CN115023438B - 特异性识别假单胞菌pcrv或psl抗原的抗体组合以及双特异性抗体 - Google Patents

特异性识别假单胞菌pcrv或psl抗原的抗体组合以及双特异性抗体 Download PDF

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Abstract

本发明提供了特异性识别铜绿假单胞菌PcrV和/或Psl的双特异性抗体，包括特异性识别假单胞菌PcrV和/或Psl的非重叠表位的抗体的药物组合物。还提供了其制备方法与用途。

Description

特异性识别假单胞菌PCRV或PSL抗原的抗体组合以及双特异 性抗体
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以下提交的ASCII TEXT文本文件的内容通过整体引用并入本文中：计算机可读形式(CRF)的序列表(文本名称：202011036860_序列表.TXT，记录日期：2020.11.03，大小：276KB)。
技术领域
本申请涉及特异性识别铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa，PA)PcrV和/或Psl的双特异性抗体，包含特异性识别假单胞菌PcrV的非重叠表位的抗原结合分子和/或特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合分子的药物组合物，及其制备方法和用途，包括用其治疗和预防假单胞菌感染的方法。
背景技术
铜绿假单胞菌是一种广泛存在于自然界的专性需氧性革兰氏阴性杆菌。尽管其致病性通常很低，但它却是一种会引起机会性感染的病原菌，这种感染经常发生在患有癌症、糖尿病、免疫缺陷病等各种基础病和服用具有免疫抑制作用药物的患者中。在有皮肤黏膜破裂的患者中容易发生铜绿假单胞菌感染，患有慢性结构性肺病(如慢性阻塞性肺病或囊性纤维化)的患者也有相当大的感染风险。铜绿假单胞菌会引起肺炎、尿路感染、败血症等病症，并且常常导致严重的后果。高达10％的医院内感染由铜绿假单胞菌引起，铜绿假单胞菌菌血症患者的死亡率接近40％。临床上，铜绿假单胞菌感染被认为是最难治疗的感染之一，不仅因为铜绿假单胞菌本身对现有的抗生素敏感性低，还因为其很容易对多种抗生素产生耐药性。因此，开发抗生素的策略在对抗铜绿假单胞菌感染方面的优势有限。
铜绿假单胞菌是医院获得性感染的主要原因之一，特别是机械通气的患者，而且它是导致囊性纤维化患者死亡的主要原因。铜绿假单胞菌III分泌系统(T3SS)是与疾病严重度相关的主要毒力因子，其可将细菌毒素直接注入宿主细胞的细胞质中。铜绿假单胞菌通过III型外毒素分泌系统(T3SS)将毒素注入真核细胞来发挥其高细胞毒性。PcrV是构成III型外毒素分泌系统的一个蛋白，由294个残基(NCBI登录号：AAC45935，序列号：71)组成，并且编码所述蛋白的操纵子序列对公众是公开的(US 6,551,795,Yahr,T.L.et al.,J.Bacteriol.,1997,vol.179,p.7165)。PcrV蛋白位于T3SS注射体复合物的顶端，是T3SS发挥功能所必需的，也是在针对铜绿假单胞菌免疫预防策略的动物模型中充分验证过的靶点。铜绿假单胞菌的T3SS是一个经过充分验证的靶点，用于干预由该机会型病原菌引起的感染。在动物模型中，采用T3SS成分蛋白的主动疫苗接种和靶向PcrV的被动免疫治疗都能强有力的缓解铜绿假单胞菌引起的疾病。因此，控制PcrV可能成为控制铜绿假单胞菌感染的治疗手段(T.Sawa et al.,Nature Medicine,1999,vol.5,p.392)，已经报道了针对PcrV的具有中和活性的多克隆抗体(Shime N et al.,J.Immunol.2001,vol.167,p.5880,Imamura Y et al.,Eur.Respir.J.,2007,Vol.29,p.965)和单克隆抗体(WO2002064161A2,Karine Faure et al.,J.Immune.Based.Therapies and Vaccines,2003,Vol.1,DaraW.Frank et al.,J.Infect.Disease,2002,Vol.186,p.64)。但是，多克隆抗体难以人源化，由于难以改善其抗原性而难以用作药物组合物。Warrener等人描述了一个针对PcrV的抗体，命名为V2L2-MD(Warrener et al.,2014,Antimicrob.Agents Chemother.,58,4384–4391)。一种基于PcrV特异性的鼠单克隆抗体MAB166的抗PcrV单克隆抗体聚乙二醇化Fab片段，在机械通气患者中预防铜绿假单胞菌引起的呼吸道感染是无效的。尽管MAB166在体外能有效阻断铜绿假单胞菌T3SS，但其在动物模型中却需要相当高的抗体量才能起到保护作用。本申请提供了新的抗PcrV单克隆抗体，在体外与体内均表现出有效的抑制作用。
铜绿假单胞菌生物膜基质的一个关键成分是多糖Psl，它是由多糖合成位点编码的蛋白质产生的。Psl既可以游离在细胞外，也可以结合在细胞表面。游离在细胞外的Psl的结构由D-甘露糖、L-鼠李糖和D-葡萄糖的五糖重复单元组成。由于Psl在生物膜形成过程中兼具结构和保护功能，而且已知它还可以保护生物膜免受抗生素(通过化学结合)和免疫系统(通过一种未知的机制)的伤害，因此可能是新的治疗选择的一个理想靶点(Ray VA.etal.Anti-Psl Targeting of Pseudomonas aeruginosa Biofilms for Neutrophil-Mediated Disruption.Sci Rep.2017)。在(DiGiandomenico,A.et al.Identification ofbroadly protective human antibodies to Pseudomonas aeruginosaexopolysaccharide Psl by phenotypic screening.J Exp Med 209,1273–1287；ValerieA.Ray,et al,Anti-Psl targeting of Pseudomonas aeruginosa biofilms forneutrophil mediated disruption,Scientific Reports7,Article number:16065(2017))中描述了靶向Psl的人单克隆抗体(mAbs)，例如Wapr-001、Wapr-016、Cam-003或其衍生物Psl0096。MedI3902(也称为MEDI3902)是一种双价、双特异性的人免疫球蛋白G1(IgG1)κ单克隆抗体(mAb)，其可选择性结合铜绿假单胞菌表面的PcrV蛋白和Psl胞外多糖。MedI3902在铜绿假单胞菌感染的小鼠模型中具有高度的保护作用。参见例如，PCT公开号WO2013/070615、WO2014/074528，PCT申请号PCT/US2015/029063、PCT申请号PCT/US2015/036576。
本文提及的所有出版物、专利、专利申请和已公开的专利申请中披露的内容，以引用方式全部并入本文中。
申请概述
本申请提供了特异性识别假单胞菌PcrV和特异性识别假单胞菌Psl的双特异性分子，特异性识别假单胞菌PcrV非重叠表位的双特异性分子，以及包含特异性识别假单胞菌PcrV非重叠表位的抗原结合蛋白和/或特异性识别Psl的抗原结合蛋白的药物组合物。还提供其用于预防和治疗假单胞菌感染的方法。
在一方面，本申请提供了一种双特异性分子，其包括特异性识别假单胞菌PcrV的第一抗原结合域，和特异性识别假单胞菌Psl的第二抗原结合域，其中第一抗原结合域包含：(a)重链可变域(VH)，所述VH包含：重链互补决定区(HC-CDR)1，其包含DX1X2MS(SEQ IDNO:20)，其中X1为N或Y，和X2为Y、H或P；HC-CDR2，其包含X1ISESGGSTNYADSVKG(SEQ ID NO:15)，其中X1为V或G；和HC-CDR3，其包含GRFSTX1SX2HFX3RAVYGMDV(SEQ ID NO:21)，其中X1为L、S、N或D，X2为S或A，X3为F或Y；以及轻链可变域(VL)，所述VL包含：轻链互补决定区(LC-CDR)1，其包含RASQGISSYLA(SEQ ID NO:10)；LC-CDR2，其包含AASTLQS(SEQ ID NO:11)；和LC-CDR3，其包含QQLSSYPLX1(SEQ ID NO:19)，其中X1为S或T；或者(b)VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含SYWMH(SEQ ID NO:22)；HC-CDR2，其包含RINEX1EX2SISYADSVKG(SEQ ID NO:44)，其中X1为D或N，和X2为T、G或R；和HC-CDR3，其包含DGPYDX1X2DI(SEQ ID NO:45)，其中X1为S、A或T，和X2为F或L；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含RASQX1VX2X3NLA(SEQ ID NO:46)，其中X1为S、G或N，X2为S、R或K和X3为S或N；LC-CDR2，其包含X1ASSRAT(SEQ ID NO:42)，其中X1为D或H；和LC-CDR3，其包含QQYGX1X2PX3T(SEQ ID NO:47)，其中X1为S、L或N，X2为S、Q或E和X3为L或I；或者(c)VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含X1X2X3MS(SEQ ID NO:17)，其中X1为D或S，X2为Y或N，和X3为P、H、Y或S；HC-CDR2，其包含X1ISESGGSTX2X3ADSVKG(SEQ ID NO:18)，其中X1为G或V，X2为N或Y，和X3为D或Y；和HC-CDR3，其包含GRFX1X2X3X4X5X6FX7RAVYGMDV(SEQ ID NO:38)，其中X1为S或C，X2为T、G、D、Y、Q或A，X3为S、D、N、E、L、A或Y，X4为S、T、Y或A，X5为S、H、Q、A、R、K、G、E、Y或D，X6为H或C，和X7为F或Y；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含RASQGIX1SYLA(SEQ ID NO:209)，其中X1为S或R；LC-CDR2，其包含AASTLQS(SEQ ID NO:11)；和LC-CDR3，其包含QQLX1SYPLX2(SEQ ID NO:210)，其中X1为S、N或K，和X2为S或T；或者(d)VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含SYWMH(SEQ ID NO:22)；HC-CDR2，其包含RINEX1EX2SISYADSVKG(SEQ ID NO:211)，其中X1为D、N、I、L或V，X2为S、T、R、G或N；和HC-CDR3，其包含DGPYDX1X2DI(SEQ ID NO:45)，其中X1为S、A或T，X2为F或L；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含RASQX1VX2X3NLA(SEQ ID NO:212)，其中X1为N、G、D或S，X2为K、R、S、N或T，X3为N、G、S或D；LC-CDR2，其包含X1ASSRAT(SEQ ID NO:213)，其中X1为D、N、H或A；和LC-CDR3，其包含QQYGX1X2PX3T(SEQ ID NO:214)，其中X1为S、T、E、H、N、A、D、M或L，X2为S、Q、E、T、D、G、H、L、N、V或Y，和X3为I、L或V。在一些实施例中，所述第二抗原结合蛋白包含：(a)VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含SSGDYWG(SEQ ID NO:48)；HC-CDR2，其包含SIHNX1GSTYYNPSLKG(SEQ ID NO:81)，其中X1为S或Q；和HC-CDR3，其包含QFGSETYYX1GIX2P(SEQ ID NO:82)，其中X1为T、N或P，和X2为D或Q；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含RSSQSLLHSX1GYNYLD(SEQ ID NO:83)，其中X1为N或R；LC-CDR2，其包含LGSNRAS(SEQ ID NO:70)；和LC-CDR3，其包含MQALQTPYT(SEQID NO:74)；或者(b)VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含IHSVH(SEQ ID NO:50)；HC-CDR2，其包含TIISSGTTTTYAQSFQD(SEQ ID NO:55)；和HC-CDR3，其包含DGX1S(SEQ ID NO:84)，其中X1为D或T；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含RASQGISSWLA(SEQ ID NO:68)；LC-CDR2，其包含HASTLES(SEQ ID NO:72)；和LC-CDR3，其包含LQAX1SLPHT(SEQ ID NO:85)，其中X1为N、F、S或K；或者(c)VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:49，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:54，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:61；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:67，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:71，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:75；或者(d)VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:51，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:56，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:64；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:69，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:73，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:80。
在一方面，本申请提供了一种双特异性分子，其包括特异性识别假单胞菌PcrV的第一抗原结合域，和特异性识别假单胞菌Psl的第二抗原结合域，其中第二抗原结合域包含：(a)VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含SSGDYWG(SEQ ID NO:48)；HC-CDR2，其包含SIHNX1GSTYYNPSLKG(SEQ ID NO:81)，其中X1为S或Q；和HC-CDR3，其包含QFGSETYYX1GIX2P(SEQ ID NO:82)，其中X1为T、N或P，和X2为D或Q；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含RSSQSLLHSX1GYNYLD(SEQ ID NO:83)，其中X1为N或R；LC-CDR2，其包含LGSNRAS(SEQ ID NO:70)；和LC-CDR3，其包含MQALQTPYT(SEQ ID NO:74)；或者(b)VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含IHSVH(SEQ ID NO:50)；HC-CDR2，其包含TIISSGTTTTYAQSFQD(SEQ ID NO:55)；和HC-CDR3，其包含DGX1S(SEQ ID NO:84)，其中X1为D或T；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含RASQGISSWLA(SEQ ID NO:68)；LC-CDR2，其包含HASTLES(SEQ ID NO:72)；和LC-CDR3，其包含LQAX1SLPHT(SEQ ID NO:85)，其中X1为N、F、S或K；或者(c)VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:49，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:54，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:61；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:67，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:71，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:75；或者(d)VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:51，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:56，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:64；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:69，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:73，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:80。
在一些实施例中，所述第一抗原结合域包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:1，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:4，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:6；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:10，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:11，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:12。在一些实施例中，所述第一抗原结合域包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ IDNO:2，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:5，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:7；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:10，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:11，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:13。在一些实施例中，所述第一抗原结合域包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:22，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:23，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:26；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:30，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ IDNO:33，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:35。在一些实施例中，所述第一抗原结合域包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:22，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:24，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:27；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:31，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:34，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:36。
在一些实施例中，所述第二抗原结合域包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:48，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:52，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:57；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:65，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:70，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:74。在一些实施例中，所述第二抗原结合域包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ IDNO:50，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:55，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ IDNO:62；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:68，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:72，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:76。
在一些实施例中，根据本文所述的任一双特异性分子，第一抗原结合域包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:1，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ IDNO:4，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:6；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:10，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:11，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:12；和第二抗原结合域包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:48，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:52，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:57；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:65，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:70，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:74。在一些实施例中，所述第一抗原结合域包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:1，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:4，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:6；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:10，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:11，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:12；和第二抗原结合域包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:49，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQID NO:54，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:61；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:67，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:71，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:75。在一些实施例中，所述第一抗原结合域包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:1，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:4，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:6；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQID NO:10，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:11，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQID NO:12；和第二抗原结合域包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:50，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:55，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:62；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:68，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:72，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:76。
在一些实施例中，所述第一抗原结合域包含：VH，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:91或161，以及VL，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:112或182；和第二抗原结合域包含：VH，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:103或173，以及VL，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:117或187。在一些实施例中，所述第一抗原结合域包含：VH，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:91或161，以及VL，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:112或182；和其第二抗原结合域包含：VH，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:109或179，以及VL，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:120或190。在一些实施例中，所述第一抗原结合域包含：VH，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:91或161，以及VL，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:112或182；和第二抗原结合域包含：VH，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:107或177，以及VL，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:119或189。
在一些实施例中，所述第一抗原结合结构域是特异性识别PcrV的Fab臂，第二抗原结合结构域是特异性识别Psl的单链抗体(scFv)，其中所述分子进一步包含Fc区，该Fc区包含CH2和CH3结构域；所述scFv通过第一连接肽(L1)与Fab臂连接，并通过第二连接肽(L2)与Fc区连接；其中双特异性分子是二价的，可与PcrV和Psl中的每一个结合。在一些实施例中，所述第一抗原结合结构域是特异性识别PcrV的单链抗体(scFv)，第二抗原结合结构域是特异性识别Psl的Fab臂，其中所述分子进一步包含Fc区，该Fc区包含CH2和CH3结构域；所述scFv通过第一连接肽(L1)与Fab臂连接，并通过第二连接肽(L2)与Fc区连接；其中双特异性分子是二价的，可与PcrV和Psl中的每一个结合。在一些实施例中，所述双特异性分子包含：氨基酸序列SEQ ID NO:135、136或159；和/或SEQ ID NOs:195-208中的任一氨基酸序列。
在一些实施例中，所述双特异性分子包含Fc区，其中Fc区选自由IgGl、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgM、IgE和IgD的Fc区组成的组中。在一些实施例中，所述Fc区包含可变Fc区。在一些实施例中，所述Fc区是糖基化的。在一些实施例中，所述Fc区是去糖基化的。在一些实施例中，所述Fc区是岩藻糖基化减少的或是无岩藻糖基化。在一些实施例中，所述可变的Fc区包括在位点297上的取代。在一些实施例中，位点297上的取代是297Q。在一些实施例中，所述可变的Fc区包括在位点239、282、289、297、312、324、330、335、337、339、356、359、361、383、384、398、400、440、422和442中的一个或多个位点上的取代，根据EU索引编号。
在一些实施例中，所述双特异性分子包括：包含SEQ ID NOs:137-152和160中任一氨基酸序列的嵌合重链，和/或包含氨基酸序列SEQ ID NO:135、136或159的轻链。
在一方面，提供了一种药物组合物包括：(i)特异性识别假单胞菌PcrV上的第一表位的抗原结合蛋白和(ii)特异性识别假单胞菌PcrV上的第二表位的抗原结合蛋白和/或特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白；其中特异性识别假单胞菌PcrV上的第一表位的抗原结合蛋包含：(a)重链可变域(VH)，所述VH包含：重链互补决定区(HC-CDR)1，其包含DX1X2MS(SEQ ID NO:20)，其中X1为N或Y，和X2为Y、H或P；HC-CDR2，其包含X1ISESGGSTNYADSVKG(SEQ ID NO:15)，其中X1为V或G；和HC-CDR3，其包含GRFSTX1SX2HFX3RAVYGMDV(SEQ ID NO:21)，其中X1为L、S、N或D，X2为S或A，X3为F或Y；以及轻链可变域(VL)，所述VL包含：轻链互补决定区(LC-CDR)1，其包含RASQGISSYLA(SEQ ID NO:10)；LC-CDR2，其包含AASTLQS(SEQ ID NO:11)；和LC-CDR3，其包含QQLSSYPLX1(SEQ ID NO:19)，其中X1为S或T；或者(b)VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含SYWMH(SEQ ID NO:22)；HC-CDR2，其包含RINEX1EX2SISYADSVKG(SEQ ID NO:44)，其中X1为D或N，和X2为T、G或R；和HC-CDR3，其包含DGPYDX1X2DI(SEQ ID NO:45)，其中X1为S、A或T，和X2为F或L；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含RASQX1VX2X3NLA(SEQ ID NO:46)，其中X1为S、G或N，X2为S、R或K和X3为S或N；LC-CDR2，其包含X1ASSRAT(SEQ ID NO:42)，其中X1为D或H；和LC-CDR3，其包含QQYGX1X2PX3T(SEQ ID NO:47)，其中X1为S、L或N，X2为S、Q或E和X3为L或I；或(c)VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含X1X2X3MS(SEQ ID NO:17)，其中X1为D或S，X2为Y或N，和X3为P、H、Y或S；HC-CDR2，其包含X1ISESGGSTX2X3ADSVKG(SEQ ID NO:18)，其中X1为G或V，X2为N或Y，和X3为D或Y；和HC-CDR3，其包含GRFX1X2X3X4X5X6FX7RAVYGMDV(SEQ ID NO:38)，其中X1为S或C，X2为T、G、D、Y、Q或A，X3为S、D、N、E、L、A或Y，X4为S、T、Y或A，X5为S、H、Q、A、R、K、G、E、Y或D，X6为H或C，和X7为F或Y；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含RASQGIX1SYLA(SEQ ID NO:209)，其中X1为S或R；LC-CDR2，其包含AASTLQS(SEQ ID NO:11)；和LC-CDR3，其包含QQLX1SYPLX2(SEQ IDNO:210)，其中X1为S、N或K，和X2为S或T；或者(d)VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含SYWMH(SEQID NO:22)；HC-CDR2，其包含RINEX1EX2SISYADSVKG(SEQ ID NO:211)，其中X1为D、N、I、L或V，X2为S、T、R、G或N；和HC-CDR3，其包含DGPYDX1X2DI(SEQ ID NO:45)，其中X1为S、A或T，X2为F或L；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含RASQX1VX2X3NLA(SEQ ID NO:212)，其中X1为N、G、D或S，X2为K、R、S、N或T，X3为N、G、S或D；LC-CDR2，其包含X1ASSRAT(SEQ ID NO:213)，其中X1为D、N、H或A；和LC-CDR3，其包含QQYGX1X2PX3T(SEQ ID NO:214)，其中X1为S、T、E、H、N、A、D、M或L，X2为S、Q、E、T、D、G、H、L、N、V或Y，和X3为I、L或V。
在一方面，提供了一种在有需要的个体中治疗和/或预防疾病或病症的方法，包括向个体施用有效量的(i)特异性识别假单胞菌PcrV上的第一表位的抗原结合蛋白和(ii)特异性识别假单胞菌PcrV上的第二表位的抗原结合蛋白和/或特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白；其中特异性识别假单胞菌PcrV上的第一表位的抗原结合蛋包含：(a)重链可变域(VH)，所述VH包含：重链互补决定区(HC-CDR)1，其包含DX1X2MS(SEQ ID NO:20)，其中X1为N或Y，和X2为Y、H或P；HC-CDR2，其包含X1ISESGGSTNYADSVKG(SEQ ID NO:15)，其中X1为V或G；和HC-CDR3，其包含GRFSTX1SX2HFX3RAVYGMDV(SEQ ID NO:21)，其中X1为L、S、N或D，X2为S或A，X3为F或Y；以及轻链可变域(VL)，所述VL包含：轻链互补决定区(LC-CDR)1，其包含RASQGISSYLA(SEQ ID NO:10)；LC-CDR2，其包含AASTLQS(SEQ ID NO:11)；和LC-CDR3，其包含QQLSSYPLX1(SEQ ID NO:19)，其中X1为S或T；或者(b)VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含SYWMH(SEQ ID NO:22)；HC-CDR2，其包含RINEX1EX2SISYADSVKG(SEQ ID NO:44)，其中X1为D或N，和X2为T、G或R；和HC-CDR3，其包含DGPYDX1X2DI(SEQ ID NO:45)，其中X1为S、A或T，和X2为F或L；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含RASQX1VX2X3NLA(SEQ ID NO:46)，其中X1为S、G或N，X2为S、R或K和X3为S或N；LC-CDR2，其包含X1ASSRAT(SEQ ID NO:42)，其中X1为D或H；和LC-CDR3，其包含QQYGX1X2PX3T(SEQ ID NO:47)，其中X1为S、L或N，X2为S、Q或E和X3为L或I；或(c)VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含X1X2X3MS(SEQ ID NO:17)，其中X1为D或S，X2为Y或N，和X3为P、H、Y或S；HC-CDR2，其包含X1ISESGGSTX2X3ADSVKG(SEQ ID NO:18)，其中X1为G或V，X2为N或Y，和X3为D或Y；和HC-CDR3，其包含GRFX1X2X3X4X5X6FX7RAVYGMDV(SEQ ID NO:38)，其中X1为S或C，X2为T、G、D、Y、Q或A，X3为S、D、N、E、L、A或Y，X4为S、T、Y或A，X5为S、H、Q、A、R、K、G、E、Y或D，X6为H或C，和X7为F或Y；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含RASQGIX1SYLA(SEQ ID NO:209)，其中X1为S或R；LC-CDR2，其包含AASTLQS(SEQ ID NO:11)；和LC-CDR3，其包含QQLX1SYPLX2(SEQ ID NO:210)，其中X1为S、N或K，和X2为S或T；或者(d)VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含SYWMH(SEQ ID NO:22)；HC-CDR2，其包含RINEX1EX2SISYADSVKG(SEQ ID NO:211)，其中X1为D、N、I、L或V，X2为S、T、R、G或N；和HC-CDR3，其包含DGPYDX1X2DI(SEQ ID NO:45)，其中X1为S、A或T，X2为F或L；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含RASQX1VX2X3NLA(SEQID NO:212)，其中X1为N、G、D或S，X2为K、R、S、N或T，X3为N、G、S或D；LC-CDR2，其包含X1ASSRAT(SEQ ID NO:213)，其中X1为D、N、H或A；和LC-CDR3，其包含QQYGX1X2PX3T(SEQ ID NO:214)，其中X1为S、T、E、H、N、A、D、M或L，X2为S、Q、E、T、D、G、H、L、N、V或Y，和X3为I、L或V。
在一些实施例中，特异性识别假单胞菌PcrV上的第二表位的抗原结合蛋白包含：(a)VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:2，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:5，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:7；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:10，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:11，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:13；或者(b)VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ IDNO:1，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:4，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:6；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:10，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:11，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:12；或者(c)VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:22，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:23，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:26；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:30，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:33，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:35；或者(d)VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:22，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:24，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:27；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:31，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQID NO:34，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:36。
在一些实施例中，特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白包含：(a)VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含SSGDYWG(SEQ ID NO:48)；HC-CDR2，其包含SIHNX1GSTYYNPSLKG(SEQ IDNO:81)，其中X1为S或Q；和HC-CDR3，其包含QFGSETYYX1GIX2P(SEQ ID NO:82)，其中X1为T、N或P，和X2为D或Q；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含RSSQSLLHSX1GYNYLD(SEQ ID NO:83)，其中X1为N或R；LC-CDR2，其包含LGSNRAS(SEQ ID NO:70)；和LC-CDR3，其包含MQALQTPYT(SEQ ID NO:74)；或者(b)VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含IHSVH(SEQ ID NO:50)；HC-CDR2，其包含TIISSGTTTTYAQSFQD(SEQ ID NO:55)；和HC-CDR3，其包含DGX1S(SEQID NO:84)，其中X1为D或T；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含RASQGISSWLA(SEQ ID NO:68)；LC-CDR2，其包含HASTLES(SEQ ID NO:72)；和LC-CDR3，其包含LQAX1SLPHT(SEQ ID NO:85)，其中X1为N、F、S或K；或者(c)VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:49，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:54，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:61；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:67，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:71，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:75；或者(d)VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:51，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:56，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:64；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:69，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:73，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:80。
在一方面，提供了一种药物组合物，包括：(i)特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白和(ii)特异性识别假单胞菌PcrV上的第一表位的抗原结合蛋白和/或特异性识别假单胞菌PcrV上的第二表位的抗原结合蛋白，其中特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白包含：(a)VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含SSGDYWG(SEQ ID NO:48)；HC-CDR2，其包含SIHNX1GSTYYNPSLKG(SEQ ID NO:81)，其中X1为S或Q；和HC-CDR3，其包含QFGSETYYX1GIX2P(SEQ ID NO:82)，其中X1为T、N或P，和X2为D或Q；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含RSSQSLLHSX1GYNYLD(SEQ ID NO:83)，其中X1为N或R；LC-CDR2，其包含LGSNRAS(SEQ ID NO:70)；和LC-CDR3，其包含MQALQTPYT(SEQ ID NO:74)；或者(b)VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含IHSVH(SEQ ID NO:50)；HC-CDR2，其包含TIISSGTTTTYAQSFQD(SEQ ID NO:55)；和HC-CDR3，其包含DGX1S(SEQ ID NO:84)，其中X1为D或T；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含RASQGISSWLA(SEQ ID NO:68)；LC-CDR2，其包含HASTLES(SEQ ID NO:72)；和LC-CDR3，其包含LQAX1SLPHT(SEQ ID NO:85)，其中X1为N、F、S或K；或者(c)VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:49，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:54，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:61；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:67，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:71，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:75；或者(d)VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:51，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:56，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:64；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:69，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:73，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:80。
在一方面，提供了一种在有需要的个体中治疗和/或预防疾病或病症的方法，包括向个体施用有效量的(i)特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白和(ii)特异性识别假单胞菌PcrV上的第一表位的抗原结合蛋白和/或特异性识别假单胞菌PcrV上的第二表位的抗原结合蛋白；其中特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白包含：(a)VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含SSGDYWG(SEQ ID NO:48)；HC-CDR2，其包含SIHNX1GSTYYNPSLKG(SEQ ID NO:81)，其中X1为S或Q；和HC-CDR3，其包含QFGSETYYX1GIX2P(SEQ ID NO:82)，其中X1为T、N或P，和X2为D或Q；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含RSSQSLLHSX1GYNYLD(SEQ ID NO:83)，其中X1为N或R；LC-CDR2，其包含LGSNRAS(SEQ ID NO:70)；和LC-CDR3，其包含MQALQTPYT(SEQID NO:74)；或者(b)VH，所述VH包含：其HC-CDR1，其包含IHSVH(SEQ ID NO:50)；HC-CDR2，其包含TIISSGTTTTYAQSFQD(SEQ ID NO:55)；和HC-CDR3，其包含DGX1S(SEQ ID NO:84)，其中X1为D或T；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含RASQGISSWLA(SEQ ID NO:68)；LC-CDR2，其包含HASTLES(SEQ ID NO:72)；和LC-CDR3，其包含LQAX1SLPHT(SEQ ID NO:85)，其中X1为N、F、S或K；或者(c)VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:49，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:54，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:61；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:67，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:71，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:75；或者(d)VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:51，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:56，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:64；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:69，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:73，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:80。
在一些实施例中，特异性识别假单胞菌PcrV上的第一表位的抗原结合蛋白包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:2，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQID NO:5，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:7；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:10，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:11，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:13。
在一些实施例中，特异性识别假单胞菌PcrV上的第一表位的抗原结合蛋白包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:1，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQID NO:4，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:6；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:10，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:11，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:12；在一些实施例中，特异性识别假单胞菌PcrV上的第一表位的抗原结合蛋白包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:22，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:23，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:26；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:30，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:33，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:35；在一些实施例中，特异性识别假单胞菌PcrV上的第一表位的抗原结合蛋白包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQID NO:22，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:24，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQID NO:27；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:31，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:34，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:36。
在一些实施例中，特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:48，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:52，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:57；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:65，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:70，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:74。在一些实施例中，特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:50，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ IDNO:55，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:62；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:68，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:72，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:76。
在一些实施例中，特异性识别假单胞菌PcrV上的第一表位的抗原结合蛋白包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:1，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQID NO:4，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:6；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:10，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:11，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:12；以及特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:48，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:52，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:57；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:65，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:70，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:74。
在一些实施例中，特异性识别假单胞菌PcrV上的第一表位的抗原结合蛋白包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:1，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQID NO:4，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:6；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:10，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:11，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:12；以及特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:49，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:54，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:61；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:67，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:71，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:75。
在一些实施例中，特异性识别假单胞菌PcrV上的第一表位的抗原结合蛋白包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:2，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQID NO:5，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:7；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:10，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:11，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:13；以及特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:48，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:52，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:57；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:65，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:70，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:74。
在一些实施例中，特异性识别假单胞菌PcrV上的第一表位的抗原结合蛋白包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:1，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQID NO:4，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:6；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:10，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:11，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:12；特异性识别假单胞菌PcrV上的第二表位的抗原结合蛋白包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:22，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQID NO:24，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:27；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:31，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:34，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:36；以及特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:48，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:52，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:57；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:65，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:70，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:74。
在一些实施例中，特异性识别假单胞菌PcrV上的第一表位的抗原结合蛋白包含：VH，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:91，和VL，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:112；以及特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白包含：VH，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:103，和VL，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:117。在一些实施例中，特异性识别假单胞菌PcrV上的第一表位的抗原结合蛋白包含：VH，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:92，和VL，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:113；以及特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白包含：VH，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:103，和VL，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:117。在一些实施例中，特异性识别假单胞菌PcrV上的第一表位的抗原结合蛋白包含：VH，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:91，和VL，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:112；以及特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白包含：VH，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:107，和VL，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:119。在一些实施例中，特异性识别假单胞菌PcrV上的第一表位的抗原结合蛋白包含：VH，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:91，和VL，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:112；特异性识别假单胞菌PcrV上的第二表位的抗原结合蛋白包含：VH，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:96，和VL，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:115；以及特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白包含：VH，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:103，和VL，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:117。
在一些实施例中，特异性识别假单胞菌PcrV上的第一表位的抗原结合蛋白，特异性识别假单胞菌PcrV上的第二表位的抗原结合蛋白和/或特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白是同时施用的。在一些实施例中，特异性识别假单胞菌PcrV上的第一表位的抗原结合蛋白，特异性识别假单胞菌PcrV上的第二表位的抗原结合蛋白和/或特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白是序贯施用的。
在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白和特异性识别假单胞菌PcrV上的第一表位的抗原结合蛋白的摩尔比约为5:1、4:1、3:1、2:1、1:1、1:2、1:3、1:4或1:5。在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白和特异性识别假单胞菌PcrV上的第一表位的抗原结合蛋白的摩尔比约为2:1或1:1。在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌PcrV上的第一表位的抗原结合蛋白和特异性识别假单胞菌PcrV上的第二表位的抗原结合蛋白的摩尔比约为5:1、4:1、3:1、2:1、1:1、1:2、1:3、1:4或1:5。在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌PcrV上的第一表位的抗原结合蛋白和特异性识别假单胞菌PcrV上的第二表位的抗原结合蛋白的摩尔比约为2:1或1:1。在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌PcrV上的第一表位的抗原结合蛋白，特异性识别假单胞菌PcrV上的第二表位的抗原结合蛋白和特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白的摩尔比约为1:1:1或1:1:2。
在一些实施例中，提供了在有需要的个体中治疗和/或预防疾病或病症的方法，包括向个体施用有效量的本文所述的任一药物组合物和/或双特异性分子。
在一些实施例中，根据本文所述的任一方法，所述疾病或病症是病原菌感染。在一些实施例中，所述感染是革兰氏阴性菌感染。在一些实施例中，所述的细菌是铜绿假单胞菌。在一些实施例中，所述疾病或病症包含由铜绿假单胞菌感染引起的一种或多种症状。在一些实施例中，所述的症状包括发热、寒战、疲劳、肌肉和关节疼痛、关节肿胀、头痛、腹泻、皮疹、伤口流脓、菌血症、急性肺炎、腹腔内感染、呼吸道感染、脓毒性休克、化脓性关节炎、肠炎、皮肤和软组织感染、尿路感染、肠道感染、溃疡性角膜炎、慢性化脓性中耳炎、乳突炎、鼻窦炎或心内膜炎中的一种或多种。
在一些实施例中，提供了一种分离的核酸分子，其编码如上所述的任一个识别PcrV的抗原结合蛋白，识别Psl的抗原结合蛋白，和双特异性分子。在一些实施例中，提供了一种载体，其包含如上所述的任一核酸分子。在一些实施例中，提供了一种宿主细胞，其包含如上所述的任一抗原结合蛋白或双特异性分子、任一核酸分子或任一载体。在一些实施例中，提供了一种制备抗PcrV抗体、抗Psl抗体或识别PcrV和/或Psl的双特异性分子的方法，包括：a)在有效表达抗PcrV抗体、抗Psl抗体或识别PcrV和/或Psl的双特异性分子的条件下培养如上所述的任一宿主细胞；并且b)在宿主细胞中获得表达的抗PcrV抗体、抗Psl抗体或识别PcrV和/或Psl的双特异性分子。
还提供了包含如上所述的任何一种双特异性分子、抗PcrV和/或抗Psl抗体、核酸、载体、分离的宿主细胞的药物组合物、试剂盒和制品。
附图说明
图1A-1B所示结果为在铜绿假单胞菌(57/66)接种量为2倍致死量(2×LD90)的腹腔感染小鼠模型中，识别非重叠表位的抗PcrV抗体(7C1和6G12)的组合提高小鼠存活率的能力，与单独施用每种抗PcrV抗体进行比较。
图2A所示结果为在铜绿假单胞菌(57/66)接种量为4倍致死量(4×LD90)的腹腔感染小鼠模型中，抗PcrV抗体(7C1)和抗Psl抗体(6G12)的组合提高小鼠存活率的能力，与单独施用抗PcrV抗体或抗Psl抗体进行比较。图2B所示结果为在铜绿假单胞菌(57/66)接种量为4倍致死量(4×LD90)的腹腔感染小鼠模型中，抗PcrV抗体(7B1)和抗Psl抗体(P59)的组合提高存活率的能力，与对照抗PcrV抗体V2L2-MD和对照抗Psl抗体Cam-003抗体进行比较。
图3所示结果为在铜绿假单胞菌(57/66)接种量为2倍致死量(2×LD90)的菌血症小鼠模型中，抗PcrV抗体(7B1)和抗Psl抗体(P59，3F12)的组合提高小鼠存活率的能力，与对照抗PcrV抗体V2L2-MD和对照抗Psl抗体Psl0096进行比较。
图4A和4B所示结果为在铜绿假单胞菌(57/66)接种量分别为4或6倍致死量(4或6×LD90)的腹腔感染小鼠模型中，抗PcrV抗体(7B1)和抗Psl抗体(P59，6G7)在不同比例下的组合提高小鼠存活率的能力。
图5A和5B所示结果为在铜绿假单胞菌(57/66)接种量分别为4或5倍致死量(4或5×LD90)的腹腔感染小鼠模型中，在指定的抗体剂量下抗PcrV抗体(7C1、7B1、6G12或9C7)和抗Psl抗体(P59)的组合提高小鼠存活率的能力。
图6所示结果为识别PcrV和Psl的或识别PcrV上两个非重叠表位的示例性双特异性抗体。
图7A和7B所示结果为抗PcrV/抗Psl双特异性抗体抑制铜绿假单胞菌裂解RBC的能力，与对照双特异性抗体MedI3902进行比较。图7C和7D所示结果为抗PcrV/抗Psl双特异性抗体抑制铜绿假单胞菌裂解A549细胞的能力，与对照双特异性抗体MedI3902进行比较。图7E和7F所示结果为抗PcrV/抗Psl双特异性抗体阻断铜绿假单胞菌吸附的能力，与对照双特异性抗体MedI3902进行比较。图7G和7H所示结果为抗PcrV/抗Psl双特异性抗体促进针对铜绿假单胞菌OPK的能力，与对照双特异性抗体MedI3902进行比较。
图8A和8B所示结果分别为不同的抗PcrV/抗Psl双特异性抗体与PcrV和PAO1的结合动力学，与对照双特异性抗体MedI3902进行比较。图8C所示BIACORE分析结果说明抗PcrV/抗Psl抗体STS7B15921M可同时与Psl和PcrV结合。图8D所示结果为抗PcrV/抗Psl双特异性抗体(STS7B11201S、STS7B159S、对照抗体MedI3902)与PAO1的结合动力学，与单特异性抗Psl抗体(3F1201、P59、对照抗体Psl0096)进行比较。图8E所示结果为抗PcrV/抗Psl双特异性抗体(STS7B15923S、STS7B159S)与BV粒子的非特异性结合。图8F所示结果为抗PcrV/抗Psl双特异性抗体(STS7B15923S、STS7B159S)与PcrV和Psl阴性的293细胞的非特异性结合。
图9A和9B所示结果为在铜绿假单胞菌腹腔感染小鼠模型中，在指定的抗体剂量下不同的抗PcrV/抗Psl双特异性抗体提高小鼠存活率的能力，与对照双特异性抗体MedI3902进行比较。图9C和9D所示结果为在铜绿假单胞菌(57/66)接种量分别为6倍或5倍致死量(6或5×LD90)腹腔感染小鼠模型中，在指定的抗体剂量下不同的抗PcrV/抗Psl双特异性抗体提高小鼠存活率的能力，与对照双特异性抗体MedI3902进行比较。
图10A所示结果为抗PcrV/抗Psl双特异性抗体STS7B15925抑制铜绿假单胞菌裂解A549细胞的能力，与单特异性抗PcrV抗体(7B1、对照抗体V2L2-MD)和对照双特异性抗体MedI3902进行比较。图10B所示结果为抗PcrV/抗Psl双特异性抗体STS7B15925抑制铜绿假单胞菌裂解RBC的能力，与单特异性抗PcrV抗体(7B1、对照抗体V2L2-MD)和对照双特异性抗体MedI3902进行比较。图10C所示结果为抗PcrV/抗Psl双特异性抗体STS7B15925促进针对铜绿假单胞菌OPK的能力，与单特异性抗Psl抗体(P5925、对照抗体Psl0096)和对照双特异性抗体MedI3902进行比较。图10D所示结果为抗PcrV/抗Psl双特异性抗体STS7B15925阻断铜绿假单胞菌吸附的能力，与单特异性抗Psl抗体(P5925、对照抗体Psl0096)和对照双特异性抗体MedI3902进行比较。
图11所示结果为在铜绿假单胞菌(57/66)接种量为5倍致死量(5×LD90)的腹腔感染小鼠模型中，在指定的抗体剂量下抗PcrV抗体7B1和抗Psl抗体P5925的组合或相应的抗PcrV/抗Psl双特异性抗体STS7B15925提高小鼠存活率的能力。
图12A所示结果为在铜绿假单胞菌(57/66)接种量为5倍致死量(5×LD90)的腹腔感染小鼠模型中，在指定的抗体剂量下抗PcrV抗体7B1、抗PcrV抗体9C7和抗Psl抗体P5925的组合或相应的抗PcrV/抗Psl双特异性抗体STS7B15925提高小鼠存活率的能力。图12B所示结果为在铜绿假单胞菌(57/66)接种量为6倍致死量(6×LD90)的腹腔感染小鼠模型中，在指定的抗体剂量下抗PcrV抗体7B1、抗PcrV抗体9C7和抗Psl抗体P5925的组合或相应的抗PcrV/抗Psl双特异性抗体STS7B15925提高小鼠存活率的能力。
图13所示结果为在铜绿假单胞菌(57/66)接种量为5倍致死量(5×LD90)的腹腔感染小鼠模型中，在指定的抗体剂量下抗PcrV抗体7B1、抗PcrV抗体9C7和抗Psl抗体P5925的组合或抗PcrV/抗Psl双特异性抗体STS7B15925提高小鼠存活率的能力，与单独施用抗PcrV抗体7B1或抗Psl抗体P5925进行比较。
本申请的详细描述
本申请一方面提供特异性识别PcrV和/或Psl的双特异性分子。本申请一方面提供特异性识别PcrV的抗原结合蛋白和/或特异性识别Psl的抗原结合蛋白的组合。通过scFv噬菌体库筛选、亲和力成熟以及适当设计的生物化学及生物学实验的组合，我们已经鉴定出结合PcrV的高效抗原结合蛋白和结合Psl的高效抗体分子。本文中所述的结果表明，与单独施用单个抗体分子相比，这些抗原结合部分的组合，或以(i)药物组合物的方式，或(ii)双特异性抗体的方式，能够以累积或协同的方式，抑制铜绿假单胞菌对红细胞和A549细胞的裂解作用，以及在体内提供了更强大的针对铜绿假单胞菌的治疗和预防作用。
同时还提供编码PcrV和Psl结合蛋白和结构域的核酸，双特异性分子、包含PcrV和Psl结合蛋白或双特异性分子的组合物，以及制备和使用PcrV和Psl结合蛋白或双特异性分子的方法。
定义
