，其编码一种多肽，其表达表现为一些易于检测的特性，例如酶活性。当DNA导入受体细胞后，在合适的时间检测报告基因的表达。合适的报告基因可包括编码荧光素酶、β-半乳糖苷酶、氯霉素乙酰转移酶、分泌碱性磷酸酶或绿色荧光蛋白的基因(e.g.,Ui-Tel et al.,2000FEBS Letters479:79-82)。合适的表达系统是公知的，可以通过已知的技术制备或通过商业途径获得。通常，把具有能够显示报告基因最高表达水平的最小5'侧翼区的构建体认定为启动子。此类启动子区可以与报告基因连接，并用于评估某些物质在调节启动子驱动的转录中能力。

在一些实施例中，提供编码本文所述的任一种全长抗PcrV抗体的核酸。在一些实施例中，所述核酸包括编码全长抗PcrV抗体重链和轻链的一个或多个核酸序列。在一些实施例中，所述一个或多个核酸序列中的每一个包含在单独的载体中。在一些实施例中，至少有一些核酸序列包含在同一载体中。在一些实施例中，所有核酸序列包含在同一载体中。载体可以选自，例如，哺乳动物表达载体和病毒载体(如源自逆转录病毒、腺病毒、腺相关病毒、疱疹病毒和慢病毒的载体)。

将基因导入细胞并表达的方法在本领域是已知的。在涉及表达载体的上下文中，通过本领域的任何方法载体可以很容易地导入宿主细胞中，如哺乳动物细胞、细菌、酵母或昆虫细胞。例如表达载体可以通过物理、化学或生物方法导入宿主细胞。

将多核苷酸导入宿主细胞的物理方法包括磷酸钙沉淀、脂质体转染、基因枪法、显微注射、电穿孔法以及诸如此类。制备包含载体和/或外源核酸的细胞的方法在本领域是熟知的。参见例如Green and Sambrook(2013,Molecular Cloning:A LaboratoryManual,Cold Spring Harbor Laboratory,New York)。在一些实施例中，通过磷酸钙转染法将多核苷酸导入宿主细胞。

将目标多核苷酸导入宿主细胞的生物学方法包括使用DNA和RNA载体。病毒载体，特别是逆转录病毒载体，已成为将基因插入哺乳动物细胞，例如人类细胞中的最广泛使用的方法。其它病毒载体可以源自慢病毒、痘病毒、单纯疱疹病毒1型、腺病毒和腺相关病毒等。参见如U.S.Pat.Nos.5,350,674和 5,585,362。

将多核苷酸导入宿主细胞的化学方法包括胶体分散系统，例如高分子复合物、纳米胶囊、微球、磁珠和以脂质为基础的系统，其包括水包油乳剂、胶团、混合胶团和脂质体。一种在体内和体外被用作递送载体的示例性胶体系统是脂质体(例如，人工膜囊)。

在使用非病毒递送系统的情况下，示例性的递送载体是脂质体。考虑使用脂质制剂将核酸导入宿主细胞(体外、离体或体内)。在另一方面，所述核酸可以与脂质结合。与脂质结合的核酸可被包裹进脂质体的水性内部，散布在脂质体的脂质双层内，通过与脂质体和寡核苷酸结合的连接分子连接在脂质体，包埋在脂质体中，与脂质体形成复合物，分散在含有脂质的溶液中，与脂质混合，与脂质结合，悬浮在脂质中，包含在胶束中或与胶束混合，或以其它方式与脂质结合。脂质、脂质/DNA或脂质/表达载体相关的组合物在溶液中不限于任何特定结构。例如，它们可能以双分子层结构、以胶束或以“塌陷”结构存在。它们也可以简单的分散在溶液中，可能形成大小或形状不均匀的聚集体。脂质是脂肪物质，可以是天然存在的或是合成的脂质。例如，脂质包括天然存在于细胞质中的脂肪滴，以及含有长链脂肪烃及其衍生物的一类化合物，例如脂肪酸、醇、胺、氨基醇和醛。

无论采用何种方法将外源核酸导入宿主细胞中或以其他方式将细胞暴露于本申请的抑制剂中，为了确认重组DNA序列存在于宿主细胞中，可以进行多种实验。这类实验包括例如本领域技术人员熟知的“分子生物学”实验。例如 Southern和Northern blotting，RT-PCR和PCR；“生物化学”实验，例如检测某一特定多肽是否存在或不存在，例如通过免疫学方法(ELISAs和Western blots)或者通过本文所述的实验来进行鉴定均落入本申请范围内。

抗PcrV抗体的制备

在一些实施例中，所述抗PcrV抗体是单克隆抗体或源于单克隆抗体。在一些实施例中，所述抗PcrV抗体包括来自单克隆抗体的V_H和V_L，或者其变体。在一些实施例中，所述抗PcrV抗体进一步包括来自单克隆抗体的C_H1和 C_L区域，或者其变体。单克隆抗体可以应用例如本领域已知的方法制备，包括杂交瘤细胞法、噬菌体展示方法或应用重组DNA法。此外，示例性的噬菌体展示法在本文及以下的实施例中进行了描述。

在杂交瘤细胞法中，通常用免疫剂免疫仓鼠、小鼠或其他适合的宿主动物，以引发产生或能够产生与免疫剂特异性结合的抗体的淋巴细胞。或者，可以在体外免疫淋巴细胞。免疫剂可包括目标蛋白的多肽或融合蛋白。通常，如果需要人源细胞，采用外周血淋巴细胞(PBLs)，而如果需要非人哺乳动物来源细胞，则会使用脾细胞或淋巴结细胞。使用适当的融合剂将淋巴细胞与永生细胞系进行融合，例如聚乙二醇，以形成杂交瘤细胞。永生细胞系通常是转化的哺乳动物细胞，尤其是啮齿类、牛科和人源的骨髓瘤细胞。通常使用大鼠或小鼠骨髓瘤细胞系。杂交瘤细胞可以在合适的培养基中进行培养，所述培养基优选含有一种或多种抑制未融合永生细胞生长或存活的物质。例如，如果亲本细胞缺乏次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(HGPRT或HPRT)，则杂交瘤细胞培养基通常包括次黄嘌呤、氨蝶呤和胸苷(HAT培养基)，该培养基能阻止 HGPRT缺陷细胞生长。

在一些实施例中，永生化细胞系有效融合，通过所选择的抗体生产细胞保证抗体高水平稳定表达，并且对某些培养基敏感，例如HAT培养基。在一些实施例中，永生细胞系是小鼠骨髓瘤细胞系，可以从例如，加利福尼亚圣地亚哥的索尔克细胞保藏中心和弗吉尼亚马纳萨斯的美国典型培养物保藏中心获得。同时还描述了人骨髓瘤和鼠-人杂交骨髓瘤细胞系用于制备人源单克隆抗体。

然后可以测定培养杂交瘤细胞的培养基中是否存在针对多肽的单克隆抗体。由杂交瘤细胞产生的单克隆抗体的结合特异性可以通过免疫沉淀法或体外结合实验确定，如放射性免疫测定法(RIA)或酶联免疫吸附法(ELISA)。此类技术或分析方法在本领域是已知的。单克隆抗体的结合亲和力可以通过例如 Munson and Pollard,Anal.Biochem.,107:220(1980)中所述的斯卡查德 (Scatchard)分析确定。

在鉴定出所需的杂交瘤细胞后，可以通过有限稀释法对目标克隆进行亚克隆，并通过标准方法进行培养。基于此目的适合的培养基包括，例如改良Eagle 培养基(DMEM)和RPMI-1640培养基。或者，杂交瘤细胞可以在哺乳动物体内以腹水的形式生长。

亚克隆分泌的单克隆抗体可以通过常规免疫球蛋白纯化方法从培养基或腹水中分离或纯化，例如蛋白A-琼脂糖凝胶、羟基磷灰石色谱层析、凝胶电泳、透析或亲和层析。

在一些实施例中，根据本文所述的任一抗PcrV抗体，所述抗PcrV抗体包含选自抗体文库(例如展示scFv或Fab片段的噬菌体文库)的克隆的序列。所述克隆可以通过筛选具有所需活性的抗体片段组合文库的方法进行鉴定。例如，本领域已知多种方法用于产生噬菌体展示文库以及筛选这些文库来获得所需结合特性的抗体。这些方法在例如Hoogenboom et al.,Methods in Molecular Biology 178:1-37(O'Brien et al.,ed.,Human Press,Totowa,N.J.,2001)中进行了综述，并且在例如McCafferty et al.,Nature348:552-554；Clackson et al.,Nature 352: 624-628(1991)；Marks et al.,J.Mol.Biol.222:581-597(1992)；Marks and Bradbury,Methods in Molecular Biology248:161-175(Lo,ed.,Human Press, Totowa,N.J.,2003)；Sidhu et al.,J.Mol.Biol.338(2):299-310(2004)；Lee et al.,J. Mol.Biol.340(5):1073-1093(2004)；Fellouse,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 101(34): 12467-12472(2004)；and Lee et al.,J.Immunol.Methods 284(1-2):119-132(2004)中进行了进一步描述。

在某些噬菌体展示方法中，通过聚合酶链式反应(PCR)分别克隆V_H和 V_L基因的所有组成成分，并在噬菌体文库中随机重组，然后筛选能够结合抗原的噬菌体，如Winter etal.,Ann.Rev.Immunol.,12:433-455(1994)中所述。噬菌体通常以scFv片段或以Fab片段形式展示抗体片段。免疫来源的文库噬菌体提供针对免疫原的高亲和力抗体而不需要构建杂交瘤细胞。或者，可以克隆天然库(例如来自人)，来提供针对多种非自身抗原和自身抗原的单一抗体来源，而不需任何免疫，如Griffiths et al.,EMBO J,12:725-734(1993)中所述。最后，天然文库也可以通过克隆来自干细胞的非重排V-gene片段，并使用包含随机序列的PCR引物编码CDR3高变区并且在体外完成重排的方法进行制备，如 Hoogenboomand Winter,J.Mol.Biol.,227:381-388(1992)中所述。描述人抗体噬菌体文库的专利出版物包括，例如U.S.Pat.No.5,750,373、和US Patent Publication Nos.2005/0079574、2005/0119455、2005/0266000、2007/0117126、 2007/0160598、2007/0237764、2007/0292936和2009/0002360。

通过噬菌体展示筛选文库中能够特异性结合靶标PcrV的抗PcrV抗体部分的方法来制备所述的抗PcrV抗体。该文库可以是人scFv噬菌体展示文库，具有至少1×10⁹(例如至少1×10⁹、2.5×10⁹、5×10⁹、7.5×10⁹、1×10¹⁰、2.5× 10¹⁰、5×10¹⁰、7.5×10¹⁰或1×10¹¹)种多样性的独特的人抗体片段。在一些实施例中，所述文库是人天然文库，通过从健康受试者的PMBCs和脾脏中提取的DNA构建，包含所有人重链和轻链亚家族。在一些实施例中，所述文库是人天然文库，通过从各种疾病患者体内分离的PMBCs中提取的DNA构建，例如自身免疫病的患者、癌症患者和感染性疾病的患者。在一些实施例中，所述文库是半合成的人文库，其中重链CDR3完全是随机的，所有氨基酸(除了半胱氨酸)以相同的概率存在于任何给定的位置。(参见,例如,Hoet,R.M.et al., Nat.Biotechnol.23(3):344-348,2005)。在一些实施例中，半合成的人文库的重链 CDR3长度在5到24个(例如5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、 16、17、18、19、20、21、22、23或24个)氨基酸之间。在一些实施例中，所述文库是全合成的噬菌体展示文库。在一些实施例中，所述文库是非人噬菌体展示文库。

对靶标PcrV具有高亲和力的噬菌体克隆可以通过噬菌体与靶标PcrV的迭代结合进行筛选，所述靶标PcrV与固相支持物结合(例如用于溶液淘选的珠子或用于细胞淘选的哺乳动物细胞)，接下来去除未结合的噬菌体，并洗脱特异性结合噬菌体。随后，洗脱结合的噬菌体克隆并用于感染合适的宿主细胞，例如E.coli XL1-Blue，进行表达和纯化。可以通过多轮淘选(例如，2、3、4、 5、6或更多轮)，例如溶液淘选、细胞淘选或两者结合以富集特异性结合PcrV 的噬菌体克隆。富集的噬菌体克隆与靶标PcrV的特异性结合可以通过本领域已知的任何方法进行检测，包括例如ELISA和FACS。

单克隆抗体也可以通过重组DNA方法进行制备，例如U.S.Patent No.4， 816,567中所述。编码本申请中所述单克隆抗体的DNA可以通过常规方法(例如通过能特异性结合编码鼠源抗体轻链和重链基因的寡聚核苷酸探针)轻易的分离和测序。如上所述的杂交瘤细胞或本申请的PcrV特异性噬菌体克隆可以作为这种DNA的来源。分离后，可将DNA置于表达载体中，然后该载体转染入宿主细胞，例如猿猴COS细胞、中华仓鼠卵巢癌(CHO)细胞或不产生免疫球蛋白的骨髓瘤细胞中，获得在重组宿主细胞中合成的单克隆抗体。所述DNA也可以被修饰，例如用人类重链和轻链恒定结构和/或框架区域的编码序列代替同源的非人类序列(美国专利号4,816,567；Morrison et al.，同上)，或者将非免疫球蛋白多肽的全部或部分编码序列共价连接到免疫球蛋白编码序列上。这种非免疫球蛋白多肽可以取代本申请中抗体的恒定区，或可以取代本申请中抗体可变域中的一个抗原结合位点，形成嵌合的二价抗体。

所述抗体可以是单价抗体。制备单价抗体的方法是本领域已知的。例如，一种涉及免疫球蛋白轻链和修饰重链的重组表达方法。通常在Fc区的任意位置截短重链，以阻止重链相互交联。或者，相关的半胱氨酸残基被其它氨基酸残基取代或被缺失以防止交联。

体外方法也适用于制备单价抗体。消化抗体产生抗体片段，特别是Fab片段，可以使用任何本领域已知的方法完成。

具有所需结合特异性(抗体-抗原结合位点)的抗体可变域可以与免疫球蛋白恒定区融合。优选与免疫球蛋白重链恒定区进行融合，其包括至少部分铰链，CH2和CH3区。在一些实施例中，包含轻链结合必要位点的第一重链恒定区(CH1)至少出现在一种融合体中。编码免疫球蛋白重链融合体的DNA，如果需要，还可以包括编码免疫球蛋白轻链的DNA，被插入进独立的表达载体中，并共转染至合适的宿主生物中。

全人和人源化抗体

所述抗PcrV抗体(如全长的抗PcrV抗体)可以是人源化抗体或全人抗体。非人(如小鼠)抗体部分的人源化形式是嵌合的免疫球蛋白、免疫球蛋白链或其片段(例如Fv、Fab、Fab’、F(ab’)₂、scFv或抗体的其他抗原结合子序列)，其通常包括最少的源于非人免疫球蛋白的序列。人源化抗体包括人免疫球蛋白、免疫球蛋白链或其片段(受体抗体)，其中受体CDR的残基被具有所需特异性、亲和力和性能的非人源(供体抗体)CDR残基取代，例如小鼠、大鼠或兔子的CDR。在一些实施例中，人免疫球蛋白Fv框架区残基被相应的非人源残基取代。人源化抗体还可以包含既不属于受体抗体也不在引入的CDR或框架区序列中的氨基酸残基。通常，人源化抗体包含至少一个，通常两个可变域，其中全部或基本上全部CDR区对应于非人免疫球蛋白的CDR区，全部或基本上全部框架区是人免疫球蛋白共有序列。

通常，人源化抗体含有一个或多个从非人源引入的氨基酸残基。那些非人源氨基酸残基通常被称为“移入”残基，通常来自“移入”可变域。根据一些实施例，人源化基本上可以按照Winter和其同事的如下方法进行(Jones et al., Nature,321:522-525(1986)；Riechmann et al.,Nature,332:323-327(1988)； Verhoeyen et al.,Science,239:1534-1536(1988))，通过用啮齿动物CDRs或 CDR序列取代人源抗体的相应序列。因此，这种“人源化”抗体部分(U.S. Patent No.4,816,567)，其基本上少于完整的人源抗体，其可变域已被来自非人源的相应序列所取代。在实际中，人源化抗体部分是典型的人源抗体部分，其中一些CDR残基和可能的一些框架区残基被来自啮齿类抗体中类似位点的残基所取代。

全人抗体是人源化的一种替代方式。例如，目前可以制备在免疫后能够产生完整的全人抗体文库而不产生内源性免疫球蛋白的转基因动物(例如，小鼠)。例如，已有报道，嵌合和种系突变小鼠中抗体重链连接区(JH)基因的纯合子缺失，完全抑制了内源性抗体的产生。将人种系免疫球蛋白基因阵列转移到这种种系突变小鼠体内，可在抗原刺激下产生全人抗体，参见，例如 akobovits et al.,PNAS USA,90:2551(1993)；Jakobovits etal.,Nature,362:255-258 (1993)；Bruggemann et al.,Year in Immunol.,7:33(1993)；U.S.Patent Nos. 5,545,806,5,569,825,5,591,669；5,545,807；和WO 97/17852。或者，可以通过将人类免疫球蛋白基因座引入转基因动物中(例如内源性免疫球蛋白基因已经被部分或全部沉默的小鼠)来制备全人抗体。抗原刺激后，可以发现全人抗体的产生在各个方面都与其在人类中的产生非常相似，包括基因重排、组装和抗体文库。这种方法在例如U.S.Patent Nos.5,545,807；5,545,806；5,569,825； 5,625,126；5,633,425；and 5,661,016,and Marks et al.,Bio/Technology,10:779-783 (1992)；Lonberg et al.,Nature,368:856-859(1994)；Morrison,Nature,368:812-813 (1994)；Fishwild et al.,NatureBiotechnology,14:845-851(1996)；Neuberger,Nature Biotechnology,14:826(1996)；Lonberg and Huszar,Intern.Rev.Immunol.,13:65- 93(1995)中进行了描述。

全人抗体也以通过体外活化B细胞(见U.S.Patents 5,567,610和 5,229,275)或通过使用本领域已知的各种技术来产生，包括噬菌体展示文库。 Hoogenboom and Winter,J.Mol.Biol.,227:381(1991)；Marks et al.,J.Mol.Biol., 222:581(1991).Cole et al.和Boerner et al.等人的技术也可以用于制备全人单克隆抗体。见Cole et al.,Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy,Alan R.Liss,p. 77(1985)and Boerneret al.,J.Immunol.,147(1):86-95(1991)。

抗PcrV抗体变体

在一些实施例中，本文提供的抗PcrV抗体变体(例如，全长的抗PcrV抗体)的氨基酸序列也在考虑中。例如，可能需要改善抗体的结合亲和力和/或其它生物学活性。抗体变体的氨基酸序列可以通过在编码抗体的核苷酸序列中引入适当的修饰或通过肽合成来制备。此类修饰包括例如，抗体氨基酸序列中残基的缺失和/或插入和/或取代。可以通过氨基酸残基缺失、插入和取代的任一组合来完成最终的构建，使其具有所需的特征。例如，抗原结合性。

在一些实施例中，提供具有一个或多个氨基酸取代的抗PcrV抗体变体。取代突变的目标位点包括高变区(HVRs)和框架区(FRs)。可以在目标抗体中引入氨基酸取代，筛选所需活性的产物，例如，改善的生物活性，保持/改善抗原结合能力，降低的免疫原性，或改善对病原菌的调理吞噬杀(OPK)，例如，铜绿假单胞菌。

