CN113999860A - 一种脱氮基因工程菌的培养方法及装置及应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种脱氮基因工程菌的培养方法及装置及应用,包括培养室以及安装在所述培养室内壁上的加热片,所述培养室的内部安装有吹风机构,所述培养室内部的上下两侧还分别安装有放置机构以及鼓风机构,所述培养室的一侧安装有出风管,所述培养室的另一侧安装有进风管,所述吹风机构包括固定连接在所述培养室内壁侧面的安装板。本发明,既能够增加培养装置内部的空气流动,从而保证了培养装置内部各个角落的温度均一致,而且可以实现放置在培养装置内部的培养皿进行不断移动,从而保证了每个培养皿都能够接触同等的热量、光照等,并且方便对培养装置内部的温度进行调控,保证了工程菌处在最佳的培养状态,因此提高了工程菌培养的质量。
Description
技术领域
本发明涉及脱氮基因工程菌技术领域,具体来说,涉及一种脱氮基因工程菌的培养方法,尤其还涉及一种脱氮基因工程菌的培养装置及应用。
背景技术
工程菌是采用现代生物工程技术加工出来的新型微生物,具有多功能、高效和适应性强等特点;工程菌通常采用培养装置进行培养,而现有技术中的培养装置存在受热不均匀,以及不便于对培养装置内部的温度进行调控,从而导致工程菌受热不均,进而影响工程菌的构建的问题。
为此,我们提出一种脱氮基因工程菌的培养方法及装置及应用。
发明内容
本发明的技术任务是针对以上不足,提供一种脱氮基因工程菌的培养方法及装置及应用,既能够增加培养装置内部的空气流动,从而保证了培养装置内部各个角落的温度均一致,而且可以实现放置在培养装置内部的培养皿进行不断移动,从而保证了每个培养皿都能够接触同等的热量、光照等,并且方便对培养装置内部的温度进行调控,保证了工程菌处在最佳的培养状态,因此提高了工程菌培养的质量,来解决上述问题。
本发明的技术方案是这样实现的:
本发明提供了一种脱氮基因工程菌的培养方法,包括以下步骤:
S1、采集原位水水样,制作DNA样本,并通过培养设备进行培养;
S2、根据数据库中报道的氨氧化细菌amo A基因序列设计简并引物,以B.subtilis168DN作为宿主菌,构建amo A基因文库,通过高通量方法初步筛选高活性的amo A基因,再通过复筛和分子手段(采用通用引物以及特异性引物进行菌落PCR验证)进一步对初筛菌株的amo A活性进行验证;
S3、HAO、NOS基因同上;
S4、以B.subtilis 168DN作为宿主菌,将筛选到的amo A基因、hao基因、nos基因共表达;
S5、将宏基因文库和基因突变基因技术应用于氨氧化酶工程菌的构建,即另采用易错PCR方法,提高突变谱的多样性,筛选高活性氨氧化酶突变基因,后将AMO-HAO-NOS三种基因进行串联,构建高活性氨氧化工程菌。
本发明还提供了一种脱氮基因工程菌的培养装置,包括上述所述的培养设备,所述培养设备包括培养室以及安装在所述培养室内壁上的加热片,所述培养室的内部安装有吹风机构,所述培养室内部的上下两侧还分别安装有放置机构以及鼓风机构,所述培养室的一侧安装有出风管,所述培养室的另一侧安装有进风管;
其中,所述吹风机构包括固定连接在所述培养室内壁侧面的安装板,所述安装板的侧面固定连接有对称设置的连接弹簧,两个所述连接弹簧的另一端通过复位板固定连接,所述复位板的顶部固定连接有吹风机,所述培养室的侧面还固定连接有安装架,所述安装架上固定连接有伺服电机,且所述伺服电机的输出轴活动贯穿所述安装架设置,所述伺服电机的输出轴上固定连接有收卷辊,所述收卷辊上缠绕设置有拉绳,所述拉绳远离所述收卷辊的一端与所述复位板侧面的中心处固定连接;
其中,所述放置机构由旋转组件以及等距离安装在所述旋转组件上的若干个放置组件构成;
其中,所述旋转组件包括固定连接在所述培养室上的旋转电机,所述旋转电机的输出轴上固定连接有旋转轴,所述旋转轴的表面固定连接有旋转辊;
其中,所述放置组件包括固定连接在所述旋转辊上的放置架,所述放置架上固定连接有放置轴,所述放置轴的表面转动连接有对称设置的连接架,两个所述连接架之间通过放置板固定连接;
其中,所述鼓风机构由活塞板以及对称安装在所述活塞板底部两侧的复位组件构成,所述活塞板的底部通过两个所述复位组件安装在所述培养室内壁的底部,所述培养室内壁的底部且对应所述活塞板的位置还安装有驱动组件;
其中,所述复位组件包括固定连接在所述培养室内壁底部的安装座,所述安装座顶部的两侧均固定连接有定位柱,两个所述定位柱之间通过定位板滑动连接,所述定位板顶部的中心处固定连接有筒体,所述筒体的内壁上滑动连接有定位滑块,所述定位滑块的底部固定连接有柱体,且所述柱体的底部活动贯穿所述筒体以及所述定位板设置,并与所述安装座的顶部固定连接;
其中,所述驱动组件包括固定连接在所述培养室内壁底部的支撑架,所述支撑架上固定连接有驱动电机,所述驱动电机的输出轴上固定连接有驱动轴,所述驱动轴的表面固定连接有对称设置的凸轮;
其中,所述出风管以及进风管的内壁上均安装有防逆流组件,所述防逆流组件包括固定连接在所述出风管内壁上的密封环,所述密封环侧面的顶部与底部均固定连接有导杆,两个所述导杆之间通过导套滑动连接,所述导杆上套设有套簧,所述套簧的一端与所述密封环固定连接,所述套簧的另一端与所述导套固定连接,所述导套侧面的中心处固定连接有连杆,所述连杆的另一端固定连接有与所述密封环相适配的密封板。
作为优选,所述吹风机构还包括对称连接在所述安装板侧面的两个限位滑杆,所述限位滑杆的另一端活动贯穿所述复位板设置,并与所述培养室的内壁固定连接。
作为优选,所述旋转轴远离所述旋转电机的一端通过滚珠轴承与所述培养室的内壁转动连接。
作为优选,所述放置组件还包括对称开设在所述放置板顶部的放置槽。
作为优选,所述放置组件还包括固定连接在所述放置板底部的配重块。
作为优选,所述活塞板的边缘处固定连接有与所述培养室内壁相适配的环形密封圈。
作为优选,所述活塞板的底部固定连接有受力板。
作为优选,所述密封板靠近所述密封环的一侧固定连接有与所述密封板相适配的密封垫。
本发明还提供了一种脱氮基因工程菌的应用,所述脱氮基因工程菌在硝化作用以及反硝化作用中的应用。
与现有技术相比,本发明的优点和积极效果在于:
1、本发明,设置的吹风机构由安装板、连接弹簧、复位板、吹风机、安装架、伺服电机、收卷辊以及拉绳构成,通过伺服电机对拉绳的收卷与放卷,并在连接弹簧的弹力作用下,实现吹风机的往复移动,因此增加了培养室内部的空气流动,从而保证了培养室内部的各个角落的温度均一致,因此为工程菌的培养提供了良好的前提;
2、本发明,设置的放置机构由旋转组件以及放置组件构成,能够在旋转组件驱动的作用下,带动放置在放置组件上的培养皿进行不断转动,从而可以保证每个培养皿均接受同等的热量、光照等,因此提高了工程菌的培养质量;
3、本发明,设置的鼓风机构由活塞板、复位组件以及驱动组件构成,当培养室内部的温度较高时,能够实现培养室内部的空气流通,从而保证培养室内部的温度符合工程菌的培养;
4、本发明,设置的防逆流组件由密封环、导杆、导套、套簧、连杆以及密封板构成,通气时,气压对密封板挤压,并使得密封板脱离密封环,从而使得气体流过,不通气时,密封板受到套簧的弹力作用,恢复原位,并堵住密封环,从而实现气体的断流。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案,下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍,显而易见地,下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例,对于本领域普通技术人员来讲,在不付出创造性劳动的前提下,还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1是根据本发明实施例的脱氮基因工程菌的培养方法的流程图;
图2是根据本发明实施例的脱氮基因工程菌的培养装置的结构示意图;
图3是根据本发明实施例的脱氮基因工程菌的培养装置的内部结构示意图;
图4是根据本发明实施例的脱氮基因工程菌的培养装置中吹风机构的结构示意图;
图5是根据本发明实施例的脱氮基因工程菌的培养装置中放置机构的结构示意图;
图6是根据本发明实施例的脱氮基因工程菌的培养装置中旋转组件的结构示意图;
图7是根据本发明实施例的脱氮基因工程菌的培养装置中放置组件的结构示意图;
图8是根据本发明实施例的脱氮基因工程菌的培养装置中放置组件的另一视角的结构示意图;
图9是根据本发明实施例的脱氮基因工程菌的培养装置中鼓风机构的结构示意图;
图10是根据本发明实施例的脱氮基因工程菌的培养装置中鼓风机构的另一视角的结构示意图;
图11是根据本发明实施例的脱氮基因工程菌的培养装置中活塞板的结构示意图;
图12是根据本发明实施例的脱氮基因工程菌的培养装置中活塞板的另一视角的结构示意图;
图13是根据本发明实施例的脱氮基因工程菌的培养装置中复位组件的结构示意图;
图14是根据本发明实施例的脱氮基因工程菌的培养装置中驱动组件的结构示意图;
图15是根据本发明实施例的脱氮基因工程菌的培养装置中出风管的内部结构示意图;
图16是根据本发明实施例的脱氮基因工程菌的培养装置中出风管的另一视角的内部结构示意图;
图17是根据本发明实施例的脱氮基因工程菌的培养装置中防逆流组件的结构示意图。
图中:
1、培养室;2、加热片;3、吹风机构;4、放置机构;5、鼓风机构;6、出风管;7、进风管;301、安装板;302、连接弹簧;303、复位板;304、吹风机;305、安装架;306、伺服电机;307、收卷辊;308、拉绳;401、旋转组件;402、放置组件;4011、旋转电机;4012、旋转轴;4013、旋转辊;4021、放置架;4022、放置轴;4023、连接架;4024、放置板;501、活塞板;502、复位组件;503、驱动组件;5021、安装座;5022、定位柱;5023、定位板;5024、筒体;5025、定位滑块;5026、柱体;5031、支撑架;5032、驱动电机;5033、驱动轴;5034、凸轮;601、防逆流组件;6011、密封环;6012、导杆;6013、导套;6014、套簧;6015、连杆;6016、密封板;309、限位滑杆;4025、放置槽;4026、配重块;5011、环形密封圈;5012、受力板;6017、密封垫。
具体实施方式
为了能够更清楚地理解本发明的上述目的、特征和优点,下面结合附图和实施例对本发明做进一步说明。需要说明的是,在不冲突的情况下,本申请的实施例及实施例中的特征可以相互组合。
下面结合附图和具体实施例对本发明作进一步说明。
实施例1
如图1中所示,本发明提供的一种脱氮基因工程菌的培养方法,包括以下步骤:
S1、采集原位水水样,制作DNA样本,并通过培养设备进行培养;
S2、根据数据库中报道的氨氧化细菌amo A基因序列设计简并引物,以B.subtilis168DN作为宿主菌,构建amo A基因文库,通过高通量方法初步筛选高活性的amo A基因,再通过复筛和分子手段(采用通用引物以及特异性引物进行菌落PCR验证)进一步对初筛菌株的amo A活性进行验证;
S3、HAO、NOS基因同上;
S4、以B.subtilis 168DN作为宿主菌,将筛选到的amo A基因、hao基因、nos基因共表达;
S5、将宏基因文库和基因突变基因技术应用于氨氧化酶工程菌的构建,即另采用易错PCR方法,提高突变谱的多样性,筛选高活性氨氧化酶突变基因,后将AMO-HAO-NOS三种基因进行串联,构建高活性氨氧化工程菌。
实施例2
基于上述工艺,本发明实施例的一种脱氮基因工程菌的培养装置,如图2-17所示,包括实施例1中的培养设备,所述培养设备包括培养室1以及安装在所述培养室1内壁上的加热片2,所述培养室1的内部安装有吹风机构3,所述培养室1内部的上下两侧还分别安装有放置机构4以及鼓风机构5,所述培养室1的一侧安装有出风管6,所述培养室1的另一侧安装有进风管7;
其中,所述吹风机构3包括固定连接在所述培养室1内壁侧面的安装板301,所述安装板301的侧面固定连接有对称设置的连接弹簧302,两个所述连接弹簧302的另一端通过复位板303固定连接,所述复位板303的顶部固定连接有吹风机304,所述培养室1的侧面还固定连接有安装架305,所述安装架305上固定连接有伺服电机306,且所述伺服电机306的输出轴活动贯穿所述安装架305设置,所述伺服电机306的输出轴上固定连接有收卷辊307,所述收卷辊307上缠绕设置有拉绳308,所述拉绳308远离所述收卷辊307的一端与所述复位板303侧面的中心处固定连接;
其中,所述放置机构4由旋转组件401以及等距离安装在所述旋转组件401上的若干个放置组件402构成;
其中,所述旋转组件401包括固定连接在所述培养室1上的旋转电机4011,所述旋转电机4011的输出轴上固定连接有旋转轴4012,所述旋转轴4012的表面固定连接有旋转辊4013;
其中,所述放置组件402包括固定连接在所述旋转辊4013上的放置架4021,所述放置架4021上固定连接有放置轴4022,所述放置轴4022的表面转动连接有对称设置的连接架4023,两个所述连接架4023之间通过放置板4024固定连接;
其中,所述鼓风机构5由活塞板501以及对称安装在所述活塞板501底部两侧的复位组件502构成,所述活塞板501的底部通过两个所述复位组件502安装在所述培养室1内壁的底部,所述培养室1内壁的底部且对应所述活塞板501的位置还安装有驱动组件503;
其中,所述复位组件502包括固定连接在所述培养室1内壁底部的安装座5021,所述安装座5021顶部的两侧均固定连接有定位柱5022,两个所述定位柱5022之间通过定位板5023滑动连接,所述定位板5023顶部的中心处固定连接有筒体5024,所述筒体5024的内壁上滑动连接有定位滑块5025,所述定位滑块5025的底部固定连接有柱体5026,且所述柱体5026的底部活动贯穿所述筒体5024以及所述定位板5023设置,并与所述安装座5021的顶部固定连接;
其中,所述驱动组件503包括固定连接在所述培养室1内壁底部的支撑架5031,所述支撑架5031上固定连接有驱动电机5032,所述驱动电机5032的输出轴上固定连接有驱动轴5033,所述驱动轴5033的表面固定连接有对称设置的凸轮5034;
其中,所述出风管6以及进风管7的内壁上均安装有防逆流组件601,所述防逆流组件601包括固定连接在所述出风管6内壁上的密封环6011,所述密封环6011侧面的顶部与底部均固定连接有导杆6012,两个所述导杆6012之间通过导套6013滑动连接,所述导杆6012上套设有套簧6014,所述套簧6014的一端与所述密封环6011固定连接,所述套簧6014的另一端与所述导套6013固定连接,所述导套6013侧面的中心处固定连接有连杆6015,所述连杆6015的另一端固定连接有与所述密封环6011相适配的密封板6016。
通过采用上述技术方案,本发明既能够增加培养装置内部的空气流动,从而保证了培养装置内部各个角落的温度均一致,而且可以实现放置在培养装置内部的培养皿进行不断移动,从而保证了每个培养皿都能够接触同等的热量、光照等,并且方便对培养装置内部的温度进行调控,保证了工程菌处在最佳的培养状态,因此提高了工程菌培养的质量。
其中,吹风机构3由安装板301、连接弹簧302、复位板303、吹风机304、安装架305、伺服电机306、收卷辊307以及拉绳308构成,通过伺服电机306对拉绳308的收卷与放卷,并在连接弹簧302的弹力作用下,实现吹风机304的往复移动,因此增加了培养室1内部的空气流动,从而保证了培养室1内部的各个角落的温度均一致,因此为工程菌的培养提供了良好的前提;
其中,放置机构4由旋转组件401以及放置组件402构成,能够在旋转组件401驱动的作用下,带动放置在放置组件402上的培养皿进行不断转动,从而可以保证每个培养皿均接受同等的热量、光照等,因此提高了工程菌的培养质量;
其中,鼓风机构5由活塞板501、复位组件502以及驱动组件503构成,当培养室1内部的温度较高时,能够实现培养室1内部的空气流通,从而保证培养室1内部的温度符合工程菌的培养;
其中,防逆流组件601由密封环6011、导杆6012、导套6013、套簧6014、连杆6015以及密封板6016构成,通气时,气压对密封板6016挤压,并使得密封板6016脱离密封环6011,从而使得气体流过,不通气时,密封板6016受到套簧6014的弹力作用,恢复原位,并堵住密封环6011,从而实现气体的断流。
实施例3
如图2-17所示,本实施例与实施例1的不同之处在于,所述吹风机构3还包括对称连接在所述安装板301侧面的两个限位滑杆309,所述限位滑杆309的另一端活动贯穿所述复位板303设置,并与所述培养室1的内壁固定连接。
通过采用上述技术方案,对复位板303起到限位作用,增加了复位板303往复移动的稳定性。
实施例4
如图2-17所示,本实施例与实施例1的不同之处在于,所述旋转轴4012远离所述旋转电机4011的一端通过滚珠轴承与所述培养室1的内壁转动连接。
通过采用上述技术方案,对旋转轴4012起到限位作用,增加了旋转轴4012转动时的稳定性,因此提高了对培养皿转动的稳定性。
实施例5
如图2-17所示,本实施例与实施例1的不同之处在于,所述放置组件402还包括对称开设在所述放置板4024顶部的放置槽4025,所述放置组件402还包括固定连接在所述放置板4024底部的配重块4026。
通过采用上述技术方案,既增加了培养皿放置在放置板4024上的稳定性,又能够保证放置板4024在转动过程中始终保持原位置,从而提高了培养皿旋转时的稳定性。
实施例6
如图2-17所示,本实施例与实施例1的不同之处在于,所述活塞板501的边缘处固定连接有与所述培养室1内壁相适配的环形密封圈5011,所述活塞板501的底部固定连接有受力板5012。
通过采用上述技术方案,既增加了活塞板501与培养室1内壁之间的密封性,从而保证了鼓风的效果,而且避免凸轮5034直接挤压活塞板501对活塞板501造成的损坏,因此提高了本发明的实用性。
实施例7
如图2-17所示,本实施例与实施例1的不同之处在于,所述密封板6016靠近所述密封环6011的一侧固定连接有与所述密封板6016相适配的密封垫6017。
通过采用上述技术方案,增加了密封板6016与密封环6011连接的密封性,从而提高了防逆流效果。
实施例8
一种脱氮基因工程菌的应用,根据实施例1-7任一项所述的构建得到的脱氮基因工程菌在硝化作用以及反硝化作用中的应用。
为了方便理解本发明的上述技术方案,以下就本发明在实际过程中的工作原理或者操作方式进行详细说明。
在实际应用时,将待培养的工程菌培养皿依次放置在放置板4024上的放置槽4025内,然后打开旋转电机4011带动旋转轴4012转动,从而能够通过旋转辊4013带动放置组件402不断转动,且通过设置配重块4026,能够保证放置组件402不断转动的过程中,始终保持放置板4024在下方,从而提高了培养皿放置的稳定性,同时,打开伺服电机306,并通过收卷辊307对拉绳308进行收卷和放卷,并在连接弹簧32的弹力作用下,能够使得复位板303上的吹风机304进行往复移动,因此可以保证培养室1内部各个角落的温度均一致,从而能够保证每个培养皿都能够接触同等的热量、光照等,并且当培养室1内部的温度较高时,通过驱动电机5032带动驱动轴5033转动,因此使得凸轮5034以不同的半径对活塞板501挤压,并且在复位组件502的弹力作用下,实现活塞板501的上下往复移动,当活塞板501向上移动时,培养室1内部的压强较大,从而会挤压出风管6内部的密封板6016,并使得密封板6016脱离密封环6011,因此可以将培养室1内部的热空气通过出风管6排出,当活塞板501向下移动时,培养室1内部的压强较小,出风管6处的密封板6016在套簧6014的弹力作用下,堵住密封环6011,而进风管7内壁上的密封板6016由于受到气体的压力作用,脱离密封环6011,从而能够将外界凉空气引入培养室1,以此往复,直至达到设定温度,从而方便对培养装置内部的温度进行调控,保证了工程菌处在最佳的培养状态,因此提高了工程菌培养的质量。
通过上面具体实施方式,所述技术领域的技术人员可容易的实现本发明。但是应当理解,本发明并不限于上述的具体实施方式。在公开的实施方式的基础上,所述技术领域的技术人员可任意组合不同的技术特征,从而实现不同的技术方案。
Claims (10)
1.一种脱氮基因工程菌的培养方法,其特征在于,包括以下步骤:
S1、采集原位水水样,制作DNA样本,并通过培养设备进行培养;
S2、根据数据库中报道的氨氧化细菌amo A基因序列设计简并引物,以B.subtilis168DN作为宿主菌,构建amo A基因文库,通过高通量方法初步筛选高活性的amo A基因,再通过复筛和分子手段(采用通用引物以及特异性引物进行菌落PCR验证)进一步对初筛菌株的amo A活性进行验证;
S3、HAO、NOS基因同上;
S4、以B.subtilis 168DN作为宿主菌,将筛选到的amo A基因、hao基因、nos基因共表达;
S5、将宏基因文库和基因突变基因技术应用于氨氧化酶工程菌的构建,即另采用易错PCR方法,提高突变谱的多样性,筛选高活性氨氧化酶突变基因,后将AMO-HAO-NOS三种基因进行串联,构建高活性氨氧化工程菌。
2.一种脱氮基因工程菌的培养装置,其特征在于,包括权利要求1中所述的培养设备,所述培养设备包括:培养室(1)以及安装在所述培养室(1)内壁上的加热片(2),所述培养室(1)的内部安装有吹风机构(3),所述培养室(1)内部的上下两侧还分别安装有放置机构(4)以及鼓风机构(5),所述培养室(1)的一侧安装有出风管(6),所述培养室(1)的另一侧安装有进风管(7);
其中,所述吹风机构(3)包括固定连接在所述培养室(1)内壁侧面的安装板(301),所述安装板(301)的侧面固定连接有对称设置的连接弹簧(302),两个所述连接弹簧(302)的另一端通过复位板(303)固定连接,所述复位板(303)的顶部固定连接有吹风机(304),所述培养室(1)的侧面还固定连接有安装架(305),所述安装架(305)上固定连接有伺服电机(306),且所述伺服电机(306)的输出轴活动贯穿所述安装架(305)设置,所述伺服电机(306)的输出轴上固定连接有收卷辊(307),所述收卷辊(307)上缠绕设置有拉绳(308),所述拉绳(308)远离所述收卷辊(307)的一端与所述复位板(303)侧面的中心处固定连接;
其中,所述放置机构(4)由旋转组件(401)以及等距离安装在所述旋转组件(401)上的若干个放置组件(402)构成;
其中,所述旋转组件(401)包括固定连接在所述培养室(1)上的旋转电机(4011),所述旋转电机(4011)的输出轴上固定连接有旋转轴(4012),所述旋转轴(4012)的表面固定连接有旋转辊(4013);
其中,所述放置组件(402)包括固定连接在所述旋转辊(4013)上的放置架(4021),所述放置架(4021)上固定连接有放置轴(4022),所述放置轴(4022)的表面转动连接有对称设置的连接架(4023),两个所述连接架(4023)之间通过放置板(4024)固定连接;
其中,所述鼓风机构(5)由活塞板(501)以及对称安装在所述活塞板(501)底部两侧的复位组件(502)构成,所述活塞板(501)的底部通过两个所述复位组件(502)安装在所述培养室(1)内壁的底部,所述培养室(1)内壁的底部且对应所述活塞板(501)的位置还安装有驱动组件(503);
其中,所述复位组件(502)包括固定连接在所述培养室(1)内壁底部的安装座(5021),所述安装座(5021)顶部的两侧均固定连接有定位柱(5022),两个所述定位柱(5022)之间通过定位板(5023)滑动连接,所述定位板(5023)顶部的中心处固定连接有筒体(5024),所述筒体(5024)的内壁上滑动连接有定位滑块(5025),所述定位滑块(5025)的底部固定连接有柱体(5026),且所述柱体(5026)的底部活动贯穿所述筒体(5024)以及所述定位板(5023)设置,并与所述安装座(5021)的顶部固定连接;
其中,所述驱动组件(503)包括固定连接在所述培养室(1)内壁底部的支撑架(5031),所述支撑架(5031)上固定连接有驱动电机(5032),所述驱动电机(5032)的输出轴上固定连接有驱动轴(5033),所述驱动轴(5033)的表面固定连接有对称设置的凸轮(5034);
其中,所述出风管(6)以及进风管(7)的内壁上均安装有防逆流组件(601),所述防逆流组件(601)包括固定连接在所述出风管(6)内壁上的密封环(6011),所述密封环(6011)侧面的顶部与底部均固定连接有导杆(6012),两个所述导杆(6012)之间通过导套(6013)滑动连接,所述导杆(6012)上套设有套簧(6014),所述套簧(6014)的一端与所述密封环(6011)固定连接,所述套簧(6014)的另一端与所述导套(6013)固定连接,所述导套(6013)侧面的中心处固定连接有连杆(6015),所述连杆(6015)的另一端固定连接有与所述密封环(6011)相适配的密封板(6016)。
3.根据权利要求2所述的一种脱氮基因工程菌的培养装置,其特征在于,所述吹风机构(3)还包括对称连接在所述安装板(301)侧面的两个限位滑杆(309),所述限位滑杆(309)的另一端活动贯穿所述复位板(303)设置,并与所述培养室(1)的内壁固定连接。
4.根据权利要求2所述的一种脱氮基因工程菌的培养装置,其特征在于,所述旋转轴(4012)远离所述旋转电机(4011)的一端通过滚珠轴承与所述培养室(1)的内壁转动连接。
5.根据权利要求2所述的一种脱氮基因工程菌的培养装置,其特征在于,所述放置组件(402)还包括对称开设在所述放置板(4024)顶部的放置槽(4025)。
6.根据权利要求2所述的一种脱氮基因工程菌的培养装置,其特征在于,所述放置组件(402)还包括固定连接在所述放置板(4024)底部的配重块(4026)。
7.根据权利要求2所述的一种脱氮基因工程菌的培养装置,其特征在于,所述活塞板(501)的边缘处固定连接有与所述培养室(1)内壁相适配的环形密封圈(5011)。
8.根据权利要求2所述的一种脱氮基因工程菌的培养装置,其特征在于,所述活塞板(501)的底部固定连接有受力板(5012)。
9.根据权利要求2所述的一种脱氮基因工程菌的培养装置,其特征在于,所述密封板(6016)靠近所述密封环(6011)的一侧固定连接有与所述密封板(6016)相适配的密封垫(6017)。
10.一种权利要求1培养的脱氮基因工程菌的应用,其特征在于,所述脱氮基因工程菌在硝化作用以及反硝化作用中的应用。
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CN112501099A (zh) * | 2020-12-14 | 2021-03-16 | 浙江双良商达环保有限公司 | 一种脱氮基因工程菌的构建方法及应用 |
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