如本文所述，“治疗(treatment)”或“治疗(treating)”是一种获得有益的或期望的结果的方法，包括临床结果。鉴于本申请的目的，所述有益的或期望的临床结果，包括但不限于以下一种或多种：缓解由疾病引起的一种或多种症状，减轻疾病程度，稳定疾病(例如，预防或延缓疾病恶化)，预防或延缓疾病的扩散(例如，病原菌全身扩散)，预防或延缓疾病复发，延缓或减缓疾病进展，改善疾病状态，缓解疾病(部分或全部)，减少治疗疾病所需的一种或多种其他药物的剂量，延迟疾病进展，改善或提高生活质量，增加体重，和/或延长生存期。同时，“治疗”还包括感染病理结果的减少(例如，宿主细胞裂解或坏死)。本申请的方法考虑了这些治疗的任何一个或多个方面。
术语“预防(prevent)”以及类似的词，如“预防(prevented)”、“预防(preventing)”、“预防(prevention)”或“预防(prophylactic)”等，表示一种预防、抑制或减少疾病或病症(如病原体感染)发生或复发可能性的方法。它还指延缓一种疾病或病症的发生或复发，或延缓一种疾病或病症的症状的发生或复发。正如在此所使用的，“预防(prevention)”和类似的词还包括在疾病或病症发生或复发之前减轻其强度、影响、症状和/或负担。正如在此所使用的，“预防(prevention)”和类似的词还包括减少疾病或病症发生或复发的风险和易感性，例如病原体感染。
如本文所述，“抗原结合蛋白”广义上是指一种蛋白质，其包含一个特异性性结合抗原或靶标的部分。抗原结合蛋白的示例有抗体和抗体片段。
如本文所述，术语“抗体”是广义的，包括各种抗体结构，包括但不限于单克隆抗体、多克隆抗体、单特异性、多特异性抗体(如双特异性抗体)、全长抗体及其抗原结合片段，只要它们表现出所需的抗原结合活性。全长抗体包括两条重链和两条轻链。轻链和重链的可变区负责抗原的结合。两条链中的可变区通常包括3个高变的环，被称为互补决定区(CDRs)(轻链(LC)CDRs包括LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3，重链(HC)CDRs包括HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3)。本文所披露的抗体或抗原结合片段的CDR边界可通过Kabat,Chothia或Al-Lazikani惯例来定义或识别(Al-Lazikani 1997；Chothia 1985；Chothia 1987；Chothia 1989；Kabat 1987；Kabat 1991)。重链或轻链的3个CDR区插入到被称为框架区(FRs)的侧翼区段之间，所述框架区比CDR区具有更高的保守性，并形成支撑高变环的支架。重链和轻链的恒定区并不参与抗原结合，但展示出多种效应功能。抗体是基于它们重链恒定区的氨基酸序列进行分类的。抗体的五种主要类别或同种型是IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，其特征在于分别具有α、δ、ε、γ和μ型重链。几种主要的抗体类别被分为亚类，如IgG1(γ1重链)、IgG2(γ2重链)、IgG3(γ3重链)、IgG4(γ4重链)、IgA1(α1重链n)或IgA2(α2重链)。
如本文所述，术语“抗原结合片段”包括一种抗体片段，包括，例如，双链抗体(diabody)、Fab、Fab’、F(ab’)2、Fv片段、二硫键稳定的Fv片段(dsFv)、(dsFv)2、双特异性dsFv(dsFv-dsFv’)、二硫键稳定的双链抗体(ds双链抗体)、单链抗体(scFv)、scFv二聚体(二价双链抗体)，由包含一个或多个CDRs的抗体片段组成的多特异性抗体、单域抗体、纳米抗体、域抗体、二价域抗体或者能够与抗原结合但不包含完整抗体结构的任何其他抗体片段。抗原结合片段还包括包含上述抗体片段的融合蛋白。抗原结合片段能够与亲本抗体或亲本抗体片段(如亲本scFv)结合相同的抗原。在一些实施例中，抗原结合片段可能包括来自特定人抗体的一个或多个CDRs，该CDRs被移植到来自一个或多个不同人抗体的框架区。
如本文所述，术语“双特异性抗体”是指在一个抗体分子中对两个不同抗原或表位具有结合特异性。双特异性抗体的生产过程包括完整分子的设计、每个结构域的核苷酸序列的合成和克隆、哺乳动物细胞的表达和最终产品的纯化。
如本文所述，术语“抗原结合域”是指抗原结合分子中与抗原特异性结合的部分。更具体地说，术语“抗原结合域”指的是抗体的一部分，该部分包括一个与部分或全部抗原特异性结合并与之互补的区域。如果是大抗原，抗原结合分子可能只结合抗原的一个特定部分，这个部分被称为抗原表位。例如，抗原结合域可以由一个或多个可变域(也称作可变区)提供。优选地，所述抗原结合结构域包括抗体轻链可变结构域(VL)和抗体重链可变结构域(VH)。一方面，抗原结合区域能够结合其抗原并阻断或部分阻断所述抗原的功能。特异性结合PcrV或Psl的抗原结合域包括本文进一步定义的抗体及其片段。
如本文所述，术语“表位”是指抗体或抗体部分结合的抗原上特定的原子或氨基酸组。如果两种抗体或抗体部分表现出与某抗原竞争性结合，则它们可能结合抗原上相同表位。
如本文所述，当第一抗体在等摩尔浓度下抑制第二抗体与PcrV靶标结合至少50％(例如至少55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％)时，第一抗体与第二抗体“竞争”结合PcrV靶标，反之亦然。PCT出版物WO 03/48731描述了基于交叉竞争的高通量抗体“表位归类”(binning)方法。
如本文所述，术语“特异性地结合”、“特异性地识别”或“对..来说是特异性的”是指可测量的和可再现的相互作用，例如靶标与抗体的结合可以确定在异质分子群，包括生物分子中存在该靶标。例如，抗体能够特异性地识别某靶标(可以是表位)是指，与其它靶标结合相比，该抗体与该靶标的结合具有更高的亲和力，亲合力，更容易和/或更持久。在一些实施例中，特异性地识别抗原的抗体与抗原的一个或多个抗原决定簇反应，其结合亲和力是其与其它靶标结合亲和力的至少10倍。
如本文所述，一种“分离的”抗体是指一种抗体，其(1)与天然存在的蛋白无关，(2)不含相同来源的其他蛋白，(3)由不同种属的细胞所表达，或(4)自然界中不存在。
如本文所述，术语“分离的核酸”，是指基因组、cDNA或合成来源的核酸或其组合。根据其来源，所述“分离的核酸”(1)与自然界中发现的“分离的核酸”中的全部或部分多核苷酸无关，(2)可与自然状态下不与之相连的多核苷酸可操作性地连接，或(3)在自然界中不作为较长序列的一部分而存在。
如本文所述，术语“CDR”或“互补决定区”是指重链和轻链多肽的可变域内发现的非连续抗原结合位点。在文献Kabat et al.,J.Biol.Chem.252:6609-6616(1977)；Kabatet al.,U.S.Dept.of Health and Human Services,“Sequences of proteins ofimmunological interest”(1991)；Chothia et al.,J.Mol.Biol.196:901-917(1987)；Al-Lazikani B.et al.,J.Mol.Biol.,273:927-948(1997)；MacCallum et al.,J.Mol.Biol.262:732-745(1996)；Abhinandan and Martin,Mol.Immunol.,45:3832-3839(2008)；Lefranc M.P.et al.,Dev.Comp.Immunol.,27:55-77(2003)；和Honegger and Plückthun,J.Mol.Biol.,309:657-670(2001)中已经描述这些特殊的区域，其中当彼此之间互相比较时，这些定义包括氨基酸残基的重合或子集。然而，采用任何一种定义方式来指示抗体或移植抗体或其变体的CDR，均包括在本文所定义和使用的术语范围之内。表1中列了由上述引用的各篇参考文献所定义的CDR所包括的氨基酸残基的位置，以示比较。CDR预测的算法和结合界面在本领域是已知的，包括，例如Abhinandan and Martin,Mol.Immunol.,45:3832-3839(2008)；Ehrenmann F.et al.,Nucleic Acids Res.,38:D301-D307(2010)；和Adolf-Bryfogle J.et al.,Nucleic Acids Res.,43:D432-D438(2015)中均有描述。本段中所引用的参考文献的内容以其整体引用并入本文中，以用于本申请和可能包含在本文中的一个或多个权利要求中。
表1：CDR定义
Kabat1 Chothia2 MacCallum3 IMGT4 AHo5
VH CDR1 31-35 26-32 30-35 27-38 25-40
VH CDR2 50-65 53-55 47-58 56-65 58-77
VH CDR3 95-102 96-101 93-101 105-117 109-137
VL CDR1 24-34 26-32 30-36 27-38 25-40
VL CDR2 50-56 50-52 46-55 56-65 58-77
VL CDR3 89-97 91-96 89-96 105-117 109-137
1氨基酸残基编号参照上述Kabat et al.中的命名方法
2氨基酸残基编号参照上述Chothia et al.中的命名方法
3氨基酸残基编号参照上述MacCallum et al.中的命名方法
4氨基酸残基编号参照上述Lefranc et al.中的命名方法
5氨基酸残基编号参照上述Honegger and Plückthun中的命名方法
术语“嵌合抗体”是指重链和/或轻链的一部分与来自特定种属或属于特定抗体种类或亚类的抗体中的相应序列一致或具有同源性，而这个(些)链的剩余部分与来自另一种属或属于其它抗体种类或亚类的抗体中的相应序列一致或具有同源性的抗体，以及此类抗体的片段，只要其具有本申请中的生物学活性(见U.S.Patent No.4,816,567；andMorrison et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,81:6851-6855(1984))。
“Fv”是包含完整抗原识别及结合位点的最小抗体片段。该片段是由一个重链可变域和一个轻链可变域紧密非共价连接形成的二聚体。通过这两个域的折叠衍生出6个高变环(轻链和重链中各3个环)，所述高变环为抗体提供了用于结合抗原的氨基酸残基，并且赋予抗体与抗原结合的特异性。然而，即使单个可变域(或Fv片段的一半，其仅包含对抗原具有特异性的3个CDRs)也具有识别和结合抗原的能力，尽管其亲和力低于完整的结合位点。
“单链Fv”，也可简写成“sFv”或“scFv”，是包含被连接成单一多肽链的VH和VL抗体域的抗体片段。在一些实施例中，scFv多肽进一步包括VH和VL域之间的连接多肽，该连接多肽使得scFv形成抗原结合的理想结构。关于scFv的概述，见Pluckthun in ThePharmacology of Monoclonal Antibodies,vol.113,Rosenburg and Moore eds.,Springer-Verlag,New York,pp.269-315(1994)。
术语“双链抗体(diabodies)”是指，在VH和VL域之间采用短接头(例如5～10个残基)构建scFv片段(见上段内容)制备而成的一种小抗体片段，这样就使得可变域在链间而不是链内进行配对，产生一个双价片段，即具有两个抗原结合位点的片段。双特异性的双链抗体是两个“交叉”scFv片段的异二聚体，其中两个抗体的VH和VL域位于不同的多肽链上。在EP 404,097；WO 93/11161；Hollinger et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,90:6444-6448(1993)中全面描述了双链抗体。
非人源(如啮齿类)抗体的“人源化”形式是嵌合抗体，其包括最少的来自非人源抗体的序列。大多数情况下，人源化抗体是人源免疫球蛋白(受体抗体)，其中受体抗体的高变区(HVR)残基被来自非人源种属例如小鼠、大鼠、兔或非人类灵长类动物的且具有理想的抗体特异性，亲和力和性能的高变区残基所取代(供体抗体)。在某些情况下，人源免疫球蛋白框架区(FR)中的残基被相应的非人源残基所取代。另外，人源化抗体可以包括在受体抗体或供体抗体中均不存在的残基。这些修饰能够进一步改善抗体的性能。通常，人源化抗体会包含基本上至少一个，通常两个可变域，其中所有或基本上所有的高变环均与非人免疫球蛋白的高变环相对应，以及所有或基本上所有的框架区均是人免疫球蛋白序列。人源抗体任选地也还包括免疫球蛋白恒定区(Fc)的至少一部分，通常是人免疫球蛋白的恒定区。具体细节可以参考Jones et al.,Nature 321:522-525(1986)；Riechmann et al.,Nature332:323-329(1988)；和Presta,Curr.Op.Struct.Biol.2:593-596(1992)。
本文所鉴定的多肽和抗体序列的“氨基酸序列同一性百分比(％)”或“同源性”被定义为：在认为保守性取代属于序列同一性的一部分的情况下进行序列对比，候选序列与待比较多肽序列中相同氨基酸残基所占的百分比。可以通过本领域技术范围内的多种比对方式来确定氨基酸序列同一性百分比，例如，使用如BLAST、BLAST-2、ALIGN、Megalign(DNASTAR)、或MUSCLE软件等可公开获得的计算机软件。本领域技术人员可以确定用于测量比对的合适的参数，包括在所比较序列的全长上实现最大化比对所需的任何算法。然而，为了本文的目的，氨基酸序列同一性百分比数值是使用序列比对电脑程序MUSCLE(Edgar,R.C.,Nucleic Acids Research 32(5):1792-1797,2004；Edgar,R.C.,BMCBioinformatics 5(1):113,2004)生成的。
术语“Fc受体”或“FcR”用于描述结合抗体Fc区的受体。在一些实施例中，本申请所述的FcR是结合IgG抗体(一种γ受体)的FcR，包括FcγRI、FcγRII和FcγRIII亚类的受体，包括这些受体的等位基因变体和可变剪接形式。FcγRII受体包括FcγRIIA(激活受体)和FcγRIIB(抑制受体)，它们具有相似的氨基酸序列，主要在细胞质结构域有所不同。激活受体FcγRIIA的胞质结构域中含有免疫受体酪氨酸活化基序(ITAM)。抑制受体FcγRIIB的胞质结构域中含有免疫受体酪氨酸抑制基序(ITIM)(见M.in Annu.Rev.Immunol.15:203-234(1997))。所述术语还包括同种异型，例如FcγRIIIA同种异型:FcγRIIIA-Phe158、FcγRIIIA-Val158、FcγRIIA-R131和/或FcγRIIA-H131。在Ravetch and Kinet,Annu.Rev.Immunol 9:457-92(1991)和Capel et al.,Immunomethods 4:25-34(1994)；andde Haas et al.,J.Lab.Clin.Med.126:330-41(1995)中对FcRs进行了描述。本申请中术语FcR涵盖其他类型的FcRs，包括将来鉴定的FcRs。术语FcR同时还包括新生儿受体FcRn，其负责向新生儿转移母体IgGs(Guyer et al.,J.Immunol.117:587(1976)and Kim et al.,J.Immunol.24:249(1994))。
术语“FcRn”指新生儿Fc受体(FcRn)。FcRn与主要组织相容性复合体(MHC)在结构上相似，由α链非共价结合到β2微球蛋白上组成。新生儿Fc受体FcRn的多种功能在Ghetieand Ward(2000)Annu.Rev.Immunol.18,739-766.中进行了描述。FcRn在免疫球蛋白IgGs从母体向新生儿的被动转运和调控血清IgG水平中起到重要作用。FcRn作为一种救助受体，可以在细胞内和细胞间以完整的形式结合和运输胞吞化的IgG，并使它们免于经受默认的降解途径。
人IgG重链恒定区的“CH1结构域”通常从118位氨基酸延伸到215位氨基酸(EU编号系统)。
“铰链区”通常被定义为从人IgG1的216位Glu延伸到230位Pro(Burton,Molec.Immunol.22:161-206(1985))。通过将形成重链间二硫键的第一个和最后一个半胱氨酸残基置于与IgG1相同位置后，可以使得其他IgG同种型的铰链区与IgG1序列比对。
人IgG Fc区的“CH2结构域”通常从231位氨基酸延伸到340位氨基酸。CH2结构域的独特之处在于，它不会与另一个区域紧密配对。而是在完整的天然IgG分子的两个CH2结构域之间插入了两条N端连接的支链糖链。据推测，糖类可能作为域与域间配对的替代，有助于保持CH2结构域稳定。Burton,Molec Immunol.22:161-206(1985)。
“CH3”结构域包括在Fc区内从C末端残基延伸到CH2结构域(从341位氨基酸到抗体序列的C末端，通常为IgG的第446或447位氨基酸残基)。
“功能性Fc片段”具有天然Fc区序列所具有的“效应功能”。示例性的“效应功能”包括C1q结合；补体依赖的细胞毒作用(CDC)；Fc受体结合；抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用(ADCC)；吞噬作用；细胞表面受体的下调(如B细胞受体；BCR)等。这类效应功能通常需要Fc区与结合结构域(如抗体可变区)结合，并且可以使用本领域公知的多种实验方法进行评估。
具有“改变的”FcR结合亲和力或ADCC活性的IgG Fc变体的抗体，与亲本多肽或包含天然Fc序列的多肽相比，其FcR结合活性和/或ADCC活性增强或减弱。表现出与FcR“结合增强”的Fc变体与亲本多肽或包含天然IgG Fc序列的多肽相比，其与至少一种FcR具有更高的结合亲和力(例如更低的表观Kd或IC50值)。在一些实施例中，与亲本多肽相比，结合能力增强3倍，例如5、10、25、50、60、100、150、200，甚至高达500倍或结合力提高25％到1000％。表现出与FcR“结合降低”的Fc变体，与亲本多肽相比，其与至少一种FcR具有更低的亲和力(例如更高的表观Kd或IC50值)。与亲本多肽相比，其结合能力下降40％或更多。
“抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用”或“ADCC”是一种细胞毒性形式，指分泌型的Ig与存在于某些细胞毒性细胞(例如自然杀伤细胞(NK)、中性粒细胞和巨噬细胞)上的Fc受体(FcRs)结合，使这些细胞毒性效应细胞能够特异性结合携带抗原的靶细胞，随后使用细胞毒素杀死靶细胞。抗体“武装”细胞毒性细胞并且是这种杀伤所必需的。介导ADCC的主要细胞类型中，NK细胞只表达FcγRIII，而单核细胞表达FcγRI、FcγRII和FcγRIII。在Ravetch and Kinet,Annu.Rev.Immunol 9:457-92(1991)第464页的Table 3中总结了在造血细胞上FcR的表达。评估目标分子的ADCC活性，可以进行体外ADCC实验，在美国专利No.5,500,362或5,821,337中进行了描述。适用于此类实验的效应细胞包括外周血单核细胞(PBMC)和自然杀伤性细胞(NK)。可选地，或者此外，目标分子的ADCC活性也可以在体内进行评估，例如在如Clynes et al.PNAS(USA)95:652-656(1998)中所公开的动物模型中进行了描述。
包含Fc区变体的多肽与包含野生型IgG Fc多肽或亲本多肽相比，在人体效应细胞存在下表现出“增强的ADCC活性”或能够更有效的介导ADCC效应，所述包含Fc区变体的多肽在实验时与包含野生型IgG Fc多肽(或亲本多肽)数量上基本相同时，无论在体外或体内均能更有效的介导ADCC。通常采用本领域已知的任何体外ADCC实验方法来鉴定此类变体，例如用于鉴定ADCC活性的实验或方法，例如在动物模型中等。在一些实施例中，此类变体与野生型Fc(或亲代多肽)相比，介导ADCC的效率提高5到100倍，例如25到50倍。
“补体依赖的细胞毒作用”或“CDC”是指在补体存在的情况下裂解靶细胞。经典的补体途径的激活是由补体系统第一组分(C1q)与结合同源抗原的抗体(具有适宜结构的亚类)相结合而启动的。为了评估补体激活，可以进行CDC实验，如Gazzano-Santoro et al.,J.Immunol.Methods 202:163(1996)中所描述的。在美国专利No.6,194,551B1和WO99/51642中描述了具有改变的Fc区氨基酸序列并增加或降低的C1q结合能力的多肽变体。这些专利出版物的内容通过引用明确地并入本文中。另见Idusogie et al.J.Immunol.164:4178-4184(2000)。
除非另有说明，一种“编码氨基酸序列的核苷酸序列”包括相互之间互为简并形式且编码相同氨基酸序列的所有核苷酸序列。编码蛋白质或RNA的核苷酸序列也可包括内含子，例如编码蛋白质的核苷酸序列在某些形式中包含内含子。
术语“可操作性地连接”是指调控序列与异源核苷酸序列之间的功能性连接，从而使后者表达。例如，当第一个核苷酸序列与第二个核苷酸序列处于功能性关系时，第一个核苷酸序列与第二个核苷酸序列为可操作性地连接。例如，如果启动子影响编码序列的转录或表达，该启动子与编码序列为可操作性地连接。通常，可操作性连接的DNA序列是连续的，并且在必要时，可以在同一个阅读框中连接两个蛋白质编码区。
“同源”是指两个多肽之间或两个核酸分子之间的序列相似性或序列同一性。如果两个比较序列的同一位置为相同的碱基或氨基酸单体亚基时，例如两个DNA分子的同一位置均为腺嘌呤，则这两个DNA分子在该位置是同源的。两个序列间的同源百分比是指两个序列中共有的匹配或同源位置的数量与位置总数之比再乘以100所得函数。例如，两个序列中如果10个位置中有6个位置是相匹配或同源的，则这两个序列的同源性为60％。举例来说，DNA序列ATTGCC和TATGGC具有50％的同源性。通常来说，在比对两个序列时，以得到最大同源性为目的来进行对比。
本文所公开的抗体或组合物的“有效量”是指足以实现特定目的的量。“有效量”可以凭经验和通过已知的与所述目的相关的方法确定。
术语“治疗有效量”是指本文所述抗体或组合物的量，对“治疗”个体的疾病或病症有效。在铜绿假单胞菌感染的情况下，本文公开的抗体或组合物的治疗有效量可以减少感染细胞的数量，抑制(即在一定程度上减缓并最好停止)感染的传播，并/或在一定程度上缓解与感染相关的一种或多种症状。在感染时，本文公开的抗体或组合物能够抑制铜绿假单胞菌生长和/或杀死铜绿假单胞菌，抗体可以是抑制细胞的和/或具有细胞毒性的。在一些实施例中，治疗有效量是指在患者中抑制感染的量。在一些实施例中，治疗有效量是指在患者中完全清除感染的量。
如本文所用的，“药学上可接受的”或“药理学上相容的”是指无生物学活性或者其它不期望性质的材料，例如该材料能够加入到给予患者的药物组合物中，而不会引起显著的不良生物反应，或者，不与组合物中包含的任何其它组分以有害的方式相互作用。药学上可接受的载体或赋形剂优选满足毒理学或制造检测的所需标准和/或包含在美国食品和药品管理局编制的非活性成分指南中。
本文中描述的本申请的实施例应理解为包含“由……组成”和/或“基本上由……组成”的实施例。
本文中提及“约”为一个数值或参数，包含(和描述)针对该值或参数本身的变体。例如，涉及“约X”的描述，包括“X”的描述。
如本文所用的，提及“不是(not)”一个数值或参数，通常表示并描述“除了(otherthan)”某一数值或参数之外。例如，该方法不能用于治疗X型感染，意味着该方法通常用于治疗除X型感染之外的其他类型。
除非上下文另有明确说明，本文和所述权利要求中所采用的单数形式“一”，“一个”和“该”包括复数对象。
识别假单胞菌PcrV和假单胞菌Psl的双特异性抗体
在一方面，本申请提供了一种双特异性分子，其包括特异性识别假单胞菌PcrV的第一抗原结合域，和特异性识别假单胞菌Psl的第二抗原结合域。
在一些实施例中，特异性识别假单胞菌PcrV的第一抗原结合域包含：(a)重链可变域(VH)，所述VH包含：重链互补决定区(HC-CDR)1，其包含DX1X2MS(SEQ ID NO:20)，其中X1为N或Y，和X2为Y、H或P；HC-CDR2，其包含X1ISESGGSTNYADSVKG(SEQ ID NO:15)，其中X1为V或G；和HC-CDR3，其包含GRFSTX1SX2HFX3RAVYGMDV(SEQ ID NO:21)，其中X1为L、S、N或D，X2为S或A，X3为F或Y；以及轻链可变域(VL)，所述VL包含：轻链互补决定区(LC-CDR)1，其包含RASQGISSYLA(SEQ ID NO:10)；LC-CDR2，其包含AASTLQS(SEQ ID NO:11)；和LC-CDR3，其包含QQLSSYPLX1(SEQ ID NO:19)，其中X1为S或T；或者(b)VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含X1X2X3MS(SEQ ID NO:17)，其中X1为D或S，X2为Y或N，和X3为P、H、Y或S；HC-CDR2，其包含X1ISESGGSTX2X3ADSVKG(SEQ ID NO:18)，其中X1为G或V，X2为N或Y，和X3为D或Y；和HC-CDR3，其包含GRFX1X2X3X4X5X6FX7RAVYGMDV(SEQ ID NO:38)，其中X1为S或C，X2为T、G、D、Y、Q或A，X3为S、D、N、E、L、A或Y，X4为S、T、Y或A，X5为S、H、Q、A、R、K、G、E、Y或D，X6为H或C，和X7为F或Y；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含RASQGIX1SYLA(SEQ ID NO:209)，其中X1为S或R；LC-CDR2，其包含AASTLQS(SEQ ID NO:11)；和LC-CDR3，其包含QQLX1SYPLX2(SEQ ID NO:210)，其中X1为S、N或K，和X2为S或T。
在一些实施例中，特异性识别假单胞菌PcrV的第一抗原结合域包含：(a)VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含DNX1MS(SEQ ID NO:14)，其中X1为Y或H；HC-CDR2，其包含X1ISESGGSTNYADSVKG(SEQ ID NO:15)，其中X1为V或G；和HC-CDR3，其包含GRFSTX1SSHFX2RAVYGMDV(SEQ ID NO:16)，其中X1为L或S,X2为F或Y；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含RASQGISSYLA(SEQ ID NO:10)；LC-CDR2，其包含AASTLQS(SEQ ID NO:11)；和LC-CDR3，其包含QQLSSYPLX1(SEQ ID NO:19)，其中X1为S或T。
在一些实施例中，特异性识别假单胞菌PcrV的第一抗原结合域包含：(a)VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含SYWMH(SEQ ID NO:22)；HC-CDR2，其包含RINEX1EX2SISYADSVKG(SEQID NO:44)，其中X1为D或N，和X2为T、G或R；和HC-CDR3，其包含DGPYDX1X2DI(SEQ ID NO:45)，其中X1为S、A或T，和X2为F或L；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含RASQX1VX2X3NLA(SEQ IDNO:46)，其中X1为S、G或N，X2为S、R或K和X3为S或N；LC-CDR2，其包含X1ASSRAT(SEQ ID NO:42)，其中X1为D或H；和LC-CDR3，其包含QQYGX1X2PX3T(SEQ ID NO:47)，其中X1为S、L或N，X2为S、Q或E和X3为L或I；或者(b)VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含SYWMH(SEQ ID NO:22)；HC-CDR2，其包含RINEX1EX2SISYADSVKG(SEQ ID NO:211)，其中X1为D、N、I、L或V，X2为S、T、R、G或N；和HC-CDR3，其包含DGPYDX1X2DI(SEQ ID NO:45)，其中X1为S、A或T，X2为F或L；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含RASQX1VX2X3NLA(SEQ ID NO:212)，其中X1为N、G、D或S，X2为K、R、S、N或T，X3为N、G、S或D；LC-CDR2，其包含X1ASSRAT(SEQ ID NO:213)，其中X1为D、N、H或A；和LC-CDR3，其包含QQYGX1X2PX3T(SEQ ID NO:214)，其中X1为S、T、E、H、N、A、D、M或L，X2为S、Q、E、T、D、G、H、L、N、V或Y，和X3为I、L或V。
在一些实施例中，特异性识别假单胞菌PcrV的第一抗原结合域包含：(a)VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含SYWMH(SEQ ID NO:22)；HC-CDR2，其包含RINEX1EX2SISYADSVKG(SEQID NO:39)，其中X1为D或N，和X2为T、G或R；和HC-CDR3，其包含DGPYDX1LDI(SEQ ID NO:40)，其中X1为S或A；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含RASQX1VX2X3NLA(SEQ ID NO:41)，其中X1为S或G，X2为S或R和X3为S或N；LC-CDR2，其包含X1ASSRAT(SEQ ID NO:42)，其中X1为D或H；和LC-CDR3，其包含QQYGX1X2PX3T(SEQ ID NO:43)，其中X1为S或L，X2为S或Q和X3为L或I。
在一些实施例中，特异性识别假单胞菌Psl的第二抗原结合域包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含SSGDYWG(SEQ ID NO:48)；HC-CDR2，其包含SIHNX1GSTYYNPSLKG(SEQ IDNO:81)，其中X1为S或Q；和HC-CDR3，其包含QFGSETYYX1GIX2P(SEQ ID NO:82)，其中X1为T、N或P，和X2为D或Q；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含RSSQSLLHSX1GYNYLD(SEQ ID NO:83)，其中X1为N或R；LC-CDR2，其包含LGSNRAS(SEQ ID NO:70)；和LC-CDR3，其包含MQALQTPYT(SEQ ID NO:74)。在一些实施例中，特异性识别假单胞菌Psl的第二抗原结合域包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含SSGDYWG(SEQ ID NO:48)；HC-CDR2，其包含SIHNX1GSTYYNPSLKG(SEQ ID NO:125)，其中X1为S、K或Q；和HC-CDR3，其包含QFGSETYYX1GIX2P(SEQ ID NO:126)，其中X1为N、S、V、T或P，和X2为D、Y、C、H、S、R、A、E、G、K、W、V或Q；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含RSSQSLLHSX1GYNYLD(SEQ ID NO:127)，其中X1为N、A、V、F、R、G、H、Q、W或P；LC-CDR2，其包含LGSNRAS(SEQ ID NO:70)；和LC-CDR3，其包含MQALQTP X1T(SEQ ID NO:128)，其中X1为R或Y。
在一些实施例中，特异性识别假单胞菌Psl的第二抗原结合域包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含IHSVH(SEQ ID NO:50)；HC-CDR2，其包含TIISSGTTTTYAQSFQD(SEQ IDNO:55)；和HC-CDR3，其包含DGX1S(SEQ ID NO:84)，其中X1为D或T；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含RASQGISSWLA(SEQ ID NO:68)；LC-CDR2，其包含HASTLES(SEQ ID NO:72)；和LC-CDR3，其包含LQAX1SLPHT(SEQ ID NO:85)，其中X1为N、F、S或K。在一些实施例中，特异性识别假单胞菌Psl的第二抗原结合域包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含IHSVH(SEQ IDNO:50)；HC-CDR2，其包含TIISSGTTTTYAQSFQD(SEQ ID NO:55)；和HC-CDR3，其包含X1X2X3X4(SEQ ID NO:129)，其中X1为D、Y或N，其中X2为G或A，其中X3为D或T，和其中X4为S、A或T；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含RASQGISSWLA(SEQ ID NO:68)；LC-CDR2，其包含HASTLES(SEQ ID NO:72)；和LC-CDR3，其包含LQAX1SLPHT(SEQ ID NO:130)，其中X1为N、D、Y、F、P、G、K、H、A、C、E、Q、R、S、T、V、W或L。
在一些实施例中，特异性识别假单胞菌PcrV的第一抗原结合域包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含SEQ ID NOs:1-3中任一氨基酸序列；HC-CDR2，其包含氨基酸序列4或5；和HC-CDR3，其包含SEQ ID NOs:6-9中任一氨基酸序列；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:10；LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:11；和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:12或13。
在一些实施例中，特异性识别假单胞菌PcrV的第一抗原结合域包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:1，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:4，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:6；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:10，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:11，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:12。在一些实施例中，特异性识别假单胞菌PcrV的第一抗原结合域包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:2，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ IDNO:5，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:7；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:10，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:11，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:13。在一些实施例中，特异性识别假单胞菌PcrV的第一抗原结合域包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:2，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:5，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:8；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:10，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:11，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:12。在一些实施例中，特异性识别假单胞菌PcrV的第一抗原结合域包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:3，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:5，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:9；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:10，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:11，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:13。
在一些实施例中，特异性识别假单胞菌PcrV的第一抗原结合域包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:22；HC-CDR2，其包含SEQ ID NOs:23-25中任一氨基酸序列；和HC-CDR3，其包含SEQ ID NOs:26-29中任一氨基酸序列；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含SEQ ID NOs:30-32中任一氨基酸序列；LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ IDNO:33或34；和LC-CDR3，其包含SEQ ID NOs:35-37中任一氨基酸序列。
在一些实施例中，特异性识别假单胞菌PcrV的第一抗原结合域包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:22，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:23，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:26；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:30，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:33，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:35。在一些实施例中，特异性识别假单胞菌PcrV的第一抗原结合域包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:22，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQID NO:24，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:27；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:31，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:34，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:36。在一些实施例中，特异性识别假单胞菌PcrV的第一抗原结合域包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:22，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:25，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:27；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:32，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:34，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:37。在一些实施例中，特异性识别假单胞菌PcrV的第一抗原结合域包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:22，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:25，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:28；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:32，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:34，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:37。在一些实施例中，特异性识别假单胞菌PcrV的第一抗原结合域包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:22，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:24，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:28；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:31，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:34，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:36。在一些实施例中，特异性识别假单胞菌PcrV的第一抗原结合域包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQID NO:22，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:25，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQID NO:26；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:32，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:34，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:37。在一些实施例中，特异性识别假单胞菌PcrV的第一抗原结合域包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:22，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:24，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:26；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:31，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:34，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:36。在一些实施例中，特异性识别假单胞菌PcrV的第一抗原结合域包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:22，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:23，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:29；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ IDNO:30，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:33，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ IDNO:35。
在一些实施例中，特异性识别假单胞菌Psl的第二抗原结合域包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:48；HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:52或53；和HC-CDR3，其包含SEQ ID NOs:57-60中任一氨基酸序列；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:65或66；LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:70；和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:74。
在一些实施例中，特异性识别假单胞菌Psl的第二抗原结合域包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:50；HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:55；和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:62或63；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:68；LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:72；和LC-CDR3，其包含SEQID NOs:76-79中任一氨基酸序列。
在一些实施例中，特异性识别假单胞菌Psl的第二抗原结合域包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:48，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:52，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:57；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:65，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:70，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:74。在一些实施例中，特异性识别假单胞菌Psl的第二抗原结合域包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:48，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQID NO:53，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:58；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:66，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:70，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:74。在一些实施例中，特异性识别假单胞菌Psl的第二抗原结合域包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:48，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:52，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:59；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:65，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:70，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:74。在一些实施例中，特异性识别假单胞菌Psl的第二抗原结合域包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:48，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:53，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:60；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:65，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:70，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:74。在一些实施例中，特异性识别假单胞菌Psl的第二抗原结合域包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:49，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:54，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:61；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:67，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQID NO:71，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:75。在一些实施例中，特异性识别假单胞菌Psl的第二抗原结合域包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:50，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:55，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:62；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:68，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:72，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:76。在一些实施例中，特异性识别假单胞菌Psl的第二抗原结合域包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQID NO:50，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:55，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQID NO:63；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:68，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:72，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:77。在一些实施例中，特异性识别假单胞菌Psl的第二抗原结合域包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:50，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:55，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:63；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:68，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:72，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:78。在一些实施例中，特异性识别假单胞菌Psl的第二抗原结合域包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:50，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:55，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:63；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:68，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:72，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:79。在一些实施例中，特异性识别假单胞菌Psl的第二抗原结合域包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:51，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:56，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:64；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:69，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:73，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:80。
在一些实施例中，特异性识别假单胞菌PcrV的第一抗原结合域包含：VH，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:91或161，以及VL，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:112或182。在一些实施例中，特异性识别假单胞菌PcrV的第一抗原结合域包含：VH，所述VH包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:91或161的VH中的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及VL，所述VL包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:112或182的VL中的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。
在一些实施例中，特异性识别假单胞菌PcrV的第一抗原结合域包含：VH，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:92或162，以及VL，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:113或183。在一些实施例中，特异性识别假单胞菌PcrV的第一抗原结合域包含：VH，所述VH包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:92或162的VH中的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及VL，所述VL包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:113或183的VL中的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。
在一些实施例中，特异性识别假单胞菌PcrV的第一抗原结合域包含：VH，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:93或163，以及VL，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:112或182。在一些实施例中，特异性识别假单胞菌PcrV的第一抗原结合域包含：VH，所述VH包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:93或163的VH中的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及VL，所述VL包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:112或182的VL中的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。
在一些实施例中，特异性识别假单胞菌PcrV的第一抗原结合域包含：VH，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:94或164，以及VL，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:113或183。在一些实施例中，特异性识别假单胞菌PcrV的第一抗原结合域包含：VH，所述VH包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:94或164的VH中的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及VL，所述VL包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:113或183的VL中的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。
在一些实施例中，特异性识别假单胞菌PcrV的第一抗原结合域包含：VH，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:95或165，以及VL，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:114或184。在一些实施例中，特异性识别假单胞菌PcrV的第一抗原结合域包含：VH，所述VH包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:95或165的VH中的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及VL，所述VL包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:114或184的VL中的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。
在一些实施例中，特异性识别假单胞菌PcrV的第一抗原结合域包含：VH，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:96或166，以及VL，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:115或185。在一些实施例中，特异性识别假单胞菌PcrV的第一抗原结合域包含：VH，所述VH包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:96或166的VH中的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及VL，所述VL包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:115或185的VL中的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。
在一些实施例中，特异性识别假单胞菌PcrV的第一抗原结合域包含：VH，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:97或167，以及VL，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:116或186。在一些实施例中，特异性识别假单胞菌PcrV的第一抗原结合域包含：VH，所述VH包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:97或167的VH中的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及VL，所述VL包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:116或186的VL中的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。
在一些实施例中，特异性识别假单胞菌PcrV的第一抗原结合域包含：VH，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:98或168，以及VL，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:116或186。在一些实施例中，特异性识别假单胞菌PcrV的第一抗原结合域包含：VH，所述VH包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:98或168的VH中的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及VL，所述VL包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:116或186的VL中的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。
在一些实施例中，特异性识别假单胞菌PcrV的第一抗原结合域包含：VH，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:99或169，以及VL，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:115或185。在一些实施例中，特异性识别假单胞菌PcrV的第一抗原结合域包含：VH，所述VH包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:99或169的VH中的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及VL，所述VL包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:115或185的VL中的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。
在一些实施例中，特异性识别假单胞菌PcrV的第一抗原结合域包含：VH，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:100或170，以及VL，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:116或186。在一些实施例中，特异性识别假单胞菌PcrV的第一抗原结合域包含：VH，所述VH包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:100或170的VH中的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及VL，所述VL包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:116或186的VL中的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。
在一些实施例中，特异性识别假单胞菌PcrV的第一抗原结合域包含：VH，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:101或171，以及VL，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:115或185。在一些实施例中，特异性识别假单胞菌PcrV的第一抗原结合域包含：VH，所述VH包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:101或171的VH中的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及VL，所述VL包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:115或185的VL中的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。
在一些实施例中，特异性识别假单胞菌PcrV的第一抗原结合域包含：VH，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:102或172，以及VL，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:114或184。在一些实施例中，特异性识别假单胞菌PcrV的第一抗原结合域包含：VH，所述VH包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:102或172的VH中的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及VL，所述VL包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:114或184的VL中的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。
在一些实施例中，特异性识别假单胞菌Psl的第二抗原结合域包含：VH，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:103或173，以及VL，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:117或187。在一些实施例中，特异性识别假单胞菌Psl的第二抗原结合域包含：VH，所述VH包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:103或173的VH中的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及VL，所述VL包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:117或187的VL中的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。
在一些实施例中，特异性识别假单胞菌Psl的第二抗原结合域包含：VH，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:104或174，以及VL，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:118或188。在一些实施例中，特异性识别假单胞菌Psl的第二抗原结合域包含：VH，所述VH包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:104或174的VH中的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及VL，所述VL包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:118或188的VL中的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。
在一些实施例中，特异性识别假单胞菌Psl的第二抗原结合域包含：VH，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:105或175，以及VL，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:117或187。在一些实施例中，特异性识别假单胞菌Psl的第二抗原结合域包含：VH，所述VH包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:105或175的VH中的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及VL，所述VL包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:117或187的VL中的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。
在一些实施例中，特异性识别假单胞菌Psl的第二抗原结合域包含：VH，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:106或176，以及VL，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:117或187。在一些实施例中，特异性识别假单胞菌Psl的第二抗原结合域包含：VH，所述VH包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:106或176的VH中的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及VL，所述VL包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:117或187的VL中的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。
在一些实施例中，特异性识别假单胞菌Psl的第二抗原结合域包含：VH，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:107或177，以及VL，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:119或189。在一些实施例中，特异性识别假单胞菌Psl的第二抗原结合域包含：VH，所述VH包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:107或177的VH中的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及VL，所述VL包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:119或189的VL中的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。
在一些实施例中，特异性识别假单胞菌Psl的第二抗原结合域包含：VH，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:108或178，以及VL，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:119或189。在一些实施例中，特异性识别假单胞菌Psl的第二抗原结合域包含：VH，所述VH包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:108或178的VH中的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及VL，所述VL包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:119或189的VL中的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。
在一些实施例中，特异性识别假单胞菌Psl的第二抗原结合域包含：VH，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:109或179，以及VL，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:120或190。在一些实施例中，特异性识别假单胞菌Psl的第二抗原结合域包含：VH，所述VH包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:109或179的VH中的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及VL，所述VL包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:120或190的VL中的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。
在一些实施例中，特异性识别假单胞菌Psl的第二抗原结合域包含：VH，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:110或180，以及VL，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:121或191。在一些实施例中，特异性识别假单胞菌Psl的第二抗原结合域包含：VH，所述VH包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:110或180的VH中的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及VL，所述VL包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:121或191的VL中的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。
在一些实施例中，特异性识别假单胞菌Psl的第二抗原结合域包含：VH，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:110或180，以及VL，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:122或192。在一些实施例中，特异性识别假单胞菌Psl的第二抗原结合域包含：VH，所述VH包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:110或180的VH中的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及VL，所述VL包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:122或192的VL中的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。
在一些实施例中，特异性识别假单胞菌Psl的第二抗原结合域包含：VH，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:110或180，以及VL，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:123或193。在一些实施例中，特异性识别假单胞菌Psl的第二抗原结合域包含：VH，所述VH包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:110或180的VH中的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及VL，所述VL包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:123或193的VL中的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。
在一些实施例中，特异性识别假单胞菌Psl的第二抗原结合域包含：VH，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:111或181，以及VL，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:124或194。在一些实施例中，特异性识别假单胞菌Psl的第二抗原结合域包含：VH，所述VH包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:111或181的VH中的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及VL，所述VL包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:124或194的VL中的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。
在一些实施例中，本申请提供了一种双特异性分子，其包括特异性识别假单胞菌PcrV的第一抗原结合域，和特异性识别假单胞菌Psl的第二抗原结合域，其中第一抗原结合域包含：(a)VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:1，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:4，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:6；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:10，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:11，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:12；或者(b)：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:2，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:5，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:7；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:10，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:11，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:13；或者(c)：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:22，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQID NO:23，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:26；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:30，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:33，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:35；或者(d)：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ IDNO:22，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:24，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ IDNO:27；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:31，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:34，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:36。
