CN114042172A - pH响应性T1-T2双激活纳米探针及其制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种pH响应性T1‑T2双激活纳米探针及其制备方法和应用，该方法通过将Tf@Gd和氨基化SPIO同时包封到胶束中，制备出具有距离可调控性和酸性微环境响应性的纳米探针。所述探针在肿瘤微环境酸性条件下能够同时实现T1和T2信号的双激活，且随着酸性、时间的增加，激活效果也随之增强，能显著提高成像的性能和准确度，实现对早期微小转移瘤诊断以及对炎症病灶的检出效能；同时，所述的纳米探针具有良好的生物相容性和生物可降解性，且制备方法简单，有利于向临床转化应用。

Description

pH响应性T1-T2双激活纳米探针及其制备方法和应用

技术领域

本发明属于纳米材料和分子影像技术领域，具体涉及pH响应性T1-T2双激活纳米探针及其制备方法和应用。

背景技术

磁共振成像(Magnetic Resonance Imaging，MRI)具备高分辨率、无电离辐射损伤及多参数、多序列成像等优点，已成为当代临床诊断中最有力的检测手段之一。

为了凸显组织间的差异，尤其是正常组织与病患部位间的差别，常使用造影剂提高成像对比度。按照作用原理，MRI造影剂可以分为纵向弛豫造影剂(T1造影剂)和横向弛豫造影剂(T2造影剂)，T1造影剂主要加速T1弛豫并在T1加权图像中产生“明亮”对比度，T2造影剂主要增加T2弛豫速率并产生“黑暗”对比效果。然而T1加权成像和T2加权成像造影剂都有它们各自的优点和缺点。例如基于钆的T1加权MRI造影剂具有优秀的造影效果，但同时也具有生物毒性威胁；基于T2加权成像的超顺磁性氧化铁纳米颗粒具有低毒性，但因为磁敏感伪影和它的负造影效果，与周围具有低MR信号的骨、脉管系统等邻近组织不能很好的区别，限制了其应用。

单一模式的T1和T2越发不能满足医疗检测的要求，将T1和T2造影剂结合的双模态造影剂带来新的突破。有研究公开了一种双向调控的(TMRET)GSH敏感的纳米探针，并通过调控T1阳性对比剂(卟啉螯合锰)及T2阴性对比剂(SPIO)的比例(40：1)，首次发现在肿瘤高还原状态微环境下T1-T2信号双淬灭和激活(OFF-ON)效应。尽管该探针能进一步增强成像部位的MRI信号激活放大倍数，但该探针所用的T1对比剂比例高，制作工艺较复杂，不利于向临床转化应用；且该探针采用的是GSH响应模式，相较于pH响应模式，存在灵敏性和特异性不足的问题。

综合上述，提供一种能有效增强MRI信号且具备高灵敏性和特异性的MRI造影剂，对于MRI领域具有重要意义。

发明内容

为解决现有技术中双模态造影剂灵敏性和特异性不足、且制备工艺复杂的问题，本发明公开了一种pH响应性T1-T2双激活纳米探针及其制备方法和应用，所述的纳米探针具备pH响应性，在肿瘤微环境酸性条件下进行T1和T2信号同时激活，最终提高成像的性能和准确度；同时，所述的纳米探针具有良好的生物相容性和生物可降解性，且制备方法简单，有利于向临床转化应用。

