CN114032178B - 一种产酸菌jc-h及其应用与产酸菌jc-h的培养、鉴定方法 - Google Patents

一种产酸菌jc-h及其应用与产酸菌jc-h的培养、鉴定方法 Download PDF

Info

Publication number
CN114032178B
CN114032178B CN202110770418.0A CN202110770418A CN114032178B CN 114032178 B CN114032178 B CN 114032178B CN 202110770418 A CN202110770418 A CN 202110770418A CN 114032178 B CN114032178 B CN 114032178B
Authority
CN
China
Prior art keywords
acid
strain
producing bacteria
culture
fermentation
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN202110770418.0A
Other languages
English (en)
Other versions
CN114032178A (zh
Inventor
高天鹏
王雪莹
刘圆
李广文
张九东
申圆圆
请求不公布姓名
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Xian University
Original Assignee
Xian University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Xian University filed Critical Xian University
Priority to CN202110770418.0A priority Critical patent/CN114032178B/zh
Publication of CN114032178A publication Critical patent/CN114032178A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN114032178B publication Critical patent/CN114032178B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/02—Separating microorganisms from their culture media
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
    • C12P7/40—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a carboxyl group including Peroxycarboxylic acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/02—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving viable microorganisms
    • C12Q1/04—Determining presence or kind of microorganism; Use of selective media for testing antibiotics or bacteriocides; Compositions containing a chemical indicator therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6844—Nucleic acid amplification reactions
    • C12Q1/686—Polymerase chain reaction [PCR]
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N31/00—Investigating or analysing non-biological materials by the use of the chemical methods specified in the subgroup; Apparatus specially adapted for such methods
    • G01N31/16—Investigating or analysing non-biological materials by the use of the chemical methods specified in the subgroup; Apparatus specially adapted for such methods using titration

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

本发明公开了一种产酸菌JC‑H，该菌株命名为：黑曲霉(Aspergillusniger)JC‑H，已于2021年01月04日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC NO：21424。可在产酸中进行应用，且于温度为30℃、pH为6、转速为160rpm条件下利用发酵培养基进行恒温震荡培养产酸效率最高。本发明的产酸菌，能够为生物产酸提供菌种资源。

