CN113993526A - 包含源自牛奶的外泌体作为有效成分的用于治疗代谢性疾病的药物组合物 - Google Patents
包含源自牛奶的外泌体作为有效成分的用于治疗代谢性疾病的药物组合物 Download PDFInfo
- Publication number
- CN113993526A CN113993526A CN202080043177.3A CN202080043177A CN113993526A CN 113993526 A CN113993526 A CN 113993526A CN 202080043177 A CN202080043177 A CN 202080043177A CN 113993526 A CN113993526 A CN 113993526A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- milk
- exosomes
- treating
- diabetic
- supernatant
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 210000001808 exosome Anatomy 0.000 title claims abstract description 109
- 239000008267 milk Substances 0.000 title claims abstract description 64
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 title claims abstract description 64
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 title claims abstract description 60
- 208000030159 metabolic disease Diseases 0.000 title claims abstract description 32
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 title claims abstract description 18
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 title claims abstract description 14
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 claims abstract description 13
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 63
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 33
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 25
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- 208000002249 Diabetes Complications Diseases 0.000 claims description 16
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 14
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 14
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 206010012655 Diabetic complications Diseases 0.000 claims description 11
- 208000016097 disease of metabolism Diseases 0.000 claims description 8
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 7
- 230000003914 insulin secretion Effects 0.000 claims description 7
- 208000008589 Obesity Diseases 0.000 claims description 6
- 235000020824 obesity Nutrition 0.000 claims description 6
- 206010007749 Cataract diabetic Diseases 0.000 claims description 5
- 208000007342 Diabetic Nephropathies Diseases 0.000 claims description 5
- 208000032131 Diabetic Neuropathies Diseases 0.000 claims description 5
- 208000008960 Diabetic foot Diseases 0.000 claims description 5
- 206010012689 Diabetic retinopathy Diseases 0.000 claims description 5
- 201000009101 diabetic angiopathy Diseases 0.000 claims description 5
- 201000007025 diabetic cataract Diseases 0.000 claims description 5
- 208000033679 diabetic kidney disease Diseases 0.000 claims description 5
- 235000013376 functional food Nutrition 0.000 claims description 4
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 claims description 4
- 230000036541 health Effects 0.000 claims description 3
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 2
- 235000020247 cow milk Nutrition 0.000 claims description 2
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical group N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 55
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 abstract description 27
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 abstract description 27
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 abstract description 27
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 abstract description 11
- 108091006300 SLC2A4 Proteins 0.000 abstract description 9
- 102100034825 [Pyruvate dehydrogenase (acetyl-transferring)] kinase isozyme 4, mitochondrial Human genes 0.000 abstract description 9
- 108010034219 Insulin Receptor Substrate Proteins Proteins 0.000 abstract description 8
- 102000009433 Insulin Receptor Substrate Proteins Human genes 0.000 abstract description 8
- 230000003178 anti-diabetic effect Effects 0.000 abstract description 8
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 abstract description 8
- 102100034798 CCAAT/enhancer-binding protein beta Human genes 0.000 abstract description 7
- 108010083885 pyruvate dehydrogenase kinase 4 Proteins 0.000 abstract description 6
- 108010064535 CCAAT-Enhancer-Binding Protein-beta Proteins 0.000 abstract description 5
- 102000058061 Glucose Transporter Type 4 Human genes 0.000 abstract description 4
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 abstract description 4
- 101710134031 CCAAT/enhancer-binding protein beta Proteins 0.000 abstract description 3
- 101000734339 Homo sapiens [Pyruvate dehydrogenase (acetyl-transferring)] kinase isozyme 4, mitochondrial Proteins 0.000 abstract description 3
- 229920002477 rna polymer Polymers 0.000 abstract description 2
- 102000015280 CCAAT-Enhancer-Binding Protein-beta Human genes 0.000 abstract 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 27