在一些实施例中，本申请提供了一种双特异性分子，其包括特异性识别假单胞菌PcrV的第一抗原结合域，和特异性识别假单胞菌Psl的第二抗原结合域，其中第二抗原结合域包含：(a)VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:48，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:52，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:57；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:65，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:70，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:74；或者(b)：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:49，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:54，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:61；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:67，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:71，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:75；或者(c)：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:51，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:56，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:64；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:69，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:73，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:80。
在一些实施例中，本申请提供了一种双特异性分子，其包括特异性识别假单胞菌PcrV的第一抗原结合域，和特异性识别假单胞菌Psl的第二抗原结合域，其中第一抗原结合域包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:1，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:4，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:6；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:10，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:11，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:12；以及其中第二抗原结合域包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:48，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:52，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:57；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:65，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:70，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:74。
在一些实施例中，本申请提供了一种双特异性分子，其包括特异性识别假单胞菌PcrV的第一抗原结合域，和特异性识别假单胞菌Psl的第二抗原结合域，其中第一抗原结合域包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:1，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:4，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:6；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:10，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:11，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:12；以其中第二抗原结合域包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:49，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:54，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:61；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:67，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:71，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:75。
在一些实施例中，本申请提供了一种双特异性分子，其包括特异性识别假单胞菌PcrV的第一抗原结合域，和特异性识别假单胞菌Psl的第二抗原结合域，其中第一抗原结合域包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:2，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:5，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:7；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:10，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:11，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:13；以及其中第二抗原结合域包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:48，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:52，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:57；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:65，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:70，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:74。
在一些实施例中，本申请提供了一种双特异性分子，其包括特异性识别假单胞菌PcrV的第一抗原结合域，和特异性识别假单胞菌Psl的第二抗原结合域，其中第一抗原结合域包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:2，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:5，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:7；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:10，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:11，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:13；以及其中第二抗原结合域包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:49，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:54，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:61；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:67，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:71，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:75。
在一些实施例中，根据本文所述的任一双特异性分子，第一抗原结合结构域是特异性识别PcrV的单链抗体(scFv)，第二抗原结合结构域是特异性识别Psl的Fab臂，其中所述分子进一步包含Fc区，该Fc区包含CH2和CH3结构域；所述scFv通过第一连接肽(L1)与Fab臂连接，并通过第二连接肽(L2)与Fc区连接。在一些实施例中，所述分子是二价的，可与PcrV和Psl中的每一个结合。
在一些实施例中，根据本文所述的任一双特异性分子，第一抗原结合结构域是特异性识别PcrV的Fab臂，第二抗原结合结构域是特异性识别Psl的单链抗体(scFv)，其中所述分子进一步包含Fc区，该Fc区包含CH2和CH3结构域；所述scFv通过第一连接肽(L1)与Fab臂连接，并通过第二连接肽(L2)与Fc区连接。在一些实施例中，所述分子是双特异性分子，其是二价的，可与PcrV和Psl中的每一个结合。
在一些实施例中，根据本文所述的任一双特异性分子，特异性识别PcrV或Psl单链抗体(scFv)的抗原结合域包括基因工程半胱氨酸突变，通过在VH和VL界面引入两个半胱氨酸突变，获得了二硫键稳定型的双特异性抗体。
接头可用于将双特异性分子的嵌合重链的结构域和/或区连接成一个连续的分子。在一些实施例中，所述双特异性分子包括至少两个连接多肽，L1和L2。在一些实施例中，所述双特异性分子可能包括额外的接头，例如连接scFv的可变重链和轻链的柔性接头。在一些实施例中，所述双特异性分子可能包括额外的接头，例如连接scFv的可变重链和轻链的柔性接头以及用于将其他结合单元与双特异性分子的核心结构连接的其他接头。与双特异性分子核心结构连接的结合单元的示例如图6所示。
接头的一个典型的、非限制性的例子是包含至少4个残基的多肽链。这类接头的部位可能是柔性的、亲水的，并且它们自己很少或不会形成二级结构(接头部位或柔性接头部位)。在分子组装完成后，至少4个氨基酸的接头可以用于连接彼此靠近的结构域和/或区。也可以使用较长的接头。在一些实施例中，接头可以是1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、25、30、35、40、45、50、100、125、150、175或200个残基。当使用多个接头连接分子的各个部分时，接头可以是相同的或不同的(例如，相同或不同的长度和/或氨基酸序列)。
在某些方面，所述连接肽包括或由甘氨酸-丝氨酸接头组成。如本文所述，术语“甘氨酸-丝氨酸接头”指由甘氨酸和丝氨酸残基组成的肽。示例性的甘氨酸-丝氨酸接头包括通式为(Gly4Ser)n的氨基酸序列，其中n是正整数(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9或10)。一个优选的甘氨酸-丝氨酸接头为(Gly4Ser)2和(Gly4Ser)4。另一个优选的甘氨酸-丝氨酸接头为(Gly4Ser)3。在其它方面，两个或两个以上的甘氨酸-丝氨酸接头串联在一个连接肽中。在某些方面，所述连接肽包括铰链区的至少一部分(例如，来源于IgGl、IgG2、IgG3或IgG4分子)和一系列的甘氨酸-丝氨酸残基(例如，甘氨酸-丝氨酸接头，例如(Gly4Ser)n)。
在一些实施例中，L1和/或L2包括铰链部分和接头部分，例如包括甘氨酸-丝氨酸接头的接头部分。在其它方面，L1和/或L2仅包括铰链部分或仅包括接头部分，例如甘氨酸-丝氨酸接头。在某些方面，L1和L2包括甘氨酸-丝氨酸接头。在某些方面，L1和L2的甘氨酸-丝氨酸接头部分的长度相同，而在其它方面，LI和L2的甘氨酸-丝氨酸接头部分的长度不同。当双特异性分子包含scFv时，scFv的重链和轻链可以通过柔性接头连接。在一些实施例中，这种柔性接头通常不包括铰链部分，而是一种甘氨酸-丝氨酸接头或其它柔性接头。可以选择和优化scFv互连结构域柔性接头的长度和氨基酸序列。
在一些实施例中，所述双特异性分子包括结合单元1(BU1)和结合单元2(BU2)。在一些实施例中，BU1包含Fab结构域。在一些实施例中，BU2包含scFv。在一些实施例中，连接肽(例如L1和/或L2)包含甘氨酸-丝氨酸或全部为甘氨酸的接头以及铰链区域的一部分或经修饰的一部分。在某些方面，双特异性分子中连接BU1(如Fab结构域)和另一个结合结构域BU2(如scFv)的连接肽(L1)包含氨基酸序列EPKSDKTGGGGSGGGGS(SEQ ID NO:153)或EPKSCGKTGGGGSGGGGS(SEQ ID NO:154)或EPKSCGGGGSGGGGS(SEQ ID NO:155)。在某些方面，双特异性分子中连接BD2与Fc域的连接肽(L2)包含氨基酸序列GGGGSGGGGSEPKSDKTHTCPPCP(SEQ ID NO:156)或GGGGSGGGGSCPPCP(SEQ ID NO:157)或GGGGSGGGGSDKTHTCPPCP(SEQ IDNO:158)。
无论是何种将结合单元1与结合单元2连接，以及将结合单元2与Fc(例如L1和L2)连接的连接肽，双特异性分子都可以选择性地包含额外的连接肽。这些额外的连接肽的长度和序列是独立选择的。例如，双特异性分子还可以包括一个柔性连接肽(L3)，其连接scFv的可变重链和轻链(VHSCFV和VLSCFV)。这种柔性的连接肽可以包括甘氨酸-丝氨酸接头。通常，这种接头不包括铰链部分。在一些实施例中，连接scFv的可变重链和轻链的柔性连接肽(L3)包含序列GGGGSGGGGSGGGGSGGGG(SEQ ID NO:87)。
在一些实施例中，本发明披露的双特异性分子包括两个重轻链对。在一些实施例中，所述双特异性分子嵌合重链的多肽序列可包括：包含抗体重链可变域1(VH1)的多肽序列、包含抗体重链恒定区1(CH1)的多肽序列、包含第一连接肽(L1)的多肽序列、包含与第二表位结合的结合单元2(BU2)的多肽序列、包含第二连接肽(L2)的多肽序列、和包含Fc结构域的多肽序列。在某些方面，Fc结构域包括CH2结构域和CH3结构域。在一些实施例中，双特异性分子的嵌合重链可以从N端到C端包含以下的多肽序列：VH1-CH1-L1-BU2-L2-CH2-CH3。双特异性分子轻链的多肽序列可包括轻链可变域1(VLl)和轻链恒定域(CL)。在一些实施例中，双特异性分子的轻链可以从N端到C端包含以下的多肽序列：VL1-CL。在一些实施例中，VH1、VLl、CH1和CL用于表示结合单元1(BU1)，其是与第一表位结合的部分。在一些实施例中，一个或多个额外的结合单元(例如scFvs)位于双特异性分子核心的N末端和/或C末端。在一些实施例中，一个或多个额外的结合单元(例如，scFvs)位于铰链区。因此，双特异性分子的重链可能包含一个延伸的核心，从N端到C端具有如下的多肽序列：VH1-CH1-L1-(BU)n-L2-CH2-CH3(n>l)。在一些实施例中，所述双特异性分子包括CH1，其包含氨基酸序列SEQ IDNo:134。在一些实施例中，所述双特异性分子包括CH2-CH3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:131、132或133。在一些实施例中，所述双特异性分子包括CH2-CH3，其包含相对于氨基酸序列SEQ ID NO:131的22、24、26位上的一个或多个取代。在一些实施例中，所述双特异性分子包括CH2-CH3，其包含相对于氨基酸序列SEQ ID NO:131的M22Y、S24T、T26E中的一个或多个取代。在一些实施例中，所述双特异性分子包括CH2-CH3，其包含相对于氨基酸序列SEQ IDNO:131的198、204位上的一个或多个取代。在一些实施例中，所述双特异性分子包括CH2-CH3，其包含相对于氨基酸序列SEQ ID NO:131的M198L、N204S中的一个或多个取代。
在一些实施例中，所述结合单元2(BU2)为scFv，双特异性分子嵌合重链可能包括：包含抗体重链可变域(VH1)的多肽序列，包含抗体重链恒定域1(CH1)的多肽序列，包含第一连接肽(L1)的多肽序列、包含抗体轻链可变域(VL2)的多肽序列、包含柔性接头(L3)的多肽序列、包含抗体重链可变域(VH2)的多肽序列，包含第二连接肽(L2)的多肽序列和包含抗体Fc结构域的多肽序列。在一些实施例中，双特异性分子的嵌合重链可以从N端到C端包含以下的多肽序列:VH1-CH1-Ll-VL2-L3-VH2-L2-Fc。嵌合重链是由氨基酸序列(例如，每个多肽结构域的氨基酸序列)组成的多肽链。或者，在一些实施例中，双特异性分子的嵌合重链可以从N端到C端包含以下的多肽序列:VH1-CH1-Ll-VH2-L3-VL2-L2-Fc。嵌合重链是由氨基酸序列(例如，每个多结构肽域的氨基酸序列)组成的多肽链。注意，VH1、VL1、CH1和CL用来表示结合单元1的部分，VH1和VL1表示与第一表位结合的部分。VH2和VL2用来表示结合单元2与第二表位结合的部分。在某些实施例中，一个或多个额外的结合单元(例如scFvs)位于双特异性分子核心的N末端和/或C末端。在其它方面，一个或多个额外的结合单元(例如，scFvs)位于铰链区。连续scFv内所包含的抗体重链可变区用VH3、VH4、VH5表示，连续scFv内所对应的抗体轻链可变区用VL3、VL4、VL5表示。在一些实施例中，所述双特异性分子包括CH1，其包含氨基酸序列SEQ ID No:134。在一些实施例中，所述双特异性分子包括CH2-CH3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:131、132或133。在一些实施例中，所述双特异性分子包括CH2-CH3，其包含相对于氨基酸序列SEQ ID NO:131的22、24、26位上的一个或多个取代。在一些实施例中，所述双特异性分子包括CH2-CH3，其包含相对于氨基酸序列SEQ ID NO:131的M22Y、S24T、T26E位上的一个或多个取代。在一些实施例中，所述双特异性分子包括CH2-CH3，其包含相对于氨基酸序列SEQ ID NO:131的198、204位上的一个或多个取代。在一些实施例中，所述双特异性分子包括CH2-CH3，其包含相对于氨基酸序列SEQ ID NO:131的M198L、N204S中的一个或多个取代。
在一些实施例中，双特异性分子的嵌合重链可以从N端到C端包含以下的多肽序列：VH1-CH1-L1-BU2-L2-CH2-CH3。在一些实施例中，双特异性分子的轻链可以从N端到C端包含以下的多肽序列：VL1-CL。在一些实施例中，所述双特异性分子包括：包含氨基酸序列SEQ ID NO:137的嵌合重链和包含氨基酸序列SEQ ID NO:135的轻链。在一些实施例中，所述双特异性分子包括：包含氨基酸序列SEQ ID NO:139的嵌合重链和包含氨基酸序列SEQID NO:135的轻链。
在一些实施例中，双特异性分子的嵌合重链可以从N端到C端包含以下的多肽序列：VH1-CH1-L1-BU2-L2-CH2-CH3。在一些实施例中，双特异性分子的轻链可以从N端到C端包含以下的多肽序列：VL1-CL。在一些实施例中，所述双特异性分子包括：包含氨基酸序列SEQ ID NO:138的嵌合重链和包含氨基酸序列SEQ ID NO:135的轻链。在一些实施例中，所述双特异性分子包括：包含氨基酸序列SEQ ID NO:140的嵌合重链和包含氨基酸序列SEQID NO:135的轻链。在一些实施例中，所述双特异性分子包括：包含氨基酸序列SEQ ID NO:141的嵌合重链和包含氨基酸序列SEQ ID NO:135的轻链。
在一些实施例中，双特异性分子的嵌合重链可以从N端到C端包含以下的多肽序列：VH1-CH1-L1-BU2-L2-CH2-CH3。在一些实施例中，双特异性分子的轻链可以从N端到C端包含以下的多肽序列：VL1-CL。在一些实施例中，所述双特异性分子包括：包含氨基酸序列SEQ ID NO:140的嵌合重链和包含氨基酸序列SEQ ID NO:136的轻链。在一些实施例中，所述双特异性分子包括：包含氨基酸序列SEQ ID NO:141的嵌合重链和包含氨基酸序列SEQID NO:136的轻链。在一些实施例中，所述双特异性分子包括：包含氨基酸序列SEQ ID NO:142的嵌合重链和包含氨基酸序列SEQ ID NO:136的轻链。
在一些实施例中，双特异性分子的嵌合重链可以从N端到C端包含以下的多肽序列：VH1-CH1-L1-BU2-L2-CH2-CH3。在一些实施例中，双特异性分子的轻链可以从N端到C端包含以下的多肽序列：VL1-CL。在一些实施例中，所述双特异性分子包括：包含氨基酸序列SEQ ID NO:142的嵌合重链和包含氨基酸序列SEQ ID NO:135的轻链。在一些实施例中，所述双特异性分子包括：包含氨基酸序列SEQ ID NO:143的嵌合重链和包含氨基酸序列SEQID NO:135的轻链。在一些实施例中，所述双特异性分子包括：包含氨基酸序列SEQ ID NO:144的嵌合重链和包含氨基酸序列SEQ ID NO:135的轻链。
在一些实施例中，双特异性分子的嵌合重链可以从N端到C端包含以下的多肽序列：VH1-CH1-L1-BU2-L2-CH2-CH3。在一些实施例中，双特异性分子的轻链可以从N端到C端包含以下的多肽序列：VL1-CL。在一些实施例中，所述双特异性分子包括：包含氨基酸序列SEQ ID NO:148的嵌合重链和包含氨基酸序列SEQ ID NO:135的轻链。在一些实施例中，所述双特异性分子包括：包含氨基酸序列SEQ ID NO:146的嵌合重链和包含氨基酸序列SEQID NO:135的轻链。
在一些实施例中，双特异性分子的嵌合重链可以从N端到C端包含以下的多肽序列：VH1-CH1-L1-BU2-L2-CH2-CH3。在一些实施例中，双特异性分子的轻链可以从N端到C端包含以下的多肽序列：VL1-CL。在一些实施例中，所述双特异性分子包括：包含氨基酸序列SEQ ID NO:145的嵌合重链和包含氨基酸序列SEQ ID NO:135的轻链。在一些实施例中，所述双特异性分子包括：包含氨基酸序列SEQ ID NO:147的嵌合重链和包含氨基酸序列SEQID NO:135的轻链。
在一些实施例中，双特异性分子的嵌合重链可以从N端到C端包含以下的多肽序列：VH1-CH1-L1-BU2-L2-CH2-CH3。在一些实施例中，双特异性分子的轻链可以从N端到C端包含以下的多肽序列：VL1-CL。在一些实施例中，所述双特异性分子包括：包含氨基酸序列SEQ ID NO:149的嵌合重链和包含氨基酸序列SEQ ID NO:135的轻链。在一些实施例中，所述双特异性分子包括：包含氨基酸序列SEQ ID NO:150的嵌合重链和包含氨基酸序列SEQID NO:135的轻链。在一些实施例中，所述双特异性分子包括：包含氨基酸序列SEQ ID NO:151的嵌合重链和包含氨基酸序列SEQ ID NO:135的轻链。在一些实施例中，所述双特异性分子包括：包含氨基酸序列SEQ ID NO:152的嵌合重链和包含氨基酸序列SEQ ID NO:135的轻链。
在一些实施例中，双特异性分子的嵌合重链可以从N端到C端包含以下的多肽序列：VH1-CH1-L1-BU2-L2-CH2-CH3。在一些实施例中，双特异性分子的轻链可以从N端到C端包含以下的多肽序列：VL1-CL。在一些实施例中，所述双特异性分子包括：包含氨基酸序列SEQ ID NO:159的嵌合重链和包含氨基酸序列SEQ ID NO:160的轻链。
在一些实施例中，双特异性分子的嵌合重链可以从N端到C端包含以下的多肽序列：VH1-CH1-L1-BU2-L2-CH2-CH3。在一些实施例中，双特异性分子的轻链可以从N端到C端包含以下的多肽序列：VL1-CL。
示例性抗体序列如表2-6所示，其CDR编号依据Kabat中的EU索引。本领域技术人员将认识到有多种已知算法来预测CDR的位置以及界定抗体轻、重链可变区。包含如本文所述特异性识别假单胞菌PcrV和/或Psl的抗PcrV、抗Psl抗体或双特异性抗体的CDRs、VH和/或VL序列，但基于预测算法而非下表中所示例的抗体也在本申请的范围内。本公司抗PcrV或抗Psl抗体序列专利，国际申请号为PCT/CN2020/100592、PCT/CN2020/093702和PCT/CN2020/107666，被并入本发明中。
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识别假单胞菌PcrV和假单胞菌Psl的抗体的组合
在一方面，本申请提供了一种药物组合物，包括：(i)特异性识别假单胞菌PcrV上的第一表位的抗原结合蛋白和(ii)特异性识别假单胞菌PcrV上的第二表位的抗原结合蛋白和/或特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白。
在一些实施例中，提供了一种药物组合物，包括：(i)特异性识别假单胞菌PcrV上的第一表位的抗原结合蛋白和(ii)特异性识别假单胞菌PcrV上的第二表位的抗原结合蛋白和/或特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白，其中：特异性识别假单胞菌PcrV上的第一表位的抗原结合蛋白包含：(a)重链可变域(VH)，所述VH包含：重链互补决定区(HC-CDR)1，其包含DX1X2MS(SEQ ID NO:20)，其中X1为N或Y，和X2为Y、H或P；HC-CDR2，其包含X1ISESGGSTNYADSVKG(SEQ ID NO:15)，其中X1为V或G；和HC-CDR3，其包含GRFSTX1SX2HFX3RAVYGMDV(SEQ ID NO:21)，其中X1为L、S、N或D，X2为S或A，X3为F或Y；以及轻链可变域(VL)，所述VL包含：轻链互补决定区(LC-CDR)1，其包含RASQGISSYLA(SEQ ID NO:10)；LC-CDR2，其包含AASTLQS(SEQ ID NO:11)；和LC-CDR3，其包含QQLSSYPLX1(SEQ ID NO:19)，其中X1为S或T；或者(b)VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含X1X2X3MS(SEQ ID NO:17)，其中X1为D或S，X2为Y或N，和X3为P、H、Y或S；HC-CDR2，其包含X1ISESGGSTX2X3ADSVKG(SEQ ID NO:18)，其中X1为G或V，X2为N或Y，和X3为D或Y；和HC-CDR3，其包含GRFX1X2X3X4X5X6FX7RAVYGMDV(SEQ ID NO:38)，其中X1为S或C，X2为T、G、D、Y、Q或A，X3为S、D、N、E、L、A或Y，X4为S、T、Y或A，X5为S、H、Q、A、R、K、G、E、Y或D，X6为H或C，和X7为F或Y；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含RASQGIX1SYLA(SEQ ID NO:209)，其中X1为S或R；LC-CDR2，其包含AASTLQS(SEQ ID NO:11)；和LC-CDR3，其包含QQLX1SYPLX2(SEQ ID NO:210)，其中X1为S、N或K，和X2为S或T。
在一些实施例中，提供了一种药物组合物包括：(i)特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白和(ii)特异性识别假单胞菌PcrV上的第一表位的抗原结合蛋白和/或特异性识别假单胞菌PcrV上的第二表位的抗原结合蛋白，其中：特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白包含：(a)VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含SSGDYWG(SEQ ID NO:48)；HC-CDR2，其包含SIHNX1GSTYYNPSLKG(SEQ ID NO:81)，其中X1为S或Q；和HC-CDR3，其包含QFGSETYYX1GIX2P(SEQ ID NO:82)，其中X1为T、N或P，和X2为D或Q；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含RSSQSLLHSX1GYNYLD(SEQ ID NO:83)，其中X1为N或R；LC-CDR2，其包含LGSNRAS(SEQ ID NO:70)；和LC-CDR3，其包含MQALQTPYT(SEQ ID NO:74)；或者(b)VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含IHSVH(SEQ ID NO:50)；HC-CDR2，其包含TIISSGTTTTYAQSFQD(SEQ ID NO:55)；和HC-CDR3，其包含DGX1S(SEQ ID NO:84)，其中X1为D或T；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含RASQGISSWLA(SEQ ID NO:68)；LC-CDR2，其包含HASTLES(SEQ ID NO:72)；和LC-CDR3，其包含LQAX1SLPHT(SEQ ID NO:85)，其中X1为N、F、S或K；或者(c)VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:49，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:54，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:61；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:67，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:71，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:75；或者(d)VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:51，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:56，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:64；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:69，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:73，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:80。
在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌PcrV上的第一表位的抗原结合蛋白，其包含：重链可变域(VH)，所述VH包含：重链互补决定区(HC-CDR)1，其包含DX1X2MS(SEQ IDNO:20)，其中X1为N或Y，和X2为Y、H或P；HC-CDR2，其包含X1ISESGGSTNYADSVKG(SEQ ID NO:15)，其中X1为V或G；和HC-CDR3，其包含GRFSTX1SX2HFX3RAVYGMDV(SEQ ID NO:21)，其中X1为L、S、N或D，X2为S或A，X3为F或Y；以及轻链可变域(VL)，所述VL包含：轻链互补决定区(LC-CDR)1，其包含RASQGISSYLA(SEQ ID NO:10)；LC-CDR2，其包含AASTLQS(SEQ ID NO:11)；和LC-CDR3，其包含QQLSSYPLX1(SEQ ID NO:19)，其中X1为S或T。在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌PcrV上的第一表位的抗原结合蛋白，其包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含DNX1MS(SEQ ID NO:14)，其中X1为Y或H；HC-CDR2，其包含X1ISESGGSTNYADSVKG(SEQ ID NO:15)，其中X1为V或G；和HC-CDR3，其包含GRFSTX1SSHFX2RAVYGMDV(SEQ ID NO:16)，其中X1为L或S,X2为F或Y；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含RASQGISSYLA(SEQ ID NO:10)；LC-CDR2，其包含AASTLQS(SEQ ID NO:11)；和LC-CDR3，其包含QQLSSYPLX1(SEQ ID NO:19)，其中X1为S或T。
在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌PcrV上的第一表位的抗原结合蛋白，其包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:1，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:4，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:6；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:10，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:11，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:12。在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌PcrV上的第一表位的抗原结合蛋白，其包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ IDNO:2，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:5，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:7；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:10，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:11，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:13。在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌PcrV上的第一表位的抗原结合蛋白，其包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:2，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:5，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:8；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:10，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:11，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:12。在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌PcrV上的第一表位的抗原结合蛋白，其包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:3，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:5，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:9；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:10，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:11，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:13。
在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌PcrV上的第二表位的抗原结合蛋白，其包含：(a)VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含SYWMH(SEQ ID NO:22)；HC-CDR2，其包含RINEX1EX2SISYADSVKG(SEQ ID NO:44)，其中X1为D或N，和X2为T、G或R；和HC-CDR3，其包含DGPYDX1X2DI(SEQ ID NO:45)，其中X1为S、A或T，和X2为F或L；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含RASQX1VX2X3NLA(SEQ ID NO:46)，其中X1为S、G或N，X2为S、R或K和X3为S或N；LC-CDR2，其包含X1ASSRAT(SEQ ID NO:42)，其中X1为D或H；和LC-CDR3，其包含QQYGX1X2PX3T(SEQ IDNO:47)，其中X1为S、L或N，X2为S、Q或E和X3为L或I；或者(b)VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含SYWMH(SEQ ID NO:22)；HC-CDR2，其包含RINEX1EX2SISYADSVKG(SEQ ID NO:211)，其中X1为D、N、I、L或V，X2为S、T、R、G或N；和HC-CDR3，其包含DGPYDX1X2DI(SEQ ID NO:45)，其中X1为S、A或T，X2为F或L；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含RASQX1VX2X3NLA(SEQ ID NO:212)，其中X1为N、G、D或S，X2为K、R、S、N或T，X3为N、G、S或D；LC-CDR2，其包含X1ASSRAT(SEQ ID NO:213)，其中X1为D、N、H或A；和LC-CDR3，其包含QQYGX1X2PX3T(SEQ ID NO:214)，其中X1为S、T、E、H、N、A、D、M或L，X2为S、Q、E、T、D、G、H、L、N、V或Y，和X3为I、L或V。在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌PcrV上的第二表位的抗原结合蛋白，其包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含SYWMH(SEQ ID NO:22)；HC-CDR2，其包含RINEX1EX2SISYADSVKG(SEQ ID NO:39)，其中X1为D或N，和X2为T、G或R；和HC-CDR3，其包含DGPYDX1LDI(SEQ ID NO:40)，其中X1为S或A；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含RASQX1VX2X3NLA(SEQ ID NO:41)，其中X1为S或G，X2为S或R和X3为S或N；LC-CDR2，其包含X1ASSRAT(SEQ ID NO:42)，其中X1为D或H；和LC-CDR3，其包含QQYGX1X2PX3T(SEQ ID NO:43)，其中X1为S或L，X2为S或Q和X3为L或I。
在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌PcrV上的第二表位的抗原结合蛋白，其包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:22；HC-CDR2，其包含SEQ IDNOs:23-25中任一氨基酸序列；和HC-CDR3，其包含SEQ ID NOs:26-29中任一氨基酸序列；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含SEQ ID NOs:30-32中任一氨基酸序列；LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:33或34；和LC-CDR3，其包含SEQ ID NOs:35-37中任一氨基酸序列。
在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌PcrV上的第二表位的抗原结合蛋白，其包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:22，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:23，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:26；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:30，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:33，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:35。在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌PcrV上的第二表位的抗原结合蛋白，其包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ IDNO:22，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:24，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ IDNO:27；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:31，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:34，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:36。在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌PcrV上的第二表位的抗原结合蛋白，其包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:22，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:25，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:27；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:32，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:34，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:37。在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌PcrV上的第二表位的抗原结合蛋白，其包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:22，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:25，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:28；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:32，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:34，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:37。在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌PcrV上的第二表位的抗原结合蛋白，其包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:22，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:24，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:28；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:31，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:34，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:36。在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌PcrV上的第二表位的抗原结合蛋白，其包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:22，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:25，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:26；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:32，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:34，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:37。在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌PcrV上的第二表位的抗原结合蛋白，其包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:22，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:24，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:26；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:31，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ IDNO:34，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:36。在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌PcrV上的第二表位的抗原结合蛋白，其包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:22，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:23，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:29；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:30，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:33，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:35。
在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白，其包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含SSGDYWG(SEQ ID NO:48)；HC-CDR2，其包含SIHNX1GSTYYNPSLKG(SEQID NO:81)，其中X1为S或Q；和HC-CDR3，其包含QFGSETYYX1GIX2P(SEQ ID NO:82)，其中X1为T、N或P，和X2为D或Q；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含RSSQSLLHSX1GYNYLD(SEQ ID NO:83)，其中X1为N或R；LC-CDR2，其包含LGSNRAS(SEQ ID NO:70)；和LC-CDR3，其包含MQALQTPYT(SEQ ID NO:74)。在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白，其包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含SSGDYWG(SEQ ID NO:48)；HC-CDR2，其包含SIHNX1GSTYYNPSLKG(SEQ ID NO:125)，其中X1为S、K或Q；和HC-CDR3，其包含QFGSETYYX1GIX2P(SEQ ID NO:126)，其中X1为N、S、V、T或P，和X2为D、Y、C、H、S、R、A、E、G、K、W、V或Q；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含RSSQSLLHSX1GYNYLD(SEQ ID NO:127)，其中X1为N、A、V、F、R、G、H、Q、W或P；LC-CDR2，其包含LGSNRAS(SEQ ID NO:70)；和LC-CDR3，其包含MQALQTP X1T(SEQ ID NO:128)，其中X1为R或Y。
在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白，其包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含IHSVH(SEQ ID NO:50)；HC-CDR2，其包含TIISSGTTTTYAQSFQD(SEQID NO:55)；和HC-CDR3，其包含DGX1S(SEQ ID NO:84)，其中X1为D或T；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含RASQGISSWLA(SEQ ID NO:68)；LC-CDR2，其包含HASTLES(SEQ ID NO:72)；和LC-CDR3，其包含LQAX1SLPHT(SEQ ID NO:85)，其中X1为N、F、S或K。在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白，其包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含IHSVH(SEQ ID NO:50)；HC-CDR2，其包含TIISSGTTTTYAQSFQD(SEQ ID NO:55)；和HC-CDR3，其包含X1X2X3X4(SEQ ID NO:129)，其中X1为D、Y或N，其中X2为G或A，其中X3为D或T，和其中X4为S、A或T；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含RASQGISSWLA(SEQ ID NO:68)；LC-CDR2，其包含HASTLES(SEQ ID NO:72)；和LC-CDR3，其包含LQAX1SLPHT(SEQ ID NO:130)，其中X1为N、D、Y、F、P、G、K、H、A、C、E、Q、R、S、T、V、W或L。
在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白，其包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:48；HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ IDNO:52或53；和HC-CDR3，其包含SEQ ID NOs:57-60中任一氨基酸序列；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:65或66；LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:70；和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:74。
在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白，其包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:50；HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ IDNO:55；和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:62或63；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:68；LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:72；和LC-CDR3，其包含SEQ ID NOs:76-79中任一氨基酸序列。
在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白，其包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:48，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ IDNO:52，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:57；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:65，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:70，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:74。在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白，其包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:48，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:53，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:58；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:66，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:70，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:74。在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白，其包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:48，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:52，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:59；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:65，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQID NO:70，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:74。在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白，其包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ IDNO:48，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:53，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ IDNO:60；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:65，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:70，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:74。在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白，其包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:49，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:54，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:61；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:67，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:71，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:75。在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白，其包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:50，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:55，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:62；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:68，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:72，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:76。在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白，其包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:50，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQID NO:55，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:63；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:68，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:72，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:77。在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白，其包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:50，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:55，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:63；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:68，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:72，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:78。在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白，其包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:50，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:55，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:63；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:68，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQID NO:72，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:79。在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白，其包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ IDNO:51，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:56，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ IDNO:64；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:69，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:73，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:80。
在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌PcrV上的第一表位的抗原结合蛋白包含：VH，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:91，以及VL，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:112。在一些实施例中，特异性识别假单胞菌PcrV上的第一表位的抗原结合蛋白包含：VH，所述VH包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:91的VH中的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及VL，所述VL包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:112的VL中的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。
在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌PcrV上的第一表位的抗原结合蛋白包含：VH，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:92，以及VL，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:113。在一些实施例中，特异性识别假单胞菌PcrV上的第一表位的抗原结合蛋白包含：VH，所述VH包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:92的VH中的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及VL，所述VL包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:113的VL中的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。
在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌PcrV上的第一表位的抗原结合蛋白包含：VH，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:93，以及VL，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:112。在一些实施例中，特异性识别假单胞菌PcrV上的第一表位的抗原结合蛋白包含：VH，所述VH包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:93的VH中的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及VL，所述VL包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:112的VL中的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。
在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌PcrV上的第一表位的抗原结合蛋白包含：VH，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:94，以及VL，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:113。在一些实施例中，特异性识别假单胞菌PcrV上的第一表位的抗原结合蛋白包含：VH，所述VH包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:94的VH中的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及VL，所述VL包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:113的VL中的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。
在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌PcrV上的第二表位的抗原结合蛋白包含：VH，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:95，以及VL，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:114。在一些实施例中，特异性识别假单胞菌PcrV上的第一表位的抗原结合蛋白包含：VH，所述VH包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:95的VH中的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及VL，所述VL包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:114的VL中的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。
在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌PcrV上的第二表位的抗原结合蛋白包含：VH，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:96，以及VL，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:115。在一些实施例中，特异性识别假单胞菌PcrV上的第一表位的抗原结合蛋白包含：VH，所述VH包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:96的VH中的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及VL，所述VL包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:115的VL中的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。
在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌PcrV上的第二表位的抗原结合蛋白包含：VH，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:97，以及VL，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:116。在一些实施例中，特异性识别假单胞菌PcrV上的第一表位的抗原结合蛋白包含：VH，所述VH包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:97的VH中的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及VL，所述VL包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:116的VL中的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。
在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌PcrV上的第二表位的抗原结合蛋白包含：VH，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:98，以及VL，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:116的。在一些实施例中，特异性识别假单胞菌PcrV上的第一表位的抗原结合蛋白包含：VH，所述VH包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:98的VH中的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及VL，所述VL包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:116的VL中的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。
在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌PcrV上的第二表位的抗原结合蛋白包含：VH，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:99，以及VL，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:115。在一些实施例中，特异性识别假单胞菌PcrV上的第一表位的抗原结合蛋白包含：VH，所述VH包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:99的VH中的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及VL，所述VL包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:115的VL中的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。
在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌PcrV上的第二表位的抗原结合蛋白包含：VH，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:100，以及VL，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:116。在一些实施例中，特异性识别假单胞菌PcrV上的第一表位的抗原结合蛋白包含：VH，所述VH包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:100的VH中的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及VL，所述VL包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:116的VL中的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。
在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌PcrV上的第二表位的抗原结合蛋白包含：VH，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:101，以及VL，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:115。在一些实施例中，特异性识别假单胞菌PcrV上的第一表位的抗原结合蛋白包含：VH，所述VH包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:101的VH中的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及VL，所述VL包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:115的VL中的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。
在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌PcrV上的第二表位的抗原结合蛋白包含：VH，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:102，以及VL，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:114。在一些实施例中，特异性识别假单胞菌PcrV上的第一表位的抗原结合蛋白包含：VH，所述VH包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:102的VH中的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及VL，所述VL包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:114的VL中的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。
在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白包含：VH，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:103，以及VL，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:117。在一些实施例中，特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白包含：VH，所述VH包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:103的VH中的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及VL，所述VL包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:117的VL中的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。
在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白包含：VH，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:104，以及VL，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:118。在一些实施例中，特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白包含：VH，所述VH包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:104的VH中的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及VL，所述VL包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:118的VL中的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。
