CN113980820A - 一种蛹虫草中虫草素和腺苷含量的培养方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种蛹虫草中虫草素和腺苷含量的培养方法，包括以下步骤：(a)将蛹虫草菌种接种到种子培养基培养制成蛹虫草种子液；(b)将蛹虫草种子液接种到发酵培养基进行培养得到蛹虫草子实体，其中，发酵培养基的组分包括腺嘌呤及酵母脱氧核糖核酸水解物。本发明中的培养方法，相对于现有常规培养方法而言，发酵培养基中添加了腺嘌呤和酵母脱氧核糖核酸水解物，经过该培养方法得到的蛹虫草子实体中，虫草素和腺苷的含量大幅率提高。
Description
技术领域
本发明涉及蛹虫草人工栽培技术领域，具体涉及一种蛹虫草中虫草素和腺苷含量的培养方法。
背景技术
蛹虫草(cordycepsmilitaris)，又名北虫草等，是子囊菌亚门麦角菌目、麦角菌科、虫草属。虫草素是冬虫夏草、蛹虫草中的主要生理活性物质。经过科学研究发现，虫草素是一种能抑制链球菌、鼻疽杆菌、炭疽杆菌等病菌的生长，抑制癌细胞的生长，还有抗病毒、抗癌和抗真菌作用。对生命体具有增强免疫、抑制肿瘤、抗衰老等作用，可促进人体新陈代谢，提高人体排毒能力；腺苷也是冬虫夏草、蛹虫草中的主要生理活性物质，是抗心律失常药，临床上用于和房室有关的室上心律失常，还用于治疗心绞痛、心肌梗塞、冠脉功能不全、动脉硬化、原发性高血压、脑血管障碍、中风后遗症、进行性肌肉萎缩等，是用于制造ATP、阿糖腺苷、辅酶A等生产原料。这二种产物作为有力于人类生命活动的活性物或药用物质具有很好的应用潜力和前景。
虫草素和腺苷是冬虫夏草、蛹虫草中的主要生理活性物质，尤其是虫草素主要只能有虫草菌发酵产生。但是，在虫草菌发酵过程中，虫草素的含量相对比较低，这使利用虫草素成为产品在成本上受到了一定的限制。所以找到一种可以使虫草菌提高虫草素和腺苷产量显得尤为重要。
发明内容
为克服现有技术中的技术问题，本发明提供一种蛹虫草中虫草素和腺苷含量的培养方法，包括以下步骤：
(a)将蛹虫草菌种接种到种子培养基培养制成蛹虫草种子液；
(b)将蛹虫草种子液接种到发酵培养基进行培养得到蛹虫草子实体，其中，发酵培养基的组分包括腺嘌呤及酵母脱氧核糖核酸水解物。
进一步地，所述种子培养基组成为:葡萄糖2-4％、酵母膏0.3-0.6％、牛肉膏0.4-0.8％、硫酸镁0.2-0.4％、磷酸氢二钾0.005-0.01％，其余为水。
进一步地，在(b)之前进行(c)配置发酵培养基；
在配置发酵培养时，进行以下步骤：
(c1)配置基本培养基；
(c2)配置腺嘌呤溶液、酵母脱氧核糖核酸水解物溶液；
(c3)往基本培养基添加腺嘌呤溶液、酵母脱氧核糖核酸水解物溶液其中。
进一步地，所述基本培养基为液态基本培养基或固态基本培养基。
进一步地，液态基本培养基组成包括:葡萄糖20-50g/L，酵母膏3-5g/L，蛋白胨5-10g/L，硫酸镁3-6g/L,氯化钠5-10g/L和磷酸氢二钾0.6-1g/L。
进一步地，所述固态基本培养基包括大米、燕麦粉和鸡蛋。
进一步地，大米、燕麦粉的比例为5/5-7/3，鸡蛋量是基本培养基量的20％。
进一步地，所述腺嘌呤溶液、酵母脱氧核糖核酸水解物溶液的浓度均为20％。
进一步地，所述腺嘌呤溶液、酵母脱氧核糖核酸水解物溶液的添加量范围均为0.05-0.3％。
进一步地，所述蛹虫草种子液为发酵培养基的30％-45％。
本发明的有益效果是：本发明中的培养方法，相对于现有常规培养方法而言，发酵培养基中添加了腺嘌呤和酵母脱氧核糖核酸水解物，经过该培养方法得到的蛹虫草子实体中，虫草素和腺苷的含量大幅率提高。
具体实施方式
以下结合实施例对本发明作进一步的阐述，所述的实施例仅为本发明一部分的实施例，这些实施例仅用于解释本发明，对本发明的范围并不构成任何限制。
实施例1
本发明提供提高一种蛹虫草中虫草素和腺苷含量的培养方法，包括以下步骤：
(a)将蛹虫草菌种接种到种子培养基培养制成蛹虫草种子液；
优选地，所述种子培养基组成为:葡萄糖2-4％、酵母膏0.3-0.6％、牛肉膏0.4-0.8％、硫酸镁0.2-0.4％、磷酸氢二钾0.005-0.01％，其余为水。
(b)将蛹虫草种子液接种到液态发酵培养基培养得到蛹虫草子实体,其中，蛹虫草种子液为培养基的30％到45％；
在(b)之前进行(c)配置液态发酵培养基；
在配置液态发酵培养时，进行以下步骤：
(c1)配置液态基本培养基，其中，液态基本培养基组成包括:葡萄糖20-50g/L，酵母膏3-5g/L，蛋白胨5-10g/L，硫酸镁3-6g/L,氯化钠5-10g/L和磷酸氢二钾0.6-1g/L；
(c2)配置腺嘌呤溶液、酵母脱氧核糖核酸水解物溶液，其中，腺嘌呤溶液、酵母脱氧核糖核酸水解物溶液的浓度均为20％；
(c3)往液态基本培养基添加腺嘌呤溶液、酵母脱氧核糖核酸水解物溶液其中，腺嘌呤溶液的添加量为0.1％，酵母脱氧核糖核酸水解物溶液为0.2％；
为了验证本实施例的效果，这里设置对比例，其中，所采用对比例的培养方法中与现有常规培养方法一样，不添加嘌呤溶液和酵母脱氧核糖核酸水解物溶液，所采用本实施例的培养方法在常规培养基础上，添加嘌呤溶液和酵母脱氧核糖核酸水解物溶液；将两种培养方法得到的蛹虫草子实体经过高效液相色谱检测得到检测结果为：采用对比例中的培养方法得到的蛹虫草子实体中虫草素和腺苷的含量分别为0.62％和0.60％，而采用本实施例中的培养方法得到的蛹虫草子实体虫草素和腺苷的含量分别为1.02％和0.77％,采用本实施例中的培养方法虫得到虫草素和腺苷的含量分别提高了60.1％和28.3％。
以上是在过程是在配置固态发酵培养基时，添加嘌呤溶液和酵母脱氧核糖核酸水解物溶液，当然也可以在发酵培养过程中，往固态发酵培养基中添加嘌呤溶液和酵母脱氧核糖核酸水解物溶液。
实施例2
本发明提供提高一种蛹虫草中虫草素和腺苷含量的培养方法，包括以下步骤：
(a)将蛹虫草菌种接种到种子培养基培养制成蛹虫草种子液；
优选地，所述种子培养基组成为:葡萄糖2-4％、酵母膏0.3-0.6％、牛肉膏0.4-0.8％、硫酸镁0.2-0.4％、磷酸氢二钾0.005-0.01％，其余为水；
(b)将蛹虫草种子液接种到固态发酵培养基培养得到蛹虫草子实体；蛹虫草种子液为培养基的30％-45％；
在(b)之前进行(c)配置液态发酵培养基；
配置固态发酵培养基时，进行以下步骤：
(c1)配置固态基本培养基，具体地，固态基本培养基以大米，燕麦粉为基本培养基，其中，大米粉、燕麦粉用量比7:3，基本培养基还添加有鸡蛋，其中，鸡蛋量是基本培养基量的20％；
(c2)配置20％浓度的腺嘌呤溶液、20％的浓度酵母脱氧核糖核酸水解物；
(c3)往固态基本培养基添加腺嘌呤溶液、酵母脱氧核糖核酸水解物形成固态发酵培养基，其中，腺嘌呤溶液添加量为0.05％，酵母脱氧核糖核酸水解物溶液添加量为0.2％；
为了验证本实施例的效果，这里设置对比例，其中，所采用对比例的培养方法中与现有常规培养方法一样，不添加嘌呤溶液和酵母脱氧核糖核酸水解物溶液，所采用本实施例的培养方法在常规培养基础上，添加嘌呤溶液和酵母脱氧核糖核酸水解物溶液；将两种培养方法得到的蛹虫草子实体经过高效液相色谱检测得到检测结果为：采用对比例中的培养方法得到的蛹虫草子实体中虫草素和腺苷的含量分别为2.65％和0.82％，而采用本实施例中的培养方法得到的蛹虫草子实体虫草素和腺苷的含量分别为3.63％和1.01％，采用本实施例中的培养方法虫得到草素和腺苷的含量分别提高了36.9％和23.1％。
以上是在过程是在配置固态发酵培养基时，添加嘌呤溶液和酵母脱氧核糖核酸水解物溶液，当然也可以在发酵培养过程中，往固态发酵培养基中添加嘌呤溶液和酵母脱氧核糖核酸水解物溶液。
实施例3
本发明提供提高一种蛹虫草中虫草素和腺苷含量的培养方法，包括以下步骤：
(a)将蛹虫草菌种接种到种子培养基培养制成蛹虫草种子液；
优选地，所述种子培养基组成为:葡萄糖2-4％、酵母膏0.3-0.6％、牛肉膏0.4-0.8％、硫酸镁0.2-0.4％、磷酸氢二钾0.005-0.01％，其余为水；
(b)将蛹虫草种子液接种到固态发酵培养基培养得到蛹虫草子实体；蛹虫草种子液为培养基的30％-45％；
在(b)之前进行(c)配置液态发酵培养基；
配置固态发酵培养基时，进行以下步骤：
(c1)配置固态基本培养基，具体地，固态基本培养基以大米，燕麦粉基本培养基，其中，大米粉、燕麦粉用量比6:4；基本培养基还添加有鸡蛋，其中，鸡蛋量是基本培养基量的20％；
(c2)配置20％浓度的腺嘌呤溶液、20％的浓度酵母脱氧核糖核酸水解物；
(c3)往固态基本培养基添加腺嘌呤溶液、酵母脱氧核糖核酸水解物形成固态发酵培养基，其中，腺嘌呤溶液添加量为0.05％，酵母脱氧核糖核酸水解物溶液添加量为0.25％；
为了验证本实施例的效果，这里设置对比例，其中，所采用对比例的培养方法中与现有常规培养方法一样，不添加嘌呤溶液和酵母脱氧核糖核酸水解物溶液，所采用本实施例的培养方法在常规培养基础上，添加嘌呤溶液和酵母脱氧核糖核酸水解物溶液；将两种培养方法得到的蛹虫草子实体经过高效液相色谱检测得到检测结果为：采用对比例中的培养方法得到的蛹虫草子实体中虫草素和腺苷的含量分别为2.81％和0.80％，而采用本实施例中的培养方法得到的蛹虫草子实体虫草素和腺苷的含量分别为4.16％和1.03％，采用本实施例中的培养方法虫得到草素和腺苷的含量分别提高了48.3％和28.7％。
以上是在过程是在配置固态发酵培养基时，添加嘌呤溶液和酵母脱氧核糖核酸水解物溶液，当然也可以在发酵培养过程中，往固态发酵培养基中添加嘌呤溶液和酵母脱氧核糖核酸水解物溶液。
实施例4
本发明提供提高一种蛹虫草中虫草素和腺苷含量的培养方法，包括以下步骤：
(a)将蛹虫草菌种接种到种子培养基培养制成蛹虫草种子液；
优选地，所述种子培养基组成为:葡萄糖2-4％、酵母膏0.3-0.6％、牛肉膏0.4-0.8％、硫酸镁0.2-0.4％、磷酸氢二钾0.005-0.01％，其余为水；
(b)将蛹虫草种子液接种到固态发酵培养基培养得到蛹虫草子实体；蛹虫草种子液为培养基的30％-45％；
在(b)之前进行(c)配置液态发酵培养基；
配置固态发酵培养基时，进行以下步骤：
(c1)配置固态基本培养基，具体地，固态基本培养基以大米，燕麦粉为基本培养基，大米粉、燕麦粉用量比5:5，基本培养基还添加有鸡蛋，其中，鸡蛋量是基本培养基量的20％；
(c2)配置20％浓度的腺嘌呤溶液、20％的浓度酵母脱氧核糖核酸水解物；
(c3)往固态基本培养基添加腺嘌呤溶液、酵母脱氧核糖核酸水解物形成固态发酵培养基，其中，腺嘌呤溶液添加量为0.1％，酵母脱氧核糖核酸水解物溶液添加量为0.2％；
为了验证本实施例的效果，这里设置对比例，其中，所采用对比例的培养方法中与现有常规培养方法一样，不添加嘌呤溶液和酵母脱氧核糖核酸水解物溶液，所采用本实施例的培养方法在常规培养基础上，添加嘌呤溶液和酵母脱氧核糖核酸水解物溶液；将两种培养方法得到的蛹虫草子实体经过高效液相色谱检测得到检测结果为：采用对比例中的培养方法得到的蛹虫草子实体中虫草素和腺苷的含量分别为3.17％和0.87％，而采用本实施例中的培养方法得到的蛹虫草子实体虫草素和腺苷的含量分别为5.06％和1.09％，采用本实施例中的培养方法虫得到草素和腺苷的含量分别提高了59.7％和25.3％。
以上是在过程是在配置固态发酵培养基时，添加嘌呤溶液和酵母脱氧核糖核酸水解物溶液，当然也可以在发酵培养过程中，往固态发酵培养基中添加嘌呤溶液和酵母脱氧核糖核酸水解物溶液。
以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非对本发明作任何形式上的限制，虽然本发明已以较佳实施例揭露如上，然而并非用以限定本发明，任何熟悉本专业的技术人员，在不脱离本发明技术方案范围内，当可利用上述揭示的技术内容作出些许改动或修饰为等同变化的等效实施例，但凡是未脱离本发明技术方案内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与修饰，均仍属于本发明技术方案的范围内。
Claims (10)
1.一种蛹虫草中虫草素和腺苷含量的培养方法，其特征在于：包括以下步骤：
（a）将蛹虫草菌种接种到种子培养基培养制成蛹虫草种子液；
（b）将蛹虫草种子液接种到发酵培养基进行培养得到蛹虫草子实体，其中，发酵培养基的组分包括腺嘌呤及酵母脱氧核糖核酸水解物。
2.根据权利要求1所述的一种蛹虫草中虫草素和腺苷含量的培养方法，其特征在于：所述种子培养基组成为:葡萄糖2-4%、酵母膏0.3-0.6%、牛肉膏0.4-0.8%、硫酸镁0.2-0.4%、磷酸氢二钾0.005-0.01%，其余为水。
3.根据权利要求1所述的一种蛹虫草中虫草素和腺苷含量的培养方法，其特征在于：
在（b）之前进行（c）配置发酵培养基；
在配置发酵培养时，进行以下步骤：
（c1）配置基本培养基；
（c2）配置腺嘌呤溶液、酵母脱氧核糖核酸水解物溶液；
（c3）往液态基本培养基添加腺嘌呤溶液、酵母脱氧核糖核酸水解物溶液其中。
4.根据权利要求3所述的一种蛹虫草中虫草素和腺苷含量的培养方法，其特征在于：所述基本培养基为液态基本培养基或固态基本培养基。
5.根据权利要求4所述的一种蛹虫草中虫草素和腺苷含量的培养方法，其特征在于：液态基本培养基组成包括:葡萄糖20-50g/L，酵母膏3-5g/L，蛋白胨5-10 g /L，硫酸镁3-6g/L, 氯化钠5-10g/L和磷酸氢二钾0.6-1g/L。
6.根据权利要求3所述的一种蛹虫草中虫草素和腺苷含量的培养方法，其特征在于：所述固态基本培养基包括大米、燕麦粉和鸡蛋。
7.根据权利要求6所述的一种蛹虫草中虫草素和腺苷含量的培养方法，其特征在于：大米、燕麦粉的比例5/5-7/3，鸡蛋量是基本培养基量的20％。
8.根据权利要求6所述的一种蛹虫草中虫草素和腺苷含量的培养方法，其特征在于：所述腺嘌呤溶液、酵母脱氧核糖核酸水解物溶液的浓度均为20%。
9.根据权利要求8所述的一种蛹虫草中虫草素和腺苷含量的培养方法，其特征在于：所述腺嘌呤溶液、酵母脱氧核糖核酸水解物溶液的添加量范围均为0.05 -0.3%。
10.根据权利要求1至9任意一项所述的一种蛹虫草中虫草素和腺苷含量的培养方法，其特征在于：所述蛹虫草种子液为发酵培养基的30％-45％。
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2021
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