CN113979999A - 靶向泛素化降解bcr-abl激酶的化合物及其制备方法、组合物和用途 - Google Patents

Abstract

本发明属于药物领域，具体涉及靶向泛素化降解BCR‑ABL激酶的化合物及其制备方法、组合物和用途，所述化合物是具有式Ⅰ结构的化合物或其药学上可接受的盐：

，式中，环A代表五元环烷基、五元杂环基或五元杂芳基，R₁代表氢、不取代的C_1‑4烷基、取代的C_1‑4烷基、不取代的C_1‑4烷氧基、取代的C_1‑4烷氧基、不取代的C_1‑4烷硫基、取代的C_1‑4烷硫基、不取代的C_1‑4烷胺基或取代的C_1‑4烷胺；L代表

；D代表

、

、

或

Description

靶向泛素化降解BCR-ABL激酶的化合物及其制备方法、组合物 和用途

技术领域

本发明属于药物领域，具体涉及靶向泛素化降解BCR-ABL激酶的化合物及其制备方法、组合物和用途。

背景技术

9号染色体的BCR基因与22号染色体的c-ABL基因形成了新的基因序列——BCR-ABL融合基因，该基因编码的P210蛋白质增强了酪氨酸激酶的活性，从而产生了细胞凋亡的抑制作用，引起细胞增殖、黏附和生存性质的改变，进而导致多种肿瘤的产生，如导致产生慢性粒细胞白血病(CML)。因此，抑制BCR-ABL激酶活性可有效抑制肿瘤生长。BCR-ABL在正常细胞中不表达，所以它是理想的治疗CML药物靶标。

目前的癌症靶向药物，占主导地位的是针对致癌蛋白的小分子或单抗抑制剂，BCR-ABL激酶抑制剂已经成为大多数慢性粒细胞白血病的一线治疗药物，例如，第一个小分子靶向抗肿瘤药物是伊马替尼(imatinib)，它可以有效抑制BCR-ABL激酶。不过，随着时间的推移，许多癌细胞会对这类药物产生抗药性，比如说产生新的突变，或者激活其它致癌蛋白。研究人员在寻找其它的抗癌途径时，注意到了细胞内的“清洁工”——泛素-蛋白酶体系统。泛素-蛋白酶体系统负责清理细胞中无用或者有害的蛋白，通过激活这个系统特异性的清理致癌蛋白，有望恢复细胞内的蛋白质稳态，阻止癌症的发生。基于此开发出靶向蛋白降解嵌合分子(PROTACs)技术，PROTACs由三部分组成：靶蛋白配体、E3泛素连接酶配体和连接链。它们可以通过靶蛋白配体和E3泛素连接酶配体分别识别靶蛋白和E3泛素连接酶，导致靶蛋白多聚泛素化，从而使靶蛋白被蛋白酶体识别并降解。这种新型的PROTACs既可以有望克服传统靶向药耐药性，也是将来一个组合疗法的利器，前景值得期待。因此，确定一种靶向泛素化降解BCR-ABL激酶的化合物，以实现对BCR-ABL激酶的诱导降解具有重要的意义。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术中存在的上述不足，提供了一种靶向泛素化降解BCR-ABL激酶的化合物及其制备方法、组合物和用途，该化合物可以实现对BCR-ABL激酶诱导降解，对研究肿瘤药物的开发有重要的意义。

为实现上述发明目的，本发明采用的技术方案如下：

第一方面，本发明提供了一种具有式Ⅰ结构的化合物或其药学上可接受的盐：

；

式中，环A代表五元环烷基、五元杂环基或五元杂芳基，R₁代表氢、不取代的C_1-4烷基、取代的C_1-4烷基、不取代的C_1-4烷氧基、取代的C_1-4烷氧基、不取代的C_1-4烷硫基、取代的C_1-4烷硫基、不取代的C_1-4烷胺基或取代的C_1-4烷胺基；

L代表

，式中，Y代表CH₂、SiH₂、NH、PH、O、S、取代的CH₂、取代的SiH₂、取代的NH或取代的PH，A₁和A₂分别独立地代表不取代的C_1-5烷基、取代的C_1-5烷基、不取代的C_1-5烷氧基、取代的C_1-5烷氧基、不取代的C_1-5烷硫基、取代的C_1-5烷硫基、不取代的C_1-5烷胺基、取代的C_1-5烷胺基、苯基、五元杂芳基、六元杂芳基、C_3-7环烷基、C_3-7杂环基、

、

、

、

、

或

；

D代表

、

、

或

，式中，Z代表氢、CH₂、SiH₂、NH、PH、O、S、

、取代的CH₂、取代的SiH₂、取代的NH或取代的PH，R₂、R₃、R₄和R₅分别独立地代表氢、不取代的C_1-4烷基、取代的C_1-4烷基、不取代的C_1-4烷氧基、取代的C_1-4烷氧基、不取代的C_1-4烷硫基、取代的C_1-4烷硫基、不取代的C_1-4烷胺基或取代的C_1-4烷胺基。

本发明提供的化合物可以使BCR-ABL激酶被蛋白酶体识别，实现对BCR-ABL激酶的诱导降解，对研究肿瘤药物的开发有重要的意义。

第二方面，本发明提供了一种如第一方面所述的化合物或其药学上可接受的盐的制备方法，包括如下步骤：

S1、

化合物Ⅱ与化合物Ⅲ在第一催化剂作用下于第一碱存在的第一反应溶剂中进行反应，得到中间体Ⅳ；

S2、

所述中间体Ⅳ与3-氨基-5-溴三氟甲苯在第一缩合剂作用下于第二碱存在的第二反应溶剂中进行反应，得到中间体Ⅴ；

S3、所述中间体Ⅴ与具有所述环A结构的化合物在碘化亚铜和8-羟基喹啉作用下于第三碱存在的第三反应溶剂中进行偶联反应，得到所述中间体Ⅴ中除溴原子之外的其它部分结构与所述环A的连接物；

S4、所述中间体Ⅴ中除溴原子之外的其它部分结构与所述环A的连接物参与反应，得到具有式Ⅰ结构的化合物或其药学上可接受的盐。

本发明提供的制备方法简单，条件温和，操作方便，设备条件要求不高，极易实现，且后处理简单，收率高，适用于工业化大规模生产。

第三方面，本发明提供了一种药物组合物，其包含治疗有效量的选自如第一方面所述的化合物或其药学上可接受的盐，并包含药学上可接受的载体。

第四方面，本发明提供了一种靶向泛素化降解BCR-ABL激酶的制剂，其包含治疗有效量的选自如第一方面所述的化合物或其药学上可接受的盐，并包含药学上可接受的载体。

第五方面，本发明提供了一种根据第一方面所述的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于预防和/或治疗肿瘤药物中的用途。

进一步的，所述肿瘤选自：

皮肤癌、膀胱癌、卵巢癌、乳腺癌、胃癌、前列腺癌、结肠癌、肺癌、骨癌、脑癌、直肠癌、食管癌、舌癌、肾癌、宫颈癌、子宫体癌、睾丸癌、泌尿癌、黑素癌、星型细胞癌、脑膜瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、急性淋巴性白血病、慢性淋巴性白血病、急性骨髓性白血病、慢性粒细胞白血病、成人T细胞白血病淋巴瘤、肝细胞癌、多发性骨髓瘤、基底细胞瘤、精原细胞瘤、软骨肉瘤、肌肉瘤、纤维肉瘤。

具体实施方式

为了使本发明要解决的技术问题、技术方案及有益效果更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

除有定义外，以下实施例中所用的技术术语具有与本发明所属领域技术人员普遍理解的相同含义。以下实施例中所用的实验试剂，如无特殊说明，均为常规生化试剂；以下实施例中所用的原材料、仪器和设备等，均可通过市场购买获得或者可通过现有方法获得；所述实验试剂用量，如无特殊说明，均为常规实验操作中试剂用量；所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。

除非有相反陈述，下列用在说明书和权利要求中的术语具有下述含义。

术语“药学上可接受的盐”指那些保留母体化合物的生物有效性及特性的盐。该盐包括：酸加成盐，其是通过母体化合物的游离碱与无机酸或与有机酸的反应而获得的；所述无机酸诸如盐酸、氢溴酸、氢碘酸、硝酸、磷酸、硫酸及高氯酸等；所述有机酸诸如乙酸、草酸、(D)或(L)苹果酸、马来酸、甲烷磺酸、对甲苯磺酸、水杨酸、苯磺酸、苯甲酸、樟脑磺酸、柠檬酸、富马酸、琥珀酸、酒石酸或丙二酸等；优选为盐酸或(L)-苹果酸；或者当母体化合物中存在的酸质子被置换为金属离子或与有机碱配位时，形成盐，所述金属离子例如碱金属离子、碱土金属离子或铝离子；所述有机碱诸如乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、缓血酸胺、N-甲基葡糖胺及类似物。

术语“环烷基”指饱和或部分不饱和单环环状烃基团，环烷基环包含3至20个碳原子，优选包含3至12个碳原子，更优选包含5个碳原子。环烷基的非限制性实例包括环戊烯基。

术语“杂环基”指饱和或部分不饱和单环环状烃基团，其包含3至20个环原子，其中一个或多个环原子为选自硅、磷、氮、氧或硫的杂原子，其余环原子为碳。优选包含3至12个环原子，其中1～4个是杂原子；最优选包含3至8个环原子，其中1～3个是杂原子，单环杂环基的非限制性实例包括二氢吡咯基。

术语“杂芳基”指具有完全共轭的π电子系统的、包含1至4个杂原子、5至14个环原子的杂芳族体系，其中杂原子选自硅、磷、氧、硫和氮。杂芳基优选为5至10元，含1至3个杂原子；优选例如呋喃基、吡咯基、噻吩基、吡啶基、咪唑基、噻唑基、吡唑基、噁唑基、嘧啶基、噻二唑、吡嗪基等。

术语“烷基”指饱和脂肪族烃基团，其为包含1至20个碳原子的直链或支链基团，优选含有1至12个碳原子的烷基。非限制性实例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基、正戊基、2 ,2-二甲基丙基、1-乙基丙基、2-甲基丁基及其各种支链异构体等。烷基可以是取代的或非取代的，当被取代时，取代基可以在任何可使用的连接点上被取代，所述取代基独立地任选选自卤素、烷基、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、烷基氨基、羟基、氰基、氨基中的一个或多个取代基所取代。

术语“取代的”指结构上任何可使用的连接点上均可以被取代基取代。

术语“烷氧基”指-O-(烷基)，其中烷基的定义如上所述。烷氧基的非限制性实例包括：甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基。烷氧基可以是任选取代的或非取代的，当被取代时，取代基可以在任何可使用的连接点上被取代，所述取代基独立地任选选自卤素、烷基、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、烷基氨基、羟基、氰基、氨基中的一个或多个取代基所取代。

术语“烷硫基”指（烷基）-S-，烷硫基的非限制性实例包括：甲硫基、乙硫基、正丙硫基、异丙硫基、正丁硫基等。

术语“烷胺基”指具有一个或两个烷基取代基的胺基基团，如“烷基-NH-”或“（烷基）₂N-”基团，其中烷基的定义如上所述。烷胺基的非限制性实例包括：二甲基氨基、甲氨基等。

各种含碳氢结构部分的碳原子含量由该部分的标有最小和最大碳原子数目的前缀表示，即前缀C_i~j表示该部分的碳原子数为整数“i”至整数“j”（包括i和j）。因此，例如，C_1~4烷基是指1至4个碳原子的烷基（包括1和4）。

术语“药物组合物”指一种或多种本文中所述的化合物或其生理学上可接受的盐与其它化学成分(诸如生理学上可接受的载体及赋形剂)的混合物。药物组合物的目的旨在促进化合物给予生物。

术语“药学上可接受的载体”指药学领域常规的药物载体，对生物不产生明显刺激且不会消除所给予的化合物的生物活性及特性的载体，例如：稀释剂，如水等；填充剂，如淀粉、蔗糖等；粘合剂，如纤维素衍生物、藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮；湿润剂，如甘油；崩解剂，如琼脂、碳酸钙和碳酸氢钠；吸收促进剂，如季铵化合物；表面活性剂，如十六烷醇；吸附载体，如高岭土和皂粘土；润滑剂，如滑石粉、硬脂酸钙和硬脂酸镁和聚乙二醇等。另外，还可以在上述药物组合物中加入其它辅料，如香味剂和甜味剂等。

术语“治疗有效量”指足以实现预期应用的本发明所述化合物的量。治疗有效量可以取决于以下因素而改变：预期应用（体外或者体内），或者所治疗的受试者和疾病病症，如受试者的重量和年龄、疾病病症的严重性和给药方式等，其可以由本领域普通技术人员容易地确定。具体剂量将取决于以下因素而改变：所选择的特定化合物、所述依据的给药方案、是否与其它化合物组合给药、给药的时间安排、所给药的组织和所承载的物理递送系统。

本发明所述“室温”具有本领域公知的含义，一般是指24-28℃。

第一方面，本发明实施例提供了一种具有式Ⅰ结构的化合物或其药学上可接受的盐：

；

式中，环A代表五元环烷基、五元杂环基或五元杂芳基，R₁代表氢、不取代的C_1-4烷基、取代的C_1-4烷基、不取代的C_1-4烷氧基、取代的C_1-4烷氧基、不取代的C_1-4烷硫基、取代的C_1-4烷硫基、不取代的C_1-4烷胺基或取代的C_1-4烷胺基；

L代表

，式中，Y代表CH₂、SiH₂、NH、PH、O、S、取代的CH₂、取代的SiH₂、取代的NH或取代的PH，A₁和A₂分别独立地代表不取代的C_1-5烷基、取代的C_1-5烷基、不取代的C_1-5烷氧基、取代的C_1-5烷氧基、不取代的C_1-5烷硫基、取代的C_1-5烷硫基、不取代的C_1-5烷胺基、取代的C_1-5烷胺基、苯基、五元杂芳基、六元杂芳基、C_3-7环烷基、C_3-7杂环基、

、

、

、

、

或

；

D代表

、

、

或

，式中，Z代表氢、CH₂、SiH₂、NH、PH、O、S、

、取代的CH₂、取代的SiH₂、取代的NH或取代的PH，R₂、R₃、R₄和R₅分别独立地代表氢、不取代的C_1-4烷基、取代的C_1-4烷基、不取代的C_1-4烷氧基、取代的C_1-4烷氧基、不取代的C_1-4烷硫基、取代的C_1-4烷硫基、不取代的C_1-4烷胺基或取代的C_1-4烷胺基。

本发明提供的化合物是一种新型靶向蛋白降解嵌合分子(PROTACs)，可以使BCR-ABL激酶被蛋白酶体识别，实现对BCR-ABL激酶的诱导降解，其通过直接诱导蛋白酶体降解BCR-ABL激酶来抑制BCR-ABL激酶活性，对研究肿瘤药物的开发有重要的意义。

具有式Ⅰ结构的化合物中的D片段可以与泛素链接酶E3相互作用，L片段为D片段与可以和BCR-ABL激酶相结合的片段之间的连接臂，具有式Ⅰ结构的化合物可以同时与BCR-ABL激酶及E3结合，使本来不能与E3结合的BCR-ABL激酶泛素化，进而被蛋白酶体识别并降解。只要该化合物与BCR-ABL激酶有一定的结合能力，过表达的BCR-ABL激酶就会被降解掉，受激酶突变的影响小，与该化合物连接的BCR-ABL激酶被降解后，该化合物还可以循环继续降解其他的BCR-ABL激酶，对药物剂量需求小，毒副作用小。

如果将具有式Ⅰ结构的化合物中的可以和BCR-ABL激酶相结合的片段替换为其它结构，可能会导致诱导降解BCR-ABL激酶的活性降低甚至消失。

进一步地，所述环A选自下述结构之一：

；

所述R₁代表氢或甲基；

所述L选自下述结构之一：

；

所述D选自下述结构之一：

。

进一步地，所述化合物选自下述的化合物：

。

第二方面，本发明实施例提供了一种如第一方面所述的化合物或其药学上可接受的盐的制备方法，包括如下步骤：

S1、

化合物Ⅱ与化合物Ⅲ在第一催化剂作用下于第一碱存在的第一反应溶剂中进行反应，得到中间体Ⅳ；

S2、

所述中间体Ⅳ与3-氨基-5-溴三氟甲苯在第一缩合剂作用下于第二碱存在的第二反应溶剂中进行反应，得到中间体Ⅴ；

S3、所述中间体Ⅴ与具有所述环A结构的化合物在碘化亚铜和8-羟基喹啉作用下于第三碱存在的第三反应溶剂中进行偶联反应，得到所述中间体Ⅴ中除溴原子之外的其它部分结构与所述环A的连接物；

S4、所述中间体Ⅴ中除溴原子之外的其它部分结构与所述环A的连接物参与反应，得到具有式Ⅰ结构的化合物或其药学上可接受的盐。

本发明实施例中各步骤的序号不构成对本发明实施例步骤顺序的限制，本发明实施例提供的制备方法简单，条件温和，操作方便，设备条件要求不高，极易实现，且后处理简单，收率高，适用于工业化大规模生产。

进一步地，在步骤S1中，所述第一催化剂为钯催化剂，所述钯催化剂为三二亚苄基丙酮二钯、醋酸钯、[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯、四三苯基膦钯中的至少一种。

进一步地，在步骤S1中，所述第一碱为醋酸钠、醋酸钾、碳酸钠、碳酸钾、磷酸钾、碳酸铯、叔丁醇钠、叔丁醇钾中的至少一种。

进一步地，在步骤S1中，所述第一反应溶剂为N,N-二甲基甲酰胺、二氧六环、N-甲基吡咯烷酮中的至少一种。

进一步地，在步骤S1中，反应温度为50℃~120℃，例如反应温度可以为50℃、60℃、70℃、80℃、90℃、100℃、110℃或120℃等。

进一步地，在步骤S2中，所述第一缩合剂为2-(7-氮杂苯并三氮唑)- N,N, N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯、O-苯并三氮唑-四甲基脲六氟磷酸酯、羰基二咪唑中的至少一种。

进一步地，在步骤S2中，所述第二碱为三乙胺、二异丙基乙胺中的至少一种。

进一步地，在步骤S2中，所述第二反应溶剂为二氯甲烷、四氢呋喃、N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺中的至少一种。

进一步地，在步骤S3中，所述第三碱为醋酸钠、醋酸钾、碳酸钠、碳酸钾、磷酸钾、碳酸铯、叔丁醇钠、叔丁醇钾中的至少一种。

进一步地，在步骤S3中，所述第三反应溶剂为二甲基亚砜、二氧六环、N-甲基吡咯烷酮、N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺中的至少一种。

第三方面，本发明实施例提供了一种药物组合物，其包含治疗有效量的选自如第一方面所述的化合物或其药学上可接受的盐，并包含药学上可接受的载体。

本发明实施例的药物组合物可通过将本发明的化合物或其盐与适宜的药学上可接受的载体组合而制备，例如可配制成固态、半固态、液态或气态制剂，如片剂、丸剂、胶囊剂、粉剂、颗粒剂、膏剂、乳剂、悬浮剂、溶液剂、栓剂、注射剂、吸入剂、凝胶剂、微球及气溶胶等。

给予本发明实施例的化合物或其药学上可接受的盐或其药物组合物的典型途径包括但不限于口服、直肠、透黏膜、经肠给药，或者局部、经皮、吸入、肠胃外、舌下、阴道内、鼻内、眼内、腹膜内、肌内、皮下、静脉内给药。

本发明实施例的药物组合物可以采用本领域众所周知的方法制造，如常规的混合法、溶解法、制粒法、制糖衣药丸法、磨细法、乳化法、冷冻干燥法等等。

对于口服给药，可以通过将活性化合物与本领域熟知的药学上可接受的载体混合来配制该药物组合物。这些载体能使本发明的化合物被配制成片剂、丸剂、锭剂、糖衣剂、胶囊剂、液体、凝胶剂、浆剂、悬浮剂等，用于对患者的口服给药。

第四方面，本发明实施例提供了一种靶向泛素化降解BCR-ABL激酶的制剂，其包含治疗有效量的选自如第一方面所述的化合物或其药学上可接受的盐，并包含药学上可接受的载体。

第五方面，本发明实施例提供了一种根据第一方面所述的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于预防和/或治疗肿瘤药物中的用途。

进一步地，本发明实施例提供了一种根据第一方面所述的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于预防和/或治疗与BCR-ABL激酶活性异常表达相关的肿瘤药物中的用途。

进一步地，所述肿瘤选自皮肤癌、膀胱癌、卵巢癌、乳腺癌、胃癌、前列腺癌、结肠癌、肺癌、骨癌、脑癌、直肠癌、食管癌、舌癌、肾癌、肾实质癌、宫颈癌、子宫体癌、子宫内膜癌、睾丸癌、泌尿癌、黑素癌、星型细胞癌、脑膜瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、急性淋巴性白血病、慢性淋巴性白血病、急性骨髓性白血病，慢性粒细胞白血病、成人T细胞白血病淋巴瘤、肝细胞癌、支气管癌、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、多发性骨髓瘤、基底细胞瘤、精原细胞瘤、横纹肌肉瘤、软骨肉瘤、肌肉瘤、纤维肉瘤。

本发明先后进行过多次试验，现举一部分试验结果作为参考对发明进行进

一步详细描述，下面结合具体实施例进行详细说明。

下述实施例中3-硝基-4-甲基-吡咯的制备方法如下：

在100mL的单口瓶中，加入3-甲基吡咯（8.11g，0.1mol）再加入40mL的冰醋酸溶解，将反应液降温至0度后，缓慢滴加浓硝酸6.7mL，滴加完毕后，然后缓慢升至室温反应1h，TLC监测反应，反应完毕后将反应液倒入400mL的冰水中，二氯甲烷萃取三次，每次萃取所用二氯甲烷萃的体积为50mL，合并有机相，有机相再用纯化水（100mL）洗涤，饱和食盐水（100mL）洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，柱层析分离得到2g3-硝基-4-甲基-吡咯，ESI(+)m/z＝127.1[M+H]⁺。

实施例1化合物1的制备

S1、将化合物1a（泊马度胺，2.73g，10.0mmol）和化合物1b（4-溴丁酸，1.67g，10.0mmol）溶于N,N-二甲基甲酰胺（DMF，10mL）中，加入碳酸钾（2.76g，20.0mmol），在50℃下反应5小时，TLC监测反应，反应完毕后降至室温，加入纯化水（100mL），有固体析出，过滤，滤饼用水洗涤，干燥滤饼，得到3.05g中间体1c，收率为84.72%。

S2、将化合物1d（4-（3-吡啶基）-2-氨基嘧啶，3.44g，20mmol）与化合物1e（3-溴-4-甲基苯甲酸，4.30g，20mmol）溶于1,4-二氧六环（50mL）中,室温下加入三二亚苄基丙酮二钯（1.83g，2mmol），2,2'-双(二苯基膦)-1,1'-联萘（2.49g，4mmol）和碳酸铯（13.03g，40mmol），在氮气保护下，回流搅拌反应4小时，TLC监测反应，反应完毕后减压浓缩除去溶剂，加入纯化水（200mL），用乙酸乙酯萃取三次，每次萃取所用乙酸乙酯的体积为50mL，合并有机相，有机相再用纯化水（50mL）洗涤，饱和食盐水（50mL）洗涤，之后用无水硫酸钠干燥，减压浓缩，柱层析分离得到2.40g中间体1f，收率为39.1%中间体1f为黄色固体，ESI(+)m/z＝307[M+H]⁺。

S3、将中间体1f（1.53g，5mmol）和N,N-二异丙基乙胺（DIEA，1.29g，10mmol）溶于N,N-二甲基甲酰胺（DMF，10mL）中，室温下加入2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯（HATU，2.85g，7.5mmol），室温反应10min后，加入3-氨基-5-溴三氟甲苯（1.20g，5mmol），继续室温搅拌6小时，TLC监测反应，反应完毕后加入纯化水（200mL），用乙酸乙酯萃取三次，每次萃取所用乙酸乙酯的体积为50mL，合并有机相，有机相再用纯化水（50mL）洗涤，饱和食盐水（50mL）洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，柱层析分离得到2.1g中间体1g，收率为79.5%，中间体1g为淡黄色固体，ESI(+)m/z＝529.3[M+H]⁺。

S4、将中间体1g（1.05g，2mmol）和3-硝基-4-甲基-吡咯（500mg，4mmol）溶于二甲基亚砜（DMSO，10mL）中，加入碘化亚铜（38mg，0.2mmol）、8-羟基喹啉（776mg，5.3mmol）和碳酸钾（552mg，4mmol），在氮气保护下，加热至80℃反应6小时，TLC监测反应，反应完毕后降至室温，加入纯化水（200mL），用乙酸乙酯萃取三次，每次萃取所用乙酸乙酯的体积为50mL，合并有机相，有机相再用纯化水（50mL）洗涤，饱和食盐水（50mL）洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，柱层析分离得到0.6g中间体1h，收率为52.3%，中间体1h为黄色固体，ESI(+)m/z＝574.5[M+H]⁺。

S5、将中间体1h（0.57g，1mmol）溶于二氯甲烷和甲醇（体积比为1：1）混合溶液（10mL）中，降温至0℃，加入锌粉（0.65g，10mmol），3滴饱和的氯化铵溶液，滴加完毕后缓慢升至室温，继续搅拌反应2h，TLC监测反应，反应完毕，过滤除掉锌粉，母液减压浓缩，柱层析分离得到0.5g中间体1i，收率为92.1%，中间体1i为黄色固体，ESI(+)m/z＝544.3[M+H]⁺。

S6、将中间体1c（132mg，0.37mmol）和N,N-二异丙基乙胺（DIEA，95.5mg，0.74mmol）溶于N,N-二甲基甲酰胺（DMF，10mL）中，加入2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯（HATU，211mg，0.56mmol），室温下搅拌反应10min，再加入中间体1i（200mg，0.37mmol），保温反应6小时，TLC监测反应，反应完毕后加入纯化水（200mL），用乙酸乙酯萃取三次，每次萃取所用乙酸乙酯的体积为50mL，合并有机相，有机相再用纯化水（50mL）洗涤，饱和食盐水（50mL）洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，柱层析分离得到210mg化合物1，收率为64.2%，ESI(+)m/z＝885.8[M+H]⁺，化合物1为淡黄色固体。

实施例2化合物2的制备

S1、将化合物1a（泊马度胺，2.73g，10.0mmol）和化合物2b（4-溴戊酸，

1.81g，10.0mmol）溶于N,N-二甲基甲酰胺（DMF，10mL）中，加入碳酸钾（2.76g，20.0mmol），升温至50℃反应5小时，TLC监测反应，反应完毕后降至室温，加入纯化水（100mL），有固体析出，过滤，滤饼用纯化水洗涤，干燥滤饼，得到3.0g中间体2c，收率为80.42%。

S2、将中间体2c（138mg，0.37mmol）和N,N-二异丙基乙胺（DIEA，95.5mg，0.74mmol）溶于N,N-二甲基甲酰胺（DMF，10mL）中，加入2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯（HATU，211mg，0.56mmol），室温下搅拌反应10min，再加入中间体1i（200mg，0.37mmol），保温反应6小时，TLC监测反应，反应完毕后加入纯化水（200mL），用乙酸乙酯萃取三次，每次萃取所用乙酸乙酯的体积为50mL，合并有机相，有机相再用纯化水（50mL）洗涤，饱和食盐水（50mL）洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，柱层析分离得到180mg化合物2，收率为54.1%，化合物2为淡黄色固体，ESI(+)m/z＝899.9[M+H]⁺。

实施例3化合物3的制备

S1、将化合物3a（来那度胺，2.59g，10.0mmol）和化合物1b（4-溴丁酸，

1.67g，10.0mmol）溶于N,N-二甲基甲酰胺（DMF，10mL）中，加入碳酸钾（2.76g，20.0mmol），升温至50℃反应5小时，TLC监测反应，反应完毕后降至室温，加入纯化水（100mL），有固体析出，过滤，滤饼用纯化水洗涤，干燥滤饼，得到3.26g中间体3c，收率为94.2%。

S2、将中间体3c（133mg，0.37mmol）和N,N-二异丙基乙胺（DIEA，95.5mg，0.74mmol）溶于N,N-二甲基甲酰胺（DMF，10mL）中，加入2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯（HATU，211mg，0.56mmol），室温下搅拌反应10min，再加入中间体1i（200mg，0.37mmol），保温反应6小时，TLC监测反应，反应完毕后加入纯化水（200mL），用乙酸乙酯萃取三次，每次萃取所用乙酸乙酯的体积为50mL，合并有机相，有机相再用纯化水（50mL）洗涤，饱和食盐水（50mL）洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，柱层析分离得到197mg化合物3，收率为61.2%，化合物3为淡黄色固体，ESI(+)m/z＝871.9[M+H]⁺。

实施例4化合物4的制备

S1、将化合物3a（来那度胺，2.59g，10.0mmol）和化合物2b（4-溴戊酸，

1.81g，10.0mmol）溶于N,N-二甲基甲酰胺（DMF，10mL）中，加入碳酸钾（2.76g，20.0mmol），升温至50℃反应5小时，TLC监测反应，反应完毕后降至室温，加入纯化水（100mL），有固体析出，过滤，滤饼用水洗涤，干燥滤饼，得到3.19g中间体4c，收率为88.85%。

S2、将中间体4c（133mg，0.37mmol）和N,N-二异丙基乙胺（DIEA，95.5mg，0.74mmol）溶于N,N-二甲基甲酰胺（DMF，10mL）中，加入2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯（HATU，211mg，0.56mmol），室温下搅拌反应10min，再加入中间体1i（200mg，0.37mmol），保温反应6小时，TLC监测反应，反应完毕后加入纯化水（200mL），用乙酸乙酯萃取三次，每次萃取所用乙酸乙酯的体积为50mL，合并有机相，有机相再用纯化水（50mL）洗涤，饱和食盐水（50mL）洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，柱层析分离得到200mg化合物4，收率为61.0%，化合物4为淡黄色固体，ESI(+)m/z＝885.9[M+H]⁺。

实施例5化合物5的制备

S1、将化合物5a（5-来那度胺，2.59g，10.0mmol）和化合物1b（4-溴丁酸，

1.67g，10.0mmol）溶于N,N-二甲基甲酰胺（DMF，10mL）中，加入碳酸钾（2.76g，20.0mmol），升温至50℃反应5小时，TLC监测反应，反应完毕后降至室温，加入纯化水（100mL），有固体析出，过滤，滤饼用纯化水洗涤，干燥滤饼，得到2.8 g中间体5c，收率为81.16%。

S2、将中间体5c（132mg，0.37mmol）和N,N-二异丙基乙胺（DIEA，95.5mg，

0.74mmol）溶于N,N-二甲基甲酰胺（DMF，10mL）中，加入2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯（HATU，211mg，0.56mmol），室温下搅拌反应10min，再加入中间体1i（200mg，0.37mmol），保温反应6小时，TLC监测反应，反应完毕后加入纯化水（200mL），用乙酸乙酯萃取三次，每次萃取所用乙酸乙酯的体积为50mL，合并有机相，有机相再用纯化水（50mL）洗涤，饱和食盐水（50mL）洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，柱层析分离得到208mg化合物5，收率为64.0%，化合物5为淡黄色固体，ESI(+)m/z＝871.9[M+H]⁺。

实施例6化合物6的制备

S1、将化合物5a（5-来那度胺，2.59g，10.0mmol）和化合物2b（4-溴戊酸，

1.81g，10.0mmol）溶于N,N-二甲基甲酰胺（DMF，10mL）中，加入碳酸钾（2.76g，20.0mmol），升温至50℃反应5小时，TLC监测反应，反应完毕后降至室温，加入纯化水（100mL），有固体析出，过滤，滤饼用水洗涤，干燥滤饼，得到2.95g中间体6c，收率为82.17%。

S2、将中间体6c（132mg，0.37mmol）和N,N-二异丙基乙胺（DIEA，95.5mg，

0.74mmol）溶于N,N-二甲基甲酰胺（DMF，10mL）中，加入2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯（HATU，211mg，0.56mmol），室温下搅拌反应10min，再加入中间体1i（200mg，0.37mmol），保温反应6小时，TLC监测反应，反应完毕后加入纯化水（200mL），用乙酸乙酯萃取三次，每次萃取所用乙酸乙酯的体积为50mL，合并有机相，有机相再用纯化水（50mL）洗涤，饱和食盐水（50mL）洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，柱层析分离得到181mg化合物6，收率为55.5%，化合物6为淡黄色固体，ESI(+)m/z＝885.9[M+H]⁺。

实施例7化合物7的制备

S1、将中间体1i（200mg，0.37mmol）溶于甲醇（10mL）中，加入多聚甲

醛（11mg，0.37mmol），室温下搅拌10min，再加入氰基硼氢化钠（44.3mg，0.74mmol），室温下搅拌反应3小时，TLC监测反应，反应完毕后加入纯化水（50mL），用乙酸乙酯萃取三次，每次萃取所用乙酸乙酯的体积为20mL，合并有机相，有机相再用纯化水（50mL）洗涤，饱和食盐水（50mL）洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，柱层析分离得到100mg中间体7j，收率为48.5%，中间体7j为淡黄色固体，ESI(+)m/z＝558.58[M+H]⁺。

S2、将中间体5c（66mg，0.18mmol）、N,N-二异丙基乙胺（DIEA，48mg，0.37mmol）溶于N,N-二甲基甲酰胺（DMF，10mL）中，加入HATU（106mg，0.28mmol），室温下搅拌反应10min，再加入中间体7j（100mg，0. 18mmol），保温反应6小时，TLC检测反应，反应完毕后加入纯化水（100mL），用乙酸乙酯萃取三次，每次萃取所用乙酸乙酯的体积为30mL，合并有机相，有机相再用纯化水（50mL）洗涤，饱和食盐水（50mL）洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，柱层析分离得到68mg化合物7，收率为43%化合物7为淡黄色固体，ESI(+)m/z＝885.9[M+H]⁺。

实施例8化合物8的制备

S1、将中间体6c（68mg，0.18mmol）和N,N-二异丙基乙胺（DIEA，48mg，

0.37mmol）溶于N,N-二甲基甲酰胺（DMF，10mL）中，加入2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯（HATU，106mg，0.28mmol），室温下搅拌反应10min，再加入中间体7j（100mg，0.18mmol），保温反应6小时，TLC监测反应，反应完毕后加入纯化水（100mL），用乙酸乙酯萃取三次，每次萃取所用乙酸乙酯的体积为30mL，合并有机相，有机相再用纯化水（50mL）洗涤，饱和食盐水（50mL）洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，柱层析分离得到60mg化合物8，收率为37.3%，化合物8为淡黄色固体，ESI(+)m/z＝899.95[M+H]⁺。

实施例9化合物9的制备

S1、将化合物1b（4-溴丁酸，1.67g，10.0mmol）和N,N-二异丙基乙胺（DIEA，

2.58g，20.0mmol）溶于N,N-二甲基甲酰胺（DMF，20mL）中，加入2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯（HATU，5.70g，15.0mmol），室温下搅拌反应10min，再加入化合物5a（5-来那度胺，2.59g，10.0mmol），保温反应6小时，TLC监测反应，反应完毕后加入纯化水（200mL），有固体析出，过滤，滤饼用水洗涤，干燥滤饼，得到3.50g中间体9c，收率为85.8%。

S2、将中间体1g（1.05g，2mmol）和4-硝基咪唑（452mg，4mmol）溶于于二甲基亚砜（DMSO）中，加入碘化亚铜（38mg，0.2mmol）、8-羟基喹啉（776mg，2mmol）和碳酸钾（552mg，4mmol），在氮气保护下，加热至80℃反应6小时，TLC监测反应，反应完毕后降至室温，加入纯化水（200mL），用乙酸乙酯萃取三次，每次萃取所用乙酸乙酯的体积为50mL，合并有机相，有机相再用纯化水（50mL）洗涤，饱和食盐水（50mL）洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，柱层析分离，得到0.56g中间体9h，收率为49.9%，中间体9h为黄色固体，ESI(+)m/z＝561.5[M+H]⁺。

S3、将中间体9h（0.56g，1mmol）溶于二氯甲烷和甲醇（体积比为1：1）混合溶液（10mL）中，降温至0℃，加入锌粉（0.65g，10mmol），3滴饱和的氯化铵溶液，滴加完毕后缓慢升至室温，继续搅拌反应2h，TLC监测反应，反应完毕，过滤除掉锌粉，母液减压浓缩，柱层析分离得到0.45g中间体9i，收率为84.9%，中间体9i为黄色固体，ESI(+)m/z＝531.5[M+H]⁺。

S4、将中间体9c（154mg，0.38mmol）和N,N-二异丙基乙胺（DIEA，98.0mg，

0.76mmol）溶于N,N-二甲基甲酰胺（DMF，10mL）中，加入2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯（HATU，217mg，0.57mmol），室温下搅拌反应10min，再加入中间体9i（200mg，0.38mmol），保温反应6小时，TLC监测反应，反应完毕后加入纯化水（200mL），用乙酸乙酯萃取三次，每次萃取所用乙酸乙酯的体积为50mL，合并有机相，有机相再用纯化水（50mL）洗涤，饱和食盐水（50mL）洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，柱层析分离得到190mg化合物9，收率为58.3%，化合物9为淡黄色固体，ESI(+)m/z＝858.8[M+H]⁺。

实施例10化合物10的制备

S1、将化合物2b（4-溴戊酸，1.81g，10.0mmol）和N,N-二异丙基乙胺（DIEA，

2.58g，20.0mmol）溶于N,N-二甲基甲酰胺（DMF，20mL）中，加入2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯（HATU，5.70g，15.0mmol），室温下搅拌反应10min，再加入化合物5a（5-来那度胺，2.59g，10.0mmol），保温反应6小时，TLC监测反应，反应完毕后加入纯化水（200mL），有固体析出，过滤，滤饼用水洗涤，干燥滤饼，得到3.6g中间体10c，收率为85.3%。

S2、将中间体10c（160mg，0.38mmol）和N,N-二异丙基乙胺（DIEA，98.0mg，

0.76mmol）溶于N,N-二甲基甲酰胺（DMF，10mL）中，加入2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯（HATU，217mg，0.57mmol），室温下搅拌反应10min，再加入中间体9i（200mg，0.38mmol），保温反应6小时，TLC监测反应，反应完毕后加入纯化水（200mL），用乙酸乙酯萃取三次，每次萃取所用乙酸乙酯的体积为50mL，合并有机相，有机相再用纯化水（50mL）洗涤，饱和食盐水（50mL）洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，柱层析分离得到195mg化合物10，收率为58.9%，化合物10为淡黄色固体，ESI(+)m/z＝872.8[M+H]⁺。

实施例11化合物11的制备

S1、将化合物11b（戊二酸，1.32g，10.0mmol）和N,N-二异丙基乙胺（DIEA，

2.58g，20.0mmol）溶于N,N-二甲基甲酰胺（DMF，20mL）中，加入2-(7-氮杂

苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯（HATU，4.18g，11.0mmol），室

温下搅拌反应10min，再化合物5a（5-来那度胺，2.59g，10.0mmol），保温反

应6小时，TLC监测反应，反应完毕后加入纯化水（200mL），有固体析出，

过滤，滤饼用水洗涤，干燥滤饼，得到2.20g中间体11c，收率为59.0%。

S2、将中间体11c（142mg，0.38mmol）和N,N-二异丙基乙胺（DIEA，98.0mg，

0.76mmol）溶于N,N-二甲基甲酰胺（DMF，10mL）中，加入2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯（HATU，217mg，0.57mmol），室温下搅拌反应10min，再加入中间体9i（200mg，0.38mmol），保温反应6小时，TLC监测反应，反应完毕后加入纯化水（200mL），用乙酸乙酯萃取三次，每次萃取所用乙酸乙酯的体积为50mL，合并有机相，有机相再用纯化水（50mL）洗涤，饱和食盐水（50mL）洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，柱层析分离得到200mg化合物11，收率为60.3%，化合物11为淡黄色固体，ESI(+)m/z＝886.87[M+H]⁺。

实施例12化合物12的制备

S1、将化合物12b（己二酸，1.32g，10.0mmol）和N,N-二异丙基乙胺（DIEA

2.58g，20.0mmol）溶于N,N-二甲基甲酰胺（DMF，20mL）中，加入2-(7-氮杂

苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯（HATU，4.18g，11.0mmol），室温下搅拌反应10min，再加入化合物5a（5-来那度胺，2.59g，10.0mmol），保温反应6小时，TLC监测反应，反应完毕后加入纯化水（200mL），有固体析出，过滤，滤饼用水洗涤，干燥滤饼，得到2.30g中间体12c，收率为60.0%。

S2、将中间体12c（142mg，0.38mmol）和N,N-二异丙基乙胺（DIEA，98.0mg，0.76mmol）溶于DMF（10ml）中，加入2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯（HATU，217mg，0.57mmol），室温下搅拌反应10min，再加入中间体9i（200mg，0.38mmol），保温反应6小时，TLC监测反应，反应完毕后加入纯化水（200mL），用乙酸乙酯萃取三次，每次萃取所用乙酸乙酯的体积为50mL，合并有机相，有机相再用纯化水（50mL）洗涤，饱和食盐水（50mL）洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，柱层析分离得到180mg化合物12，收率为52.6%，化合物12为淡黄色固体，ESI(+)m/z＝900.9[M+H]⁺。

实施例13化合物13的制备

S1、将化合物13a（3-(5-溴-1-氧代-1,3-二氢-2H-异吲哚-2-基)哌啶-2,6-二酮，6.46g，20mmol）与化合物13b（1-BOC-哌嗪，3.72g，20mmol）溶于1,4-二氧六环（50mL）中,室温下加入三二亚苄基丙酮二钯（1.83g，2mmol）、2,2'-双(二苯基膦)-1,1'-联萘（2.49g，4mmol）和碳酸铯（13.03g，40mmol），在氮气保护下，回流搅拌反应4小时，TLC监测反应，反应完毕后减压除去溶剂，加入纯化水（200mL），用乙酸乙酯萃取三次，每次萃取所用乙酸乙酯的体积为50mL，合并有机相，有机相再用纯化水（50mL）洗涤，饱和食盐水（50mL）洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，柱层析分离得到2.20g中间体13c，收率为25.7%，中间体13c为黄色固体，ESI(+)m/z＝429.5[M+H]⁺。

S2、将中间体13c（1.5g，3.5mmol）溶于1,4-二氧六环（5mL）中,室温下滴入4M HCl的1,4-二氧六环溶液（5mL），室温反应3h，TLC监测反应，反应完毕后减压除去溶剂，得到中间体13d盐酸盐，直接进入下一步实验。

S3、将中间体13d盐酸盐（1.0g，2.75mmol）和4-溴甲基哌啶（0.49g，2.75mmol）溶于N,N-二甲基甲酰胺（DMF，10mL）中，加入碳酸钾（1.52g，11mmol），升温至50℃反应5小时，TLC监测反应，反应完毕后降至室温，加入纯化水（100mL），有固体析出，过滤，滤饼用水洗涤，干燥滤饼，得到1.0g中间体13e，收率为85.47%，ESI(+)m/z＝426.5[M+H]⁺。

S4、将中间体1g（1.05g，2mmol）和4-甲基-1H-吡咯-3-羧酸（500mg，4mmol）溶于二甲基亚砜（DMSO）中，加入碘化亚铜（38mg，0.2mmol）、8-羟基喹啉（776mg，2mmol）和碳酸钾（552mg，4mmol）中，在氮气保护下，加热至80℃反应6小时，TLC监测反应，反应完毕后降至室温，加入纯化水（200mL），用乙酸乙酯萃取三次，每次萃取所用乙酸乙酯的体积为50mL，合并有机相，有机相再用纯化水（50mL）洗涤，饱和食盐水（50mL）洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，柱层析分离，得到0.52g中间体13h，收率为45.4%，中间体13h为黄色固体，ESI(+)m/z＝573.5[M+H]⁺。

S5、将中间体13h（217.5mg，0.38mmol）和N,N-二异丙基乙胺（DIEA，

98.0mg，0.76mmol）溶于N,N-二甲基甲酰胺（DMF，10mL）中，加入2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯（HATU，217mg，0.57mmol），室温下搅拌反应10min，再加入中间体13e（161.7mg，0.38mmol），保温反应6小时，TLC监测反应，反应完毕后加入纯化水（200mL），用乙酸乙酯萃取三次，每次萃取所用乙酸乙酯的体积为50mL，合并有机相，有机相再用纯化水（50mL）洗涤，饱和食盐水（50mL）洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，柱层析分离得到150mg化合物13，收率为40.3%，化合物13为淡黄色固体，ESI(+)m/z＝981.1[M+H]⁺。

实施例14化合物14的制备

S1、将化合物14a（3-(4-溴-1-氧代-1,3-二氢-2H-异吲哚-2-基)哌啶-2,6-二酮，6.46g，20mmol）与化合物13b（1-BOC-哌嗪，3.72g，20mmol）溶于1,4-二氧六环（50mL）中,室温下加入三二亚苄基丙酮二钯（1.83g，2mmol）、2,2'-双(二苯基膦)-1,1'-联萘（2.49g，4mmol）和碳酸铯（13.03g，40mmol），在氮气保护下，回流搅拌反应4小时，TLC监测反应，反应完毕后减压除去溶剂，加入纯化水（200mL），用乙酸乙酯萃取三次，每次萃取所用乙酸乙酯的体积为50mL，合并有机相，有机相再用纯化水（50mL）洗涤，饱和食盐水（50mL）洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，柱层析分离得到2.40g中间体14c，收率为28.0%，中间体14c为黄色固体，ESI(+)m/z＝429.5[M+H]⁺。

S2、将中间体14c（1.5g，3.5mmol）溶于1,4-二氧六环（5mL）中,室温下滴入4M HCl1,4-二氧六环溶液，室温反应3h，TLC监测反应，反应完毕后减压除去溶剂，得到中间体14d盐酸盐,直接进入下一步实验。

S3、将中间体14d盐酸盐（1.0g，2.75mmol）和4-溴甲基哌啶（0.49g，2.75mmol）溶于N,N-二甲基甲酰胺（DMF，10mL）中，加入碳酸钾（1.52g，11mmol），升温至50℃反应5小时，TLC监测反应，反应完毕后降至室温，加入纯化水（100mL），有固体析出，过滤，滤饼用水洗涤，干燥滤饼，得到1.1g中间体14e，收率为94.0%，ESI(+)m/z＝426.5[M+H]⁺。

S4、将中间体13h（217.5mg，0.38mmol）和N,N-二异丙基乙胺（DIEA，

98.0mg，0.76mmol）溶于N,N-二甲基甲酰胺（DMF，10mL）中，加入2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯（HATU，217mg，0.57mmol），室温下搅拌反应10min，再加入中间体14e（161.7mg，0.38mmol），保温反应6小时，TLC监测反应，反应完毕后加入纯化水（200mL），用乙酸乙酯萃取三次，每次萃取所用乙酸乙酯的体积为50mL，合并有机相，有机相再用纯化水（50mL）洗涤，饱和食盐水（50mL）洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，柱层析分离得到142mg化合物14，收率为38.2%，化合物14为淡黄色固体，ESI(+)m/z＝981.1[M+H]⁺。

实施例15化合物15的制备

S1、将中间体9i（200mg，0.38mmol）和N,N-二异丙基乙胺（DIEA，98.0mg，0.76mmol）溶于四氢呋喃（THF，10mL）中，加入N,N'-羰基二咪唑（CDI，92.3mg，0.57mmol），室温下搅拌反应30min，再加入中间体13e（242.5mg，0.57mmol），保温反应2小时，TLC监测反应，反应完毕后加入纯化水（200mL），用乙酸乙酯萃取三次，每次萃取所用乙酸乙酯的体积为50mL，合并有机相，有机相再用纯化水（50mL）洗涤，饱和食盐水（50mL）洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，柱层析分离得到210mg化合物15，收率为56.2%，化合物15为淡黄色固体，ESI(+)m/z＝983.04[M+H]⁺。

实施例16化合物16的制备

S1、将中间体9i（200mg，0.38mmol）和N,N-二异丙基乙胺（DIEA，98.0mg，

0.76mmol）溶于四氢呋喃（THF，10mL）中，加入N,N'-羰基二咪唑（CDI，92.3mg，0.57mmol），室温下搅拌反应30min，再加入中间体14e（242.5mg，0.57mmol），保温反应2小时，TLC监测反应，反应完毕后加入纯化水（200mL），用乙酸乙酯萃取三次，每次萃取所用乙酸乙酯的体积为50mL，合并有机相，有机相再用纯化水（50mL）洗涤，饱和食盐水（50mL）洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，柱层析分离得到202mg化合物16，收率为54.1%，化合物16为淡黄色固体，ESI(+)m/z＝983.04[M+H]⁺。

实施例17肿瘤细胞增殖抑制活性测试

本实施例通过检测实施例1~16制备的化合物1~16在1个肿瘤细胞系小鼠骨髓祖细胞（C57BL/6）中对体外细胞增殖活性的影响而研究化合物抑制细胞增殖的作用，尼洛替尼为内控化合物。

具体方法为：（1）制备1000x cpd抗凝剂的二甲基亚砜（DMSO）溶液，用培养基将待测化合物稀释至最终浓度的20倍，在98µL生长培养基中加入2µL 1000x cpd抗凝剂溶液。（2）第一天，旋转贴壁细胞，在培养基中重悬，用细胞计数器计数，在培养基中稀释细胞悬液至所需密度，100µL的细胞悬液取96孔板。（3）第二天，96孔板上取培养基上清50µL，再向96孔板中加入45µL培养基，根据板图在96孔板上加入5µL20x cpd抗凝剂溶液，每口井的最终DMSO浓度为0.1%，37℃，5% CO₂条件下，培育24h，加入不同浓度化合物，继续培养48h。（4）第五天，测量前将测板平衡至室温，每孔加入50µL CellTiter-Glo®试剂，将内容物在轨道摇床上混合2分钟，诱导细胞裂解，室温孵育10分钟以稳定发光信号，记录发光。计算以上16个化合物和尼洛替尼对BCR-ABL诱导增殖的IC₅₀值，所得结果见表1。

表1

从表1中可以看出，化合物1~16对BCR-ABL诱导的小鼠骨髓祖细胞增殖均有一定的抑制作用，其中，化合物5、化合物13和化合物15的IC₅₀值较小。

实施例18靶向降解BCR-ABL激酶的活性测定

本实施例评价实施例1~16制备的化合物1~16和尼洛替尼对小鼠骨髓祖细胞细胞内的BCR-ABL激酶含量的影响，同时分析内参GAPDH的含量。

具体方法为:（1）将化合物干预过的各祖细胞收集至1.5mL EP管中，培养基去除干净，加入一定体积（根据细胞量确定，每2e6细胞加入约80uL）的Lysis Buffer (RIPA：蛋白酶/磷酸酶抑制剂=100：1)。（2）加入Lysis Buffer 后将EP管迅速置于冰上，使用涡旋仪涡旋EP管，使细胞充分裂解。注意涡旋时间不要过久，迅速将样品管置于冰上裂解，每间隔10min震荡一次，共三次。（3）裂解时间结束后将EP管放入预冷至4℃离心机中12000 rpm离心10 min。（4）离心后，将上清转移至新的1.5mL EP管中，并做好标记。（5）使用BCA蛋白浓度测定试剂盒，根据试剂盒说明书，对组织裂解上清进行蛋白定量。（6）完成蛋白浓度测定后，以浓度最低的裂解上清为基准，其余的裂解上清均按照BCA标准曲线计算后使用LysisBuffer稀释至该浓度。（7）向完成稀释的裂解上清中加入相应体积的5X loading Buffer，95℃温金属浴加热10 min，随后放置于冰上冷却，-20度冰箱短期保存样品。（8）制胶：洗净制胶用的玻璃板，将两块玻璃板底部对齐后放入支架，夹子固定；按照12%或15%分离胶配方先配好分离胶，混匀后加入玻璃板中，加入约3/4玻璃板停止，用75%乙醇压胶；30min后，分离胶凝固，倒出75%乙醇，用滤纸吸干玻璃板上残留的乙醇溶液，配置5%浓缩胶，混匀后加入到玻璃板中，再插上加样梳，待30min后，即制成胶。（9）蛋白上样和电泳：将胶板放在电泳槽中固定，用1x电泳液内槽加满，外槽超过金属丝；拔下加样梳，加入5uL蛋白样品和proteinladder；接通电源，用恒压80V电泳30min后，恒压120V继续电泳1h左右，直至溴酚蓝指示带到达底部，停止电泳。（10）蛋白电转：将PVDF膜在甲醇中浸泡30s醒膜，后与4张滤纸，2块海绵一起放入转膜盒中；转膜盒中倒入提前配置好的1x电转液；将凝胶取出，切割成需要的大小，依次按照海绵，滤纸，凝胶，PVDF膜，滤纸，海绵的顺序在转膜夹中放好，去除气泡，将膜位于阳极面，凝胶位于阴极面（黑胶白膜），插入电泳槽中，倒入转膜缓冲液，放入冰袋，将电泳槽周围也放置冰袋降温；恒压100V电泳转移1h30min。（11）封闭和孵育一抗：电转完成后，将PVDF膜放入5%的脱脂牛奶封闭液中，置于脱色摇床上缓慢摇动，室温封闭1h；将封闭好的PVDF膜，在TBST中缓慢洗涤3次，每次10min；洗涤结束后，将PVDF膜放入一抗的抗体盒中，一抗按照1：1000的比例，用一抗稀释液进行稀释，抗体盒放置于4℃温和摇床孵育（10-16h）。（12）孵育二抗：将过夜孵育的PVDF膜的抗体盒从冰箱取出，吸走一抗孵育液；将PVDF膜在TBST中缓慢洗涤3次，每次10min；将洗涤之后的PVDF膜放入相应种属的二抗（1：3000）稀释液（含5%脱脂牛奶）中，室温条件下温和摇床孵育1h；二抗孵育结束后，取出PVDF膜，在TBST中缓慢洗涤3次，每次10min；将ECL试剂盒中等体积的A液和B液混合，均匀加在膜的表面，放入Tanon 5200发光成像仪（提前5 min开启预冷）中曝光显影，拍照保存图片。用Image J软件分析每个条带的灰度值，计算蛋白降解50％时的抑制剂浓度DC₅₀，得到的结果如表2所示。

表2

由表2可知，化合物13靶向降解BCR-ABL激酶的活性最强，化合物13对肿瘤细胞增殖的抑制活性和尼洛替尼相近，同时实施例1~16制备的化合物1~16在细胞中均能够有效降解过度表达的BCR-ABL激酶，验证了本申请提供的化合物1~16（新型BCR-ABL蛋白水解靶向嵌合分子（PROTACs））的蛋白降解能力，降解后的PROTACs可以循环继续降解其他的蛋白激酶，具有临床药物剂量需求小，毒副作用小的优势。

以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种具有式Ⅰ结构的化合物或其药学上可接受的盐：

；

式中，环A代表五元环烷基、五元杂环基或五元杂芳基，R₁代表氢、不取代的C_1-4烷基、取代的C_1-4烷基、不取代的C_1-4烷氧基、取代的C_1-4烷氧基、不取代的C_1-4烷硫基、取代的C_1-4烷硫基、不取代的C_1-4烷胺基或取代的C_1-4烷胺基；

L代表

，式中，Y代表CH₂、SiH₂、NH、PH、O、S、取代的CH₂、取代的SiH₂、取代的NH或取代的PH，A₁和A₂分别独立地代表不取代的C_1-5烷基、取代的C_1-5烷基、不取代的C_1-5烷氧基、取代的C_1-5烷氧基、不取代的C_1-5烷硫基、取代的C_1-5烷硫基、不取代的C_1-5烷胺基、取代的C_1-5烷胺基、苯基、五元杂芳基、六元杂芳基、C_3-7环烷基、C_3-7杂环基、

、

、

、

、

或

；

D代表

、

、

或

，式中，Z代表氢、CH₂、SiH₂、NH、PH、O、S、

、取代的CH₂、取代的SiH₂、取代的NH或取代的PH，R₂、R₃、R₄和R₅分别独立地代表氢、不取代的C_1-4烷基、取代的C_1-4烷基、不取代的C_1-4烷氧基、取代的C_1-4烷氧基、不取代的C_1-4烷硫基、取代的C_1-4烷硫基、不取代的C_1-4烷胺基或取代的C_1-4烷胺基。

2.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于，所述环A选自下述结构之一：

；

所述R₁代表氢或甲基；

所述L选自下述结构之一：

；

所述D选自下述结构之一：

。

3.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于，所述化合物选自下述的化合物：

。

4.一种如权利要求1-3任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1、

化合物Ⅱ与化合物Ⅲ在第一催化剂作用下于第一碱存在的第一反应溶剂中进行反应，得到中间体Ⅳ；

S2、

所述中间体Ⅳ与3-氨基-5-溴三氟甲苯在第一缩合剂作用下于第二碱存在的第二反应溶剂中进行反应，得到中间体Ⅴ；

S3、所述中间体Ⅴ与具有所述环A结构的化合物在碘化亚铜和8-羟基喹啉作用下于第三碱存在的第三反应溶剂中进行偶联反应，得到所述中间体Ⅴ中除溴原子之外的其它部分结构与所述环A的连接物；

S4、所述中间体Ⅴ中除溴原子之外的其它部分结构与所述环A的连接物参与反应，得到具有式Ⅰ结构的化合物或其药学上可接受的盐。

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，在步骤S1中：

所述第一催化剂为钯催化剂，所述钯催化剂为三二亚苄基丙酮二钯、醋酸钯、[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯、四三苯基膦钯中的至少一种；

所述第一碱为醋酸钠、醋酸钾、碳酸钠、碳酸钾、磷酸钾、碳酸铯、叔丁醇钠、叔丁醇钾中的至少一种；

所述第一反应溶剂为N,N-二甲基甲酰胺、二氧六环、N-甲基吡咯烷酮中的至少一种；

反应温度为50℃~120℃。

6.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，在步骤S2中：

所述第一缩合剂为2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯、O-苯并三氮唑-四甲基脲六氟磷酸酯、羰基二咪唑中的至少一种；

所述第二碱为三乙胺、二异丙基乙胺中的至少一种；

所述第二反应溶剂为二氯甲烷、四氢呋喃、N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺中的至少一种。

7.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，在步骤S3中：

所述第三碱为醋酸钠、醋酸钾、碳酸钠、碳酸钾、磷酸钾、碳酸铯、叔丁醇钠、叔丁醇钾中的至少一种；

所述第三反应溶剂为二甲基亚砜、二氧六环、N-甲基吡咯烷酮、N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺中的至少一种。

8.一种药物组合物，其包含治疗有效量的选自如权利要求1-3任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，并包含药学上可接受的载体。

9.一种靶向泛素化降解BCR-ABL激酶的制剂，其包含治疗有效量的选自如权利要求1-3任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，并包含药学上可接受的载体。

10.根据权利要求1-3任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于预防和/或治疗肿瘤药物中的用途。