在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白包含：VH，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:105，以及VL，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:117。在一些实施例中，特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白包含：VH，所述VH包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:105的VH中的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及VL，所述VL包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:117的VL中的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。
在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白包含：VH，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:106，以及VL，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:117。在一些实施例中，特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白包含：VH，所述VH包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:106的VH中的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及VL，所述VL包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:117的VL中的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。
在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白包含：VH，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:107，以及VL，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:119。在一些实施例中，特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白包含：VH，所述VH包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:107的VH中的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及VL，所述VL包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:119的VL中的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。
在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白包含：VH，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:108，以及VL，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:119。在一些实施例中，特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白包含：VH，所述VH包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:108的VH中的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及VL，所述VL包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:119的VL中的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。
在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白包含：VH，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:109，以及VL，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:120。在一些实施例中，特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白包含：VH，所述VH包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:109的VH中的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及VL，所述VL包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:120的VL中的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。
在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白包含：VH，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:110，以及VL，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:121。在一些实施例中，特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白包含：VH，所述VH包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:110的VH中的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及VL，所述VL包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:121的VL中的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。
在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白包含：VH，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:110，以及VL，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:122。在一些实施例中，特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白包含：VH，所述VH包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:110的VH中的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及VL，所述VL包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:122的VL中的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。
在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白包含：VH，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:110，以及VL，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:123。在一些实施例中，特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白包含：VH，所述VH包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:110的VH中的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及VL，所述VL包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:123的VL中的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。
在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白包含：VH，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:111，以及VL，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:124。在一些实施例中，特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白包含：VH，所述VH包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:111的VH中的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及VL，所述VL包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:124的VL中的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。
在一些实施例中，其中所述药物组合物包括：(i)特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白和(ii)特异性识别假单胞菌PcrV上的第一表位的抗原结合蛋白和/或特异性识别假单胞菌PcrV上的第二表位的抗原结合蛋白，特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白和特异性识别假单胞菌PcrV上的第一表位的抗原结合蛋白的摩尔比约为20:1、10:1、9:1、8:1、7:1、6:1、5:1、4:1、3:1、2:1、1:1、1:2、1:3、1:4、1:5、1:6、1:7、1:8、1:9、1:10或1:20。在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白和特异性识别假单胞菌PcrV上的第一表位的抗原结合蛋白的摩尔比约为5:1、4:1、3:1、2:1、1:1、1:2、1:3、1:4或1:5。在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白和特异性识别假单胞菌PcrV上的第一表位的抗原结合蛋白的摩尔比约为2:1或1:1。
在一些实施例中，其中所述药物组合物包括：(i)特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白和(ii)特异性识别假单胞菌PcrV上的第一表位的抗原结合蛋白和/或特异性识别假单胞菌PcrV上的第二表位的抗原结合蛋白，特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白和特异性识别假单胞菌PcrV上的第二表位的抗原结合蛋白的摩尔比约为20:1、10:1、9:1、8:1、7:1、6:1、5:1、4:1、3:1、2:1、1:1、1:2、1:3、1:4、1:5、1:6、1:7、1:8、1:9、1:10或1:20。在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌PSL的抗原结合蛋白和特异性识别假单胞菌PcrV上的第二表位的抗原结合蛋白的摩尔比约为5:1、4:1、3:1、2:1、1:1、1:2、1:3、1:4或1:5。在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白和特异性识别假单胞菌PcrV上的第二表位的抗原结合蛋白的摩尔比约为2:1或1:1。
在一些实施例中，其中所述药物组合物包括：(i)特异性识别假单胞菌PcrV上的第一表位的抗原结合蛋白和(ii)特异性识别假单胞菌PcrV上的第二表位的抗原结合蛋白和/或特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白，特异性识别假单胞菌PcrV上的第一表位的抗原结合蛋白和特异性识别假单胞菌PcrV上的第二表位的抗原结合蛋白的摩尔比约为20:1、10:1、9:1、8:1、7:1、6:1、5:1、4:1、3:1、2:1、1:1、1:2、1:3、1:4、1:5、1:6、1:7、1:8、1:9、1:10或1:20。在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌PcrV上的第一表位的抗原结合蛋白和特异性识别假单胞菌PcrV上的第二表位的抗原结合蛋白的摩尔比约为5:1、4:1、3:1、2:1、1:1、1:2、1:3、1:4或1:5。在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌PcrV上的第一表位的抗原结合蛋白和特异性识别假单胞菌PcrV上的第二表位的抗原结合蛋白的摩尔比约为2:1或1:1。
在一些实施例中，其中所述药物组合物包括：(i)特异性识别假单胞菌PcrV上的第一表位的抗原结合蛋白和(ii)特异性识别假单胞菌PcrV上的第二表位的抗原结合蛋白和/或特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白，特异性识别假单胞菌PcrV上的第一表位的抗原结合蛋白和特异性识别假单胞菌PcrV上的第一表位的抗原结合蛋白的摩尔比约为20:1、10:1、9:1、8:1、7:1、6:1、5:1、4:1、3:1、2:1、1:1、1:2、1:3、1:4、1:5、1:6、1:7、1:8、1:9、1:10或1:20。在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌PcrV上的第一表位的抗原结合蛋白和特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白的摩尔比约为5:1、4:1、3:1、2:1、1:1、1:2、1:3、1:4或1:5。在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌PcrV上的第一表位的抗原结合蛋白和特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白的摩尔比约为2:1或1:1。
在一些实施例中，提供了一种药物组合物包括：特异性识别假单胞菌PcrV上的第一表位的抗原结合蛋白和特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白，其中特异性识别假单胞菌PcrV上的第一表位的抗原结合蛋白包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:1，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:4，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQID NO:6；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:10，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:11，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:12；以及其中特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ IDNO:48，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:52，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ IDNO:57；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:65，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:70，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:74。在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌PcrV上的第一表位的抗原结合蛋白和特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白的摩尔比约为1:1或2:1。
在一些实施例中，提供了一种药物组合物包括：特异性识别假单胞菌PcrV上的第一表位的抗原结合蛋白和特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白，其中特异性识别假单胞菌PcrV上的第一表位的抗原结合蛋白包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:1，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:4，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQID NO:6；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:10，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:11，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:12；以及其中特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白包含：VH，所述VH包含HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ IDNO:49，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:54，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ IDNO:61；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:67，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:71，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:75。在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌PcrV上的第一表位的抗原结合蛋白和特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白的摩尔比约为1:1或2:1。
在一些实施例中，提供了一种药物组合物包括：特异性识别假单胞菌PcrV上的第一表位的抗原结合蛋白和特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白，其中特异性识别假单胞菌PcrV上的第一表位的抗原结合蛋白包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:2，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:5，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQID NO:7；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:10，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:11，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:13；以及其中特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ IDNO:48，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:52，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ IDNO:57；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:65，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:70，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:74。在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌PcrV上的第一表位的抗原结合蛋白和特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白的摩尔比约为1:1或2:1。
在一些实施例中，提供了一种药物组合物包括：特异性识别假单胞菌PcrV上的第一表位的抗原结合蛋白和特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白，其中特异性识别假单胞菌PcrV上的第一表位的抗原结合蛋白包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:2，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:5，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQID NO:7；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:10，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:11，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:13；以及其中特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ IDNO:49，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:54，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ IDNO:61；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:67，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:71，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:75。在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌PcrV上的第一表位的抗原结合蛋白和特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白的摩尔比约为1:1或2:1。
在一些实施例中，提供了一种药物组合物包括：特异性识别假单胞菌PcrV上的第一表位的抗原结合蛋白，特异性识别假单胞菌PcrV上的第二表位的抗原结合蛋白和特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白，其中特异性识别假单胞菌PcrV上的第一表位的抗原结合蛋白包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:1，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:4，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:6；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:10，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:11，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:12；以及其中特异性识别假单胞菌PcrV上的第二表位的抗原结合蛋白包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:22，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:24，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:27；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:31，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQID NO:34，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:36；以及其中特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:48，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:52，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:57；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:65，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ IDNO:70，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:74。在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌PcrV上的第一表位的抗原结合蛋白，特异性识别假单胞菌PcrV上的第二表位的抗原结合蛋白和特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白的摩尔比约为1:1:1或1:1:2。
抗PcrV抗原结合域和抗原结合蛋白
在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌PcrV的抗原结合域和抗原结合蛋白包括，但不限于，人源化抗体，嵌合抗体，小鼠抗体，人抗体，以及本文所述的包含重链和/或轻链CDRs的抗体分子。一方面，所述抗原结合域或蛋白是与PcrV结合的分离的抗体。预期的特异性识别假单胞菌PcrV的抗原结合域或蛋白包括，全长抗PcrV抗体(如全长IgG1、IgG2或IgG4)的全部或片段，抗PcrV单链抗体，多特异性(如双特异性)抗PcrV抗体，抗PcrV免疫偶联物，以及诸如此类。在一些实施例中，抗PcrV抗体是Fab、Fab’、F(ab)’2、Fab’-SH、单链抗体(scFv)、Fv片段、dAb、Fd、纳米抗体或双链抗体(diabody)。在一些实施例中，特异性结合PcrV的抗原结合域或蛋白是指抗原结合域或蛋白与PcrV结合的亲和力至少是与非靶标结合亲和力的10倍以上(包括例如10、102、103、104、105、106、或107倍)。在一些实施例中，非靶标是指不是PcrV的抗原。
结合亲和力可通过本领域已知的方法来测定，如ELISA，荧光激活细胞分选(FACS)分析或放射免疫沉淀分析(RIA)。Kd值可以通过本领域已知的方法来测定，如表面等离子共振(SPR)技术或生物层干涉(BLI)技术。
在某些方面，所述特异性与假单胞菌PcrV结合的抗原结合域或蛋白(a)促进、介导或增强铜绿假单胞菌的调理吞噬杀伤(OPK)，和/或(b)破坏III型毒素分泌系统的活性。
尽管本文广泛地讨论了包含人序列的抗原结合域或蛋白(例如，包含人CDR序列的人重链和轻链可变域)，但同时也考虑了非人抗原结合域或蛋白。在一些实施例中，非人抗原结合域或蛋白包括本文所述的抗原结合域或蛋白的人CDR序列和非人框架区序列，在一些实施例中，非人框架区序列包括任何的用于使用如本文所述的一种或多种人CDR序列产生重链和/或轻链可变域的序列，包括例如哺乳动物，例如小鼠、大鼠、兔子、猪、牛(例如，牛、公牛、水牛)、鹿、绵羊、山羊、鸡、猫、狗、雪貂、灵长类(例如，狨猴，猕猴)等。在一些实施例中，非人抗原结合域或蛋白包括将一种或多种本文所述的人CDR序列移植到非人框架区中(例如，鼠或鸡的框架区序列)所产生的抗原结合域或蛋白。
示例性PcrV蛋白的完整氨基酸序列包含或由氨基酸序列SEQ ID NO:86组成。在一些实施例中，本文所述特异性识别假单胞菌PcrV的抗原结合域或蛋白，特异性识别假单胞菌PcrV中的一个表位。在一些实施例中，所述抗原结合域或蛋白是假单胞菌PcrV特异性的，并且没有种属交叉反应或不与其它类型的非假单胞菌蛋白发生交叉反应。
在一些实施例中，本文所述特异性识别假单胞菌PcrV的抗原结合域或蛋白特异性结合假单胞菌PcrV中的线性表位。在一些实施例中，本文所述特异性识别假单胞菌PcrV的抗原结合域或蛋白特异性结合假单胞菌PcrV中的非线性表位。在一些实施例中，本文所述的抗原结合域或蛋白特异性结合假单胞菌PcrV上的表位，其中，所述表位包含假单胞菌PcrV的Gln160、Asp165、Asp170、Asp173、Thr175和Ser202中的至少1、2、3、4、5或6个氨基酸残基，根据氨基酸序列SEQ ID NO:86的位置。在一些实施例中，本文所述特异性识别假单胞菌PcrV的抗原结合域或蛋白特异性结合假单胞菌PcrV上的表位，其中，所述表位包含假单胞菌PcrV的Gln160、Asp165、Asp170、Asp173、Thr175和Ser202中的至少2个氨基酸残基，根据氨基酸序列SEQ ID NO:86的位置。在一些实施例中，本文所述特异性识别假单胞菌PcrV的抗原结合域或蛋白特异性结合假单胞菌PcrV上的表位，其中，所述表位包含假单胞菌PcrV的Gln160、Asp165、Asp170、Asp173、Thr175和Ser202中的至少3个氨基酸残基，根据氨基酸序列SEQ ID NO:86的位置。在一些实施例中，本文所述特异性识别假单胞菌PcrV的抗原结合域或蛋白特异性结合假单胞菌PcrV上的表位，其中，所述表位包含假单胞菌PcrV的Gln160、Asp165、Asp170、Asp173、Thr175和Ser202中的至少4个氨基酸残基，根据氨基酸序列SEQ ID NO:86的位置。在一些实施例中，本文所述特异性识别假单胞菌PcrV的抗原结合域或蛋白特异性结合假单胞菌PcrV上的表位，其中，所述表位包含假单胞菌PcrV的Gln160、Asp165、Asp170、Asp173、Thr175和Ser202中的至少5个氨基酸残基，根据氨基酸序列SEQ IDNO:86的位置。在一些实施例中，本文所述特异性识别假单胞菌PcrV的抗原结合域或蛋白特异性结合假单胞菌PcrV上的表位，其中，所述表位包含假单胞菌PcrV的Gln160、Asp165、Asp170、Asp173、Thr175和Ser202，根据氨基酸序列SEQ ID NO:86的位置。
在一些实施例中，所述双特异性分子包括抗体重链恒定区和抗体轻链恒定区。在一些实施例中，所述双特异性分子包括IgG1型重链恒定区。在一些实施例中，所述双特异性分子包括IgG2型重链恒定区。在一些实施例中，所述双特异性分子包括IgG3型重链恒定区。在一些实施例中，所述双特异性分子包括IgG4型重链恒定区。在一些实施例中，所述IgG指的是人IgG。在一些实施例中，所述重链恒定区包含或由氨基酸序列SEQ ID NO:89组成。在一些实施例中，所述重链恒定区包含或由氨基酸序列SEQ ID NO:90组成。在一些实施例中，所述双特异性分子包含λ轻链恒定区。在一些实施例中，所述抗PcrV抗体包含κ轻链恒定区。在一些实施例中，所述轻链恒定区包含或由氨基酸序列SEQ ID NO:88组成。在一些实施例中，所述双特异性分子包括抗体重链可变域和抗体轻链可变域。
抗Psl抗原结合域和抗原结合蛋白
在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合域和抗原结合蛋白包括，但不限于，人源化抗体，嵌合抗体，小鼠抗体，人抗体，以及本文所述的包含重链和/或轻链CDRs的抗体分子。一方面，所述抗原结合域或蛋白是与Psl结合的分离的抗体。预期的特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合域或蛋白包括，全长抗Psl抗体(如全长IgG1、IgG2或IgG4)的全部或片段，抗Psl单链抗体，多特异性(如双特异性)抗Psl抗体，抗Psl免疫偶联物，以及诸如此类。在一些实施例中，抗Psl抗体是Fab、Fab’、F(ab)’2、Fab’-SH、单链抗体(scFv)、Fv片段、dAb、Fd、纳米抗体或双链抗体(diabody)。在一些实施例中，特异性结合Psl的抗原结合域或蛋白是指抗原结合域或蛋白与Psl结合的亲和力至少是与非靶标结合亲和力的10倍以上(包括例如10、102、103、104、105、106、或107倍)。在一些实施例中，非靶标是指不是Psl的抗原。
结合亲和力可通过本领域已知的方法来测定，如ELISA，荧光激活细胞分选(FACS)分析或放射免疫沉淀分析(RIA)。Kd值可以通过本领域已知的方法来测定，如表面等离子共振(SPR)技术或生物层干涉(BLI)技术。
在某些方面，所述特异性与假单胞菌Psl结合的抗原结合域或蛋白(a)促进、介导或增强铜绿假单胞菌的调理吞噬杀伤(OPK)，和/或(b)阻止铜绿假单胞菌与上皮细胞的结合。
尽管本文广泛地讨论了包含人序列的抗原结合域或蛋白(例如，包含人CDR序列的人重链和轻链可变域)，但同时也考虑了非人抗原结合域或蛋白。在一些实施例中，非人抗原结合域或蛋白包括本文所述的抗原结合域或蛋白的人CDR序列和非人框架区序列，在一些实施例中，非人框架区序列包括任何的用于使用如本文所述的一种或多种人CDR序列产生重链和/或轻链可变域的序列，包括例如哺乳动物，例如小鼠、大鼠、兔子、猪、牛(例如，牛、公牛、水牛)、鹿、绵羊、山羊、鸡、猫、狗、雪貂、灵长类(例如，狨猴，猕猴)等。在一些实施例中，非人抗原结合域或蛋白包括将一种或多种本文所述的人CDR序列移植到非人框架区中(例如，鼠或鸡的框架区序列)所产生的抗原结合域或蛋白。
在一些实施例中，本文所述特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合域或蛋白，特异性识别假单胞菌Psl中的一个表位。在一些实施例中，所述抗原结合域或蛋白是假单胞菌Psl特异性的，并且没有种属交叉反应或不与其它类型的非假单胞菌蛋白发生交叉反应。
在一些实施例中，所述双特异性分子包括抗体重链恒定区和抗体轻链恒定区。在一些实施例中，所述双特异性分子包括IgG1型重链恒定区。在一些实施例中，所述双特异性分子包括IgG2型重链恒定区。在一些实施例中，所述双特异性分子包括IgG3型重链恒定区。在一些实施例中，所述双特异性分子包括IgG4型重链恒定区。在一些实施例中，所述IgG指的是人IgG。在一些实施例中，所述重链恒定区包含或由氨基酸序列SEQ ID NO:89组成。在一些实施例中，所述重链恒定区包含或由氨基酸序列SEQ ID NO:90组成。在一些实施例中，所述双特异性分子包含λ轻链恒定区。在一些实施例中，所述抗PcrV抗体包含κ轻链恒定区。在一些实施例中，所述轻链恒定区包含或由氨基酸序列SEQ ID NO:88组成。在一些实施例中，所述双特异性分子包括抗体重链可变域和抗体轻链可变域。
结合亲和力
结合亲和力可以采用Kd、Koff、Kon或Ka来表示。如本文所用，术语“Koff”是指抗原结合域从抗原结合域/抗原复合物中解离的速率常数，通过动力学选择装置测定。术语“Kon”是指抗体与抗原结合形成抗原结合域/抗原复合物的结合速率常数。本文所用的解离常数“Kd”是指特定抗体抗原相互作用时的解离常数，是指在抗体分子溶液中，抗原占据所有抗体结合域的一半并且达到平衡时所需的抗原浓度，等于Koff/Kon。Kd的测定假设所有的结合分子均在溶液中。抗原结合域与细胞壁连接的情况，例如在酵母表达系统中，相应的解离速率常数采用EC50来表示，其是Kd的一个良好的近似值。亲和结合常数Ka是解离常数Kd的倒数。在一些实施例中，所述抗原结合域被包含在抗原结合蛋白内。
平衡解离常数(Kd)可以作为抗原结合域部分与抗原亲和力的指标。例如，可以通过Scatchard方法使用标记有各种标记物的抗体，和Biacore仪器(由AmershamBiosciences制造)进行简单分析，根据用户手册或附带试剂盒，通过表面等离子体共振来分析生物分子间的相互作用。使用这些方法得到的Kd值，用单位M来表示。与靶标特异性结合的抗体可能具有，例如≤10-7M、≤10-8M、≤10-9M、≤10-10M、≤10-11M、≤10-12M或≤10-13M的Kd值。
抗体的结合特异性可以通过本领域已知的方法进行实验测定。这些方法包括，但不限于Western blots、ELISA-、RIA-、ECL-、IRMA-、EIA-、BIAcore测试和肽扫描等。
在一些实施例中，所述特异性识别PcrV的抗原结合域特异性结合PcrV靶标，其Kd值为10-7M至10-13M(例如10-7M至10-13M、10-8M至10-13M、10-9M至10-13M或10-10M至10-12M)。因此，在一些实施例中，抗特异性识别PcrV的抗原结合域与PcrV之间结合的Kd值为10-7M至10-13M、1×10-7M至5×10-13M、10-7M至10-12M、10-7M至10-11M、10-7M至10-10M、10-7M至10-9M、10-8M至10- 13M、1×10-8M至5×10-13M、10-8M至10-12M、10-8M至10-11M、10-8M至10-10M、10-8M至10-9M、5×10- 9M至1×10-13M、5×10-9M至1×10-12M、5×10-9M至1×10-11M、5×10-9M至1×10-10M、10-9M至10-13M、10-9M至10-12M、10-9M至10-11M、10-9M至10-10M、5×10-10M至1×10-13M、5×10-10M至1×10- 12M、5×10-10M至1×10-11M、10-10M至10-13M、1×10-10M至5×10-13M、1×10-10M至1×10-12M、1×10-10M至5×10-12M、1×10-10M至1×10-11M、10-11M至10-13M、1×10-11M至5×10-13M、10-11M至10-12M、10-12M至10-13M。在一些实施例中，抗特异性识别PcrV的抗原结合域与PcrV之间结合的Kd值为10-7M至10-13M。
在一些实施例中，特异性识别PcrV的抗原结合域与非靶标之间结合的Kd值高于特异性识别PcrV的抗原结合域与靶标的Kd值，并且本文中引用的一些实施例中，特异性识别PcrV的抗原结合域与靶标(例如，PcrV)的结合亲和力高于特异性识别PcrV的抗原结合域与非靶标的结合亲和力。一些实施例中，非靶标是指非PcrV抗原。在一些实施例中，特异性识别PcrV的抗原结合域与非PcrV靶标结合的Kd值是特异性识别PcrV的抗原结合域和靶标PcrV之间结合的Kd的至少10倍，例如10-100倍、100-1000倍、103-104倍、104-105倍、105-106倍、106-107倍、107-108倍、108-109倍、109-1010倍、1010-1011倍、1011-1012倍。
在一些实施例中，所述特异性识别Psl的抗原结合域特异性结合Psl靶标，其Kd值为10-7M至10-13M(例如10-7M至10-13M、10-8M至10-13M、10-9M至10-13M或10-10M至10-12M)。因此，在一些实施例中，抗特异性识别Psl的抗原结合域与Psl之间结合的Kd值为10-7M至10-13M、1×10-7M至5×10-13M、10-7M至10-12M、10-7M至10-11M、10-7M至10-10M、10-7M至10-9M、10-8M至10-13M、1×10-8M至5×10-13M、10-8M至10-12M、10-8M至10-11M、10-8M至10-10M、10-8M至10-9M、5×10-9M至1×10-13M、5×10-9M至1×10-12M、5×10-9M至1×10-11M、5×10-9M至1×10-10M、10-9M至10-13M、10-9M至10-12M、10-9M至10-11M、10-9M至10-10M、5×10-10M至1×10-13M、5×10-10M至1×10-12M、5×10-10M至1×10-11M、10-10M至10-13M、1×10-10M至5×10-13M、1×10-10M至1×10-12M、1×10-10M至5×10-12M、1×10-10M至1×10-11M、10-11M至10-13M、1×10-11M至5×10-13M、10-11M至10-12M、10-12M至10-13M。在一些实施例中，抗特异性识别Psl的抗原结合域与Psl之间结合的Kd值为10-7M至10-13M。
在一些实施例中，特异性识别Psl的抗原结合域与非靶标之间结合的Kd值高于特异性识别Psl的抗原结合域与靶标的Kd值，并且本文中引用的一些实施例中，特异性识别Psl的抗原结合域与靶标(例如，Psl)的结合亲和力高于特异性识别Psl的抗原结合域与非靶标的结合亲和力。一些实施例中，非靶标是指非Psl抗原。在一些实施例中，特异性识别Psl的抗原结合域与非Psl靶标结合的Kd值是特异性识别Psl的抗原结合域和靶标Psl之间结合的Kd的至少10倍，例如10-100倍、100-1000倍、103-104倍、104-105倍、105-106倍、106-107倍、107-108倍、108-109倍、109-1010倍、1010-1011倍、1011-1012倍。
核酸
编码PcrV结合域或蛋白、Psl结合域或蛋白以及双特异性分子的核酸分子也被考虑在内。在一些实施例中，提供一种(或一组)编码全长抗PcrV抗体或抗Psl抗体的核酸，包括本文所述的任一种全长抗PcrV抗体或抗Psl抗体。在一些实施例中，本文所述的抗原结合域、抗原结合蛋白或双特异性分子的核酸(或一组核酸)还可以包括编码多肽标签的核酸序列(例如蛋白纯化标签，His-标签、HA标签)。
同时本文还考虑了包含抗PcrV抗体、抗Psl抗体或特异性识别假单胞菌PcrV和Psl的双特异性分子的分离的宿主细胞，编码抗PcrV抗体、抗Psl抗体或特异性识别假单胞菌PcrV和Psl的双特异性分子多肽组分的分离的核酸，或者包含编码本文所述的抗PcrV抗体、抗Psl抗体或特异性识别假单胞菌PcrV和Psl的双特异性分子多肽组分的核酸的载体。
本申请还包括这些核酸序列的变体。例如，变体包括至少在中等严格杂交条件下与编码本申请的抗原结合域、抗原结合蛋白或双特异性分子的核酸序列杂交的核苷酸序列。
本申请同时还提供可将本申请中核酸序列插入到其中的载体。
简言之，将编码抗原结合域、抗原结合蛋白或双特异性分子的天然或合成的核酸插入到合适的表达载体中，使得核酸可操作性的连接到5’和3’端调控元件，例如包括启动子(例如淋巴细胞特异性启动子)和3’非翻译区(UTR)，可表达抗原结合域、抗原结合蛋白或双特异性分子。所述载体可适用于在真核宿主细胞中复制和整合。典型的克隆与表达载体包含调控目标核酸序列的表达的转录和翻译终止子、起始序列和启动子。
本申请所述的核酸也可以通过使用标准的基因递送方案，用于核酸免疫和基因治疗。核酸递送方法是本领域已知的。例如参见U.S.Pat.Nos.5,399,346、5,580,859、5,589,466，通过引用其全部内容并入本文。在一些实施例中，本申请还提供基因治疗载体。
可以将核酸克隆到许多类型的载体中。例如，可以将核酸克隆到载体中，所述载体包括，但不限于，质粒、噬菌粒、噬菌体衍生物、动物病毒和柯斯质粒。特别感兴趣的载体包括表达载体、复制载体、探针生成载体和测序载体。
此外，表达载体可以以病毒载体的形式提供给细胞。病毒载体技术是本领域熟知的，并且描述于例如Green and Sambrook(2013,Molecular Cloning:A LaboratoryManual,Cold Spring Harbor Laboratory,New York)，以及其它病毒学或分子生物学手册中。可用作载体的病毒包括，但不限于，逆转录病毒、腺病毒、腺相关病毒、疱疹病毒和慢病毒。通常，合适的载体包括一个在至少一种生物体中起作用的复制起点、启动子序列、方便的限制性内切酶位点以及一个或多个选择标记物(参见例如，WO 01/96584；WO 01/29058；和U.S.Pat.No.6,326,193)。
已经开发了许多基于病毒的系统，用于将基因转移到哺乳动物细胞中。例如，逆转录病毒为基因递送系统提供了便利的平台。可以应用本领域已知的技术，将选择的基因插入载体中并包装在逆转录病毒颗粒中。然后分离重组病毒，在体内或体外递送至受试者的细胞中。许多逆转录病毒系统在本领域中是已知的。在一些实施例中，使用腺病毒载体。许多腺病毒载体在本领域中是已知的。在一些实施例中，使用慢病毒载体。衍生自逆转录病毒的载体，例如慢病毒，是实现长期基因转移的合适工具，因为它们使得转基因长期稳定的整合以及在子代细胞中繁殖。慢病毒载体相对于衍生自肿瘤的逆转录病毒例如小鼠白血病病毒具有额外的优势，因为它们可以转导非分裂细胞，例如肝细胞。同时，其还具有低免疫原性的额外优势。
其它的启动子元件，例如，增强子，调控转录起始频率。通常它们位于起始位点上游30-110bp处，虽然最近发现很多启动子也包含起始位点下游的功能元件。启动子元件之间的间隔通常是灵活的，所以当元件彼此之间位置互换或移动时仍保持启动子的功能。在胸苷激酶(tk)启动子中，启动子元件之间的间隔增加到50bp，活性才会开始下降。
合适启动子的一个示例是即时早期巨细胞病毒(CMV)启动子序列。该启动子序列是一个很强的组成型启动子序列，可以驱动任何与其可操作性连接的多核苷酸序列高水平表达。合适启动子的另一个示例是延伸因子1α(EF-1α)启动子。然而，也可以使用其它组成型启动子，包括但不限于，猿猴病毒40(SV40)早期启动子、小鼠乳腺肿瘤病毒(MMTV)、人免病缺陷病毒长末端重复序列(HIV-LTR)启动子、MoMuLV启动子、禽类白血病病毒启动子、Epstein-Barr病毒即刻早期启动子、劳斯氏肉瘤病毒启动子以及人类基因启动子，例如包括但不限于，肌动蛋白启动子、肌球蛋白启动子、血红蛋白启动子和肌酸激酶启动子。此外，不应将本申请局限在仅使用组成型启动子。诱导型启动子也是本申请考虑的部分。诱导型启动子的使用提供了一种分子开关，当需要这种表达时，能启动其与之可操作性连接的多核苷酸序列表达，当不需要时，则关闭表达。诱导型启动子，包含但不局限于，金属硫蛋白启动子、糖皮质激素启动子、孕酮启动子和四环素启动子。
在一些实施例中，抗原结合域、抗原结合蛋白或双特异性分子的表达是可诱导的。在一些实施例中，编码抗原结合域、抗原结合蛋白或双特异性分子的核酸序列可操作的连接到诱导型启动子上，包括本文所述的任一诱导型启动子。
诱导型启动子
诱导型启动子的使用提供了一种分子开关，当需要表达时，可启动与之可操作性连接的多核苷酸序列表达，而在不需要表达时，则关闭表达。真核细胞中适用的示例性诱导型启动子，包括但不限于，激素调节元件(例如，参见Mader,S.and White,J.H.(1993)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90:5603-5607)、合成配体调节元件(参见Spencer,D.M.et al(1993)Science 262:1019-1024)以及电离辐射调控元件(参见Manome,Y.et al.(1993)Biochemistry 32:10607-10613；Datta,R.et al.(1992)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 89:1014-10153)。其它适用于体内或体外哺乳动物系统的示例性诱导型启动子参见Gingrichet al.(1998)Annual Rev.Neurosci21:377-405。在一些实施例中，用于表达抗原结合域、抗原结合蛋白或双特异性分子的诱导型启动子系统为Tet系统。在一些实施例中，表达抗原结合域、抗原结合蛋白或双特异性分子的诱导型启动子系统为大肠杆菌lac抑制系统。
本申请所采用的一个示例性诱导型启动子系统为Tet系统。该系统是基于Gossen等(1993)描述的Tet系统。在一个示例性实施例中，目标多核苷酸由包含一个或多个Tet操纵子(TetO)位点的启动子控制。在非激活状态，Tet阻遏物(TetR)与TetO位点结合并抑制启动子的转录。在激活状态，例如，在存在诱导剂如四环素(Tc)、无水四环素、多西环素(Dox)或其活性类似物的情况下，诱导剂会使TetR从TetO上释放，从而导致转录发生。多西环素是四环素抗生素家族中的一员，其化学名为1-二甲氨基-2,4a,5,7-五羟基-11-甲基-4,6-二氧基-1,4a,11,11a,12,12a-六氢四烯-3-甲酰胺。
在一个实施例中，TetR经密码子优化适用于在哺乳动物细胞中表达，例如小鼠或人类细胞。由于遗传密码的简并性，大多数氨基酸由不止一个密码子编码，从而使得给定核酸的序列具有大量的变体，而其编码的氨基酸序列没有任何改变。然而，许多生物体在密码子使用方面存在差异，也称为“密码子偏好”(即，给定氨基酸使用特定密码子的偏好)。密码子偏好通常与特定密码子的优势tRNA种类的存在有关，反过来又提高了mRNA翻译的效率。因此可以通过密码子优化来定制源自特定物种的编码序列(例如，原核生物)，以提高其在不同物种(例如，真核生物)中的表达。
Tet系统的其它具体变体，包括以下的“Tet-Off”和“Tet-On”系统。在Tet-off系统中，转录在Tc或Dox存在下是失活的。在该系统中，由TetR与单纯疱疹病毒VP16强转录激活结构域融合组成的四环素调控的转录激活蛋白(tTA)，在四环素反应启动子元件(TRE)转录控制下调控靶核酸的表达。TRE元件由TetO序列串联与启动子(通常是来源于人巨细胞病毒即刻早期启动子的最小启动子序列)融合组成。在不存在Tc或Dox的情况下，tTA结合TRE并激活靶基因的转录。在存在Tc或Dox的情况下，tTA不能结合TRE，靶基因不能表达。
相反，在Tet-On系统中，转录在Tc或Dox存在下是激活的。Tet-On系统是基于反向四环素调控的转录激活因子rtTA。与tTA一样，rtTA是由TetR阻遏物与VP16反式激活域组成的融合蛋白。然而，TetR的DNA结合区中4个氨基酸的变化改变了rtTA的结合特性，使其在存在Dox的情况下只能识别靶转基因TRE上的tetO序列。所以在Tet-On系统中，只有在存在Dox的情况下，rtTA才能激活TRE调控的靶基因的转录。
另一种诱导型启动子系统是大肠杆菌的lac阻遏物系统(参见Brown et al.,Cell49:603-612(1987))。Lac阻遏物系统通过调控与包含lac操纵子(lacO)的启动子可操作性连接的目标多核苷酸的转录发挥功能。Lac阻遏物(lacR)与LacO结合，进而阻止目标多核苷酸的转录。通过合适的诱导剂来诱导目标多核苷酸的表达，例如，异丙基-β-D硫代半乳糖吡喃苷(IPTG)。
为了评估多肽或其部分的表达，待导入细胞的表达载体还可包含选择标记基因或报告基因或二者都有，以便于从病毒载体转染或感染的细胞群体中识别和选择表达细胞。在其他方面，选择标记可以携带在单独的DNA片段上并在共转染实验中使用。选择标记基因或报告基因都可侧接于合适的调控序列，使其在宿主细胞中能够表达。有用的选择标记包括，例如，抗生素耐药基因，如neo以及类似基因。
报告基因可用于鉴定潜在的转染细胞和评价调控序列的功能。通常，报告基因是不存在于受体生物体或组织中或不由受体生物体或组织表达的基因，其编码一种多肽，其表达表现为一些易于检测的特性，例如酶活性。当DNA导入受体细胞后，在合适的时间检测报告基因的表达。合适的报告基因可包括编码荧光素酶、β-半乳糖苷酶、氯霉素乙酰转移酶、分泌碱性磷酸酶或绿色荧光蛋白的基因(e.g.,Ui-Tel et al.,2000FEBS Letters479:79-82)。合适的表达系统是公知的，可以通过已知的技术制备或通过商业途径获得。通常，把具有能够显示报告基因最高表达水平的最小5'侧翼区的构建体认定为启动子。此类启动子区可以与报告基因连接，并用于评估某些物质在调节启动子驱动的转录中能力。
在一些实施例中，提供编码本文所述的任一种抗原结合域、抗原结合蛋白或双特异性分子的核酸。在一些实施例中，所述核酸包括编码抗原结合域、抗原结合蛋白或双特异性分子重链和轻链的一个或多个核酸序列。在一些实施例中，所述一个或多个核酸序列中的每一个包含在单独的载体中。在一些实施例中，至少有一些核酸序列包含在同一载体中。在一些实施例中，所有核酸序列包含在同一载体中。载体可以选自，例如，哺乳动物表达载体和病毒载体(如源自逆转录病毒、腺病毒、腺相关病毒、疱疹病毒和慢病毒的载体)。
将基因导入细胞并表达的方法在本领域是已知的。在涉及表达载体的上下文中，通过本领域的任何方法载体可以很容易地导入宿主细胞中，如哺乳动物细胞、细菌、酵母或昆虫细胞。例如表达载体可以通过物理、化学或生物方法导入宿主细胞。
将多核苷酸导入宿主细胞的物理方法包括磷酸钙沉淀、脂质体转染、基因枪法、显微注射、电穿孔法以及诸如此类。制备包含载体和/或外源核酸的细胞的方法在本领域是熟知的。参见例如Green and Sambrook(2013,Molecular Cloning:A Laboratory Manual,Cold Spring Harbor Laboratory,New York)。在一些实施例中，通过磷酸钙转染法将多核苷酸导入宿主细胞。
将目标多核苷酸导入宿主细胞的生物学方法包括使用DNA和RNA载体。病毒载体，特别是逆转录病毒载体，已成为将基因插入哺乳动物细胞，例如人类细胞中的最广泛使用的方法。其它病毒载体可以源自慢病毒、痘病毒、单纯疱疹病毒1型、腺病毒和腺相关病毒等。参见如U.S.Pat.Nos.5,350,674和5,585,362。
将多核苷酸导入宿主细胞的化学方法包括胶体分散系统，例如高分子复合物、纳米胶囊、微球、磁珠和以脂质为基础的系统，其包括水包油乳剂、胶团、混合胶团和脂质体。一种在体内和体外被用作递送载体的示例性胶体系统是脂质体(例如，人工膜囊)。
在使用非病毒递送系统的情况下，示例性的递送载体是脂质体。考虑使用脂质制剂将核酸导入宿主细胞(体外、离体或体内)。在另一方面，所述核酸可以与脂质结合。与脂质结合的核酸可被包裹进脂质体的水性内部，散布在脂质体的脂质双层内，通过与脂质体和寡核苷酸结合的连接分子连接在脂质体，包埋在脂质体中，与脂质体形成复合物，分散在含有脂质的溶液中，与脂质混合，与脂质结合，悬浮在脂质中，包含在胶束中或与胶束混合，或以其它方式与脂质结合。脂质、脂质/DNA或脂质/表达载体相关的组合物在溶液中不限于任何特定结构。例如，它们可能以双分子层结构、以胶束或以“塌陷”结构存在。它们也可以简单的分散在溶液中，可能形成大小或形状不均匀的聚集体。脂质是脂肪物质，可以是天然存在的或是合成的脂质。例如，脂质包括天然存在于细胞质中的脂肪滴，以及含有长链脂肪烃及其衍生物的一类化合物，例如脂肪酸、醇、胺、氨基醇和醛。
无论采用何种方法将外源核酸导入宿主细胞中或以其他方式将细胞暴露于本申请的抑制剂中，为了确认重组DNA序列存在于宿主细胞中，可以进行多种实验。这类实验包括例如本领域技术人员熟知的“分子生物学”实验。例如Southern和Northern blotting，RT-PCR和PCR；“生物化学”实验，例如检测某一特定多肽是否存在或不存在，例如通过免疫学方法(ELISAs和Western blots)或者通过本文所述的实验来进行鉴定均落入本申请范围内。
抗原结合蛋白和双特异性分子的制备
在一些实施例中，所述抗原结合蛋白(例如，特异性识别PcrV或Psl的抗原结合蛋白)是单克隆抗体。在一些实施例中，所述抗原结合蛋白或双特异性分子是源于单克隆抗体。在一些实施例中，所述抗原结合蛋白或双特异性分子包括来自单克隆抗体的VH和VL，或者其变体。在一些实施例中，所述，所述抗原结合蛋白或双特异性分子进一步包括来自单克隆抗体的CH1和CL区域，或者其变体。单克隆抗体可以应用例如本领域已知的方法制备，包括杂交瘤细胞法、酵母展示、噬菌体展示方法或应用重组DNA法。此外，示例性的酵母展示和噬菌体展示法在本文及以下的实施例中进行了描述。
在杂交瘤细胞法中，通常用免疫剂免疫仓鼠、小鼠或其他适合的宿主动物，以引发产生或能够产生与免疫剂特异性结合的抗体的淋巴细胞。或者，可以在体外免疫淋巴细胞。免疫剂可包括目标蛋白的多肽或融合蛋白。通常，如果需要人源细胞，采用外周血淋巴细胞(PBLs)，而如果需要非人哺乳动物来源细胞，则会使用脾细胞或淋巴结细胞。使用适当的融合剂将淋巴细胞与永生细胞系进行融合，例如聚乙二醇，以形成杂交瘤细胞。永生细胞系通常是转化的哺乳动物细胞，尤其是啮齿类、牛科和人源的骨髓瘤细胞。通常使用大鼠或小鼠骨髓瘤细胞系。杂交瘤细胞可以在合适的培养基中进行培养，所述培养基优选含有一种或多种抑制未融合永生细胞生长或存活的物质。例如，如果亲本细胞缺乏次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(HGPRT或HPRT)，则杂交瘤细胞培养基通常包括次黄嘌呤、氨蝶呤和胸苷(HAT培养基)，该培养基能阻止HGPRT缺陷细胞生长。
在一些实施例中，永生化细胞系有效融合，通过所选择的抗体生产细胞保证抗体高水平稳定表达，并且对某些培养基敏感，例如HAT培养基。在一些实施例中，永生细胞系是小鼠骨髓瘤细胞系，可以从例如，加利福尼亚圣地亚哥的索尔克细胞保藏中心和弗吉尼亚马纳萨斯的美国典型培养物保藏中心获得。同时还描述了人骨髓瘤和鼠-人杂交骨髓瘤细胞系用于制备人源单克隆抗体。
然后可以测定培养杂交瘤细胞的培养基中是否存在针对多肽的单克隆抗体。由杂交瘤细胞产生的单克隆抗体的结合特异性可以通过免疫沉淀法或体外结合实验确定，如放射性免疫测定法(RIA)或酶联免疫吸附法(ELISA)。此类技术或分析方法在本领域是已知的。单克隆抗体的结合亲和力可以通过例如Munson and Pollard,Anal.Biochem.,107:220(1980)中所述的斯卡查德(Scatchard)分析确定。
在鉴定出所需的杂交瘤细胞后，可以通过有限稀释法对目标克隆进行亚克隆，并通过标准方法进行培养。基于此目的适合的培养基包括，例如改良Eagle培养基(DMEM)和RPMI-1640培养基。或者，杂交瘤细胞可以在哺乳动物体内以腹水的形式生长。
亚克隆分泌的单克隆抗体可以通过常规免疫球蛋白纯化方法从培养基或腹水中分离或纯化，例如蛋白A-琼脂糖凝胶、羟基磷灰石色谱层析、凝胶电泳、透析或亲和层析。
在一些实施例中，根据本文所述的任一抗原结合蛋白或双特异性分子，所述抗原结合蛋白或双特异性分子包含选自抗体文库(例如展示scFv或Fab片段的噬菌体文库)的克隆的序列。所述克隆可以通过筛选具有所需活性的抗体片段组合文库的方法进行鉴定。例如，本领域已知多种方法用于产生噬菌体展示文库以及筛选这些文库来获得所需结合特性的抗体。这些方法在例如Hoogenboom et al.,Methods in Molecular Biology 178:1-37(O'Brien et al.,ed.,Human Press,Totowa,N.J.,2001)中进行了综述，并且在例如McCafferty et al.,Nature 348:552-554；Clackson et al.,Nature 352:624-628(1991)；Marks et al.,J.Mol.Biol.222:581-597(1992)；Marks and Bradbury,Methodsin Molecular Biology 248:161-175(Lo,ed.,Human Press,Totowa,N.J.,2003)；Sidhuet al.,J.Mol.Biol.338(2):299-310(2004)；Lee et al.,J.Mol.Biol.340(5):1073-1093(2004)；Fellouse,Proc.Natl.Acad.Sci.USA101(34):12467-12472(2004)；and Lee etal.,J.Immunol.Methods 284(1-2):119-132(2004)中进行了进一步描述。
在某些噬菌体展示方法中，通过聚合酶链式反应(PCR)分别克隆VH和VL基因的所有组成成分，并在噬菌体文库中随机重组，然后筛选能够结合抗原的噬菌体，如Winter etal.,Ann.Rev.Immunol.,12:433-455(1994)中所述。噬菌体通常以scFv片段或以Fab片段形式展示抗体片段。免疫来源的文库噬菌体提供针对免疫原的高亲和力抗体而不需要构建杂交瘤细胞。或者，可以克隆天然库(例如来自人)，来提供针对多种非自身抗原和自身抗原的单一抗体来源，而不需任何免疫，如Griffiths et al.,EMBO J,12:725-734(1993)中所述。最后，天然文库也可以通过克隆来自干细胞的非重排V-gene片段，并使用包含随机序列的PCR引物编码CDR3高变区并且在体外完成重排的方法进行制备，如Hoogenboom andWinter,J.Mol.Biol.,227:381-388(1992)中所述。描述人抗体噬菌体文库的专利出版物包括，例如U.S.Pat.No.5,750,373、和US Patent Publication Nos.2005/0079574、2005/0119455、2005/0266000、2007/0117126、2007/0160598、2007/0237764、2007/0292936和2009/0002360。
通过噬菌体展示筛选文库中能够特异性结合靶标(例如，PcrV或Psl)的抗原结合部分的方法来制备所述的抗原结合蛋白或双特异性分子。该文库可以是人scFv噬菌体展示文库，具有至少1×109(例如至少1×109、2.5×109、5×109、7.5×109、1×1010、2.5×1010、5×1010、7.5×1010或1×1011)种多样性的独特的人抗体片段。在一些实施例中，所述文库是人天然文库，通过从健康受试者的PMBCs和脾脏中提取的DNA构建，包含所有人重链和轻链亚家族。在一些实施例中，所述文库是人天然文库，通过从各种疾病患者体内分离的PMBCs中提取的DNA构建，例如自身免疫病的患者、癌症患者和感染性疾病的患者。在一些实施例中，所述文库是半合成的人文库，其中重链CDR3完全是随机的，所有氨基酸(除了半胱氨酸)以相同的概率存在于任何给定的位置。(参见，例如，Hoet,R.M.et al.,Nat.Biotechnol.23(3):344-348,2005)。在一些实施例中，半合成的人文库的重链CDR3长度在5到24个(例如5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23或24个)氨基酸之间。在一些实施例中，所述文库是全合成的噬菌体展示文库。在一些实施例中，所述文库是非人噬菌体展示文库。
对靶标抗原(例如，PcrV或Psl)具有高亲和力的噬菌体克隆可以通过噬菌体与靶标抗原的迭代结合进行筛选，所述靶标抗原与固相支持物结合(例如用于溶液淘选的珠子或用于细胞淘选的哺乳动物细胞)，接下来去除未结合的噬菌体，并洗脱特异性结合噬菌体。随后，洗脱结合的噬菌体克隆并用于感染合适的宿主细胞，例如E.coli XL1-Blue，进行表达和纯化。可以通过多轮淘选(例如，2、3、4、5、6或更多轮)，例如溶液淘选、细胞淘选或两者结合以富集特异性结合靶标抗原的噬菌体克隆。富集的噬菌体克隆与靶标抗原的特异性结合可以通过本领域已知的任何方法进行检测，包括例如ELISA和FACS。
单克隆抗体也可以通过重组DNA方法进行制备，例如U.S.Patent No.4，816,567中所述。编码本申请中所述单克隆抗体的DNA可以通过常规方法(例如通过能特异性结合编码鼠源抗体轻链和重链基因的寡聚核苷酸探针)轻易的分离和测序。如上所述的杂交瘤细胞或本申请的抗原特异性噬菌体克隆可以作为这种DNA的来源。分离后，可将DNA置于表达载体中，然后该载体转染入宿主细胞，例如猿猴COS细胞、中华仓鼠卵巢癌(CHO)细胞或不产生免疫球蛋白的骨髓瘤细胞中，获得在重组宿主细胞中合成的单克隆抗体。所述DNA也可以被修饰，例如用人类重链和轻链恒定结构和/或框架区域的编码序列代替同源的非人类序列(美国专利号4,816,567；Morrison et al.，同上)，或者将非免疫球蛋白多肽的全部或部分编码序列共价连接到免疫球蛋白编码序列上。这种非免疫球蛋白多肽可以取代本申请中抗体的恒定区，或可以取代本申请中抗体可变域中的一个抗原结合位点，形成嵌合的二价抗体。在一些实施例中，针对不同表位或抗原的额外的可变域可以被包括进来以产生嵌合的双特异性抗体。
所述抗体可以是单价抗体。制备单价抗体的方法是本领域已知的。例如，一种涉及免疫球蛋白轻链和修饰重链的重组表达方法。通常在Fc区的任意位置截短重链，以阻止重链相互交联。或者，相关的半胱氨酸残基被其它氨基酸残基取代或被缺失以防止交联。
体外方法也适用于制备单价抗体。消化抗体产生抗体片段，特别是Fab片段，可以使用任何本领域已知的方法完成。
具有所需结合特异性(抗体-抗原结合位点)的抗体可变域可以与免疫球蛋白恒定区融合。优选与免疫球蛋白重链恒定区进行融合，其包括至少部分铰链，CH2和CH3区。在一些实施例中，包含轻链结合必要位点的第一重链恒定区(CH1)至少出现在一种融合体中。编码免疫球蛋白重链融合体的DNA，如果需要，还可以包括编码免疫球蛋白轻链的DNA，被插入进独立的表达载体中，并共转染至合适的宿主生物中。在一些实施例中，针对不同抗原表位或不同抗原的抗体可变域可与免疫球蛋白恒定域序列融合以产生嵌合的双特异性分子。
全人和人源化抗体
所述抗原结合蛋白或双特异性分子可以是人源化抗体或全人抗体。非人(如小鼠)抗体部分的人源化形式是嵌合的免疫球蛋白、免疫球蛋白链或其片段(例如Fv、Fab、Fab’、F(ab’)2、scFv或抗体的其他抗原结合子序列)，其通常包括最少的源于非人免疫球蛋白的序列。人源化抗体包括人免疫球蛋白、免疫球蛋白链或其片段(受体抗体)，其中受体CDR的残基被具有所需特异性、亲和力和性能的非人源(供体抗体)CDR残基取代，例如小鼠、大鼠或兔子的CDR。在一些实施例中，人免疫球蛋白Fv框架区残基被相应的非人源残基取代。人源化抗体还可以包含既不属于受体抗体也不在引入的CDR或框架区序列中的氨基酸残基。通常，人源化抗体包含至少一个，通常两个可变域，其中全部或基本上全部CDR区对应于非人免疫球蛋白的CDR区，全部或基本上全部框架区是人免疫球蛋白共有序列。
通常，人源化抗体含有一个或多个从非人源引入的氨基酸残基。那些非人源氨基酸残基通常被称为“移入”残基，通常来自“移入”可变域。根据一些实施例，人源化基本上可以按照Winter和其同事的如下方法进行(Jones et al.,Nature,321:522-525(1986)；Riechmann et al.,Nature,332:323-327(1988)；Verhoeyen et al.,Science,239:1534-1536(1988))，通过用啮齿动物CDRs或CDR序列取代人源抗体的相应序列。因此，这种“人源化”抗体部分(U.S.Patent No.4,816,567)，其基本上少于完整的人源抗体，其可变域已被来自非人源的相应序列所取代。在实际中，人源化抗体部分是典型的人源抗体部分，其中一些CDR残基和可能的一些框架区残基被来自啮齿类抗体中类似位点的残基所取代。
产生人抗体部分是人源化的一种替代方式。例如，目前可以制备在免疫后能够产生完整的全人抗体文库而不产生内源性免疫球蛋白的转基因动物(例如，小鼠)。例如，已有报道，嵌合和种系突变小鼠中抗体重链连接区(JH)基因的纯合子缺失，完全抑制了内源性抗体的产生。将人种系免疫球蛋白基因阵列转移到这种种系突变小鼠体内，可在抗原刺激下产生全人抗体，参见，例如akobovits et al.,PNAS USA,90:2551(1993)；Jakobovits etal.,Nature,362:255-258(1993)；Bruggemann et al.,Year in Immunol.,7:33(1993)；U.S.Patent Nos.5,545,806,5,569,825,5,591,669；5,545,807；和WO 97/17852。或者，可以通过将人类免疫球蛋白基因座引入转基因动物中(例如内源性免疫球蛋白基因已经被部分或全部沉默的小鼠)来制备全人抗体。抗原刺激后，可以发现全人抗体的产生在各个方面都与其在人类中的产生非常相似，包括基因重排、组装和抗体文库。这种方法在例如U.S.Patent Nos.5,545,807；5,545,806；5,569,825；5,625,126；5,633,425；and 5,661,016,and Marks et al.,Bio/Technology,10:779-783(1992)；Lonberg et al.,Nature,368:856-859(1994)；Morrison,Nature,368:812-813(1994)；Fishwild et al.,NatureBiotechnology,14:845-851(1996)；Neuberger,Nature Biotechnology,14:826(1996)；Lonberg and Huszar,Intern.Rev.Immunol.,13:65-93(1995)中进行了描述。
人抗体或人抗体部分也以通过体外活化B细胞(见U.S.Patents 5,567,610和5,229,275)或通过使用本领域已知的各种技术来产生，包括噬菌体展示文库。Hoogenboomand Winter,J.Mol.Biol.,227:381(1991)；Marks et al.,J.Mol.Biol.,222:581(1991).Cole et al.和Boerner et al.等人的技术也可以用于制备全人单克隆抗体。见Cole etal.,Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy,Alan R.Liss,p.77(1985)andBoerner et al.,J.Immunol.,147(1):86-95(1991)。
抗PcrV抗体、抗Psl抗体或特异性识别假单胞菌PcrV和假单胞菌Psl的双特异性抗体的变体
在一些实施例中，本文提供的抗原结合域或抗原结合蛋白变体(例如，特异性识别PcrV或Psl的抗体部分，或特异性识别假单胞菌PcrV和Psl的双特异性抗体)的氨基酸序列也在考虑中。例如，可能需要改善抗原结合域或抗原结合蛋白的结合亲和力和/或其它生物学活性。抗原结合实体变体的氨基酸序列可以通过在编码抗原结合实体的核苷酸序列中引入适当的修饰或通过肽合成来制备。此类修饰包括例如，抗原结合实体氨基酸序列中残基的缺失和/或插入和/或取代。可以通过氨基酸残基缺失、插入和取代的任一组合来完成最终的构建，使其具有所需的特征。例如，抗原结合性。
在一些实施例中，提供具有一个或多个氨基酸取代的抗原结合域或抗原结合蛋白变体。取代突变的目标位点包括高变区(HVRs)和框架区(FRs)。可以在目标抗体中引入氨基酸取代，筛选所需活性的产物，例如，改善的生物活性，保持/改善抗原结合能力，降低的免疫原性，减少的病原菌结合或改善对病原菌的调理吞噬杀伤(OPK)，例如，铜绿假单胞菌。在一些实施例中，本文所述的氨基酸取代仅限于本申请表7中的“示例性取代”。在一些实施例中，所述氨基酸取代仅限于本申请表7中的“优选取代”。
保守取代如下表7所示。
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根据侧链性质将氨基酸分为不同类别：
疏水氨基酸：去甲亮氨酸Norleucine、蛋氨酸Met、丙氨酸Ala、缬氨酸Val、亮氨酸Leu、异亮氨酸Ile；
b.中性亲水性氨基酸：半胱氨酸Cys、丝氨酸Ser、苏氨酸Thr、天冬酰胺Asn、谷氨酰胺Gln；
c.酸性氨基酸：天冬氨酸Asp、谷氨酸Glu；
d.碱性氨基酸：组氨酸His、赖氨酸Lys、精氨酸Arg；
e.影响链方向的氨基酸：甘氨酸Gly、脯氨酸Pro；
f.芳香族氨基酸：色氨酸Trp、酪氨酸Tyr、苯丙氨酸Phe。
非保守氨基酸的取代包含将以上一种类别取代为另一种类别。
一种示例性的取代变体是亲和力成熟的抗体，可采用例如以噬菌体展示为基础的亲和力成熟技术而方便地产生。简言之，将一个或多个CDR残基进行突变，变体抗体部分展示在噬菌体上，并筛选具有特定生物活性(例如，基于RBC细胞裂解抑制实验或结合亲和力)的变体。可以在HVRs区进行改变(例如，取代)来获得改善的基于RBC裂解抑制实验或抗体亲和力。可以在HVR的“热点区”产生改变，即在体细胞成熟过程中发生高频突变的密码子编码的残基(参见，例如Chowdhury,Methods Mol.Biol.207:179-196(2008))，和/或在特异的决定性残基(SDRs)，检测所得变体VH和VL的结合亲和力。从二级文库中构建和重新选择亲和力成熟的方法已经在一些文献中进行描述，例如，Hoogenboom et al.in Methods inMolecular Biology 178:1-37(O'Brien et al.,ed.,Human Press,Totowa,NJ,(2001))。
在一些亲和力成熟的实施例中，通过多种方法中的任一种(例如易错PCR，链改组或寡核苷酸定向突变)，将多样性引入选择的用于亲和力成熟的可变基因中。然后创建二级文库。对该文库进行筛选，鉴定出具有所需亲和力的抗体变体。另一种引入多样性的方法包括HVR介导的方式，其中几个HVR残基(例如，一次4-6个残基)被随机化。涉及抗原结合的HVR残基被特异性地识别，例如，采用丙氨酸扫描诱变或建模。通常CDR-H3和CDR-L3区域尤其是重点靶标。
在一些实施例中，取代、插入或缺失可能发生在一个或多个HVRs内，只要这种改变基本上不降低抗体结合抗原的能力。例如，可以在HVRs中产生基本上不降低结合亲和力的保守性改变(例如，本文中提供的保守性取代)。这些改变可能发生在HVR“热点区”或SDRs区域之外。在一些实施例中上文提供的变体VH和VL序列，每一个HVR或者是未发生改变，或者包含不超过1个、2个或3个氨基酸取代。
一种有用的可以鉴定出抗体中能被靶向性突变的氨基酸残基或区域的方法称为“丙氨酸扫描突变”，如Cunningham and Wells(1989)Science,244:1081-1085中所述。在该方法中，一个或一组目标残基(例如，带电残基如精氨酸、天冬氨酸、组氨酸、赖氨酸和谷氨酸)被中性或带负电荷氨基酸(例如，丙氨酸或谷氨酸)取代，以此来确定抗体与抗原相互作用是否受到影响。可以在氨基酸的位置进一步引入取代，来证明该位置对初始取代具有功能敏感性。或者/另外，通过抗原-抗体复合物的晶体结构来鉴定抗体和抗原之间的接触位点。这些接触位点残基和邻近残基可作为取代候选物而被靶向或消除。筛选变体，确定它们是否具有所需要的性质。
氨基酸序列的插入，包括在氨基端和/或羧基末端的融合，长度范围从1个残基到包含100个或更多个残基的多肽，还包括在序列内插入1个或多个氨基酸残基。末端插入的例子包括N末端具有甲硫氨酰残基的抗原结合部分。抗原结合部分的其它插入变体，包括在抗原结合部分N-末端或C-末端融合一个酶(例如，ADEPT)或增加抗原结合部分血清半衰期的多肽。
Fc区变体
在一些实施例中，将一个或多个氨基酸修饰引入本文所述的抗原结合部分(例如，全长抗PcrV抗体、抗Psl抗体、特异性识别假单胞菌PcrV和Psl的双特异性抗体，抗PcrV抗体、抗Psl抗体或特异性识别假单胞菌PcrV和Psl的双特异性分子的融合蛋白)的Fc区，从而产生Fc区变体。在一些实施例中，Fc区变体具有增强的ADCC效能，通常与结合Fc的受体(FcRs)有关。在一些实施例中，Fc区变体具有降低的ADCC效能。有很多关于Fc序列的改变或突变影响其效能的例子，例如，WO 00/42072和Shields et al.J Biol.Chem.9(2):6591-6604(2001)描述了与FcRs的结合增强或减弱的抗体变体。这些出版物的内容通过引用并入本文。
抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用(ADCC)是治疗性抗体针对肿瘤细胞的作用机制。ADCC是细胞介导的免疫防御，当靶细胞膜表面的抗原被特异性抗原结合部分(例如，抗PcrV抗体、抗Psl抗体或特异性识别假单胞菌PcrV和Psl的双特异性抗体)结合，免疫系统的效应细胞主动裂解靶细胞(例如，感染的细胞)。通常ADCC效应涉及由抗体激活的NK细胞。NK细胞表达Fc受体CD16。该受体识别并结合与靶细胞表面相结合的抗体分子的Fc部分。NK细胞表面最常见的Fc受体为CD16或FcγRIII。Fc受体与抗体Fc区的结合导致NK细胞的活化，细胞裂解颗粒的释放，及随后靶细胞的凋亡。
在一些实施例中，本申请还提供抗PcrV抗体、抗Psl抗体或特异性识别假单胞菌PcrV和Psl的双特异性抗体变体(例如全长抗PcrV抗体、抗Psl抗体或特异性识别假单胞菌PcrV和Psl的双特异性抗体的变体)，其包含具有一种或多种效应功能的Fc区，这使得它成为一个理想的申请候选抗体，在抗PcrV抗体、抗Psl抗体或特异性识别假单胞菌PcrV和Psl的双特异性抗体的半衰期体内是重要的，但某些效应功能(如CDC和ADCC)是不必要或有害的。通过进行体外和/或体内的细胞毒性试验，来确认CDC和/或ADCC活性的降低/消除。例如，可以进行Fc受体(FcR)结合实验来确认抗体缺乏FcγR结合(因此可能缺乏ADCC活性)，但是保留FcRn结合能力。介导ADCC的主要细胞中，NK细胞仅表达FcγRIII，而单核细胞表达FcγRI、FcγRII和FcγRIII。Ravetch and Kinet Annu.Rev.Immunol.9:457-492(1991)第464页的表3中总结了FcR在造血细胞上的表达。在体外评估目标分子的ADCC活性的非限制性实例在U.S.Pat.No.5,500,362中进行了描述(参见例如Hellstrom,I.et al.Proc.Nat'lAcad.Sci.USA 83:7059-7063(1986))and Hellstrom,I et al.,Proc.Nat'lAcad.Sci.USA 82:1499-1502(1985)；U.S.Pat.No.5,821,337(see Bruggemann,M.et al.,J.Exp.Med.166:1351-1361(1987))。或者，可以采用非放射性检测方法(参见，例如ACTITM流式细胞术非放射性细胞毒性检测(CellTechnology,Inc.Mountain View,Calif.)和CYTOTOX 96TM非放射性细胞毒性检测(Promega,Madison,Wis.))。此类检测实验采用的效应细胞包括外周血单核细胞(PBMC)和自然杀伤细胞(NK)。或者，另外地，目标分子的ADCC活性在体内进行检测，例如，在动物模型中，如Clynes et al.Proc.Nat'l Acad.Sci.USA 95:652-656(1998)中所述。同时还可以进行C1q结合试验来确认抗体不能与C1q结合，从而缺乏CDC活性。参见，例如WO2006/029879和WO 2005/100402中C1q和C3c结合ELISA。为了评估补体激活情况，可进行CDC检测(参见，例如Gazzano-Santoro et al.,J.Immunol.Methods202:163(1996)；Cragg,M.S.et al.,Blood 101:1045-1052(2003)；和Cragg,M.S.andM.J.Glennie,Blood 103:2738-2743(2004))。使用本领域已知的方法来测定FcRn结合和体内清除/半衰期(参见，例如，Petkova,S.B.et al.,Int'l.Immunol.18(12):1759-1769(2006))。
具有降低的效应功能的抗体，包括在Fc区残基238、265、269、270、297、327和329位进行一个或多个残基的取代(U.S.Pat.No.6,737,056)。这些Fc变体包括在265、269、270、297和327位进行两个或多个残基的取代的Fc变体，包括被称为“DANA”的Fc变体，其在265和297位残基取代为丙氨酸(U.S.Pat.No.7,332,581)。
这类与FcRs结合能力提高或降低的抗体变体已有描述(参见例如U.S.Pat.No.6,737,056；WO 2004/056312,和Shields et al.,J.Biol.Chem.9(2):6591-6604(2001))。
在一些实施例中，Fc区的改变导致调理作用的改变(即增强或减弱)，参见Mooreet al.,MAbs.2(2):181–189(2010)中所述。
在一些实施例中，提供一种抗PcrV抗体、抗Psl抗体或特异性识别假单胞菌PcrV和Psl的双特异性抗体(例如全长的抗PcrV抗体、抗Psl抗体或特异性识别假单胞菌PcrV和Psl的双特异性抗体)变体，其包含具有一个或多个氨基酸取代的Fc区变体，能够延长半衰期和/或增强与Fc受体(FcRn)的结合。具有延长半衰期和改善FcRn结合的抗体在US2005/0014934A1(Hinton等)中有所描述。这些抗体Fc区包含一个或多个氨基酸取代，增强了Fc区与FcRn的结合。这些Fc变体在Fc区包含238、256、265、272、286、303、305、307、311、312、317、340、356、360、362、376、378、380、382、413、424或434位的残基中的一个或多个取代，例如Fc区434位残基的取代(U.S.Pat.No.7,371,826)。
同时参见Duncan&Winter,Nature 322:738-40(1988)；U.S.Pat.No.5,648,260；U.S.Pat.No.5,624,821和WO 94/29351中提供其它Fc区变体的例子。
本申请考虑了包括本文所述的任一种Fc变体或其组合的抗PcrV抗体、抗Psl抗体或特异性识别假单胞菌PcrV和Psl的双特异性抗体(例如全长抗PcrV抗体、抗Psl抗体或特异性识别假单胞菌PcrV和Psl的双特异性抗体)。
糖基化变体
在一些实施例中，对本文所提供的抗PcrV抗体、抗Psl抗体或特异性识别假单胞菌PcrV和Psl的双特异性抗体(例如全长抗PcrV抗体、抗Psl抗体或特异性识别假单胞菌PcrV和Psl的双特异性抗体)进行改变，以增加或降低抗PcrV抗体、抗Psl抗体或特异性识别假单胞菌PcrV和Psl的双特异性抗体糖基化的程度。通过改变抗PcrV抗体、抗Psl抗体或特异性识别假单胞菌PcrV和Psl的双特异性抗体或其多肽部分的氨基酸序列以此来增加或去除一个或多个糖基化位点，可以方便地实现添加或删除抗PcrV抗体、抗Psl抗体或特异性识别假单胞菌PcrV和Psl的双特异性抗体上的糖基化位点。
其中抗PcrV抗体、抗Psl抗体或特异性识别假单胞菌PcrV和Psl的双特异性抗体包含Fc区，可以改变与其连接的糖。由哺乳动物细胞产生的天然抗体通常包含分支的双触角寡糖，该寡糖通常通过N-连接与Fc区CH2结构域Asn297连接，参见例如Wright et al.，TIBTECH 15:26-32(1997)。所述寡糖可包含多种糖类，例如甘露糖、N-乙酰氨基葡萄糖苷(GlcNAc)、半乳糖和唾液酸，以及与双触角寡糖结构“茎”部的GlcNAc相连接的海藻糖。在一些实施例中，可对本申请的抗PcrV抗体、抗Psl抗体或特异性识别假单胞菌PcrV和Psl的双特异性抗体进行寡糖修饰，从而产生具有某些改进特性的抗PcrV抗体、抗Psl抗体或特异性识别假单胞菌PcrV和Psl的双特异性抗体变体。
与Fc区的CH2结构域连接的N-聚糖是异质的。CHO细胞中产生的抗体或Fc融合蛋白通过岩藻糖基转移酶活性被岩藻糖基化，参见Shoji-Hosaka et al.,J.Biochem.2006,140:777-83。通常，可以在人血清中检测出一小部分天然存在的非岩藻糖基化IgGs。Fc区的N-糖基化对于其与Fc R结合很重要；而非岩藻糖基化的N-聚糖增强了Fc与Fc RIIIa的结合能力。与Fc RIIIa结合能力增强使得ADCC效应增强，这在需要细胞毒性的某些抗体治疗应用中是有利的。
在一些实施例中，当不需要Fc介导的细胞毒作用时，增强的效应功能可能是有害的。在一些实施例中，Fc片段或CH2结构域是非糖基化的。在一些实施例中，通过对CH2结构域中的N-糖基化位点进行突变以阻止其糖基化。
在一些实施例中，提供抗PcrV抗体、抗Psl抗体或特异性识别假单胞菌PcrV和Psl的双特异性抗体(例如全长的抗PcrV抗体、抗Psl抗体或特异性识别假单胞菌PcrV和Psl的双特异性抗体)变体，其包含Fc区，其中连接于Fc区的糖类结构具有减少的岩藻糖或缺乏岩藻糖，这可能会增强ADCC功能。具体地，本文提供抗PcrV抗体、抗Psl抗体或特异性识别假单胞菌PcrV和Psl的双特异性抗体，其相对于野生型CHO细胞产生的相同抗PcrV抗体、抗Psl抗体或特异性识别假单胞菌PcrV和Psl的双特异性抗体具有减少的岩藻糖。也就是说，它们的特征在于，与天然CHO细胞(例如，产生天然糖基化形式的CHO细胞，含有天然FUT8基因的CHO细胞)产生的抗体相比，具有更少量的岩藻糖。在一些实施例中，所述抗PcrV抗体、抗Psl抗体或特异性识别假单胞菌PcrV和Psl的双特异性抗体的N-连接聚糖具有少于50％、40％、30％、20％、10％或5％的岩藻糖。例如，该抗PcrV抗体、抗Psl抗体或特异性识别假单胞菌PcrV和Psl的双特异性抗体的岩藻糖含量可能是1％-80％、1％-65％、5％-65％或20％-40％。在一些实施例中，所述抗PcrV抗体、抗Psl抗体或特异性识别假单胞菌PcrV和Psl的双特异性抗体的N-连接聚糖不包含岩藻糖，即，其中抗PcrV抗体、抗Psl抗体或特异性识别假单胞菌PcrV和Psl的双特异性抗体完全不含岩藻糖，或没有岩藻糖或是去岩藻糖基化。岩藻糖的含量是通过计算连接到Asn297上的糖链内岩藻糖平均含量相对于通过MALDI-TOF质谱测量的所有连接在Asn297上的糖结构(如复合、杂交或甘露糖结构)的总量来确定的，如WO2008/077546所述。Asn297是指位于Fc区297位的天冬酰胺残基(EU Fc区残基编号体系)。然而，由于抗体的微小序列变化，Asn297也可位于297位的上游或下游±3个氨基酸，即在294和300位之间。这些岩藻糖基化变体可能具有增强的ADCC功能。参见例如US PatentPublication Nos.US 2003/0157108(Presta,L.)，US 2004/0093621(Kyowa Hakko KogyoCo.,Ltd)。与“去岩藻糖基化”或“岩藻糖缺乏”的抗体变体相关的出版物的实例，包括US2003/0157108；WO 2000/61739；WO 2001/29246；US 2003/0115614；US 2002/0164328；US2004/0093621；US 2004/0132140；US 2004/0110704；US 2004/0110282；US 2004/0109865；WO 2003/085119；WO 2003/084570；WO 2005/035586；WO 2005/035778；WO2005/053742；WO2002/031140；Okazaki et al.J.Mol.Biol.336:1239-1249(2004)；Yamane-Ohnuki etal.Biotech.Bioeng.87:614(2004)。能够产生去岩藻糖基化抗体的细胞系包括缺乏蛋白岩藻糖基化功能的Lec13 CHO细胞(Ripka et al.Arch.Biochem.Biophys.249:533-545(1986)；US Pat Appl No US 2003/0157108 A1,Presta,L；和WO 2004/056312 A1,Adamset al.,尤其是实施例11)，和基因敲除细胞系，例如α-1,6-岩藻糖基转移酶基因，FUT8基因敲除的CHO细胞(参见Yamane-Ohnuki et al.Biotech.Bioeng.87:614(2004)；Kanda,Y.etal.,Biotechnol.Bioeng.,94(4):680-688(2006)；和WO2003/085107)。
抗PcrV抗体、抗Psl抗体或特异性识别假单胞菌PcrV和Psl的双特异性抗体(例如全长抗PcrV抗体、抗Psl抗体或特异性识别假单胞菌PcrV和Psl的双特异性抗体)变体进一步提供二等分寡糖，例如，其中连接于抗PcrV抗体、抗Psl抗体或特异性识别假单胞菌PcrV和Psl的双特异性抗体Fc区的双触角寡糖被GlcNAc等分。这种抗PcrV抗体、抗Psl抗体或特异性识别假单胞菌PcrV和Psl的双特异性抗体(例如全长抗PcrV抗体、抗Psl抗体或特异性识别假单胞菌PcrV和Psl的双特异性抗体)变体可能具有减少的岩藻糖基化和/或增强的ADCC功能。这类抗体变体的实例在WO 2003/011878(Jean-Mairet et al.)；U.S.Pat.No.6,602,684(Umana et al.)；US 2005/0123546(Umana et al.),和Ferrara et al.,Biotechnology and Bioengineering,93(5):851-861(2006)中有所描述。还提供抗PcrV抗体、抗Psl抗体或特异性识别假单胞菌PcrV和Psl的双特异性抗体(例如全长抗PcrV抗体、抗Psl抗体或特异性识别假单胞菌PcrV和Psl的双特异性抗体)变体，其在与Fc区连接的寡糖中具有至少一个半乳糖残基。这类抗PcrV抗体、抗Psl抗体或特异性识别假单胞菌PcrV和Psl的双特异性抗体变体可能具有增强的CDC功能。这类变体在例如WO 1997/30087(Patelet al.)；WO 1998/58964(Raju,S.)；和WO 1999/22764(Raju,S.)中有所描述。
在一些实施例中，所述抗PcrV抗体、抗Psl抗体或特异性识别假单胞菌PcrV和Psl的双特异性抗体(例如全长抗PcrV抗体、抗Psl抗体或特异性识别假单胞菌PcrV和Psl的双特异性抗体)变体包含能与FcγRIII相结合的Fc区。在一些实施例中，包含Fc区的所述抗PcrV抗体、抗Psl抗体或特异性识别假单胞菌PcrV和Psl的双特异性抗体(例如全长抗PcrV抗体、抗Psl抗体或特异性识别假单胞菌PcrV和Psl的双特异性抗体)变体在人效应细胞(例如T细胞)存在下具有ADCC活性，或者与具有人野生型IgG1 Fc区的其他相同抗PcrV抗体、抗Psl抗体或特异性识别假单胞菌PcrV和Psl的双特异性抗体(例如全长抗PcrV抗体、抗Psl抗体或特异性识别假单胞菌PcrV和Psl的双特异性抗体)相比，在人效应细胞存在下，具有增强的ADCC活性。
半胱氨酸工程变体
在一些实施例中，需要制备半胱氨酸工程化的抗PcrV抗体、抗Psl抗体或特异性识别假单胞菌PcrV和Psl的双特异性抗体(例如全长抗PcrV抗体、抗Psl抗体或特异性识别假单胞菌PcrV和Psl的双特异性抗体)，在该抗体中一个或多个氨基酸残基被半胱氨酸残基取代。在一些实施例中，取代残基出现在抗PcrV抗体、抗Psl抗体或特异性识别假单胞菌PcrV和Psl的双特异性抗体的可及位点。通过用半胱氨酸取代那些残基，具有活性的巯基基团位于抗PcrV抗体、抗Psl抗体或特异性识别假单胞菌PcrV和Psl的双特异性抗体的可及位点，可以用于将该抗PcrV抗体、抗Psl抗体或特异性识别假单胞菌PcrV和Psl的双特异性抗体与其它部分偶联，例如药物部分或接头-药物部分，来制备如本文中进一步描述的抗PcrV抗体、抗Psl抗体或特异性识别假单胞菌PcrV和Psl的双特异性抗体免疫偶联物。半胱氨酸工程化的抗PcrV抗体、抗Psl抗体或特异性识别假单胞菌PcrV和Psl的双特异性抗体(例如，全长抗PcrV抗体、抗Psl抗体或特异性识别假单胞菌PcrV和Psl的双特异性抗体)可以按照例如U.S.Pat.No.7,521,541所述进行制备。
衍生物
在一些实施例中，本文所提供的特异性识别假单胞菌PcrV和Psl的双特异性抗体(例如全长的特异性识别假单胞菌PcrV和Psl的双特异性抗体)可进一步修饰以包含本领域已知并且容易获得的其它非蛋白部分。适用于衍生化特异性识别假单胞菌PcrV和Psl的双特异性抗体的部分包括但不限于，水溶性聚合物。水溶性聚合物的非限制性实例包括但不限于，聚乙二醇(PEG)、乙二醇/丙二醇共聚物、羧甲基纤维素、右旋糖酐、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚-1,3-二氧戊烷、聚-1,3,6-三氧杂环已烷、乙烯/马来酸酐共聚物、聚氨基酸(均聚物或无规共聚物)、右旋糖酐或聚(n-乙烯基吡咯烷酮)聚乙二醇、丙二醇均聚物、环氧丙烷/环氧乙烷共聚物、聚氧乙基化多元醇(例如甘油)、聚乙烯醇及其混合物。聚乙二醇丙醛由于其在水中的稳定性，在制造中具有优势。聚合物可以具有任意分子量，可以是支链或非支链的。连接在特异性识别假单胞菌PcrV和Psl的双特异性抗体上的聚合物数量可以变化，并且如果连接多于一个多聚物，它们可以是相同的或不同的分子。通常，用于衍生化的聚合物的数量和/或类型可基于以下考虑因素来确定，包括但不限于，需要改进特异性识别假单胞菌PcrV和Psl的双特异性抗体的特性或功能，特异性识别假单胞菌PcrV和Psl的双特异性抗体衍生物是否用于特定条件下的治疗等。
药物组合物
本文还提供包含任一种抗PcrV抗体、抗Psl抗体或特异性识别假单胞菌PcrV和Psl的双特异性抗体(例如全长抗PcrV抗体、抗Psl抗体或特异性识别假单胞菌PcrV和Psl的双特异性抗体)、编码抗体的核酸、包含编码抗体的核酸的载体或者包含本文所述的核酸或载体的宿主细胞的组合物(例如药物组合物，在这里也称为制剂)。在一些实施例中，提供一种药物组合物，包含本文所述的任一种抗PcrV抗体、抗Psl抗体或特异性识别假单胞菌PcrV和Psl的双特异性抗体和药学上可接受的载体。
可通过混合具有所需纯度的抗PcrV抗体、抗Psl抗体或特异性识别假单胞菌PcrV和Psl的双特异性抗体与任选的药学上可接受的载体、赋形剂或稳定剂(Remington'sPharmaceutical Sciences 16th edition,Osol,A.Ed.(1980))获得合适的抗PcrV抗体、抗Psl抗体或特异性识别假单胞菌PcrV和Psl的双特异性抗体制剂，制备成冻干制剂或液体制剂形式。可接受的载体、赋形剂或稳定剂在所用剂量和浓度下对接受者无毒，包括缓冲剂如：磷酸盐、柠檬酸和其它有机酸；抗氧化剂，包括抗坏血酸和蛋氨酸；防腐剂(例如十八烷基二甲基苄基氯化铵；六甲基氯化铵；苯扎氯铵；苄索氯铵；苯酚；丁醇或苄醇；对羟基苯甲酸烷基酯，如对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯；邻苯二酚；间苯二酚；环己醇；3-戊醇和间甲酚)；低分子量(少于10个残基)多肽；蛋白质，例如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白；亲水性聚合物，如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸，例如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、组氨酸、精氨酸或赖氨酸；单糖、二糖和其它碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合剂如EDTA；糖类，如蔗糖、甘露醇、海藻糖或山梨糖醇；成盐反离子如钠；金属复合物(如锌-蛋白复合物)；和/或非离子表面活性剂如TWEENTM，PLURONICSTM或聚乙二醇(PEG)；示例性制剂如WO98/56418中所述，并通过引用明确并入本文。适合皮下给药的冻干制剂在WO97/04801中有所描述。这类冻干制剂可通过合适的稀释剂重构成高蛋白浓度的制剂，并且重构的制剂可以通过皮下给药的方式给予本文中待治疗个体。阳离子脂质体或脂质体可以用于将本申请中的抗PcrV抗体、抗Psl抗体或特异性识别假单胞菌PcrV和Psl的双特异性抗体递送至细胞。
本文所述的制剂除包含抗PcrV抗体、抗Psl抗体或特异性识别假单胞菌PcrV和Psl的双特异性抗体(例如全长抗PcrV抗体、抗Psl抗体或特异性识别假单胞菌PcrV和Psl的双特异性抗体)之外，还可以包含一种或多种治疗特定病症所必要的其它活性物质，优选具有活性互补且彼此无不良反应的物质。例如，除了抗PcrV抗体、抗Psl抗体或特异性识别假单胞菌PcrV和Psl的双特异性抗体之外，可能需要进一步包含抗肿瘤药、生长抑制剂、细胞毒性剂或化学治疗药物。这些分子以对预期目的有效的量组合存在。其它这些物质的有效量取决于制剂中的抗PcrV抗体、抗Psl抗体或特异性识别假单胞菌PcrV和Psl的双特异性抗体的含量，疾病或病症或治疗的类型，以及如上所述的其它因素。这些药物通常以与本文描述的相同剂量和给药途径使用，或者以目前应用剂量的1％至99％使用。
所述抗PcrV抗体、抗Psl抗体或特异性识别假单胞菌PcrV和Psl的双特异性抗体(例如，全长抗PcrV抗体、抗Psl抗体或特异性识别假单胞菌PcrV和Psl的双特异性抗体)也可以包埋在例如通过凝聚技术和界面聚合制备的微胶囊中，例如分别在胶体药物递送系统(例如，脂质体、白蛋白微球、微乳液、纳米颗粒和纳米胶囊)中或粗乳液中的羟甲基纤维素或明胶-微胶囊和聚(甲基丙烯酸甲酯)微胶囊。可以制备缓释制剂。
可以制备抗PcrV抗体、抗Psl抗体或特异性识别假单胞菌PcrV和Psl的双特异性抗体(例如，全长抗PcrV抗体、抗Psl抗体或特异性识别假单胞菌PcrV和Psl的双特异性抗体)的缓释制剂。缓释制剂的适合的实例包括含有抗体(或其片段)的固体疏水聚合物半透性基质，这些基质是成型制品的形式，例如，薄膜或微胶囊。缓释基质的实例包括聚酯、水凝胶(例如，聚(2-羟乙基甲基丙烯酸酯)或聚(乙烯醇))、聚乳酸(U.S.Pat.No.3,773,919)，L-谷氨酸和L-谷氨酸乙酯共聚物，不可降解的乙烯-醋酸乙烯酯，可降解的乳酸-乙醇酸共聚物如LUPRON DEPOTTM(由乳酸-乙醇酸共聚物和醋酸亮丙瑞林组成的可注射微球)以及聚-D(-)-3-羟基丁酸。虽然诸如乙烯-醋酸乙烯酯和乳酸-乙醇酸之类的聚合物可以使分子的释放超过100天，某些水凝胶可以在更短的时间内释放蛋白质。当包封的抗体在体内长时间停留时，它们会因暴露于37℃的潮湿环境中发生变性或聚集，可能导致生物活性的丧失或免疫原性的改变。可以根据相应的机制，设计合理的策略来稳定抗PcrV抗体、抗Psl抗体或特异性识别假单胞菌PcrV和Psl的双特异性抗体。例如，如果发现聚集机制是通过硫代二硫化物交换形成分子间S-S键，则可以通过修饰巯基残基、在酸性溶液中冻干、控制含水量、使用适当的添加剂、以及开发特定的聚合物基质组合物来实现稳定化。
在一些实施例中，所述抗PcrV抗体、抗Psl抗体或特异性识别假单胞菌PcrV和Psl的双特异性抗体(例如全长抗PcrV抗体、抗Psl抗体或特异性识别假单胞菌PcrV和Psl的双特异性抗体)配制在含有柠檬酸盐、氯化钠、乙酸盐、琥珀酸盐、甘氨酸、聚山梨酯80(吐温80)或上述任何组合的缓冲液中。在一些实施例中，抗PcrV抗体、抗Psl抗体或特异性识别假单胞菌PcrV和Psl的双特异性抗体配制在包含约100mM至约150mM甘氨酸的缓冲液中。在一些实施例中，抗PcrV抗体、抗Psl抗体或特异性识别假单胞菌PcrV和Psl的双特异性抗体配制在包含约50mM至约100mM NaCl的缓冲液中。在一些实施例中，抗PcrV抗体、抗Psl抗体或特异性识别假单胞菌PcrV和Psl的双特异性抗体配制在包含约10mM至约50mM醋酸盐的缓冲液中。在一些实施例中，抗PcrV抗体、抗Psl抗体或特异性识别假单胞菌PcrV和Psl的双特异性抗体配制在包含约10mM至约50mM琥珀酸的缓冲液中。在一些实施例中，抗PcrV抗体、抗Psl抗体或特异性识别假单胞菌PcrV和Psl的双特异性抗体配制在包含约0.005％至约0.02％聚山梨醇酯80的缓冲液中。在一些实施例中，抗Psl抗体配制在pH值介于5.1和5.6之间的缓冲液中。在一些实施例中，抗PcrV抗体、抗Psl抗体或特异性识别假单胞菌PcrV和Psl的双特异性抗体配制在包含10mM柠檬酸、100mM NaCl、100mM甘氨酸和0.01％聚山梨醇酯80的缓冲液中，其中制剂的pH为5.5。
用于体内给药的制剂必须是无菌的。这可以通过例如应用无菌过滤膜过滤而容易地实现。
使用特异性识别抗原结合部分的组合物治疗或预防假单胞菌感染的方法
使用特异性识别PcrV和/或Psl的双特异性分子进行治疗或预防的方法
在某些实施例中，提供了一种治疗个体中假单胞菌感染的方法，所述方法包括向个体施用有效量的包含本文所述的任一特异性识别假单胞菌PcrV和假单胞菌Psl的双特异性分子的组合物，和/或任一特异性识别假单胞菌PcrV的抗原结合蛋白和/或特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白的组合物。在一些实施例中，治疗假单胞菌感染的方法进一步提供了与假单胞菌感染相关的疾病和/或病症治疗性或预防性的效果。在某些方面，提供了一种预防个体中假单胞菌感染的方法，包括向个体施用有效量的组合物，该组合物包含本文所述的任一双特异性分子或药物组合物。在一些实施例中，提供了如上所述任一双特异性分子或者药物组合物在制备用于治疗疾病或病症的药物中的用途。
与假单胞菌感染相关的疾病和/或病症包括但不限于发热、寒战、疲劳、肌肉和关节疼痛、关节肿胀、头痛、腹泻、皮疹、伤口流脓、菌血症、急性肺炎、腹腔内感染。进一步的示例性疾病包括但不限于呼吸道感染、菌血症、脓毒性休克、化脓性关节炎、肠炎、皮肤软组织感染(如烧伤伤口感染)、尿路感染、肠道感染、溃疡性角膜炎、慢性化脓性中耳炎、乳突炎、鼻窦炎和心内膜炎。在一些实施例中，治疗或预防假单胞菌感染的方法降低了假单胞菌感染导致的死亡率。
在一些实施例中，提供了一种治疗或预防个体中假单胞菌感染的方法，所述方法包括向个体施用有效量的包含特异性识别假单胞菌PcrV和假单胞菌Psl的双特异性分子的组合物。
在一些实施例中，提供了一种治疗或预防个体中假单胞菌感染的方法，所述方法包括向个体施用有效量的包含特异性识别假单胞菌PcrV和假单胞菌Psl的双特异性分子的组合物，其中特异性识别假单胞菌PcrV的第一抗原结合域包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含SEQ ID NOs:1-3中任一氨基酸序列，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:4或5，和HC-CDR3，其包含SEQ ID NOs:6-9中任一氨基酸序列；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:10，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:11，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:12或13。在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌PcrV的第一抗原结合域包含：VH，所述VH包含SEQ ID NOs:91-94和161-164中任一氨基酸序列，以及VL，所述VL包含氨基酸序列SEQ ID NO:112、113、182或183。
在一些实施例中，提供了一种治疗或预防个体中假单胞菌感染的方法，所述方法包括向个体施用有效量的包含特异性识别假单胞菌PcrV和假单胞菌Psl的双特异性分子的组合物，其中特异性识别假单胞菌PcrV的第一抗原结合域包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:22，HC-CDR2，其包含SEQ ID NOs:23-25中任一氨基酸序列，和HC-CDR3，其包含SEQ ID NOs:26-29中任一氨基酸序列；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含SEQ ID NOs:30-32中任一氨基酸序列，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:33或34，和LC-CDR3，其包含SEQ ID NOs:35-37中任一氨基酸序列。在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌PcrV的第一抗原结合域包含：VH，所述VH包含SEQ ID NOs:95-102和165-172中任一氨基酸序列，以及VL，所述VL包含SEQ ID NOs:114-116和184-186中任一氨基酸序列。
在一些实施例中，提供了一种治疗或预防个体中假单胞菌感染的方法，所述方法包括向个体施用有效量的包含特异性识别假单胞菌PcrV和假单胞菌Psl的双特异性分子的组合物，其中特异性识别假单胞菌Psl的第二抗原结合域包含：(a)VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:48，HC-CDR2，其包含SEQ ID NO:52或53中任一氨基酸序列，和HC-CDR3，其包含SEQ ID NOs:57-60中任一氨基酸序列；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:65或66，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:70，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:74；或者(b)VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:50，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:55，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:62或63；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:68，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:72，和LC-CDR3，其包含SEQ ID NOs:76-79中任一氨基酸序列。在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌PcrV的第一抗原结合域包含：VH，所述VH包含103-106和173-176中任一氨基酸序列，以及VL，所述VL包含氨基酸序列SEQ ID NO:117、118、187或188。在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌PcrV的第一抗原结合域包含：VH，所述VH包含氨基酸序列SEQ ID NO:109、110、179或180，以及VL，所述VL包含SEQ ID NOs:120-123和190-193中任一氨基酸序列。
在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌PcrV的第一抗原结合域包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:1，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:4，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:6；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:10，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:11，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:12。在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌PcrV的第一抗原结合域包含：VH，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:91或161，以及VL，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:112或182。在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌PcrV的第一抗原结合域包含：VH，所述VH包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:91或161的VH中的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及VL，所述VL包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:112或182的VL中的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。
在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌PcrV的第一抗原结合域包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:2，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:5，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:7；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:10，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:11，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:13。在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌PcrV的第一抗原结合域包含：VH，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:92或162，以及VL，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:113或183。在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌PcrV的第一抗原结合域包含：VH，所述VH包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:92或162的VH中的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及VL，所述VL包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:113或183的VL中的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。
在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌PcrV的第一抗原结合域包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:2，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:5，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:8；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:10，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:11，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:12。在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌PcrV的第一抗原结合域包含：VH，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:93或163，以及VL，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:112或182。在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌PcrV的第一抗原结合域包含：VH，所述VH包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:93或163的VH中的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及VL，所述VL包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:112或182的VL中的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。
在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌PcrV的第一抗原结合域包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:3，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:5，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:9；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:10，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:11，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:13。在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌PcrV的第一抗原结合域包含：VH，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:94或164，以及VL，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:113或183。在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌PcrV的第一抗原结合域包含：VH，所述VH包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:94或164的VH中的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及VL，所述VL包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:113或183的VL中的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。
在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌PcrV的第一抗原结合域包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:22，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ IDNO:23，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:26；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:30，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:33，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:35。在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌PcrV的第一抗原结合域包含：VH，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:95或165，以及VL，其包含氨基酸序列SEQ IDNO:114或184。在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌PcrV的第一抗原结合域包含：VH，所述VH包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:95或165的VH中的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及VL，所述VL包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:114或184的VL中的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。
在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌PcrV的第一抗原结合域包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:22，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ IDNO:24，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:27；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:31，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:34，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:36。在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌PcrV的第一抗原结合域包含：VH，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:96或166，以及VL，其包含氨基酸序列SEQ IDNO:115或185。在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌PcrV的第一抗原结合域包含：VH，所述VH包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:96或166的VH中的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及VL，所述VL包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:115或185的VL中的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。
在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌PcrV的第一抗原结合域包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:22，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ IDNO:25，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:27；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:32，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:34，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:37。在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌PcrV的第一抗原结合域包含：VH，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:97或167，以及VL，其包含氨基酸序列SEQ IDNO:116或186。在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌PcrV的第一抗原结合域包含：VH，所述VH包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:97或167的VH中的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及VL，所述VL包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:116或186的VL中的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。
在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌PcrV的第一抗原结合域包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:22，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ IDNO:25，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:28；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:32，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:34，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:37。在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌PcrV的第一抗原结合域包含：VH，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:98或168，以及VL，其包含氨基酸序列SEQ IDNO:116或186。在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌PcrV的第一抗原结合域包含：VH，所述VH包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:98或168的VH中的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及VL，所述VL包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:116或186的VL中的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌PcrV的第一抗原结合域包含：VH，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:99或169，以及VL，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:115或185。在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌PcrV的第一抗原结合域包含：VH，所述VH包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:99或169的VH中的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及VL，所述VL包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:115或185的VL中的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。
在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌PcrV的第一抗原结合域包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:22，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ IDNO:24，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:28；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:31，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:34，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:36。
在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌PcrV的第一抗原结合域包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:22，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ IDNO:25，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:26；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:32，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:34，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:37。在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌PcrV的第一抗原结合域包含：VH，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:100或170，以及VL，其包含氨基酸序列SEQ IDNO:116或186。在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌PcrV的第一抗原结合域包含：VH，所述VH包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:110或170的VH中的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及VL，所述VL包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:116或186的VL中的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。
在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌PcrV的第一抗原结合域包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:22，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ IDNO:24，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:26；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:31，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:34，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:36。在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌PcrV的第一抗原结合域包含：VH，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:101或171，以及VL，其包含氨基酸序列SEQ IDNO:115或185。在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌PcrV的第一抗原结合域包含：VH，所述VH包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:101或171的VH中的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及VL，所述VL包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:115或185的VL中的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。
在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌PcrV的第一抗原结合域包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:22，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ IDNO:23，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:29；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:30，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:33，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:35。在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌PcrV的第一抗原结合域包含：VH，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:102或172，以及VL，其包含氨基酸序列SEQ IDNO:114或184。在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌PcrV的第一抗原结合域包含：VH，所述VH包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:102或172的VH中的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及VL，所述VL包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:114或184的VL中的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。
在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌Psl的第二抗原结合域包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:48，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:52或53，和HC-CDR3，其包含SEQ ID NOs:57-60中任一氨基酸序列；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:65或66，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:70，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:74。
在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌Psl的第二抗原结合域包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:50，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:55，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:62或63；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:68，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:72，和LC-CDR3，其包含SEQ ID NOs:76-79中任一氨基酸序列。
在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌Psl的第二抗原结合域包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:48，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:52，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:57；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:65，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:70，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:74。在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌Psl的第二抗原结合域包含：VH，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:103或173，以及VL，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:117或187。在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌Psl的第二抗原结合域包含：VH，所述VH包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:103或173的VH中的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及VL，所述VL包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:117或187的VL中的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。
在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌Psl的第二抗原结合域包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:48，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:53，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:58；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:66，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:70，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:74。在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌Psl的第二抗原结合域包含：VH，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:104或174，以及VL，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:118或188的VL。在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌Psl的第二抗原结合域包含：VH，所述VH包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:104或174的VH中的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及VL，所述VL包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:118或188的VL中的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。
在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌Psl的第二抗原结合域包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:48，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:52，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:59；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:65，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:70，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:74。在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌Psl的第二抗原结合域包含：VH，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:105或175，以及VL，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:117或187。在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌Psl的第二抗原结合域包含：VH，所述VH包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:105或175的VH中的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及VL，所述VL包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:117或187的VL中的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。
在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌Psl的第二抗原结合域包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:48，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:53，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:60；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:65，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:70，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:74。在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌Psl的第二抗原结合域包含：VH，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:106或176，以及VL，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:117或187。在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌Psl的第二抗原结合域包含：VH，所述VH包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:106或176的VH中的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及VL，所述VL包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:117或187的VL中的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。
在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌Psl的第二抗原结合域包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:49，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:54，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:61；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:67，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:71，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:75。在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌Psl的第二抗原结合域包含：VH，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:107、108、177或178，以及VL，其包含氨基酸序列SEQ IDNO:119或189。在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌Psl的第二抗原结合域包含：VH，所述VH包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:107、108、177或178的VH中的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及VL，所述VL包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:119或189的VL中的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。
在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌Psl的第二抗原结合域包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:50，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:55，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:62；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:68，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:72，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:76。在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌Psl的第二抗原结合域包含：VH，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:109或179，以及VL，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:120或190。在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌Psl的第二抗原结合域包含：VH，所述VH包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:109或179的VH中的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及VL，所述VL包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:120或190的VL中的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。
在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌Psl的第二抗原结合域包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:50，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:55，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:63；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:68，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:72，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:77。在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌Psl的第二抗原结合域包含：VH，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:110，以及VL，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:121。在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌Psl的第二抗原结合域包含：VH，所述VH包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:110的VH中的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及VL，所述VL包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:121的VL中的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。
在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌Psl的第二抗原结合域包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:50，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:55，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:63；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:68，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:72，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:78。在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌Psl的第二抗原结合域包含：VH，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:110或180，以及VL，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:122或192。在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌Psl的第二抗原结合域包含：VH，所述VH包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:110或180的VH中的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及VL，所述VL包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:121或192的VL中的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。
在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌Psl的第二抗原结合域包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:50，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:55，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:63；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:68，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:72，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:79。在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌Psl的第二抗原结合域包含：VH，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:110或180，以及VL，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:123或193的VL。在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌Psl的第二抗原结合域包含：VH，所述VH包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:110或180的VH中的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及VL，所述VL包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:123或193的VL中的HC-LDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。
在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌Psl的第二抗原结合域包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:51，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:56，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:64；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:69，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:73，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:80。在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌Psl的第二抗原结合域包含：VH，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:111或181，以及VL，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:124或194的VL。在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌Psl的第二抗原结合域包含：VH，所述VH包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:111或181的VH中的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及VL，所述VL包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:124或194的VL中的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。
在一些实施例中，提供了一种治疗或预防个体中假单胞菌感染的方法，所述方法包括向个体施用有效量的包含特异性识别假单胞菌PcrV和假单胞菌Psl的双特异性分子的组合物，其中包括特异性识别假单胞菌PcrV的第一抗原结合域，和特异性识别假单胞菌Psl的第二抗原结合域的双特异性分子，其中所述第一抗原结合域包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:1，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:4，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:6；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQID NO:10，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:11，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQID NO:12；以及其中所述第二抗原结合域包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:48，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:52，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:57；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:65，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:70，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:74。
在一些实施例中，提供了一种治疗或预防个体中假单胞菌感染的方法，所述方法包括向个体施用有效量的包含特异性识别假单胞菌PcrV和假单胞菌Psl的双特异性分子的组合物，其中包括特异性识别假单胞菌PcrV的第一抗原结合域，和特异性识别假单胞菌Psl的第二抗原结合域的双特异性分子，其中所述第一抗原结合域包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:1，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:4，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:6；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQID NO:10，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:11，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQID NO:12；以及其中所述第二抗原结合域包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:49，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:54，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:61；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:67，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:71，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:75。
在一些实施例中，提供了一种治疗或预防个体中假单胞菌感染的方法，所述方法包括向个体施用有效量的包含特异性识别假单胞菌PcrV和假单胞菌Psl的双特异性分子的组合物，其中包括特异性识别假单胞菌PcrV的第一抗原结合域，和特异性识别假单胞菌Psl的第二抗原结合域的双特异性分子，其中所述第一抗原结合域包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:2，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:5，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:7；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQID NO:10，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:11，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQID NO:13；以及其中所述第二抗原结合域包含：VH，所述VH包含HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:48，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:52，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:57；以及VL，所述VL包括：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:65，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:70，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:74。
在一些实施例中，提供了一种治疗或预防个体中假单胞菌感染的方法，所述方法包括向个体施用有效量的包含特异性识别假单胞菌PcrV和假单胞菌Psl的双特异性分子的组合物，其中包括特异性识别假单胞菌PcrV的第一抗原结合域，和特异性识别假单胞菌Psl的第二抗原结合域的双特异性分子，其中所述第一抗原结合域包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:2，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:5，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:7；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQID NO:10，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:11，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQID NO:13；以及其中所述第二抗原结合域包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:49，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:54，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:61；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:67，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:71，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:75。