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 27
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 25
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 25
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 13
- 108700030796 Tsg101 Proteins 0.000 description 12
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 11
- 108700011259 MicroRNAs Proteins 0.000 description 10
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 10
- 239000002679 microRNA Substances 0.000 description 9
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 8
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 7
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 7
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 7
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 6
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 6
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 6
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 6
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 6
- 208000015486 malignant pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 6
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 6
- 108091070501 miRNA Proteins 0.000 description 6
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 description 6
- 208000008443 pancreatic carcinoma Diseases 0.000 description 6
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 6
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 6
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 108091008611 Protein Kinase B Proteins 0.000 description 5
- 102100033810 RAC-alpha serine/threonine-protein kinase Human genes 0.000 description 5
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 5
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 5
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 5
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 5
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 5
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 5
- 108020004635 Complementary DNA Proteins 0.000 description 4
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 4
- 238000010804 cDNA synthesis Methods 0.000 description 4
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 4
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 4
- 230000006870 function Effects 0.000 description 4
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 4
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 4
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 4
- 239000008055 phosphate buffer solution Substances 0.000 description 4
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 4
- 230000007727 signaling mechanism Effects 0.000 description 4
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102100034343 Integrase Human genes 0.000 description 3
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010092799 RNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 3
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 3
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 3
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 3
- 239000003925 fat Substances 0.000 description 3
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 3
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 3
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 3
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 3
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 3
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 3
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 3
- 235000020183 skimmed milk Nutrition 0.000 description 3
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 3
- 208000001072 type 2 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 3
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 description 3
- HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N Acrylamide Chemical compound NC(=O)C=C HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000009020 BCA Protein Assay Kit Methods 0.000 description 2
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L Calcium carbonate Chemical compound [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 229920002527 Glycogen Polymers 0.000 description 2
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 2
- 102000006382 Ribonucleases Human genes 0.000 description 2
- 108010083644 Ribonucleases Proteins 0.000 description 2
- 239000003125 aqueous solvent Substances 0.000 description 2
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 2
- 238000010805 cDNA synthesis kit Methods 0.000 description 2
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 2
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 2
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 2
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 2