Description

一种产酸菌JC-H及其应用与产酸菌JC-H的培养、鉴定方法
技术领域
本发明属于环境微生物技术领域，涉及一种产酸菌JC-H及其应用，还涉及该产酸菌JC-H的培养、鉴定方法。
背景技术
矿产资源是人类生产、生活以及社会经济快速发展的物质基础，也是保障国家安全、维护国家发展利益的战略性资源。但是，不合理的开采会造成开采区及周围自然环境的极大破坏，每年的金属及非金属尾矿排放量达3亿吨，尾矿的累积堆存量近200亿吨。矿区中尾矿、废渣堆积在自然环境中，使尾矿中重金属渗透到土壤环境中的种类和数量也随之增多，不断向周边环境释放重金属，给当地自然生态环境和生产生活带来了较大的生态健康风险。近年来，我国发生的重金属污染事件也是屡见不鲜，如血铅事件、镉米事件等问，也使得重金属污染越来越受到广泛关注。
当前针对矿区重金属污染土壤资源进行修复的过程中，主要使用的是物理修复、化学修复和生物修复。在实际修复过程中：物理方法主要有换土客土、热处理法、电动修复等方法，然而物理方法一般需要花费大量的人力、物力、财力等，且一般仅限于小面积的重金属污染处理；化学方法主要有浸提、改良剂固定化、沉淀、离子交换等方法，化学修复方法虽然操作简单，也可以原位修复，但普遍会带来二次污染，甚至破坏土壤结构，且耗费较大。因此，这几种方法在技术上、经济上难以实现，也难以为公众所接受，面对大规模的重金属污染更是难以应用。而生物修复生物方法被认为是环境重金属污染治理的最具前景的新方法，重金属的生物修复就是利用生物作用，削减、净化环境中的重金属或降低重金属的毒性。
迄今为止，微生物修复正在引起国内外专家的关注，所以研究利用微生物修复矿区重金属污染土壤具有十分重要的意义。
发明内容
本发明的目的是提供一种产酸菌JC-H及其应用与产酸菌JC-H的培养、鉴定方法，为生物产酸并改良尾矿随意处理导致周边区域重金属污染土壤问题提供了菌种资源。
本发明所采用的技术方案是，一种产酸菌JC-H，该菌株命名为：黑曲霉(Aspergillus niger)JC-H，已于2021年01月04日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC NO：21424。
产酸菌JC-H的培养方法，具体为：
步骤1、菌株的分离培养
采集受重金属污染严重的土壤作为样品；
制备查式培养基：将蔗糖30g、NaNO3 3g、K2HPO4 1g、KCl 0.5g，FeSO4·7H2O 0.01g、琼脂20g、蒸馏水1L，混合后，于121℃高温灭菌20min，接着倒平板待其凝固，制成无菌的查式培养基，用来进行分离培养；
将采集的土壤样品与无菌水混合制备土壤悬液，土壤悬液经梯度稀释后涂布于培养基表面，并编号，于30℃恒温培养箱中培养3-5d；
步骤2、鉴别产酸菌株
制备产酸鉴别培养基：将1.6％溴甲酚紫加入查式固体培养基中，在121℃高温灭菌20min，倒平板待其凝固后制成无菌的产酸鉴别培养基备用，其颜色为紫色；
将步骤1培养后的菌株取出，观察菌株形态，挑选出不同形态菌落，划线培养于产酸鉴别培养基；
培养3-5d后产酸鉴别培养基由紫色变为黄色则说明该菌株具有产酸能力，若无变化则说明该菌株不具有产酸能力，挑选具有产酸能力的菌株多次接种于产酸鉴别培养基中，获取纯化后的单一菌株；
当添加重金属的查式培养基中，添加Zn2+浓度≤300mg/L，或Pb2+浓度≤2000mg/L，或Cd2+浓度≤300mg/L对产酸菌JC-H的产酸效果基本无影响。
产酸菌JC-H在产酸中的应用，利用发酵培养基测定产酸菌JC-H的产酸效率，所述发酵培养基采用蔗糖100g，NaNO3 1.5g，KH2PO4 0.5g，KCl 0.025g，MgSO4·7H2O 0.025g，酵母浸膏1.6g，调节pH为6，于121℃灭菌20min；
向培养后产酸菌JC-H培养基中加入无菌水，用无菌涂布棒，轻轻刮菌落表面，获得菌株孢子，再通过血球计数板观察孢子数量，加无菌水，将菌株孢子稀释，按3.6×106个/50ml的比例加入发酵培养基，于30℃、160rpm的转数下在恒温振荡培养箱中进行培养。
产酸菌JC-H的鉴定方法，包括：利用18S rRNA基因序列对菌种鉴定和发酵液中有机酸含量的测定。
利用18S rRNA基因序列对菌种鉴定具体为：
目标菌株18S rRNA基因序列的PCR扩增：