在一些实施例中，提供了一种治疗或预防个体中假单胞菌感染的方法，所述方法包括向个体施用有效量的包含特异性识别假单胞菌PcrV和假单胞菌Psl的双特异性分子的组合物比施用等价量的特异性识别假单胞菌PcrV的抗原结合蛋白或等价量的特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白更有效。在一些实施例中，所述方法包括施用有效量的特异性识别假单胞菌PcrV和假单胞菌Psl的双特异性分子增强针对铜绿假单胞菌的调理吞噬杀伤(OPK)至约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％、2倍、5倍、10倍、20倍、50倍或100倍以上，与施用等价量的特异性识别假单胞菌PcrV的抗原结合蛋白或等价量的特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白相比。在一些实施例中，所述方法包括施用有效量的特异性识别假单胞菌PcrV和假单胞菌Psl的双特异性分子破坏III型毒素分泌系统的活性至约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％、2倍、5倍、10倍、20倍、50倍或100倍以上，与施用等价量的特异性识别假单胞菌PcrV的抗原结合蛋白或等价量的特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白相比。在一些实施例中，所述方法包括施用有效量的特异性识别假单胞菌PcrV和假单胞菌Psl的双特异性分子抑制假单胞菌对上皮细胞的结合至约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％、2倍、5倍、10倍、20倍、50倍或100倍以上，与施用等价量的特异性识别假单胞菌PcrV的抗原结合蛋白或等价量的特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白相比。在一些实施例中，所述方法包括施用有效量的特异性识别假单胞菌PcrV和假单胞菌Psl的双特异性分子抑制假单胞菌引起的红细胞裂解至约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％、2倍、5倍、10倍、20倍、50倍或100倍以上，与施用等价量的特异性识别假单胞菌PcrV的抗原结合蛋白或等价量的特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白相比。在一些实施例中，所述方法包括施用有效量的特异性识别假单胞菌PcrV和假单胞菌Psl的双特异性分子提高病人的生存率至约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％、2倍、5倍、10倍、20倍、50倍或100倍以上，与施用等价量的特异性识别假单胞菌PcrV的抗原结合蛋白或等价量的特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白相比。
使用包含识别PcrV和/或Psl的抗原结合蛋白的药物组合物进行治疗或预防的方法
在一些实施例中，提供了一种治疗或预防个体中假单胞菌感染的方法，
所述方法包括向个体施用有效量的药物组合物，其包括：(i)特异性识别假单胞菌PcrV上的第一表位的抗原结合蛋白和(ii)特异性识别假单胞菌PcrV上的第二表位的抗原结合蛋白和/或特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白。
在一些实施例中，提供了一种治疗或预防个体中假单胞菌感染的方法，所述方法包括向个体施用有效量的药物组合物，其包括：(i)特异性识别假单胞菌PcrV上的第一表位的抗原结合蛋白和(ii)特异性识别假单胞菌PcrV上的第二表位的抗原结合蛋白和/或特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白。其中所述特异性识别假单胞菌PcrV上的第一表位的抗原结合蛋白包含：(a)重链可变域(VH)，所述VH包含：重链互补决定区(HC-CDR)1，其包含DX1X2MS(SEQ ID NO:20)，其中X1为N或Y，和X2为Y、H或P；HC-CDR2，其包含X1ISESGGSTNYADSVKG(SEQ ID NO:15)，其中X1为V或G；和HC-CDR3，其包含GRFSTX1SX2HFX3RAVYGMDV(SEQ ID NO:21)，其中X1为L、S、N或D，X2为S或A，X3为F或Y；以及轻链可变域(VL)，所述VL包含：轻链互补决定区(LC-CDR)1，其包含RASQGISSYLA(SEQ ID NO:10)；LC-CDR2，其包含AASTLQS(SEQ ID NO:11)；和LC-CDR3，其包含QQLSSYPLX1(SEQ ID NO:19)，其中X1为S或T；或者(b)VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含X1X2X3MS(SEQ ID NO:17)，其中X1为D或S，X2为Y或N，和X3为P、H、Y或S；HC-CDR2，其包含X1ISESGGSTX2X3ADSVKG(SEQ ID NO:18)，其中X1为G或V，X2为N或Y，和X3为D或Y；和HC-CDR3，其包含GRFX1X2X3X4X5X6FX7RAVYGMDV(SEQ ID NO:38)，其中X1为S或C，X2为T、G、D、Y、Q或A，X3为S、D、N、E、L、A或Y，X4为S、T、Y或A，X5为S、H、Q、A、R、K、G、E、Y或D，X6为H或C，和X7为F或Y；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含RASQGIX1SYLA(SEQ ID NO:209)，其中X1为S或R；LC-CDR2，其包含AASTLQS(SEQ ID NO:11)；和LC-CDR3，其包含QQLX1SYPLX2(SEQ ID NO:210)，其中X1为S、N或K，和X2为S或T。
在一些实施例中，提供了一种治疗和/或预防个体中假单胞菌感染的方法，所述方法包括向个体施用有效量的药物组合物，其包括：(i)特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白和(ii)特异性识别假单胞菌PcrV上的第一表位的抗原结合蛋白和/或特异性识别假单胞菌PcrV上的第二表位的抗原结合蛋白。
在一些实施例中，提供了一种治疗和/或预防个体中假单胞菌感染的方法，所述方法包括向个体施用有效量的药物组合物，其包括：(i)特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白和(ii)特异性识别假单胞菌PcrV上的第一表位的抗原结合蛋白和/或特异性识别假单胞菌PcrV上的第二表位的抗原结合蛋白。其中特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白包含：(a)VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含SSGDYWG(SEQ ID NO:48)；HC-CDR2，其包含SIHNX1GSTYYNPSLKG(SEQ ID NO:81)，其中X1为S或Q；和HC-CDR3，其包含QFGSETYYX1GIX2P(SEQ ID NO:82)，其中X1为T、N或P，和X2为D或Q；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含RSSQSLLHSX1GYNYLD(SEQ ID NO:83)，其中X1为N或R；LC-CDR2，其包含LGSNRAS(SEQ ID NO:70)；和LC-CDR3，其包含MQALQTPYT(SEQ ID NO:74)；或者(b)VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含IHSVH(SEQ ID NO:50)；HC-CDR2，其包含TIISSGTTTTYAQSFQD(SEQ ID NO:55)；和HC-CDR3，其包含DGX1S(SEQ ID NO:84)，其中X1为D或T；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含RASQGISSWLA(SEQ ID NO:68)；LC-CDR2，其包含HASTLES(SEQ ID NO:72)；和LC-CDR3，其包含LQAX1SLPHT(SEQ ID NO:85)，其中X1为N、F、S或K；或者(c)VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:49，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:54，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:61；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:67，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:71，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:75；或者(d)VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:51，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:56，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:64；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:69，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:73，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:80。
在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌PcrV上的第一表位的抗原结合蛋白包含：(a)重链可变域(VH)，所述VH包含：重链互补决定区(HC-CDR)1，其包含DX1X2MS(SEQ IDNO:20)，其中X1为N或Y，和X2为Y、H或P；HC-CDR2，其包含X1ISESGGSTNYADSVKG(SEQ ID NO:15)，其中X1为V或G；和HC-CDR3，其包含GRFSTX1SX2HFX3RAVYGMDV(SEQ ID NO:21)，其中X1为L、S、N或D，X2为S或A，X3为F或Y；以及轻链可变域(VL)，所述VL包含：轻链互补决定区(LC-CDR)1，其包含RASQGISSYLA(SEQ ID NO:10)；LC-CDR2，其包含AASTLQS(SEQ ID NO:11)；和LC-CDR3，其包含QQLSSYPLX1(SEQ ID NO:19)，其中X1为S或T；或者(b)VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含X1X2X3MS(SEQ ID NO:17)，其中X1为D或S，X2为Y或N，和X3为P、H、Y或S；HC-CDR2，其包含X1ISESGGSTX2X3ADSVKG(SEQ ID NO:18)，其中X1为G或V，X2为N或Y，和X3为D或Y；和HC-CDR3，其包含GRFX1X2X3X4X5X6FX7RAVYGMDV(SEQ ID NO:38)，其中X1为S或C，X2为T、G、D、Y、Q或A，X3为S、D、N、E、L、A或Y，X4为S、T、Y或A，X5为S、H、Q、A、R、K、G、E、Y或D，X6为H或C，和X7为F或Y；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含RASQGIX1SYLA(SEQ ID NO:209)，其中X1为S或R；LC-CDR2，其包含AASTLQS(SEQ ID NO:11)；和LC-CDR3，其包含QQLX1SYPLX2(SEQ ID NO:210)，其中X1为S、N或K，和X2为S或T。
在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌PcrV上的第一表位的抗原结合蛋白包含：(a)VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含DNX1MS(SEQ ID NO:14)，其中X1为Y或H；HC-CDR2，其包含X1ISESGGSTNYADSVKG(SEQ ID NO:15)，其中X1为V或G；和HC-CDR3，其包含GRFSTX1SSHFX2RAVYGMDV(SEQ ID NO:16)，其中X1为L或S,X2为F或Y；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含RASQGISSYLA(SEQ ID NO:10)；LC-CDR2，其包含AASTLQS(SEQ ID NO:11)；和LC-CDR3，其包含QQLSSYPLX1(SEQ ID NO:19)，其中X1为S或T。
在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌PcrV上的第一表位的抗原结合蛋白包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:1，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:4，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:6；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:10，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:11，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:12。在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌PcrV上的第一表位的抗原结合蛋白包含：VH，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:91以及VL，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:112。在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌PcrV上的第一表位的抗原结合蛋白包含：VH，所述VH包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:91的VH中的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及VL，所述VL包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:112的VL中的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。
在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌PcrV上的第一表位的抗原结合蛋白包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:2，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:5，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:7；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:10，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:11，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:13。在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌PcrV上的第一表位的抗原结合蛋白包含：VH，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:92以及VL，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:113。在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌PcrV上的第一表位的抗原结合蛋白包含：VH，所述VH包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:92的VH中的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及VL，所述VL包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:113的VL中的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。
在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌PcrV上的第一表位的抗原结合蛋白包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:2，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:5，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:8；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:10，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:11，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:12。在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌PcrV上的第一表位的抗原结合蛋白包含：VH，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:93以及VL，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:112。在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌PcrV上的第一表位的抗原结合蛋白包含：VH，所述VH包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:93的VH中的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及VL，所述VL包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:112的VL中的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。
在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌PcrV上的第一表位的抗原结合蛋白包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:3，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:5，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:9；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:10，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:11，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:13。在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌PcrV上的第一表位的抗原结合蛋白包含：VH，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:94以及VL，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:113。在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌PcrV上的第一表位的抗原结合蛋白包含：VH，所述VH包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:94的VH中的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及VL，所述VL包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:113的VL中的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。
在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌PcrV上的第二表位的抗原结合蛋白包含：(a)VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含SYWMH(SEQ ID NO:22)；HC-CDR2，其包含RINEX1EX2SISYADSVKG(SEQ ID NO:44)，其中X1为D或N，和X2为T、G或R；和HC-CDR3，其包含DGPYDX1X2DI(SEQ ID NO:45)，其中X1为S、A或T，和X2为F或L；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含RASQX1VX2X3NLA(SEQ ID NO:46)，其中X1为S、G或N，X2为S、R或K和X3为S或N；LC-CDR2，其包含X1ASSRAT(SEQ ID NO:42)，其中X1为D或H；和LC-CDR3，其包含QQYGX1X2PX3T(SEQ IDNO:47)，其中X1为S、L或N，X2为S、Q或E和X3为L或I；或者(b)VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含SYWMH(SEQ ID NO:22)；HC-CDR2，其包含RINEX1EX2SISYADSVKG(SEQ ID NO:211)，其中X1为D、N、I、L或V，X2为S、T、R、G或N；和HC-CDR3，其包含DGPYDX1X2DI(SEQ ID NO:45)，其中X1为S、A或T，X2为F或L；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含RASQX1VX2X3NLA(SEQ ID NO:212)，其中X1为N、G、D或S，X2为K、R、S、N或T，X3为N、G、S或D；LC-CDR2，其包含X1ASSRAT(SEQ ID NO:213)，其中X1为D、N、H或A；和LC-CDR3，其包含QQYGX1X2PX3T(SEQ ID NO:214)，其中X1为S、T、E、H、N、A、D、M或L，X2为S、Q、E、T、D、G、H、L、N、V或Y，和X3为I、L或V。在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌PcrV上的第二表位的抗原结合蛋白包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含SYWMH(SEQ ID NO:22)；HC-CDR2，其包含RINEX1EX2SISYADSVKG(SEQ ID NO:39)，其中X1为D或N，和X2为T、G或R；和HC-CDR3，其包含DGPYDX1LDI(SEQ ID NO:40)，其中X1为S或A；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含RASQX1VX2X3NLA(SEQ ID NO:41)，其中X1为S或G，X2为S或R和X3为S或N；LC-CDR2，其包含X1ASSRAT(SEQ ID NO:42)，其中X1为D或H；和LC-CDR3，其包含QQYGX1X2PX3T(SEQ ID NO:43)，其中X1为S或L，X2为S或Q和X3为L或I。
在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌PcrV上的第二表位的抗原结合蛋白包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:22；HC-CDR2，其包含SEQ IDNOs:23-25中任一氨基酸序列；和HC-CDR3，其包含SEQ ID NOs:26-29中任一氨基酸序列；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含SEQ ID NOs:30-32中任一氨基酸序列；LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:33或34；和LC-CDR3，其包含SEQ ID NOs:35-37中任一氨基酸序列。
在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌PcrV上的第二表位的抗原结合蛋白包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:22，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:23，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:26；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:30，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:33，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:35。在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌PcrV上的第二表位的抗原结合蛋白包含：VH，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:95以及VL，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:114。在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌PcrV上的第二表位的抗原结合蛋白包含：VH，所述VH包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:95的VH中的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及VL，所述VL包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:114的VL中的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。
在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌PcrV上的第二表位的抗原结合蛋白包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:22，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:24，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:27；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:31，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:34，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:36。在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌PcrV上的第二表位的抗原结合蛋白包含：VH，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:96以及VL，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:115。在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌PcrV上的第二表位的抗原结合蛋白包含：VH，所述VH包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:96的VH中的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及VL，所述VL包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:115的VL中的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。
在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌PcrV上的第二表位的抗原结合蛋白包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:22，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:25，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:27；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:32，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:34，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:37。在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌PcrV上的第二表位的抗原结合蛋白包含：VH，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:97以及VL，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:116。在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌PcrV上的第二表位的抗原结合蛋白包含：VH，所述VH包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:97的VH中的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及VL，所述VL包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:116的VL中的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。
在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌PcrV上的第二表位的抗原结合蛋白包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:22，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:25，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:28；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:32，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:34，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:37。在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌PcrV上的第二表位的抗原结合蛋白包含：VH，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:98以及VL，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:116。在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌PcrV上的第二表位的抗原结合蛋白包含：VH，所述VH包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:98的VH中的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及VL，所述VL包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:116的VL中的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。
在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌PcrV上的第二表位的抗原结合蛋白包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:22，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:24，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:28；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:31，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:34，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:36。在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌PcrV上的第二表位的抗原结合蛋白包含：VH，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:99以及VL，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:115。在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌PcrV上的第二表位的抗原结合蛋白包含：VH，所述VH包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:99的VH中的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及VL，所述VL包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:115的VL中的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。
在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌PcrV上的第二表位的抗原结合蛋白包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:22，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:25，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:26；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:32，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:34，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:37。在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌PcrV上的第二表位的抗原结合蛋白包含：VH，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:100以及VL，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:116。在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌PcrV上的第二表位的抗原结合蛋白包含：VH，所述VH包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:100的VH中的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及VL，所述VL包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:116的VL中的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。
在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌PcrV上的第二表位的抗原结合蛋白包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:22，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:24，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:26；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:31，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:34，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:36。在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌PcrV上的第二表位的抗原结合蛋白包含：VH，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:101以及VL，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:115。在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌PcrV上的第二表位的抗原结合蛋白包含：VH，所述VH包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:101的VH中的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及VL，所述VL包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:115的VL中的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。
在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌PcrV上的第二表位的抗原结合蛋白包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:22，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:23，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:29；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:30，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:33，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:35。在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌PcrV上的第二表位的抗原结合蛋白包含：VH，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:102以及VL，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:114。在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌PcrV上的第二表位的抗原结合蛋白包含：VH，所述VH包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:102的VH中的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及VL，所述VL包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:114的VL中的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。
在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含SSGDYWG(SEQ ID NO:48)；HC-CDR2，其包含SIHNX1GSTYYNPSLKG(SEQ IDNO:81)，其中X1为S或Q；和HC-CDR3，其包含QFGSETYYX1GIX2P(SEQ ID NO:82)，其中X1为T、N或P，和X2为D或Q；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含RSSQSLLHSX1GYNYLD(SEQ ID NO:83)，其中X1为N或R；LC-CDR2，其包含LGSNRAS(SEQ ID NO:70)；和LC-CDR3，其包含MQALQTPYT(SEQ ID NO:74)。在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含SSGDYWG(SEQ ID NO:48)；HC-CDR2，其包含SIHNX1GSTYYNPSLKG(SEQ ID NO:125)，其中X1为S、K或Q；和HC-CDR3，其包含QFGSETYYX1GIX2P(SEQ ID NO:126)，其中X1为N、S、V、T或P，和X2为D、Y、C、H、S、R、A、E、G、K、W、V或Q；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含RSSQSLLHSX1GYNYLD(SEQ ID NO:127)，其中X1为N、A、V、F、R、G、H、Q、W或P；LC-CDR2，其包含LGSNRAS(SEQ ID NO:70)；和LC-CDR3，其包含MQALQTP X1T(SEQ ID NO:128)，其中X1为R或Y。
在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含IHSVH(SEQ ID NO:50)；HC-CDR2，其包含TIISSGTTTTYAQSFQD(SEQ IDNO:55)；和HC-CDR3，其包含DGX1S(SEQ ID NO:84)，其中X1为D或T；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含RASQGISSWLA(SEQ ID NO:68)；LC-CDR2，其包含HASTLES(SEQ ID NO:72)；和LC-CDR3，其包含LQAX1SLPHT(SEQ ID NO:85)，其中X1为N、F、S或K。在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含IHSVH(SEQ IDNO:50)；HC-CDR2，其包含TIISSGTTTTYAQSFQD(SEQ ID NO:55)；和HC-CDR3，其包含X1X2X3X4(SEQ ID NO:129)，其中X1为D、Y或N，其中X2为G或A，其中X3为D或T，和其中X4为S、A或T；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含RASQGISSWLA(SEQ ID NO:68)；LC-CDR2，其包含HASTLES(SEQ ID NO:72)；和LC-CDR3，其包含LQAX1SLPHT(SEQ ID NO:130)，其中X1为N、D、Y、F、P、G、K、H、A、C、E、Q、R、S、T、V、W或L。
在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:48；HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:52或53；和HC-CDR3，其包含SEQ ID NOs:57-60中任一氨基酸序列；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:65或66；LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:70；和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:74。
在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:50；HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:55；和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:62或63；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:68；LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:72；和LC-CDR3，其包含SEQID NOs:76-79中任一氨基酸序列。
在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:48，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:52，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:57；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:65，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:70，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:74。在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白包含：VH，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:103以及VL，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:117。在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白包含：VH，所述VH包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:103的VH中的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及VL，所述VL包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:117的VL中的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。
在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:48，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:53，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:58；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:66，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:70，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:74。在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白包含：VH，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:104以及VL，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:118。在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白包含：VH，所述VH包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:104的VH中的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及VL，所述VL包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:118的VL中的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。
在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:48，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:52，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:59；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:65，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:70，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:74。在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白包含：VH，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:105以及VL，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:117。在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白包含：VH，所述VH包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:105的VH中的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及VL，所述VL包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:117的VL中的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。
在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:48，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:53，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:60；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:65，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:70，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:74。在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白包含：VH，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:106以及VL，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:117。在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白包含：VH，所述VH包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:106的VH中的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及VL，所述VL包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:117的VL中的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。
在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:49，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:54，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:61；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:67，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:71，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:75。在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白包含：VH，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:107或108以及VL，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:119的VL。在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白包含：VH，所述VH包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:107或108的VH中的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及VL，所述VL包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:119的VL中的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。
在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:50，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:55，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:62；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:68，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:72，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:76。在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白包含：VH，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:109以及VL，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:120的VL。在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白包含：VH，所述VH包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:109的VH中的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及VL，所述VL包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:120的VL中的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。
在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:50，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:55，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:63；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:68，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:72，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:77。在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白包含：VH，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:110以及VL，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:121。在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白包含：VH，所述VH包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:110的VH中的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及VL，所述VL包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:121的VL中的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。
在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:50，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:55，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:63；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:68，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:72，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:78。在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白包含：VH，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:110以及VL，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:122。在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白包含：VH，所述VH包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:110的VH中的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及VL，所述VL包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:122的VL中的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。
在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:50，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:55，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:63；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:68，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:72，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:79。在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白包含：VH，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:110以及VL，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:123的VL。在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白包含：VH，所述VH包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:110的VH中的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及VL，所述VL包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:123的VL中的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。
在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:51，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:56，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:64；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:69，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:73，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:80。在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白包含：VH，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:111以及VL，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:124的VL。在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白包含：VH，所述VH包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:111的VH中的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及VL，所述VL包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:124的VL中的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。
在一些实施例中，所述方法包括施用药物组合物，其包括：(i)特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白和(ii)特异性识别假单胞菌PcrV上的第一表位的抗原结合蛋白和/或特异性识别假单胞菌PcrV上的第二表位的抗原结合蛋白，特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白和特异性识别假单胞菌PcrV上的第一表位的抗原结合蛋白的摩尔比约为20:1、10:1、9:1、8:1、7:1、6:1、5:1、4:1、3:1、2:1、1:1、1:2、1:3、1:4、1:5、1:6、1:7、1:8、1:9、1:10或1:20。在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白和特异性识别假单胞菌PcrV上的第一表位的抗原结合蛋白的摩尔比约为5:1、4:1、3:1、2:1、1:1、1:2、1:3、1:4或1:5。在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白和特异性识别假单胞菌PcrV上的第一表位的抗原结合蛋白的摩尔比约为2:1或1:1。
在一些实施例中，所述方法包括施用药物组合物，其包括：(i)特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白和(ii)特异性识别假单胞菌PcrV上的第一表位的抗原结合蛋白和/或特异性识别假单胞菌PcrV上的第二表位的抗原结合蛋白，特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白和特异性识别假单胞菌PcrV上的第二表位的抗原结合蛋白的摩尔比约为20:1、10:1、9:1、8:1、7:1、6:1、5:1、4:1、3:1、2:1、1:1、1:2、1:3、1:4、1:5、1:6、1:7、1:8、1:9、1:10或1:20。在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白和特异性识别假单胞菌PcrV上的第二表位的抗原结合蛋白的摩尔比约为5:1、4:1、3:1、2:1、1:1、1:2、1:3、1:4或1:5。在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白和特异性识别假单胞菌PcrV上的第二表位的抗原结合蛋白的摩尔比约为2:1或1:1。
在一些实施例中，所述方法包括施用药物组合物，其包括：(i)特异性识别假单胞菌PcrV上的第一表位的抗原结合蛋白和(ii)特异性识别假单胞菌PcrV上的第二表位的抗原结合蛋白和/或特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白，特异性识别假单胞菌PcrV上的第一表位的抗原结合蛋白和特异性识别假单胞菌PcrV上的第二表位的抗原结合蛋白的摩尔比约为20:1、10:1、9:1、8:1、7:1、6:1、5:1、4:1、3:1、2:1、1:1、1:2、1:3、1:4、1:5、1:6、1:7、1:8、1:9、1:10或1:20。在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌PcrV上的第一表位的抗原结合蛋白和特异性识别假单胞菌PcrV上的第二表位的抗原结合蛋白的摩尔比约为5:1、4:1、3:1、2:1、1:1、1:2、1:3、1:4或1:5。在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌PcrV上的第一表位的抗原结合蛋白和特异性识别假单胞菌PcrV上的第二表位的抗原结合蛋白的摩尔比约为1:1或2:1。
在一些实施例中，所述方法包括施用药物组合物，其包括：(i)特异性识别假单胞菌PcrV上的第一表位的抗原结合蛋白和(ii)特异性识别假单胞菌PcrV上的第二表位的抗原结合蛋白和/或特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白，特异性识别假单胞菌PcrV上的第一表位的抗原结合蛋白和特异性识别假单胞菌PcrV上的第二表位的抗原结合蛋白的摩尔比约为20:1、10:1、9:1、8:1、7:1、6:1、5:1、4:1、3:1、2:1、1:1、1:2、1:3、1:4、1:5、1:6、1:7、1:8、1:9、1:10或1:20。在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌PcrV上的第一表位的抗原结合蛋白和特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白的摩尔比约为5:1、4:1、3:1、2:1、1:1、1:2、1:3、1:4或1:5。在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌PcrV上的第一表位的抗原结合蛋白和特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白的摩尔比约为1:1或1:2。
在一些实施例中，提供了一种包括特异性识别假单胞菌PcrV上的第一表位的抗原结合蛋白和特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白的药物组合物，其中特异性识别假单胞菌PcrV上的第一表位的抗原结合蛋白包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:1，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:4，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQID NO:6；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:10，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:11，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:12；以及其中特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ IDNO:48，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:52，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ IDNO:57；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:65，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:70，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:74。在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌PcrV上的第一表位的抗原结合蛋白和特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白的摩尔比约为1:1或1:2。
在一些实施例中，提供了一种治疗个体中假单胞菌感染的方法，所述方法包括向个体施用有效量的包含特异性识别假单胞菌PcrV上的第一表位的抗原结合蛋白和特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白的组合物，其中特异性识别假单胞菌PcrV上的第一表位的抗原结合蛋白包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:1，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:4，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:6；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:10，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ IDNO:11，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:12；以及其中特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:49，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:54，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:61；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:67，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ IDNO:71，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:75。在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌PcrV上的第一表位的抗原结合蛋白和特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白的摩尔比约为1:1或1:2。
在一些实施例中，提供了一种治疗个体中假单胞菌感染的方法，所述方法包括向个体施用有效量的包含特异性识别假单胞菌PcrV上的第一表位的抗原结合蛋白和特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白的组合物，其中特异性识别假单胞菌PcrV上的第一表位的抗原结合蛋白包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:2，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:5，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:7；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:10，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ IDNO:11，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:13；以及其中特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:48，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:52，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:57；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:65，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ IDNO:70，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:74。在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌PcrV上的第一表位的抗原结合蛋白和特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白的摩尔比约为1:1或1:2。
在一些实施例中，提供了一种治疗个体中假单胞菌感染的方法，所述方法包括向个体施用有效量的包含特异性识别假单胞菌PcrV上的第一表位的抗原结合蛋白和特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白的组合物，其中特异性识别假单胞菌PcrV上的第一表位的抗原结合蛋白包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:2，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:5，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:7；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:10，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ IDNO:11，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:13；以及其中特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:49，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:54，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:61；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:67，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ IDNO:71，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:75。在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌PcrV上的第一表位的抗原结合蛋白和特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白的摩尔比约为1:1或1:2。
在一些实施例中，提供了一种治疗个体中假单胞菌感染的方法，所述方法包括向个体施用有效量的包含特异性识别假单胞菌PcrV上的第一表位的抗原结合蛋白，特异性识别假单胞菌PcrV上的第二表位的抗原结合蛋白和特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白的组合物，其中特异性识别假单胞菌PcrV上的第一表位的抗原结合蛋白包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:1，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:4，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:6；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:10，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:11，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:12；其中特异性识别假单胞菌PcrV上的第二表位的抗原结合蛋白包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:22，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ IDNO:24，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:27；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:31，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:34，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:36；以及其中特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白包含：VH，所述VH包含：HC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:48，HC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ IDNO:52，和HC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:57；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:65，LC-CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:70，和LC-CDR3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:74。在一些实施例中，所述特异性识别假单胞菌PcrV上的第一表位的抗原结合蛋白，所述特异性识别假单胞菌PcrV上的第二表位的抗原结合蛋白和特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白的摩尔比约为1:1:1或1:1:2。
在一些实施例中，提供了治疗或预防个体中假单胞菌感染的方法，所述方法包括向个体施用有效量的包含特异性识别假单胞菌PcrV的抗原结合蛋白和假单胞菌Psl的抗原结合蛋白的组合物，该方法比施用等价量的特异性识别假单胞菌PcrV的抗原结合蛋白或等价量的特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白更有效。在一些实施例中，所述方法包括施用有效量的包含特异性识别假单胞菌PcrV的抗原结合蛋白和假单胞菌Psl的抗原结合蛋白的组合物，该方法与施用等价量的特异性识别假单胞菌PcrV的抗原结合蛋白或等价量的特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白相比，增强针对铜绿假单胞菌的调理吞噬杀伤(OPK)至约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％、2倍、5倍、10倍、20倍、50倍或100倍以上。在一些实施例中，所述方法包括施用有效量的包含特异性识别假单胞菌PcrV的抗原结合蛋白和假单胞菌Psl的抗原结合蛋白的组合物，该方法与施用等价量的特异性识别假单胞菌PcrV的抗原结合蛋白或等价量的特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白相比，破坏III型毒素分泌系统的活性至约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％、2倍、5倍、10倍、20倍、50倍或100倍以上。在一些实施例中，所述方法包括施用有效量的包含特异性识别假单胞菌PcrV的抗原结合蛋白和假单胞菌Psl的抗原结合蛋白的组合物，该方法与施用等价量的特异性识别假单胞菌PcrV的抗原结合蛋白或等价量的特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白相比，抑制假单胞菌对上皮细胞的结合至约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％、2倍、5倍、10倍、20倍、50倍或100倍以上。在一些实施例中，所述方法包括施用有效量的包含特异性识别假单胞菌PcrV的抗原结合蛋白和假单胞菌Psl的抗原结合蛋白的组合物，该方法与施用等价量的特异性识别假单胞菌PcrV的抗原结合蛋白或等价量的特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白相比，抑制假单胞菌引起的红细胞裂解至约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％、2倍、5倍、10倍、20倍、50倍或100倍以上。在一些实施例中，所述方法包括施用有效量的包含特异性识别假单胞菌PcrV的抗原结合蛋白和假单胞菌Psl的抗原结合蛋白的组合物，该方法与施用等价量的特异性识别假单胞菌PcrV的抗原结合蛋白或等价量的特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白相比，提高病人的生存率至约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％、2倍、5倍、10倍、20倍、50倍或100倍以上。
制品及试剂盒
在本申请的一些实施例中，提供一种制品，所述制品包含一种物质，所述物质能够用于治疗或预防个体中的假单胞菌感染，或者用于递送双特异性分子(例如识别PcrV和Psl的双特异性抗体)，或者包括特异性识别PcrV上一个或多个表位的抗原结合蛋白和特异性识别Psl上一个或多个表位的抗原结合蛋白的药物组合物，到被表达PcrV和Psl的病原菌附着的细胞中。所述制品可以包括一种容器以及在容器上或随该容器附带的标签或包装说明书。合适的容器包括，例如瓶子、小瓶、注射器等。容器可以由多种材料制成，例如玻璃或塑料。通常，该容器内装有能够有效治疗本文所述疾病或病症的组合物，并且具有一个无菌端口(例如该容器可以是一个静脉输液袋或是一个具有皮下注射针头可刺穿盖子的小瓶)。组合物中的至少一种活性物质为本申请所述的双特异性分子或抗原结合蛋白。标签或包装说明书标示了该组合物可以用于治疗的特定病症。标签或包装说明书进一步包含给患者施用双特异性分子或药物组合物的说明书。包括联合治疗的制品和试剂盒均在本文的考虑范围之内。
包装说明书是指通常包含在治疗产品的商业包装内的说明书，其包含关于与这些治疗产品使用有关的适应症、用法、剂量、施用、禁忌症和/或警告信息。在一些实施例中，包装说明书标明该组合物可以用于治疗细菌感染。在一些实施例中，包装说明书标明该组合物可用于治疗假单胞菌感染。
此外，所述制品还可以包括第二容器，其包含药学上可接受的缓冲液，例如抑菌性注射用水(BWFI)、磷酸盐缓冲液、格林氏溶液或葡萄糖溶液。还可以包括从商业和用户角度而言所需的其他材料，包括其他缓冲液、稀释液、过滤器、针头和注射器。
同时还提供可用于各种目的的试剂盒，例如用于治疗或预防个体中假单胞菌感染，或者用于递送抗PcrV抗体、抗Psl抗体或特异性识别假单胞菌PcrV和Psl的双特异性抗体(例如全长抗PcrV抗体、抗Psl抗体或特异性识别假单胞菌PcrV和Psl的双特异性抗体)到被表达PcrV或Psl的病原菌附着的细胞中，任选与制品组合。本申请的试剂盒包括一个或多个容器，其包含抗PcrV抗体、抗Psl抗体或特异性识别假单胞菌PcrV和Psl的组合物(或单剂量形式和/或制品)，并且在一些实施例中，进一步包含另一种药剂(例如本文所述的药剂)和/或与本文所述任一方法相一致的使用说明书。该试剂盒可进一步包括选择适合治疗个体的描述。本申请中试剂盒中所附带的使用说明书通常是标签或包装说明书上的书面说明(例如包含在试剂盒内的纸页)，机器可读的说明(例如，磁性或光学储存光盘上的说明)也是可以接受的。
例如，在一些实施例中，试剂盒包括一种包含抗PcrV抗体、抗Psl抗体或特异性识别假单胞菌PcrV和Psl的双特异性抗体(例如全长的抗PcrV抗体、抗Psl抗体或特异性识别假单胞菌PcrV和Psl的双特异性抗体)的组合物。在一些实施例中，试剂盒包括：a)包含本文所述的任一种抗PcrV抗体、抗Psl抗体或特异性识别假单胞菌PcrV和Psl的双特异性抗体的组合物，和b)至少一种有效量的其它药剂，其能够增强抗PcrV抗体、抗Psl抗体或特异性识别假单胞菌PcrV和Psl的双特异性抗体的效果(如治疗效果、检测效果)。在一些实施例中，试剂盒包括：a)包含本文所述的任一种抗PcrV抗体、抗Psl抗体或特异性识别假单胞菌PcrV和Psl的双特异性抗体的组合物，和b)向个体施用抗PcrV抗体、抗Psl抗体或特异性识别假单胞菌PcrV和Psl的双特异性抗体组合物用于治疗个体中假单胞菌感染的使用说明书。在一些实施例中，试剂盒包括：a)包含本文所述的任一种抗PcrV抗体、抗Psl抗体或特异性识别假单胞菌PcrV和Psl的双特异性抗体的组合物，和b)至少一种有效量的其它药剂，其能够增强抗PcrV抗体、抗Psl抗体或特异性识别假单胞菌PcrV和Psl的双特异性抗体的效果(如治疗效果、检测效果)和c)向个体施用抗PcrV抗体、抗Psl抗体或特异性识别假单胞菌PcrV和Psl的双特异性抗体组合物和其它物质用于治疗个体中假单胞菌感染的使用说明书。所述抗Psl抗体和其他物质可以存在于独立的容器或同一个容器中。例如，该试剂盒可以包括一种特定组合物或两种或更多种组合物，其中一种组合物包括抗PcrV抗体、抗Psl抗体或特异性识别假单胞菌PcrV和Psl的双特异性抗体，另一种组合物包括另一种药剂。
在一些实施例中，试剂盒包含一种(或一组)编码抗PcrV抗体、抗Psl抗体或特异性识别假单胞菌PcrV和Psl的双特异性抗体(例如全长的抗PcrV抗体、抗Psl抗体或特异性识别假单胞菌PcrV和Psl的双特异性抗体)的核酸。在一些实施例中，试剂盒包含：a)一种(或一组)编码抗PcrV抗体、抗Psl抗体或特异性识别假单胞菌PcrV和Psl的双特异性抗体的核酸，和b)一种表达核酸(或一组核酸)的宿主细胞。在一些实施例中，试剂盒包含：a)一种(或一组)编码抗PcrV抗体、抗Psl抗体或特异性识别假单胞菌PcrV和Psl的双特异性抗体的核酸，和b)使用说明书，适用于：i)在宿主细胞中表达抗PcrV抗体、抗Psl抗体或特异性识别假单胞菌PcrV和Psl的双特异性抗体，ii)制备包含抗PcrV抗体、抗Psl抗体或特异性识别假单胞菌PcrV和Psl的双特异性抗体的组合物，和iii)向个体施用包含抗PcrV抗体、抗Psl抗体或特异性识别假单胞菌PcrV和Psl的双特异性抗体的组合物来治疗或预防个体中假单胞菌感染。在一些实施例中，试剂盒包括：a)一种(或一组)编码抗PcrV抗体、抗Psl抗体或特异性识别假单胞菌PcrV和Psl的双特异性抗体的核酸，b)一种表达核酸(或一组核酸)的宿主细胞，和c)使用说明书，适用于：i)在宿主细胞中表达抗PcrV抗体、抗Psl抗体或特异性识别假单胞菌PcrV和Psl的双特异性抗体，ii)制备包含抗PcrV抗体、抗Psl抗体或特异性识别假单胞菌PcrV和Psl的双特异性抗体的组合物，和iii)向个体施用包含抗PcrV抗体、抗Psl抗体或特异性识别假单胞菌PcrV和Psl的双特异性抗体的组合物来治疗或预防个体中假单胞菌感染。
本申请所述的试剂盒以合适的形式进行包装。合适的包装包括，但不限于，小瓶、瓶子、广口瓶、软包装(例如密封的聚酯薄膜或塑料袋)等。试剂盒可以任选地提供其它的组分，例如缓冲液和说明信息。因此，本申请还提供制品，其包括小瓶(例如密封的小瓶)、瓶子、广口瓶、软包装等等。
关于抗PcrV抗体、抗Psl抗体或特异性识别假单胞菌PcrV和Psl的双特异性抗体组合物的使用说明书，通常包括一些信息，诸如，剂量，给药周期和给药途径的。容器可以是单位剂量的，大包装的(如，多剂量包装)或亚单位剂量的。例如，提供一种包含足够剂量的如本文所述的抗PcrV抗体、抗Psl抗体或特异性识别假单胞菌PcrV和Psl的双特异性抗体(例如全长的抗PcrV抗体、抗Psl抗体或特异性识别假单胞菌PcrV和Psl的双特异性抗体)的试剂盒以对个体进行长期有效的治疗，例如一周、8天、9天、10天、11天、12天、13天、2周、3周、4周、6周，8周，3个月、4个月、5个月、7个月、8个月、9个月或更长时间。试剂盒还可包含多单位剂量的抗PcrV抗体、抗Psl抗体或特异性识别假单胞菌PcrV和Psl的双特异性抗体、药物组合物和使用说明书，并且以足够在药房中储存和使用的量进行包装，例如，医院药房和复方药房。
本领域的技术人员将认识到在本申请的范围和宗旨内可能的若干实施例。现在将通过参考以下非限制性实施例来更详细地描述本申请。以下实施例进一步阐明本申请，但不应解释为以任何方式进行限制其范围。
具体实施方式
以下实验中使用铜绿假单胞菌株O6-57/66(CNCTC 57/66)和PAO1(O5)(CNCTCPAO1)。
实施例1：使用结合非重叠表位的抗PcrV抗体的组合治疗铜绿假单胞菌感染
在腹腔感染模型中小鼠的存活率提高，证明了结合非重叠表位的抗PcrV抗体的组合预防性中和铜绿假单胞菌感染的能力。PA49先导抗体(和优化后的抗体6G12、9C7)与13-42先导抗体(和优化后的抗体7B1、7C1)结合的表位没有重叠(数据未显示)。
结合非重叠表位的抗PcrV抗体的组合使得腹腔感染模型小鼠的存活率提高
评估结合非重叠表位的抗PcrV抗体7C1和6G12的组合在腹腔感染模型中提高小鼠存活率的能力，与单独施用7C1或6G12进行比较。HIV中和抗体10E8(Huang J,et al.,Broadand potent neutralization of HIV-1 by a gp41-specific humanantibody.Nature.2012Nov 15；491(7424):406-12)作为阴性对照，在本文中命名为HIV-10E8。
在预防性模型中，在感染前24小时向7-8周龄BALB/c小鼠(维通利华)腹腔注射7C1、6G12或其组合。具体地，在高抗体剂量设置下，向小鼠施用抗PcrV抗体克隆7C1(5mg/kg)，抗PcrV抗体克隆6G12(5mg/kg)或7C1和6G12的组合(每个2.5mg/kg，共5mg/kg)。在低抗体剂量设置下，向小鼠施用7C1(2.5mg/kg)、6G12(2.5mg/kg)或7C1和6G12的组合(每个1.25mg/kg，共2.5mg/kg)。为诱导腹腔内感染，向BALB/c小鼠腹腔内接种悬浮在300μl接种液中的2倍致死剂量(2×LD90＝5×105CFU)的铜绿假单胞菌(O6-57/66菌株)。在感染后的7天内记录小鼠存活率。
结果如图1A所示，在高抗体剂量设置(共5mg/kg)下，相比单独施用7C1(5mg/kg)，7C1和6G12的组合(每个2.5mg/kg)表现出更高的小鼠存活率改善，且与单独施用6G12(5mg/kg)相比，表现出具有统计学差异的更高的小鼠存活率改善(p<0.005)。结果如图1B所示，在低抗体剂量设置(共2.5mg/kg)下，相比单独施用7C1(2.5mg/kg)，7C1和6G12的组合(每个1.25mg/kg)表现出更高的小鼠存活率改善，且与单独施用6G12(2.5mg/kg)相比，表现出具有统计学差异的更高的小鼠存活率改善(p<0.005)。这些结果表明，抗PcrV抗体的组合比单独施用一种特定的抗PcrV抗体的效果更好，并证明本文所披露的结合非重叠表位的抗PcrV抗体组合用于中和铜绿假单胞菌的临床潜力。
实施例2：使用抗PcrV抗体和抗Psl抗体的组合治疗铜绿假单胞菌感染
在腹腔感染模型中小鼠的存活率提高，证明了抗PcrV抗体和抗Psl抗体的组合预防性中和铜绿假单胞菌感染的能力。
抗PcrV抗体、抗Psl抗体或其组合使得腹腔感染模型小鼠的存活率提高
评估抗PcrV抗体7C1和抗Psl抗体P59的组合在腹腔感染模型中的提高小鼠存活率的能力，与单独施用7C1或P59进行比较。这些结果也与对照抗PcrV抗体V2L2-MD或抗Psl抗体Cam003及其组合进行了比较。在腹腔感染模型中，比较抗PcrV抗体7B1和抗Psl抗体P59的组合与对照抗PcrV抗体V2L2-MD和抗Psl抗体Psl0096的组合在腹腔感染模型中提高小鼠存活率的能力。HIV-10E8作为阴性对照。
在预防性模型中，在感染前24小时向7-8周龄BALB/c小鼠(维通利华)腹腔注射抗Psl抗体、抗PcrV或其组合。具体地，在一个试验组中，向小鼠施用抗PcrV抗体7C1(5mg/kg)，抗Psl抗体P59(5mg/kg)或7C1和P59的组合(每个1mg/kg，共2mg/kg)。在相应的对照组中，向小鼠施用抗PcrV抗体V2L2-MD(5mg/kg)、抗Psl抗体Cam003(5mg/kg)或V2L2-MD和Cam003的组合(每个1mg/kg，共2mg/kg)(图2A)。在一个单独的试验组中，在高抗体剂量设置下，向小鼠施用7B1和P59的组合(每个1mg/kg，共2mg/kg)；在相应的对照组中，向小鼠施用V2L2-MD和Psl0096的组合(每个1mg/kg，共2mg/kg)。在低抗体剂量设置下，向小鼠施用7B1和P59的组合(每个0.33mg/kg，共0.66mg/kg)；在相应的对照组中，向小鼠施用V2L2-MD和Psl0096的组合(每个0.33mg/kg，共0.66mg/kg)(图2B)。为诱导腹腔内感染，向BALB/c小鼠腹腔内接种悬浮在300μl接种液中的4倍致死剂量(4×LD90＝9×105CFU)的铜绿假单胞菌(O6-57/66菌株)。在感染后的7天内记录小鼠存活率。
结果如图2A所示，低剂量的7C1和P59的组合(共2mg/kg)，与单独施用7C1(5mg/kg)或P59(5mg/kg)相比，表现出具有统计学差异的更高的小鼠存活率改善(p<0.001)。此外，7C1和P59的组合(共2mg/kg)也表现出更高的小鼠存活率改善，与对照抗PcrV抗体V2L2-MD(5mg/kg)、对照抗Psl抗体Cam-003(5mg/kg)或V2L2-MD和Cam-003的组合(共2mg/kg)相比。结果如图2B所示，在高或低抗体剂量设置下，7B1和P59的组合，与对照抗体PcrV抗体和抗Psl抗体的组合相比，表现出相当或更高的小鼠存活率改善，且与阴性对照HIV-10E8相比，表现出具有统计学差异的更高的小鼠存活率改善(p<0.005)。这些结果表明，与对照抗体组合相比，本文所披露的组合即使在较低的剂量下也能获得更好的存活率保护，并证明本文所披露的抗PcrV抗体和抗Psl抗体组合用于中和铜绿假单胞菌的临床潜力。
实施例3：在小鼠菌血症模型中使用抗PcrV抗体和抗Psl抗体的组合治疗铜绿假单胞菌感染
在菌血症模型中小鼠的存活率提高，证明了抗PcrV抗体和抗Psl抗体的组合预防性中和铜绿假单胞菌感染的能力。构建静脉注射感染引起的小鼠菌血症模型如先前所述(参见Ajitha Thanabalasuriar et.al,Bispecific antibody targets multiplePseudomonas aeruginosa evasion mechanisms in the lung vasculature,J ClinInvest.2017；127(6):2249–2261.)。
使用抗PcrV抗体和抗Psl抗体的组合提高菌血症模型小鼠的存活率
评估抗PcrV抗体7B1和抗Psl抗体P59或3F12的组合在菌血症模型中的提高小鼠存活率的能力，与对照抗PcrV抗体和抗Psl抗体的组合进行比较。HIV-10E8作为阴性对照。
在预防性模型中，在感染前24小时向7-8周龄BALB/c小鼠(维通利华)腹腔注射抗PcrV抗体7B1和抗Psl抗体P59的组合，PcrV抗体7B1和抗Psl抗体3F12的组合或对照PcrV抗体V2L2-MD和抗Psl抗体Psl0096的组合。BALB/c小鼠静脉接种2倍致死剂量(2×LD90＝5×105CFU)的铜绿假单胞菌(O6-57/66菌株)，该菌株代表与临床疾病相关的高毒性的细胞毒性的铜绿假单胞菌血清型。在感染后的7天内记录小鼠存活率。
结果如图3所示，施用任何一个抗PcrV抗体和抗Psl抗体(7B1+P59，7B1+3F12)的组合的小鼠均存活，其与对照抗体V2L2-MD和Psl0096的组合相比，表现出更高的小鼠存活率改善，且与阴性对照HIV-10E8相比，表现出具有统计学差异的更高的小鼠存活率改善(p<0.005)。这些结果表明，本文所披露的抗PcrV抗体和抗Psl抗体组合用于中和铜绿假单胞菌的临床潜力。
实施例4：使用不同抗体比例的抗PcrV抗体和抗Psl抗体的组合治疗铜绿假单胞菌感染
在菌血症模型中小鼠的存活率提高，检查了不同比例的抗PcrV抗体和抗Psl抗体的组合预防性中和铜绿假单胞菌感染的效力。
使用抗PcrV抗体和抗Psl抗体的组合提高腹腔感染模型小鼠的存活率
进一步检测了不同比例的抗PcrV抗体7B1和抗Psl抗体P59或6G7的组合在腹腔感染模型中的提高小鼠存活率的能力，以7B1:P59或7B1:6G7的比例进行检测。HIV-10E8作为阴性对照。
在预防性模型中，在感染前24小时向7-8周龄BALB/c小鼠(维通利华)腹腔注射不同比例的抗PcrV抗体和抗Psl抗体的组合。在第一个试验组中，向小鼠施用7B1和P59的组合(共0.67mg/kg)，其中7B1与P59的比例为4:1、3:1、2:1、1:1、1:2、1:3或1:4。向对照组小鼠单独施用7B1(共0.67mg/kg)或P59(共0.67mg/kg)。为诱导腹腔内感染，向BALB/c小鼠腹腔内接种悬浮在300μl接种液中的4倍致死剂量(4×LD90＝9×105CFU)的铜绿假单胞菌(O6-57/66菌株)。在第二个试验组中，向小鼠施用7B1和6G7的组合(共2mg/kg)，其中7B1与6G7的比例为5:1、3:1、1:1、1:3或1:5。使用了更高剂量的铜绿假单胞菌感染，用来阐释不同抗体比例的效力。为诱导腹腔内感染，向BALB/c小鼠腹腔内接种悬浮在300μl接种液中的6倍致死剂量(6×LD90＝1.2×106CFU)的铜绿假单胞菌(O6-57/66菌株)。在感染后的7天内记录小鼠存活率。
结果如图4A所示，在接种量为4倍致死剂量(4×LD90＝9×105CFU)下，抗PcrV抗体和抗Psl抗体的比例为1:1或1:2时，7B1和P59的组合在5个试验比例中表现出最高的小鼠存活率改善；且与等量的7B1或P59单独施用相比，表现出具有统计学显著性差异的更高的小鼠存活率改善(p<0.005)。结果如图4B所示，在铜绿假单胞菌(57/66)接种量为6倍致死剂量(6×LD90＝1.2×106CFU)的腹腔感染模型中，大多数小鼠在48小时内死亡。在1:1比例下的7B1和6G7的组合在5个试验比例中表现出最高的小鼠存活率改善；且与阴性对照HIV-10E8相比，表现出具有统计学差异的更高的小鼠存活率改善(p<0.005)。这些结果表明，相比单独施用其中一个抗体，本文所披露的抗PcrV抗体和抗Psl抗体组合能更有效地中和铜绿假单胞菌，且在(抗PcrV抗体或抗Psl的抗体)1:1或1:2的比例时更加高效。
实施例5：使用结合非重叠表位的抗PcrV抗体和Psl抗体的组合治疗铜绿假单胞菌感染
在腹腔感染模型中小鼠的存活率提高，证明了两个结合非重叠表位的抗PcrV抗体和抗Psl抗体的组合预防性中和铜绿假单胞菌感染的效力。
使用结合非重叠表位的抗PcrV抗体和抗Psl抗体的组合提高腹腔感染模型小鼠的存活率
评估结合非重叠表位的抗PcrV抗体7C1和6G12的组合，或抗PcrV抗体7B1和9C7的组合，与抗Psl抗体P59在腹腔感染模型中的提高小鼠存活率的能力，分别与用7C1和P59的组合或7B1和P59的组合治疗进行比较。HIV-10E8作为阴性对照。
在预防性模型中，在感染前24小时向7-8周龄BALB/c小鼠(维通利华)腹腔注射等量或总量一半的抗体组合7C1+P59+6G12，与抗体组合7C1+P59进行比较。在第一个试验组中，向小鼠施用7C1和P59的组合(每个1mg/kg，共2mg/kg)或7C1、P59和6G12的组合(每个0.67mg/kg，共2mg/kg；或每个0.33mg/kg，共1mg/kg)。为诱导腹腔内感染，向BALB/c小鼠腹腔内接种悬浮在300μl接种液中的4倍致死剂量(4×LD90＝9×105CFU)的铜绿假单胞菌(O6-57/66菌株)。在感染后的7天内记录小鼠存活率。在第二个试验组中，向小鼠施用7B1和P59的组合(每个1mg/kg，共2mg/kg；每个0.2mg/kg，共0.4mg/kg；或每个0.04mg/kg，共0.08mg/kg)或7B1、P59和9C7的组合(每个0.67mg/kg，共2mg/kg；每个0.133mg/kg，共0.4mg/kg；或每个0.027mg/kg，共0.08mg/kg)。为诱导腹腔内感染，向BALB/c小鼠腹腔内接种悬浮在300μl接种液中的5倍致死剂量(5×LD90＝1×106CFU)的铜绿假单胞菌(O6-57/66菌株)。在感染后的7天内记录小鼠存活率。
结果如图5A所示，与7C1+P59的组合相比，即使7C1+P59+6G12的组合在抗体总量减半时仍表现出相当的小鼠存活率改善。结果如图5B所示，在2mg/kg和0.4mg/kg总抗体剂量设置时，7B1+P59+9C7的组合表现出更高的小鼠存活率改善，与7B1+P59的组合相比。这些结果表明，本文所披露的两个结合非重叠表位的抗PcrV抗体和抗Psl抗体组合用于在中和铜绿假单胞菌中的临床潜力。
实施例6：识别PcrV和Psl的双特异性抗体的制备和表征
示例性抗PcrV/Psl双特异性抗体的结构如图6所示。在示例性抗PcrV/Psl双特异性抗体中，嵌合重链包含抗PcrV抗体的重链，其中在CH1和CH2结构域之间的铰链区域插入Psl scFv，产生一个序列为VH-CH1上部铰链/接头-scFv(VH-接头-VL)-接头/下部铰链-CH2-CH3的嵌合重链。此外，通过取代将两个半胱氨酸引入scFv序列(VH-Cys44和VL-Cys100，相对于scFv的VH或VL序列的位置)，以促进二硫键的形成，从而稳定scFv的结构。
示例性的抗PcrV/抗Psl双特异性抗体的轻链包含抗PcrV抗体的轻链。
用重叠PCR扩增技术将嵌合重链的各个部分连接在一起。
实施例7：表征识别PcrV和Psl的双特异性抗体的体外活性
通过抑制红细胞(RBCs)裂解和对人支气管上皮细胞系A549细胞的细胞毒性的能力来确定抗PcrV/Psl双特异性抗体抑制PcrV功能的能力，通过促进对铜绿假单胞菌的调理吞噬杀伤(OPK)和抑制铜绿假单胞菌对上皮细胞吸附的能力来确定抗PcrV/Psl双特异性抗体抑制Psl功能的能力。
通过RBC裂解抑制分析对PcrV的活性
对于双特异性抗体STS7B15925S(包含抗PcrV抗体7B1的Fab和抗Psl抗体P5925的scFv)、STS7B15921S(包含抗PcrV抗体7B1的Fab和抗Psl抗体P5921的scFv)、STS7B11201S(包含抗PcrV抗体7B1的Fab和抗Psl抗体3F1201的scFv)、STS7B15923S(包含抗PcrV抗体7B1的Fab和抗Psl抗体P5923的scFv)和STS7B159S(包含抗PcrV抗体7B1的Fab和抗Psl抗体P59的scFv)，通过RBC裂解实验评估它们抑制PcrV的生物活性。简言之，通过离心新鲜的人全血或兔全血来制备红细胞(RBCs)，添加EDTA并用磷酸盐缓冲液(PBS)洗涤几次。用含10％胎牛血清(FBS，Gibco)的DMEM培养基稀释洗涤过的RBCs至终浓度为2.5％(v/v)，将其与待测双特异性抗体或对照的双特异性抗体MedI3902或对照抗体V2L2-MD共同加入到96孔圆底板中。铜绿假单胞菌菌株57/66(O6)在2×YT培养基(Oxford)中生长至对数生长期，离心收集后用含FBS的DMEM培养基重悬，至600nm处吸光值(OD600)为0.15。取10μl的菌悬液加到RBC-抗体混合物中，通过震荡进行混合，在37℃、5％CO2条件下孵育3小时。将培养板短暂离心(1000rpm，1min)以沉淀完整的RBCs，上清液转移至96孔平底板中，测量OD405值以检测裂解情况，据此计算RBC裂解抑制的相对值并绘制曲线。从使用饱和保护剂量的对照抗体V2L2-MD的孔中测定得到的OD405值设为100％抑制，不添加双特异性抗体进行测定得到的OD405值设为0％抑制。还确定了抗体的IC50值。
结果如图7A和7B所示，双特异性抗体STS7B15925S、STS7B15921S、STS7B11201S、STS7B15923S和STS7B159S对RBC裂解的抑制与MedI3902相当，说明优化后的双特异性抗体与对照双特异性抗体对抑制PcrV具有相当的能力。
通过A549 CTX试验分析对PcrV的活性
为了检测对铜绿假单胞菌引起的细胞毒性(CTX)和细胞裂解的抑制能力，将双特异性抗体STS7B15925S、STS7B15921S、STS7B11201S、STS7B15923S、STS7B159S、对照双特异性抗体MedI3902或对照抗体V2L2-MD加入到人支气管上皮细胞系A549中，所述细胞用含10％FBS的DMEM培养基接种在白色96孔板(Nunc Nunclon Delta)中。以感染复数10(MOI＝10)加入对数生长期的铜绿假单胞菌菌株PA103(O11)，37℃、5％CO2孵育2小时，然后在室温平衡20分钟。根据操作说明，用CytoTox-ONE试剂盒(Promega)定量裂解细胞释放的乳酸脱氢酶(LDH)，从而检测膜的完整性。从使用饱和保护剂量的对照抗体V2L2-MD的孔中测定得到的荧光值设为100％抑制，不添加双特异性抗体进行测定得到的荧光值设为0％抑制，据此计算CTX抑制的相对值并绘制曲线。还确定了抗体的IC50值。
结果如图7C和7D所示，双特异性抗体STS7B15925S、STS7B15921S、STS7B11201S、STS7B15923S或STS7B159S对A549细胞裂解的抑制与MedI3902相当，说明优化后的双特异性抗体与对照双特异性抗体对抑制PcrV具有相当的能力。
通过抑制铜绿假单胞菌与A549人肺上皮细胞的吸附分析对Psl的活性
利用PTN 7转座子系统构建发光铜绿假单胞菌PAO1(O5)-LUX，如Choi K H,etal.mini-Tn7 insertion in bacteria with single attTn7 sites:examplePseudomonas aeruginosa[J].Nature Protocols,2006,1(1):153-161中所述。通过检测发光铜绿假单胞菌的发光信号值确定双特异性抗体阻断铜绿假单胞菌与A549细胞吸附的活性。用含10％FBS的DMEM培养基将A549细胞(人腺癌肺泡基底上皮细胞系)接种到白色96孔板(Nunclon Delta)中，向融合成单层的上述细胞加入双特异性抗体STS7B15925S、STS7B15921S、STS7B11201S、STS7B15923S、STS7B159S、对照双特异性抗体MedI3902或对照抗体Psl0096。以感染复数10(MOI＝10)将对数生长期的发光铜绿假单胞菌PAO1(O5)-LUX加入到细胞中，37℃、5％CO2孵育1小时。然后用PBS洗涤A549细胞去除未吸附的细菌，随后添加2YT培养基。在37℃短暂孵育后，通过发光读数对PAO1(O5)-LUX的吸附量进行定量。具体而言，在自发光模块中检测96孔板。从使用饱和保护剂量的对照抗体Psl0096的孔中测定得到的荧光值设为100％抑制，不添加双特异性抗体进行测定得到的荧光值设为0％抑制，据此计算吸附抑制的相对值并绘制曲线。用GraphPad Prism 6，四参数法计算抗体的IC50值。
结果如图7E和7F所示，双特异性抗体STS7B15925S、STS7B15921S、STS7B11201S、STS7B15923S或STS7B159S对吸附的抑制与MedI3902相当，说明优化后的双特异性抗体与对照双特异性抗体对抑制Psl具有相当的能力。
通过调理吞噬杀伤(OPK)分析对Psl的活性
利用PTN 7转座子系统构建发光铜绿假单胞菌PAO1(O5)-LUX。双特异性抗体STS7B15925S、STS7B15921S、STS7B11201S、STS7B15923S或STS7B159S介导OPK的活性通过检测发光铜绿假单胞菌的发光信号值确定。OPK检测的方法如DiGiandomenico,A.,et al.,InfectImmun 72,7012-7021(2004)中所述。简言之，所述检测在96孔板中进行，每孔分别加入稀释的补体(25μl/孔)、分化的HL-60细胞，用对数生长期的发光铜绿假单胞菌PAO1(O5)-LUX感染，并用稀释的双特异性抗体(10μl/孔)处理。具体而言，兔血清(CreativeDiagnostics)作为补体来源，用培养基稀释至原浓度的10％，将双特异性抗体、对照双特异性抗体MedI3902或对照抗体Psl0096以3倍比例倍比稀释后加入到培养基中，然后以感染复数为0.1(MOI＝0.1)加入对数生长期的发光铜绿假单胞菌PAO1(O5)-LUX。在37℃、5％CO2孵育4小时后，通过读取发光强度值对细菌进行定量。从使用饱和保护剂量的对照抗体Psl0096的孔中测定得到的荧光值设为100％杀伤，不添加双特异性抗体进行测定得到的荧光值设为0％杀伤，据此计算相对杀伤率并绘制曲线。使用GraphPad Prism 6，四参数法计算抗体的IC50值。
结果如图7G和7H所示，优化后的双特异性抗体STS7B15925S、STS7B15921S、STS7B11201S、STS7B15923S或STS7B159S介导的OPK与MedI3902相当，说明优化后的双特异性抗体与对照双特异性抗体对抑制Psl具有相当的能力。
实施例8：表征双特异性抗体与PcrV和Psl结合特异性
通过在VH、VL、和/或Fc中引入变体进一步优化STS7B15925、STS7B1H9、STS7B112，得到STS7B15925M、STS7B15921M、STS7B1H9M、STS7B1H924M、STS7B112M、STS7B11201M。在ELISA实验中，用合成的PcrV或PAO1包被96孔板。第二天，PBST洗涤后，用200μL PBS-牛奶封闭1小时，再用PBST洗涤后，加入相应的抗体并在37℃孵育1小时。用0.1％TBST洗涤板6次，然后向每孔加入100μL山羊抗人Fc抗体-AP(用PBS 1:3000稀释)，孵育1小时。用0.1％TBST洗涤6次后，每孔加入50μl pNPP(对硝基磷酸苯酯)，37℃显色10-20min。随后，用酶标仪在410nm波长处读取比色信号。分析ELISA结果(OD410)并计算EC50值。
结果如图8A所示，所有测试的双特异性抗体(STS7B15925M、STS7B15921M、STS7B1H9M、STS7B1H924M、STS7B112M和STS7B11201M)均表现出与PcrV相似的结合动力学。结果如图8B所示，所有测试的双特异性抗体均表现出与PAO1的结合。
BsAb与Psl和PcrV的同时结合(BLI)
用生物层干涉(BLI)技术表征双特异性抗体与Psl和PcrV同时结合的活性。具体地，首先用Psl包被APS生物传感器，并用含1％BSA的PBS封闭5分钟。所述双特异性抗体用PBS缓冲液稀释至浓度为2μg/ml并加入到反应孔中。PcrV或Psl(作为对照)用PBS缓冲液稀释至浓度为2μg/ml并加入到反应孔中。监测双特异性抗体与Psl或PcrV的稳定结合。示例性抗体STS7B15921M的结果如图8C所示，Psl与STS7B15921M组合之后结合量增加，随后加入PcrV后结合量进一步增加，说明Psl结合并不影响双特异性抗体与PcrV结合的能力。因此，该示例性的双特异性抗体(STS7B15921M)能够同时结合Psl和PcrV。其他双特异性抗体也表现出同时结合Psl和PcrV的能力(数据未显示)。
通过Biacore表征优化后的双特异性抗体与PcrV的结合
在25℃，使用实时生物传感器表面等离子体共振技术(BIACORETMT200)测定选定的双特异性抗体与PcrV的结合亲和力(Kd)。简言之，所述抗体首先被捕获在CM5芯片上，形成抗体表面。系列稀释的PcrV蛋白注入抗体表面。实时监测抗原与抗体的结合和结合复合物的解离。使用BIA评估软件进行动力学分析，确定平衡解离常数(Kd)和解离速率常数。
结果如表8所示，双特异性抗体STS7B11201S、STS7B159S与PcrV的Kon、Koff和Kd均与7B1相当，说明与单特异性抗体7B1相比，双特异性抗体形式与PcrV的结合并没有发生改变。
表8：抗PcrV/Psl双特异性抗体与单特异性抗体的结合与解离动力学比较
通过ELISA表征优化后的双特异性抗体与Psl的结合
在ELISA实验中，用PAO1包被96孔板，4℃孵育过夜。第二天，PBST洗涤后，用200μLPBS-牛奶封闭1小时，再用PBST洗涤后，加入相应的抗体(双特异性抗体STS7B11201S、STSB159S；抗Psl抗体P59、3F1201；对照双特异性抗体MedI3902；对照抗Psl抗体Psl0096)并在37℃孵育1小时。用0.1％TBST洗涤板6次，然后向每孔加入100μl山羊抗人Fc抗体-AP(用PBS 1:3000稀释)，孵育1小时。用0.1％TBST洗涤6次后，每孔加入50μl pNPP(对硝基磷酸苯酯)，37℃显色10-20min，然后用NaOH终止反应。随后，用酶标仪在410nm波长处读取比色信号。分析ELISA结果(OD410)并计算EC50值。
结果如表8D所示，双特异性抗体STS7B11201S、STSB159S的PAO1结合动力学与单特异性抗Psl抗体相似，与对照双特异性抗体MedI3902相当。
表征双特异性抗体的非特异性结合
通过测量与BV粒子和PcrV/Psl阴性293细胞的交叉反应性，表征优化后的双特异性抗体的非特异性结合。
与BV粒子的交叉反应性：根据先前描述的方法(见I,et al,2012,mAbs 4:6,753–760)，用ELISA法检测双特异性抗体STS7B15923S和STS7B159S与BV粒子的交叉反应性。Lenzilumab作为阳性对照，Tildrakizumab作为阴性对照。BV ELISA评分是使用抗体进行测定获得的OD值与未添加抗体进行测定获得的OD值之间的比值。结果如图8E所示，阳性对照与BV粒子具有高水平的结合。与此相反，双特异抗体STS7B15923S和STS7B159S表现出低水平的结合，与阴性对照相似。
与293T细胞的交叉反应性：用FACS检测双特异性抗体STS7B159S和STS7B15923S与PcrV和Psl阴性293细胞的交叉反应性。抗NPHS2抗体作为阳性对照(PC)，未添加抗体作为阳性对照(NC)。结果如图8F-8G所示，阳性对照抗NPHS2抗体表现出高水平的293细胞结合，双特异性抗体STS7B159S和STS7B15923S则表现出与阴性对照(不加任何抗体)相似的低水平的293细胞结合。
综上所述，这些结果表明双特性抗体STS7B159S和STS7B15923S具有低非特异性结合。
实施例9：表征识别PcrV和Psl的双特异性抗体的体内活性
评估优化后的双特异性抗体提高腹腔感染模型小鼠存活率的能力，与对照双特异性抗体MedI3902进行比较。
提高腹腔感染模型小鼠的存活率
评估优化后的双特异性抗体STS7B15925S、STSB15921S、STS7B11201S、STS7B15923S或STS7B159S，与MedI3902进行比较。HIV-10E8作为阴性对照。
在预防性模型中，在感染前24小时向7-8周龄BALB/c小鼠(维通利华)腹腔内注射双特异性抗体STS7B15925S、STSB15921S、STS7B11201S、STS7B15923S或STS7B159S，与MedI3902进行比较评估。具体地，在中等剂量设置下，向小鼠施用STS7B15925S、STS7B15921S、STS7B11201S或MedI3902(以6mg/kg、2mg/kg或0.667mg/kg的抗体剂量)。为诱导腹腔内感染，向BALB/c小鼠腹腔内接种悬浮在300μl接种液中的4倍致死剂量(4×LD90＝9×105CFU)的铜绿假单胞菌(O6-57/66菌株)。在感染后的7天内记录小鼠存活率。结果如图9A所示。
在高抗体剂量试验组中，向小鼠施用STS7B159S、STS7B15923S、STS7B11201S或MedI3902(以60mg/kg、20mg/kg、6mg/kg或2mg/kg的抗体剂量)。为诱导腹腔内感染，向BALB/c小鼠腹腔内接种悬浮在300μl接种液中的4倍致死剂量(4×LD90＝9×105CFU)的铜绿假单胞菌(O6-57/66菌株)。在感染后的7天内记录小鼠存活率。结果如图9B所示。
结果如图9A和9B所示，在不同抗体剂量下，与对照双特异性抗体MedI3902相比，STS7B15925S、STSB15921S、STS7B11201S、STS7B15923S和STS7B159S表现出相似的小鼠存活率改善，没有统计学意义上的显著差异，且与阴性对照HIV-10E8相比，表现出具有统计学差异的更高的小鼠存活率改善(p<0.005)。这些结果表明，本文所披露的识别PcrV和Psl的双特异性抗体用于中和铜绿假单胞菌的临床潜力。
提高腹腔感染模型小鼠的存活率
评估双特异性抗体STS7B15925(含抗PcrV抗体7B1的Fab和抗Psl抗体P5925的scFv)、STS7B1H9(含抗PcV抗体7B1的Fab和抗Psl抗体7H9的scFv)、STS7B112(含抗PcrV抗体7B1的Fab和抗Psl抗体3F12的scFv)提高腹腔感染模型小鼠存活率的能力，与对照双特异性抗体MedI3902进行比较。HIV-10E8作为阴性对照。
在预防性模型中，在感染前24小时向7-8周龄BALB/c小鼠(维通利华)腹腔内注射STS7B15925、STS7B1H9、STS7B112或MedI3902。具体地，小鼠给予STS7B15925、STS7B1H9、STS7B112或MedI3902(0.44mg/kg或0.147mg/kg)。为诱导腹腔内感染，向BALB/c小鼠腹腔内接种悬浮在300μl接种液中的6倍致死剂量(6×LD90＝1.2×106CFU)的铜绿假单胞菌(O6-57/66菌株)。在感染后的7天内记录小鼠存活率。
结果如图9C所示，在0.44mg/kg和0.147mg/kg的抗体剂量设置下，与STS7B1H9或STS7B112相比，双特异性抗体STS7B15925表现出更高的小鼠存活率改善，且与对照双特异性抗体MeDI3902相比，表现出相当的小鼠存活率改善。
通过在VH、VL或Fc变体中引入变体进一步对STS7B15925和STS7B112进行优化，得到STS7B15921M、STS7B15925M、STS7B11201M。重复进行实验，在5倍致死剂量(5×LD90＝1×106CFU)的铜绿假单胞菌(O6-57/66菌株)感染前24小时，向小鼠腹腔内注射STS7B15921M、STS7B15925M、STS7B11201M或MedI3902(0.665mg/kg)。
结果如图9D所示，在0.665mg/kg的抗体剂量设置下，与对照双特异性抗体MedI3902相比，优化后的双特异性抗体STS7B15921M和STS7B11201M表现出相当的小鼠存活率改善，且优化后的双特异性抗体STS7B15925M与对照双特异性抗体MedI3902相比，表现出具有统计学差异的更高的小鼠存活率改善(p<0.005)。
实施例10：比较识别PcrV和Psl的双特异性抗体与识别PcrV的抗体或识别Psl的抗体的体外活性
通过抑制RBCs和A549细胞裂解的能力来确定抗PcrV/Psl双特异性抗体抑制PcrV功能的能力，通过促进调理吞噬杀伤(OPK)和抑制吸附的能力来确定双特异性抗体抑制Psl功能的能力，与抗PcrV抗体或抗Psl抗体进行比较。
通过A549 CTX试验分析对PcrV的活性
A549 CTX试验的操作如实施例7所述。结果如图10A所示，STS7B15925对A549细胞裂解的抑制与MedI3902相当，也与7B1或V2L2-MD相当，表明双特异性抗体STS7B15925具有与单特异性抗PcrV抗体相当的抑制PcrV的能力。
通过RBC裂解抑制分析对PcrV的活性
RBC裂解抑制实验的操作如实施例7所述。结果如图10B所示，STS7B15925对RBC裂解的抑制与MedI3902相当，也与7B1或V2L2-MD相当，说明双特异性抗体STS7B15925具有与单特异性抗PcrV抗体相当的抑制PcrV的能力。
通过调理吞噬杀伤(OPK)分析对Psl的活性
OPK实验的操作如实施例7所述。结果如图10C所示，STS7B15925介导的OPK与MedI3902相当，也与P5925和Psl0096相当，说明双特异性抗体STS7B15925具有与单特异性抗Psl抗体相当的抑制Psl的能力。
通过抑制铜绿假单胞菌与A549细胞的吸附分析对Psl的活性
吸附实验的操作如实施例7所述。结果如图10D所示，STS7B15925的吸附抑制与MedI3902相当，也与P5925或Psl0096相当，说明双特异性抗体STS7B15925具有与单特异性抗Psl抗体相当的抑制Psl的能力。
实施例11：比较识别PcrV和Psl的双特异性抗体与识别PcrV的抗体和识别Psl的抗体组合的体内活性
在腹腔感染模型中小鼠存活率的提高，证明了识别PcrV和Psl的双特异性抗体预防性中和假单胞菌感染的能力，与抗PcrV和抗Psl抗体的组合进行比较。
抗PcrV抗体、抗Psl抗体的组合或其联合应用提高腹腔感染模型小鼠的存活率
在不同剂量浓度下，评估双特异性抗体STS7B15925(包含抗PcrV抗体7B1的Fab和抗Psl抗体P5925的scFv)提高腹腔感染模型小鼠存活率的能力，与抗PcrV抗体7B1和抗Psl抗体P5925的组合进行比较。HIV-10E8作为阴性对照。
在预防性模型中，在感染前24小时向7-8周龄BALB/c小鼠(维通利华)腹腔内注射STS7B15925或抗PcrV抗体和抗Psl抗体的组合(等于提供了相同数量的结合位点)。具体地，在高抗体剂量设置下，向小鼠施用STS7B15925(1.33mg/kg)；或7B1和P5925的组合(每个1mg/kg，共2mg/kg)。在中等抗体剂量设置下，向小鼠施用STS7B15925(0.266mg/kg)；或7B1和P5925的组合(每个0.2mg/kg，共0.4mg/kg)。在低抗体剂量设置下，向小鼠施用STS7B15925(0.0532mg/kg)；或7B1和P5925的组合(每个0.04mg/kg，共0.08mg/kg)。为诱导腹腔内感染，向BALB/c小鼠腹腔内接种悬浮在300μl接种液中的5倍致死剂量(5×LD90＝1×106CFU)的铜绿假单胞菌(O6-57/66菌株)。在感染后的7天内记录小鼠存活率。
结果如图11所示，在中等和高抗体剂量设置下，STS7B15925与7B1和P5925的组合相比，表现出具有统计学差异的更高的小鼠存活率改善(p<0.01)。这些结果表明，本文所披露的识别PcrV和Psl的双特异性抗体用于中和铜绿假单胞菌的临床潜力。
实施例12：比较识别PcrV和Psl的双特异性抗体与识别不同PcrV表位的抗体和识别Psl的抗体组合的体内活性
在腹腔感染模型中小鼠存活率的提高，证明了识别PcrV和Psl的双特异性抗体预防性中和假单胞菌感染的能力，与抗PcrV和抗Psl抗体的组合进行比较。
双特异性抗体、抗PcrV抗体和抗Psl抗体的组合提高腹腔感染模型小鼠的存活率
不同剂量浓度下，评估双特异性抗体STS7B15925(包含抗PcrV抗体7B1的Fab和抗Psl抗体P5925的scFv)提高腹腔感染模型小鼠存活率的能力，与两个抗PcrV抗体7B1和9C7(与非重叠表位结合)和抗Psl抗体P5925的组合进行比较。HIV-10E8作为阴性对照。
在预防性模型中，在感染前24小时向7-8周龄BALB/c小鼠(维通利华)腹腔内注射STS7B15925或抗PcrV抗体和抗Psl抗体的组合(等于提供了相同数量的结合位点)。具体地，在高抗体剂量设置下，向小鼠施用STS7B15925(1.33mg/kg)；或7B1、9C7和P5925的组合(每个0.67mg/kg，共2mg/kg)。在中等抗体剂量设置下，向小鼠施用STS7B15925(0.266mg/kg)；或7B1、9C7和P5925的组合(每个0.133mg/kg，共0.4mg/kg)。在低抗体剂量设置下，向小鼠施用STS7B15925(0.0532mg/kg)；或7B1、9C7和P5925的组合(每个0.027mg/kg，共0.08mg/kg)。为诱导腹腔内感染，向BALB/c小鼠腹腔内接种悬浮在300μl接种液中的5倍致死剂量(5×LD90＝1×106CFU)的铜绿假单胞菌(O6-57/66菌株)。在感染后的7天内记录小鼠存活率。
结果如图12A所示，在高抗体剂量设置下，双特异性抗体STS7B15925表现出更高的小鼠存活率改善，与7B1、9C7和P5925的组合相比，在中等抗体剂量设置下，STS7B15925与7B1、9C7和P5925的组合相比，表现出具有统计学差异的更高的小鼠存活率改善(p<0.05)。
为了进一步比较双特异性抗体与抗PcrV抗体和抗Psl抗体的效力，重复进行实验，在以更高剂量(6倍致死剂量(6×LD90＝1.2×106CFU))的铜绿假单胞菌(O6-57/66菌株)感染前24小时，向小鼠施用相同摩尔量的STS7B15925(0.44mg/kg)；或7B1、9C7和P5925的组合(共0.67mg/kg，以1:1:1或1:1:2的比例)。在感染后的7天内记录小鼠存活率。
结果如图12B所示，在更高剂量(6×LD90＝1.2×106CFU)的铜绿假单胞菌(57/66)感染的腹腔感染模型中，与任何比例下的7B1、9C7和P5925组合相比，STS7B15925表现出具有统计学差异的更高的小鼠存活率改善(p<0.05)。
实施例13：使用识别PcrV和Psl的双特异性抗体、抗PcrV和抗Psl抗体的组合治疗铜绿假单胞菌感染
在腹腔感染模型中小鼠存活率的提高，证明了识别PcrV和Psl的双特异性抗体预防性中和假单胞菌感染的能力，与抗PcrV抗体、抗Psl抗体或其组合进行比较。
双特异性抗体、抗PcrV抗体、抗Psl抗体或其组合提高腹腔感染模型小鼠的存活率
评估双特异性抗体STS7B15925(包含抗PcrV抗体7B1的Fab和抗Psl抗体P5925的scFv)提高腹腔感染模型小鼠存活率的能力，与两个抗PcrV抗体7B1和9C7(与非重叠表位结合)和抗Psl抗体P5925的组合，抗PcrV抗体7B1和抗Psl抗体的组合进行比较，以及与单独施用7B1或P5925进行比较。HIV-10E8作为阴性对照。
在预防性模型中，在感染前24小时向7-8周龄BALB/c小鼠(维通利华)腹腔内注射STS7B15925、抗Psl抗体、抗PcrV抗体或其组合(等于提供了相同数量的结合位点)。具体地，向小鼠施用STS7B15925(0.44mg/kg)，7B1、9C7和P5925的组合(每个0.22mg/kg，共0.66mg/kg)，7B1和P5925的组合(每个0.335mg/kg，共0.67mg/kg)，单独施用7B1(0.67mg/kg)或P5925(0.67mg/kg)。为诱导腹腔内感染，向BALB/c小鼠腹腔内接种悬浮在300μl接种液中的5倍致死剂量(5×LD90＝1×106CFU)的铜绿假单胞菌(O6-57/66菌株)。在感染后的7天内记录小鼠存活率。
结果如图13所示，所述双特异性抗体STS7B15925表现出更高的小鼠存活率改善，与7B1、9C7和P5925的组合相比，STS7B15925与单独施用7B1、单独施用P5925或7B1和P5925的组合相比，表现出具有统计学差异的更高的小鼠存活率改善(p<0.05)。
序列表
<110> 舒泰神（北京）生物制药股份有限公司
<120> 特异性识别假单胞菌PCRV或PSL抗原的抗体组合以及双特异性抗体
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Gly
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Gly
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Gly
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<221> 变体
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Gly
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Gly
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<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 36
Gln Gln Tyr Gly Leu Gln Pro Ile Thr
1 5
<210> 37
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 37
Gln Gln Tyr Gly Asn Glu Pro Ile Thr
1 5
<210> 38
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<220>
<221> 变体
<222> 4
<223> Xaa = Ser or Cys
<220>
<221> 变体
<222> 5
<223> Xaa = Thr, Gly, Asp, Tyr, Gln, or Ala
<220>
<221> 变体
<222> 6
<223> Xaa = Ser, Asp, Asn, Glu, Leu, Ala, or Tyr
<220>
<221> 变体
<222> 7
<223> Xaa = Ser, Thr, Tyr, or Ala
<220>
<221> 变体
<222> 8
<223> Xaa = Ser, His, Gln, Ala, Arg, Lys, Gly, Glu, Tyr, or Asp
<220>
<221> 变体
<222> 9
<223> Xaa = His or Cys
<220>
<221> 变体
<222> 11
<223> Xaa = Phe or Tyr
<400> 38
Gly Arg Phe Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Phe Xaa Arg Ala Val Tyr Gly
1 5 10 15
Met Asp Val
<210> 39
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<220>
<221> 变体
<222> 5
<223> Xaa = Asp or Asn
<220>
<221> 变体
<222> 7
<223> Xaa = Thr or Gly
<400> 39
Arg Ile Asn Glu Xaa Glu Xaa Ser Ile Ser Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 40
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<220>
<221> 变体
<222> 6
<223> Xaa = Ser or Ala
<400> 40
Asp Gly Pro Tyr Asp Xaa Leu Asp Ile
1 5
<210> 41
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<220>
<221> 变体
<222> 5
<223> Xaa = Ser or Gly
<220>
<221> 变体
<222> 7
<223> Xaa = Ser or Arg
<220>
<221> 变体
<222> 8
<223> Xaa = Ser or Asn
<400> 41
Arg Ala Ser Gln Xaa Val Xaa Xaa Asn Leu Ala
1 5 10
<210> 42
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<220>
<221> 变体
<222> 1
<223> Xaa = Asp or His
<400> 42
Xaa Ala Ser Ser Arg Ala Thr
1 5
<210> 43
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<220>
<221> 变体
<222> 5
<223> Xaa = Ser or Leu
<220>
<221> 变体
<222> 6
<223> Xaa = Ser or Gln
<220>
<221> 变体
<222> 8
<223> Xaa = Leu or Ile
<400> 43
Gln Gln Tyr Gly Xaa Xaa Pro Xaa Thr
1 5
<210> 44
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<220>
<221> 变体
<222> 5
<223> Xaa = Asp or Asn
<220>
<221> 变体
<222> 7
<223> Xaa = Thr, Gly, or Arg
<400> 44
Arg Ile Asn Glu Xaa Glu Xaa Ser Ile Ser Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 45
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<220>
<221> 变体
<222> 6
<223> Xaa = Ser, Ala, or Thr
<220>
<221> 变体
<222> 7
<223> Xaa = Phe or Leu
<400> 45
Asp Gly Pro Tyr Asp Xaa Xaa Asp Ile
1 5
<210> 46
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<220>
<221> 变体
<222> 5
<223> Xaa = Ser, Gly, or Asn
<220>
<221> 变体
<222> 7
<223> Xaa = Ser, Arg, or Lys
<220>
<221> 变体
<222> 8
<223> Xaa = Ser or Asn
<400> 46
Arg Ala Ser Gln Xaa Val Xaa Xaa Asn Leu Ala
1 5 10
<210> 47
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<220>
<221> 变体
<222> 5
<223> Xaa = Ser, Leu, or Asn
<220>
<221> 变体
<222> 6
<223> Xaa = Ser, Gln, or Glu
<220>
<221> 变体
<222> 8
<223> Xaa = Leu or Ile
<400> 47
Gln Gln Tyr Gly Xaa Xaa Pro Xaa Thr
1 5
<210> 48
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 48
Ser Ser Gly Asp Tyr Trp Gly
1 5
<210> 49
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 49
Asp Tyr Tyr Trp Ser
1 5
<210> 50
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 50
Ile His Ser Val His
1 5
<210> 51
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 51
Ser Asp Ser Tyr Trp Gly
1 5
<210> 52
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 52
Ser Ile His Asn Gln Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Gly
1 5 10 15
<210> 53
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 53
Ser Ile His Asn Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Gly
1 5 10 15
<210> 54
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 54
Tyr Ile His Ser Ser Gly Ser Thr Asp Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser
1 5 10 15
<210> 55
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 55
Thr Ile Ile Ser Ser Gly Thr Thr Thr Thr Tyr Ala Gln Ser Phe Gln
1 5 10 15
Asp
<210> 56
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 56
Thr Ile Tyr Tyr Asp Gly Thr Thr Phe Tyr Asn Pro Ser Leu Arg Ser
1 5 10 15
<210> 57
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 57
Gln Phe Gly Ser Glu Thr Tyr Tyr Thr Gly Ile Asp Pro
1 5 10
<210> 58
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 58
Gln Phe Gly Ser Glu Thr Tyr Tyr Asn Gly Ile Gln Pro
1 5 10
<210> 59
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 59
Gln Phe Gly Ser Glu Thr Tyr Tyr Pro Gly Ile Asp Pro
1 5 10
<210> 60
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 60
Gln Phe Gly Ser Glu Thr Tyr Tyr Asn Gly Ile Asp Pro
1 5 10
<210> 61
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 61
Ala Gln Gly Gly Ser Arg Arg Thr Leu Asp Tyr
1 5 10
<210> 62
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 62
Asp Gly Asp Ser
1
<210> 63
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 63
Asp Gly Thr Ser
1
<210> 64
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 64
His Glu Ser Gly Gln Gln Leu Val Asn Asn Trp Phe Asp Pro
1 5 10
<210> 65
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 65
Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp
1 5 10 15
<210> 66
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 66
Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser Arg Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp
1 5 10 15
<210> 67
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 67
Arg Ala Ser Gln Thr Ile Ser Ser Tyr Leu Asn
1 5 10
<210> 68
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 68
Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp Leu Ala
1 5 10
<210> 69
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 69
Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asn Leu Ala
1 5 10
<210> 70
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 70
Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser
1 5
<210> 71
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 71
Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser
1 5
<210> 72
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 72
His Ala Ser Thr Leu Glu Ser
1 5
<210> 73
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 73
Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr
1 5
<210> 74
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 74
Met Gln Ala Leu Gln Thr Pro Tyr Thr
1 5
<210> 75
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 75
Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Tyr Thr
1 5
<210> 76
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 76
Leu Gln Ala Asn Ser Leu Pro His Thr
1 5
<210> 77
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 77
Leu Gln Ala Phe Ser Leu Pro His Thr
1 5
<210> 78
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 78
Leu Gln Ala Ser Ser Leu Pro His Thr
1 5
<210> 79
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 79
Leu Gln Ala Lys Ser Leu Pro His Thr
1 5
<210> 80
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 80
Gln Gln Ser Gly Asp Ser Leu Val Thr
1 5
<210> 81
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<220>
<221> 变体
<222> 5
<223> Xaa = Ser or Gln
<400> 81
Ser Ile His Asn Xaa Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Gly
1 5 10 15
<210> 82
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<220>
<221> 变体
<222> 9
<223> Xaa = Thr, Asn, or Pro
<220>
<221> 变体
<222> 12
<223> Xaa = Asp or Gln
<400> 82
Gln Phe Gly Ser Glu Thr Tyr Tyr Xaa Gly Ile Xaa Pro
1 5 10
<210> 83
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<220>
<221> 变体
<222> 10
<223> Xaa = Asn or Arg
<400> 83
Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser Xaa Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp
1 5 10 15
<210> 84
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<220>
<221> 变体
<222> 3
<223> Xaa = Asp or Thr
<400> 84
Asp Gly Xaa Ser
1
<210> 85
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<220>
<221> 变体
<222> 4
<223> Xaa = Asn, Phe, Ser, or Lys
<400> 85
Leu Gln Ala Xaa Ser Leu Pro His Thr
1 5
<210> 86
<211> 294
<212> PRT
<213> 铜绿假单胞菌
<400> 86
Met Glu Val Arg Asn Leu Asn Ala Ala Arg Glu Leu Phe Leu Asp Glu
1 5 10 15
Leu Leu Ala Ala Ser Ala Ala Pro Ala Ser Ala Glu Gln Glu Glu Leu
20 25 30
Leu Ala Leu Leu Arg Ser Glu Arg Ile Val Leu Ala His Ala Gly Gln
35 40 45
Pro Leu Ser Glu Ala Gln Val Leu Lys Ala Leu Ala Trp Leu Leu Ala
50 55 60
Ala Asn Pro Ser Ala Pro Pro Gly Gln Gly Leu Glu Val Leu Arg Glu
65 70 75 80
Val Leu Gln Ala Arg Arg Gln Pro Gly Ala Gln Trp Asp Leu Arg Glu
85 90 95
Phe Leu Val Ser Ala Tyr Phe Ser Leu His Gly Arg Leu Asp Glu Asp
100 105 110
Val Ile Gly Val Tyr Lys Asp Val Leu Gln Thr Gln Asp Gly Lys Arg
115 120 125
Lys Ala Leu Leu Asp Glu Leu Lys Ala Leu Thr Ala Glu Leu Lys Val
130 135 140
Tyr Ser Val Ile Gln Ser Gln Ile Asn Ala Ala Leu Ser Ala Lys Gln
145 150 155 160
Gly Ile Arg Ile Asp Ala Gly Gly Ile Asp Leu Val Asp Pro Thr Leu
165 170 175
Tyr Gly Tyr Ala Val Gly Asp Pro Arg Trp Lys Asp Ser Pro Glu Tyr
180 185 190
Ala Leu Leu Ser Asn Leu Asp Thr Phe Ser Gly Lys Leu Ser Ile Lys
195 200 205
Asp Phe Leu Ser Gly Ser Pro Lys Gln Ser Gly Glu Leu Lys Gly Leu
210 215 220
Ser Asp Glu Tyr Pro Phe Glu Lys Asp Asn Asn Pro Val Gly Asn Phe
225 230 235 240
Ala Thr Thr Val Ser Asp Arg Ser Arg Pro Leu Asn Asp Lys Val Asn
245 250 255
Glu Lys Thr Thr Leu Leu Asn Asp Thr Ser Ser Arg Tyr Asn Ser Ala
260 265 270
Val Glu Ala Leu Asn Arg Phe Ile Gln Lys Tyr Asp Ser Val Leu Arg
275 280 285
Asp Ile Leu Ser Ala Ile
290
<210> 87
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 87
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
1 5 10 15
Gly Gly Gly
<210> 88
<211> 107
<212> PRT
<213> 人类
<400> 88
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
1 5 10 15
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
20 25 30
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
35 40 45
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
50 55 60
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
65 70 75 80
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
85 90 95
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
100 105
<210> 89
<211> 330
<212> PRT
<213> 人类
<400> 89
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
225 230 235 240
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
<210> 90
<211> 327
<212> PRT
<213> 人类
<400> 90
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
115 120 125
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
130 135 140
Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp
145 150 155 160
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe
165 170 175
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
180 185 190
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu
195 200 205
Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
210 215 220
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys
225 230 235 240
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
245 250 255
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
260 265 270
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
275 280 285
Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser
290 295 300
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
305 310 315 320
Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
325
<210> 91
<211> 128
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 91
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Asn
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<223> 合成构建体
<400> 113
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Asp Arg Val Ala Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Thr Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Leu Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys
100 105
<210> 120
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 120
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Ala Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr His Ala Ser Thr Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Ala Asn Ser Leu Pro His
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 121
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 121
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Ala Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr His Ala Ser Thr Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Ala Phe Ser Leu Pro His
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 122
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 122
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Ala Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr His Ala Ser Thr Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Ala Ser Ser Leu Pro His
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 123
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 123
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Ala Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr His Ala Ser Thr Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Ala Lys Ser Leu Pro His
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 124
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 124
Glu Thr Thr Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asn
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Gly Asp Ser Leu Val
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 125
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<220>
<221> 变体
<222> 5
<223> Xaa = Ser, Lys, or Gln
<400> 125
Ser Ile His Asn Xaa Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Gly
1 5 10 15
<210> 126
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<220>
<221> 变体
<222> 9
<223> Xaa = Asn, Ser, Val, Thr, or Pro
<220>
<221> 变体
<222> 12
<223> Xaa = Asp, Tyr, Cys, His, Ser, Arg, Ala, Glu, Gly, Lys, Trp,Val, or Gln
<400> 126
Gln Phe Gly Ser Glu Thr Tyr Tyr Xaa Gly Ile Xaa Pro
1 5 10
<210> 127
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<220>
<221> 变体
<222> 10
<223> Xaa = Asn, Ala, Val, Phe, Arg, Gly, His, Gln, Trp, or Pro
<400> 127
Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser Xaa Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp
1 5 10 15
<210> 128
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<220>
<221> 变体
<222> 8
<223> Xaa = Arg or Tyr
<400> 128
Met Gln Ala Leu Gln Thr Pro Xaa Thr
1 5
<210> 129
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<220>
<221> 变体
<222> 1
<223> Xaa = Asp, Tyr, or Asn
<220>
<221> 变体
<222> 2
<223> Xaa = Gly or Ala
<220>
<221> 变体
<222> 3
<223> Xaa = Asp or Thr
<220>
<221> 变体
<222> 4
<223> Xaa = Ser, Ala, or Thr
<400> 129
Xaa Xaa Xaa Xaa
1
<210> 130
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<220>
<221> 变体
<222> 4
<223> Xaa = Asn, Asp, Tyr, Phe, Pro, Gly, Lys, His, Ala, Cys, Glu,Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp, or Leu
<400> 130
Leu Gln Ala Xaa Ser Leu Pro His Thr
1 5
<210> 131
<211> 217
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 131
Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
1 5 10 15
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
20 25 30
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
35 40 45
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
50 55 60
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
65 70 75 80
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
85 90 95
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
100 105 110
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
115 120 125
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
130 135 140
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
145 150 155 160
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
165 170 175
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
180 185 190
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
195 200 205
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
210 215
<210> 132
<211> 217
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 132
Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
1 5 10 15
Pro Lys Asp Thr Leu Tyr Ile Thr Arg Glu Pro Glu Val Thr Cys Val
20 25 30
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
35 40 45
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
50 55 60
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
65 70 75 80
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
85 90 95
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
100 105 110
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
115 120 125
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
130 135 140
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
145 150 155 160
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
165 170 175
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
180 185 190
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
195 200 205
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
210 215
<210> 133
<211> 217
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 133
Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
1 5 10 15
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
20 25 30
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
35 40 45
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
50 55 60
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
65 70 75 80
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
85 90 95
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
100 105 110
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
115 120 125
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
130 135 140
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
145 150 155 160
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
165 170 175
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
180 185 190
Phe Ser Cys Ser Val Leu His Glu Ala Leu His Ser His Tyr Thr Gln
195 200 205
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
210 215
<210> 134
<211> 98
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 134
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Lys Val
<210> 135
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 135
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Leu Ser Ser Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 136
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 136
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Leu Ser Ser Tyr Pro Leu
85 90 95
Ser Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 137
<211> 724
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 137
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Asn
20 25 30
Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Asp Trp Val
35 40 45
Ser Val Ile Ser Glu Ser Gly Gly Ser Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Ser Thr Ser Arg Asp Asn Ser Lys Ser Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Asp Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Gly Arg Phe Ser Thr Leu Ser Ser His Phe Phe Arg Ala Val
100 105 110
Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Ala Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
130 135 140
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
145 150 155 160
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
165 170 175
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
180 185 190
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
195 200 205
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
210 215 220
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
225 230 235 240
Ser Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Thr Ser
245 250 255
Glu Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Val Ser Asp
260 265 270
Tyr Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Cys Leu Glu Trp
275 280 285
Ile Gly Tyr Ile His Ser Ser Gly Ser Thr Asp Tyr Asn Pro Ser Leu
290 295 300
Lys Ser Arg Leu Thr Ile Ser Gly Asp Ala Ala Lys Lys Gln Phe Ser
305 310 315 320
Leu Asn Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
325 330 335
Ala Arg Ala Gln Gly Gly Ser Arg Arg Thr Leu Asp Tyr Trp Gly Gln
340 345 350
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
355 360 365
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Ile Val Met
370 375 380
Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Ala
385 390 395 400
Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Thr Ile Ser Ser Tyr Leu Asn Trp Tyr
405 410 415
Gln Leu Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser
420 425 430
Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly
435 440 445
Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala
450 455 460
Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Tyr Thr Phe Gly Cys
465 470 475 480
Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
485 490 495
Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu
500 505 510
Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu
515 520 525
Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser
530 535 540
His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu
545 550 555 560
Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr
565 570 575
Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn
580 585 590
Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro
595 600 605
Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln
610 615 620
Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val
625 630 635 640
Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val
645 650 655
Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro
660 665 670
Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr
675 680 685
Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val
690 695 700
Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu
705 710 715 720
Ser Pro Gly Lys
<210> 138
<211> 724
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 138
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Asn
20 25 30
Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Asp Trp Val
35 40 45
Ser Val Ile Ser Glu Ser Gly Gly Ser Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Ser Thr Ser Arg Asp Asn Ser Lys Ser Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Asp Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Gly Arg Phe Ser Thr Leu Ser Ser His Phe Phe Arg Ala Val
100 105 110
Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Ala Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
130 135 140
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
145 150 155 160
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
165 170 175
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
180 185 190
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
195 200 205
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
210 215 220
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
225 230 235 240
Ser Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Thr Ser
245 250 255
Glu Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Val Ser Asp
260 265 270
Tyr Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Cys Leu Glu Trp
275 280 285
Ile Gly Tyr Ile His Ser Ser Gly Ser Thr Asp Tyr Asn Pro Ser Leu
290 295 300
Lys Ser Arg Leu Thr Ile Ser Gly Asp Ala Ala Lys Lys Gln Phe Ser
305 310 315 320
Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
325 330 335
Ala Arg Ala Gln Gly Gly Ser Arg Arg Thr Leu Asp Tyr Trp Gly Gln
340 345 350
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
355 360 365
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Ile Val Met
370 375 380
Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Ala
385 390 395 400
Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Thr Ile Ser Ser Tyr Leu Asn Trp Tyr
405 410 415
Gln Leu Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser
420 425 430
Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly
435 440 445
Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala
450 455 460
Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Tyr Thr Phe Gly Cys
465 470 475 480
Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
485 490 495
Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu
500 505 510
Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu
515 520 525
Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser
530 535 540
His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu
545 550 555 560
Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr
565 570 575
Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn
580 585 590
Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro
595 600 605
Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln
610 615 620
Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val
625 630 635 640
Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val
645 650 655
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Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
355 360 365
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser
370 375 380
Val Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Ala Cys Arg Ala Ser
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Gln Gly Ile Ser Ser Trp Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys
405 410 415
Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr His Ala Ser Thr Leu Glu Ser Gly Val
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Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
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<210> 150
<211> 716
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 150
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Gly Gly Gly Ser Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys
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<220>
<223> 合成构建体
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<210> 160
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<400> 160
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180 185 190
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195 200 205
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225 230 235 240
Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser
245 250 255
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260 265 270
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275 280 285
Ser Gly Gly Ser Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Ser
290 295 300
Thr Ser Arg Asp Asn Ser Lys Ser Thr Leu Tyr Leu Asp Met Asn Ser
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420 425 430
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580 585 590
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
595 600 605
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
610 615 620
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
625 630 635 640
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
645 650 655
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
660 665 670
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
675 680 685
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Leu His
690 695 700
Glu Ala Leu His Ser His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
705 710 715 720
Gly Lys
<210> 161
<211> 128
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 161
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Asn
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<220>
<223> 合成构建体
<400> 181
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<220>
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<220>
<223> 合成构建体
<400> 199
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Ser Val Ile Ser Glu Ser Gly Gly Ser Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val
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<220>
<223> 合成构建体
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Gly Gly Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val
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275 280 285
Lys Cys Leu Glu Leu Ile Gly Ser Ile His Asn Ser Gly Ser Thr Tyr
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<220>
<223> 合成构建体
<400> 201
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130 135 140
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
145 150 155 160
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
165 170 175
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
180 185 190
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
195 200 205
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
210 215 220
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
225 230 235 240
Ser Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser
245 250 255
Glu Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Pro Ile Thr Ser
260 265 270
Ser Gly Asp Tyr Trp Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Cys Leu
275 280 285
Glu Leu Ile Gly Ser Ile His Asn Gln Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro
290 295 300
Ser Leu Lys Gly Arg Val Thr Ile Ser Gly Asp Thr Ser Lys Asn Gln
305 310 315 320
Ile Ser Leu Arg Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr
325 330 335
Tyr Cys Ala Arg Gln Phe Gly Ser Glu Thr Tyr Tyr Thr Gly Ile Asp
340 345 350
Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly
355 360 365
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
370 375 380
Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
385 390 395 400
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser
405 410 415
Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
420 425 430
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro
435 440 445
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
450 455 460
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Ala
465 470 475 480
Leu Gln Thr Pro Tyr Thr Phe Gly Cys Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
485 490 495
<210> 202
<211> 499
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 202
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Asn
20 25 30
Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Asp Trp Val
35 40 45
Ser Val Ile Ser Glu Ser Gly Gly Ser Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
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65 70 75 80
Leu Asp Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys
85 90 95
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Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Ala Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
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130 135 140
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165 170 175
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
180 185 190
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
195 200 205
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210 215 220
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Gly Lys Thr Gly Gly Gly Gly Ser Gly
225 230 235 240
Gly Gly Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val
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Lys Pro Ser Glu Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Pro
260 265 270
Ile Thr Ser Ser Gly Asp Tyr Trp Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly
275 280 285
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290 295 300
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305 310 315 320
Lys Asn Gln Ile Ser Leu Arg Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr
325 330 335
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340 345 350
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355 360 365
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
370 375 380
Gly Gly Ser Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val
385 390 395 400
Thr Pro Gly Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu
405 410 415
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420 425 430
Gly Gln Ser Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser
435 440 445
Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
450 455 460
Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys
465 470 475 480
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485 490 495
Glu Ile Lys
<210> 203
<211> 496
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 203
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
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Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Asp Trp Val
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Ser Val Ile Ser Glu Ser Gly Gly Ser Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val
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65 70 75 80
Leu Asp Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys
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Leu Gln Thr Pro Tyr Thr Phe Gly Cys Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
485 490 495
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<211> 481
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 204
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Asn
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Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
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Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser
370 375 380
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435 440 445
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450 455 460
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465 470 475 480
Lys
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<211> 484
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 205
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Asn
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Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Asp Trp Val
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130 135 140
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Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
165 170 175
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
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195 200 205
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
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Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Gly Lys Thr Gly Gly Gly Gly Ser Gly
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Gly Gly Gly Ser Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys
245 250 255
Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Asp Thr
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Ser Thr Ile His Ser Val His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Cys
275 280 285
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Ser Thr Gly Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Phe Glu Asp Thr Ala
325 330 335
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340 345 350
Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
355 360 365
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser
370 375 380
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405 410 415
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435 440 445
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450 455 460
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Leu Glu Ile Lys
<210> 206
<211> 484
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 206
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Asn
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Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
165 170 175
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Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
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Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Gly Lys Thr Gly Gly Gly Gly Ser Gly
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Gly Gly Gly Ser Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys
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Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Asp Thr
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Ser Thr Ile His Ser Val His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Cys
275 280 285
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325 330 335
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Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
355 360 365
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser
370 375 380
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450 455 460
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Leu Glu Ile Lys
<210> 207
<211> 484
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 207
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
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Gly Gly Gly Ser Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys
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Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Asp Thr
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Ser Thr Ile His Ser Val His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Cys
275 280 285
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325 330 335
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355 360 365
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Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys
405 410 415
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450 455 460
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Leu Glu Ile Lys
<210> 208
<211> 490
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 208
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225 230 235 240
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245 250 255
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260 265 270
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275 280 285
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290 295 300
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305 310 315 320
Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ala Lys Gly Arg Phe
325 330 335
Ser Thr Leu Ser Ser His Phe Phe Arg Ala Val Tyr Gly Met Asp Val
340 345 350
Trp Gly Gln Gly Thr Ala Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser
355 360 365
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp
370 375 380
Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp
385 390 395 400
Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Tyr Leu
405 410 415
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420 425 430
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485 490
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<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<220>
<221> 变体
<222> 7
<223> Xaa = Ser or Arg
<400> 209
Arg Ala Ser Gln Gly Ile Xaa Ser Tyr Leu Ala
1 5 10
<210> 210
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<220>
<221> 变体
<222> 4
<223> Xaa = Ser, Asn, or Lys
<220>
<221> 变体
<222> 9
<223> Xaa = Ser or Thr
<400> 210
Gln Gln Leu Xaa Ser Tyr Pro Leu Xaa
1 5
<210> 211
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Synthetic Construct
<220>
<221> 变体
<222> 5
<223> Xaa = Asp, Asn, Ile, Leu, or Val
<220>
<221> 变体
<222> 7
<223> Xaa = Ser, Thr, Arg, Gly, or Asn
<400> 211
Arg Ile Asn Glu Xaa Glu Xaa Ser Ile Ser Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 212
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<220>
<221> 变体
<222> 5
<223> Xaa = Asn, Gly, Asp, or Ser
<220>
<221> 变体
<222> 7
<223> Xaa = Lys, Arg, Ser, Asn, or Thr
<220>
<221> 变体
<222> 8
<223> Xaa = Asn, Gly, Ser, or Asp
<400> 212
Arg Ala Ser Gln Xaa Val Xaa Xaa Asn Leu Ala
1 5 10
<210> 213
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<220>
<221> 变体
<222> 1
<223> Xaa = Asp, Asn, His, or Ala
<400> 213
Xaa Ala Ser Ser Arg Ala Thr
1 5
<210> 214
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<220>
<221> 变体
<222> 5
<223> Xaa = Ser, Thr, Glu, His, Asn, Ala, Asp, Met, or Leu
<220>
<221> 变体
<222> 6
<223> Xaa = Ser, Gln, Glu, Thr, Asp, Gly, His, Leu, Asn, Val, or Tyr
<220>
<221> 变体
<222> 8
<223> Xaa = Ile, Leu, or Val
<400> 214
Gln Gln Tyr Gly Xaa Xaa Pro Xaa Thr
1 5

Claims (23)

1.一种双特异性分子，包括特异性识别假单胞菌PcrV的第一抗原结合域和特异性识别假单胞菌Psl的第二抗原结合域，其中，
第一抗原结合域包含：
VH，所述VH包含：HC-CDR1，其氨基酸序列为SEQ ID NO:1，HC-CDR2，其氨基酸序列为SEQID NO:4，和HC-CDR3，其氨基酸序列为SEQ ID NO:6；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其氨基酸序列为SEQ ID NO:10，LC-CDR2，其氨基酸序列为SEQ ID NO:11，和LC-CDR3，其氨基酸序列为SEQ ID NO:12；以及，第二抗原结合域包含：
VH，所述VH包含：HC-CDR1，其氨基酸序列为SEQ ID NO:48，HC-CDR2，其氨基酸序列为SEQID NO:52，和HC-CDR3，其氨基酸序列为SEQ ID NO:57；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其氨基酸序列为SEQ ID NO:65，LC-CDR2，其氨基酸序列为SEQ ID NO:70，和LC-CDR3，其氨基酸序列为SEQ ID NO:74；或，
VH，所述VH包含：HC-CDR1，其氨基酸序列为SEQ ID NO:48，HC-CDR2，其氨基酸序列为SEQID NO:53，和HC-CDR3，其氨基酸序列为SEQ ID NO:60；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其氨基酸序列为SEQ ID NO:65，LC-CDR2，其氨基酸序列为SEQ ID NO:70，和LC-CDR3，其氨基酸序列为SEQ ID NO:74；或，
VH，所述VH包含：HC-CDR1，其氨基酸序列为SEQ ID NO:48，HC-CDR2，其氨基酸序列为SEQID NO:52，和HC-CDR3，其氨基酸序列为SEQ ID NO:59；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其氨基酸序列为SEQ ID NO:65，LC-CDR2，其氨基酸序列为SEQ ID NO:70，和LC-CDR3，其氨基酸序列为SEQ ID NO:74；或，
VH，所述VH包含：HC-CDR1，其氨基酸序列为SEQ ID NO:48，HC-CDR2，其氨基酸序列为SEQID NO:53，和HC-CDR3，其氨基酸序列为SEQ ID NO:58；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其氨基酸序列为SEQ ID NO:66，LC-CDR2，其氨基酸序列为SEQ ID NO:70，和LC-CDR3，其氨基酸序列为SEQ ID NO:74；或，
VH，所述VH包含：HC-CDR1，其氨基酸序列为SEQ ID NO:49，HC-CDR2，其氨基酸序列为SEQID NO:54，和HC-CDR3，其氨基酸序列为SEQ ID NO:61；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其氨基酸序列为SEQ ID NO:67，LC-CDR2，其氨基酸序列为SEQ ID NO:71，和LC-CDR3，其氨基酸序列为SEQ ID NO:75；或，
VH，所述VH包含：HC-CDR1，其氨基酸序列为SEQ ID NO:50，HC-CDR2，其氨基酸序列为SEQID NO:55，和HC-CDR3，其氨基酸序列为SEQ ID NO:62；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其氨基酸序列为SEQ ID NO:68，LC-CDR2，其氨基酸序列为SEQ ID NO:72，和LC-CDR3，其氨基酸序列为SEQ ID NO:76。
2.根据权利要求1中所述的双特异性分子，其中，
第一抗原结合域包含：
VH，其氨基酸序列为SEQ ID NO:91或161，或与氨基酸序列SEQ ID NO:91或161具有至少90％序列同源性的变体序列；以及VL，其氨基酸序列为SEQ ID NO:112或182，或与氨基酸序列SEQ ID NO:112或182具有至少90％序列同源性的变体序列；
以及，第二抗原结合域包含：
VH，其氨基酸序列为SEQ ID NO:103或173，或与氨基酸序列SEQ ID NO:103或173具有至少90％序列同源性的变体序列；以及VL，其氨基酸序列为SEQ ID NO:117或187，或与氨基酸序列SEQ ID NO:117或187具有至少90％序列同源性的变体序列；或，
VH，其氨基酸序列为SEQ ID NO:106或176，或与氨基酸序列SEQ ID NO:106或176具有至少90％序列同源性的变体序列；以及VL，其氨基酸序列为SEQ ID NO:117或187，或与氨基酸序列SEQ ID NO:117或187具有至少90％序列同源性的变体序列；或，
VH，其氨基酸序列为SEQ ID NO:105或175，或与氨基酸序列SEQ ID NO:105或175具有至少90％序列同源性的变体序列；以及VL，其氨基酸序列为SEQ ID NO:117或187，或与氨基酸序列SEQ ID NO:117或187具有至少90％序列同源性的变体序列；或，
VH，其氨基酸序列为SEQ ID NO:104或174，或与氨基酸序列SEQ ID NO:104或174具有至少90％序列同源性的变体序列；以及VL，其氨基酸序列为SEQ ID NO:118或188，或与氨基酸序列SEQ ID NO:118或188具有至少90％序列同源性的变体序列；或，
VH，其氨基酸序列为SEQ ID NO:107或177，或与氨基酸序列SEQ ID NO:107或177具有至少90％序列同源性的变体序列；以及VL，其氨基酸序列为SEQ ID NO:119或189，或与氨基酸序列SEQ ID NO:119或189具有至少90％序列同源性的变体序列；或，
VH，其氨基酸序列为SEQ ID NO:108或178，或与氨基酸序列SEQ ID NO:108或178具有至少90％序列同源性的变体序列；以及VL，其氨基酸序列为SEQ ID NO:119或189，或与氨基酸序列SEQ ID NO:119或189具有至少90％序列同源性的变体序列；或，
VH，其氨基酸序列为SEQ ID NO:109或179，或与氨基酸序列SEQ ID NO:109或179具有至少90％序列同源性的变体序列；以及VL，其氨基酸序列SEQ ID NO:120或190，或与氨基酸序列SEQ ID NO:120或190具有至少90％序列同源性的变体序列。
3.根据权利要求1-2中任一项所述的双特异性分子，其中：
第一抗原结合结构域是特异性识别PcrV的Fab臂，第二抗原结合结构域是特异性识别Psl的单链抗体(scFv)，其中所述分子进一步包含Fc区，该Fc区包含CH2和CH3结构域；以及
其中，scFv通过第一连接肽(L1)与Fab臂连接，并通过第二连接肽(L2)与Fc区连接；其中双特异性分子是二价的，可与PcrV和Psl中的每一个结合。
4.根据权利要求3中所述的双特异性分子，其中双特异性分子包含：
氨基酸序列SEQ ID NO:135，或与氨基酸序列SEQ ID NO:135具有至少90％序列同源性的变体序列；以及SEQ ID NOs:195-207中的任一氨基酸序列，或与SEQ ID NOs:195-207中任一氨基酸序列具有至少90％序列同源性的变体序列。
5.根据权利要求3中所述的双特异性分子，其中Fc区选自由IgGl、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgM、IgE和IgD的Fc区组成的组中。
6.根据权利要求5中所述的双特异性分子，其中Fc区包括可变Fc区。
7.根据权利要求5中所述的双特异性分子，其中Fc区是糖基化的。
8.根据权利要求5中所述的双特异性分子，其中Fc区是去糖基化的。
9.根据权利要求8中所述的双特异性分子，其中Fc区是岩藻糖基化减少的或是无岩藻糖基化。
10.根据权利要求6中所述的双特异性分子，其中可变的Fc区包括在位点239、282、289、297、312、324、330、335、337、339、356、359、361、383、384、398、400、440、422和442中的一个或多个位点上的取代，根据EU索引编号。
11.根据权利要求10中所述的双特异性分子，其中可变的Fc区包括在位点297的取代。
12.根据权利要求11中所述的双特异性分子，其中位点297上的取代是297Q。
13.根据权利要求1-2中任一项所述的双特异性分子，其中双特异性分子包括:SEQ IDNOs:137-152中任一氨基酸序列的嵌合重链，或与SEQ ID NOs:137-152中任一氨基酸序列具有至少90％序列同源性的变体序列；以及氨基酸序列SEQ ID NO:135的轻链，或与氨基酸序列SEQ ID NO:135具有至少90％序列同源性的变体序列。
14.一种药物组合物、制品或试剂盒，包括：
(i)特异性识别假单胞菌PcrV上的第一表位的抗原结合蛋白，以及
(ii)特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白；其中，
特异性识别假单胞菌PcrV上的第一表位的抗原结合蛋白包含：
VH，所述VH包含：HC-CDR1，其氨基酸序列为SEQ ID NO:1，HC-CDR2，其氨基酸序列为SEQID NO:4，和HC-CDR3，其氨基酸序列为SEQ ID NO:6；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其氨基酸序列为SEQ ID NO:10，LC-CDR2，其氨基酸序列SEQ ID NO:11，和LC-CDR3，其氨基酸序列SEQID NO:12；以及，特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白包含：
VH，所述VH包含：HC-CDR1，其氨基酸序列为SEQ ID NO:48，HC-CDR2，其氨基酸序列为SEQID NO:52，和HC-CDR3，其氨基酸序列为SEQ ID NO:57；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其氨基酸序列为SEQ ID NO:65，LC-CDR2，其氨基酸序列为SEQ ID NO:70，和LC-CDR3，其氨基酸序列为SEQ ID NO:74；或，
VH，所述VH包含：HC-CDR1，其氨基酸序列为SEQ ID NO:49，HC-CDR2，其氨基酸序列为SEQID NO:54，和HC-CDR3，其氨基酸序列为SEQ ID NO:61；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其氨基酸序列为SEQ ID NO:67，LC-CDR2，其氨基酸序列为SEQ ID NO:71，和LC-CDR3，其氨基酸序列为SEQ ID NO:75；或，
VH，所述VH包含：HC-CDR1，其氨基酸序列为SEQ ID NO:51，HC-CDR2，其氨基酸序列为SEQID NO:56，和HC-CDR3，其氨基酸序列为SEQ ID NO:64；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其氨基酸序列为SEQ ID NO:69，LC-CDR2，其氨基酸序列为SEQ ID NO:73，和LC-CDR3，其氨基酸序列SEQ ID NO:80；或，
VH，所述VH包含：HC-CDR1，其氨基酸序列为SEQ ID NO:48，HC-CDR2，其氨基酸序列为SEQID NO:53，和HC-CDR3，其氨基酸序列为SEQ ID NO:60；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其氨基酸序列为SEQ ID NO:65，LC-CDR2，其氨基酸序列为SEQ ID NO:70，和LC-CDR3，其氨基酸序列为SEQ ID NO:74。
15.一种药物组合物、制品或试剂盒，包括
(i)特异性识别假单胞菌PcrV上的第一表位的抗原结合蛋白，以及
(ii)特异性识别假单胞菌PcrV上的第二表位的抗原结合蛋白和特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白；其中，
特异性识别假单胞菌PcrV上的第一表位的抗原结合蛋白包含：
VH，所述VH包含：HC-CDR1，其氨基酸序列为SEQ ID NO:1，HC-CDR2，其氨基酸序列为SEQID NO:4，和HC-CDR3，其氨基酸序列为SEQ ID NO:6；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其氨基酸序列为SEQ ID NO:10，LC-CDR2，其氨基酸序列为SEQ ID NO:11，和LC-CDR3，其氨基酸序列为SEQ ID NO:12；以及，特异性识别假单胞菌PcrV上的第二表位的抗原结合蛋白包含：
VH，所述VH包含：HC-CDR1，其氨基酸序列为SEQ ID NO:22，HC-CDR2，其氨基酸序列为SEQID NO:24，和HC-CDR3，其氨基酸序列为SEQ ID NO:27；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其氨基酸序列为SEQ ID NO:31，LC-CDR2，其氨基酸序列为SEQ ID NO:34，和LC-CDR3，其氨基酸序列为SEQ ID NO:36；以及，特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白包含：
VH，所述VH包含：HC-CDR1，其氨基酸序列为SEQ ID NO:48，HC-CDR2，其氨基酸序列为SEQID NO:53，和HC-CDR3，其氨基酸序列为SEQ ID NO:60；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其氨基酸序列为SEQ ID NO:65，LC-CDR2，其氨基酸序列为SEQ ID NO:70，和LC-CDR3，其氨基酸序列为SEQ ID NO:74；或，
VH，所述VH包含：HC-CDR1，其氨基酸序列为SEQ ID NO:48，HC-CDR2，其氨基酸序列为SEQID NO:52，和HC-CDR3，其氨基酸序列为SEQ ID NO:57；以及VL，所述VL包含：LC-CDR1，其氨基酸序列为SEQ ID NO:65，LC-CDR2，其氨基酸序列为SEQ ID NO:70，和LC-CDR3，其氨基酸序列为SEQ ID NO:74。
16.根据权利要求14中所述的药物组合物、制品或试剂盒，其中，
特异性识别假单胞菌PcrV上的第一表位的抗原结合蛋白包含：
VH，其氨基酸序列为SEQ ID NO:91，或与氨基酸序列SEQ ID NO:91具有至少90％序列同源性的变体序列；以及VL，其氨基酸序列为SEQ ID NO:112，或与氨基酸序列SEQ ID NO:112具有至少90％序列同源性的变体序列；
以及，特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白包含：
VH，其氨基酸序列为SEQ ID NO:103，或与氨基酸序列SEQ ID NO:103具有至少90％序列同源性的变体序列；以及VL，其氨基酸序列为SEQ ID NO:117，或与氨基酸序列SEQ ID NO:117具有至少90％序列同源性的变体序列；或，VH，其氨基酸序列为SEQ ID NO:107，或与氨基酸序列SEQ ID NO:107具有至少90％序列同源性的变体序列；以及VL，其氨基酸序列为SEQ ID NO:119，或与氨基酸序列SEQ ID NO:119具有至少90％序列同源性的变体序列；或，VH，其氨基酸序列为SEQ ID NO:111，或与氨基酸序列SEQ ID NO:111具有至少90％序列同源性的变体序列；以及VL，其氨基酸序列为SEQ ID NO:124，或与氨基酸序列SEQ ID NO:124具有至少90％序列同源性的变体序列；或，VH，其氨基酸序列为SEQ ID NO:106，或与氨基酸序列SEQ ID NO:106具有至少90％序列同源性的变体序列；以及VL，其氨基酸序列为SEQ IDNO:117，或与氨基酸序列SEQ ID NO:117具有至少90％序列同源性的变体序列。
17.根据权利要求15中所述的药物组合物、制品或试剂盒，其中，
特异性识别假单胞菌PcrV上的第一表位的抗原结合蛋白包含：
VH，其氨基酸序列为SEQ ID NO:91，或与氨基酸序列SEQ ID NO:91具有至少90％序列同源性的变体序列；以及VL，其氨基酸序列为SEQ ID NO:112，或与氨基酸序列SEQ ID NO:112具有至少90％序列同源性的变体序列；
以及，特异性识别假单胞菌PcrV上的第二表位的抗原结合蛋白包含：
VH，其氨基酸序列为SEQ ID NO:96，或与氨基酸序列SEQ ID NO:96具有至少90％序列同源性的变体序列；以及VL，其氨基酸序列为SEQ ID NO:115，或与氨基酸序列SEQ ID NO:115具有至少90％序列同源性的变体序列；
以及，特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白包含：
VH，其氨基酸序列为SEQ ID NO:106，或与氨基酸序列SEQ ID NO:106具有至少90％序列同源性的变体序列；以及VL，其氨基酸序列为SEQ ID NO:117，或与氨基酸序列SEQ ID NO:117具有至少90％序列同源性的变体序列；或，VH，其氨基酸序列为SEQ ID NO:103，或与氨基酸序列SEQ ID NO:103具有至少90％序列同源性的变体序列；以及VL，其氨基酸序列为SEQ ID NO:117，或与氨基酸序列SEQ ID NO:117具有至少90％序列同源性的变体序列。
18.根据权利要求14中所述的药物组合物、制品或试剂盒，其中特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白和特异性识别假单胞菌PcrV上的第一表位的抗原结合蛋白的摩尔比约为5:1、4:1、3:1、2:1、1:1、1:2、1:3、1:4或1:5。
19.根据权利要求18中所述的药物组合物、制品或试剂盒，其中特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白和特异性识别假单胞菌PcrV上的第一表位的抗原结合蛋白的摩尔比约为2:1或1:1。
20.根据权利要求15中所述的药物组合物、制品或试剂盒，其中特异性识别假单胞菌PcrV上的第一表位的抗原结合蛋白，特异性识别假单胞菌PcrV上的第二表位的抗原结合蛋白和特异性识别假单胞菌Psl的抗原结合蛋白的摩尔比约为1:1:1或1:1:2。
21.一种药物组合物，包括权利要求1-13中任一项所述的双特异性分子。
22.如权利要求1-13中任一项所述的双特异性分子或权利要求14-20中任一项所述的药物组合物、制品或试剂盒在制备治疗和/或预防由铜绿假单胞菌感染引起的一种或多种症状的药物中的用途。
23.根据权利要求22中所述的用途，其中所述的症状包括发热、寒战、疲劳、肌肉和关节疼痛、关节肿胀、头痛、腹泻、皮疹、伤口流脓、菌血症、急性肺炎、腹腔内感染、呼吸道感染、脓毒性休克、化脓性关节炎、肠炎、皮肤和软组织感染、尿路感染、肠道感染、溃疡性角膜炎、慢性化脓性中耳炎、乳突炎、鼻窦炎或心内膜炎中的一种或多种。
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