保守取代如下表5所示

根据侧链性质将氨基酸分为不同类别：

疏水氨基酸：去甲亮氨酸Norleucine、蛋氨酸Met、丙氨酸Ala、缬氨酸Val、亮氨酸Leu、异亮氨酸Ile；

中性亲水性氨基酸：半胱氨酸Cys、丝氨酸Ser、苏氨酸Thr、天冬酰胺Asn、谷氨酰胺Gln；

酸性氨基酸：天冬氨酸Asp、谷氨酸Glu；

碱性氨基酸：组氨酸His、赖氨酸Lys、精氨酸Arg；

影响链方向的氨基酸：甘氨酸Gly、脯氨酸Pro；

芳香族氨基酸：色氨酸Trp、酪氨酸Tyr、苯丙氨酸Phe。

非保守氨基酸的取代包含将以上一种类别取代为另一种类别。

一种示例性的取代变体是亲和力成熟的抗体，可采用例如以噬菌体展示为基础的亲和力成熟技术而方便地产生。简言之，将一个或多个CDR残基进行突变，变体抗体部分展示在噬菌体上，并筛选具有特定生物活性(例如，基于 RBC细胞裂解抑制实验或结合亲和力)的变体。可以在HVRs区进行改变(例如，取代)来获得改善的基于RBC裂解抑制实验或抗体亲和力。可以在HVR 的“热点区”产生改变，即在体细胞成熟过程中发生高频突变的密码子编码的残基(参见，例如Chowdhury,Methods Mol.Biol.207:179-196(2008))，和/或在特异的决定性残基(SDRs)，检测所得变体V_H和V_L的结合亲和力。从二级文库中构建和重新选择亲和力成熟的方法已经在一些文献中进行描述，例如，Hoogenboom et al.inMethods in Molecular Biology 178:1-37(O'Brien et al., ed.,Human Press,Totowa,NJ,(2001))。

在一些亲和力成熟的实施例中，通过多种方法中的任一种(例如易错 PCR，链改组或寡核苷酸定向突变)，将多样性引入选择的用于亲和力成熟的可变基因中。然后创建二级文库。对该文库进行筛选，鉴定出具有所需亲和力的抗体变体。另一种引入多样性的方法包括HVR介导的方式，其中几个HVR 残基(例如，一次4-6个残基)被随机化。涉及抗原结合的HVR残基被特异性地识别，例如，采用丙氨酸扫描诱变或建模。通常CDR-H3和CDR-L3区域尤其是重点靶标。

在一些实施例中，取代、插入或缺失可能发生在一个或多个HVRs内，只要这种改变基本上不降低抗体结合抗原的能力。例如，可以在HVRs中产生基本上不降低结合亲和力的保守性改变(例如，本文中提供的保守性取代)。这些改变可能发生在HVR“热点区”或SDRs区域之外。在一些实施例中上文提供的变体VH和VL序列，每一个HVR或者是未发生改变，或者包含不超过1 个、2个或3个氨基酸取代。

一种有用的可以鉴定出抗体中能被靶向性突变的氨基酸残基或区域的方法称为“丙氨酸扫描突变”，如Cunningham and Wells(1989)Science,244:1081- 1085中所述。在该方法中，一个或一组目标残基(例如，带电残基如精氨酸、天冬氨酸、组氨酸、赖氨酸和谷氨酸)被中性或带负电荷氨基酸(例如，丙氨酸或谷氨酸)取代，以此来确定抗体与抗原相互作用是否受到影响。可以在氨基酸的位置进一步引入取代，来证明该位置对初始取代具有功能敏感性。或者/ 另外，通过抗原-抗体复合物的晶体结构来鉴定抗体和抗原之间的接触位点。这些接触位点残基和邻近残基可作为取代候选物而被靶向或消除。筛选变体，确定它们是否具有所需要的性质。

氨基酸序列的插入，包括在氨基端和/或羧基末端的融合，长度范围从1个残基到包含100个或更多个残基的多肽，还包括在序列内插入1个或多个氨基酸残基。末端插入的例子包括N末端具有甲硫氨酰残基的抗体。抗体分子的其它插入变体，包括在抗体分子N-末端或C-末端融合一个酶(例如，ADEPT) 或增加抗体血清半衰期的多肽。

Fc区变体

在一些实施例中，将一个或多个氨基酸修饰引入本文所述的抗体(例如，全长抗PcrV抗体或抗PcrV抗体融合蛋白)的Fc区，从而产生Fc区变体。在一些实施例中，Fc区变体具有增强的ADCC效能，通常与结合Fc的受体 (FcRs)有关。在一些实施例中，Fc区变体具有降低的ADCC效能。有很多关于Fc序列的改变或突变影响其效能的例子，例如，WO 00/42072和Shields et al.J Biol.Chem.9(2):6591-6604(2001)描述了与FcRs的结合增强或减弱的抗体变体。这些出版物的内容通过引用并入本文。

抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用(ADCC)是治疗性抗体针对肿瘤细胞的作用机制。ADCC是细胞介导的免疫防御，当靶细胞膜表面的抗原被特异性抗体(例如，抗PcrV抗体)结合，免疫系统的效应细胞主动裂解靶细胞(例如，感染的细胞)。通常ADCC效应涉及由抗体激活的NK细胞。NK细胞表达Fc受体CD16。该受体识别并结合与靶细胞表面相结合的抗体分子的Fc部分。NK细胞表面最常见的Fc受体为CD16或FcγRIII。Fc受体与抗体Fc区的结合导致NK细胞的活化，细胞裂解颗粒的释放，及随后靶细胞的凋亡。

在一些实施例中，本申请还提供抗PcrV抗体变体(例如全长抗PcrV抗体变体)，其包含具有部分但不是全部的效应功能Fc区，使得其在体内具有延长的半衰期，然而特定的效应功能(例如CDC或ADCC)是非必需的或有害的，这种抗PcrV抗体成为本申请理想的候选。通过在体外和/或体内进行细胞毒性检测来确认CDC和/或ADCC活性的减少/消除。例如，通过Fc受体(FcR)结合试验来确认抗体缺乏FcγR结合能力(因此可能缺乏ADCC活性)但依然保留FcRn的结合能力。介导ADCC的主要细胞中，NK细胞仅表达FcγRIII，而单核细胞表达FcγRI、FcγRII和FcγRIII。Ravetch and Kinet Annu.Rev.Immunol. 9:457-492(1991)第464页的表3中总结了FcR在造血细胞上的表达。在体外评估目标分子的ADCC活性的非限制性实例在U.S.Pat.No.5,500,362中进行了描述(参见例如Hellstrom,I.etal.Proc.Nat'l Acad.Sci.USA 83:7059-7063(1986)) and Hellstrom,I et al.,Proc.Nat'l Acad.Sci.USA 82:1499-1502(1985)；U.S.Pat. No.5,821,337(seeBruggemann,M.et al.,J.Exp.Med.166:1351-1361(1987))。或者，可以采用非放射性检测方法(参见，例如ACTI^TM流式细胞术非放射性细胞毒性检测(CellTechnology,Inc.Mountain View,Calif.)和CYTOTOX 96^TM非放射性细胞毒性检测(Promega,Madison,Wis.))。此类检测实验采用的效应细胞包括外周血单核细胞(PBMC)和自然杀伤细胞(NK)。或者，另外地，目标分子的ADCC活性在体内进行检测，例如，在动物模型中，如Clynes etal. Proc.Nat'l Acad.Sci.USA 95:652-656(1998)中所述。同时还可以进行C1q结合试验来确认抗体不能与C1q结合，从而缺乏CDC活性。参见，例如 WO2006/029879和WO 2005/100402中C1q和C3c结合ELISA。为了评估补体激活情况，可进行CDC检测(参见，例如Gazzano-Santoro et al.,J. Immunol.Methods 202:163(1996)；Cragg,M.S.et al.,Blood 101:1045-1052(2003)；和Cragg,M.S.and M.J.Glennie,Blood 103:2738-2743(2004))。使用本领域已知的方法来测定FcRn结合和体内清除/半衰期(参见，例如，Petkova,S.B.et al., Int'l.Immunol.18(12):1759-1769(2006))。

具有降低的效应功能的抗体，包括在Fc区残基238、265、269、270、 297、327和329位进行一个或多个残基的取代(U.S.Pat.No.6,737,056)。这些Fc变体包括在265、269、270、297和327位进行两个或多个残基的取代的 Fc变体，包括被称为“DANA”的Fc变体，其在265和297位残基取代为丙氨酸 (U.S.Pat.No.7,332,581)。

这类与FcRs结合能力提高或降低的抗体变体已有描述(参见例如U.S.Pat. No.6,737,056；WO 2004/056312,和Shields et al.,J.Biol.Chem.9(2):6591-6604 (2001))。

在一些实施例中，Fc区的改变导致调理作用的改变(即增强或减弱)，参见Mooreet al.,MAbs.2(2):181–189(2010)中所述。

在一些实施例中，提供一种抗PcrV抗体(例如全长的抗PcrV抗体)变体，其包含具有一个或多个氨基酸取代的Fc区变体，能够延长半衰期和/或增强与Fc受体(FcRn)的结合。具有延长半衰期和改善FcRn结合的抗体在 US2005/0014934A1(Hinton等)中有所描述。这些抗体Fc区包含一个或多个氨基酸取代，增强了Fc区与FcRn的结合。这些Fc变体在Fc区包含238、256、 265、272、286、303、305、307、311、312、317、340、356、360、362、 376、378、380、382、413、424或434位的残基中的一个或多个取代，例如 Fc区434位残基的取代(U.S.Pat.No.7,371,826)。

同时参见Duncan&Winter,Nature 322:738-40(1988)；U.S.Pat.No. 5,648,260；U.S.Pat.No.5,624,821和WO 94/29351中提供其它Fc区变体的例子。

本申请考虑了包括本文所述的任一种Fc变体或其组合的抗PcrV抗体(例如全长抗PcrV抗体)。

糖基化变体

在一些实施例中，对本文所提供的抗PcrV抗体(例如全长抗PcrV抗体) 进行改变，以增加或降低抗PcrV抗体糖基化的程度。通过改变抗PcrV抗体或其多肽部分的氨基酸序列以此来增加或去除一个或多个糖基化位点，可以方便地实现添加或删除抗PcrV抗体上的糖基化位点。

其中抗PcrV抗体包含Fc区，可以改变与其连接的糖。由哺乳动物细胞产生的天然抗体通常包含分支的双触角寡糖，该寡糖通常通过N-连接与Fc区 CH2结构域Asn297连接，参见例如Wright et al.，TIBTECH 15:26-32(1997)。所述寡糖可包含多种糖类，例如甘露糖、N-乙酰氨基葡萄糖苷(GlcNAc)、半乳糖和唾液酸，以及与双触角寡糖结构“茎”部的GlcNAc相连接的海藻糖。在一些实施例中，可对本申请的抗PcrV抗体进行寡糖修饰，从而产生具有某些改进特性的抗PcrV抗体变体。

与Fc区的CH2结构域连接的N-聚糖是异质的。CHO细胞中产生的抗体或 Fc融合蛋白通过岩藻糖基转移酶活性被岩藻糖基化，参见Shoji-Hosaka et al.,J. Biochem.2006,140:777-83。通常，可以在人血清中检测出一小部分天然存在的非岩藻糖基化IgGs。Fc区的N-糖基化对于其与FcγR结合很重要；而非岩藻糖基化的N-聚糖增强了Fc与FcγRIIIa的结合能力。与FcγRIIIa结合能力增强使得ADCC效应增强，这在需要细胞毒性的某些抗体治疗应用中是有利的。

在一些实施例中，当不需要Fc介导的细胞毒作用时，增强的效应功能可能是有害的。在一些实施例中，Fc片段或CH2结构域是非糖基化的。在一些实施例中，通过对CH2结构域中的N-糖基化位点进行突变以阻止其糖基化。

在一些实施例中，提供抗PcrV抗体(例如全长的抗PcrV抗体)变体，其包含Fc区，其中连接于Fc区的糖类结构具有减少的岩藻糖或缺乏岩藻糖，这可能会增强ADCC功能。具体地，本文提供抗PcrV抗体，其相对于野生型 CHO细胞产生的相同抗PcrV抗体具有减少的岩藻糖。也就是说，它们的特征在于，与天然CHO细胞(例如，产生天然糖基化形式的CHO细胞，含有天然 FUT8基因的CHO细胞)产生的抗体相比，具有更少量的岩藻糖。在一些实施例中，所述抗PcrV抗体的N-连接聚糖具有少于50％、40％、30％、20％、10％或5％的岩藻糖。例如，该抗PcrV抗体的岩藻糖含量可能是1％-80％、1％- 65％、5％-65％或20％-40％。在一些实施例中，所述抗PcrV抗体的N-连接聚糖不包含岩藻糖，即，其中抗PcrV抗体完全不含岩藻糖，或没有岩藻糖或是去岩藻糖基化。岩藻糖的含量是通过计算连接到Asn297上的糖链内岩藻糖平均含量相对于通过MALDI-TOF质谱测量的所有连接在Asn297上的糖结构(如复合、杂交或甘露糖结构)的总量来确定的，如WO 2008/077546所述。

Asn297是指位于Fc区297位的天冬酰胺残基(EU Fc区残基编号体系)。然而，由于抗体的微小序列变化，Asn297也可位于297位的上游或下游±3个氨基酸，即在294和300位之间。这些岩藻糖基化变体可能具有增强的ADCC功能。参见例如US Patent PublicationNos.US 2003/0157108(Presta,L.)，US 2004/0093621(Kyowa Hakko Kogyo Co.,Ltd)。与“去岩藻糖基化”或“岩藻糖缺乏”的抗体变体相关的出版物的实例，包括US 2003/0157108；WO 2000/61739；WO 2001/29246；US 2003/0115614；US 2002/0164328；US 2004/0093621；US 2004/0132140；US 2004/0110704；US 2004/0110282；US 2004/0109865；WO2003/085119；WO 2003/084570；WO 2005/035586；WO 2005/035778；WO2005/053742；WO2002/031140；Okazaki et al.J.Mol.Biol. 336:1239-1249(2004)；Yamane-Ohnuki etal.Biotech.Bioeng.87:614(2004)。能够产生去岩藻糖基化抗体的细胞系包括缺乏蛋白岩藻糖基化功能的Lec13 CHO细胞(Ripka et al.Arch.Biochem.Biophys.249:533-545(1986)；US Pat Appl No US 2003/0157108 A1,Presta,L；和WO 2004/056312 A1,Adamset al.,尤其是实施例 11)，和基因敲除细胞系，例如α-1,6-岩藻糖基转移酶基因，FUT8基因敲除的 CHO细胞(参见Yamane-Ohnuki et al.Biotech.Bioeng.87:614(2004)；Kanda,Y.et al.,Biotechnol.Bioeng.,94(4):680-688(2006)；和WO2003/085107)。

抗PcrV抗体(例如全长抗PcrV抗体)变体进一步提供二等分寡糖，例如，其中连接于抗PcrV抗体Fc区的双触角寡糖被GlcNAc等分。这种抗PcrV 抗体(例如全长的抗PcrV抗体)变体可能具有减少的岩藻糖基化和/或增强的 ADCC功能。这类抗体变体的实例在WO2003/011878(Jean-Mairet et al.)；U.S. Pat.No.6,602,684(Umana et al.)；US 2005/0123546(Umana et al.),和Ferrara et al.,Biotechnology and Bioengineering,93(5):851-861(2006)中有所描述。还提供抗PcrV抗体(例如全长的抗PcrV抗体)变体，其在与Fc区连接的寡糖中具有至少一个半乳糖残基。这类抗PcrV抗体变体可能具有增强的CDC功能。这类变体在例如WO 1997/30087(Patel et al.)；WO 1998/58964(Raju,S.)；和WO1999/22764(Raju,S.)中有所描述。

在一些实施例中，所述抗PcrV抗体(例如全长抗PcrV抗体)变体包含能与FcγRIII相结合的Fc区。在一些实施例中，包含Fc区的所述抗PcrV抗体(例如全长抗PcrV抗体)变体在人效应细胞(例如T细胞)存在下具有 ADCC活性，或者与具有人野生型IgG1 Fc区的其他相同抗PcrV抗体(例如全长抗PcrV抗体)相比，在人效应细胞存在下，具有增强的ADCC活性。

半胱氨酸工程变体

在一些实施例中，需要制备半胱氨酸工程化的抗PcrV抗体(例如全长抗 PcrV抗体)，在该抗体中一个或多个氨基酸残基被半胱氨酸残基取代。在一些实施例中，取代残基出现在抗PcrV抗体的可及位点。通过用半胱氨酸取代那些残基，具有活性的巯基基团位于抗PcrV抗体的可及位点，可以用于将该抗 PcrV抗体与其它部分偶联，例如药物部分或接头-药物部分，来制备如本文中进一步描述的抗PcrV免疫偶联物。半胱氨酸工程化的抗PcrV抗体(例如，全长抗PcrV抗体)可以按照例如U.S.Pat.No.7,521,541所述进行制备。

衍生物

在一些实施例中，本文所提供的抗PcrV抗体(例如全长抗PcrV抗体)可进一步修饰以包含本领域已知并且容易获得的其它非蛋白部分。适用于衍生化抗PcrV抗体的部分包括但不限于，水溶性聚合物。水溶性聚合物的非限制性实例包括但不限于，聚乙二醇(PEG)、乙二醇/丙二醇共聚物、羧甲基纤维素、右旋糖酐、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚-1,3-二氧戊烷、聚-1,3,6-三氧杂环已烷、乙烯/马来酸酐共聚物、聚氨基酸(均聚物或无规共聚物)、右旋糖酐或聚(n- 乙烯基吡咯烷酮)聚乙二醇、丙二醇均聚物、环氧丙烷/环氧乙烷共聚物、聚氧乙基化多元醇(例如甘油)、聚乙烯醇及其混合物。聚乙二醇丙醛由于其在水中的稳定性，在制造中具有优势。聚合物可以具有任意分子量，可以是支链或非支链的。连接在抗PcrV抗体上的聚合物数量可以变化，并且如果连接多于一个多聚物，它们可以是相同的或不同的分子。通常，用于衍生化的聚合物的数量和/或类型可基于以下考虑因素来确定，包括但不限于，需要改进抗PcrV抗体的特性或功能，抗PcrV抗体衍生物是否用于特定条件下的治疗等。

在一些实施例中，提供了抗PcrV抗体(例如全长抗PcrV抗体)与非蛋白部分的偶合物，可能通过暴露于辐射而被选择性加热。在一些实施例中，非蛋白部分是碳纳米管(Kam et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 102:11600-11605 (2005))。辐射可以是任意波长，包括但不限于不伤害正常细胞的波长，但是在该波长下可加热非蛋白部分至杀死接近于抗PcrV抗体非蛋白部分偶合物的细胞的温度。

药物组合物

本文还提供包含任一种抗PcrV抗体(例如全长抗PcrV抗体)、编码抗体的核酸、包含编码抗体的核酸的载体或者包含本文所述的核酸或载体的宿主细胞的组合物(例如药物组合物，在这里也称为制剂)。在一些实施例中，提供一种药物组合物，包含本文所述的任一种抗PcrV抗体和药学上可接受的载体。

可通过混合具有所需纯度的抗PcrV抗体与任选的药学上可接受的载体、赋形剂或稳定剂(Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition,Osol,A.Ed. (1980))获得合适的抗PcrV抗体制剂，制备成冻干制剂或液体制剂形式。可接受的载体、赋形剂或稳定剂在所用剂量和浓度下对接受者无毒，包括缓冲剂如：磷酸盐、柠檬酸和其它有机酸；抗氧化剂，包括抗坏血酸和蛋氨酸；防腐剂(例如十八烷基二甲基苄基氯化铵；六甲基氯化铵；苯扎氯铵；苄索氯铵；苯酚；丁醇或苄醇；对羟基苯甲酸烷基酯，如对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯；邻苯二酚；间苯二酚；环己醇；3-戊醇和间甲酚)；低分子量(少于 10个残基)多肽；蛋白质，例如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白；亲水性聚合物，如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸，例如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、组氨酸、精氨酸或赖氨酸；单糖、二糖和其它碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合剂如EDTA；糖类，如蔗糖、甘露醇、海藻糖或山梨糖醇；成盐反离子如钠；金属复合物(如锌-蛋白复合物)；和/或非离子表面活性剂如TWEEN^TM，PLURONICS^TM或聚乙二醇(PEG)；示例性制剂如WO98/56418 中所述，并通过引用明确并入本文。适合皮下给药的冻干制剂在WO97/04801 中有所描述。这类冻干制剂可通过合适的稀释剂重构成高蛋白浓度的制剂，并且重构的制剂可以通过皮下给药的方式给予本文中待治疗个体。阳离子脂质体或脂质体可以用于将本申请中的抗PcrV抗体递送至细胞。