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 2
- 238000001378 electrochemiluminescence detection Methods 0.000 description 2
- 239000003792 electrolyte Substances 0.000 description 2
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 2
- 229940096919 glycogen Drugs 0.000 description 2
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 2
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 2
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 210000002487 multivesicular body Anatomy 0.000 description 2
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 2
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 2
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 2
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 2
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 2
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 2
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 2
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 2
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 2
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 2
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 2
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 2
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 239000001226 triphosphate Substances 0.000 description 2
- 235000011178 triphosphate Nutrition 0.000 description 2
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 2
- YLZOPXRUQYQQID-UHFFFAOYSA-N 3-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)-1-[4-[2-[[3-(trifluoromethoxy)phenyl]methylamino]pyrimidin-5-yl]piperazin-1-yl]propan-1-one Chemical compound N1N=NC=2CN(CCC=21)CCC(=O)N1CCN(CC1)C=1C=NC(=NC=1)NCC1=CC(=CC=C1)OC(F)(F)F YLZOPXRUQYQQID-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 206010002383 Angina Pectoris Diseases 0.000 description 1
- 206010003210 Arteriosclerosis Diseases 0.000 description 1
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 238000011537 Coomassie blue staining Methods 0.000 description 1
- 206010059866 Drug resistance Diseases 0.000 description 1
- LVGKNOAMLMIIKO-UHFFFAOYSA-N Elaidinsaeure-aethylester Natural products CCCCCCCCC=CCCCCCCCC(=O)OCC LVGKNOAMLMIIKO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000206602 Eukaryota Species 0.000 description 1
- 239000004606 Fillers/Extenders Substances 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 206010020772 Hypertension Diseases 0.000 description 1
- 206010022489 Insulin Resistance Diseases 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 239000005913 Maltodextrin Substances 0.000 description 1
- 229920002774 Maltodextrin Polymers 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 208000001132 Osteoporosis Diseases 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 208000018262 Peripheral vascular disease Diseases 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 239000012083 RIPA buffer Substances 0.000 description 1
- 238000010802 RNA extraction kit Methods 0.000 description 1
- 101710141795 Ribonuclease inhibitor Proteins 0.000 description 1
- 229940122208 Ribonuclease inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 102100037968 Ribonuclease inhibitor Human genes 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 208000006011 Stroke Diseases 0.000 description 1
- 206010067584 Type 1 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 235000021068 Western diet Nutrition 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 210000001789 adipocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000000577 adipose tissue Anatomy 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 1
- 210000004381 amniotic fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 208000011775 arteriosclerosis disease Diseases 0.000 description 1
- 210000001130 astrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000001363 autoimmune Effects 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000000022 bacteriostatic agent Substances 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 230000008827 biological function Effects 0.000 description 1
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 210000001772 blood platelet Anatomy 0.000 description 1
- 230000037182 bone density Effects 0.000 description 1
- 230000010478 bone regeneration Effects 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 229910000019 calcium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000005754 cellular signaling Effects 0.000 description 1
- 210000001175 cerebrospinal fluid Anatomy 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 230000001461 cytolytic effect Effects 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 239000005549 deoxyribonucleoside Substances 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 1