通过真菌通用引物ITS1(5′-TCCGTAGGTGAACCTGCGG-3′)和ITS4(5′-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3′)进行PCR扩增。在聚合酶的作用下，经预变性、变性、退火、延伸、35个循环、修复延伸、获得目标菌株的18SrRNA基因序列。
发酵培养基内发酵液中有机酸含量的测定具体为：
首先进行0.1mol/L NaOH标准溶液、1％酚酞指示剂的配置。然后准确吸取10mL样品发酵液，转移到100mL容量瓶中，加蒸馏水至100mL刻度并摇匀。用滤纸过滤，准确吸取滤液20mL放入100mL三角瓶中，加入1％酚酞2滴，用0.1mol/L NaOH标准溶液滴定至初显粉色在0.5min内不褪色为终点，记下NaOH用量，重复取三次取平均值。并测定空白组消耗NaOH的含量。
本发明的有益效果是：
产酸菌JC-H的耐重金属效果：
当添加重金属的查式培养基中，采用打孔器接菌的方式，于30℃培养真菌，观察其菌株抑制率。抑制率(％)＝(空白平板直径-重金属平板直径)/(空白直径-3mm)。当添加重金属Zn2+浓度高于300mg/L，或Pb2+浓度高于2000mg/L，或Cd2+浓度高于300mg/L时，才会对产酸菌JC-H产生严重抑制作用。
产酸菌JC-H的耐重金属胁迫的产酸能力：
未进行重金属处理时，产酸菌JC-H培养液初始pH值为5.44，产酸菌JC-H培养48h后培养液pH值降至最小值4.86，菌株培养液pH值下降了0.58；重金属胁迫下，随重金属浓度的增加，产酸菌JC-H的初始培养液pH值降低、pH的变化幅度变小，培养液在发酵后期出现pH上升趋势。在重金属Pb胁迫时，产酸菌JC-H在200mg/LPb2+处理该菌株27h后培养液pH值下降了0.53；重金属Zn胁迫时，产酸菌JC-H在100mg/LZn2+处理该菌株24h后培养液pH值下降了0.87，说明低浓度的Zn2+对菌株产酸具有促进作用，但随着重金属添加量的升高，菌株产酸能力也下降；在重金属Cd胁迫时，产酸菌JC-H在50mg/L Cd2+处理该菌株63h后培养液pH值下降了0.75，说明低浓度的Zn2+、Cd2+对菌株产酸具有促进作用，但随着重金属添加量的升高，菌株产酸能力也下降；
在不同重金属浓度下产酸菌JC-H仍具有产酸能力。本发明的产酸菌JC-H的筛选与鉴定方法，能够为生物产酸提供菌种资源。
附图说明
图1是本发明的产酸菌图；
图2是本发明产酸菌基于18S rRNA基因序列构建的系统发育树；
图3是本发明产酸菌的生长曲线；
图4是本发明产酸菌的不同发酵时期培养基中pH变化图；
图5是本发明中不同浓度重金属Zn、Cd、Pb对产酸菌生长的影响；
图6是本发明中不同浓度重金属Pb对产酸菌pH的影响；
图7是本发明中不同浓度重金属Cd对产酸菌pH的影响；
图8是本发明中不同浓度重金属Zn对产酸菌pH的影响；
图9不同温度对产酸菌JC-H发酵液pH的影响图；
图10不同温度对产酸菌JC-H发酵液消耗NaOH量的影响图；
图11不同初始pH对产酸菌JC-H发酵液pH的影响图；
图12不同初始pH对产酸菌JC-H发酵液消耗NaOH量的影响图；
图13不同转速对产酸菌JC-H发酵液pH的影响图；
图14不同转速对产酸菌JC-H发酵液消耗NaOH量的影响图。
保藏信息：产酸菌已于2021年01月04日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编100101)，保藏编号为CGMCC NO：21424。命名为：黑曲霉(Aspergillus niger)JC-H。
具体实施方式
下面结合附图和具体实施方式对本发明进行详细说明。
一种产酸菌JC-H，该菌株命名为：黑曲霉(Aspergillus niger)JC-H，已于2021年01月04日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC NO：21424。
产酸菌JC-H的培养方法，具体为：
步骤1、菌株的分离培养
采集受重金属污染严重的土壤作为样品；目的是从中分离具有产酸能力的微生物。
制备查式培养基：将蔗糖30g、NaNO3 3g、K2HPO4 1g、KCl 0.5g，FeSO4·7H2O 0.01g、琼脂20g、蒸馏水1L，接着倒平板待其凝固，制成无菌分离培养基备用；
将采集的土壤样品与无菌水混合制备土壤悬液，具体的：将采集的土壤样品与无菌水混合制备土壤悬液，土壤悬液经梯度稀释后涂布于培养基表面，并编号，于30℃恒温培养箱中培养3-5d。吸取不同梯度的土壤悬液需换用不同的吸管。
取稀释后的土壤悬液0.5mL；用无菌涂布棒均匀涂布土壤悬液于查式培养基表面，并编号，于30℃恒温培养箱中培养3-5d；
步骤2、鉴别产酸菌株
制备产酸鉴别培养基：将1.6％溴甲酚紫加入查式培养基，在121℃高温灭菌20min，倒平板待其凝固后制成无菌的产酸鉴别培养基备用，其颜色为紫色；
将步骤1培养后的菌株取出，观察菌株形态，挑选出不同形态菌落划线培养于产酸鉴别培养基；
培养3-5d后产酸鉴别培养基由紫色变为黄色则说明该菌株具有产酸能力，若无变化则说明该菌株不具有产酸能力，挑取具有产酸能力的菌株多次划线于产酸鉴别培养基中，获取纯化后的单一菌株；获得单一产酸菌株之后保藏于4℃冰箱中，待后续实验使用。
菌株形态观察和生理生化
菌落表面呈圆形，中间黑色呈厚绒毛状，菌丝为黑褐色，长有大量黑褐色孢子。显微镜下观察，菌丝发达，多分枝；分生孢子梗细长，分生孢子头为穗球形，上面有大量分生孢子，分生孢子梗末端有球形顶囊。
如图2所示，产酸菌JC-H基于18S rRNA基因序列构建的系统发育树，简介获得步骤：
系统进化分析：将测序结果与GenBank上已登录的基因序列进行比对，发现与黑曲霉(Aspergillus niger)同源性最高，为100％。利用MEGA 5软件进行多序列比对分析，Neighbor-joining法构建系统发育树。综合生理生化特征和分子生物学特性，确定产酸菌JC-H为黑曲霉(Aspergillus niger)。
如图3可知，产酸菌JC-H在查式液体培养基中生长延滞期较短，对数生长期为2-3.5d，在培养到3.5d后处于生长的平稳期。生长3.5d以后菌株的生物量达到0.11g·mL-1。产酸菌JC-H在培养0-5d时，pH变化幅度为5.44降低至4.86，菌株培养液pH值下降了0.58；48h后发酵液pH逐渐上升。
产酸菌JC-H在产酸中的应用，将产酸菌JC-H孢子以3.6×106个/50mL的比例加入发酵培养基进行恒温震荡培养，于温度为30℃、pH为6、160rpm条件下产酸效率最高。
重金属胁迫下，随重金属浓度的增加，产酸菌JC-H的初始培养液pH值降低、pH的变化幅度变小，培养液在发酵后期出现pH上升趋势。在重金属Pb胁迫时，产酸菌JC-H在200mg/L Pb2+处理该菌株27h后培养液pH值下降了0.53；重金属Zn胁迫时，产酸菌JC-H在100mg/LZn2+处理该菌株24h后培养液pH值下降了0.87，说明低浓度的Zn2+对菌株产酸具有促进作用，但随着重金属添加量的升高，菌株产酸能力也下降；在重金属Cd胁迫时，产酸菌JC-H在50mg/L Cd2+处理该菌株63h后培养液pH值下降了0.75，说明低浓度的Cd2+对菌株产酸具有促进作用，但随着重金属添加量的升高，菌株产酸能力也下降；
产酸菌JC-H的鉴定方法，包括：利用18S rRNA基因序列对菌种鉴定和发酵培养基的发酵液中有机酸含量的测定。
利用18S rRNA基因序列对菌种鉴定具体为：
目标菌株18S rRNA基因序列的PCR扩增：
通过真菌通用引物ITS1(5′-TCCGTAGGTGAACCTGCGG-3′)和ITS4(5′-TCCTCCGCTTATTGATATC-3′)进行PCR扩增。在聚合酶的作用下，经预变性、变性、退火、延伸、35个循环、修复延伸、获得目标菌株的18S rRNA基因序列。
发酵培养基的发酵液中有机酸含量的测定具体为：
首先进行0.1mol/L NaOH标准溶液、1％酚酞指示剂的配置。然后准确吸取10mL样品发酵液，转移到100mL容量瓶中，加蒸馏水至100mL刻度并摇匀。用滤纸过滤，准确吸取滤液20mL放入100mL三角瓶中，加入1％酚酞2滴，用0.1mol/L NaOH标准溶液滴定至初显粉色在0.5min内不褪色为终点，记下NaOH用量，重复取三次取平均值。并测定空白组消耗NaOH的含量。
产酸菌JC-H对重金属Cd、Pb和Zn的耐受性：
通过观测产酸菌JC-H在不同浓度的Cd2+、Pb2+和Zn2+平板上培养10d后的菌落直径大小，考察这两株产酸真菌对重金属的耐受性。随着重金属离子浓度的增加，产酸菌JC-H受到不同程度的抑制情况，Cd2+浓度为100mg/L时对产酸菌JC-H的抑菌率达到了80％左右，显著抑制真菌生长，Cd2+浓度在400、500mg/L时完全抑制；在Pb2+浓度为200、300mg/L时，对产酸菌JC-H的抑制效果较少，当Pb2+在高浓度2000mg/L的时候抑制率达到80％以上；在Zn2+浓度上升至400mg/L时对菌株JC-H的抑菌率达到了95％。
产酸菌JC-H在未添加重金属的发酵培养基中初始pH值为5.44，然后pH逐渐下降，48h后上升。随重金属浓度的增加，菌株JC-H的初始培养液pH值降低、pH变化幅度变小、到达最低pH时间延长，培养液在发酵后期出现pH上升趋势。重金属Pb胁迫时，pH值降幅最大者为菌株JC-H，在Pb浓度为200mg/L处理该菌株27h后培养液pH值下降了0.53；重金属Cd胁迫时，在Cd浓度为50mg/L处理该菌株63h后培养液pH下降了0.75；重金属Zn胁迫时，在Zn浓度为100mg/L处理该菌株30h后培养液pH值下降了0.83。
说明产酸菌JC-H耐重金属效果Pb2+>Zn2+>Cd2+。耐不同重金属时产酸菌JC-H仍具有产酸能力。
采用单因素实验法分析不同温度、初始发酵液pH及转速对菌株发酵产酸的影响情况。
发酵培养基采用蔗糖100g，NaNO3 1.5g，KH2PO4 0.5g，MgSO4·7H2O 0.025g，KCl0.025g，酵母浸膏1.6g，蒸馏水1L，pH调至5，121℃灭菌20min；按3.6×106个/50ml的比例加入发酵培养基中，在恒温振荡培养箱中以160rpm，保持30℃培养；
1.温度
温度设置梯度为25℃、28℃、30℃、32℃和35℃，分别测定不同温度下发酵液中pH的变化与发酵液NaOH的消耗量，来确定最佳产酸的温度条件。
如图8-9所示，当培养温度为30℃时，发酵液pH下降能力最大，且消耗NaOH量最多，所以当培养温度达到30℃的时候产酸菌JC-H产酸能力最强。
2.pH
初始发酵液pH设置梯度为4、5、6、7和8，分别测定不同初始发酵液pH下发酵液中pH的变化与发酵液NaOH的消耗量，来确定最佳产酸的初始发酵液pH条件。
如图10-11所示，当培养初始发酵液pH为6时，发酵液pH下降能力最大，且消耗NaOH量最多，所以当培养初始发酵液pH达到6的时候产酸菌JC-H产酸能力最强。
3.转速
转速设置梯度为100rpm、120rpm、140rpm、160rpm和180rpm，分别测定不同转速下发酵液中pH的变化与发酵液NaOH的消耗量，来确定最佳产酸的转速条件。
如图12-13所示，当培养转速为160rpm时，发酵液pH下降能力最大，且消耗NaOH量最多，所以当培养初始发酵液转速达到160rpm的时候产酸菌JC-H产酸能力最强。
序列表
<110> 西安文理学院
<120> 一种产酸菌JC-H及其应用与产酸菌JC-H的培养、鉴定方法
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 571
<212> DNA/RNA
<213> 黑曲霉(Aspergillus niger)
<400> 1
gcggaaggat cattaccgag tgcgggtcct ttgggcccaa cctcccatcc gtgtctattg 60
taccctgttg cttcggcggg cccgccgctt gtcggccgcc gggggggcgc ctctgccccc 120
cgggcccgtg cccgccggag accccaacac gaacactgtc tgaaagcgtg cagtctgagt 180
tgattgaatg caatcagtta aaactttcaa caatggatct cttggttccg gcatcgatga 240
agaacgcagc gaaatgcgat aactaatgtg aattgcagaa ttcagtgaat catcgagtct 300
ttgaacgcac attgcgcccc ctggtattcc ggggggcatg cctgtccgag cgtcattgct 360
gccctcaagc ccggcttgtg tgttgggtcg ccgtccccct ctccgggggg acgggcccga 420
aaggcagcgg cggcaccgcg tccgatcctc gagcgtatgg ggctttgtca catgctctgt 480
aggattggcc ggcgcctgcc gacgttttcc aaccattctt tccaggttga cctcggatca 540
ggtagggata cccgctgaac ttaagcatat c 571

Claims (4)

1.一种产酸菌JC-H，其特征在于，该菌株命名为：黑曲霉(Aspergillus niger)JC-H，已于2021年01月04日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC NO：21424。
2.根据权利要求1所述的产酸菌JC-H的鉴定方法，其特征在于，包括：利用18S rRNA基因序列对菌种鉴定和发酵培养基内发酵液中有机酸含量的测定。
3.根据权利要求2所述的产酸菌JC-H的鉴定方法，其特征在于，利用18SrRNA对基因序列菌种鉴定具体为：目标菌株18S rRNA基因序列的PCR扩增：通过真菌通用引物ITS1 5′-TCCGTAGGTGAACCTGCGG-3′和ITS45′-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3′进行PCR扩增，在聚合酶的作用下，经预变性、变性、退火、延伸、35个循环、修复延伸、获得目标菌株的18SrRNA基因序列。
4.根据权利要求2所述的产酸菌的鉴定方法，其特征在于，发酵培养基内发酵液中有机酸含量的测定具体为：首先进行0.1mol/L NaOH标准溶液、1％酚酞指示剂的配置；然后准确吸取10mL样品发酵液，转移到100mL容量瓶中，加蒸馏水至100mL刻度并摇匀；用滤纸过滤，准确吸取滤液20mL放入100mL三角瓶中，加入1％酚酞2滴，用0.1mol/L NaOH标准溶液滴定至初显粉色在0.5min内不褪色为终点，记下NaOH用量，重复取三次取平均值，并测定空白组消耗NaOH的含量。
CN202110770418.0A 2021-07-08 2021-07-08 一种产酸菌jc-h及其应用与产酸菌jc-h的培养、鉴定方法 Active CN114032178B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202110770418.0A CN114032178B (zh) 2021-07-08 2021-07-08 一种产酸菌jc-h及其应用与产酸菌jc-h的培养、鉴定方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202110770418.0A CN114032178B (zh) 2021-07-08 2021-07-08 一种产酸菌jc-h及其应用与产酸菌jc-h的培养、鉴定方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN114032178A CN114032178A (zh) 2022-02-11
CN114032178B true CN114032178B (zh) 2023-11-17

Family

ID=80139846

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202110770418.0A Active CN114032178B (zh) 2021-07-08 2021-07-08 一种产酸菌jc-h及其应用与产酸菌jc-h的培养、鉴定方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN114032178B (zh)

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101392224A (zh) * 2008-09-19 2009-03-25 南京工业大学 一株高产绿原酸水解酶的黑曲霉菌株及其应用
CN102796670A (zh) * 2012-07-25 2012-11-28 浙江大学 一种黑曲霉菌株及其应用
CN103695319A (zh) * 2013-12-23 2014-04-02 安徽丰原发酵技术工程研究有限公司 一种生产柠檬酸的菌株及其发酵制备柠檬酸的方法
CN105018352A (zh) * 2015-07-23 2015-11-04 云南大学 一种产曲酸真菌菌株及制备方法
CN109182136A (zh) * 2018-08-31 2019-01-11 南京农业大学 一株具有多种难溶性磷源分解能力的黑曲霉jxz01的分离及应用
CN111778165A (zh) * 2020-08-11 2020-10-16 哈尔滨工业大学 黑曲霉dfy1及其应用

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101392224A (zh) * 2008-09-19 2009-03-25 南京工业大学 一株高产绿原酸水解酶的黑曲霉菌株及其应用
CN102796670A (zh) * 2012-07-25 2012-11-28 浙江大学 一种黑曲霉菌株及其应用
CN103695319A (zh) * 2013-12-23 2014-04-02 安徽丰原发酵技术工程研究有限公司 一种生产柠檬酸的菌株及其发酵制备柠檬酸的方法
CN105018352A (zh) * 2015-07-23 2015-11-04 云南大学 一种产曲酸真菌菌株及制备方法
CN109182136A (zh) * 2018-08-31 2019-01-11 南京农业大学 一株具有多种难溶性磷源分解能力的黑曲霉jxz01的分离及应用
CN111778165A (zh) * 2020-08-11 2020-10-16 哈尔滨工业大学 黑曲霉dfy1及其应用

Also Published As

Publication number Publication date
CN114032178A (zh) 2022-02-11

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Zhang et al. Solubilization of insoluble potassium and phosphate by Paenibacillus kribensis CX-7: a soil microorganism with biological control potential
Bai et al. Phylogenetic diversity of culturable bacteria from alpine permafrost in the Tianshan Mountains, northwestern China
CN111154673B (zh) 一株灵菌红素产生菌及其生产方法与应用
CN104531585B (zh) 一种戴尔福特菌及其应用
CN101603022B (zh) 一种施氏假单胞菌菌株及其在降解高分子量多环芳烃中的应用
CN108239611B (zh) 一株短杆菌及其用于农田重金属污染原位修复的方法
Nguyen et al. Limnobacter humi sp. nov., a thiosulfate-oxidizing, heterotrophic bacterium isolated from humus soil, and emended description of the genus Limnobacter Spring et al. 2001
CN104371948B (zh) 微杆菌菌株及其应用
CN114934002A (zh) 一株放线菌新物种及其在植物抗旱促生中的应用
CN108676763B (zh) 一种高耐锑卡氏变形杆菌dshn0704及其分离筛选方法和应用
CN101525585B (zh) 广州芽孢杆菌及其应用
CN114032178B (zh) 一种产酸菌jc-h及其应用与产酸菌jc-h的培养、鉴定方法
CN106591173A (zh) 一种可活化土壤重金属镉的弯曲芽孢杆菌（Bacillus flexus）HL‑37及其应用
CN108977370A (zh) 一株降解苯酚类化合物的酵母菌及其应用
CN115851450A (zh) 极细枝孢霉nxy8、菌丝球及其在高盐废水处理中的应用
CN101812416A (zh) 一种用门多萨假单细胞菌株的提取方法
CN105670965B (zh) 一种具有铁还原能力的菌种及其应用
CN105602869B (zh) 一种适合于电动修复长链烷烃污染土壤的中间底物降解菌及其应用
CN113846028B (zh) 一种产酸菌nq-p4及其应用与产酸菌nq-p4的培养、鉴定方法
CN114395482B (zh) 一种产酸菌jc-c及其应用与产酸菌jc-c的培养、鉴定方法
CN114480157B (zh) 一种产酸菌nq-p6及其应用与产酸菌nq-p6的培养、鉴定方法
CN114317302A (zh) 一种黑臭水体修复菌剂及其应用
CN114426937A (zh) 一株具有解磷功能的根瘤内生菌s43及其应用
CN111154702A (zh) 一种降解石油污染的阴沟肠杆菌及其应用
CN100400646C (zh) 耐氯菌株1号

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant