CN114007624A - 3-氧-氨磺酰氧基-7β-甲基-D-增-6-氧杂雌-1,3,5(10),8(9)-四烯-17a-酮用于治疗乳腺癌的用途 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及医药领域以及化学和药理学行业，并且涉及一种用于治疗乳腺癌的药物。尤其是，本发明涉及由3‑氧‑氨磺酰氧基‑7β‑甲基‑D‑增‑6‑氧杂雌‑1,3,5(10),8(9)‑四烯‑17a‑酮在乳腺癌（包括三阴性乳腺癌）的单一疗法和辅助疗法中作为抗癌剂的用途。

Description

3-氧-氨磺酰氧基-7β-甲基-D-增-6-氧杂雌-1,3,5(10),8 (9)-四烯-17a-酮用于治疗乳腺癌的用途
技术领域
本发明涉及医药领域以及化学和制药行业，并且涉及一种用于治疗乳腺癌的药物。
背景技术
乳腺癌是女性的一种主要的肿瘤疾病[Parkin D.M.，Bray F.，Ferlay J.，PisaniP.，CA Cancer J.Clin.，2005年，第55卷，第74-108页]。根据世卫组织的数据，全世界有209万患者，每年与乳腺癌相关的死亡人数为62.7万名妇女[http://www.who.int/news-room/fact-sheets/detail/cancer]。
在这种位置出现的很大一部分肿瘤是在雌激素的作用下发展而成的[Yue W.，Yager J.D.，Wang J.-P.，Jupe E.R.，Santen R.J.，Steroids，2013年，第78卷，第161-170页]。免疫组织化学分析揭示了表达雌激素(ER)、孕激素(PR)和HER2NEU(使癌症具有“赫赛汀敏感性”)的受体的乳腺癌。很大一部分肿瘤具有ER、PR和/或HER2NEU 3+。若某种肿瘤没有ER和PR并且对赫赛汀不敏感(ER0、PR0、HER2NEU 0-1)，则被认为是三阴性形式(ER-/PR-/HER-2-)。这是最致命的乳腺癌形式之一，因为它没有抑制其生长的标靶。目前，世界上没有治疗这种形式的癌症的药物。
雌激素在血液中循环，并以硫酸盐的形式积聚在肿瘤中，这种硫酸盐不能与雌激素受体结合，但在转化为游离激素后，它们会激活肿瘤生长。因此，一个有希望的治疗策略路线包括使用抑制剂阻断该组游离激素在肿瘤中的形成。
他莫西芬是一种来自选择性雌激素受体调节剂的组的药物，可阻断雌激素对激素依赖性组织(包括乳腺组织)的作用。他莫昔芬是针对绝经前和绝经后妇女的一种标准激素治疗。在使用他莫昔芬期间出现的最典型的副作用包括：静脉血栓形成风险增加、心血管疾病(包括心绞痛发作)进程的恶化、子宫内膜肿瘤(息肉和子宫内膜癌)的发育，以及子宫纤维瘤。他莫昔芬还有肝毒性。根据由Gordon Amidon等人在1995年开发的生物制药分类系统(BCS)，他莫昔芬被归入第二类，即，具有低溶解度和高渗透性的药物。
芳香酶抑制剂已被证明比他莫昔芬更有效。目前，来曲唑和阿那曲唑等芳香酶抑制剂已在本领域中投入使用。根据BCS系统，它们被归入第一类，第一类代表具有高溶解度和高渗透性的药物。芳香酶抑制剂的副作用包括骨质疏松症、潮热和头痛。
除了上述药物之外，甾体硫酸酯酶也是一个备受关注的课题，因为大量的循环雌酮硫酸酯会导致雌激素的局部间质形成。甾体硫酸酯酶催化雌酮硫酸酯水解为雌酮，并催化DHEA硫酸酯水解为DHEA(Dibbelt I.，Biol.Chem，Hoppe-Seyler，1991年，第372卷，第173-185页；Stein C.，J.Biol.Chem.，1989年，第264卷，第13865-13872页)。
最著名的甾体硫酸酶抑制剂是EMATE-雌酮氨基磺酸酯(Ahmed S.，Curr.Med.Chem.，2002年，第9卷，第2期，第263-273页)。但是，它有一个明显的缺点。含有氨基磺酸酯基团的雌酮硫酸酯酶抑制剂随着游离配体的释放而导致不可逆的酶失活[Howarth N.M.，Purohit A.，Reed M.J.，J.Med.Chem.，1994年，第37卷，第219-221页]。尤其是，雌酮氨基磺酸酯抑制雌酮硫酸酯酶，但游离激素的释放导致强的亲子宫活性的出现[Shields-Botella J.等人，J.Steroid Biochem.Mol.Biol.，2003年，第84卷，第327-335页]。
在WO9933858(А2)(公开日为1999-07-08)中描述了一组雌酮硫酸酯酶抑制剂，其中下列通式的衍生物可用作雌酮硫酸酯酶抑制剂，用于治疗或预防雌激素依赖性疾病，例如乳腺癌。
Figure BDA0003153441950000031
这些化合物也具有亲子宫活性。
因此，在寻找新的抗癌试剂时，需要考虑到雌酮硫酸酯酶抑制剂的氨基磺酸酯基团的载体不应具有激素活性。
这些要求导致了基于雌激素的氨基磺酸酯的应用的扩展，因为它们具有广泛的活性，尤其是它们可用于治疗复发性乳腺癌[Shah R.等人，“Sulfatase inhibitors forrecidivist breast cancer treatment:A chemical review”，Eur.J.Med.Chem.，2016年，第114卷，第170-190页]。尤其是，描述了一种雌二醇氨基磺酸酯的17α取代的衍生物。
现有技术还公开了一种作为乳腺癌细胞MCF-7生长抑制剂的具有以下化学式的化合物3,17αβ-二氨磺酰氧基-7β-甲基-D-增-6-氧杂雌-1,3,5(10),8,14-五烯(RU 2619457，于2017年5月16日公布)。可将这种化合物选择作为本发明的最接近的现有技术。
Figure BDA0003153441950000032
发明内容
本发明的技术问题是提供一种化合物并开发一种合成该化合物的有效方法，所述化合物可在乳腺癌的单一疗法和辅助疗法中用作抗癌剂，包括最致命形式的乳腺癌，例如三阴性乳腺癌(ER-/PR-/HER-2-)。
该问题是通过提供抑制雌酮硫酸酯酶的式(2)化合物3-氧-氨磺酰氧基-7β-甲基-氧-增-6-氧杂雌-1,3,5(10),8(9)-四烯在乳腺癌的单一疗法和辅助疗法中作为抗癌剂的用途来解决的，所述乳腺癌包括三阴性形式(ER-/PR-/HER-2-)的乳腺癌。
Figure BDA0003153441950000041
下面是式(2)的目标化合物的合成方案。
Figure BDA0003153441950000042
将式(3)的化合物引入与乙烯基溴化镁的反应中。所得到的乙烯基甲醇与2-甲基环己烷-1,3-二酮的缩合导致形成式(4)的开环化合物。在盐酸中进行式(4)的化合物的环化脱水反应，以得到式(5)的化合物。通过在乙醇中的钯/碳上对式(5)的化合物进行氢化来制备式(6)的雌四烯，产率为75％。制备式(2)的氨基磺酸酯，产率为86％。
所获得的抗癌剂属于第五类危险物质(LD50>5000毫克/千克)。所获得的数据允许将用于抗肿瘤活性研究的剂量分级为安全。该药物的治疗有效剂量优选为0.1至20毫克/千克。
FBV/N雌性小鼠(HER-2/neu转基因)的乳腺肿瘤(BT)是腺癌，其特征是雌激素受体(ER)含量低(图1)，并且缺少孕酮受体(PR)。可分化为两种腺癌亚型，具体而言是ER+、PR-和ER-、PR-。乳腺肿瘤中的ERα的免疫组织化学分析表明，在45个样本中，仅有10个样本的细胞核呈单一阳性染色(图1)。
该模型对CAF(环磷酰胺、阿霉素、5-氟尿嘧啶)治疗敏感，能观察到肿瘤生长抑制(TGI)，导致平均肿瘤体积稳定(图2)。实验第14天和第21天的TGI分别为63％和46％。
由于动物可能患有多个肿瘤，因此在实验开始时分析小鼠的平均总肿瘤体积(图3)及其肿瘤体积的相对变化(图4)是合理的。肿瘤体积的相对增大图表明该参数在对照组中是线性变化的，这说明该参数适合用于评估肿瘤对治疗的生物反应。例如，在近3周的时间内，用CAF疗法进行的治疗未引起该参数的任何变化，这表明疾病稳定。
附图说明
本发明是通过以下附图示出的：
图1示出了用ERα抗体对乳腺肿瘤进行染色；
可视化：辣根过氧化物酶+二氨基联苯胺，放大倍率x100(A)。乳腺导管细胞核和各个肿瘤细胞核的特异性染色(B)，放大倍率x 400。
图2示出了在实验开始时接受CAF治疗的小鼠体内的肿瘤的平均体积；
图3示出了在实验开始时接受CAF治疗的小鼠体内的肿瘤的平均总体积；
图4示出了在实验开始时接受CAF治疗的小鼠体内的肿瘤的平均总体积的相对变化；
图5示出了在使用20毫克/千克和100毫克/千克的剂量评估药物的抗肿瘤活性时小鼠体内的肿瘤的平均总体积的相对变化；
图6示出了在使用2.0毫克/千克的剂量评估药物的抗肿瘤活性时小鼠体内的肿瘤的平均总体积的相对变化。
具体实施方式
下面将通过本文公开的实施例进一步说明本发明。
例1
3-羟基-7β-甲基-D-增-6-氧杂雌-1,3,5(10),8(9),8,14-五烯-17a-酮(5)的合成。
由6.0克色满酮(3)制备式4的开环化合物。
向式4的开环甾类化合物在100毫升甲醇中的溶液，加入6毫升盐酸，并将所得的混合物煮沸10小时。将冷却的反应混合物倒入冷水中，用5％碳酸氢钠溶液洗涤，然后用水洗涤至中性pH，并在硫酸钠上干燥。在旋转蒸发器上蒸馏溶剂。所得的产物的熔点为237-240℃。
NMR谱1Н(CDCl3),ppm:7.08；6.45；6.39；5.84；5.30；5.00，采用(1Н,C3-OH)；2.79；2.74-2.40；2.14,1.69；1.28；1.24，采用(3H)。
NMR谱13С(DMSO-d6),ppm:214.6；158.6,152.6(С-3,С-5),137.4；C)；123.9,125.4；124.1；115.7；118.3；108.7；103.8；69.9；45.0；35.4；28.6；24.1；21.1；18.1。
从100毫克雌五烯获得3-羟基-7β-甲基-D-增-6-氧杂雌-1,3,5(10),8(9)-四烯-17a-酮(6)。使反应产物从甲醇中结晶出来，并干燥。获得了76毫克(75％)化合物，T>254℃。
NMR谱1H(DMSO-d6),ppm:9.44，采用(С3-ОН)；6.96；6.33,6.22；4.84,2.80；2.51；2.46,2.18；2.12；2.06；1.91；1.83；1.62；1.52；1.16,1.08，采用(ЗН)。
NMR谱13С(DMSO-d6),ppm:214.4；158.1,152.4；25 128.2；122.3；116.4；123.8；108.5；103.7；70.5；46.8；45.4；37.0；29.0；25.9；22.3；21.8；19.6；16.4。
在不同比例的己烷/石油醚40-70-乙酸乙酯的溶剂体系中，在由Kavalier生产的Silufol UV254和由Machereynagel生产的Alugram SIL G/UV254板上使用薄层色谱法(TLC)，以便检查反应的进展和化合物的个性。在紫外光(λmax＝254纳米)下，通过碘蒸汽的吸附或通过加热时与硫酸的甲醇溶液(3:1)的反应对这些化合物进行检测。
使用购自Acros Organics的硅胶60(0.035-0.070毫米；0.060-0.200毫米)通过柱色谱法对化合物进行纯化。
在Bruker DPX-300上，对于1Н和13С分别以400.130和100.613MHz的频率在298K温度下在CDCl3中(除非另有说明)记录1H和13C NMR谱。使用0.6毫升CDCl3中的3-5毫克化合物溶液，以获得1НNMR谱。在相同体积的包含20-50毫克化合物的溶液中获得13C NMR谱。测量了相对于四甲基硅烷的化学位移，溶剂信号(СDСl3/СНСl3＝99.9/0.1)的分配值为7.26ppm(1H)和77.16ppm(13С)。
例2
药理活性的研究。
细胞培养和培养条件。
对传代的MCF-7人类细胞培养的培养物(乳腺腺癌)进行了研究分析。使用早期传代的正常人类皮肤成纤维细胞(HDF)作为阴性对照。
利用在37℃温度下、在5％二氧化碳气氛中添加的1.0％的不含抗生素的胎牛胚胎血清(Biolot)，在DMEM/F12培养基(Biolot)中，在卡雷尔瓶中对细胞进行培养。
细胞的增殖活性的评估。
以每瓶50x104个细胞在卡雷尔瓶上接种细胞。为了研究细胞在硫酸酯酶抑制条件下的增殖活性，接种后24小时，将培养基替换为含有硫酸酯酶抑制剂的培养基，最终浓度为50毫克/毫升，然后将这些肿瘤细胞系孵育不同时间段(24至72小时)。抑制剂溶解在二甲基亚砜(DMSO)中。培养基中的DMSO的最终浓度不超过0.5％。为了排除DMSO的细胞毒性作用，制备了含有DMSO但不含硫酸酯酶抑制剂的对照样品。
为了排除化合物的非特异性有害作用，使用了正常人类皮肤成纤维细胞。然后使用维尔烯-胰蛋白酶溶液(Biolot)分离细胞，放到具有新鲜的完全培养基的卡雷尔瓶上。在未处理的对照细胞达到培养瓶的每单位表面积的最大细胞密度(单层)时，对细胞进行计数，并将它们的数量设为100％。以一式三份的形式测定了暴露于硫酸酯酶抑制剂的所有被研究的细胞培养物的增殖活性。
对获得的氨基磺酸酯对传代的人类MCF-7细胞培养物(乳腺腺癌)的增殖的影响的研究表明，浓度为20毫克/毫升的式2的甾体完全阻止了肿瘤细胞的增殖，但它不影响没有雌激素受体的人类皮肤成纤维细胞的生长。肿瘤细胞的增殖受到抑制的程度与已临床使用30多年的他莫昔芬的效果相同。这一点非常重要，因为氨基磺酸酯和他莫昔芬具有不同的作用机制，这使得它们的组合使用前景广阔。
在患有乳腺肿瘤的HER-2/neu(ER-/PR-/HER2+)转基因的FVB小鼠的实验中，该试剂比临床使用的他莫昔芬更有效地抑制肿瘤的增殖，这表明它们作为乳腺癌治疗组合的潜力。
对于三阴性乳腺癌的MDA-MB-231细胞系，该化合物抑制细胞生长，IC50＝4.8μM，其效果与临床使用的化疗药物依托泊苷相当。
例3
此研究是对从Charles River Laboratories(意大利)小鼠库获得的常规类别的HER-2/neu转基因雌性FVB小鼠进行的。在研究开始时，动物为21-41周大，体重为25-30克。
在实验中使用了他莫昔芬Hexal(德国霍尔茨基兴市83607，Hexal AG，批号HA1575，2017年1月)，其代表一种药物剂型，该药物配制成白色或微黄色包衣的圆形双凸面片剂，具有均匀光滑的表面，包含20毫克活性化合物。
居住条件是根据《实验动物护理和使用指南》(ILAR publication，1996，NationalAcademy Press，1996)中规定的标准选择的。
动物在适合于实验室啮齿动物的独立T2型笼子中以小组为单位(每组不超过5只动物)在单独的房间中居住。笼子的尺寸为268×215×141立方毫米(底面积为370平方厘米)，分别配有聚碳酸酯桶、带饲料容器的不锈钢盖子和饮水瓶分隔器。
笼内垫材是由无尘刨花制成的。
这些动物可不受限制地获得针对实验室啮齿动物的混合全颗粒饲料。
饮用水可从由TECNIPLAST制造的标准190毫升饮水瓶随意获取，该饮水瓶由高温聚砜制成，带有硅胶圈和由AISI 316不锈钢制成的金属盖。
室温保持在20-26℃的水平，相对湿度为50-70％。光照周期设定为用荧光灯人工照明下的12:12小时夜/天。
在饲养笼上放置一张标识卡，上面有笼子/卡片编号、实验组编号、动物的个体数量、它们的编号和性别、研究编号、负责研究人员的姓名。每个动物的耳廓都用美国Kent-Scientific镍合金制成的小型实验室啮齿动物金属标牌夹住(标牌具有由制造商压印的三位数字)。
在实验结束时，用二氧化碳使小鼠安乐死。对所有动物尸体进行解剖，然后进行微观描述。
使用OECD 423试验(OECD化学品试验指南。急性口服毒性-急性毒性分级法)测定了该药物在HER-2/neu转基因的FVB小鼠体内的LD50值。
在实验中使用了12只雌性小鼠。
在第一步中，给3只小鼠服用药物，剂量为300毫克/千克。使用金属无创伤性管饲法对所研究的药物进行灌胃(i.g.)给药(该程序与临床环境中的口服给药对应)。为了进行灌胃给药，将药物的活性化合物与橄榄油混合，以制备所需浓度的悬浮液，用于每10克动物体重给药0.1毫升悬浮液。给药的剂型是临时制备的。
由于在以300毫克/千克的剂量给药后没有动物死亡，因此对另外3只动物给予了相同的剂量。在这两组中均未发现死亡。因此，进一步以2000毫克/千克的剂量分两步给药，每步中向3只动物给药。
按照表1所示的方案进行临床观察并记录体重。每天对动物进行两次检查，在给药后的头60分钟内进行单独的临床检查，在前4小时内给予特别关注，在前24小时内定期检查，第二天检查，然后一周一次地检查，最多14天。观察者将笼子托在手中，对每只动物进行彻底检查。记录动物的整体状况，例如它们的行为特点、运动活动的强度和性质、毛和皮肤的外观。
使用经过验证的高速电子实验室天平Ohaus Scout Pro(美国)记录动物的体重，该天平的最大负载为2000克、测量步长为0.1克。
在第15天，使动物安乐死，并进行尸检分析，记录宏观变化。将数据收集在一个专用的个体尸检表格中。
在研究结束时，对所有实验动物进行病理形态学检查。仔细检查被安乐死的动物的外部病理变化。检查胸腔和腹腔，并进行内脏的宏观分析。没有对实验动物的器官和组织进行微观分析，因为在整个观察期间没有记录动物的死亡。此外，对内脏的宏观分析没有揭示任何病理变化。
表1.
在评估急性毒性时对动物进行观察和称重的方案
Figure BDA0003153441950000101
Figure BDA0003153441950000111
使用金属无创伤性管饲法对所研究的药物进行灌胃给药(该程序与临床环境中的口服给药途径对应)。该药物以20毫克/千克体重的单次每日剂量，以及以100毫克/千克体重的5倍每日剂量给药。用于给药的药剂的临时溶液是以橄榄油(添加有未精炼的特级初榨橄榄油的精炼橄榄油，商标为Global Village“Clasico”，批号为L:183351116，保质期到2020年4月26日，西班牙BAIEO)制备的。给药量为每10克小鼠体重0.1毫升(每20克小鼠0.2毫升即用型制剂)。在随机分组24小时后开始给药。给药疗程为27-28天。
参考药物他莫昔芬也是使用金属无创伤性管饲给药的(该程序与临床环境中的口服给药对应)，每日剂量为4.0毫克/千克，这是根据临床剂量计算的[5]。该剂量与20毫克/千克的人体每日剂量对应。将他莫昔芬片剂在捣具中捣碎，使用所得的粉末制备40毫升橄榄油中的悬浮液，给药量为每10克小鼠体重0.08毫升，给药持续时间与实验药物相同，持续27-28天。
给对照组饲喂橄榄油(安慰剂)。
评估标准包括临床观察数据、动物体重、死亡时间(若适用)、肿瘤随时间的生长、病理形态学检查数据(尸检期间肿瘤的验证、通过内部器官变化的宏观表现评估毒性作用)。
体重测量
使用经过验证的高速电子实验室天平Ohaus Scout Pro(美国)在第一次给药前记录动物的体重，然后每周记录两次，该天平的最大负载为2000克，测量步长为0.1克。
肿瘤尺寸测量
在称重过程中，每周对动物体内的宏观可检测的肿瘤结节测量一次。为每个节点记录两个线性尺寸，包括最大尺寸和相对于前者成直角的最大尺寸。最大尺寸作为肿瘤节点的长度(a)，第二个尺寸作为肿瘤节点的宽度(b)。肿瘤体积按下式计算：V＝(a×b)2/2。
通过记录每只小鼠的平均肿瘤体积的变化、肿瘤生长抑制(TGI)和平均总肿瘤体积及其随时间的变化来评估治疗的疗效。
肿瘤生长抑制的百分比按下式计算：TGI＝(Vctrl-Vexp)/Vctrl×100(％),其中Vctrl是对照组的平均肿瘤体积，Vexp是实验组的平均肿瘤体积。
将各个表格的原始数据转移到微软Excel 2007工作簿中。为所有量化数据计算组算术平均值(M)和标准偏差(m)。使用统计软件GraphPad Prism 6.0进行了统计分析。使用ANOVA回归分析和费希尔精确检验评估各组之间的差异。
在评估急性毒性时，在前60分钟内连续观察动物，然后在3小时内每小时检查一次，在24小时内再检查一次。在第二天观察两次。然后每天观察一次。在活性化合物给药后，每隔一天对每只动物进行临床检查一次，然后每周检查一次。观察者将饲养笼托在手中，对动物进行彻底检查。记录动物的整体状况，例如它们的行为特点、运动活动的强度和性质、毛和皮肤的外观。
在实验期间，在以300毫克/千克的剂量给药时，没有发现动物死亡。在整个观察期间，没有一只动物表现出可见的中毒迹象。动物的外观和行为都和往常一样。当用手拿起时，这些动物表现出常规的微弱反应。在给药时或给药之后不久，没有发现动物发出声音。
对动物的总体状况和行为反应的每日监测表明，单次口服试验药物不会影响暴露于中毒的实验动物的总体状况和活动。
体重在表2和表3中示出。
表2.以300毫克/千克的起始剂量给药后动物体重的变化
Figure BDA0003153441950000131
表3.以2000毫克/千克的剂量给药后动物体重的变化
Figure BDA0003153441950000132
Figure BDA0003153441950000141
从表2中所示的日期开始，以300毫克/千克的剂量给药的动物的平均体重在第2天下降1％。
由于给药剂量为300毫克/千克时没有动物死亡，因此将给药剂量设为2000毫克/千克。分两步给药，间隔3小时，每步每10克体重给药0.1毫升，浓度为100毫克/毫升，这是因为油中的悬浮液在较高浓度时较稠，不能通过管饲法给药。在以2000毫克/千克剂量给药后，没有发现中毒的临床迹象。不论是哪一组，在整个观察期间，动物的睑裂宽度几乎没有变化。未检测到眼睛的病理性分泌物。鼻子呈粉红色，适度湿润，无病理性分泌物。所有小鼠的毛都很整洁，有光泽，没有秃斑。动物体重在第2天从初始体重下降了1％，在第7天下降了6％(表3)。到观察期结束时，平均体重与初始体重没有差异。
在第15天，使动物安乐死，随后进行尸检分析。在宏观分析时，未发现内脏器官的变化。
尸检数据如下：
动物的毛外表整洁，有光泽，无秃斑。动物的营养状况令人满意。
自然孔口无病理性分泌物。
颌下淋巴结呈圆形，淡粉色，中等致密。唾液腺形态正常，呈淡黄色，中等致密。
腹膜光滑有光泽，腔内无游离液。
脾脏未肿大，致密，包膜光滑有光泽。胰腺呈浅粉色，有叶状结构。
肝脏的大小和形状无变化，肝包膜有光泽。肝组织呈褐色，质地中等致密。
肾脏致密，包膜光滑、有光泽，肾脏周围有适度的脂肪组织外生长。
卵巢未增大，表面有光泽。
胃有折叠的有光泽粘膜，腔内有少量粘液和食物。
胸膜光滑有光泽，胸腔内无游离液。胸腺呈三角形，白色。肺部呈淡粉色，通风。
因此，根据OECD 423试验，该药物可归入第五类或未分类类别，LD50等于或大于5000毫克/千克，这与GOST 12.1.007-76定义的低危害化合物类别对应。
动物令人满意地耐受了药物的给药，未观察到毒性的临床迹象。在整个观察期间，各组的动物体重都在增加，体重的增加可能归因于小鼠肿瘤结节体积的增加(表4、5)。实验结束时的尸检分析未揭示对内脏器官的毒性损伤的特定迹象。
表4.评估20毫克/千克和100毫克/千克剂量的药物的抗肿瘤活性时小鼠平均体重的变化(克)
Figure BDA0003153441950000151
Figure BDA0003153441950000161
表5.评估2.0毫克/千克剂量的药物的抗肿瘤活性时小鼠平均体重的变化(克)
Figure BDA0003153441950000162
在图1、表6中示出了在实验开始时在对照-1组、20毫克/千克给药组、100毫克/千克给药组和他莫昔芬-1组中存在的肿瘤的平均肿瘤体积随时间变化的数据，在图2、表7中示出了对照-3组、2.0毫克/千克给药组和他莫昔芬-2组中的肿瘤的平均肿瘤体积随时间变化的数据。
表6.在使用20.0毫克/千克和100.0毫克/千克的剂量评估药物的抗肿瘤活性时在实验开始时肿瘤的平均体积的变化(立方厘米)
Figure BDA0003153441950000171
M是平均值，m是平均误差，N是分析中包括的治疗开始时的肿瘤数目。#是第一组试验的对照组。
表7.评估2.0毫克/千克的剂量的药物的抗肿瘤活性时在实验开始时肿瘤的平均体积的变化(立方厘米)
Figure BDA0003153441950000172
Figure BDA0003153441950000181
总体来说，可得出结论，与剂量为4.0毫克/千克的参考药物他莫昔芬(他莫昔芬-1、他莫昔芬-2组)相似，在检查剂量范围(2.0、20.0和100.0毫克/千克)内，此药物对本模型没有明显的抗肿瘤作用。对于剂量为20毫克/千克和100毫克/千克的药物，在第28天观察期结束时，与对照组2相比，TGI分别为10％和28％。根据获得的数据(图1、表6、图2、表7)，在实验的第0天，2.0毫克/千克给药组和他莫昔芬-2组的小鼠体内的平均肿瘤体积分别比对照-2组大3.4倍和3.6倍。因此，横跨这些组比较肿瘤体积的绝对值似乎是不准确的，因为这可能影响随后的随着时间的生长速度。因此，评估这些参数的相对变化更准确(表11、表12)。应注意的是，在评估他莫昔芬-2组的TGI时，在第7天至第21天观察到抑制，并且在实验结束时，在治疗开始时肿瘤的平均体积超过对照组中该参数31％，这可能与肿瘤在其生长期间对参考药物的抗性的发展有关。
在分析整个观察期内肿瘤稳定的频率和新肿瘤的发展时(表8)，应注意的是，在观察期结束时确定的趋势是新肿瘤体积变小。因此，在对照-2组中，该参数为0.28±0.09立方厘米，在20毫克/千克给药组和100毫克/千克给药组中，该参数为0.19±0.04立方厘米和0.18±0.04立方厘米，分别比对照(参考)值低32％和36％。剂量为2.0毫克/千克的药物对稳定的频率或新发展的肿瘤的体积都没有影响。
表8.在评估药物的抗肿瘤活性时肿瘤的稳定频率以及在实验结束时出现的新肿瘤的数量和平均体积
Figure BDA0003153441950000191
疾病稳定百分比(％)是一个与RECIST标准类似的参数，它反映了在观察期结束时的体积相对于治疗开始时的体积增大不超过20％的肿瘤的频率。
在分析肿瘤平均总体积的变化时(图3、表9、图4、表10)获得了类似的数据。就TGI而言，剂量为20和100毫克/千克的药物具有抗肿瘤效果，在第28天时分别为12％和30％。
表9.评估20.0毫克/千克和100.0毫克/千克剂量的药物的抗肿瘤活性时小鼠体内的肿瘤的平均总体积(立方厘米)
Figure BDA0003153441950000201
表10.评估2.0毫克/千克剂量的药物的抗肿瘤活性时小鼠体内的肿瘤的平均总体积(立方厘米)
Figure BDA0003153441950000211
在评估小鼠的肿瘤总体积的相对变化时，确定该参数在对照组(对照-2、对照-3)中是线性变化的，并且不断增大。在以20和100毫克/千克的剂量给药时，对于所有实验组，该参数在统计学上显著更低(图5、表11)，这证实了所研究的这种药物调节肿瘤生长的效果，虽然它未导致肿瘤总数的减少。在以2.0毫克/千克的剂量给药时，该参数大于对照值，但是应注意的是，他莫昔芬-2组的该参数也超过了对照-3组的值。
表11.评估20毫克/千克和100毫克/千克剂量的药物的抗肿瘤活性时小鼠的肿瘤的平均总体积相对于第1天的相对变化(以％表示)
Figure BDA0003153441950000221
*、**、***分别为与对照组相比时p<0.05、p<0.01、p<0.001。
表12.评估2.0毫克/千克剂量的药物的抗肿瘤活性时小鼠的肿瘤的平均总体积相对于第1天的相对变化(以％表示)
Figure BDA0003153441950000222
Figure BDA0003153441950000231
***分别为与对照组相比时p<0.001。
就所有分析数据而言，该药物对于HER-2\neu转基因的FBV小鼠的乳腺肿瘤模型的抗肿瘤活性不低于参考药物他莫昔芬。
在观察期结束时，通过比较子宫(不包括子宫角)的重量分析了药物对子宫体的激素作用(表13)。对于在2.0至100毫克/千克的剂量范围内给药的药物，与对照组相比，没有观察到该参数在统计学上的显著差异。
表13.评估药物的抗肿瘤活性期间患有乳腺肿瘤的小鼠的子宫体重量和体重
Figure BDA0003153441950000232
Figure BDA0003153441950000241
对于20毫克/千克和100毫克/千克的剂量，在HER-2/neu转基因的FBV/N雌性小鼠的多发性乳腺肿瘤模型上测试的该药物的TGI方面的效果分别为10％和28％。这种活性与参考药物他莫昔芬(4.0毫克/千克)的活性类似，对于他莫昔芬，在观察期结束时TGI值为5％。
结果表明，本药物没有亲子宫活性。
根据OECD 423试验，本药物可归入第五类或非分类类别，其LD50等于或大于5000毫克/千克，这与GOST 12.1.007-76定义的低危害化合物类别对应。
工业实用性
在接种了三阴性乳腺癌人类肿瘤的动物模型上，该化合物表现出比临床使用的他莫昔芬和芳香酶抑制剂来曲唑更好的作用。
作为所进行的实验的结果，形成了针对此化合物使用的以下建议：绝经后妇女的早期激素阳性乳腺癌的单一疗法和辅助疗法；三阴性乳腺癌的治疗；已使用他莫昔芬治疗2-3年的绝经后妇女的乳腺癌的单一疗法和辅助疗法；晚期乳腺癌的治疗。

Claims (1)

1.由下式2表示的3-氧-氨磺酰氧基-7β-甲基-D-增-6-氧杂雌-1,3,5(10),8(9)-四烯-17a-酮在包括三阴性乳腺癌的乳腺癌的单一疗法和辅助疗法中作为抗癌剂的用途，
Figure DEST_PATH_IMAGE002
。
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