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 239000007884 disintegrant Substances 0.000 description 1
- 238000001647 drug administration Methods 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 238000002651 drug therapy Methods 0.000 description 1
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- LVGKNOAMLMIIKO-QXMHVHEDSA-N ethyl oleate Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OCC LVGKNOAMLMIIKO-QXMHVHEDSA-N 0.000 description 1
- 229940093471 ethyl oleate Drugs 0.000 description 1
- 238000009207 exercise therapy Methods 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 235000003599 food sweetener Nutrition 0.000 description 1
- 239000003205 fragrance Substances 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 238000007429 general method Methods 0.000 description 1
- 238000000703 high-speed centrifugation Methods 0.000 description 1
- 210000003630 histaminocyte Anatomy 0.000 description 1
- 235000020256 human milk Nutrition 0.000 description 1
- 210000004251 human milk Anatomy 0.000 description 1
- 229940027941 immunoglobulin g Drugs 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 239000007937 lozenge Substances 0.000 description 1
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 description 1
- 229940035034 maltodextrin Drugs 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 208000010125 myocardial infarction Diseases 0.000 description 1
- 230000001537 neural effect Effects 0.000 description 1
- 208000015122 neurodegenerative disease Diseases 0.000 description 1
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 1
- 239000002777 nucleoside Substances 0.000 description 1
- -1 nucleoside triphosphate Chemical class 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 1
- 235000008390 olive oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000004006 olive oil Substances 0.000 description 1
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 238000001050 pharmacotherapy Methods 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 239000006187 pill Substances 0.000 description 1
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 239000000376 reactant Substances 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 230000002207 retinal effect Effects 0.000 description 1
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 1
- 239000003161 ribonuclease inhibitor Substances 0.000 description 1
- 210000003296 saliva Anatomy 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 239000003765 sweetening agent Substances 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 1
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 1
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 1
- 239000000454 talc Substances 0.000 description 1
- 229910052623 talc Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 238000004627 transmission electron microscopy Methods 0.000 description 1
- UNXRWKVEANCORM-UHFFFAOYSA-N triphosphoric acid Chemical compound OP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O UNXRWKVEANCORM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 description 1
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/20—Milk; Whey; Colostrum
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
- A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/04—Anorexiants; Antiobesity agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
- A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2200/00—Function of food ingredients
- A23V2200/30—Foods, ingredients or supplements having a functional effect on health
- A23V2200/328—Foods, ingredients or supplements having a functional effect on health having effect on glycaemic control and diabetes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2200/00—Function of food ingredients
- A23V2200/30—Foods, ingredients or supplements having a functional effect on health
- A23V2200/332—Promoters of weight control and weight loss
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Obesity (AREA)
- Hematology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Emergency Medicine (AREA)
- Child & Adolescent Psychology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Virology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
本发明涉及包含源自牛奶的外泌体作为有效成分的用于治疗代谢性疾病的药物组合物。具体地，本发明的源自牛奶的外泌体包含公知的具有抗糖尿病活性的mi‑155及mi‑375，在促进有关作为促进胰岛素信号传导因子的胰岛素受体底物‑1(IRS‑1)及葡萄糖转运蛋白4(GLUT‑4)的信使核糖核酸(mRNA)的表达的同时，抑制有关作为抑制胰岛素信号传导因子的CCAAT增强子结合蛋白β(C/EBPβ)及丙酮酸脱氢酶激酶4(PDK4)的信使RNA的表达，可以有效地用于治疗代谢性疾病。
Description
技术领域
本发明涉及包含源自牛奶的外泌体作为有效成分的用于治疗代谢性疾病的药物组合物。
背景技术
由于经济的急速发展带来西式饮食与营养过剩，最近韩国国内的疾病发病状态发生了很大变化，与过去不同，动脉硬化、高血压、癌症、肥胖及糖尿病等之类的慢性退行性疾病开始成为主要的死亡原因。尤其是糖尿病及由其引起的并发症的发病率急剧增加，具体地，上世纪七十年代不足人口1％的糖尿病患者到了上世纪九十年代以后每10万人中就有17.2人因糖尿病死亡。