本文所述的制剂除包含抗PcrV抗体(例如全长抗PcrV抗体)之外，还可以包含一种或多种治疗特定病症所必要的其它活性物质，优选具有活性互补且彼此无不良反应的物质。例如，除了抗PcrV抗体之外，可能需要进一步包含抗肿瘤药、生长抑制剂、细胞毒性剂或化学治疗药物。这些分子以对预期目的有效的量组合存在。其它这些物质的有效量取决于制剂中的抗PcrV抗体的含量，疾病或病症或治疗的类型，以及如上所述的其它因素。这些药物通常以与本文描述的相同剂量和给药途径使用，或者以目前应用剂量的1％至99％使用。

所述抗PcrV抗体(例如，全长抗PcrV抗体)也可以包埋在例如通过凝聚技术和界面聚合制备的微胶囊中，例如分别在胶体药物递送系统(例如，脂质体、白蛋白微球、微乳液、纳米颗粒和纳米胶囊)中或粗乳液中的羟甲基纤维素或明胶-微胶囊和聚(甲基丙烯酸甲酯)微胶囊。可以制备缓释制剂。

可以制备抗PcrV抗体(例如，全长抗PcrV抗体)的缓释制剂。缓释制剂的适合的实例包括含有抗体(或其片段)的固体疏水聚合物半透性基质，这些基质是成型制品的形式，例如，薄膜或微胶囊。缓释基质的实例包括聚酯、水凝胶(例如，聚(2-羟乙基甲基丙烯酸酯)或聚(乙烯醇))、聚乳酸(U.S.Pat. No.3,773,919)，L-谷氨酸和L-谷氨酸乙酯共聚物，不可降解的乙烯-醋酸乙烯酯，可降解的乳酸-乙醇酸共聚物如LUPRON DEPOT^TM(由乳酸-乙醇酸共聚物和醋酸亮丙瑞林组成的可注射微球)以及聚-D(-)-3-羟基丁酸。虽然诸如乙烯-醋酸乙烯酯和乳酸-乙醇酸之类的聚合物可以使分子的释放超过100天，某些水凝胶可以在更短的时间内释放蛋白质。当包封的抗体在体内长时间停留时，它们会因暴露于37℃的潮湿环境中发生变性或聚集，可能导致生物活性的丧失或免疫原性的改变。可以根据相应的机制，设计合理的策略来稳定抗PcrV抗体。例如，如果发现聚集机制是通过硫代二硫化物交换形成分子间S-S键，则可以通过修饰巯基残基、在酸性溶液中冻干、控制含水量、使用适当的添加剂、以及开发特定的聚合物基质组合物来实现稳定化。

在一些实施例中，所述抗PcrV抗体(例如全长抗PcrV抗体)配制在含有柠檬酸盐、氯化钠、乙酸盐、琥珀酸盐、甘氨酸、聚山梨酯80(吐温80)或上述任何组合的缓冲液中。在一些实施例中，抗PcrV抗体配制在包含约100mM至约150mM甘氨酸的缓冲液中。在一些实施例中，抗PcrV抗体配制在包含约 50mM至约100mm NaCl的缓冲液中。在一些实施例中，抗PcrV抗体配制在包含约10mM至约50mm醋酸盐的缓冲液中。在一些实施例中，抗PcrV抗体配制在包含约10mM至约50mm琥珀酸的缓冲液中。在一些实施例中，抗PcrV 抗体配制在包含约0.005％至约0.02％聚山梨醇酯80的缓冲液中。在一些实施例中，抗PcrV抗体配制在pH值介于5.1和5.6之间的缓冲液中。在一些实施例中，抗PcrV抗体配制在包含10mM柠檬酸、100mM NaCl、100mM甘氨酸和0.01％聚山梨醇酯80的缓冲液中，其中制剂的pH为5.5。

用于体内给药的制剂必须是无菌的。这可以通过例如应用无菌过滤膜过滤而容易地实现。

使用抗PcrV抗体的治疗或预防方法

在某些实施例中，提供了一种治疗个体中假单胞菌感染的方法，所述方法包括向个体施用有效量的包含本文所述的任一抗PcrV抗体的组合物。在一些实施例中，治疗假单胞菌感染的方法进一步提供了与假单胞菌感染相关的疾病和/ 或病症治疗性或预防性的效果。在某些方面，提供了一种预防个体中假单胞菌感染的方法，包括向个体施用有效量的组合物，该组合物包含本文所述的任一抗PcrV抗体。在一些实施例中，抗PcrV抗体(如上所述任一抗PcrV抗体) 或者药用组合物(包含抗PcrV抗体的如上所述任一药用组合物)在制备用于治疗疾病或病症的药物中的用途。

与假单胞菌感染相关的疾病和/或病症包括但不限于发热、寒战、疲劳、肌肉和关节疼痛、关节肿胀、头痛、腹泻、皮疹、伤口流脓、菌血症、急性肺炎、腹腔内感染。进一步的示例性疾病包括但不限于呼吸道感染、菌血症、脓毒性休克、化脓性关节炎、肠炎、皮肤软组织感染(如烧伤伤口感染)、尿路感染、肠道感染、溃疡性角膜炎、慢性化脓性中耳炎、乳突炎、鼻窦炎和心内膜炎。在一些实施例中，治疗或预防假单胞菌感染的方法降低了假单胞菌感染导致的死亡率。

在一些实施例中，提供了一种治疗或预防个体中假单胞菌感染的方法，包括向个体施用有效量的包含抗PcrV抗体的组合物。在一些实施例中，抗PcrV 抗体特异性结合假单胞菌PcrV中的一个线性表位。在一些实施例中，本文所述的抗PcrV抗体特异性结合假单胞菌PcrV中的一个非线性表位。

在一些实施例中，提供了一种治疗或预防个体中假单胞菌感染的方法，包括向个体施用有效量的包含抗PcrV抗体的组合物，其中所述抗PcrV抗体包括 V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:1的HC-CDR1，一个包含SEQ ID NOs:2-9中任一氨基酸序列的HC-CDR2，和一个包含SEQ ID NOs: 10-13中任一氨基酸序列的HC-CDR3；以及V_L，所述V_L包含：一个包含SEQ ID NOs:14-25中任一氨基酸序列的LC-CDR1，一个包含SEQ ID NOs:26-29中任一氨基酸序列的LC-CDR2，和一个包含SEQ ID NOs:30-44中任一氨基酸序列的LC-CDR3。在一些实施例中，提供了一种治疗或预防个体中假单胞菌感染的方法，包括向个体施用有效量的包含抗PcrV抗体的组合物，其中所述抗 PcrV抗体与如下抗体竞争，该抗体包括V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:1的HC-CDR1，一个包含SEQ ID NOs:2-9中任一氨基酸序列的 HC-CDR2，和一个包含SEQ ID NOs:10-13中任一氨基酸序列的HC-CDR3；以及V_L，所述V_L包含：一个包含SEQ ID NOs:14-25中任一氨基酸序列的LC- CDR1，一个包含SEQ ID NOs:26-29中任一氨基酸序列的LC-CDR2，和一个包含SEQ ID NOs:30-44中任一氨基酸序列的LC-CDR3。在一些实施例中，提供了一种治疗或预防个体中假单胞菌感染的方法，包括向个体施用有效量的包含抗PcrV抗体的组合物，其中所述抗PcrV抗体与如下抗体结合相同的表位，该抗体包括V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:1的HC- CDR1，一个包含SEQ ID NOs:2-9中任一氨基酸序列的HC-CDR2，和一个包含SEQ IDNOs:10-13中任一氨基酸序列的HC-CDR3；以及V_L，所述V_L包含：一个包含SEQ ID NOs:14-25中任一氨基酸序列的LC-CDR1，一个包含 SEQ ID NOs:26-29中任一氨基酸序列的LC-CDR2，和一个包含SEQ ID NOs: 30-44中任一氨基酸序列的LC-CDR3。

在一些实施例中，提供了一种治疗或预防个体中假单胞菌感染的方法，包括向个体施用有效量的包含抗PcrV抗体的组合物，其中所述抗PcrV抗体包括 V_H，所述V_H包含SEQID NOs:52-64中任一氨基酸序列；以及V_L，所述V_L包含SEQ ID NOs:65-79中任一氨基酸序列。在一些实施例中，提供了一种治疗或预防个体中假单胞菌感染的方法，包括向个体施用有效量的包含抗PcrV抗体的组合物，其中所述抗PcrV抗体与如下抗体竞争，该抗体包括V_H，所述V_H包含SEQ ID NOs:52-64中任一氨基酸序列；以及V_L，所述V_L包含SEQ ID NOs:65-79中任一氨基酸序列。在一些实施例中，提供了一种治疗或预防个体中假单胞菌感染的方法，包括向个体施用有效量的包含抗PcrV抗体的组合物，其中所述抗PcrV抗体与如下抗体结合相同的表位，该抗体包括V_H，所述V_H包含SEQ ID NOs:52-64中任一氨基酸序列；以及V_L，所述V_L包含SEQ ID NOs:65-79中任一氨基酸序列。

在一些实施例中，提供了一种治疗或预防个体中假单胞菌感染的方法，包括向个体施用有效量的包含抗PcrV抗体的组合物，其中所述抗PcrV抗体与如下抗体竞争，该抗体包括V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO: 1的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:2的HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:10的HC-CDR3；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:14的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:26的 LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:30的LC-CDR3。在一些实施例中，提供了一种治疗或预防个体中假单胞菌感染的方法，包括向个体施用有效量的包含抗PcrV抗体的组合物，其中所述抗PcrV抗体与如下抗体结合相同的表位，该抗体包括V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:1的 HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:2的HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:10的HC-CDR3；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:14的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:26的LC- CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:30的LC-CDR3。

在一些实施例中，提供了一种治疗或预防个体中假单胞菌感染的方法，包括向个体施用有效量的包含抗PcrV抗体的组合物，其中所述抗PcrV抗体与如下抗体竞争，该抗体包括包含氨基酸序列SEQ ID NO:52的V_H以及包含氨基酸序列SEQ ID NO:65的V_L。在一些实施例中，提供了一种治疗或预防个体中假单胞菌感染的方法，包括向个体施用有效量的包含抗PcrV抗体的组合物，其中所述抗PcrV抗体与如下抗体结合相同的表位，该抗体包括包含氨基酸序列 SEQ ID NO:52的V_H以及包含氨基酸序列SEQ ID NO:65的V_L。

在一些实施例中，提供了一种治疗或预防个体中假单胞菌感染的方法，包括向个体施用有效量的包含抗PcrV抗体的组合物，其中所述抗PcrV抗体包括 V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:1的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:2的HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO: 10的HC-CDR3，或者包含至多5个氨基酸取代的变体；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:14的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQID NO:26的LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:30的LC- CDR3，或者包含至多5个氨基酸取代的变体。在一些实施例中，抗PcrV抗体包括V_H，所述V_H包含氨基酸序列SEQ IDNO:52，或者与氨基酸序列SEQ ID NO:52具有至少90％序列同源性的变体序列；以及V_L，所述V_L包含氨基酸序列SEQ ID NO:65，或者与氨基酸序列SEQ ID NO:65具有至少90％序列同源性的变体序列。

在一些实施例中，提供了一种治疗或预防个体中假单胞菌感染的方法，包括向个体施用有效量的包含抗PcrV抗体的组合物，其中所述抗PcrV抗体与如下抗体竞争，该抗体包括V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO: 1的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:2的HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:11的HC-CDR3；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:14的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:26的 LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:30的LC-CDR3。在一些实施例中，提供了一种治疗或预防个体中假单胞菌感染的方法，包括向个体施用有效量的包含抗PcrV抗体的组合物，其中所述抗PcrV抗体与如下抗体结合相同的表位，该抗体包括V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:1的 HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:2的HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:11的HC-CDR3；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:14的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:26的LC- CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:30的LC-CDR3。在一些实施例中，提供了一种治疗或预防个体中假单胞菌感染的方法，包括向个体施用有效量的包含抗PcrV抗体的组合物，其中所述抗PcrV抗体与如下抗体竞争，该抗体包括包含氨基酸序列SEQ ID NO:56的V_H以及包含氨基酸序列SEQ ID NO: 65的V_L。在一些实施例中，提供了一种治疗或预防个体中假单胞菌感染的方法，包括向个体施用有效量的包含抗PcrV抗体的组合物，其中所述抗PcrV抗体与如下抗体结合相同的表位，该抗体包括包含氨基酸序列SEQ ID NO:56的 V_H以及包含氨基酸序列SEQID NO:65的V_L。

在一些实施例中，提供了一种治疗或预防个体中假单胞菌感染的方法，包括向个体施用有效量的包含抗PcrV抗体的组合物，其中所述抗PcrV抗体包括V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:1的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:2的HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO: 11的HC-CDR3，或者包含至多5个氨基酸取代的变体；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:14的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列 SEQID NO:26的LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:30的LC- CDR3，或者包含至多5个氨基酸取代的变体。在一些实施例中，抗PcrV抗体包括V_H，所述V_H包含氨基酸序列SEQ IDNO:56，或者与氨基酸序列SEQ ID NO:56具有至少90％序列同源性的变体序列；以及V_L，所述V_L包含氨基酸序列SEQ ID NO:65，或者与氨基酸序列SEQ ID NO:65具有至少90％序列同源性的变体序列。

在一些实施例中，提供了一种治疗或预防个体中假单胞菌感染的方法，包括向个体施用有效量的包含抗PcrV抗体的组合物，其中所述抗PcrV抗体与如下抗体竞争，该抗体包括V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO: 1的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:3的HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:11的HC-CDR3；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:15的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:27的 LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:31的LC-CDR3。在一些实施例中，提供了一种治疗或预防个体中假单胞菌感染的方法，包括向个体施用有效量的包含抗PcrV抗体的组合物，其中所述抗PcrV抗体与如下抗体结合相同的表位，该抗体包括V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:1的 HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:3的HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:11的HC-CDR3；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:15的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:27的LC- CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:31的LC-CDR3。

在一些实施例中，提供了一种治疗或预防个体中假单胞菌感染的方法，包括向个体施用有效量的包含抗PcrV抗体的组合物，其中抗PcrV抗体与如下抗体竞争，该抗体包括包含氨基酸序列SEQ ID NO:53的V_H以及包含氨基酸序列 SEQ ID NO:66的V_L。在一些实施例中，提供了一种治疗或预防个体中假单胞菌感染的方法，包括向个体施用有效量的包含抗PcrV抗体的组合物，其中所述抗PcrV抗体与如下抗体结合相同的表位，该抗体包括包含氨基酸序列SEQ ID NO:53的V_H以及包含氨基酸序列SEQ ID NO:66的V_L。

在一些实施例中，提供了一种治疗或预防个体中假单胞菌感染的方法，包括向个体施用有效量的包含抗PcrV抗体的组合物，其中所述抗PcrV抗体包括 V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:1的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:3的HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO: 11的HC-CDR3，或者包含至多5个氨基酸取代的变体；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:15的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列 SEQID NO:27的LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:31的LC- CDR3，或者包含至多5个氨基酸取代的变体。在一些实施例中，抗PcrV抗体包括V_H，所述V_H包含氨基酸序列SEQ IDNO:53，或者与氨基酸序列SEQ ID NO:53具有至少90％序列同源性的变体序列；以及V_L，所述V_L包含氨基酸序列SEQ ID NO:66，或者与氨基酸序列SEQ ID NO:66具有至少90％序列同源性的变体序列。

在一些实施例中，提供了一种治疗或预防个体中假单胞菌感染的方法，包括向个体施用有效量的包含抗PcrV抗体的组合物，其中所述抗PcrV抗体与如下抗体竞争，该抗体包括V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO: 1的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:7的HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:13的HC-CDR3；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:23的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:27的 LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:39的LC-CDR3。在一些实施例中，提供了一种治疗或预防个体中假单胞菌感染的方法，包括向个体施用有效量的包含抗PcrV抗体的组合物，其中所述抗PcrV抗体与如下抗体结合相同的表位，该抗体包括V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:1的 HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:7的HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:13的HC-CDR3；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:23的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:27的LC- CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:39的LC-CDR3。

在一些实施例中，提供了一种治疗或预防个体中假单胞菌感染的方法，包括向个体施用有效量的包含抗PcrV抗体的组合物，其中所述抗PcrV抗体与如下抗体竞争，该抗体包括包含氨基酸序列SEQ ID NO:62的V_H以及包含氨基酸序列SEQ ID NO:74的V_L。在一些实施例中，提供了一种治疗或预防个体中假单胞菌感染的方法，包括向个体施用有效量的包含抗PcrV抗体的组合物，其中所述抗PcrV抗体与如下抗体结合相同的表位，该抗体包括包含氨基酸序列 SEQ ID NO:62的V_H以及包含氨基酸序列SEQ ID NO:74的V_L。

在一些实施例中，提供了一种治疗或预防个体中假单胞菌感染的方法，包括向个体施用有效量的包含抗PcrV抗体的组合物，其中所述抗PcrV抗体包括 V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:1的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:7的HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO: 13的HC-CDR3，或者包含至多5个氨基酸取代的变体；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:23的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列 SEQID NO:27的LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:39的LC- CDR3，或者包含至多5个氨基酸取代的变体。在一些实施例中，抗PcrV抗体包括V_H，所述V_H包含氨基酸序列SEQ IDNO:62，或者与氨基酸序列SEQ ID NO:62具有至少90％序列同源性的变体序列；以及V_L，所述V_L包含氨基酸序列SEQ ID NO:74，或者与氨基酸序列SEQ ID NO:74具有至少90％序列同源性的变体序列。在一些实施例中，这个方法可以预防个体假单胞菌感染。

在一些实施例中，提供了一种治疗或预防个体中假单胞菌感染的方法，包括向个体施用有效量的包含抗PcrV抗体的组合物，其中所述抗PcrV抗体与如下抗体竞争，该抗体包括V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO: 1的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:4的HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:11的HC-CDR3；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:16的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:28的 LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:32的LC-CDR3。在一些实施例中，提供了一种治疗或预防个体中假单胞菌感染的方法，包括向个体施用有效量的包含抗PcrV抗体的组合物，其中所述抗PcrV抗体与如下抗体结合相同的表位，该抗体包括V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:1的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:4的HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:11的HC-CDR3；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:16的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:28的LC- CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:32的LC-CDR3。

在一些实施例中，提供了一种治疗或预防个体中假单胞菌感染的方法，包括向个体施用有效量的包含抗PcrV抗体的组合物，其中所述抗PcrV抗体与如下抗体竞争，该抗体包括包含氨基酸序列SEQ ID NO:54的V_H以及包含氨基酸序列SEQ ID NO:67的V_L。在一些实施例中，提供了一种治疗或预防个体中假单胞菌感染的方法，包括向个体施用有效量的包含抗PcrV抗体的组合物，其中所述抗PcrV抗体与如下抗体结合相同的表位，该抗体包括包含氨基酸序列 SEQ ID NO:54的V_H以及包含氨基酸序列SEQ ID NO:67的V_L。

在一些实施例中，提供了一种治疗或预防个体中假单胞菌感染的方法，包括向个体施用有效量的包含抗PcrV抗体的组合物，其中所述抗PcrV抗体包括 V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:1的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:4的HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO: 11的HC-CDR3，或者包含至多5个氨基酸取代的变体；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:16的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列 SEQID NO:28的LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:32的LC- CDR3，或者包含至多5个氨基酸取代的变体。在一些实施例中，抗PcrV抗体包括V_H，所述V_H包含氨基酸序列SEQ IDNO:54，或者与氨基酸序列SEQ ID NO:54具有至少90％序列同源性的变体序列；以及V_L，所述V_L包含氨基酸序列SEQ ID NO:67，或者与氨基酸序列SEQ ID NO:67具有至少90％序列同源性的变体序列。

在一些实施例中，提供了一种治疗或预防个体中假单胞菌感染的方法，包括向个体施用有效量的包含抗PcrV抗体的组合物，其中所述抗PcrV抗体与如下抗体竞争，该抗体包括V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO: 1的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:5的HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:11的HC-CDR3；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:17的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:27的LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:33的LC-CDR3。在一些实施例中，提供了一种治疗或预防个体中假单胞菌感染的方法，包括向个体施用有效量的包含抗PcrV抗体的组合物，其中所述抗PcrV抗体与如下抗体结合相同的表位，该抗体包括V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:1的 HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:5的HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:11的HC-CDR3；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:17的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:27的LC- CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:33的LC-CDR3。

在一些实施例中，提供了一种治疗或预防个体中假单胞菌感染的方法，包括向个体施用有效量的包含抗PcrV抗体的组合物，其中所述抗PcrV抗体与如下抗体竞争，该抗体包括包含氨基酸序列SEQ ID NO:55的V_H以及包含氨基酸序列SEQ ID NO:68的V_L。在一些实施例中，提供了一种治疗或预防个体中假单胞菌感染的方法，包括向个体施用有效量的包含抗PcrV抗体的组合物，其中所述抗PcrV抗体与如下抗体结合相同的表位，该抗体包括包含氨基酸序列 SEQ ID NO:55的V_H以及包含氨基酸序列SEQ ID NO:68的V_L。

在一些实施例中，提供了一种治疗或预防个体中假单胞菌感染的方法，包括向个体施用有效量的包含抗PcrV抗体的组合物，其中所述抗PcrV抗体包括 V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:1的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:5的HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO: 11的HC-CDR3，或者包含至多5个氨基酸取代的变体；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:17的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列 SEQID NO:27的LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:33的LC- CDR3，或者包含至多5个氨基酸取代的变体。在一些实施例中，抗PcrV抗体包括V_H，所述V_H包含氨基酸序列SEQ IDNO:55，或者与氨基酸序列SEQ ID NO:55具有至少90％序列同源性的变体序列；以及V_L，所述V_L包含氨基酸序列SEQ ID NO:68，或者与氨基酸序列SEQ ID NO:68具有至少90％序列同源性的变体序列。

在一些实施例中，提供了一种治疗或预防个体中假单胞菌感染的方法，包括向个体施用有效量的包含抗PcrV抗体的组合物，其中所述抗PcrV抗体与如下抗体竞争，该抗体包括V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO: 1的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:2的HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:11的HC-CDR3；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:18的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:28的 LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:34的LC-CDR3。在一些实施例中，提供了一种治疗或预防个体中假单胞菌感染的方法，包括向个体施用有效量的包含抗PcrV抗体的组合物，其中所述抗PcrV抗体与如下抗体结合相同的表位，该抗体包括V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:1的 HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:2的HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:11的HC-CDR3；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:18的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:28的LC- CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:34的LC-CDR3。

在一些实施例中，提供了一种治疗或预防个体中假单胞菌感染的方法，包括向个体施用有效量的包含抗PcrV抗体的组合物，其中所述抗PcrV抗体与如下抗体竞争，该抗体包括包含氨基酸序列SEQ ID NO:56的V_H以及包含氨基酸序列SEQ ID NO:69的V_L。在一些实施例中，提供了一种治疗或预防个体中假单胞菌感染的方法，包括向个体施用有效量的包含抗PcrV抗体的组合物，其中所述抗PcrV抗体与如下抗体结合相同的表位，该抗体包括包含氨基酸序列 SEQ ID NO:56的V_H以及包含氨基酸序列SEQ ID NO:69的V_L。

在一些实施例中，提供了一种治疗或预防个体中假单胞菌感染的方法，包括向个体施用有效量的包含抗PcrV抗体的组合物，其中所述抗PcrV抗体包括 V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:1的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:2的HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO: 11的HC-CDR3，或者包含至多5个氨基酸取代的变体；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:18的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列 SEQID NO:28的LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:34的LC- CDR3，或者包含至多5个氨基酸取代的变体。在一些实施例中，抗PcrV抗体包括V_H，所述V_H包含氨基酸序列SEQ IDNO:56，或者与氨基酸序列SEQ ID NO:56具有至少90％序列同源性的变体序列；以及V_L，所述V_L包含氨基酸序列SEQ ID NO:69，或者与氨基酸序列SEQ ID NO:69具有至少90％序列同源性的变体序列。

在一些实施例中，提供了一种治疗或预防个体中假单胞菌感染的方法，包括向个体施用有效量的包含抗PcrV抗体的组合物，其中所述抗PcrV抗体与如下抗体竞争，该抗体包括V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO: 1的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:9的HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:13的HC-CDR3；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:17的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:27的 LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:43的LC-CDR3。在一些实施例中，提供了一种治疗或预防个体中假单胞菌感染的方法，包括向个体施用有效量的包含抗PcrV抗体的组合物，其中所述抗PcrV抗体与如下抗体结合相同的表位，该抗体包括V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:1的 HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:9的HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:13的HC-CDR3；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:17的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:27的LC- CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:43的LC-CDR3。

在一些实施例中，提供了一种治疗或预防个体中假单胞菌感染的方法，包括向个体施用有效量的包含抗PcrV抗体的组合物，其中所述抗PcrV抗体与如下抗体竞争，该抗体包括包含氨基酸序列SEQ ID NO:64的V_H以及包含氨基酸序列SEQ ID NO:78的V_L。在一些实施例中，提供了一种治疗或预防个体中假单胞菌感染的方法，包括向个体施用有效量的包含抗PcrV抗体的组合物，其中所述抗PcrV抗体与如下抗体结合相同的表位，该抗体抗体包括包含氨基酸序列 SEQ ID NO:64的V_H以及包含氨基酸序列SEQ ID NO:78的V_L。

在一些实施例中，提供了一种治疗或预防个体中假单胞菌感染的方法，包括向个体施用有效量的包含抗PcrV抗体的组合物，其中所述抗PcrV抗体包括 V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:1的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:9的HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO: 13的HC-CDR3，或者包含至多5个氨基酸取代的变体；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:17的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQID NO:27的LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:43的LC- CDR3，或者包含至多5个氨基酸取代的变体。在一些实施例中，抗PcrV抗体包括V_H，所述V_H包含氨基酸序列SEQ IDNO:64，或者与氨基酸序列SEQ ID NO:64具有至少90％序列同源性的变体序列；以及V_L，所述V_L包含氨基酸序列SEQ ID NO:78，或者与氨基酸序列SEQ ID NO:78具有至少90％序列同源性的变体序列。

在一些实施例中，提供了一种治疗或预防个体中假单胞菌感染的方法，包括向个体施用有效量的包含抗PcrV抗体的组合物，其中所述抗PcrV抗体与如下抗体竞争，该抗体包括V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO: 1的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:2的HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:11的HC-CDR3；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:19的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:28的 LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:35的LC-CDR3。在一些实施例中，提供了一种治疗或预防个体中假单胞菌感染的方法，包括向个体施用有效量的包含抗PcrV抗体的组合物，其中所述抗PcrV抗体与如下抗体结合相同的表位，该抗体包括V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:1的 HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:2的HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:11的HC-CDR3；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:19的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:28的LC- CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:35的LC-CDR3。

在一些实施例中，提供了一种治疗或预防个体中假单胞菌感染的方法，包括向个体施用有效量的包含抗PcrV抗体的组合物，其中所述抗PcrV抗体与如下抗体竞争，该抗体包括包含氨基酸序列SEQ ID NO:56的V_H以及包含氨基酸序列SEQ ID NO:70的V_L。在一些实施例中，提供了一种治疗或预防个体中假单胞菌感染的方法，包括向个体施用有效量的包含抗PcrV抗体的组合物，其中所述抗PcrV抗体与如下抗体结合相同的表位，该抗体包括包含氨基酸序列 SEQ ID NO:56的V_H以及包含氨基酸序列SEQ ID NO:70的V_L。

在一些实施例中，提供了一种治疗或预防个体中假单胞菌感染的方法，包括向个体施用有效量的包含抗PcrV抗体的组合物，其中所述抗PcrV抗体包括V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:1的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:2的HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO: 11的HC-CDR3，或者包含至多5个氨基酸取代的变体；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:19的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列 SEQID NO:28的LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:35的LC- CDR3，或者包含至多5个氨基酸取代的变体。在一些实施例中，抗PcrV抗体包括V_H，所述V_H包含氨基酸序列SEQ IDNO:56，或者与氨基酸序列SEQ ID NO:56具有至少90％序列同源性的变体序列；以及V_L，所述V_L包含氨基酸序列SEQ ID NO:70，或者与氨基酸序列SEQ ID NO:70具有至少90％序列同源性的变体序列。

在一些实施例中，提供了一种治疗或预防个体中假单胞菌感染的方法，包括向个体施用有效量的包含抗PcrV抗体的组合物，其中所述抗PcrV抗体与如下抗体竞争，该抗体包括V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO: 1的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:6的HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:11的HC-CDR3；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:20的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:27的 LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:36的LC-CDR3。在一些实施例中，提供了一种治疗或预防个体中假单胞菌感染的方法，包括向个体施用有效量的包含抗PcrV抗体的组合物，其中所述抗PcrV抗体与如下抗体结合相同的表位，该抗体包括V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:1的 HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:6的HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:20的HC-CDR3；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:27的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:28的LC- CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:36的LC-CDR3。

在一些实施例中，提供了一种治疗或预防个体中假单胞菌感染的方法，包括向个体施用有效量的包含抗PcrV抗体的组合物，其中所述抗PcrV抗体与如下抗体竞争，该抗体包括包含氨基酸序列SEQ ID NO:57的V_H以及包含氨基酸序列SEQ ID NO:71的V_L。在一些实施例中，提供了一种治疗或预防个体中假单胞菌感染的方法，包括向个体施用有效量的包含抗PcrV抗体的组合物，其中所述抗PcrV抗体与如下抗体结合相同的表位，该抗体包括包含氨基酸序列 SEQ ID NO:57的V_H以及包含氨基酸序列SEQ ID NO:71的V_L。

在一些实施例中，提供了一种治疗或预防个体中假单胞菌感染的方法，包括向个体施用有效量的包含抗PcrV抗体的组合物，其中所述抗PcrV抗体包括 V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:1的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:6的HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO: 11的HC-CDR3，或者包含至多5个氨基酸取代的变体；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:20的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列 SEQID NO:27的LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:36的LC- CDR3，或者包含至多5个氨基酸取代的变体。在一些实施例中，抗PcrV抗体包括V_H，所述V_H包含氨基酸序列SEQ IDNO:57，或者与氨基酸序列SEQ ID NO:57具有至少90％序列同源性的变体序列；以及V_L，所述V_L包含氨基酸序列SEQ ID NO:71，或者与氨基酸序列SEQ ID NO:71具有至少90％序列同源性的变体序列。

在一些实施例中，提供了一种治疗或预防个体中假单胞菌感染的方法，包括向个体施用有效量的包含抗PcrV抗体的组合物，其中所述抗PcrV抗体与如下抗体竞争，该抗体包括V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO: 1的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:4的HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:11的HC-CDR3；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:21的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:28的 LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:37的LC-CDR3。在一些实施例中，提供了一种治疗或预防个体中假单胞菌感染的方法，包括向个体施用有效量的包含抗PcrV抗体的组合物，其中所述抗PcrV抗体与如下抗体结合相同的表位，该抗体包括V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:1的 HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:4的HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:11的HC-CDR3；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:21的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:28的LC- CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:37的LC-CDR3。

在一些实施例中，提供了一种治疗或预防个体中假单胞菌感染的方法，包括向个体施用有效量的包含抗PcrV抗体的组合物，其中所述抗PcrV抗体与如下抗体竞争，该抗体包括包含氨基酸序列SEQ ID NO:54的V_H以及包含氨基酸序列SEQ ID NO:72的V_L。在一些实施例中，提供了一种治疗或预防个体中假单胞菌感染的方法，包括向个体施用有效量的包含抗PcrV抗体的组合物，其中所述抗PcrV抗体与如下抗体结合相同的表位，该抗体包括包含氨基酸序列 SEQ ID NO:54的V_H以及包含氨基酸序列SEQ ID NO:72的V_L。

在一些实施例中，提供了一种治疗或预防个体中假单胞菌感染的方法，包括向个体施用有效量的包含抗PcrV抗体的组合物，其中所述抗PcrV抗体包括 V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:1的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:4的HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO: 11的HC-CDR3，或者包含至多5个氨基酸取代的变体；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:21的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列 SEQID NO:28的LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:37的LC- CDR3，或者包含至多5个氨基酸取代的变体。在一些实施例中，抗PcrV抗体包括V_H，所述V_H包含氨基酸序列SEQ IDNO:54，或者与氨基酸序列SEQ ID NO:54具有至少90％序列同源性的变体序列；以及V_L，所述V_L包含氨基酸序列SEQ ID NO:72，或者与氨基酸序列SEQ ID NO:72具有至少90％序列同源性的变体序列。

在一些实施例中，提供了一种治疗或预防个体中假单胞菌感染的方法，包括向个体施用有效量的包含抗PcrV抗体的组合物，其中所述抗PcrV抗体与如下抗体竞争，该抗体包括V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO: 1的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:2的HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:11的HC-CDR3；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:22的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:28的 LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:38的LC-CDR3。在一些实施例中，提供了一种治疗或预防个体中假单胞菌感染的方法，包括向个体施用有效量的包含抗PcrV抗体的组合物，其中所述抗PcrV抗体与如下抗体结合相同的表位，该抗体包括V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:1的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:2的HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:11的HC-CDR3；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:22的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:28的LC- CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:38的LC-CDR3。

在一些实施例中，提供了一种治疗或预防个体中假单胞菌感染的方法，包括向个体施用有效量的包含抗PcrV抗体的组合物，其中所述抗PcrV抗体与如下抗体竞争，该抗体包括包含氨基酸序列SEQ ID NO:56的V_H以及包含氨基酸序列SEQ ID NO:73的V_L。在一些实施例中，提供了一种治疗或预防个体中假单胞菌感染的方法，包括向个体施用有效量的包含抗PcrV抗体的组合物，其中所述抗PcrV抗体与如下抗体结合相同的表位，该抗体包括包含氨基酸序列 SEQ ID NO:56的V_H以及包含氨基酸序列SEQ ID NO:73的V_L。

在一些实施例中，提供了一种治疗或预防个体中假单胞菌感染的方法，包括向个体施用有效量的包含抗PcrV抗体的组合物，其中所述抗PcrV抗体包括 V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:1的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:2的HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO: 11的HC-CDR3，或者包含至多5个氨基酸取代的变体；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:22的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列 SEQID NO:28的LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:38的LC- CDR3，或者包含至多5个氨基酸取代的变体。在一些实施例中，抗PcrV抗体包括V_H，所述V_H包含氨基酸序列SEQ IDNO:56，或者与氨基酸序列SEQ ID NO:56具有至少90％序列同源性的变体序列；以及V_L，所述V_L包含氨基酸序列SEQ ID NO:73，或者与氨基酸序列SEQ ID NO:73具有至少90％序列同源性的变体序列。

在一些实施例中，提供了一种治疗或预防个体中假单胞菌感染的方法，包括向个体施用有效量的包含抗PcrV抗体的组合物，其中所述抗PcrV抗体与如下抗体竞争，该抗体包括V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO: 1的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:7的HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:11的HC-CDR3；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:23的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:27的LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:39的LC-CDR3。在一些实施例中，提供了一种治疗或预防个体中假单胞菌感染的方法，包括向个体施用有效量的包含抗PcrV抗体的组合物，其中所述抗PcrV抗体与如下抗体结合相同的表位，该抗体包括V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:1的 HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:7的HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:11的HC-CDR3；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:23的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:27的LC- CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:39的LC-CDR3。

在一些实施例中，提供了一种治疗或预防个体中假单胞菌感染的方法，包括向个体施用有效量的包含抗PcrV抗体的组合物，其中所述抗PcrV抗体与如下抗体竞争，该抗体包括包含氨基酸序列SEQ ID NO:58的V_H以及包含氨基酸序列SEQ ID NO:74的V_L。在一些实施例中，提供了一种治疗或预防个体中假单胞菌感染的方法，包括向个体施用有效量的包含抗PcrV抗体的组合物，其中所述抗PcrV抗体与如下抗体结合相同的表位，该抗体包括包含氨基酸序列 SEQ ID NO:58的V_H以及包含氨基酸序列SEQ ID NO:74的V_L。

在一些实施例中，提供了一种治疗或预防个体中假单胞菌感染的方法，包括向个体施用有效量的包含抗PcrV抗体的组合物，其中所述抗PcrV抗体包括 V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:1的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:7的HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO: 11的HC-CDR3，或者包含至多5个氨基酸取代的变体；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:23的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列 SEQID NO:27的LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:39的LC- CDR3，或者包含至多5个氨基酸取代的变体。在一些实施例中，抗PcrV抗体包括V_H，所述V_H包含氨基酸序列SEQ IDNO:58，或者与氨基酸序列SEQ ID NO:58具有至少90％序列同源性的变体序列；以及V_L，所述V_L包含氨基酸序列SEQ ID NO:74，或者与氨基酸序列SEQ ID NO:74具有至少90％序列同源性的变体序列。

在一些实施例中，提供了一种治疗或预防个体中假单胞菌感染的方法，包括向个体施用有效量的包含抗PcrV抗体的组合物，其中所述抗PcrV抗体与如下抗体竞争，该抗体包括V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO: 1的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:8的HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:11的HC-CDR3；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:21的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:28的 LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:40的LC-CDR3。在一些实施例中，提供了一种治疗或预防个体中假单胞菌感染的方法，包括向个体施用有效量的包含抗PcrV抗体的组合物，其中所述抗PcrV抗体与如下抗体结合相同的表位，该抗体包括V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:1的 HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:8的HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:11的HC-CDR3；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:21的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:28的LC- CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:40的LC-CDR3。

在一些实施例中，提供了一种治疗或预防个体中假单胞菌感染的方法，包括向个体施用有效量的包含抗PcrV抗体的组合物，其中所述抗PcrV抗体与如下抗体竞争，该抗体包括包含氨基酸序列SEQ ID NO:59的V_H以及包含氨基酸序列SEQ ID NO:75的V_L。在一些实施例中，提供了一种治疗或预防个体中假单胞菌感染的方法，包括向个体施用有效量的包含抗PcrV抗体的组合物，其中所述抗PcrV抗体与如下抗体结合相同的表位，该抗体包括包含氨基酸序列 SEQ ID NO:59的V_H以及包含氨基酸序列SEQ ID NO:75的V_L。

在一些实施例中，提供了一种治疗或预防个体中假单胞菌感染的方法，包括向个体施用有效量的包含抗PcrV抗体的组合物，其中所述抗PcrV抗体包括 V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:1的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:8的HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO: 11的HC-CDR3，或者包含至多5个氨基酸取代的变体；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:21的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列 SEQID NO:28的LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:40的LC- CDR3，或者包含至多5个氨基酸取代的变体。在一些实施例中，抗PcrV抗体包括V_H，所述V_H包含氨基酸序列SEQ IDNO:59，或者与氨基酸序列SEQ ID NO:59具有至少90％序列同源性的变体序列；以及V_L，所述V_L包含氨基酸序列SEQ ID NO:75，或者与氨基酸序列SEQ ID NO:75具有至少90％序列同源性的变体序列。

在一些实施例中，提供了一种治疗或预防个体中假单胞菌感染的方法，包括向个体施用有效量的包含抗PcrV抗体的组合物，其中所述抗PcrV抗体与如下抗体竞争，该抗体包括V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO: 1的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:6的HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:11的HC-CDR3；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:24的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:28的 LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:41的LC-CDR3。在一些实施例中，提供了一种治疗或预防个体中假单胞菌感染的方法，包括向个体施用有效量的包含抗PcrV抗体的组合物，其中所述抗PcrV抗体与如下抗体结合相同的表位，该抗体包括V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:1的 HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:6的HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:11的HC-CDR3；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:24的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:28的LC- CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:41的LC-CDR3。

在一些实施例中，提供了一种治疗或预防个体中假单胞菌感染的方法，包括向个体施用有效量的包含抗PcrV抗体的组合物，其中所述抗PcrV抗体与如下抗体竞争，该抗体包括包含氨基酸序列SEQ ID NO:57的V_H以及包含氨基酸序列SEQ ID NO:76的V_L。在一些实施例中，提供了一种治疗或预防个体中假单胞菌感染的方法，包括向个体施用有效量的包含抗PcrV抗体的组合物，其中所述抗PcrV抗体与如下抗体结合相同的表位，该抗体包括包含氨基酸序列 SEQ ID NO:57的V_H以及包含氨基酸序列SEQ ID NO:76的V_L。

在一些实施例中，提供了一种治疗或预防个体中假单胞菌感染的方法，包括向个体施用有效量的包含抗PcrV抗体的组合物，其中所述抗PcrV抗体包括 V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:1的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:6的HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO: 11的HC-CDR3，或者包含至多5个氨基酸取代的变体；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:24的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQID NO:28的LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:41的LC- CDR3，或者包含至多5个氨基酸取代的变体。在一些实施例中，抗PcrV抗体包括V_H，所述V_H包含氨基酸序列SEQ IDNO:57，或者与氨基酸序列SEQ ID NO:57具有至少90％序列同源性的变体序列；以及V_L，所述V_L包含氨基酸序列SEQ ID NO:76，或者与氨基酸序列SEQ ID NO:76具有至少90％序列同源性的变体序列。

在一些实施例中，提供了一种治疗或预防个体中假单胞菌感染的方法，包括向个体施用有效量的包含抗PcrV抗体的组合物，其中所述抗PcrV抗体与如下抗体竞争，该抗体包括V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO: 1的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:9的HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:11的HC-CDR3；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:25的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:29的 LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:42的LC-CDR3。在一些实施例中，提供了一种治疗或预防个体中假单胞菌感染的方法，包括向个体施用有效量的包含抗PcrV抗体的组合物，其中所述抗PcrV抗体与如下抗体结合相同的表位，该抗体包括V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:1的 HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:9的HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:11的HC-CDR3；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:25的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:29的LC- CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:42的LC-CDR3。

在一些实施例中，提供了一种治疗或预防个体中假单胞菌感染的方法，包括向个体施用有效量包含抗PcrV抗体的组合物，其中所述抗PcrV抗体与如下抗体竞争，该抗体包括包含氨基酸序列SEQ ID NO:60的V_H以及包含氨基酸序列SEQ ID NO:77的V_L。在一些实施例中，提供了一种治疗或预防个体中假单胞菌感染的方法，包括向个体施用有效量的包含抗PcrV抗体的组合物，其中所述抗PcrV抗体与如下抗体结合相同的表位，该抗体包括包含氨基酸序列SEQ ID NO:60的V_H以及包含氨基酸序列SEQ ID NO:77的V_L。

在一些实施例中，提供了一种治疗或预防个体中假单胞菌感染的方法，包括向个体施用有效量的包含抗PcrV抗体的组合物，其中所述抗PcrV抗体包括V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:1的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:9的HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO: 11的HC-CDR3，或者包含至多5个氨基酸取代的变体；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:25的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列 SEQID NO:29的LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:42的LC- CDR3，或者包含至多5个氨基酸取代的变体。在一些实施例中，抗PcrV抗体包括V_H，所述V_H包含氨基酸序列SEQ IDNO:60，或者与氨基酸序列SEQ ID NO:60具有至少90％序列同源性的变体序列；以及V_L，所述V_L包含氨基酸序列SEQ ID NO:77，或者与氨基酸序列SEQ ID NO:77具有至少90％序列同源性的变体序列。

在一些实施例中，提供了一种治疗或预防个体中假单胞菌感染的方法，包括向个体施用有效量的包含抗PcrV抗体的组合物，其中所述抗PcrV抗体与如下抗体竞争，该抗体包括V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO: 1的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:9的HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:11的HC-CDR3；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:17的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:27的 LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:43的LC-CDR3。在一些实施例中，提供了一种治疗或预防个体中假单胞菌感染的方法，包括向个体施用有效量的包含抗PcrV抗体的组合物，其中所述抗PcrV抗体与如下抗体结合相同的表位，该抗体包括V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:1的 HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:9的HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:11的HC-CDR3；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:17的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:27的LC- CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:43的LC-CDR3。

在一些实施例中，提供了一种治疗或预防个体中假单胞菌感染的方法，包括向个体施用有效量的包含抗PcrV抗体的组合物，其中所述抗PcrV抗体与如下抗体竞争，该抗体包括包含氨基酸序列SEQ ID NO:60的V_H以及包含氨基酸序列SEQ ID NO:78的V_L。在一些实施例中，提供了一种治疗或预防个体中假单胞菌感染的方法，包括向个体施用有效量的包含抗PcrV抗体的组合物，其中所述抗PcrV抗体与如下抗体结合相同的表位，该抗体包括包含氨基酸序列 SEQ ID NO:60的V_H以及包含氨基酸序列SEQ ID NO:78的V_L。

在一些实施例中，提供了一种治疗或预防个体中假单胞菌感染的方法，包括向个体施用有效量的包含抗PcrV抗体的组合物，其中所述抗PcrV抗体包括 V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:1的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:9的HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO: 11的HC-CDR3，或者包含至多5个氨基酸取代的变体；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:17的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列 SEQID NO:27的LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:43的LC- CDR3，或者包含至多5个氨基酸取代的变体。在一些实施例中，抗PcrV抗体包括V_H，所述V_H包含氨基酸序列SEQ IDNO:60，或者与氨基酸序列SEQ ID NO:60具有至少90％序列同源性的变体序列；以及V_L，所述V_L包含氨基酸序列SEQ ID NO:78，或者与氨基酸序列SEQ ID NO:78具有至少90％序列同源性的变体序列。

在一些实施例中，提供了一种治疗或预防个体中假单胞菌感染的方法，包括向个体施用有效量的包含抗PcrV抗体的组合物，其中所述抗PcrV抗体与如下抗体竞争，该抗体包括V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO: 1的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:2的HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:11的HC-CDR3；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:17的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:27的 LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:44的LC-CDR3。在一些实施例中，提供了一种治疗或预防个体中假单胞菌感染的方法，包括向个体施用有效量的包含抗PcrV抗体的组合物，其中所述抗PcrV抗体与如下抗体结合相同的表位，该抗体包括V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:1的 HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:2的HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:11的HC-CDR3；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:17的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:27的LC- CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:44的LC-CDR3。

在一些实施例中，提供了一种治疗或预防个体中假单胞菌感染的方法，包括向个体施用有效量的包含抗PcrV抗体的组合物，其中所述抗PcrV抗体与如下抗体竞争，该抗体包括包含氨基酸序列SEQ ID NO:56的V_H以及包含氨基酸序列SEQ ID NO:79的V_L。在一些实施例中，提供了一种治疗或预防个体中假单胞菌感染的方法，包括向个体施用有效量的包含抗PcrV抗体的组合物，其中所述抗PcrV抗体与如下抗体结合相同的表位，该抗体包括包含氨基酸序列 SEQ ID NO:56的V_H以及包含氨基酸序列SEQ ID NO:79的V_L。

在一些实施例中，提供了一种治疗或预防个体中假单胞菌感染的方法，包括向个体施用有效量的包含抗PcrV抗体的组合物，其中所述抗PcrV抗体包括 V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:1的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:2的HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO: 11的HC-CDR3，或者包含至多5个氨基酸取代的变体；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:17的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列 SEQID NO:27的LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:44的LC- CDR3，或者包含至多5个氨基酸取代的变体。在一些实施例中，抗PcrV抗体包括V_H，所述V_H包含氨基酸序列SEQ IDNO:56，或者与氨基酸序列SEQ ID NO:56具有至少90％序列同源性的变体序列；以及V_L，所述V_L包含氨基酸序列SEQ ID NO:79，或者与氨基酸序列SEQ ID NO:79具有至少90％序列同源性的变体序列。

在一些实施例中，提供了一种治疗或预防个体中假单胞菌感染的方法，包括向个体施用有效量的包含抗PcrV抗体的组合物，其中所述抗PcrV抗体与如下抗体竞争，该抗体包括V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO: 1的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:7的HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:12的HC-CDR3；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:23的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:27的 LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:39的LC-CDR3。在一些实施例中，提供了一种治疗或预防个体中假单胞菌感染的方法，包括向个体施用有效量的包含抗PcrV抗体的组合物，其中所述抗PcrV抗体与如下抗体结合相同的表位，该抗体包括V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:1的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:7的HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:12的HC-CDR3；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:23的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:27的LC- CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:39的LC-CDR3。

在一些实施例中，提供了一种治疗或预防个体中假单胞菌感染的方法，包括向个体施用有效量的包含抗PcrV抗体的组合物，其中所述抗PcrV抗体与如下抗体竞争，该抗体包括包含氨基酸序列SEQ ID NO:61的V_H以及包含氨基酸序列SEQ ID NO:74的V_L。在一些实施例中，提供了一种治疗或预防个体中假单胞菌感染的方法，包括向个体施用有效量的包含抗PcrV抗体的组合物，其中所述抗PcrV抗体与如下抗体结合相同的表位，该抗体包括包含氨基酸序列 SEQ ID NO:61的V_H以及包含氨基酸序列SEQ ID NO:74的V_L。

在一些实施例中，提供了一种治疗或预防个体中假单胞菌感染的方法，包括向个体施用有效量的包含抗PcrV抗体的组合物，其中所述抗PcrV抗体包括 V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:1的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:7的HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO: 12的HC-CDR3，或者包含至多5个氨基酸取代的变体；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:23的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列 SEQID NO:27的LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:39的LC- CDR3，或者包含至多5个氨基酸取代的变体。在一些实施例中，抗PcrV抗体包括V_H，所述V_H包含氨基酸序列SEQ IDNO:61，或者与氨基酸序列SEQ ID NO:61具有至少90％序列同源性的变体序列；以及V_L，所述V_L包含氨基酸序列SEQ ID NO:74，或者与氨基酸序列SEQ ID NO:74具有至少90％序列同源性的变体序列。

在一些实施例中，提供了一种治疗或预防个体中假单胞菌感染的方法，包括向个体施用有效量的包含抗PcrV抗体的组合物，其中所述抗PcrV抗体与如下抗体竞争，该抗体包括V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO: 1的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:9的HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:12的HC-CDR3；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:17的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:27的LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:43的LC-CDR3。在一些实施例中，提供了一种治疗或预防个体中假单胞菌感染的方法，包括向个体施用有效量的包含抗PcrV抗体的组合物，其中所述抗PcrV抗体与如下抗体结合相同的表位，该抗体包括V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:1的 HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:7的HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:12的HC-CDR3；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:17的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:27的LC- CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:43的LC-CDR3。

在一些实施例中，提供了一种治疗或预防个体中假单胞菌感染的方法，包括向个体施用有效量的包含抗PcrV抗体的组合物，其中所述抗PcrV抗体与如下抗体竞争，该抗体包括包含氨基酸序列SEQ ID NO:63的V_H以及包含氨基酸序列SEQ ID NO:78的V_L。在一些实施例中，提供了一种治疗或预防个体中假单胞菌感染的方法，包括向个体施用有效量的包含抗PcrV抗体的组合物，其中所述抗PcrV抗体与如下抗体结合相同的表位，该抗体包括包含氨基酸序列 SEQ ID NO:63的V_H以及包含氨基酸序列SEQ ID NO:78的V_L。

在一些实施例中，提供了一种治疗或预防个体中假单胞菌感染的方法，包括向个体施用有效量的包含抗PcrV抗体的组合物，其中所述抗PcrV抗体包括 V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:1的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:9的HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO: 12的HC-CDR3，或者包含至多5个氨基酸取代的变体；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:17的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列 SEQID NO:27的LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:43的LC- CDR3，或者包含至多5个氨基酸取代的变体。在一些实施例中，抗PcrV抗体包括V_H，所述V_H包含氨基酸序列SEQ IDNO:63，或者与氨基酸序列SEQ ID NO:63具有至少90％序列同源性的变体序列；以及V_L，所述V_L包含氨基酸序列SEQ ID NO:78，或者与氨基酸序列SEQ ID NO:78具有至少90％序列同源性的变体序列。

在一些实施例中，本文所述任一种治疗或预防的方法，所述抗PcrV抗体包含一个抗体重链恒定区和一个抗体轻链恒定区。在一些实施例中，所述抗PcrV 抗体包含一个IgG1重链恒定区。在一些实施例中，所述抗PcrV抗体包含一个 IgG2重链恒定区。在一些实施例中，所述抗PcrV抗体包含一个IgG3重链恒定区。在一些实施例中，所述抗PcrV抗体包含一个IgG4重链恒定区。在一些实施例中，所述IgG是人IgG。在一些实施例中，重链恒定区包含或由氨基酸序列SEQ ID NO:82。在一些实施例中，重链恒定区包含或由氨基酸序列SEQ IDNO:83。在一些实施例中，所述抗PcrV抗体包含一个λ轻链恒定区。在一些实施例中，所述抗PcrV抗体包含一个κ轻链恒定区。在一些实施例中，轻链恒定区包含或有氨基酸序列SEQID NO:81组成。在一些实施例中，所述抗PcrV抗体包含一个抗体重链可变区和一个抗体轻链可变区。

在一些实施例中，本文所述任一种治疗或预防的方法，所述方法进一步提供与假单胞菌感染相关疾病和/或病症的治疗性或预防性的效果。在一些实施例中，所述方法可预防个体假单胞菌感染。

在一些实施例中，所述个体是哺乳动物(例如人、非人灵长类、大鼠、小鼠、牛、马、猪、绵羊、山羊、狗、猫等)。在一些实施例中，所述个体是人类。在一些实施例中，所述个体是临床患者、临床试验志愿者、实验动物等。在一些实施例中，所述个体年龄小于60岁(包括例如小于50、40、30、25、 20、15或10岁)。在一些实施例中，所述个体年龄大于60岁(包括例如大于 70、80、90或100岁)。

在一些实施例中，所述个体存在与铜绿假单胞菌感染相关的一个或多个危险因素。例如，在一些实施例中，所述个体已暴露或破坏皮肤粘液层。在一些实施例中，所述个体有一种或多种烧伤。在一些实施例中，所述个体有一种或多种手术伤口。在一些实施例中，所述个体有皮肤疾病。在一些实施例中，所述个体有异物植入，例如，但不限于一个呼吸器或导管。在一些实施例中，所述个体被诊断患有或在遗传上容易患上免疫缺陷疾病，包括但不限于HIV感染、AIDS和/或中性粒细胞缺乏症。在一些实施例中，所述个体接受过一种或多种形式的化疗。在一些实施例中，所述个体接受过一种或多种形式的肾上腺糖皮质激素治疗。在一些实施例中，所述个体接受过一种或多种形式的化疗。在一些实施例中，所述个体被诊断患有或在遗传上容易患上癌症、糖尿病和/或慢性结构性肺病(例如囊性纤维化或COPD)。在一些实施例中，所述个体被诊断患有或在遗传上容易患上消化系统和/或其他器官的菌群失调。在一些实施例中，所述个体有与上述一种或多种疾病或病症相关的一种或多种危险因素。

在一些实施例中，本申请提供了一种将抗PcrV抗体(比如本文所述的任一抗PcrV抗体，例如一种分离的抗PcrV抗体)递送到个体中被病原菌感染的细胞中的方法，所述方法包括向该个体施用包含抗PcrV抗体的组合物。

在一些实施例中，根据本文所述的任一方法，所述方法进一步包括施用一种或多种额外的治疗药物。在一些实施例中，至少一种治疗药物是抗生素。在一些实施例中，所述抗生素是一种青霉素、一种头孢菌素、一种碳青霉烯、一种氟喹诺酮、一种氨基糖苷、一种单胺菌、一种多粘菌素、一种含有β-内酰胺酶抑制剂的抗生素组合物，或它们的任意组合物。在一些实施例中，所述抗生素是头孢吡肟、头孢他啶、头孢匹罗、亚胺培南、美罗培南、替卡西林、哌拉西林、阿洛西林、卡苄西林、美洛西林、阿曲南、妥布霉素、庆大霉素、阿米卡星、环丙沙星、左氧氟沙星、头孢哌松舒巴坦、哌拉西林-他唑巴坦、磷霉素或其任何组合。在一些实施例中，所述抗生素是亚胺培南、妥布霉素、环丙沙星、美罗培南或阿曲南中的一种或多种。在一些实施例中，所述抗生素是庆大霉素、氨苄西林或卡那霉素中的一种或多种。

表达PcrV的感染性病原体的诊断方法和这些疾病的临床描述在本领域内是已知的。这些方法包括但不限于，例如免疫组化、PCR和荧光原位杂交 (FISH)。

在一些实施例中，所述抗PcrV抗体(例如全长抗PcrV抗体)和/组合物与第二、第三或第四药剂(包括，例如抗生素)联合使用来治疗或预防与表达 PcrV的病原菌相关的疾病或病症。

抗PcrV抗体的给药剂量和方法

施用于个体(例如人)的抗PcrV抗体(例如分离的抗PcrV抗体)组合物的剂量可能因特定组合物、给药方式和治疗疾病类型的不同而不同。在一些实施例中，组合物(例如，包含分离的抗PcrV抗体的组合物)的量可在治疗或预防假单胞菌感染中有效产生客观响应(例如，部分响应或完全响应)。在一些实施例中，抗PcrV抗体组合物的量足以在个体中产生完全响应。在一些实施例中，抗PcrV抗体组合物的量足以在个体中产生部分响应。在一些实施例中，抗PcrV抗体组合物的给药剂量(例如当单独施用时)足以在使用抗PcrV抗体组合物治疗的个体群体中产生高于20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、 55％、60％、64％、65％、70％、75％、80％、85％或90％的总响应率。个体对本文所述治疗或预防方法的响应可通过，例如，利用革兰氏染色或其他表型测试方法对假单胞菌的检测来确定。

在一些实施例中，组合物(例如包含分离的抗PcrV抗体的组合物)的量足以延长个体的无进展生存期。在一些实施例中，组合物的量足以延长个体的总体生存期。在一些实施例中，在使用抗PcrV抗体组合物治疗的个体群体中，组合物的量(例如当单独施用时)足以产生高于50％、60％、70％或77％的临床益处。

在一些实施例中，组合物(例如包含分离的抗PcrV抗体的组合物)的量，单独使用或与第二、第三、和/或第四药剂联合使用时，与同一受试者治疗前相比或与未接受治疗的其它受试者的相应器官负荷相比，其足以减轻假单胞菌器官负荷的强度至少为10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、 90％、95％或100％。可以采用标准方法来测量该疗效的大小，例如纯化酶的体外检测、基于细胞的检测、动物模型或人体试验。

在一些实施例中，当将组合物施用于个体时，组合物中抗PcrV抗体(例如全长的抗PcrV抗体)的量低于引起毒性效应(即，一种高于临床可接受毒性水平的效应)的水平，或者处于潜在副作用可以控制或耐受的水平。

在一些实施例中，遵循相同的给药方案，组合物的量接近组合物的最大耐受剂量(MTD)。在一些实施例中，组合物的量高于MTD的80％、90％、95％或98％。

在一些实施例中，组合物中抗PcrV抗体(例如全长的抗PcrV抗体)的含量在0.001μg到1000μg的范围之内。

在一些实施例中，所述组合物或方法进一步包含一种或多种抗生素。在一些实施例中，组合物中的抗生素(例如亚胺培南、妥布霉素、环丙沙星、美罗培南、阿曲南、替卡西林、哌拉西林、阿洛西林、卡苄西林、美洛西林、庆大霉素或阿米卡星)的含量在0.001μg到1000μg的范围之内。

在如上所述任一个实施例中，组合物中的PcrV抗体(例如全长的抗PcrV 抗体)的有效量，按照体重计算，为0.1μg/kg到100mg/kg的范围之内。

在如上所述任一个实施例中，组合物中的抗生素(例如亚胺培南、妥布霉素、环丙沙星、美罗培南、阿曲南、替卡西林、哌拉西林、阿洛西林、卡苄西林、美洛西林、庆大霉素或阿米卡星)的有效量，按照体重计算，为0.1μg/kg 到100mg/kg的范围之内。

抗PcrV抗体组合物可通过多种途径施用于个体(如人类)，包括，例如静脉注射、动脉内给药、腹腔注射、肺内给药、口服给药、吸入给药、血管内给药、肌肉注射、气管内给药、皮下注射、眼内给药、鞘内给药、粘膜给药或经皮给药。在一些实施例中，使用组合物的缓释制剂。在一些实施例中，组合物通过静脉给药。在一些实施例中，组合物通过门静脉给药。在一些实施例中，组合物通过动脉给药。在一些实施例中，组合物通过腹膜内给药。在一些实施例中，组合物通过肝内给药。在一些实施例中，组合物通过肝动脉输注给药。在一些实施例中，组合物施用于远离第一病灶的部位。

制品及试剂盒

在本申请的一些实施例中，提供一种制品，所述制品包含一种物质，所述物质能够用于治疗或预防个体中假单胞菌感染，或者用于递送抗PcrV抗体(例如一种全长抗PcrV抗体)到被表达PcrV的病原菌附着的细胞中。所述制品可以包括一种容器以及在容器上或随该容器附带的标签或包装说明书。合适的容器包括，例如瓶子、小瓶、注射器等。容器可以由多种材料制成，例如玻璃或塑料。通常，该容器内装有能够有效治疗本文所述疾病或病症的组合物，并且具有一个无菌端口(例如该容器可以是一个静脉输液袋或是一个具有皮下注射针头可刺穿盖子的小瓶)。组合物中的至少一种活性物质即为本申请所述的抗PcrV抗体。标签或包装说明书标示了该组合物可以用于治疗的特定病症。标签或包装说明书进一步包含给患者施用抗PcrV抗体组合物的说明书。包括联合治疗的制品和试剂盒均在本文的考虑范围之内。

包装说明书是指通常包含在治疗产品的商业包装内的说明书，其包含关于与这些治疗产品使用有关的适应症、用法、剂量、施用、禁忌症和/或警告信息。在一些实施例中，包装说明书标明该组合物可以用于治疗细菌感染。在一些实施例中，包装说明书标明该组合物可用于治疗假单胞菌感染。

此外，所述制品还可以包括第二容器，其包含药学上可接受的缓冲液，例如抑菌性注射用水(BWFI)、磷酸盐缓冲液、格林氏溶液或葡萄糖溶液。还可以包括从商业和用户角度而言所需的其他材料，包括其他缓冲液、稀释液、过滤器、针头和注射器。

同时还提供可用于各种目的的试剂盒，例如用于治疗或预防个体中假单胞菌感染，或者用于递送抗PcrV抗体(例如全长抗PcrV抗体)到被表达PcrV 的病原菌附着的细胞中，任选与制品组合。本申请的试剂盒包括一个或多个容器，其包含抗PcrV抗体组合物(或单剂量形式和/或制品)，并且在一些实施例中，进一步包含另一种药剂(例如本文所述的药剂)和/或与本文所述任一方法相一致的使用说明书。该试剂盒可进一步包括选择适合治疗个体的描述。本申请中试剂盒中所附带的使用说明书通常是标签或包装说明书上的书面说明 (例如包含在试剂盒内的纸页)，机器可读的说明(例如，磁性或光学储存光盘上的说明)也是可以接受的。

例如，在一些实施例中，试剂盒包括一种包含抗PcrV抗体(例如全长的抗 PcrV抗体)的组合物。在一些实施例中，试剂盒包括：a)包含本文所述的任一种抗PcrV抗体的组合物，和b)至少一种有效量的其它药剂，其能够增强抗 PcrV抗体的效果(如治疗效果、检测效果)。在一些实施例中，试剂盒包括： a)包含本文所述的任一种抗PcrV抗体的组合物，和b)向个体施用抗PcrV抗体组合物用于治疗个体中假单胞菌感染的使用说明书。在一些实施例中，试剂盒包括：a)包含本文所述的任一种抗PcrV抗体的组合物，和b)至少一种有效量的其它药剂，其能够增强抗PcrV抗体的效果(如治疗效果、检测效果)和c) 向个体施用抗PcrV抗体组合物和其它物质用于治疗个体中假单胞菌感染的使用说明书。所述抗PcrV抗体和其他物质可以存在于独立的容器或同一个容器中。例如，该试剂盒可以包括一种特定组合物或两种或更多种组合物，其中一种组合物包括抗PcrV抗体，另一种组合物包括另一种药剂。

在一些实施例中，试剂盒包含一种(或一组)编码抗PcrV抗体(例如全长的抗PcrV抗体)的核酸。在一些实施例中，试剂盒包含：a)一种(或一组)编码抗PcrV抗体，和b)一种表达核酸(或一组核酸)的宿主细胞。在一些实施例中，试剂盒包含：a)一种(或一组)编码抗PcrV抗体的核酸，和b)使用说明书，适用于：i)在宿主细胞中表达抗PcrV抗体，ii)制备包含抗PcrV抗体的组合物，和iii)向个体施用包含抗PcrV抗体的组合物来治疗或预防个体中假单胞菌感染。在一些实施例中，试剂盒包括：a)一种(或一组)编码抗PcrV 抗体的核酸，b)一种表达核酸(或一组核酸)的宿主细胞，和c)使用说明书，适用于：i)在宿主细胞中表达抗PcrV抗体，ii)制备包含抗PcrV抗体的组合物，和iii)向个体施用包含抗PcrV抗体的组合物来治疗或预防个体中假单胞菌感染。

本申请所述的试剂盒以合适的形式进行包装。合适的包装包括，但不限于，小瓶、瓶子、广口瓶、软包装(例如密封的聚酯薄膜或塑料袋)等。试剂盒可以任选地提供其它的组分，例如缓冲液和说明信息。因此，本申请还提供制品，其包括小瓶(例如密封的小瓶)、瓶子、广口瓶、软包装等等。

关于抗PcrV抗体组合物的使用说明书，通常包括一些信息，诸如，剂量，给药周期和给药途径的。容器可以是单位剂量的，大包装的(如，多剂量包装)或亚单位剂量的。例如，提供一种包含足够剂量的如本文所述的抗PcrV抗体(例如全长的抗PcrV抗体)的试剂盒以对个体进行长期有效的治疗，例如一周、8天、9天、10天、11天、12天、13天、2周、3周、4周、6周，8周， 3个月、4个月、5个月、7个月、8个月、9个月或更长时间。试剂盒还可包含多单位剂量的抗PcrV抗体、药物组合物和使用说明书，并且以足够在药房中储存和使用的量进行包装，例如，医院药房和复方药房。

本领域的技术人员将认识到在本申请的范围和宗旨内可能的若干实施例。现在将通过参考以下非限制性实施例来更详细地描述本申请。以下实施例进一步阐明本申请，但不应解释为以任何方式进行限制其范围。

具体实施方式

实施例1：制备重组假单胞菌PcrV和筛选抗PcrV的单链抗体(scFv)

制备重组假单胞菌PcrV

合成PcrV(PAO1)基因的全长序列(上海捷瑞)，并利用限制酶识别位点NdeI和BamHI将其亚克隆到表达载体pET中。用His标签或其他通用的标签标记PcrV。构建产生表达载体pET-6His–PcrV和pET-6His-Avi-PcrV。在这些构建中，“His”代表His标签，和“Avi”代表Avi标签。按照制造商的操作说明书对包括pET-6His-PcrV、pET-6His-Avi-PcrV的重组PcrV进行表达和纯化。简而言之，用表达载体转化大肠杆菌细胞，并用IPTG诱导上述细胞，在25℃、 220rpm条件下培养过夜。随后，对大肠杆菌细胞进行超声处理，沉淀并去除细胞碎片，通过离心分离蛋白。

根据制造商的操作说明书，使用镍柱(Ni Sepharose purification)纯化具有His标签的蛋白质。特别的，使用Qiagen Ni-NTA超流柱(Qiagen Ni-NTA Superflowcartridges)进行固定化金属亲和层析(IMAC)分析。首先用缓冲液A1 (50mM Na₃PO₄，0.15MNaCl，pH 7.2)平衡柱子，流速150cm/h。培养基的上清液(调整pH值为7.2)在室温以150cm/h的速度流穿柱子。下一步，缓冲液 A1(6倍柱体积)用于平衡柱子，流速150cm/h。采用10倍柱体积的50mM PB缓冲液(0.15M NaCl and 0.2M咪唑，pH 7.2)来清洗柱子，并收集洗脱液。

制备生物素化的PcrV抗原

按照制造商的操作说明书，采用生物素连接酶B0101A

(GENECOPOEIA^TM)对6His-Avi-PcrV进行生物素化标记。简言之，将缓冲液A/B与连接酶加入6His-Avi-PcrV中，然后在30℃孵育1小时。生物素化的 PcrV在后文中被命名为Bhavi-PcrV。通过ELISA法检测生物素化效率。简言之，通过与磁珠(Dynabeads^TMMyOne^TMStreptavidin T1)孵育以去除Bhavi- PcrV，以已知浓度的6His-Avi-PcrV作为标准品，用ELISA定量上清中6His- Avi-PcrV的浓度。确定生物素化标记效率为90％。

筛选抗PcrV单链抗体(scFv)

构建酵母scFv抗体展示库：从2000份人血样中收集RNAs，逆转录获得 cDNA，用V_H-和V_K-特异性引物扩增V_H和V_K片段。在凝胶提取和纯化后，通过接头连接V_H和V_K生成scFv。这些scFvs被克隆到酵母展示质粒PYD1 中，然后电穿孔到酵母中，构建产生酵母scFv抗体展示库。

通过PcrV结合筛选抗PcrV单链抗体(scFv)

从酵母展示文库中分离识别PcrV的scFvs。简言之，采用MACS磁珠分选对表达抗PcrV scFv抗体的细胞进行富集。按照制造商的操作说明书，Bhavi- PcrV与磁珠(Dynabeads^TMMyOne^TMStreptavidin T1)混合过夜，使生物素化的 PcrV包被磁珠。然后将scFv抗体酵母库与包被磁珠的PcrV混合，富集展示 PcrV抗体的酵母，未结合的在洗脱步骤被洗掉。然后，为了筛选与PcrV具有高亲和性的酵母展示抗体，用PcrV蛋白标记富集的酵母细胞，并用FACS分选。FACS介导的筛选重复2-3个循环。将筛选的酵母库细胞置于琼脂上，挑取单菌落，并进行进一步的FACS分析。从PcrV结合阳性的酵母克隆中提取 scFv基因，与6-His标签融合，并亚克隆到原核表达载体中。随后，用上述镍柱对His标记的scFvs进行纯化。筛选完成后获得一组阳性scFv抗体，并对这些抗体抑制铜绿假单胞菌引起的红细胞(RBC)裂解的功能进行测试。

通过RBC裂解抑制分析候选抗PcrV scFv抗体

筛选单克隆scFv抗体，通过RBC裂解实验评估其生物活性。简言之，通过离心新鲜的人全血或兔全血来制备红细胞(RBCs)，添加EDTA并用磷酸盐缓冲液(PBS)洗涤几次。用含10％胎牛血清(FBS，Gibco)的DMEM培养基稀释洗涤过的RBCs至终浓度为2.5％(v/v)，将其与用PBS稀释的纯化的抗 PcrV抗体共同加入到96孔圆底板中。铜绿假单胞菌菌株57/66(O6)在2×YT培养基(Oxford)中生长至对数生长期，离心收集后用含FBS的DMEM培养基重悬，至600nm处吸光值(OD600)为0.15。取10μl的菌悬液加到RBC-抗体混合物中，通过震荡进行混合，在37℃、5％CO₂条件下孵育3小时。将培养板短暂离心(1000rpm，1min)以沉淀完整的RBCs，上清液转移至96孔平底板中，测量OD405值以检测裂解情况，据此计算裂解抑制的相对量并作曲线。还确定了抗体的IC50值。

实施例2：全长人抗PcrV抗体的制备与表征

全长人抗PcrV抗体的制备

将最有潜力的scFv抗体重构成具有人IgG1的重链恒定区和人κ轻链恒定区的人IgG1抗体分子。从原核表达载体中扩增V_L和V_H，然后分别构建入真核表达载体pTT5-L(包含kappa恒定区)和pTT5-H1(包含IgG1重链恒定区) 中。提取表达轻链或重链的质粒，共转染293F细胞，37℃、8％CO₂、120rpm 培养5天，用Protein A亲和层析柱纯化培养液。

简而言之，首先采用6倍柱体积的包含0.15M NaCl的50mM PBS缓冲液 (pH7.2)以150cm/h的流速平衡Protein A柱。培养液上清(调节pH至7.2) 以150cm/h流速流穿柱子。在进行进一步平衡之后，采用50mM柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液(pH3.5)洗脱，收集包含抗PcrV抗体的洗脱液。按照实施例1中的方法与如下所描述的方法，对全长抗体的抑制RBC裂解(参见实施例1)和 A549/U937细胞裂解，以及提高急性肺炎小鼠模型存活率的能力进行功能性表征。

通过A549或U937裂解抑制分析候选抗PcrV抗体

为检测对铜绿假单胞菌引起的细胞毒性和细胞裂解的抑制能力，将候选抗 PcrV抗体加入到人支气管上皮细胞系A549或人淋巴瘤细胞系U937中，所述细胞用含10％FBS的DMEM培养基接种在白色96孔板(Nunc Nunclon Delta) 中。以感染复数10(MOI＝10)加入对数生长期的铜绿假单胞菌菌株PA103 (O11)，37℃、5％CO₂孵育2小时，然后在室温平衡20分钟。用CytoTox- ONE试剂盒(Promega)定量裂解细胞释放的乳酸脱氢酶，从而检测膜的完整性。据此绘制裂解抑制的相对量曲线。还确定了抗体的IC50值。

通过小鼠急性肺炎模型分析候选抗PcrV抗体

检测候选抗PcrV抗体提高急性肺炎小鼠模型存活率的能力。在预防性模型中，在感染前24小时，向7-8周龄的BALB/c小鼠(维通利华)腹腔注射 (i.p.)候选抗体或PBS，按小鼠体重计给药剂量为1、5、10或25mg/kg。为建立急性肺炎模型，操作如前期(DiGiandomenico et al.,2007,Proc.Natl.Acad. Sci.U.S.A.,104:4624–4629)所述，向BALB/c小鼠鼻腔接种致死量或2倍致死量(8×10⁵-1.6×10⁶CFU；1*或2*LD90)的悬浮于40μl接种液中的铜绿假单胞菌 (PA103菌株)。在感染后的7天内记录小鼠存活率。

PA49克隆抗体作为先导抗体进一步进行优化

在所制备的全长抗体中，根据抑制RBC裂解、A549细胞或U937细胞裂解的能力，以及提高急性肺炎小鼠模型的存活率的能力，选择单克隆抗体PA49 作为先导亲本抗体。

实施例3：制备和表征优化的全长抗PcrV抗体

在所制备的全长抗体中，单克隆抗体PA49被选为先导亲本抗体做进一步优化。特别地，优化PA49以提高其亲和力和生物活性。用"扩大的二元替换" 技术(AugmentedBinary Substitution，见Sue Townsend,et al,2015,PNAS vol.112,15354–15359)设计组合文库。在LC-CDR1、LC-CDR2、HC-CDR1和 HC-CDR2中，二元替换CDR片段盒被插入到框架中形成文库，该文库中每个位置只编码亲本或人类种系的目的残基。HC-CDR3也以每个克隆1±1个随机取代的方式扩大，即在9个位点(HC-CDR3全长)中随机选取2个位点进行 NNK突变(编码全部的20个氨基酸)。随着亲本抗体的亲和力成熟，该技术降低了CDR中非生殖系序列的含量，从而降低了最终分子的免疫原性风险。

从PA49的scFv开始，如上所述构建了一个包含CDR区突变的噬菌体 scFv展示库。用BLI鉴定出与PcrV结合具有高亲和力和低解离率的突变体，并检测这些突变体抑制RBC裂解、A549细胞裂解或U937细胞裂解的功能。由PA49优化得到的与亲本scFv相比具有相当或改善的生物活性的scFv抗体用于制备全长抗体。筛选结束后获得了一组优化的全长抗体。

通过BLI检测优化后的抗PcrV单抗克隆和对照抗体V2L2-MD与PcrV的结合动力学和亲和力，结果显示在表6中。

然后，根据实施例1和实施例2中描述的方法，对优化的全长抗体的抑制 RBC裂解、A549细胞裂解或U937细胞裂解的能力进行功能表征。

优化的抗PcrV抗体抑制铜绿假单胞菌引起的RBC、A549或U937细胞裂解

优化的抗PcrV抗体抑制RBC裂解

将优化的抗PcrV单抗克隆抑制RBC裂解的能力与亲本PA49单抗和对照抗体V2L2-MD进行比较。RBC裂解抑制实验如实施例1所述。

结果如图1A、1B和表7所示，与亲本PA49单抗和对照抗体V2L2-MD相比，由PA49优化得到的所有抗体在抑制RBC裂解方面表现出更好或相当的效果。

优化的抗PcrV抗体抑制A549细胞裂解或U937细胞裂解

同时评价了优化后的抗PcrV抗体抑制A549或U937细胞裂解的能力。 A549和U937细胞裂解抑制实验如实施例2所示。

结果如图2A和2B所示，在100μg/ml及更低剂量下，由PA49优化得到的所有抗体在抑制A549(图2A)或U937(图2B)细胞裂解方面均表现出较高的效果，且抑制效果呈剂量依赖性。

实施例4：表征优化的抗PcrV抗体的非特异性结合和亲和力

在BV ELISA或293细胞交叉反应试验中进一步表征优化抗体6G4、5F3、 9C7、11E9、7H5、6G12、2A5、4A2、5B4、10D8、2B4、对照抗体V2L2- MD、阴性对照抗体Tildrakizumab或阳性对照抗体Lenzilumab的非特异性结合。

抗PcrV抗体的非特异性结合

通过测量与BV粒子和PcrV阴性293细胞的交叉反应性，表征优化的抗 PcrV抗体的非特异性结合。

与BV粒子的交叉反应性：根据先前描述的方法(见

I,et al,2012, mAbs 4:6,753–760)，用ELISA法检测优化的抗体6G4、5F3、9C7、11E9、 7H5、6G12、2A5、4A2、5B4、10D8、2B4、对照抗体V2L2-MD、阴性对照抗体Tildrakizumab或阳性对照抗体Lenzilumab与BV粒子的交叉反应性。结果如图3所示，阳性对照Lenzilumab与BV粒子具有高水平的非特异性结合。相比之下，优化后的抗体表现出低水平的非特异性结合，与V2L2-MD相似。

与293T细胞的交叉反应性：用FACS检测优化抗体5F3、9C7或V2L2- MD与PcrV阴性293细胞的交叉反应性。结果如图4A-4C所示，阳性对照 Lenzilumab表现出高水平的293细胞结合，优化抗体5F3或9C7则表现出与阴性对照(不加任何抗体)或V2L2-MD相似的低水平293结合，而在特异性针对293细胞上的GM-CSF的阳性对照抗体Lenzilumab表现出与293细胞更高水平的结合。

综上所述，这些结果表明优化抗体5F3和9C7具有与对照抗体V2L2-MD 相似的低非特异性结合。

实施例5：优化的全长抗PcrV抗体广泛中和铜绿假单胞菌菌株

为了检查优化后的抗PcrV抗体对铜绿假单胞菌菌株是否具有广谱性的中和活性，研究了优化的抗PcrV抗体对几株临床相关铜绿假单胞菌菌株(O1、 O11、O6)引起的RBC裂解的抑制能力，这些菌株代表了铜绿假单胞菌感染的大多数临床病例。

优化的抗PcrV抗体对RBC裂解的抑制作用

分析优化后的抗PcrV单抗克隆11E9、9C7、5F3和7H5对铜绿假单胞菌菌株O1-52/66引起的RBC裂解的抑制能力；分析5B4、4A2、2A5和11E9对铜绿假单胞菌菌株O11-PA103的抑制作用；分析9C7、5F3、7H5或对照抗体 V2L2-MD对铜绿假单胞菌菌株O6-57/66的抑制作用。RBC裂解抑制试验如实施例1所述。

结果如图5A-5C和表8A-8C所示，所有优化后的单抗克隆均能有效抑制菌株O1-52/66(图5A)或菌株O11-PA103(图5B)引起的RBC裂解，9C7、 5F3或7H5对菌株O6-57/66(图5C)引起的RBC裂解的抑制效果比对照抗体 V2L2-MD更好。

为了进一步说明优化后的抗体是否能广泛中和铜绿假单胞菌菌株，测试了这些抗体与不同形式的PcrV突变体的结合能力。简言之，从Genebank数据库中随机选取100条PcrV序列。与野生型序列(SEQ ID No:80)相比，所选序列中有13％的序列在225位包含R、G或K(野生型序列SEQ No:80中则是S)。

优化后的9C7、5F3、4A2、2A5、5B4、11E9或7H5抗体对这些PcrV突变体具有亲和力和特异性，并且与这些突变体有很强的结合(数据未显示)。这些结果进一步说明，优化后的抗PcrV抗体对可能多种表达形式的PcrV突变体的铜绿假单胞菌菌株具有广谱性的中和活性。

实施例6：优化的抗PcrV抗体用于预防铜绿假单胞菌感染

在小鼠肺炎模型和腹腔感染模型中存活率的提高证明了优化后的抗PcrV抗体可预防性地保护免受铜绿假单胞菌感染。

抗PcrV抗体提高小鼠肺炎模型的存活率

评估了亲本抗PcrV抗体PA49，优化抗体6G12、4A2、10D8、7H5、 11E9、6G4、2A5、9C7、5F3或对照抗体V2L2-MD在小鼠肺炎模型中提高存活率的能力，与HIV-10E8(阴性对照)进行对比。HIV-10E8是先前描述过的一种广泛中和HIV的抗体(见Huang J,et al,2012,Nature 491:406)。

在预防性模型中，在感染前24小时向7-8周龄BALB/c小鼠(维通利华) 腹腔注射(i.p.)抗体，按小鼠体重计给药剂量为1或10mg/kg。为诱导急性肺炎，BALB/c小鼠鼻腔接种致死量(1*LD90)或2倍致死量(2*LD90)(8×10⁵～ 1.6×10⁶CFU)的悬浮于40μl接种液中的铜绿假单胞菌(PA103菌株)。在感染后的7天内记录小鼠存活率，其结果用Kaplan-Meier生存曲线表示。

结果如图6A-6C中Kaplan-Meier生存曲线所示，与阴性对照组相比，在接种1倍(图6B)和2倍(图6A和6C)致死剂量(1*LD90或2*LD90；8×10⁵～1.6×10⁶CFU)的铜绿假单胞菌(PA103菌株)时，所有抗PcrV抗体均明显提高了急性肺炎模型小鼠的存活率。采用对数轶检验计算存活率差异。

施用抗PcrV抗体的肺炎模型小鼠中的器官负荷

进一步评价优化后的抗PcrV抗体4A2、9C7、11E9、5F3、7H5或2A5在急性肺炎模型中减轻器官负荷的能力。HIV-10E8作为阴性对照。

在预防性模型中，在感染前24小时向7-8周龄BALB/c小鼠(维通利华) 腹腔注射(i.p.)抗体，按小鼠体重计给药剂量为10mg/kg。为诱导急性肺炎， BALB/c小鼠鼻腔接种半致死剂量(0.5*LD90；3x10⁵ CFU)的悬浮于40μl接种液中的铜绿假单胞菌(PA103菌株)。感染后24小时，处死小鼠，提取肺、脾、肾，进行匀浆，稀释后置于琼脂上来测量活菌单位(CFU)，这代表各个器官样本中铜绿假单胞菌的负荷。

结果如图7所示，与阴性对照HIV-10E8相比，所有优化后的抗PcrV抗体在减轻肺炎模型小鼠肺、脾、肾的器官负荷方面均表现出更高的效力。采用对数轶检验计算存活率差异。

使用抗PcrV抗体提高腹腔感染模型小鼠的存活率

以HIV-10E8作为阴性对照，评估优化的抗PcrV抗体6G4或10D8在腹腔感染模型小鼠中提高存活率的能力。构建小鼠腹腔内感染模型如前所述(见 Warrener et al.,2014,Antimicrob.Agents Chemother.,58,4384–4391)。

在预防性模型中，在感染前24小时向7-8周龄BALB/c小鼠(维通利华) 腹腔注射(i.p.)抗体，按小鼠体重计给药剂量为10mg/kg。为诱导腹腔感染， BALB/c小鼠腹腔接种4倍致死剂量(4*LD90＝1×10⁶CFU)的悬浮于300μl接种液中的铜绿假单胞菌(O6-57/66菌株)。在感染后的7天内记录小鼠的存活率。

结果如图8所示，在接种4倍致死量(4*LD₉₀)的铜绿假单胞菌(57/66菌株)时，与阴性对照组相比，所有抗PcrV抗体在10mg/kg抗体剂量时均可显著提高腹腔内感染模型小鼠的生存率。采用对数轶检验计算存活率差异。

综上所述，这些结果表明，本文所披露的抗PcrV抗体可以在小鼠肺炎模型和小鼠腹腔内感染模型中可以预防铜绿假单胞菌感染。

实施例7：优化的抗PcrV抗体用于治疗铜绿假单胞菌感染

肺炎模型小鼠存活率的提高证明了优化后的抗PcrV抗体可治疗铜绿假单胞菌感染。

优化的抗PcrV抗体提高肺炎模型小鼠的存活率

评价了优化后的抗PcrV抗体4A2、2A5、9C7、6G12和PA49在急性肺炎模型中提高存活率的能力。HIV-10E8作为阴性对照。

在治疗性模型中，为诱导急性肺炎，向7-8周龄BALB/c小鼠(维通利华)鼻腔接种致死量(1*LD90＝8x10⁵ CFU)的悬浮于40μl接种液中的铜绿假单胞菌(PA103菌株)。在感染后1小时，静脉注射抗体或PBS，按小鼠体重计给药剂量为2mg/kg。在感染后的7天内记录小鼠存活率。

结果如图9所示，在接种致死剂量(1*LD90)的铜绿假单胞菌(PA103菌株)时，与阴性对照组相比，所有抗PcrV抗体均明显提高了急性肺炎模型小鼠的存活率。与亲本抗体PA49相比，优化后的抗体4A2、2A5、9C7或6G12的也明显提高了急性肺炎模型小鼠的存活率。采用对数轶检验计算存活率差异。结果表明，本文所述的抗PcrV抗体可用于治疗铜绿假单胞菌感染。

实施例8：优化的抗PcrV抗体与抗生素联合治疗铜绿假单胞菌感染

抗PcrV抗体联合抗生素提高小鼠腹腔感染模型的存活率

评估了优化的抗PcrV抗体9C7或4A2提高腹腔感染模型小鼠存活率的能力，与抗生素美罗培南，以及9C7和美罗培南或4A2和美罗培南的联合治疗进行比较。HIV-10E8作为阴性对照。

在预防性模型中对抗PcrV抗体进行测试，在感染前24小时向7-8周龄 BALB/c小鼠(维通利华)腹腔注射抗体或在感染后2小时注射抗生素。具体的，分别向小鼠施用优化的抗PcrV抗体克隆9C7或4A2(5mg/kg)、美罗培南(6mg/kg)或9C7(5mg/kg)和美罗培南(6mg/kg)的组合或4A2 (5mg/kg)和美罗培南(6mg/kg)的组合。为诱导腹腔感染，向BALB/c小鼠腹腔内接种3倍致死剂量(3*LD90＝7x10⁵ CFU)的悬浮于300μl接种液中的的铜绿假单胞菌(57/66菌株)。在感染后的5天内记录小鼠存活率。

结果如图10所示，在接种3倍致死剂量(3*LD90)的铜绿假单胞菌 (57/66菌株)时，单独使用优化后的抗体9C7(5mg/kg)或4A2(5mg/kg)或抗生素美罗培南(6mg/kg)均不能对腹腔内感染模型小鼠提供100％的保护。与单独使用抗体或单独使用抗生素相比，当抗体与抗生素联合使用时，9C7 (5mg/kg)与抗生素美罗培(6mg/kg)联合使用或4A2(5mg/kg)与抗生素美罗培南(6mg/kg)联合使用均明显提高腹腔内感染模型小鼠的存活率(p< 0.05)。采用对数轶检验计算存活率的差异。这些结果表明了本文所述的抗 PcrV抗体与抗生素联合使用在中和铜绿假单胞菌中的临床潜力。

实施例9：优化的抗PcrV抗体的药代动力学

为了研究优化后的抗PcrV抗体的体内药代动力学，随时间测量了5F3、 9C7、7H5或对照抗体V2L2-MD在大鼠血浆中的水平。

大鼠的药代动力学：将32只健康成年大鼠(体重约0.2kg)平均分为两组，每组的平均体重相近。向其中一组以30mg/kg静脉注射5F3、9C7、7H5或 V2L2-MD，另一组则以3mg/kg静脉注射5F3、9C7、7H5或V2L2-MD。分别于注射后0小时、0.5小时、2小时、8小时、1天、3天、7天、11天、17 天、23天、31天、41天、52天采集血样。离心后，用ELISA法测定血浆中抗体的浓度。在ELISA实验中，用合成的PcrV包被96孔板。第二天，PBST洗涤后，用200μL PBS-牛奶封闭1小时，再用PBST洗涤后，将血浆加入板中， 37℃孵育1小时。96孔板用0.1％TBST洗涤6次，然后向每孔加入100μL山羊抗人Fc抗体AP(用PBS 1:3000稀释)，孵育1小时。用0.1％TBST洗涤6次后，每孔加入50μL pNPP，37℃显色10-20min。用酶标仪在410nm波长处读取信号。

结果如图11A和11B所示，在静脉注射高剂量和低剂量(3mg/kg或30 mg/kg)时，5F3、9C7和7H5的半衰期均长于对照抗体V2L2-MD，这表明与对照抗体V2L2-MD相比，优化后的抗体在不同剂量时均表现出更稳定的药代动力学。

序列表

<110> 舒泰神（北京）生物制药股份有限公司

<120> 特异性识别假单胞菌PCRV的抗体及其用途

<160> 86

<170> SIPO序列表 1.0

<210> 1

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成构建体

<400> 1

Ser Tyr Trp Met His

1 5

<210> 2

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成构建体

<400> 2

Arg Ile Asn Glu Asp Glu Thr Ser Ile Ser Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 3

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成构建体

<400> 3

Arg Ile Asn Glu Val Glu Asn Ser Ile Ser Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 4

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成构建体

<400> 4

Arg Ile Asn Glu Asp Glu Ser Ser Ile Ser Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 5

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成构建体

<400> 5

Arg Ile Asn Glu Leu Glu Ser Ser Ile Ser Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 6

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成构建体

<400> 6

Arg Ile Asn Glu Asn Glu Ser Ser Ile Ser Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 7

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成构建体

<400> 7

Arg Ile Asn Glu Asn Glu Gly Ser Ile Ser Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 8

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成构建体

<400> 8

Arg Ile Asn Glu Ile Glu Thr Ser Ile Ser Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 9

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成构建体

<400> 9

Arg Ile Asn Glu Asp Glu Arg Ser Ile Ser Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 10

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成构建体

<400> 10

Asp Gly Pro Tyr Asp Ser Phe Asp Ile

1 5

<210> 11

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成构建体

<400> 11

Asp Gly Pro Tyr Asp Ser Leu Asp Ile

1 5

<210> 12

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成构建体

<400> 12

Asp Gly Pro Tyr Asp Ala Leu Asp Ile

1 5

<210> 13

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成构建体

<400> 13

Asp Gly Pro Tyr Asp Thr Leu Asp Ile

1 5

<210> 14

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成构建体

<400> 14

Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asn Leu Ala

1 5 10

<210> 15

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成构建体

<400> 15

Arg Ala Ser Gln Gly Val Asn Asn Asn Leu Ala

1 5 10

<210> 16

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成构建体

<400> 16

Arg Ala Ser Gln Gly Val Lys Asn Asn Leu Ala

1 5 10

<210> 17

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成构建体

<400> 17

Arg Ala Ser Gln Asn Val Lys Asn Asn Leu Ala

1 5 10

<210> 18

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成构建体

<400> 18

Arg Ala Ser Gln Asp Val Arg Asn Asn Leu Ala

1 5 10

<210> 19

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成构建体

<400> 19

Arg Ala Ser Gln Gly Val Ser Ser Asn Leu Ala

1 5 10

<210> 20

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成构建体

<400> 20

Arg Ala Ser Gln Asp Val Arg Asp Asn Leu Ala

1 5 10

<210> 21

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成构建体

<400> 21

Arg Ala Ser Gln Asn Val Lys Gly Asn Leu Ala

1 5 10

<210> 22

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成构建体

<400> 22

Arg Ala Ser Gln Asp Val Thr Asn Asn Leu Ala

1 5 10

<210> 23

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成构建体

<400> 23

Arg Ala Ser Gln Gly Val Arg Asn Asn Leu Ala

1 5 10

<210> 24

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成构建体

<400> 24

Arg Ala Ser Gln Ser Val Asn Asn Asn Leu Ala

1 5 10

<210> 25

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成构建体

<400> 25

Arg Ala Ser Gln Asn Val Ser Asn Asn Leu Ala

1 5 10

<210> 26

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成构建体

<400> 26

Asp Ala Ser Ser Arg Ala Thr

1 5

<210> 27

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成构建体

<400> 27

His Ala Ser Ser Arg Ala Thr

1 5

<210> 28

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成构建体

<400> 28

Asn Ala Ser Ser Arg Ala Thr

1 5

<210> 29

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成构建体

<400> 29

Ala Ala Ser Ser Arg Ala Thr

1 5

<210> 30

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成构建体

<400> 30

Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro Leu Thr

1 5

<210> 31

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成构建体

<400> 31

Gln Gln Tyr Gly Thr Val Pro Ile Thr

1 5

<210> 32

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成构建体

<400> 32

Gln Gln Tyr Gly Glu Tyr Pro Leu Thr

1 5

<210> 33

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成构建体

<400> 33

Gln Gln Tyr Gly Ala Glu Pro Ile Thr

1 5

<210> 34

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成构建体

<400> 34

Gln Gln Tyr Gly Thr Asn Pro Leu Thr

1 5

<210> 35

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成构建体

<400> 35

Gln Gln Tyr Gly His Gln Pro Ile Thr

1 5

<210> 36

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成构建体

<400> 36

Gln Gln Tyr Gly Glu Thr Pro Ile Thr

1 5

<210> 37

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成构建体

<400> 37

Gln Gln Tyr Gly His Asp Pro Val Thr

1 5

<210> 38

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成构建体

<400> 38

Gln Gln Tyr Gly Asp Leu Pro Ile Thr

1 5

<210> 39

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成构建体

<400> 39

Gln Gln Tyr Gly Leu Gln Pro Ile Thr

1 5

<210> 40

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成构建体

<400> 40

Gln Gln Tyr Gly Asn Gln Pro Ile Thr

1 5

<210> 41

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成构建体

<400> 41

Gln Gln Tyr Gly Thr Thr Pro Ile Thr

1 5

<210> 42

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成构建体

<400> 42

Gln Gln Tyr Gly Met Gly Pro Ile Thr

1 5

<210> 43

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成构建体

<400> 43

Gln Gln Tyr Gly Asn Glu Pro Ile Thr

1 5

<210> 44

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成构建体

<400> 44

Gln Gln Tyr Gly Thr His Pro Ile Thr

1 5 10

<210> 45

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成构建体

<220>

<221> 变体

<222> (5)

<223> Xaa = Asp, Asn, Ile, Leu or Val

<220>

<221> 变体

<222> (7)

<223> Xaa = Ser, Thr, Arg, Gly or Asn

<400> 45

Arg Ile Asn Glu Xaa Glu Xaa Ser Ile Ser Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 46

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成构建体

<220>

<221> 变体

<222> (6)

<223> Xaa = Ser, Ala or Thr

<220>

<221> 变体

<222> (7)

<223> Xaa = Phe or Leu

<400> 46

Asp Gly Pro Tyr Asp Xaa Xaa Asp Ile

1 5

<210> 47

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成构建体

<220>

<221> 变体

<222> (5)

<223> Xaa = Asn, Gly, Asp or Ser

<220>

<221> 变体

<222> (7)

<223> Xaa = Lys, Arg, Ser, Asn or Thr

<220>

<221> 变体

<222> (8)

<223> Xaa = Asn, Gly, Ser or Asp

<400> 47

Arg Ala Ser Gln Xaa Val Xaa Xaa Asn Leu Ala

1 5 10

<210> 48

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成构建体

<220>

<221> 变体

<222> (1)

<223> Xaa = Asp, Asn, His or Ala

<400> 48

Xaa Ala Ser Ser Arg Ala Thr

1 5

<210> 49

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成构建体

<220>

<221> 变体

<222> (5)

<223> Xaa = Ser, Thr, Glu, His, Asn, Ala, Asp, Met or Leu

<220>

<221> 变体

<222> (6)

<223> Xaa = Ser, Gln, Glu, Thr, Asp, Gly, His, Leu, Asn, Val or Tyr

<220>

<221> 变体

<222> (8)

<223> Xaa = Ile, Leu or Val

<400> 49

Gln Gln Tyr Gly Xaa Xaa Pro Xaa Thr

1 5

<210> 50

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成构建体

<220>

<221> 变体

<222> (5)

<223> Xaa = Asp, Thr, Asn, Leu, Ile, Ser, Val, Ala or His

<220>

<221> 变体

<222> (7)

<223> Xaa = Ser, Thr, Asn, Asp, Gly or Arg

<220>

<221> 变体

<222> (9)

<223> Xaa = Ile or Thr

<400> 50

Arg Ile Asn Glu Xaa Glu Xaa Ser Xaa Ser Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 51

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成构建体

<220>

<221> 变体

<222> (3)

<223> Xaa = Pro, Tyr or Ala

<220>

<221> 变体

<222> (4)

<223> Xaa = Tyr or Trp

<220>

<221> 变体

<222> (5)

<223> Xaa = Asp, Thr or Asn

<220>

<221> 变体

<222> (6)

<223> Xaa = Ser, Thr or Ala

<220>

<221> 变体

<222> (7)

<223> Xaa = Leu, Phe or Met

<220>

<221> 变体

<222> (9)

<223> Xaa = Ile, Val, Ala, Ser, Leu or Trp

<400> 51

Asp Gly Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Asp Xaa

1 5

<210> 52

<211> 118

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成构建体

<400> 52

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Arg Ser Tyr

20 25 30

Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Val Trp Val

35 40 45

Ser Arg Ile Asn Glu Asp Glu Thr Ser Ile Ser Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Gly Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Asp Gly Pro Tyr Asp Ser Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Met Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 53

<211> 118

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成构建体

<400> 53

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Val Trp Val

35 40 45

Ser Arg Ile Asn Glu Val Glu Asn Ser Ile Ser Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Gly Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Val Arg Asp Gly Pro Tyr Asp Ser Leu Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Met Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 54

<211> 118

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成构建体

<400> 54

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Val Trp Val

35 40 45

Ser Arg Ile Asn Glu Asp Glu Ser Ser Ile Ser Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Gly Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Val Arg Asp Gly Pro Tyr Asp Ser Leu Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Met Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 55

<211> 118

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成构建体

<400> 55

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Val Trp Val

35 40 45

Ser Arg Ile Asn Glu Leu Glu Ser Ser Ile Ser Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Gly Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Val Arg Asp Gly Pro Tyr Asp Ser Leu Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Met Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 56

<211> 118

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成构建体

<400> 56

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Val Trp Val

35 40 45

Ser Arg Ile Asn Glu Asp Glu Thr Ser Ile Ser Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Gly Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Val Arg Asp Gly Pro Tyr Asp Ser Leu Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Met Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 57

<211> 118

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成构建体

<400> 57

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Val Trp Val

35 40 45

Ser Arg Ile Asn Glu Asn Glu Ser Ser Ile Ser Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Gly Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Val Arg Asp Gly Pro Tyr Asp Ser Leu Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr

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<213> 人工序列

<220>

<223> 合成构建体

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<220>

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<213> 人工序列

<220>

<223> 合成构建体

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<213> 人工序列

<220>

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<213> 人工序列

<220>

<223> 合成构建体

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<213> 人工序列

<220>

<223> 合成构建体

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<220>

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<213> 人工序列

<220>

<223> 合成构建体

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<223> 合成构建体

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成构建体

<400> 69

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<213> 人工序列

<220>

<223> 合成构建体

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<220>

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成构建体

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

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<400> 74

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成构建体

<400> 75

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成构建体

<400> 76

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成构建体

<400> 77

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<210> 78

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成构建体

<400> 78

Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly

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Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asn Val Lys Asn Asn

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Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

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<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成构建体

<400> 79

Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asn Val Lys Asn Asn

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln His Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

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<210> 80

<211> 294

<212> PRT

<213> 铜绿假单胞菌

<400> 80

Met Glu Val Arg Asn Leu Asn Ala Ala Arg Glu Leu Phe Leu Asp Glu

1 5 10 15

Leu Leu Ala Ala Ser Ala Ala Pro Ala Ser Ala Glu Gln Glu Glu Leu

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Leu Ala Leu Leu Arg Ser Glu Arg Ile Val Leu Ala His Ala Gly Gln

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Pro Leu Ser Glu Ala Gln Val Leu Lys Ala Leu Ala Trp Leu Leu Ala

50 55 60

Ala Asn Pro Ser Ala Pro Pro Gly Gln Gly Leu Glu Val Leu Arg Glu

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Phe Leu Val Ser Ala Tyr Phe Ser Leu His Gly Arg Leu Asp Glu Asp

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Asp Ile Leu Ser Ala Ile

290

<210> 81

<211> 107

<212> PRT

<213> 人类

<400> 81

Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu

1 5 10 15

Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe

20 25 30

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Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser

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Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser

85 90 95

Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

100 105

<210> 82

<211> 330

<212> PRT

<213> 人类

<400> 82

Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys

1 5 10 15

Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr

20 25 30

Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser

35 40 45

Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser

50 55 60

Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr

65 70 75 80

Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys

85 90 95

Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys

100 105 110

Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro

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Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp

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Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu

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Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr

245 250 255

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275 280 285

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Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

325 330

<210> 83

<211> 327

<212> PRT

<213> 人类

<400> 83

Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg

1 5 10 15

Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr

20 25 30

Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser

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Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser

50 55 60

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100 105 110

Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

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Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

130 135 140

Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp

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Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe

165 170 175

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

180 185 190

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu

195 200 205

Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

210 215 220

Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys

225 230 235 240

Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

245 250 255

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

260 265 270

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser

275 280 285

Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser

290 295 300

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser

305 310 315 320

Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys

325

<210> 84

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成构建体

<220>

<221> 变体

<222> (5)

<223> Xaa = Ser, Asn, Asp or Gly

<220>

<221> 变体

<222> (7)

<223> Xaa = Ser, Lys, Asn, Arg or Thr

<220>

<221> 变体

<222> (8)

<223> Xaa = Ser, Asn, Asp or Gly

<400> 84

Arg Ala Ser Gln Xaa Val Xaa Xaa Asn Leu Ala

1 5 10

<210> 85

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成构建体

<220>

<221> 变体

<222> (1)

<223> Xaa = Asp, Asn, His, Ala or Ser

<400> 85

Xaa Ala Ser Ser Arg Ala Thr

1 5

<210> 86

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成构建体

<220>

<221> 变体

<222> (5)

<223> Xaa = Ser, Ala, Thr, Glu, Asp, His, Asn, Gln, Gly, Leu, Tyr, Met,Arg or Val

<220>

<221> 变体

<222> (6)

<223> Xaa = Ser, Gln, Val, Glu, Thr, Asp, Met, Tyr, Gly, His, Leu, Asn,Ala, Phe or Pro

<220>

<221> 变体

<222> (8)

<223> Xaa = Ile, Leu or Val

<400> 86

Gln Gln Tyr Gly Xaa Xaa Pro Xaa Thr

1 5

Claims

1.一种分离的抗PcrV抗体，其中所述抗PcrV抗体包括：

重链可变域(V_H)，所述V_H包括：一个重链互补决定区(HC-CDR)1，包含SYWMH(SEQ ID NO:1)或其包含至多3个氨基酸取代的变体；一个HC-CDR2，包含RINEX₁EX₂SX₃SYADSVKG(SEQ IDNO:50)，或其包含至多3个氨基酸取代的变体，其中X₁为D、T、N、L、I、S、V、A或H，X₂为S、T、N、D、G或R，X₃为I或T；和一个HC-CDR3，包含DGX₁X₂X₃X₄X₅DX₆(SEQ ID NO:51)，或其包含至多3个氨基酸取代的变体，其中X₁为P、Y或A，X₂为Y或W，X₃为D、T或N，X₄为S、T或A，X₅为L、F或M，X₆为I、V、A、S、L或W；

以及轻链可变域(V_L)，所述V_L包括：一个轻链互补决定区(LC-CDR)1，包含RASQX₁VX₂X₃NLA(SEQ ID NO:47)，或其包含至多3个氨基酸取代的变体，其中X₁为S、N、D或G，X₂为S、K、N、R或T，X₃为N、S、D或G；一个LC-CDR2，包含X₁ASSRAT(SEQ ID NO:85)，或其包含至多3个氨基酸取代的变体，其中X₁为D、N、H、A或S；和一个LC-CDR3，包含QQYGX₁X₂PX₃T(SEQ IDNO:86)，或其包含至多3个氨基酸取代的变体，其中X₁为S、A、T、E、D、H、N、Q、G、L、Y、M、R或V，X₂为S、Q、V、E、T、D、M、Y、G、H、L、N、A、F或P，X₃为I、L或V。

2.一种分离的抗体PcrV抗体，其中所述抗PcrV抗体包括：

V_H，所述V_H包括：一个HC-CDR1，包含SYWMH(SEQ ID NO:1)或其包含至多3个氨基酸取代的变体；一个HC-CDR2，包含RINEX1EX2SISYADSVKG(SEQ ID NO:45)或其包含至多3个氨基酸取代的变体，其中X1为D、N、I、L或V，X2为S、T、R、G或N；和一个HC-CDR3，包含DGPYDX1X2DI(SEQ ID NO:46)或其包含至多3个氨基酸取代的变体，其中X1为S、A或T，X2为F或L；

以及V_L，所述V_L包括：一个LC-CDR1，包含RASQX1VX2X3NLA(SEQ ID NO:47)或其包含至多3个氨基酸取代的变体，其中X1为N、G、D或S，X2为K、R、S、N或T，X3为N、G、S或D；一个LC-CDR2，包含X1ASSRAT(SEQ ID NO:48)或其包含至多3个氨基酸取代的变体，其中X1为D、N、H或A；和一个LC-CDR3，包含QQYGX1X2PX3T(SEQ ID NO:49)或其包含至多3个氨基酸取代的变体，其中X1为S、T、E、H、N、A、D、M或L，X2为S、Q、E、T、D、G、H、L、N、V或Y，和X3为I、L或V。

3.根据权利要求1或2所述的分离的抗PcrV抗体，其中抗PcrV抗体与假单胞菌PcrV结合的Kd值约为0.1pM至1nM。

4.一种分离的抗体PcrV抗体，包括：

V_H，所述V_H包括：一个HC-CDR1，包含氨基酸序列SEQ ID NO:1，或其包含至多3个氨基酸取代的变体；一个HC-CDR2，包含SEQ ID NOs:2-9中任一氨基酸序列，或其包含至多3个氨基酸取代的变体；和一个HC-CDR3，包含SEQ ID NOs:10-13中任一氨基酸序列，或其包含至多3个氨基酸取代的变体；

以及V_L，所述V_L包括：一个LC-CDR1，包含SEQ ID NOs:14-25中任一氨基酸序列，或其包含至多3个氨基酸取代的变体；一个LC-CDR2，包含SEQ ID NOs:26-29中任一氨基酸序列，或其包含至多3个氨基酸取代的变体；一个LC-CDR3，包含SEQ ID NOs:30-44中任一氨基酸序列，或其包含至多3个氨基酸取代的变体。

5.一种分离的抗PcrV抗体，包括：V_H，其包含具有SEQ ID NOs:52-64中任一氨基酸序列的V_H中的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及V_L，其包含具有SEQ ID NOs:65-79中任一氨基酸序列的V_L中的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。

6.根据权利要求1-5中任一项所述的分离的抗体PcrV抗体，包括：

(i)V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:1的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:2的HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:10的HC-CDR3；或者在HC-CDRs中包含至多5个氨基酸取代的V_H变体；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:14的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:26的LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQID NO:30的LC-CDR3，或者在LC-CDRs中包含至多5个氨基酸取代的V_L变体；

(ii)V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:1的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:2的HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:11的HC-CDR3；或者在HC-CDRs中包含至多5个氨基酸取代的V_H变体；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ IDNO:14的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:26的LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:30的LC-CDR3，或者在LC-CDRs中包含至多5个氨基酸取代的V_L变体；

(iii)V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:1的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:3的HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:11的HC-CDR3；或者在HC-CDRs中包含至多5个氨基酸取代的V_H变体；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ IDNO:15的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:27的LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:31的LC-CDR3，或者在LC-CDRs中包含至多5个氨基酸取代的V_L变体；

(iv)V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:1的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:7的HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:13的HC-CDR3；或者在HC-CDRs中包含至多5个氨基酸取代的V_H变体；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ IDNO:23的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:27的LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:39的LC-CDR3，或者在LC-CDRs中包含至多5个氨基酸取代的V_L变体；

(v)V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:1的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:4的HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:11的HC-CDR3；或者在HC-CDRs中包含至多5个氨基酸取代的V_H变体；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:16的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:28的LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQID NO:32的LC-CDR3，或者在LC-CDRs中包含至多5个氨基酸取代的V_L变体；

(vi)V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:1的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:5的HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:11的HC-CDR3；或者在HC-CDRs中包含至多5个氨基酸取代的V_H变体；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ IDNO:17的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:27的LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:33的LC-CDR3，或者在LC-CDRs中包含至多5个氨基酸取代的V_L变体；

(vii)V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:1的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:2的HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:11的HC-CDR3；或者在HC-CDRs中包含至多5个氨基酸取代的V_H变体；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ IDNO:18的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:28的LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:34的LC-CDR3，或者在LC-CDRs中包含至多5个氨基酸取代的V_L变体；

(viii)V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:1的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:9的HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:13的HC-CDR3；或者在HC-CDRs中包含至多5个氨基酸取代的V_H变体；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ IDNO:17的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:27的LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:43的LC-CDR3，或者在LC-CDRs中包含至多5个氨基酸取代的V_L变体；

(ix)V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:1的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:2的HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:11的HC-CDR3；或者在HC-CDRs中包含至多5个氨基酸取代的V_H变体；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ IDNO:19的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:28的LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:35的LC-CDR3，或者在LC-CDRs中包含至多5个氨基酸取代的V_L变体；

(x)V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:1的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:6的HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:11的HC-CDR3；或者在HC-CDRs中包含至多5个氨基酸取代的V_H变体；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:20的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:27的LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQID NO:36的LC-CDR3，或者在LC-CDRs中包含至多5个氨基酸取代的V_L变体；

(xi)V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:1的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:4的HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:11的HC-CDR3；或者在HC-CDRs中包含至多5个氨基酸取代的V_H变体；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ IDNO:21的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:28的LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:37的LC-CDR3，或者在LC-CDRs中包含至多5个氨基酸取代的V_L变体；

(xii)V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:1的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:2的HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:11的HC-CDR3；或者在HC-CDRs中包含至多5个氨基酸取代的V_H变体；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ IDNO:22的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:28的LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:38的LC-CDR3，或者在LC-CDRs中包含至多5个氨基酸取代的V_L变体；

(xiii)V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:1的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:7的HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:11的HC-CDR3；或者在HC-CDRs中包含至多5个氨基酸取代的V_H变体；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ IDNO:23的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:27的LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:39的LC-CDR3，或者在LC-CDRs中包含至多5个氨基酸取代的V_L变体；

(xiv)V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:1的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:8的HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:11的HC-CDR3；或者在HC-CDRs中包含至多5个氨基酸取代的V_H变体；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ IDNO:21的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:28的LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:40的LC-CDR3，或者在LC-CDRs中包含至多5个氨基酸取代的V_L变体；

(xv)V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:1的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:6的HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:11的HC-CDR3；或者在HC-CDRs中包含至多5个氨基酸取代的V_H变体；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ IDNO:24的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:28的LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:41的LC-CDR3，或者在LC-CDRs中包含至多5个氨基酸取代的V_L变体；

(xvi)V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:1的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:9的HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:11的HC-CDR3；或者在HC-CDRs中包含至多5个氨基酸取代的V_H变体；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ IDNO:25的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:29的LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:42的LC-CDR3，或者在LC-CDRs中包含至多5个氨基酸取代的V_L变体；

(xvii)V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:1的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:9的HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:11的HC-CDR3；或者在HC-CDRs中包含至多5个氨基酸取代的V_H变体；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ IDNO:17的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:27的LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:43的LC-CDR3，或者在LC-CDRs中包含至多5个氨基酸取代的V_L变体；

(xviii)V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:1的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:2的HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:11的HC-CDR3；或者在HC-CDRs中包含至多5个氨基酸取代的V_H变体；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ IDNO:17的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:27的LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:44的LC-CDR3，或者在LC-CDRs中包含至多5个氨基酸取代的V_L变体；

(xix)V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:1的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:7的HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:12的HC-CDR3；或者在HC-CDRs中包含至多5个氨基酸取代的V_H变体；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ IDNO:23的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:27的LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:39的LC-CDR3，或者在LC-CDRs中包含至多5个氨基酸取代的V_L变体；或者

(xx)V_H，所述V_H包含：一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:1的HC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:9的HC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:12的HC-CDR3；或者在HC-CDRs中包含至多5个氨基酸取代的V_H变体；以及V_L，所述V_L包含：一个包含氨基酸序列SEQ IDNO:17的LC-CDR1，一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:27的LC-CDR2，和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO:43的LC-CDR3，或者在LC-CDRs中包含至多5个氨基酸取代的V_L变体。

7.根据权利要求1-6中任一项所述的分离的抗体PcrV抗体，包括：

V_H，所述V_H包含SEQ ID NOs:52-64中任一氨基酸序列，或包含与SEQ ID NOs:52-64中任一氨基酸序列具有至少90％序列同源性的变体序列；以及V_L，所述V_L包含SEQ ID NOs:65-79中任一氨基酸序列，或包含与SEQ ID NOs:65-79中任一氨基酸序列具有至少90％序列同源性的变体序列。

8.根据权利要求7中所述的分离的抗PcrV抗体，包括：

(i)包含氨基酸序列SEQ ID NO:52的V_H和包含氨基酸序列SEQ ID NO:65的V_L；

(ii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:56的V_H和包含氨基酸序列SEQ ID NO:65的V_L；

(iii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:53的V_H和包含氨基酸序列SEQ ID NO:66的V_L；

(iv)包含氨基酸序列SEQ ID NO:62的V_H和包含氨基酸序列SEQ ID NO:74的V_L；

(v)包含氨基酸序列SEQ ID NO:54的V_H和包含氨基酸序列SEQ ID NO:67的V_L；

(vi)包含氨基酸序列SEQ ID NO:55的V_H和包含氨基酸序列SEQ ID NO:68的V_L；

(vii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:56的V_H和包含氨基酸序列SEQ ID NO:69的V_L；

(viii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:64的V_H和包含氨基酸序列SEQ ID NO:78的V_L；

(ix)包含氨基酸序列SEQ ID NO:56的V_H和包含氨基酸序列SEQ ID NO:70的V_L；

(x)包含氨基酸序列SEQ ID NO:57的V_H和包含氨基酸序列SEQ ID NO:71的V_L；

(xi)包含氨基酸序列SEQ ID NO:54的V_H和包含氨基酸序列SEQ ID NO:72的V_L；

(xii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:56的V_H和包含氨基酸序列SEQ ID NO:73的V_L；

(xiii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:58的V_H和包含氨基酸序列SEQ ID NO:74的V_L；

(xiv)包含氨基酸序列SEQ ID NO:59的V_H和包含氨基酸序列SEQ ID NO:75的V_L；

(xv)包含氨基酸序列SEQ ID NO:57的V_H和包含氨基酸序列SEQ ID NO:76的V_L；

(xvi)包含氨基酸序列SEQ ID NO:60的V_H和包含氨基酸序列SEQ ID NO:77的V_L；

(xvii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:60的V_H和包含氨基酸序列SEQ ID NO:78的V_L；

(xviii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:56的V_H和包含氨基酸序列SEQ ID NO:79的V_L；

(xix)包含氨基酸序列SEQ ID NO:61的V_H和包含氨基酸序列SEQ ID NO:74的V_L；或者

(xx)包含氨基酸序列SEQ ID NO:63的V_H和包含氨基酸序列SEQ ID NO:78的V_L。

9.一种分离的特异性结合PcrV的抗PcrV抗体，其与权利要求1-8中任一项所述的分离的抗PcrV抗体竞争性地结合PcrV，或者与权利要求1-8中任一项所述的分离的抗PcrV抗体特异地结合相同的表位。

10.根据权利要求1-9中任一项分离的抗PcrV抗体，其中所述抗PcrV抗体包含Fc片段。

11.根据权利要求10中分离的抗PcrV抗体，其中所述抗PcrV抗体是全长的IgG抗体。

12.根据权利要求10中分离的抗PcrV抗体，其中所述抗PcrV抗体是全长的IgG1或IgG4抗体。

13.根据权利要求1-12中任一项分离的抗PcrV抗体，其中所述抗PcrV抗体是嵌合的、全人或人源化的。

14.根据权利要求1-9中任一项分离的抗PcrV抗体，其中所述抗PcrV抗体是一种抗原结合片段，其选自由Fab、Fab’、F(ab)’2、Fab’-SH、单链抗体(scFv)、Fv片段、dAb、Fd或双链抗体组成的组中。

15.一种编码权利要求1-14中任一项所述的抗PcrV抗体的核酸分子。

16.一种包含权利要求15中所述的核酸分子的载体。

17.一种分离的宿主细胞，其包含权利要求1-14中任一项所述的抗PcrV抗体、权利要求15中所述的核酸分子或权利要求16中所述的载体。

18.一种制备分离的抗PcrV抗体的方法，包括

a)在有效表达抗PcrV抗体的条件下培养权利要求17中所述的宿主细胞；并且

b)在宿主细胞中获得表达的抗PcrV抗体。

19.一种药用组合物，包括权利要求1-14中任一项所述的抗PcrV抗体、权利要求15中所述的核酸分子、权利要求16中所述的载体、或者权利要求17中所述的分离的宿主细胞，以及药学上可接受的载体。

20.一种在有需要的个体中治疗疾病或病症的方法，包括向个体施用有效量的权利要求19中所述的药用组合物。

21.根据权利要求20中所述的方法，其中疾病或病症是病原菌感染。

22.根据权利要求21中所述的方法，其中所述感染是革兰氏阴性菌感染。

23.根据权利要求22中所述的方法，其中的细菌是铜绿假单胞菌。

24.根据权利要求20-23中任一项的方法，其中所述疾病或病症包含由铜绿假单胞菌感染引起的一种或多种症状。

25.根据权利要求24中所述的方法，其中所述症状包括发热、寒战、疲劳、肌肉和关节疼痛、关节肿胀、头痛、腹泻、皮疹、伤口流脓、菌血症、急性肺炎、腹腔内感染、呼吸道感染、脓毒性休克、化脓性关节炎、肠炎、皮肤和软组织感染、尿路感染、肠道感染、溃疡性角膜炎、慢性化脓性中耳炎、乳突炎、鼻窦炎或心内膜炎中的一种或多种。

26.根据权利要求20-25中任一项的方法，其中所述方法进一步包括施用一种或多种治疗药物。

27.根据权利要求26中所述的方法，其中至少一种治疗药物是抗生素。

28.根据权利要求27中所述的方法，其中抗生素是亚胺培南、妥布霉素、环丙沙星、美罗培南或阿曲南中的一种或多种。