CN113925886B

CN113925886B - 四联活菌组合物的新应用

Info

Publication number: CN113925886B
Application number: CN202111155418.6A
Authority: CN
Inventors: 闫天文; 王志明; 尚云龙; 王娇红; 汪倩; 刘兵; 王宏英
Original assignee: Hangzhou Grand Biologic Pharmaceutical Inc
Current assignee: Hangzhou Grand Biologic Pharmaceutical Inc
Priority date: 2021-09-28
Filing date: 2021-09-28
Publication date: 2024-02-02
Anticipated expiration: 2041-09-28
Also published as: CN113925886A

Abstract

四联活菌组合物的新应用，属于生物医药技术领域。为了获得对过敏反应具有预防或治疗效果的药物或保健食品，本发明提供了四联活菌组合物的一种新用途，所述四联活菌组合物包含双歧杆菌，乳杆菌，球菌和芽孢杆菌。经实验证实，本发明所述的四联活菌组合物能有效减轻过敏的症状，改变菌群结构，对于过敏反应具有很好的预防及治疗作用，可用于制备预防或治疗过敏反应的药物或保健食品或食品。

Description

四联活菌组合物的新应用

技术领域

本发明涉及四联活菌组合物的新应用，属于生物医药技术领域。

技术背景

目前，过敏性疾病已成为一种普遍的公共健康问题。2005年世界变态反应组织(WAO)对30个国家过敏性疾病的流行病学调查显示：这些国家的总人口中，22％的人患有过敏性疾病，如过敏性鼻炎、哮喘、结膜炎、湿疹、食物过敏、药物过敏等。而且，过敏性疾病的发生率正逐年增加，造成了巨大的医疗负担。如何有效预防及治疗过敏性疾病已成为当下研究热点。

过敏是指机体对环境中原本无害的物质产生的不适当的免疫反应，也称I型变态反应，由此引发的一组疾病叫过敏性疾病，属于全身性疾病，有以下特点：儿童多发、反复发作、多种过敏原、多器官受累。常见疾病类型包括：过敏性皮炎、过敏性鼻炎、过敏性哮喘等。世界变态反应组织对30个国家过敏性疾病的流行病学调查显示：这些国家的总人口中，30％～40％的人患有过敏性疾病，如过敏性鼻炎、哮喘、结膜炎、湿疹、食物过敏、药物过敏等。

乳杆菌属的特定菌株已被发现能够定殖于肠道粘膜，并协助维持人类和动物的健康，一般使用浓度在10亿以上的活菌含量水平。近年来，国内外研制出多种益生菌活菌制剂，其基本指导思想就是用人或动物的正常生理菌群的菌株，经过筛选和培养，通过各种途径，制成各种剂型的活菌制剂，然后再以投入方式使其回到原来环境，从而发挥其自然的生理作用。我国对益生菌用于保健食品和药品的研究起步较晚，20世纪90年代才开始将双歧杆菌用于各种保健食品中。目前市场上出现的益生菌保健产品剂型大致分为三类，即胶囊剂，如美常安、聚克、整肠生、贝飞达、丽珠肠乐等；颗粒剂和散剂，如妈咪爱、培菲康、常乐康等；片剂，如促菌生、金双歧、益生菌组合物、乳酸菌素等，这些益生菌产品主要用于肠道相关的消化系统疾病。

免疫系统是人体天然的屏障，当失去了它的保护，或保护作用降低时，人体感染病毒、细菌、真菌等病原体的几率大大增加，导致各种疾病发生。研究表明，绝大多数疾病的发病率和发病程度都与患病人群的免疫水平有紧密关联。

中国发明专利CN 01108353.0公开了一种“双歧杆菌四联活菌片”，由婴儿双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、粪肠球菌和蜡样芽胞杆菌四种菌种组成。该专利中记载：该“双歧杆菌四联活菌片”可以补充人体肠道的正常生理细菌，恢复体内的微生态平衡。临床研究表明，该“双歧杆菌四联活菌片”对成人急性腹泻、慢性腹泻、成人便秘、小儿急性腹泻等有良好的疗效。但是该专利及相关文献均未提及该组合物对于剖腹产婴儿相关的食物过敏症状具有缓解或治疗作用。因此，将针对包含双歧杆菌、乳杆菌、球菌或芽孢杆菌的四联或四联以上的益生菌组合物由消化系统领域扩展到新的治疗领域具有重要临床应用意义。

发明内容

发明人发现，采用特异性免疫疗法是治疗过敏性疾病的最佳手段，目前尚未研制出治疗对应过敏性疾病的疫苗，最主要的治疗方式是采用药物治疗来控制过敏症状(即对症用药)；但是，药物治疗并不能改变过敏性疾病的进程，因而也就不能从根本上达到治愈效果。剖腹产出生的孩子更容易发生食物过敏，剖腹产出生的孩子身上的细菌菌群与阴道分娩的孩子不同，这些菌群可能会影响食物过敏的风险。并且剖腹产出生的儿童比正常分娩出生的儿童患食物过敏的风险高21％。婴儿食物过敏可能会出现皮疹，并且伴有瘙痒，还会出现嗓子痒，嘴麻，严重的可能会引起呼吸困难，气喘，还会引起过敏性休克，甚至会危及生命。

为了解决上述问题，本发明发明了对于过敏反应具有预防或治疗效果的药物，具体技术方案如下：

本发明提供了一种用于预防或治疗过敏反应的四联活菌组合物，所述四联活菌组合物包含双歧杆菌，乳杆菌，球菌和芽孢杆菌。

进一步地限定，所述四联活菌组合物中活性益生菌的含量至少为1×10⁶cfu/g；所述四联活菌组合物中双歧杆菌的活菌数至少为1×10⁶cfu/g；乳杆菌的活菌数至少为1×10⁶cfu/g；球菌的活菌数至少为1×10⁶cfu/g；芽孢杆菌的活菌数至少为1×10⁵cfu/g。

优选地，所述双歧杆菌选自青春双歧杆菌、动物双歧杆菌、乳双歧杆菌、两歧双歧杆菌、短双歧杆菌、婴儿双歧杆菌和长双歧杆中的一种或多种；

所述乳杆菌选自嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、卷曲乳杆菌、德氏乳杆菌保加利亚亚种、德氏乳杆菌乳亚种、发酵乳杆菌、格氏乳杆菌、瑞士乳杆菌、约氏乳杆菌、副干酪乳杆菌、植物乳杆菌、罗伊氏乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、唾液乳杆菌、清酒乳杆菌和弯曲乳杆菌中的一种或多种。

所述球菌选自粪肠球菌、嗜热链球菌、乳酸乳球菌乳酸亚种、乳酸乳球菌乳脂亚种、乳酸乳球菌双乙酰亚种、乳酸片球菌、戊糖片球菌、小牛葡萄球菌、木糖葡萄球菌和肉葡萄球菌中的一种或多种；

所述芽孢杆菌选自蜡样芽孢杆菌或凝结芽孢杆菌。

优选地，所述组合物由婴儿双歧杆菌，嗜酸乳杆菌，粪肠球菌和蜡样芽孢杆菌组成；所述婴儿双歧杆菌的菌种保藏号为CGMCC No.0460.1；所述嗜酸乳杆菌的菌种保藏号为CGMCC No.0460.2；所述粪肠球菌的菌种保藏号为CGMCC No.0460.3；所述蜡样芽孢杆菌的菌种保藏号为CGMCC No.0460.4。

进一步地限定，所述过敏反应由Thl/Th2失衡导致。

进一步地限定，与Thl/Th2失衡相关的过敏反应包括过敏性鼻炎、哮喘、结膜炎、湿疹、食物过敏、药物过敏。

本发明还提供了一种用于预防或治疗过敏反应的产品，所述产品中含有如上所述的四联活菌组合物。

进一步地限定，所述产品包括药品、保健食品和食品。

本发明还提供了如上所述四联活菌组合物在制备用于预防或治疗过敏反应的产品中的应用；所述产品包括药品、保健食品和食品。

进一步地限定，所述四联活菌组合物的剂型为片剂、胶囊剂、颗粒剂、散剂、液体制剂中的任意一种。

本发明的有益效果：

本发明所述的四联活菌组合物能有效减轻食物过敏的症状，改变菌群结构，对于食物过敏具有一定的预防作用，具体效果如下：

1、临床症状指标：剖腹产小鼠使用四联活菌组合物干预组能显著降低粪便评分、改善体温变化。

2、血清学指标：剖腹产小鼠使用四联活菌组合物干预组能显著降低肠组织和血清中的组胺水平；显著降低IgG和IgE含量。

3、免疫机制(TH2介导相关因子)：剖腹产小鼠使用四联活菌组合物干预组能显著降低炎症因子IL4、IL10表达量及组织含量。

4、屏障蛋白：剖腹产小鼠使用四联活菌组合物干预组能显著提高Zo-1，Occludin，claudin-1屏障蛋白水平。

5、肠道菌群：剖腹产小鼠使用四联活菌组合物干预组能显著增加肠道菌群α多样性β多样性。

附图说明：

图1为不同时间点剖腹产及剖腹产四联活菌组合物干预组IgE和IgG抗体水平变化结果图；其中，CS为剖腹产；CSP为剖腹产四联活菌组合物干预组；OVA为卵清蛋白；图1中的A为给药第28天时两个不同试验组IgE的变化情况；图1中的B为给药第49天两个不同试验组IgG的变化情况；

图2为肠组织和血清中的组胺水平变化结果图；其中，CS为剖腹产；CSP为剖腹产四联活菌组合物干预组；图2中的A表示肠组织中的组胺水平；图2中的A表示血清中的组胺水平；

图3为不同时间点各组的体温及粪便评分结果图，其中，CS为剖腹产；CSP为剖腹产四联活菌组合物干预组；图3中的A表示体温评分；图3中的B表示粪便评分；

图4为肠组织中的屏障蛋白水平变化结果图；其中，CS为剖腹产；CSP为剖腹产四联活菌组合物干预组；

图5为各组OVA造模大鼠肠组织中的IL4、IL10含量和mRNA水平IL4、IL10相对表达量以及组织含量结果图；其中，CS为剖腹产；CSP为剖腹产四联活菌组合物干预组；图5中的A表示肠组织中的IL4、IL10含量；图5中的B表示mRNA水平IL4、IL10相对表达量以及组织含量；

图6为各组灌菌1个月后大鼠肠道菌群α多样性及β多样性分析结果图；

图7为灌胃四联活菌组合物中剂21天后两组菌群差异结果图；其中，CS为剖腹产；CSP为剖腹产四联活菌组合物干预组；

图8为灌胃四联活菌组合物及OVA造模后两组群落热点图；其中，CS为剖腹产；CSP为剖腹产四联活菌组合物干预组；

具体实施方式

实施例1：四联活菌组合物

菌种保藏信息：

婴儿双歧杆菌的菌种保藏号为CGMCC No.0460.1；所述嗜酸乳杆菌的菌种保藏号为CGMCC No.0460.2；所述粪肠球菌的菌种保藏号为CGMCC No.0460.3；所述蜡样芽孢杆菌的菌种保藏号为CGMCC No.0460.4。

①益生菌的冻干：将婴儿双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、粪肠球菌和蜡样芽孢杆菌进行二次活化后，将益生菌粉制成冻干菌粉。

②益生菌组合物悬液制备：将婴儿双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、粪肠球菌、蜡样芽孢杆菌菌粉按计算量混合，制备得到组合物，其中，双歧杆菌的活菌数至少为1×10⁶cfu/g；乳杆菌的活菌数至少为1×10⁶cfu/g；粪肠球菌的活菌数至少为1×10⁶cfu/g；并且蜡样芽孢杆菌的活菌数至少为1×10⁵cfu/g。

实施例2：实施例1所述四联活菌组合物的应用

(一)动物实验

1、实验动物

妊娠Sprague Dawley大鼠购自北京SPF生物技术有限公司。所有动物都保持在SPF环境(22±2℃，12小时明暗循环)中，可随意获取食物和水。怀孕第20天，行子宫切除术并及剖腹产(CS)。幼崽被轻轻地放在无菌纱布上，下面有一个加热垫。用无菌棉签按摩每只幼崽直到出现自主呼吸，然后剪断脐带。幼崽在30分钟内被转移到同一天分娩的代养母鼠笼中。此外，自然出生的幼崽由他们的生母抚养，这些窝作为顺产(VD)对照。仔鼠在出生后第21天断奶，每笼饲养三只大鼠。然后给它们编号，笼外的标签上也有相应的记录。每组仔鼠均来自两窝，每窝之间无差异。

2、实验分组

分娩后第21天，健康雄性VD和CS大鼠分别随机分为致敏组和对照组。

致敏组：

致敏组灌胃1mgOVA(Sigma-Aldrich,St.Louis,MO,USA)溶于1ml磷酸盐缓冲盐水(PBS)中，每天灌胃，连续49天，而对照组为1ml PBS。如果在致敏后出现厌食、体重迅速减轻或精神和行为倦怠，则被排除在外，并且将进行动物安乐死。在第70天，所有大鼠用溶于1mlPBS中的100mg OVA灌胃激发。通过利用数字温度计测量刺激后25分钟大鼠直肠温度的变化来评估过敏反应。为了评估腹泻的严重程度，粪便状况记录如下：固体(0分)、索状(1分)、浆状(2分)和水样(3分)。然后从尾静脉收集血样。攻击后8小时处死所有大鼠，并收集回肠组织样本用于进一步研究。各组大鼠总数如下：VD_PBS(n＝9)、VD_OVA(n＝8)、CS_PBS(n＝8)、CS_OVA(n＝8)。

四联活菌干预组：

CS分娩的幼崽在接受PBS(CSP组，CSP＝益生菌干预剖宫产)或PBS(CS组，CS＝剖宫产后代)中混合四联活菌组合物每天灌胃给药21天。低剂量组合物中婴儿双歧杆菌的活菌数为1.86×10⁴CFU/mL(1-10×10⁴CFU/mL)，嗜酸乳杆菌的活菌数为不低于1.86×10⁴CFU/mL(1-10×10⁴CFU/mL)，粪肠球菌的活菌数为不低于1.86×10⁴CFU/mL(1-10×10⁴CFU/mL)，蜡样芽孢杆菌的活菌数为不低于1.86×10³CFU/mL(1-10×10³CFU/mL)；中剂量组合物中婴儿双歧杆菌的活菌数为1.86×10⁶CFU/mL(1-10×10⁶CFU/mL)，嗜酸乳杆菌的活菌数为1.86×10⁶CFU/mL(1-10×10⁶CFU/mL)，粪肠球菌的活菌数为1.86×10⁵CFU/mL(1-10×10⁵CFU/mL)，蜡样芽孢杆菌的活菌数为1.86×10⁴CFU/mL(1-10×10⁴CFU/mL)；高剂量组合物中婴儿双歧杆菌的活菌数为不低于1.86×10⁸CFU/mL(1-10×10⁸CFU/mL)，嗜酸乳杆菌的活菌数为不低于1.86×10⁸CFU/mL(1-10×10⁸CFU/mL)，粪肠球菌的活菌数为不低于1.86×10⁷CFU/mL(1-10×10⁷CFU/mL)，蜡样芽孢杆菌的活菌数为不低于1.86×10⁶CFU/mL(1-10×10⁶CFU/mL)。(动物剂量按照临床用药等效剂量进行换算)

在第21天，雄性CS和CSP大鼠接受后来的OVA干预。每组大鼠总数：CS(n＝7)、CSP(n＝7)。

3、检测项目及方法

(1)血清OVA特异性IgE和IgG分析

从大鼠的尾静脉收集血液。离心后，收集血清并储存在-80℃直至分析。OVA特异性IgE和IgG的水平通过酶联免疫吸附测定(ELISA)进行测量。简而言之，NuncTMMaxiSorpTMELISA板(BioLegend，圣地亚哥，美国)用10mg/ml OVA包被缓冲液(BioLegend，圣地亚哥，美国)包被过夜，用于OVA特异性IgE检测，1mg/ml用于OVA特异性检测IgG检测。将血清样品(在AssayDiluentB,BioLegend中以1/10稀释)加入板中，并在4℃下孵育过夜。生物素偶联的小鼠抗大鼠IgE二抗(1:2,000；ThermoFisherScientific，美国)或生物素偶联的小鼠抗大鼠IgG(H+L)二抗(1：100,000；ThermoFisherScientific，美国)添加到板里。此后，加入以1:2,000稀释的HRP抗生物素蛋白(BioLegend,SanDiego,USA)。板在室温下用四甲基联苯胺(TMB)显色15分钟，通过添加停止溶液(BioLegend)停止，并在450和570nm处读数。从观察到的OD450和OD570之差揭示抗体水平。

(2)通过ELISA测量组胺和细胞因子

通过低温超声提取回肠组织的总蛋白质并通过BCA测定(BCA蛋白质测定试剂盒，ABPBiosciences，USA)定量。组织和血清中的组胺通过大鼠组胺ELISA试剂盒(AnoricBiotechnology，有限公司，天津，中国)。通过除以每个样品的总蛋白质浓度(ng/g蛋白质)来标准化组织中的组胺含量。IL4和IL10使用大鼠IL4高灵敏度ELISA试剂盒(MultiSciencesBiotech,CO.,Ltd.)和大鼠IL-10高灵敏度ELISA试剂盒(MultiSciencesBiotech,CO.,Ltd.)检测，并以相同的方式归一化(ng/g蛋白质)。BCA和ELISA检测均根据制造商的说明进行。

(3)WesternBlot

使用RIPALysisBuffer(SolarbioLifeScience，Beijing，China)获得组织的总蛋白并进行定量。此后，蛋白质变性并通过10％十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分离并转移到聚偏二氟乙烯(PVDF)膜上。膜在4℃下用一抗处理过夜，然后与二抗在22℃下孵育60分钟。使用改进的化学发光底物(Millipore，USA)检测条带。抗体：抗β-actin(1:10,000；Proteintech，中国湖北)、ZO-1多克隆抗体(1:500；ThermoFisherScientific，美国，61-7300)、Occludin多克隆抗体(1:200；ThermoFisherScientific，美国，71-1500)、Claudin-1多克隆抗体(1:250；ThermoFisherScientific，美国，51-9000)、山羊抗小鼠IgG(1:1,000；中国北京中山金桥)和山羊抗兔IgG(1:1,000；中国北京中杉金桥)。

(4)免疫组织化学(IHC)染色和苏木精-伊红(HE)染色

将大鼠的回肠组织在4％多聚甲醛中于4℃下固定过夜，然后包埋在石蜡中。固定和包埋的组织被切成4毫米的载玻片。使用Zo-1多克隆抗体(1:2,000)、Occludin多克隆抗体(1:1,000)和Claudin-1多克隆抗体(1:1,000)进行IHC染色。石蜡包埋的组织切片进行HE染色以检测炎症的严重程度。

(5)RNA提取和定量实时PCR

使用TRIzol试剂(Invitrogen，CA，USA)从回肠中部提取总RNA。然后使用ReverTraAceqPCRRTKit(Toyobo，Osaka，Japan)制备cDNA。在AppliedBiosystemsStepOne实时PCR系统(Thermo，Waltham，MA，USA)上，所有反应均一式三份进行。β-actin用作内源对照。用于实时PCR分析的引物序列如下：β-actin正向引物序列如SEQ ID No.1所示(5'-CTCTGTGTGGATTGGTGGCT-3')，反向引物序列如SEQ ID No.2所示(5'-CGCAGCTCAGTAACAGTCCG-3')，IL-4正向引物序列如SEQ ID No.3所示(5'-TGTAGAGGTGTCAGCGGTCT-3')，反向引物序列如SEQ ID No.4所示，(5'-TCAGTGTTGTGAGCGTGGAC-3')，IL-10正向引物序列如SEQ ID No.5所示(5'-TAACTGCACCCACTTCCCAG-3')，反向引物序列如SEQ ID No.6所示，(5'-TGGCAACCCAAGTAACCCTTAAA-3')。

(6)16S核糖体RNA基因测序和微生物群分析

在第7天，VD和CS组中的8只大鼠被处死以获得肠内容物。在第21天和第70天，收集粪便。大鼠粪便样品在液氮中快速冷冻并保存在-80℃。Fast DNA SPIN试剂盒(MPBiomedicals,Irvine,CA,USA)用于根据试剂盒方案从粪便样品中提取微生物DNA。使用引物通过PCR扩增细菌16SrRNA基因的V3-V4区域。随后通过凝胶提取(AxyPrepDNA凝胶提取试剂盒，Axygen，UnionCity，CA，USA)纯化扩增子，并通过QuantiFluorTM-ST(Promega)进行定量。然后由Majorbio(中国上海)在IlluminaMiSeq平台上对纯化的DNA扩增子进行测序。使用Ace和Chao指数以及alpha多样性的Shannon指数评估每个样品的微生物丰富度。操作分类单元(OTU)级别上的PCoA分析是基于binary-jaccard距离执行的。使用ANOSIM和999次排列测试评估VD和CS大鼠菌群的结构差异。使用双侧student-t检验评估属的相对丰度以在组间进行比较。通过从门到属水平的LEfSe分析确定每组中具有显著区别性的分类群，其中Kruskal-Wallis秩和检验的值设置为0.05。皮尔曼相关系数，并显示为相关热图(斯皮尔曼系数的相关边缘>0.75/<-0.75)。

(7)数据分析

使用GraphPadPrism5.0c(GraphPadSoftware,LaJolla,CA,USA)分析结果。使用单向方差分析评估多组之间的差异。t检验或单向方差分析用于比较两组数据。数据在柱状图中表示为平均值±SEM。差异在P<0.05具有显著性。Kruskal-Wallis非参数检验用于评估各组之间的不同分类群。两个参数之间的相关性通过Spearman等级相关性进行评估。

4、实验结果

(1)四联活菌对IgE和IgG抗体水平的影响

OVA-sIgE、OVA-sIgG是反映食物过敏最客观的指标之一，图1展示的是使用四联活菌组合物不同时间点剖腹产及剖腹产四联活菌组合物干预组IgE和IgG抗体水平，从图中可以看出四联活菌组合物干预可以显著降低IgE水平，并随着给药时间延长IgE含量进一步降低；IgG的变化不大。四联活菌高剂量组和低剂量组干预对IgE降低水平没有中剂量组对IgE降低水平明显。

(2)四联活菌对肠组织和血清中的组胺水平的影响

组胺是衡量过敏反应严重程度的重要指标，通过图2展示的试验结果可知，剖腹产四联活菌组合物干预组肠组织和血清中的组胺水平与剖腹产组相比有显著差异，四联活菌组合物干预可以显著降低组胺水平。四联活菌高剂量组和低剂量组干预对组胺降低水平没有中剂量组对组胺降低水平明显。

(3)四联活菌对体温及粪便评分的影响

一般过敏反应都伴随腹泻发生，在试验过程中参考临床评分标准：solid(score0),funicular(score 1),slurry(score 2),and watery(score 3)，评分越高代表腹泻的症状越严重。不同时间点各组的体温及粪便评分结果如图3所示，通过对两个不同组进行粪便评分比较，可以看出，剖腹产四联活菌组合物干预组较对照组可显著降低大鼠粪便评分。同样的，在体温指标上，可显著降低体温指标变化。四联活菌高剂量组和低剂量组干预对大鼠粪便评分和体温指标的降低水平都没有中剂量组对大鼠粪便评分和体温指标的降低水平明显。

(4)四联活菌对肠组织中的屏障蛋白水平的影响

在肠黏膜屏障指标上，在过敏反应中会导致肠道黏膜屏障蛋白受损并较少，由图4展示的结果可知，通过四联活菌组合物进行干预，可以显著提高肠组织中的屏障蛋白水平的表达。四联活菌高剂量组和低剂量组干预对大鼠肠组织中的屏障蛋白水平的表达水平低于中剂量组大鼠肠组织中的屏障蛋白水平的表达水平。

(5)四联活菌对IL4、IL10含量和mRNA水平IL4、IL10相对表达量以及组织含量的影响在炎症因子方面，过敏反应会导致体内炎症性因子表达升高，由图5可知，通过四联活菌组合物干预，可显著降低组织中的IL4、IL10含量和mRNA水平IL4、IL10相对表达量以及组织含量。四联活菌高剂量组和低剂量组干预对组织中的IL4、IL10含量和mRNA水平IL4、IL10相对表达量以及组织中的降低水平低于中剂量组。

同时本发明还发现，将炎症因子水平与各组大鼠菌群进行spearman相关分析，发现一些高度相关的菌种包括瘤胃球菌和梭状芽胞杆菌。

(6)四联活菌对大鼠肠道菌群α多样性和β多样性的影响

由图6可知，在肠道菌群指标上，通过益生菌干预1个月后发现，四联活菌组合物干预组更有利于剖腹产大鼠肠道菌群α多样性、β多样性的恢复。四联活菌高剂量组和低剂量组干预对大鼠肠道菌群α多样性、β多样性的恢复程度低于中剂量组。

目前无论从临床症状(体温、粪便评分)、血清学证据(抗体水平、组胺等)还是机制(TH2相关因子)、屏障蛋白、肠道菌群都可以说明在生命早期用四联活菌组合物干预对剖腹产个体后期罹患食物过敏有很好的预防作用。

SEQUENCE LISTING

<110> 四联活菌组合物的新应用

<120> 杭州远大生物制药有限公司

<160> 6

<170> PatentIn version 3.3

<210> 1

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工合成

<400> 1

ctctgtgtgg attggtggct 20

<210> 2

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工合成

<400> 2

cgcagctcag taacagtccg 20

<210> 3

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工合成

<400> 3

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<210> 4

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工合成

<400> 4

tcagtgttgt gagcgtggac 20

<210> 5

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工合成

<400> 5

taactgcacc cacttcccag 20

<210> 6

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工合成

<400> 6

tggcaaccca agtaaccctt aaa 23

Claims

1.一种四联活菌组合物在制备用于预防或治疗食物过敏的药物中的应用，其特征在于，所述四联活菌组合物由婴儿双歧杆菌（Bifidobacterium infatis），嗜酸乳杆菌（Lactobacillus acidophilus），粪肠球菌（Enterococcus faecalis）和蜡样芽孢杆菌（Bacillus cereus）组成；所述婴儿双歧杆菌的菌种保藏号为CGMCC No.0460.1，所述嗜酸乳杆菌的菌种保藏号为CGMCCNo.0460.2，所述粪肠球菌的菌种保藏号为CGMCC No.0460.3，所述蜡样芽孢杆菌的菌种保藏号为CGMCC No.0460.4。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述四联活菌组合物中活性益生菌的含量至少为1×10⁶cfu/g；所述四联活菌组合物中婴儿双歧杆菌的活菌数至少为1×10⁶cfu/g；嗜酸乳杆菌的活菌数至少为1×10⁶cfu/g；粪肠球菌的活菌数至少为1×10⁶cfu/g；蜡样芽孢杆菌的活菌数至少为1×10⁵cfu/g。

3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述食物过敏为由含有鸡卵清白蛋白的食物引起的食物过敏。

4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述四联活菌组合物的剂型为片剂、胶囊剂、颗粒剂、散剂、液体制剂中的任意一种。