CN114019076A - 一种同时测定复方羟丙茶碱去氯羟嗪胶囊中5种成分的方法 - Google Patents

一种同时测定复方羟丙茶碱去氯羟嗪胶囊中5种成分的方法 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种同时测定复方羟丙茶碱去氯羟嗪胶囊中5种成分的方法，该方法采用高效液相色谱法，以含高氯酸钠的磷酸二氢钾溶液‑乙腈为流动相，梯度洗脱，在检测波长240nm和210nm下实现同时测定全部5种成分的含量。该方法操作简便，通用性强，且具有良好的专属性、精密度、重复性、回收率以及耐用性等，可用于复方羟丙茶碱去氯羟嗪胶囊的质量控制与评价，保证用药有效性。

Description

一种同时测定复方羟丙茶碱去氯羟嗪胶囊中5种成分的方法
技术领域
本发明涉及药物分析领域，具体涉及一种同时测定复方羟丙茶碱去氯羟嗪胶囊中5种成分的方法。
背景技术
复方羟丙茶碱去氯羟嗪胶囊(曾用名舒喘平胶囊)为5种活性成分组成的复方制剂，每粒胶囊含二羟丙茶碱100mg、盐酸去氯羟嗪30mg、盐酸溴己新8mg、消旋山莨菪碱(含两对对映异构体)3mg及盐酸克仑特罗0.035mg，用于治疗支气管哮喘、喘息型支气管炎及慢性阻塞性肺气肿等疾病。这5种活性成分具体结构式如下：
Figure BDA0003351228690000011
由于多组分共存且含量差异较大，复方羟丙茶碱去氯羟嗪胶囊现行质量标准(国家药品标准WS-10001-(HD-0446)-2002/化学药品地方标准上升国家标准.第五册,2002:167-169)采用0.02mol/L磷酸二氢钠-甲醇(30:70)流动相体系，在240nm波长下，仅对二羟丙茶碱、盐酸去氯羟嗪、盐酸溴己新3个组分的含量进行控制。此流动相体系下消旋山莨菪碱及盐酸克仑特罗与二羟丙茶碱共洗脱，但在此方法的供试品浓度及波长条件下，消旋山莨菪碱及盐酸克仑特罗因响应较低无法检出，因此不干扰另外3个组分的测定，但也因此无法对其中消旋山莨菪碱及盐酸克仑特罗的含量进行测定与控制。
茆玉国等采用甲醇-水(95:5)色谱系统在240nm波长下，同样只对该复方制剂中二羟丙茶碱、盐酸去氯羟嗪、盐酸溴己新3个组分进行测定(茆玉国,杨波.RP-HPLC法测定舒喘平胶囊中3个主要成分的含量[J].药学与临床研究,2007,15(2):113-115)。
唐树荣采用二阶导数光谱法和紫外光谱法测定舒喘平胶囊(复方羟丙茶碱去氯羟嗪胶囊)中盐酸溴己新和二羟丙茶碱(唐树荣.二阶导数光谱法和紫外光谱法测定复方制剂中盐酸溴己胺和二羟丙茶碱[J].药学学报,1986(10):776-780)。
周震宇在国家药品标准的色谱系统基础上，通过降低流动相甲醇比例至30％，增大供试品浓度，在210nm波长下单独对复方制剂中的盐酸克仑特罗含量进行了测定。但消旋山莨菪碱依旧与二羟丙茶碱共洗脱，且盐酸去氯羟嗪、盐酸溴己新因保留较强未能洗脱，因此只能单独测定盐酸克仑特罗(周震宇.复方羟丙茶碱去氯羟嗪胶囊中盐酸克仑特罗的含量测定[J].中国药品标准,2017,18(1):25-28)。
因此目前法定检验方法以及其他文献方法均存在明显缺陷，质量控制存在较大风险，无法测定全部5种活性成分的含量。为了保证复方羟丙茶碱去氯羟嗪胶囊产品质量的稳定性和有效性，急需开发一种能够同时测定其中5种成分含量的检测方法。
发明内容
本发明要解决的技术问题是：提供一种同时测定复方羟丙茶碱去氯羟嗪胶囊中5种成分的方法。该方法弥补了目前法定检验方法只能同时测定二羟丙茶碱、盐酸去氯羟嗪、盐酸溴己新3种成分的缺陷，且方法操作简便，通用性强，可用于该产品的质量控制与评价。
本发明解决上述技术问题的技术方案如下：
本发明提供了一种同时测定复方羟丙茶碱去氯羟嗪胶囊中5种成分的方法，其特征在于，测定的5种成分为二羟丙茶碱、盐酸去氯羟嗪、盐酸溴己新、消旋山莨菪碱及盐酸克仑特罗，包括如下步骤：
(1)色谱条件：使用具有紫外检测器的高效液相色谱仪进行高效液相色谱法检测；其中，检测波长为240nm和210nm的双波长测定条件；采用十八烷基硅烷键合硅胶为固定相的色谱柱；流动相A为含高氯酸钠的磷酸二氢钾溶液，流动相B为乙腈，梯度洗脱；
(2)稀释剂的制备；
(3)对照品溶液的制备；
(4)供试品溶液的制备；
(5)在两种波长下按外标法以峰面积计算样品中5种成分的含量。
在本发明中，发明人通过多次尝试选择后发现磷酸盐溶液-乙腈体系相比背景技术的磷酸盐溶液-甲醇体系和水-甲醇体系，对消旋山莨菪碱与二羟丙茶碱有更好的分离效果，对盐酸去氯羟嗪与盐酸溴己新有更强的洗脱能力，通过进一步选择合适的色谱柱、设置合适的梯度洗脱程序、柱温、流速，对5种组分实现了较好的分离；然而去氯羟嗪与溴己新拖尾严重(拖尾因子均大于2.3)，峰高较低，检测灵敏度低，尝试封端更好的色谱柱或加入常用的扫尾剂三乙胺，改善效果均不明显，且加入扫尾剂三乙胺后，基线漂移明显变大；
通过尝试发明人惊奇地发现，高氯酸钠的加入，使得去氯羟嗪与溴己新的拖尾明显改善，拖尾因子从均大于2.3减小为均小于1.5，所有组分的峰高都明显增大，提高了检测灵敏度，且除二羟丙茶碱外的另外4个组分保留均有部分增强，分离度进一步提高。推测是因为高氯酸钠与质子化的碱性分析物产生了一定的离子对作用，形成了复合物，减少了与固定性残留硅醇基作用而造成的拖尾，且增强了分析物的疏水性，提高了其保留。通过再次调整合适的梯度程序，最终在0.01mol·L-1磷酸二氢钾溶液(含0.05mol·L-1高氯酸钠，pH2.5)-乙腈的流动相体系下，梯度程序30min，5个组分完全分离且拖尾因子均小于1.5。更换不同的C18柱考察，分离度及拖尾因子均能很好的重现；
在本发明中，盐酸克仑特罗及消旋山莨菪碱最大吸收波长为210nm，但在该波长处，含量相对最高的二羟丙茶碱响应很强，呈平头峰，无法测定其含量。由于二羟丙茶碱在245nm处具有最小吸收，且盐酸去氯羟嗪及盐酸溴己新在240nm处具有较大吸收，因此最终采用双波长测定法，即选择240nm作为二羟丙茶碱、盐酸去氯羟嗪、盐酸溴己新3个组分的测定波长，选择210nm作为盐酸克仑特罗及消旋山莨菪碱2个组分的测定波长；
进一步的，所述步骤(1)中色谱柱选自Xbridge Shield RP18色谱柱(250mm×4.6mm,5μm)、ZORBBAX Eclipse XDB-C18色谱柱(250mm×4.6mm,5μm)、Xselect CSH C18色谱柱(250mm×4.6mm,5μm)或Kromasil C18色谱柱(250mm×4.6mm,5μm)；
进一步的，所述步骤(1)中流动相A为含0.05mol/L高氯酸钠的0.01mol/L磷酸二氢钾溶液；流动相B为乙腈；
进一步的，所述步骤(1)中进样量为20±5μL，流速为1.0±0.1ml/min，柱温为35±5℃；
优选的，所述步骤(1)中进样量为20μL；流速为1.0ml/min；柱温为35℃；
进一步的，所述步骤(1)中梯度洗脱程序为：0～3min,10％B；3～13min,10％B→40％B；13～23min,40％B；23～24min，40％B→10％B；24～30min，10％B；或0～5min,10％B；5～15min,10％B→40％B；15～27min,40％B；27～28min；40％B→10％B；28～35min，10％B；
进一步的，所述步骤(2)具体为取初始比例的流动相作为稀释剂；所述初始比例的流动相为0.01mol/L磷酸二氢钾溶液(含0.05mol/L高氯酸钠，用磷酸调pH至2.5)-乙腈(90:10)；
进一步的，所述步骤(3)具体为分别取二羟丙茶碱对照品、盐酸去氯羟嗪对照品、盐酸溴己新对照品、消旋山莨菪碱对照品、盐酸克仑特罗对照品适量，加稀释剂溶解并稀释制成混合对照品溶液；
在本发明中，为提高盐酸克仑特罗及消旋山莨菪碱的灵敏度同时又避免二羟丙茶碱过载，以及考虑到含量均匀度测定的可操作性，最终调整供试品浓度为取约相当于一个制剂单位的内容物稀释100倍，即制成每1mL分别约含二羟丙茶碱1000μg、盐酸去氯羟嗪300μg、盐酸溴己新80μg、消旋山莨菪碱30μg及盐酸克仑特罗0.35μg的供试品溶液；
进一步的，所述步骤(4)具体为取本品10～20粒，精密称定，倾出内容物后，精密称定胶囊壳，计算平均装量，取内容物适量(约相当于二羟丙茶碱100mg)，精密称定，置100mL量瓶中，加稀释剂60mL～80mL，超声提取10min以上，放冷，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；
在本发明的5种组分中，盐酸溴己新在水中极微溶解。盐酸溴己新在其他制剂中的提取方法均为纯甲醇或高比例超声提取。但在本发明中，甲醇对其他4个组分的溶解度不好，同时为避免溶剂效应，本发明考察在100mL量瓶中加入60～70mL梯度初始比例的流动相后，不同超声时间(5、10、15、20min，频率53kHz)对5个组分尤其是盐酸溴己新的提取率。结果惊奇地发现，超声5min后，除盐酸溴己新以外的其他4个组分均可提取完全，而盐酸溴己新在超声10min后可提取完全。因此最终提取方法为加入适量初始比例流动相超声10min以上；
进一步的，所述步骤(5)具体为在240nm波长下按外标法以峰面积计算样品中二羟丙茶碱、盐酸去氯羟嗪、盐酸溴己新的含量；在210nm波长下按外标法以峰面积计算样品中消旋山莨菪碱、盐酸克仑特罗的含量。
本发明中化合物的中文命名与结构式有冲突的，以结构式为准；结构式有明显错误的除外。
本发明的有益效果在于：
(1)重新建立了流动相为磷酸二氢钾溶液-乙腈的色谱体系，通过合适的色谱柱、梯度洗脱程序、流速、柱温等可同时对复方羟丙茶碱去氯羟嗪胶囊中全部5种活性成分进行分离；
(2)通过加入高氯酸钠有效改善了各组分的拖尾，且提高了各组分的响应；
(3)通过采用240nm和210nm的双波长测定法以及合适的供试品、对照品浓度，提高了处方中含量较低的盐酸克仑特罗及消旋山莨菪碱的检测灵敏度；
本发明通过上述技术方案的组合，最终实现了复方羟丙茶碱去氯羟嗪胶囊中全部5个成分含量的同时测定，弥补了目前法定检验方法只能检测其中二羟丙茶碱、盐酸去氯羟嗪、盐酸溴己新3个成分以及其他文献方法只能单独测定其中盐酸克伦特罗1种成分的缺陷，完善了该复方制剂的质量控制；且该检测方法操作简便，方法学验证表明该方法通用性强、重复性好、准确度高；同时，由于这5个组分也是其他止咳平喘类复方制剂的常见活性组分，因此也为其他复方制剂同时测定其中多种组分提供了借鉴。
附图说明
图1为本申请实施例1提供的240nm波长的空白溶剂的色谱图；
图2为本申请实施例1提供的210nm波长的空白溶剂色谱图；
图3为本申请实施例1提供的240nm波长下混合对照品溶液的色谱图；
图4为本申请实施例1提供的210nm波长下混合对照品溶液的色谱图；
图5为本申请实施例1提供的240nm波长下供试品溶液的色谱图；
图6为本申请实施例1提供的210nm波长下供试品溶液的色谱图；
图7为本申请实施例2提供的240nm波长下供试品溶液的色谱图；
图8为本申请实施例2提供的210nm波长下供试品溶液的色谱图；
其中，峰1为二羟丙茶碱峰；峰2为山莨菪碱异构体1峰；峰3为山莨菪碱异构体2峰；峰4为克仑特罗峰；峰5为去氯羟嗪峰；峰6为溴己新峰。
具体实施方式
以下结合实例说明本发明，但不限制本发明。在本领域内，技术人员对本发明所做的简单替换或改进均属于本发明所保护的技术方案内。
实施例1：
1.材料
1.1仪器
Shimadzu LC-20AT高效液相色谱仪(日本岛津公司)；XSE205DU型电子分析天平(瑞士梅特勒公司)；SK5200HP超声波仪(上海科导公司)；超纯水机(美国Milli-Q公司)。
1.2试剂与试药
对照品二羟丙茶碱(批号100417-201603，含量99.9％)，盐酸去氯羟嗪(批号100262-201302，含量99.1％)，盐酸溴己新(批号100427-201903，含量99.8％)，消旋山莨菪碱(批号100249-201904，含量99.7％)，盐酸克仑特罗(批号100072-201503，以克仑特罗计含量90.5％)均购自中国食品药品检定研究院。乙腈为色谱纯，购自赛默飞世尔公司。磷酸二氢钾、高氯酸钠、磷酸均为分析纯，购自国药试剂有限公司。三批复方羟丙茶碱去氯羟嗪胶囊(批号191201-2、200201-2、201001-2)分别为来自生产企业、批发经营企业、医疗使用机构的监督抽检样品。
2.方法
2.1色谱条件与系统适用性
色谱柱为XBrige Shield RP18色谱柱(250mm×4.6mm,5μm)；以0.01mol·L-1磷酸二氢钾溶液(含0.05mol·L-1高氯酸钠，磷酸调pH至2.5)为流动相A，乙腈为流动相B，梯度洗脱(0～3min,10％B；3～13min,10％B→40％B；13～23min,40％B；23～24min，40％B→10％B；24～30min，10％B)，流速1.0mL/min，柱温35℃，检测波长为240nm(二羟丙茶碱、盐酸去氯羟嗪、盐酸溴己新)和210nm(消旋山莨菪碱、盐酸克仑特罗)，进样量20μL。取混合对照品溶液进样，两种波长下5个组分之间的分离度均应大于2.0，拖尾因子均应小于2.0。
2.2溶液制备
2.2.1稀释剂取初始比例的流动相[0.01mol·L-1磷酸二氢钾溶液(含0.05mol·L-1高氯酸钠，磷酸调pH至2.5)-乙腈(90：10)]作为稀释剂。
2.2.2混合对照品溶液取盐酸去氯羟嗪对照品约20mg，精密称定，置20mL量瓶中，加稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品储备液(1)；取盐酸溴己新对照品约20mg，精密称定，置50mL量瓶中，加稀释剂超声溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品储备液(2)；取消旋山莨菪碱对照品约20mg，精密称定，置200mL量瓶中，加稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品储备液(3)；取盐酸克仑特罗对照品约14mg，置200mL量瓶中，加稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取2mL，置20mL量瓶中，加稀释剂稀释至刻度，摇匀，作为对照品储备液(4)；取二羟丙茶碱对照品约20mg，精密称定，置20mL量瓶中，分别精密量取对照品储备液(1)、(2)、(3)、(4)适量，置同一20mL量瓶中，加稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀，制成每1mL分别含二羟丙茶碱1000μg、盐酸去氯羟嗪300μg、盐酸溴己新80μg、消旋山莨菪碱30μg及盐酸克仑特罗0.35μg的混合照品溶液。
2.2.3供试品溶液取本品20粒，精密称定，倾出内容物后，精密称定胶囊壳，计算平均装量，取内容物适量(约相当于二羟丙茶碱100mg)，精密称定，置100mL量瓶中，加稀释剂60mL，超声提取10min，放冷，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。
2.3计算方法
在240nm波长下按外标法以峰面积计算样品中二羟丙茶碱、盐酸去氯羟嗪、盐酸溴己新的含量；在210nm波长下按外标法以峰面积计算样品中消旋山莨菪碱、盐酸克仑特罗的含量。
实施例2：
本实施例仅色谱柱和梯度程序与实施例1存在差异，其它材料及方法均同实施例1，具体如下：
色谱柱为ZORBBAX Eclipse XDB-C18色谱柱(250mm×4.6mm,5μm)，梯度洗脱(0～5min,10％B；5～15min,10％B→40％B；15～27min,40％B；27～28min；40％B→10％B；28～35min，10％B)。相比实施例1，由于色谱柱和梯度程序的差异，各色谱峰的保留时间一定程度上整体发生了变化，但各组分色谱峰之间的分离度、拖尾因子、理论板数均能达到预期理想的效果(图7和图8)。
试验例1：方法学验证
1.专属性试验
取实施例1“2.2”项下稀释剂、混合对照品溶液、供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件进行测定。结果在240nm和210nm两个波长下，混合对照品溶液中二羟丙茶碱、消旋山莨菪碱异构体1(由于含两对对映异构体，因此呈双峰)、消旋山莨菪碱异构体2、克仑特罗、去氯羟嗪、溴己新依次出峰(图3和4)。6个峰之间的分离度均大于3.0，拖尾因子均小于1.5。供试品色谱图中显示与对照品相同保留时间的色谱峰，且其他杂质峰或辅料峰均不干扰测定(图5和6)。空白溶剂色谱图中各主峰保留时间处均未出现色谱峰干扰(图1和2)。
2.线性与范围
精密量取实施例1“2.2.1”项混合对照品液3、5、4mL，分别置于10mL、10mL、5mL量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，得到30％、50％和80％三个浓度水平的系列混合对照品溶液。取二羟丙茶碱对照品约30mg，精密称定，置20mL量瓶中，分别精密量取“2.2.1”项下对照品储备液(1)、(2)、(3)、(4)适量，置同一20mL量瓶中，加稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀，制成150％浓度水平的混合对照品溶液，再精密量取4.0mL置于5mL量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，得到120％浓度水平的混合对照品溶液。按“2.1”项下色谱条件，以对照品的浓度值(C)为横坐标，以峰面积值(A)为纵坐标进行线性回归(n＝6)，结果见表1。表明各成分在线性范围内与峰面积呈良好线性关系。
表1：5种成分的线性回归方程
Figure BDA0003351228690000071
Figure BDA0003351228690000081
3.精密度试验
取实施例1“2.2.2”项混合对照品溶液，按“2.1”项色谱条件连续进样6次，结果二羟丙茶碱、盐酸去氯羟嗪、盐酸溴己新、消旋山莨菪碱(两个异构体合并计算)、盐酸克仑特罗峰面积RSD(n＝6)分别为0.02％、0.2％、0.2％、0.1％、1.0％，表明仪器精密度良好。
4.重复性试验
取同一批号样品(批号201001-2)，按实施例1“2.2.3”项方法平行制备6份供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件测定，按外标法计算，测得样品中二羟丙茶碱、盐酸去氯羟嗪、盐酸溴己新、消旋山莨菪碱(两个异构体合并计算)、盐酸克仑特罗平均含量(n＝6)分别为标示量的100.8％、100.6％、98.7％、97.9％、92.4％，RSD(n＝6)分别为0.2％、0.5％、0.2％、0.8％、1.8％。表明方法重复性良好。
5.回收率试验
精密量取已知含量的供试品溶液(批号201001-2)5mL置10mL量瓶中，平行制备9份。分别精密加入对照品溶液适量，制成80％、100％、120％三个浓度水平的加样回收率溶液，每个浓度水平平行制备3份。按实施例1“2.1”项色谱条件进样，计算回收率(n＝9)，结果见表2。表明方法准确度良好。
表2：回收率试验结果
Figure BDA0003351228690000082
6.溶液稳定性
取实施例1“2.2.3”项供试品溶液，分别在室温放置0、12、24、48h后，按“2.1”项下色谱条件测定，结果各组分峰面积的RSD均小于2.0％，说明供试品溶液在室温下48h内稳定。
7.耐用性考察
考察不同品牌的C18色谱柱如Xbridge Shield RP18(250mm×4.6mm,5μm)、Kromasil C18(250mm×4.6mm,5μm)、Xselect CSH C18(250mm×4.6mm,5μm)，以及更高柱温(40℃)进样，系统适用性试验均满足要求。
试验例2：偏差验证
按实施例1“2.2.3”项下方法制备3批供试品溶液，每批平行制备两份。按“2.1”项下色谱条件进行测定。并将二羟丙茶碱、盐酸去氯羟嗪、盐酸溴己新3个组分的含量测定结果与按现行质量标准测定的结果进行了对比，相对偏差均小于2％。结果详见表3。
表3:三批样品中5个组分含量测定结果
Figure BDA0003351228690000091
以上所述的仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明创造构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种同时测定复方羟丙茶碱去氯羟嗪胶囊中5种成分的方法，其特征在于，测定的5种成分为二羟丙茶碱、盐酸去氯羟嗪、盐酸溴己新、消旋山莨菪碱及盐酸克仑特罗，包括如下步骤：
（1）色谱条件：使用具有紫外检测器的高效液相色谱仪进行高效液相色谱法检测；其中，检测波长为240nm和210nm的双波长测定条件；采用十八烷基硅烷键合硅胶为固定相的色谱柱；流动相A为含高氯酸钠的磷酸二氢钾溶液，流动相B为乙腈，梯度洗脱；
（2）稀释剂的制备；
（3）对照品溶液的制备；
（4）供试品溶液的制备；
（5）在两种波长下按外标法以峰面积计算样品中5种成分的含量。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤（1）中色谱柱选自XBridgeShield RP18色谱柱（250mm×4.6mm, 5μm）、ZORBBAX Eclipse XDB-C18色谱柱（250mm×4.6mm, 5μm）、Xselect CSH C18色谱柱（250mm×4.6mm, 5μm）或Kromasil C18色谱柱（250mm×4.6mm, 5μm）。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤（1）中流动相A为含0.05mol/L高氯酸钠的0.01mol/L磷酸二氢钾溶液，并用磷酸调pH至2.5；流动相B为乙腈。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤（1）中进样量为20±5μL；流速为1.0±0.1ml/min；柱温为35±5℃。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤（1）中梯度洗脱程序为：
0~3min, 10%B；3~13min, 10%B→40%B；13~23min, 40%B；23~24min，40%B→10%B；24~30min，10%B；
或
0~5min, 10%B；5~15 min, 10%B→40%B；15~27 min, 40%B；27~28 min；40%B→10%B；28~35 min，10%B。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤（2）具体为取初始比例的流动相作为稀释剂；所述初始比例的流动相为0.01mol/L磷酸二氢钾溶液（含0.05mol/L高氯酸钠，用磷酸调pH至2.5）-乙腈（90:10）。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤（3）具体为分别取二羟丙茶碱对照品、盐酸去氯羟嗪对照品、盐酸溴己新对照品、消旋山莨菪碱对照品、盐酸克仑特罗对照品适量，加稀释剂溶解并稀释制成混合对照品溶液。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述混合对照品溶液中每1mL分别约含二羟丙茶碱1000μg、盐酸去氯羟嗪300μg、盐酸溴己新80μg、消旋山莨菪碱30μg及盐酸克仑特罗0.35μg。
9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤（4）具体为取本品10~20粒，精密称定，倾出内容物后，精密称定胶囊壳，计算平均装量，取内容物适量（约相当于二羟丙茶碱100mg），精密称定，置100mL量瓶中，加稀释剂60mL~80mL，超声提取10min以上，放冷，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。
10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤（5）具体为在240nm波长下按外标法以峰面积计算样品中二羟丙茶碱、盐酸去氯羟嗪、盐酸溴己新的含量；在210nm波长下按外标法以峰面积计算样品中消旋山莨菪碱、盐酸克仑特罗的含量。
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