为解决上述问题，本发明首先提供了一种pH响应性T1-T2双激活纳米探针的制备方法，包括以下步骤：

S1，以硝酸钆、转铁蛋白为原料，加入NaOH溶液，37℃进行反应，反应液离心取上清，经超滤、复溶后得到转铁蛋白螯合钆，4℃保存备用；

S2，以转铁蛋白螯合钆、氨基化SPIO为原料，加入双醛基聚乙二醇溶液，室温条件下反应，得到所述的pH响应性T1-T2双激活纳米探针；

其中，步骤S1中，所述的NaOH溶液的浓度为1mol/L，所述的硝酸钆、转铁蛋白和NaOH溶液的用量比为5-6mg：15-25mg：0.1-0.2mL；

步骤S2中，所述转铁蛋白螯合钆和氨基化SPIO中钆离子与铁离子的质量比为15：1。

优选地，所述的氨基化SPIO中的铁离子浓度为0.01-1.0mg/mL。

优选地，所述的双醛基聚乙二醇的分子量为4000。

优选地，所述步骤S1中的离心为冷冻离心，10000rpm，离心30min。

优选地，所述步骤S1中超滤的具体步骤为：将上清装入截留分子量为30KDa的超滤管中，5000rpm，超滤30min。

本发明另一方面还提供了一种根据前面任一所述的制备方法制备的pH响应性T1-T2双激活纳米探针。

本发明另一方面还提供了一种造影用组合物，包括：权利要求6所述的pH响应性T1-T2双激活纳米探针；以及药学上可接受的辅剂。

本发明另一方面还提供了一种药用组合物，包括：权利要求6所述的pH响应性T1-T2双激活纳米探针，药物以及药学上可接受的载体。

本发明另一方面还提供了所述的pH响应性T1-T2双激活纳米探针、所述的造影用组合物在制备磁共振成像剂中的应用。

相对于现有技术，本发明的有益效果是：

1、本发明的T1-T2双激活纳米探针在体内肿瘤周围正常组织中处于T1和T2信号双淬灭状态，而在肿瘤部位能够实现T1和T2信号同时激活，使肿瘤部位与周围正常组织呈现显著的MRI信号差，从而实现对肿瘤部位的高质量成像。

2、本发明的T1-T2双激活纳米探针具有pH响应机制，在酸性条件下能够同时实现T1和T2造影剂信号激活，随着酸性的增加，激活效果也随之增强；同时具有时间依赖性，随着时间的推移，激活效果也随之增强。

3、本发明制备的T1-T2双激活纳米探针中，采用的T1对比剂相较于传统的钆基对比剂(如Gd-DTPA、Gd-DOTA等)，弛豫率提高了近三倍，有效降低了T1与T2对比剂的比例，不仅提高了生物相容性，且工艺简单，易于制备，有利于向临床转化应用。

附图说明

图1为本发明制备Tf@Gd-PEG-SPIO纳米探针的流程图；

图2为实施例1制备的Tf@Gd在不同浓度、不同pH条件下的T1、T2弛豫率；

图3为实施例1制备的Tf@Gd-PEG-SPIO纳米探针的TEM图；

a为pH7.4条件下Tf@Gd-PEG-SPIO纳米探针的TEM图；

b为pH5.0条件下Tf@Gd-PEG-SPIO纳米探针的TEM图；

图4表示实施例1制备的Tf@Gd-PEG-SPIO纳米探针在不同pH条件下的T1和T2信号强度图及T1map和T2map彩色编码图；

a为不同pH条件下Tf@Gd-PEG-SPIO纳米探针的T1加权成像图及T1map彩色编码图；

b为不同pH条件下Tf@Gd-PEG-SPIO纳米探针的T2加权成像图及T2map彩色编码图；

c为不同pH条件下Tf@Gd-PEG-SPIO纳米探针的T1弛豫率；

d为不同pH条件下Tf@Gd-PEG-SPIO纳米探针的T2弛豫率；

图5表示实施例1制备的Tf@Gd-PEG-SPIO纳米探针的T1和T2信号强度随时间的变化；

a为不同时间下Tf@Gd-PEG-SPIO纳米探针的T1加权成像图及T1map彩色编码图；

b为不同时间下Tf@Gd-PEG-SPIO纳米探针的T2加权成像图及T2map彩色编码图；

c为不同时间下Tf@Gd-PEG-SPIO纳米探针的T1弛豫率；

d为不同时间下Tf@Gd-PEG-SPIO纳米探针的T2弛豫率；

图6表示肝脏微转移瘤小鼠经Tf@Gd-PEG-SPIO注射后的MRI成像图；

a为小鼠注射Tf@Gd-PEG-SPIO后0h和5h的T1map彩色编码图；

b为小鼠注射Tf@Gd-PEG-SPIO后0h和5h的T2map彩色编码图；

c为小鼠注射Tf@Gd-PEG-SPIO后0h和5h时，正常肝脏组织和肿瘤组织之间的T1弛豫率对比；

d为小鼠注射Tf@Gd-PEG-SPIO后0h和5h时，正常肝脏组织和肿瘤组织之间的T2弛豫率对比；

图7表示肌肉内炎症小鼠经Tf@Gd-PEG-SPIO注射后的MRI成像图；

a为小鼠注射Tf@Gd-PEG-SPIO后0h、3h和6h的T1map彩色编码图；

b为小鼠注射Tf@Gd-PEG-SPIO后0h、3h和6h的T2map彩色编码图；

c为小鼠注射Tf@Gd-PEG-SPIO后0h、3h和6h的T1弛豫率；

d为小鼠注射Tf@Gd-PEG-SPIO后0h、3h和6h的T2弛豫率。

具体实施方式

以下将结合附图和实施例对本发明的技术方案做进一步的说明。

如前所述，鉴于现有技术的不足，本发明申请人经长期研究和大量实践，提出本发明的技术方案，制备流程如图1所示：首先利用生物矿化法将硝酸钆吸附到转铁蛋白上得到T1阳性对比剂(Tf@Gd)，然后与表面氨基化修饰的T2阴性对比剂超顺磁性氧化铁(superparamagnetic iron oxide，SPIO)按照钆离子与铁离子的质量比为15：1的比例共同孵育在双醛基聚乙二醇溶液中，利用T1和T2对比剂表面的氨基与醛基反应形成席夫碱，实现T1、T2对比剂的共组装，得到具有pH响应性的T1-T2双激活纳米探针Tf@Gd-PEG-SPIO(TGPS)。

术语

本发明所述“转铁蛋白螯合钆”“Tf@Gd”可以互换使用；“氨基化SPIO”“SPIO-NH₂”可以互换使用；“双醛基聚乙二醇”“CHO-PEG4000-CHO”可以互换使用。

如本发明所用，“药学上可接受的”的成分是适用于人和/或哺乳动物而无过度不良副反应(如毒性)的，即具有合理的效益/风险比的物质。术语“药学上可接受的载体”指用于治疗剂给药的载体，包括各种赋形剂和稀释剂。该术语指这样一些药剂载体：它们本身并不是必要的活性成分，且施用后没有过分的毒性。

本发明的pH响应性T1-T2双激活纳米探针的制备方法，包括以下步骤：

S1，以硝酸钆、转铁蛋白为原料，加入NaOH溶液，37℃进行反应，反应液冷冻离心取上清，经超滤、复溶后得到转铁蛋白螯合钆，4℃保存备用；

S2，以转铁蛋白螯合钆、氨基化SPIO为原料，加入双醛基聚乙二醇溶液，室温条件下反应，得到所述的pH响应性T1-T2双激活纳米探针；

其中，步骤S1中，所述的NaOH溶液的浓度为1mol/L，所述的硝酸钆、转铁蛋白和NaOH溶液的用量比为5-6mg：15-25mg：0.1-0.2mL；

超滤的具体步骤为：将上清装入截留分子量为30KDa的超滤管中，5000rpm，超滤30min；

步骤S2中，所述转铁蛋白螯合钆和氨基化SPIO中钆离子与铁离子的质量比为15：1。

优选地，所述的氨基化SPIO中的铁离子浓度为0.01-1.0mg/mL。

优选地，所述的双醛基聚乙二醇的分子量为4000。

本发明还提供了前面任一所述的制备方法制备的pH响应性T1-T2双激活纳米探针及其用途，例如在制备造影用组合物中的用途，所述造影用组合物包括：所述的pH响应性T1-T2双激活纳米探针；以及药学上可接受的辅剂。

本发明还提供了所述的pH响应性T1-T2双激活纳米探针和造影用组合物在制备磁共振成像剂中的应用。

本发明还提供了一种药用组合物，包括：所述的pH响应性T1-T2双激活纳米探针，药物以及药学上可接受的载体。所述药物包括治疗性药物、示踪性分子等药物组分，可实现诊疗一体化。

本发明探针在肿瘤微环境的酸性条件下，连接Tf@Gd与SPIO的席夫碱键响应性解离，Tf@Gd与SPIO之间的距离增加致使T1、T2信号双激活，肿瘤诊断中具有良好的信号激活能力和高空间分辨率，从而实现对早期微小转移瘤诊断以及对炎症病灶的检出效能。

下面对本发明的实验过程及实验结果进行详细说明。

实施例1、TGPS纳米探针的制备

(1)转铁蛋白螯合钆(Tf@Gd)的制备

称取硝酸钆Gd(NO₃)₃ 5.4mg、转铁蛋白Tf 20mg溶解于1.2mL纯水中(环境温度保持37℃)，搅拌5分钟，待溶解完全，加入配好的0.12mL 1MNaOH溶液，继续在37℃下搅拌反应12h(匀速缓慢搅拌即可，不宜剧烈搅拌)。反应结束后，将反应物用冷冻离心机10000rpm转速离心30min，提取上清液，装入超滤管(30KDa)中，在5000rpm转速下超滤30min，除去多余的Gd³⁺离子，然后将超滤管中上层的产物复溶在1mL纯水中，即可得到转铁蛋白螯合钆(Tf@Gd)，用ICP对Gd含量进行定量后，制备成Gd浓度为1mg/mL的探针溶液，置于4℃冰箱内保存。

取出部分Tf@Gd用3.0T的磁共振扫描仪进行测试，结果如图2所示，本发明制备的T1阳性对比剂(Tf@Gd)的弛豫率在pH 7.4条件下为14.25mM^-1s^-1，在pH 5.5条件下为15.5mM^-1s^-1，而目前临床常用的钆造影剂弛豫率仅在5mM^-1s^-1左右，即本发明制备的Tf@Gd弛豫率为常规T1造影剂的三倍左右，为后续制备双激活探针时降低T1对比剂的使用量提供基础。

(2)双醛基聚乙二醇水溶液的制备

称取10.5mg的CHO-PEG4000-CHO溶于0.375mL纯水中，配制双醛基聚乙二醇水溶液。

(3)Tf@Gd-PEG-SPIO(TGPS)的制备

称取Tf@Gd 1mL和铁浓度为0.05mg/mL的SPIO-NH₂ 1.33mL，将二者共混于10mL圆底烧瓶中，然后加入双醛基聚乙二醇水溶液，分多次加入，密切观察有无沉淀产生；如果有沉淀产生，则涡旋搅拌至没有沉淀，再继续加入剩余的双醛基聚乙二醇水溶液。在室温下搅拌48h，即可得到Tf@Gd-PEG-SPIO(TGPS)，然后通过离心浓缩，纯水定容至1mL。置于4℃冰箱内保存。

(4)透射电镜表征

为了考察本发明双激活纳米探针能通过控制pH值实现Tf@Gd(T1对比剂)和SPIO(T2对比剂)之间距离的调节，最终控制T1和T2信号的激活，我们对其进行了电镜考察：分别在pH 7.4和5.0条件下测试TEM，观察纳米颗粒在两种酸性条件下的分散、解离情况。

结果图3所示，在pH 7.4条件下，TGPS均匀而紧密的排列成球形(图3中的a)；当在酸性溶液的作用下，pH值从7.4将至5.0时，纳米胶束由纳米球解离为纳米颗粒(图3中的b)。说明本发明方法制备的纳米探针可在酸性微环境中成功实现T1对比剂和T2对比剂的解离，最终实现酸性微环境中T1和T2信号的激活。

实施例2、TGPS纳米探针的制备

(1)转铁蛋白螯合钆(Tf@Gd)的制备

称取硝酸钆Gd(NO₃)₃ 5mg、转铁蛋白Tf 15mg溶解于1.2mL纯水中(环境温度保持37℃)，搅拌5分钟，待溶解完全，加入配好的0.1 2mL 1M NaOH溶液，继续在37℃下搅拌反应12h(匀速缓慢搅拌即可，不宜剧烈搅拌)。反应结束后，将反应物用冷冻离心机10000rpm转速离心30min，提取上清液，装入超滤管(30KDa)中，在5000rpm转速下超滤30min，除去多余的Gd³⁺离子，然后将超滤管中上层的产物复溶在1mL纯水中，即可得到转铁蛋白螯合钆(Tf@Gd)，用ICP对Gd含量进行定量后，制备成Gd浓度为1mg/mL的探针溶液，置于4℃冰箱内保存。