糖尿病为血液中葡萄糖浓度增加的代谢性疾病中的一种，是因胰岛素的分泌量不足或者无法发挥正常功能而导致的疾病。糖尿病大体分为1型和2型，1型糖尿病是因自身免疫机制、病毒、感染等原因而破坏胰腺的B细胞使胰岛素的分泌绝对不足而引起的。另一方面，2型糖尿病则因不分泌胰岛素或者分泌的胰岛素在体内不能正常发挥功能而无法调节血糖，从而出现血糖上升的情况。
并且，糖尿病引起视网膜、肾脏及神经等毛细血管并发症以及中风、心绞痛、心肌梗塞及末梢血管疾病之类的大血管并发症。近来，随着糖尿病治疗方法的发展，糖尿病患者的平均寿命得到延长，由急性代谢性并发症引起的死亡率急剧下降，但糖尿病并发症的发生却在增加，对此的治疗问题呈上升的趋势。
糖尿病利用药物疗法、运动疗法及饮食疗法进行治疗，根据患者的症状使用胰岛素制剂和各种血糖剂。然而，糖尿病是表现出肝脏内糖的过度生成、胰岛素抗药性、在肌肉和脂肪细胞等中的糖处理能力减少等特征的综合疾病，只依靠特定治疗方法无法阻止诱发多种副作用。尤其，药物疗法使用胰岛素及化学物质，会诱发药物服用的副作用及患者的抗药性。
另一方面，外泌体(exosome)为从多种细胞分泌的膜结构的小囊泡，具有约50nm至200nm的直径。根据最近的研究结果，外泌体不是直接从细胞质膜(plasma membrane)脱落的，而是起源于称作多囊体(multivesicular bodies，MVB)的细胞内特定区域并向细胞外放出的。
外泌体不仅是在肥大细胞、淋巴细胞、星形细胞、血小板、神经细胞、内皮细胞、上皮细胞之类的细胞，而且是在几乎所有的真核生物及细菌的代谢活动过程中生成的物质，在包括血液、小便、唾液、母乳、羊水、腹水、脑脊髓液等的所有液体中被分离出来。不仅如此，由于外泌体反映细胞的状态或者细胞膜，包含多种蛋白质、脂质、核酸等，因此，近来作为在诊断上有用的生物学试样而备受瞩目。这是因为外泌体反映起源细胞(供给细胞)特有的生物学功能并含有各种细胞特异性结构成分，从各种细胞分离的外泌体的大小或者蛋白质及核酸的构成互不相同。
与此相关地，韩国公开专利第10-2019-0011213号公开了如下内容：从源自脂肪组织的干细胞提取的外泌体表现出促进骨再生及增进骨密度的效果，能够有效用于治疗骨质疏松症。
发明内容
技术课题
本发明的目的在于，提供源自牛奶的外泌体治疗代谢性疾病的用途。
本发明的再一目的在于，提供源自牛奶的外泌体促进胰岛素分泌的用途。
本发明的还有一目的在于，提供从牛奶中提取外泌体的方法。
解决问题的方案
为了实现上述目的，本发明提供包含源自牛奶的外泌体作为有效成分的用于预防或治疗代谢性疾病的药物组合物。
并且，本发明提供包含源自牛奶的外泌体作为有效成分的用于预防或改善代谢性疾病的保健功能食品。
并且，本发明提供包含源自牛奶的外泌体作为有效成分的用于促进胰岛素分泌的组合物。
并且，本发明提供从牛奶中提取外泌体的方法，包括：使用醋酸处理牛奶来获得第一上清液的步骤；使用选自由乙二胺四乙酸(EDTA，ethylenediaminetetraacetic acid)及盐酸(HCl，hydrogen chloride)组成的组中的一种以上的试剂处理获得的第一上清液来获得第二上清液的步骤；以及从获得的第二上清液中提取外泌体的步骤。
并且，本发明提供预防、改善或者治疗代谢性疾病的方法，包括向个体给药源自牛奶的外泌体的步骤。
进而，本发明提供源自牛奶的外泌体，用来制备用于预防、改善或者治疗代谢性疾病的药剂的用途。
发明的效果
本发明的源自牛奶的外泌体包含公知的具有抗糖尿病活性的mi-155及mi-375，在促进有关作为促进胰岛素信号传导因子的胰岛素受体底物-1(IRS-1)及葡萄糖转运蛋白4(GLUT-4)的信使核糖核酸(mRNA)的表达的同时，抑制有关作为抑制胰岛素信号传导因子的CCAAT增强子结合蛋白β(C/EBPβ)及丙酮酸脱氢酶激酶4(PDK4)蛋白的信使RNA的表达，可以有效地用于治疗代谢性疾病。
附图说明
图1为通过肉眼确认使用1％(v/v)、2％(v/v)、5％(v/v)、10％(v/v)的醋酸与乙二胺四乙酸或者磷酸盐缓冲溶液(PBS)一起处理牛奶后提取的外泌体的结果的图。
图2为示出使用透射电子显微镜(TEM)拍摄从牛奶中提取的外泌体的结果(A部分)的图以及示出在提取的外泌体中确认作为外泌体标记蛋白的TSG101蛋白的表达的结果(B部分)的图。
图3为在测量从牛奶中提取的外泌体的大小后，示出其大小分布结果的柱状图。
图4为示出用于确认从牛奶中提取的外泌体中是否存在mi-155及mi-375的微小核糖核酸(miRNA)的Ct值(A部分)、标准熔融曲线(B部分)及差异熔融曲线(C部分)的图标。
图5为使用胰岛素处理胰腺癌细胞株后确认是否诱发AKT蛋白质的磷酸化的结果的图。
图6为使用从牛奶中提取的外泌体处理胰腺癌细胞株后确认有关作为促进胰岛素信号传导因子的胰岛素受体底物-1及葡萄糖转运蛋白4蛋白的信使RNA的表达变化的结果的柱状图。
图7为使用从牛奶中提取的外泌体处理胰腺癌细胞株后确认有关作为抑制胰岛素信号传导因子的CCAAT增强子结合蛋白β及丙酮酸脱氢酶激酶4蛋白的信使RNA的表达变化的结果的柱状图。
具体实施方式
以下，详细说明本发明。
本发明提供包含源自牛奶的外泌体作为有效成分的用于预防或治疗代谢性疾病的药物组合物。
本说明书中所使用的术语“外泌体(exosome)”是指从多种细胞中分泌的膜结构的小囊泡。上述外泌体发挥与其他细胞或者组织结合来传递膜结构要素、蛋白质、RNA等的多种功能，通常具有约50nm至200nm的平均直径。具体地，本发明的外泌体可以具有50nm至250nm、50nm至220nm、50nm至200nm、50nm至180nm、80nm至250nm、80nm至220nm、80nm至200nm、80nm至180nm、100nm至250nm、100nm至220nm、100nm至200nm或者100nm至180nm的平均直径。
上述外泌体可以表达外泌体标记蛋白，具体地，上述外泌体标记蛋白可以为TSG101蛋白。上述TSG101蛋白可以包括在通常的技术领域中已知为TSG101蛋白的所有序列，可以与公知的序列具有80％以上、90％以上、95％以上、97％以上或者99％以上的同源性。作为一例，上述TSG101蛋白可以为由记载为序列7的氨基酸序列构成的多肽。
上述外泌体可以包含公知为具有抗糖尿病活性的微小RNA(microRNA)。具体地，上述微小RNA可以为选自由mi-155及mi-375组成的组中的一种以上，更具体地，可以为mi-155及mi-375。上述mi-155可以为由记载为序列8的碱基序列构成的多核苷酸，mi-375可以为由记载为序列9的碱基序列构成的多核苷酸。
上述外泌体可以在增加促进胰岛素信号传导机制的因子表达的同时，对抑制胰岛素信号传导机制的因子的表达进行抑制。因此，本发明的外泌体可以用于预防或者治疗代谢性疾病。具体地，上述代谢性疾病可以为肥胖、糖尿病或者糖尿病并发症，上述糖尿病并发症可以为糖尿病视网膜病变、糖尿病性白内障、糖尿病肾病、糖尿病神经病变、糖尿病足部溃疡或者糖尿病血管并发症。
本发明的外泌体可以通过包括如下步骤的方法获得：步骤1)，使用醋酸处理牛奶来获得第一上清液；步骤2)，使用选自由乙二胺四乙酸及盐酸组成的组中的一种以上的溶液处理获得的第一上清液来获得第二上清液；以及步骤3)，从获得的第二上清液中提取外泌体。
在上述方法中，能够以1∶5至1∶150、1∶5至1∶120、1∶5至1∶110、1∶5至1∶80、1∶5至1∶60、1∶5至1∶30、1∶5至1∶15、1∶8至1∶150、1∶8至1∶120、1∶8至1∶110、1∶8至1∶80、1∶8至1∶60、1∶8至1∶30或者1∶8至1∶15的体积比添加牛奶及醋酸。
相比于组合物的总重量，本发明的药物组合物可以包含10重量百分比至95重量百分比的作为有效成分的源自牛奶的外泌体。并且，除上述有效成分外，本发明的药物组合物还可以包含表现出相同或者相似功能的一种以上的有效成分。
本发明的药物组合物可以包含生物学制剂通常使用的载体、稀释剂、赋形剂或者它们的混合物。药学上可接收的载体只要是适于将组合物传递到活体内的就都可以使用。具体地，上述载体可以为记载于Merck Index,13th ed.,Merck&Co.Inc.的化合物、生理盐水、灭菌水、林格氏液、葡萄糖溶液、麦芽糊精溶液、甘油、乙醇或者它们的混合物。并且，可以根据需要添加抗氧化剂、缓冲液、静菌剂等之类的通常的添加剂。
在配制上述组合物的情况下，可以添加通常使用的填充剂、增量剂、结合剂、湿润剂、崩解剂、表面活性剂等稀释剂或者赋形剂。
本发明的组合物可以配制为口服制剂或者胃肠外制剂。口服用制剂可以包括固体制剂及液体制剂。上述固体制剂可以为片剂、丸剂、散剂、颗粒剂、胶囊剂或者锭剂，这些固体制剂可以通过向上述组合物添加一种以上的赋形剂来制备。上述赋形剂可以为淀粉、碳酸钙、葡萄糖、乳糖、明胶或者它们的混合物。并且，上述固体制剂可以包含润滑剂，例如硬脂酸镁、滑石等。另一方面，上述液体制剂可以为悬浮剂、内溶液剂、油剂或者糖浆剂。在此情况下，上述液体制剂可以包含湿润剂、甜味剂、芳香剂、保存剂等之类的赋形剂。
上述胃肠外制剂可以包括注射剂、栓剂、呼吸机吸入用粉末、喷雾用气雾剂、粉末及霜剂等。上述注射剂可以包括灭菌的水溶液、非水性溶剂、悬浮溶剂、油剂等。在此情况下，非水性溶剂或者悬浮溶剂可以使用丙二醇、聚乙二醇、橄榄油之类的植物油或者油酸乙酯之累的能够注射的酯类。
并且，本发明提供包含源自牛奶的外泌体作为有效成分的用于预防或改善代谢性疾病的保健功能食品。
上述保健功能食品所包含的作为有效成分的源自牛奶的外泌体可以具有如上所述的特征。作为一例，上述外泌体可以具有50nm至250nm、50nm至220nm、50nm至200nm、50nm至180nm、80nm至250nm、80nm至220nm、80nm至200nm、80nm至180nm、100nm至250nm、100nm至220nm、100nm至200nm或者100nm至180nm的平均直径。并且，上述外泌体可以表达外泌体标记蛋白，具体地，上述外泌体标记蛋白可以为TSG101蛋白。
上述外泌体可以包含公知为具有抗糖尿病活性的微小RNA。具体地，上述微小RNA可以为选自由mi-155及mi-375组成的组中的一种以上，更具体地，可以为mi-155及mi-375。
上述代谢性疾病可以为肥胖、糖尿病或者糖尿病并发症，上述糖尿病并发症可以为糖尿病视网膜病变、糖尿病性白内障、糖尿病肾病、糖尿病神经病变、糖尿病足部溃疡或者糖尿病血管并发症。
并且，本发明提供包含源自牛奶的外泌体作为有效成分的用于促进胰岛素分泌的组合物。
上述用于促进胰岛素分泌的组合物所包含的作为有效成分的源自牛奶的外泌体可以具有如上所述的特征。作为一例，上述外泌体可以具有50nm至250nm、50nm至220nm、50nm至200nm、50nm至180nm、80nm至250nm、80nm至220nm、80nm至200nm、80nm至180nm、100nm至250nm、100nm至220nm、100nm至200nm或者100nm至180nm的平均直径。并且，上述外泌体可以表达外泌体标记蛋白，具体地，上述外泌体标记蛋白可以为TSG101蛋白。
上述外泌体可以包含公知为具有抗糖尿病活性的微小RNA。具体地，上述微小RNA可以为选自由mi-155及mi-375组成的组中的一种以上，更具体地，可以为mi-155及mi-375。因此，上述外泌体可以在增加促进胰岛素信号传导机制的因子表达的同时，对抑制胰岛素信号传导机制的因子的表达进行抑制。
进而，本发明提供从牛奶中提取外泌体的方法，包括：使用醋酸处理牛奶来获得第一上清液的步骤；使用选自由乙二胺四乙酸及盐酸组成的组中的一种以上的试剂处理获得的第一上清液来获得第二上清液的步骤；以及从获得的第二上清液中提取外泌体的步骤。
本发明从牛奶中提取外泌体的方法提供使用醋酸处理牛奶来获得第一上清液的步骤。
在上述步骤中，可以为了去除牛奶中包含的蛋白质和脂肪而添加醋酸，在此情况下，能够以0.5％(v/v)至15％(v/v)、0.5％(v/v)至12％(v/v)、0.5％(v/v)至8％(v/v)、0.5％(v/v)至6％(v/v)、0.5％(v/v)至3％(v/v)、0.5％(v/v)至1.5％(v/v)、0.8％(v/v)至15％(v/v)、0.8％(v/v)至12％(v/v)、0.8％(v/v)至8％(v/v)、0.8％(v/v)至6％(v/v)、0.8％(v/v)至3％(v/v)、0.8％(v/v)至1.5％(v/v)的体积比包含醋酸。可以通过离心分离经醋酸处理的牛奶来获得上清液。上述离心分离可以根据本发明所属技术领域通常已知的条件进行，本发明所属技术领域的普通技术人员可以根据需要适当地进行变形。
上述步骤还可以包括过滤获得的第一上清液来获得过滤物的步骤。上述过滤可以根据本发明所属技术领域通常已知的方法进行，具体地，可以使用具有0.3μm至0.7μm大小孔隙(pore)的过滤器进行。
本发明的从牛奶中提取外泌体的方法提供使用选自由乙二胺四乙酸及盐酸组成的组中的一种以上的试剂处理获得的第一上清液来获得第二上清液的步骤。
上述步骤可以为了在已通过醋酸的处理去除蛋白质和脂肪的牛奶中去除酪蛋白之类的残留物而进行。在此情况下，乙二胺四乙酸或者或者盐酸能够以与上述醋酸等量的方式添加。可以通过再次离心分离添加有乙二胺四乙酸或者盐酸的第一上清液来获得第二上清液。上述离心分离可以根据本发明所属技术领域通常已知的条件进行，本发明所属技术领域的普通技术人员可以根据需要适当地进行变形。
上述步骤还可以包括过滤获得的第一上清液来获得过滤物的步骤。上述过滤可以根据本发明所属技术领域通常已知的方法进行，具体地，可以使用具有0.1μm至0.5μm大小孔隙的过滤器进行。
在上述方法中，能够以1∶5至1∶150、1∶5至1∶120、1∶5至1∶110、1∶5至1∶80、1∶5至1∶60、1∶5至1∶30、1∶5至1∶15、1∶8至1∶150、1∶8至1∶120、1∶8至1∶110、1∶8至1∶80、1∶8至1∶60、1∶8至1∶30或者1∶8至1∶15的体积比添加牛奶及醋酸。
本发明的从牛奶中提取外泌体的方法提供从获得的第二上清液中提取外泌体的步骤。
在上述步骤中，外泌体的提取能够以通过离心分离获得颗粒(pellet)的方式进行。上述离心分离可以根据本发明所属技术领域通常已知的条件进行，本发明所属技术领域的普通技术人员可以根据需要适当地进行变形。
并且，本发明提供预防、改善或者治疗代谢性疾病的方法，包括向个体给药源自牛奶的外泌体的步骤。
为了预防、改善或者治疗上述代谢性疾病而向个体给药的源自牛奶的外泌体可以具有如上所述的特征。作为一例，上述外泌体可以具有50nm至250nm、50nm至220nm、50nm至200nm、50nm至180nm、80nm至250nm、80nm至220nm、80nm至200nm、80nm至180nm、100nm至250nm、100nm至220nm、100nm至200nm或者100nm至180nm的平均直径。并且，上述外泌体可以表达外泌体标记蛋白，具体地，上述外泌体标记蛋白可以为TSG101蛋白。
上述外泌体可以包含公知为具有抗糖尿病活性的微小RNA。具体地，上述微小RNA可以为选自由mi-155及mi-375组成的组中的一种以上，更具体地，可以为mi-155及mi-375。
上述代谢性疾病可以为肥胖、糖尿病或者糖尿病并发症，上述糖尿病并发症可以为糖尿病视网膜病变、糖尿病性白内障、糖尿病肾病、糖尿病神经病变、糖尿病足部溃疡或者糖尿病血管并发症。
上述个体可以为哺乳动物，具体地，可以为人类。
上述给药可以根据所目的的方法口服或者胃肠外给药。胃肠外给药可以包括腹腔内、直肠内、皮下、静脉、肌肉内或者胸部内注射方式。并且，上述给药能够以药学上的有效的量给药。上述药学上有效的量可以根据疾病的种类、疾病的严重程度、药物的活性、患者对药物的敏感度、给药时间、给药途径、治疗期间、同时使用的药物等的不同而不同。但是，为了获得优选的效果，本发明的有效成分能够以0.0001mg/kg至1000mg/kg的量给药，具体地，能够以0.001mg/kg至500mg/kg的量给药，上述给药可以一天一次或者一天数次给药。
并且，上述给药能够以单独或者与其他治疗剂并用的方式进行。并用给药时，可以按照顺序或者同时给药。
进而，本发明提供源自牛奶的外泌体用来制备用于预防、改善或者治疗代谢性疾病的药剂的用途。
用来制备用于预防、改善或者治疗上述代谢性疾病的源自牛奶的外泌体可以具有如上所述的特征。作为一例，上述外泌体可以具有50nm至250nm、50nm至220nm、50nm至200nm、50nm至180nm、80nm至250nm、80nm至220nm、80nm至200nm、80nm至180nm、100nm至250nm、100nm至220nm、100nm至200nm或者100nm至180nm的平均直径。并且，上述外泌体可以表达外泌体标记蛋白，具体地，上述外泌体标记蛋白可以为TSG101蛋白。
上述外泌体可以包含公知为具有抗糖尿病活性的微小RNA。具体地，上述微小RNA可以为选自由mi-155及mi-375组成的组中的一种以上，更具体地，可以为mi-155及mi-375。
上述代谢性疾病可以为肥胖、糖尿病或者糖尿病并发症，上述糖尿病并发症可以为糖尿病视网膜病变、糖尿病性白内障、糖尿病肾病、糖尿病神经病变、糖尿病足部溃疡或者糖尿病血管并发症。
实施方式
以下，通过下述实施例详细说明本发明，但下述实施例仅用于例示本发明，而不是限制本发明。本发明的发明要求保护范围记载的技术思想及实质上具有与之相同的结构并实现相同效果的一切都应包括在本发明的技术范围内。
实施例1.从牛奶中提取外泌体
用于有效地从牛奶中提取外泌体的条件确立如下。
首先，在37℃的温度下将市面上销售的基于巴氏消毒处理的脱脂牛奶预处理10分钟后，分别向40ml的牛奶添加1％(v/v)、2％(v/v)、5％(v/v)、10％(v/v)的醋酸并在常温下反应5分钟来使蛋白质和脂肪沉淀。反应结束后，以10000g的条件离心分离10分钟来获得上清液，使用具有0.45μm大小孔隙(pore)的过滤器过滤获得的上清液来获得一次过滤物。以与醋酸相同的量向获得的过滤物添加0.25M的乙二胺四乙酸或者磷酸盐缓冲溶液(PBS，phosphate buffer saline)后，放置在冰块上30分钟使酪蛋白等沉淀后只获取上清液。使用具有0.22μm大小孔隙的过滤器过滤获取的上清液来获得二次过滤物，在210000g、4℃的条件下超高速离心分离90分钟来获得颗粒。使用10mM的磷酸盐缓冲溶液洗涤获得的颗粒后，以与上述相同的条件进行离心分离来最终从牛奶中提取外泌体。通过肉眼观察提取的外泌体的结果的照片如图1所示。另一方面，将提取的外泌体在500μl的10mM磷酸盐缓冲溶液中再悬浮后，直至使用前在4℃(短期保管)或者-80℃(长期保管)的温度下保管。
如图1所示，与添加磷酸盐缓冲溶液的情况相比，通过乙二胺四乙酸的牛奶外泌体的提取更为优秀。另一方面，当添加10％(v/v)以下浓度的醋酸时提取效率高，尤其，在添加2％(v/v)的醋酸的情况下，牛奶外泌体的提取效率最高。
实施例2.确认从牛奶中提取的外泌体
2-1.确认外泌体的形态及大小
实施例1中提取的外泌体的形态是通过普通的方法进行阴性染色(negativestaining)后利用透射电子显微镜进行分析的。
另一方面，外泌体的大小是利用qNano(iZon公司，澳大利亚)确认的。具体地，使用200nm的标定粒子(calibration particle)校正仪器后，将外泌体以1/100的稀释系数(dilution factor)稀释于电解质缓冲液(electrolyte buffer)准备为试样。外泌体的大小是通过仪器内置的软件测量的。其结果，使用透射电子显微镜确认的外泌体的形态如图1的A部分所示，示出外泌体的大小分布的柱状图如图2所示。
如图2的A部分及图3所示，从牛奶中提取的外泌体的平均直径为109nm，提取的外泌体数量平均为4×1011particles/ml。
2-2.外泌体的确认
通过蛋白印迹法确认实施例1中提取的外泌体中是否表达作为外泌体标记蛋白的TSG101蛋白。
首先，向外泌体添加RIPA缓冲液并充分混合后，将其在冰中搅拌30分钟来使细胞溶解。使用BCA蛋白质检测试剂盒(BCA protein assay kit，Promega公司，美国)定量细胞溶解物种包含的蛋白质后，利用10％的丙烯酰胺凝胶(acrylamide gel)在三甘氨酸-十二烷基硫酸钠(tris-glycine-SDS)缓冲液上以100V的电压电泳70分钟。通过考马斯蓝染色确认电泳的蛋白质印记，在250mA的条件下向膜上移动60分钟。使用包含5％(w/v)的脱脂牛奶(skimmilk)的磷酸盐缓冲溶液-T缓冲溶液预处理上述膜2小时后，使用洗涤缓冲溶液洗涤1小时。向洗涤的膜添加作为对TSG101蛋白的一次矿体的抗-TSG101抗体(EPR7130(B))(ab125011，abcam公司)，在4℃的温度下隔夜反应。反应结束后使用洗涤缓冲液洗涤膜1小时，添加作为二次抗体的山羊抗-兔免疫球蛋白G(IgG)(H+L)、辣根过氧化物酶(HRP)(赛默飞世尔公司，#65-6120)并在常温下反应2小时后，再次使用洗涤缓冲液洗涤1小时。利用洗涤的膜进行增强化学发光(ECL)(Amersham公司，美国)反应来确认的结果照片如图2的B部分所示。
如图2的B部分所示，在从牛奶中提取的外泌体中确认到作为外泌体标记蛋白的TSG101蛋白的表达。
实施例3.确认外泌体中包含的微小RNA
通过如下方法确认实施例1中提取的外泌体是否存在有抑制具有抗糖尿病活性的mi-155及mi-375的微小RNA。
首先，使用Hybrid-RTM微小RNA提取试剂盒(GeneAll公司，韩国)按照生产商的说明书从外泌体中提取微小RNA后，使用通常的方法对提取的微小RNA进行聚腺苷酸反应(polyadenylation)。在此情况下，反应在37℃的温度下进行30分钟，以通过反应获得的聚腺苷酸化(polyA)-微小RNA为模板，使用TOPscriptTMcDNA合成试剂盒(Enzynomics公司，韩国)合成互补脱氧核糖核酸(cDNA)。
具体地，将2μl的逆转录酶缓冲液、1μl的逆转录酶、2μl的脱氧核糖核苷三磷酸(dNTP)混合物、100ng的模板RNA、1μl的各个引物以及0.5μl的核糖核酸酶(RNase)抑制剂混合后，向其添加灭菌的去离子水(distilled deionized water，DDI water)使总体积达到20μl来制备反应物。在60℃的温度下使上述反应物反应1小时来合成互补DNA后，在95℃的温度下放置5分钟使其灭活。在此情况下，引物使用了具有下述表1中记载的序列1、序列2、序列4及序列5的碱基序列的引物。
表1
利用合成的互补DNA以通常的方法进行实时聚合酶链式反应(PCR)来确认mi-155及mi-375的表达。实时聚合酶链式反应是以95℃的温度下3分钟、95℃的温度下10秒钟以及60℃的温度下60秒为一个周期共反复50个周期来进行的，之后，设定临界点(threshold)来调节Ct值后，确认实际的实时扩增量。在此情况下，引物使用具有上述表1记载的序列1、序列3、序列4及序列6的引物。通过Rotor geneQ软件计算扩增的结果，计算的结果如图4所示。
如图4的A部分所示，mi-155及mi-375的各个Ct值分别为26.5±0.1及29.5±0.2，如图4的B部分及图4的C部分所示，从计算的结果中确认到熔融曲线(melt curve)。通过上述结果可知从牛奶中提取的外泌体中存在有丰富的mi-155及mi-375。
实验例1.确认AKT蛋白质通过胰岛素的磷酸化
通过蛋白印迹法确认当使用胰岛素处理胰腺细胞时，是否通过阳性胰岛素信号传导使AKT(蛋白激酶B(protein kinase B))蛋白质磷酸化。
首先，将1×106个的胰腺癌细胞株(pancreatic cancer cell，ATCC公司)分株与100mm的细胞培养皿中，在37℃、5％CO2的条件下进行培养。培养36小时后，洗涤细胞后添加不包含血清的培养基使细胞饥饿24小时。之后，洗涤细胞后添加胰岛素使其浓度达到200nM并反应30分钟。在此情况下，将不使细胞饥饿的细胞(C)和未使用胰岛素处理的细胞(0)用作对照组。利用反应结束的细胞以通常的方法进行蛋白印迹法。除使用3％(w/v)的牛血清白蛋白替换5％(w/v)的脱脂牛奶进行预处理以及将抗-pAKT抗体(细胞信号传导(Cellsignaling))用作一次抗体以外，以与实施例2-2相同的条件及方法进行蛋白印迹法。
其结果如图5所示，可知通过使用200nM浓度的胰岛素处理30分钟诱导AKT蛋白质磷酸化，增加了糖原合成(glycogenesis)。
实验例2.确认通过外泌体的信使RNA表达的变化
通过如下方法确认通过从牛奶中提取的外泌体是否诱导阳性胰岛素信号传导反应。
首先，以与实验例1的记载相同条件及方法准备胰腺癌细胞株。使用1011particles的外泌体处理饥饿了24小时的细胞并反应24小时。在此情况下，将200nM的胰岛素处理组用作阳性对照组。反应结束后，使用信使RNA提取试剂盒(GeneAll Biotechnology公司，韩国)按照生产商的说明书提取胰腺癌细胞株的信使RNA。
以提取的信使RNA为模板，使用TOPscriptTMcDNA合成试剂盒(Enzynomics公司，韩国)合成互补脱氧核糖核酸。具体地，将2μl的逆转录没缓冲液、1μl的逆转录酶、2μl的核苷三磷酸混合物、100ng的模板RNA、1μl的多聚胸腺嘧啶、T重复寡核苷酸(oligo dT)以及0.5μl的核糖核酸酶抑制剂混合后，向其添加灭菌的去离子水使总体积达到20μl来制备反应物。使上述反应物在42℃的温度下反应5分钟及60℃的温度下反应1小时来合成互补DNA后，在95℃的温度下放置5分钟使其灭活。
利用合成的互补DNA以通常的方法进行实施聚合酶链式反应来确认作为与胰岛素信号传导相关的因子的胰岛素受体底物-1(IRS-1，insulin receptor substrate 1)、葡萄糖转运蛋白4(GLUT-4，glucose transporter type 4)、CCAAT增强子结合蛋白β(C/EBPβ，CCAAT/enhancer-binding proteinβ)及丙酮酸脱氢酶激酶4(PDK4，pyruvatedehydrogenase kinase 4)蛋白质的信使RNA的表达。实时聚合酶链式反应是以95℃的温度下3分钟、95℃的温度下10秒钟、55℃的温度下60秒钟以及在72℃的温度下20秒为一个周期共反复50个周期来进行的，之后，设定临界点来调节Ct值后，确认实际的实时扩增量。在此情况下，引物使用在本发明所属技术领域中普遍使用的引物。通过Rotor geneQ软件计算扩增的结果，计算的结果如图6及图7所示。
如图6所示，即使与阳性对照组相比，有关作为促进胰岛素信号传导的因子的胰岛素受体底物-1及葡萄糖转运蛋白4的信使RNA的表达也显著增加。另一方面，如图7所示，有关作为抑制胰岛素信号传导的因子的CCAAT增强子结合蛋白β及丙酮酸脱氢酶激酶4的信使RNA的表达被抑制了。
因此，通过上述说明可知，本发明的外泌体增加胰岛素的信号传导，从而可以用于治疗糖尿病。
Claims (11)
1.一种用于预防或治疗代谢性疾病的药物组合物，其特征在于，包含源自牛奶的外泌体作为有效成分。
2.根据权利要求1所述的用于预防或治疗代谢性疾病的药物组合物，其特征在于，上述外泌体通过包括如下步骤的方法获得：
步骤1)，使用醋酸处理牛奶来获得上清液；
步骤2)，使用选自由乙二胺四乙酸及盐酸组成的组中的一种以上的试剂处理获得的上清液来获得上清液；以及
步骤3)，从获得的上清液中获得外泌体。
3.根据权利要求2所述的用于预防或治疗代谢性疾病的药物组合物，其特征在于，以1∶5至1∶150的体积比添加牛奶及醋酸。
4.根据权利要求1所述的用于预防或治疗代谢性疾病的药物组合物，其特征在于，上述代谢性疾病为肥胖、糖尿病或者糖尿病并发症。
5.根据权利要求4所述的用于预防或治疗代谢性疾病的药物组合物，其特征在于，上述糖尿病并发症为糖尿病视网膜病变、糖尿病性白内障、糖尿病肾病、糖尿病神经病变、糖尿病足部溃疡或者糖尿病血管并发症。
6.一种用于预防或改善代谢性疾病的保健功能食品，其特征在于，包含源自牛奶的外泌体作为有效成分。
7.一种用于促进胰岛素分泌的组合物，其特征在于，包含源自牛奶的外泌体作为有效成分。
8.一种从牛奶中提取外泌体的方法，其特征在于，包括：
步骤1)，使用醋酸处理牛奶来获得第一上清液；
步骤2)，使用选自由乙二胺四乙酸及盐酸组成的组中的一种以上的溶液处理获得的第一上清液来获得第二上清液；以及
步骤3)，从获得的第二上清液中提取外泌体。
9.根据权利要求8所述的从牛奶中提取外泌体的方法，其特征在于，以1∶5至1∶150的体积比添加牛奶及醋酸。
10.一种预防、改善或者治疗代谢性疾病的方法，其特征在于，包括向个体给药源自牛奶的外泌体的步骤。
11.一种源自牛奶的外泌体的用途，其特征在于，用来制备用于预防、改善或者治疗代谢性疾病的药剂。
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1020190070090A KR102223138B1 (ko) | 2019-06-13 | 2019-06-13 | 우유로부터 유래된 엑소좀을 유효성분으로 포함하는 대사성 질환 치료용 약학적 조성물 |
| KR10-2019-0070090 | 2019-06-13 | ||
| PCT/KR2020/007480 WO2020251245A1 (ko) | 2019-06-13 | 2020-06-10 | 우유로부터 유래된 엑소좀을 유효성분으로 포함하는 대사성 질환 치료용 약학적 조성물 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN113993526A true CN113993526A (zh) | 2022-01-28 |
Family
ID=73780912
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202080043177.3A Pending CN113993526A (zh) | 2019-06-13 | 2020-06-10 | 包含源自牛奶的外泌体作为有效成分的用于治疗代谢性疾病的药物组合物 |
Country Status (3)
| Country | Link |
|---|---|
| KR (1) | KR102223138B1 (zh) |
| CN (1) | CN113993526A (zh) |
| WO (1) | WO2020251245A1 (zh) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN115038454A (zh) * | 2020-08-31 | 2022-09-09 | 庆熙大学校产学协力团 | 包含牛乳外泌体的用于诱导棕色脂肪化的组合物 |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR102223138B1 (ko) * | 2019-06-13 | 2021-03-04 | 충북대학교 산학협력단 | 우유로부터 유래된 엑소좀을 유효성분으로 포함하는 대사성 질환 치료용 약학적 조성물 |
| KR102627823B1 (ko) * | 2021-05-11 | 2024-01-19 | 충북대학교 산학협력단 | 우유로부터 유래된 엑소좀을 유효성분으로 포함하는 흉터 생성 억제용 조성물 |
| KR20230113122A (ko) | 2022-01-21 | 2023-07-28 | 한국과학기술연구원 | 우유 유래 엑소좀을 유효성분으로 포함하는 장 건강기능 개선용 조성물 및 그 제조방법 |
Citations (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP3192518A1 (en) * | 2014-09-09 | 2017-07-19 | Morinaga Milk Industry Co., Ltd. | Anti-inflammatory agent |
| CN108315440A (zh) * | 2018-03-29 | 2018-07-24 | 华南农业大学 | 一种区分水牛和奶牛奶的miRNA标记物及其应用 |
| WO2018170332A1 (en) * | 2017-03-15 | 2018-09-20 | Nutech Ventures | Extracellular vesicles and methods of using |
| WO2020251245A1 (ko) * | 2019-06-13 | 2020-12-17 | 충북대학교 산학협력단 | 우유로부터 유래된 엑소좀을 유효성분으로 포함하는 대사성 질환 치료용 약학적 조성물 |
| KR20220091906A (ko) * | 2020-12-24 | 2022-07-01 | 순천향대학교 산학협력단 | 모유 유래 엑소좀 마이크로 rna |
| CN115361879A (zh) * | 2020-04-03 | 2022-11-18 | 雅培制药有限公司 | 牛奶外泌体产品和方法、营养组合物和治疗方法 |