(2)双醛基聚乙二醇水溶液的制备

称取10.5mg的CHO-PEG4000-CHO溶于0.375mL纯水中，配制双醛基聚乙二醇水溶液。

(3)Tf@Gd-PEG-SPIO(TGPS)的制备

称取Tf@Gd 1mL和铁浓度为0.05mg/mL的SPIO-NH₂ 1.33mL，将二者共混于10mL圆底烧瓶中，然后加入双醛基聚乙二醇水溶液，分多次加入，密切观察有无沉淀产生；如果有沉淀产生，则涡旋搅拌至没有沉淀，再继续加入剩余的双醛基聚乙二醇水溶液。在室温下搅拌48h，即可得到Tf@Gd-PEG-SPIO(TGPS)，然后通过离心浓缩，纯水定容至1mL。置于4℃冰箱内保存。

实施例3、TGPS纳米探针的制备

(1)转铁蛋白螯合钆(Tf@Gd)的制备

称取硝酸钆Gd(NO₃)₃ 6mg、转铁蛋白Tf 25mg溶解于1.2mL纯水中(环境温度保持37℃)，搅拌5分钟，待溶解完全，加入配好的0.12mL 1M NaOH溶液，继续在37℃下搅拌反应12h(匀速缓慢搅拌即可，不宜剧烈搅拌)。反应结束后，将反应物用冷冻离心机10000rpm转速离心30min，提取上清液，装入超滤管(30KDa)中，在5000rpm转速下超滤30min，除去多余的Gd³⁺离子，然后将超滤管中上层的产物复溶在1mL纯水中，即可得到转铁蛋白螯合钆(Tf@Gd)，用ICP对Gd含量进行定量后，制备成Gd浓度为1mg/mL的探针溶液，置于4℃冰箱内保存。

(2)双醛基聚乙二醇水溶液的制备

称取10.5mg的CHO-PEG4000-CHO溶于0.375mL纯水中，配制双醛基聚乙二醇水溶液。

(3)Tf@Gd-PEG-SPIO(TGPS)的制备

称取Tf@Gd1 mL和铁浓度为0.05mg/mL的SPIO-NH₂ 1.33mL，将二者共混于10mL圆底烧瓶中，然后加入双醛基聚乙二醇水溶液，分多次加入，密切观察有无沉淀产生；如果有沉淀产生，则涡旋搅拌至没有沉淀，再继续加入剩余的双醛基聚乙二醇水溶液。在室温下搅拌48h，即可得到Tf@Gd-PEG-SPIO(TGPS)，然后通过离心浓缩，纯水定容至1mL。置于4℃冰箱内保存。

实施例4、TGPS纳米探针的pH响应分析

以实施例1制备的T1-T2双激活纳米探针为例，对本发明的T1-T2双激活纳米探针的pH响应进行分析。

将100μl实施例1制备的T1-T2双激活纳米探针分别加入900μl预先配置好的pH值为5.0、5.5、6.8、7.4的PBS溶液中，摇晃均匀，用3.0T的磁共振扫描仪进行测试，测试得到不同pH值下的T1加权成像T1WI和T2加权成像T2WI。重复三次扫描并测量弛豫时间，计算R1和R2。

结果如图4中的a-d所示，本发明制备的T1-T2双激活纳米探针具有良好的pH响应性，在中性环境下处于T1和T2信号双淬灭状态，而在酸性条件下能够同时实现T1和T2信号的激活，且随着酸性的增加，其激活效果也随之增强。

实施例5、酸性环境下TGPS纳米探针的时间响应分析

以实施例1制备的T1-T2双激活纳米探针为例，对本发明的T1-T2双激活纳米探针在酸性环境下的时间响应进行分析。

将100μl实施例1制备的T1-T2双激活纳米探针加入900μl预先配置好的pH值为5.0的PBS溶液中，摇晃均匀后分别于2h、6h、12h和24h用3.0T的磁共振扫描仪进行测试，测试得到不同时间下的T1加权成像T1WI和T2加权成像T2WI。重复三次扫描并测量弛豫时间，计算R1和R2。

结果如图5中的a-d所示，本发明制备的T1-T2双激活纳米探针在生理pH值下稳定，MRI信号变化不显著；在酸性pH条件下，试剂孵育时间越长，T1和T2信号的双激活效果也随之增强。表明本发明制备的纳米探针在酸性条件下，具有时间依赖性，随着时间的推移，信号激活越显著，为后面的细胞实验及体内实验打下基础。

实施例6、MRI监测TGPS纳米探针在小鼠肝脏微转移瘤内的释放

选用4T1乳腺癌细胞构建Balb/c鼠脾脏注射肝转移模型，观察肝脏转移瘤生长情况，待长至肿瘤大小约1-3mm时，尾静脉注射200μL TGPS纳米探针，注射前和注射后5h分别进行T1WI、T2WI、T1 map、T2 map序列扫描，选择信号相对均匀的区域作为ROI区域，测量三次，取平均值。以上实验重复三次并测量弛豫时间，计算R1和R2。

结果如图6中的a-d所示，肝脏中的微小转移瘤在尾静脉注射200μLTGPS纳米探针后呈现激活状态，给药后5h肿瘤区域的R1和R2值明显升高，并且正常组织和肿瘤组织之间MR强度的对比度差异明显增大。结果表明，本发明制备的纳米探针可敏感性检出微小肿瘤病灶。

实施例7、MRI监测TGPS纳米探针在小鼠病灶内炎症的释放

构建裸大鼠肌肉内炎症模型：将100μl松节油缓慢注入裸大鼠肌肉间，SPF级别饲养，注射后每两天观察裸大腿肌肉有无红肿、水肿以及裸大鼠精神状态，大约3-4天左右，发现裸大鼠大腿肌肉水肿后，尾静脉注射200μLTGPS纳米探针，在注射前和注射后3h、6h分别进行T1WI、T2WI、T1 map、T2 map序列扫描，选择信号相对均匀的区域作为ROI区域，测量三次，取平均值。以上实验重复三次并测量弛豫时间，计算R1和R2。

结果如图7中的a-d所示，肌肉间的炎症病灶在给药后呈现更高的TGPS积累，并且这种效应随着时间的推移而增加。结果表明，在炎症酸性环境下，本发明纳米探针发生T1-T2双激活效应，且随着时间的推移，激活效果越显著，本发明制备的探针对对体内炎症病灶也有良好的检出效能。

综上所述，本发明的pH响应性T1-T2双激活纳米探针具有pH响应性，在肿瘤微环境酸性条件下能够同时实现T1和T2信号的双激活，且随着酸性、时间的增加，激活效果也随之增强，能显著提高成像的性能和准确度；同时，所述的纳米探针具有良好的生物相容性和生物可降解性，且制备方法简单，有利于向临床转化应用。

尽管本发明的内容已经通过上述优选实施例作了详细介绍，但应当认识到上述的描述不应被认为是对本发明的限制。在本领域技术人员阅读了上述内容后，对于本发明的多种修改和替代都将是显而易见的。因此，本发明的保护范围应由所附的权利要求来限定。

Claims (9)

1.一种pH响应性T1-T2双激活纳米探针的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1，以硝酸钆、转铁蛋白为原料，加入NaOH溶液，37℃进行反应，反应液离心取上清，经超滤、复溶后得到转铁蛋白螯合钆，4℃保存备用；

S2，以转铁蛋白螯合钆、氨基化SPIO为原料，加入双醛基聚乙二醇溶液，室温条件下反应，得到所述的pH响应性T1-T2双激活纳米探针；

其中，步骤S1中，所述的NaOH溶液的浓度为1mol/L，所述的硝酸钆、转铁蛋白和NaOH溶液的用量比为5-6mg：15-25mg：0.1-0.2mL；

步骤S2中，所述转铁蛋白螯合钆和氨基化SPIO中钆离子与铁离子的质量比为15：1。

2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的氨基化SPIO中的铁离子浓度为0.01-1.0mg/mL。

3.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的双醛基聚乙二醇的分子量为4000。

4.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤S1中的离心为冷冻离心，10000rpm，离心30min。

5.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤S1中超滤的具体步骤为：将上清装入截留分子量为30KDa的超滤管中，5000rpm，超滤30min。

6.一种根据权利要求1-5中任一项所述的制备方法制备的pH响应性T1-T2双激活纳米探针。

7.一种造影用组合物，其特征在于，所述造影用组合物包括：权利要求6所述的pH响应性T1-T2双激活纳米探针；以及药学上可接受的辅剂。

8.一种药用组合物，其特征在于，所述药用组合物包括：权利要求6所述的pH响应性T1-T2双激活纳米探针，药物以及药学上可接受的载体。

9.权利要求6所述的pH响应性T1-T2双激活纳米探针或权利要求7所述的造影用组合物在制备磁共振成像剂中的应用。

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