| CN116036298A (zh) * | 2021-10-28 | 2023-05-02 | 谛邈生物科技(北京)有限公司 | 牛奶外泌体在制备药物载体中的应用 |
| WO2023070429A1 (zh) * | 2021-10-28 | 2023-05-04 | 谛邈生物科技(北京)有限公司 | 牛奶外泌体在制备药物载体中的应用 |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP6469394B2 (ja) * | 2014-09-09 | 2019-02-13 | 森永乳業株式会社 | アポトーシス抑制剤 |
| KR101524079B1 (ko) * | 2014-12-03 | 2015-06-04 | 서울대학교산학협력단 | 엑소솜을 이용한 성체 유래 세포로부터 인슐린 생산세포로의 분화 유도 방법 |
| WO2017131352A1 (ko) * | 2016-01-26 | 2017-08-03 | 한양대학교 에리카산학협력단 | 줄기세포로부터 추출된 엑소좀을 함유하는 베이지 지방세포 분화 유도용 조성물 |
| KR20190011213A (ko) | 2017-07-24 | 2019-02-01 | 한양대학교 에리카산학협력단 | 줄기세포로부터 추출된 엑소좀을 유효성분으로 포함하는 골다공증 예방 또는 치료용 조성물 |
-
2019
- 2019-06-13 KR KR1020190070090A patent/KR102223138B1/ko active IP Right Grant
-
2020
- 2020-06-10 WO PCT/KR2020/007480 patent/WO2020251245A1/ko active Application Filing
- 2020-06-10 CN CN202080043177.3A patent/CN113993526A/zh active Pending
Patent Citations (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP3192518A1 (en) * | 2014-09-09 | 2017-07-19 | Morinaga Milk Industry Co., Ltd. | Anti-inflammatory agent |
| WO2018170332A1 (en) * | 2017-03-15 | 2018-09-20 | Nutech Ventures | Extracellular vesicles and methods of using |
| CN108315440A (zh) * | 2018-03-29 | 2018-07-24 | 华南农业大学 | 一种区分水牛和奶牛奶的miRNA标记物及其应用 |
| WO2020251245A1 (ko) * | 2019-06-13 | 2020-12-17 | 충북대학교 산학협력단 | 우유로부터 유래된 엑소좀을 유효성분으로 포함하는 대사성 질환 치료용 약학적 조성물 |
| CN115361879A (zh) * | 2020-04-03 | 2022-11-18 | 雅培制药有限公司 | 牛奶外泌体产品和方法、营养组合物和治疗方法 |
| KR20220091906A (ko) * | 2020-12-24 | 2022-07-01 | 순천향대학교 산학협력단 | 모유 유래 엑소좀 마이크로 rna |
| CN116036298A (zh) * | 2021-10-28 | 2023-05-02 | 谛邈生物科技(北京)有限公司 | 牛奶外泌体在制备药物载体中的应用 |
| WO2023070429A1 (zh) * | 2021-10-28 | 2023-05-04 | 谛邈生物科技(北京)有限公司 | 牛奶外泌体在制备药物载体中的应用 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| BODO C. MELNIK: "Milk exosomal miRNAs: potential drivers of AMPK-to-mTORC1 switching in β -cell dedifferentiation of type 2 diabetes mellitus", MELNIK NUTRITION & METABOLISM, vol. 16, pages 1 - 13 * |
| LI-MIN LEI等: "Exosomes and Obesity-Related Insulin Resistance", FRONTIERS IN CELL AND DEVELOPMENTAL BIOLOGY, vol. 9, pages 1 - 11 * |
| 查干其其格;锡林其其格;文娟;韩留杰;赛乌其日;房君;斯琴;: "马奶和酸马奶来源外秘体的分离及其对RAW264.7细胞细胞因子的作用", 临床和实验医学杂志, no. 24, pages 2397 - 2402 * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN115038454A (zh) * | 2020-08-31 | 2022-09-09 | 庆熙大学校产学协力团 | 包含牛乳外泌体的用于诱导棕色脂肪化的组合物 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO2020251245A1 (ko) | 2020-12-17 |
| KR20200142785A (ko) | 2020-12-23 |
| KR102223138B1 (ko) | 2021-03-04 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN113993526A (zh) | 包含源自牛奶的外泌体作为有效成分的用于治疗代谢性疾病的药物组合物 | |
| JP6813156B2 (ja) | 抗肥満及び抗糖尿作用を有するペプチド及びその用途 | |
| KR20210061328A (ko) | 중간엽 줄기 세포로부터 유래된 세포외 소포 | |
| US11180810B2 (en) | Methods for detecting hepatic fibrosis and responsiveness to therapy | |
| WO2006115274A1 (ja) | 骨髄赤血球前駆細胞分化促進剤 | |
| Yotsumoto et al. | Expression of adrenomedullin, a hypotensive peptide, in the trophoblast giant cells at the embryo implantation site in mouse | |
| Lin et al. | Roles of notch signaling pathway and endothelial-mesenchymal transition in vascular endothelial dysfunction and atherosclerosis. | |
| WO2017157131A1 (zh) | 绿原酸在制备治疗以lag-3为靶点的疾病的药物中的用途 | |
| JP2021532091A (ja) | 膵臓疾患のミトコンドリア増強療法 | |
| Hinshaw et al. | Islet autotransplantation after pancreatectomy for chronic pancreatitis with a new method of islet preparation | |
| JP6875516B2 (ja) | 抗肥満および抗糖尿病効能を有するペプチド、並びにその用途 | |
| Cutshall | The Saunders-Sutton syndrome: an analysis of delirium tremens | |
| US20210361715A1 (en) | Use of exosome derived from mesenchymal stem cells co-cultured with melatonin in prevention and treatment of chronic kidney disease | |
| WO2007012748A2 (fr) | Nouvelles fractions proteiques laitieres et leur utilisation pour la prevention ou le traitement des maladies inflammatoires chroniques | |
| WO2017093353A1 (en) | Method for diagnosing cardiomyopathies | |
| KR102096886B1 (ko) | 편도 유래 중간엽 줄기세포의 조정 배지를 포함하는 이식편대숙주 질환 예방 혹은 치료용 조성물 | |
| EP2437771B1 (en) | Compositions modulating mg29 for use in the treatment of diabetes | |
| AU2022200653A1 (en) | Viral vector for treating autoimmune disease and diabetes and construction method and application thereof | |
| CN117320733A (zh) | 包含三维球状体型细胞聚集体来源细胞外囊泡的用于促进神经再生的组合物 | |
| Beraldo et al. | Experiments on the factor in urine forming substance U | |
| JP6497827B1 (ja) | エイコサノイド産生促進剤 | |
| US8603993B2 (en) | Compositions and methods modulating MG29 for the treatment of diabetes | |
| CN110628896A (zh) | Cmdl-1的应用、诊断心脏疾病的试剂盒及治疗心脏疾病的药物 | |
| CN108721342A (zh) | 灵芝孢子粉在制备具有防治代偿性心肌肥厚型心脏疾病作用的药物中的应用 | |
| US20130287747A1 (en) | Methods of Treating Acute Kidney Injury Using Mesenchymal Stem Cells |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination |