CN113917162B - 去唾液酸糖蛋白受体片段sH2a作为标志物的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种去唾液酸糖蛋白受体片段sH2a作为标志物在制备用于诊断活动期肝病的产品中的应用。本发明通过研究发现,通过对生物样品中的去唾液酸糖蛋白受体片段sH2a的含量进行测定,能够很好地鉴别诊断活动期肝病,从而应用于活动期肝病的早期诊断、鉴别诊断,并为疾病治疗提供有力依据。通过检测sH2a可以高效地将活动期肝病与非活动期肝病、其他类型肝病(药物性肝炎、脂肪肝等)区分鉴别开来,sH2a具备作为活动期肝病诊断标志物的价值,且诊断价值较高。该标志物的发现,为进一步研究活动期肝病的机理,探索活动期肝病的治疗提供了新的实验理论基础和新的方向,丰富了活动期肝病的诊断和检测手段。
Description
技术领域
本发明涉及肝病领域,特别是涉及一种去唾液酸糖蛋白受体片段sH2a作为标志物在制备用于诊断活动期肝病的产品中的应用。
背景技术
肝脏是人体内最大的消化腺,是体内物质能量代谢的中心站。据估计,在肝脏中发生的化学反应有500种以上。首先它分泌胆汁,帮助消化饮食;它把吸收的氨基酸合成蛋白质供给机体能量;它能贮藏和燃烧体内的脂肪,控制体形;它是脂溶性维生素的贮存器官;它还能够氧化、还原、分解体内的毒素,吞噬不小心吃入体内的细菌,是人体最大的解毒器官。实验证明,动物在完全摘除肝脏后即使给予相应的治疗,最多也只能生存50多个小时,这说明肝脏是维持生命活动的一个必不可少的重要器官。而肝病是常见病和多发病,通常可将肝病分为病毒性肝炎、脂肪肝、酒精性肝病、药物性肝损伤、自身免疫性肝炎、肝硬化及肝癌等几大类。
乙型肝炎是一种损害肝脏的乙型肝炎病毒感染,可引起急性或慢性疾病,临床上以食欲减退、恶心、上腹部不适、肝区痛、乏力为主要表现。部分患者可有黄疸发热和肝大伴有肝功能损害。有些患者可慢性化,甚至发展成肝硬化,少数可发展为肝癌。临床上还不能将乙型肝炎同由其它病毒因子引起的肝炎区分开来,因此,必须通过实验室检测来确诊,可用若干血液检测方法对乙肝患者进行诊断和监测。目前主要依靠乙型肝炎表面抗原(HBsAg)、乙肝表面抗体(HBsAb)、乙肝e抗原(HBeAg)、乙肝e抗体(HBeAb)及乙肝核心抗体(HBcAb)等指标和乙肝病毒感染病程是否超过6个月来区分急性和慢性乙型肝炎,结合碱性磷酸酶、转氨酶(如ALT、AST等)、HBV DNA等指标区分肝病活动期及非活动期。肝硬化是临床常见的慢性进行性肝病,由一种或多种病因长期或反复作用形成的弥漫性肝损害。大多数为肝炎后肝硬化,少部分为酒精性肝硬化和血吸虫性肝硬化。病理组织学上有广泛的肝细胞坏死、残存肝细胞结节性再生、结缔组织增生与纤维隔形成,导致肝小叶结构破坏和假小叶形成,肝脏逐渐变形、变硬而发展为肝硬化。早期由于肝脏代偿功能较强可无明显症状,后期则以肝功能损害和门脉高压为主要表现,并有多系统受累,晚期常出现上消化道出血、肝性脑病、继发感染、脾功能亢进、腹水、癌变等并发症。自身免疫性肝病(AILD)是一组肝脏免疫耐受机制失衡引起的肝细胞或胆管上皮慢性损伤性炎症疾病,根据其临床表现、生化、免疫学、影像学和组织病理学特点,可分为以肝实质细胞进行性损伤为主的自身免疫性肝炎(AIH),以胆道系统受累为主的原发性胆汁性肝硬化(PBC)和原发性硬化型胆管炎(PSC)。自身免疫性肝病可单独发病,也可出现AIH与PBC、或AIH与PSC同时发病的情况,被称为“重叠综合征”(overlap syndrome),其中各类型活动期自身免疫肝病均出现碱性磷酸酶、转氨酶等含量升高。不同类型的自身免疫性肝病,其人口学特征、临床表现、肝脏的病理改变各有不同。该病具体的发病机制尚不明了,患者多伴有其他自身免疫性疾病,如糖尿病、桥本甲状腺炎等。
目前,如何将活动期肝病与非活动期肝病、以及其他类型肝病(药物性肝炎、脂肪肝等)快速便捷地区分鉴别开来仍然是不清楚的。
发明内容
基于此,有必要提供一种特异性和灵敏度较高的可用于诊断活动期肝病的标志物。
本发明提供了一种去唾液酸糖蛋白受体片段sH2a作为标志物在制备用于诊断活动期肝病的产品中的应用。
在其中一个实施例中,所述产品为试剂盒、检测试纸条或检测芯片。
在其中一个实施例中,所述试剂盒包括捕获抗体,所述捕获抗体能够特异性结合所述去唾液酸糖蛋白受体片段sH2a。
在其中一个实施例中,所述试剂盒包括检测抗体,所述检测抗体能够特异性结合所述去唾液酸糖蛋白受体片段sH2a,且所述检测抗体上标记有检测标记物。
在其中一个实施例中,所述检测标记物为荧光标记、化学发光标记、电子致密标记、金属粒子、放射性标记、发色团标记或酶标记。
在其中一个实施例中,所述检测标记物为罗丹明、荧光素、量子点、地高辛标记探针、放射性同位素、荧光微球、胶体金、吖啶酯、荧光素酶、辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、β-半乳糖苷酶或葡萄糖-6-磷酸脱氢酶。
在其中一个实施例中,所述试剂盒还包括所述去唾液酸糖蛋白受体片段sH2a。
在其中一个实施例中,所述试剂盒还包括固相载体、包被缓冲液和洗涤缓冲液中的一种或多种。
在其中一个实施例中,所述固相载体为磁性颗粒、胶乳粒子、酶标板或微流控芯片。
在其中一个实施例中,所述活动期肝病包括活动期乙肝病毒型肝炎、活动期乙肝肝硬化和活动期自身免疫性肝病。
在其中一个实施例中,所述产品用于通过检测样本中去唾液酸糖蛋白受体片段sH2a的含量诊断受试者是否患有活动期肝病。
在其中一个实施例中,所述样本选自血浆、全血、淋巴液、尿液、汗液、粘液、痰液和唾液中的一种或多种。
本发明通过研究发现,通过对生物样品中的去唾液酸糖蛋白受体片段sH2a的含量进行测定,能够很好地鉴别诊断活动期肝病,从而应用于活动期肝病的早期诊断、鉴别诊断,并为疾病治疗提供有力依据。实验数据表明,以sH2a作为检测指标检测活动期肝病样本时,ROC曲线统计结果显示曲线下面积为0.9583,以65.77ng/mL作为检测参考值,sH2a检测试剂盒特异性为94.50%,灵敏度为85.33%。ROC曲线下面积越接近1越具有诊断价值,这表明通过检测sH2a可以高效地将活动期肝病与非活动期肝病、其他类型肝病(药物性肝炎、脂肪肝等)区分鉴别开来,sH2a具备作为活动期肝病诊断标志物的价值,且诊断价值较高。该标志物的发现,为进一步研究活动期肝病的机理,探索活动期肝病的治疗提供了新的实验理论基础和新的方向,丰富了活动期肝病的诊断和检测手段。
附图说明
图1为本发明一实施例的sH2a重组蛋白的SDS-PAGE电泳纯度鉴定图,分子量大小在35-40kDa,灰度分析表明蛋白纯度达到95%以上;
图2为本发明一实施例的sH2a检测试剂盒的校准曲线,线性范围6.25ng/mL~200ng/mL;
图3为本发明一实施例的sH2a检测试剂盒检测活动期肝病及健康人血浆中sH2a浓度的样本浓度散点图;
图4为本发明一实施例的sH2a检测试剂盒检测活动期肝病及健康人血浆中sH2a浓度的ROC曲线;
图5为本发明一实施例的sH2a检测试剂盒检测非活动期肝病及健康人血浆中sH2a浓度的样本浓度散点图;
图6为本发明一实施例的sH2a检测试剂盒检测活动期肝病、非活动期肝病、其他类型肝病及健康人血浆中sH2a浓度的样本浓度散点图;
图7为本发明一实施例的sH2a检测试剂盒检测活动期肝病、非活动期肝病及健康人血清中sH2a浓度的样本浓度散点图;
图8为本发明一实施例的sH2a检测试剂盒检测活动期肝病、非活动期肝病及健康人全血中sH2a浓度的样本浓度散点图。
具体实施方式
为了便于理解本发明,下面将对本发明进行更全面的描述,并给出了本发明的较佳实施例。但是,本发明可以以许多不同的形式来实现,并不限于本文所描述的实施例。相反地,提供这些实施例的目的是使对本发明的公开内容的理解更加透彻全面。
除非另有定义,本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的,不是旨在于限制本发明。本文所使用的术语“和/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。
本发明提供了一种去唾液酸糖蛋白受体片段sH2a作为标志物在制备用于诊断活动期肝病的产品中的应用。
ASGPR(asialoglycoprotein receptor,去唾液酸糖蛋白受体)是第一个被发现的凝集素,由Ashwell及其同伴Morell发现,也称Ashwell-Morell受体,主要表达于肝窦状间隙的肝实质细胞表面,由于其结合配体的钙离子依赖性,因此属于 C 型凝集素。其能够介导去唾液酸化的糖蛋白被肝细胞内吞降解,在糖蛋白代谢、脂代谢、凋亡细胞降解、调节凝血、介导病毒进入细胞和自身免疫性炎症反应等多个生理环节均发挥着重要的作用。而sH2a则是源于肝脏ASGPR的H2亚基,H2有3种可变剪切形式。H2a为最长的可变剪切形式,相比H2b和H2c,它包含有57个核苷酸的胞内区域,以及15个核苷酸的紧邻跨膜区。由于这15个核苷酸编码的5个氨基酸可以作为蛋白水解信号, H2a在紧邻五肽处裂解为35kDa的片段,以可溶形式分泌至细胞外,即sH2a。
本发明通过研究发现,通过对生物样品中的去唾液酸糖蛋白受体片段sH2a的含量进行测定,能够很好地鉴别诊断活动期肝病,从而应用于活动期肝病的早期诊断、鉴别诊断,并为疾病治疗提供有力依据。实验数据表明,以sH2a作为检测指标检测活动期肝病样本时,ROC曲线统计结果显示曲线下面积为0.9583,以65.77ng/mL作为检测参考值,sH2a检测试剂盒特异性为94.50%,灵敏度为85.33%。ROC曲线下面积越接近1越具有诊断价值,这表明通过检测sH2a可以高效地将活动期肝病与非活动期肝病、其他类型肝病(药物性肝炎、脂肪肝等)区分鉴别开来,sH2a具备作为活动期肝病诊断标志物的价值,且诊断价值较高。该标志物的发现,为进一步研究活动期肝病的机理,探索活动期肝病的治疗提供了新的实验理论基础和新的方向,丰富了活动期肝病的诊断和检测手段。
在一个具体示例中,上述产品为试剂盒、检测试纸条或检测芯片,可以理解,具体类型不限于此,各种蛋白检测产品均可。
在一个具体示例中,上述产品通过双抗体夹心法检测去唾液酸糖蛋白受体片段sH2a。可以理解,检测目的蛋白的方法不限于此,可以根据需要进行调整,例如竞争法等。
在一个具体示例中,上述试剂盒包括捕获抗体,捕获抗体能够特异性结合上述去唾液酸糖蛋白受体片段sH2a。
在一个具体示例中,上述试剂盒包括检测抗体,检测抗体能够特异性结合去唾液酸糖蛋白受体片段sH2a,且检测抗体上标记有检测标记物。可以理解,根据检测标记物的不同,相应的检测方法和检测试剂可根据需要选择,例如荧光标记通过荧光检测方法和相应试剂进行测定,酶标记通过底物反应和相关试剂进行测定等。
在一个具体示例中,上述检测标记物为荧光标记、化学发光标记、电子致密标记、金属粒子、放射性标记、发色团标记或酶标记。
在一个具体示例中,上述检测标记物为罗丹明、荧光素、量子点、地高辛标记探针、放射性同位素、荧光微球、胶体金、吖啶酯、荧光素酶、辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、β-半乳糖苷酶或葡萄糖-6-磷酸脱氢酶。可以理解,检测标记物的具体种类不限于此,可根据需要进行选择。
可选地,上述试剂盒通过酶联免疫吸附法检测去唾液酸糖蛋白受体片段sH2a,其基本原理是酶分子与抗体或抗抗体分子共价结合,此种结合不会改变抗体的免疫学特性,也不影响酶的生物学活性。此种酶标记抗体可与吸附在固相载体上的抗原或抗体发生特异性结合。滴加底物溶液后,底物可在酶作用下使其所含的供氢体由无色的还原型变成有色的氧化型,出现颜色反应。因此,可通过底物的颜色反应来判定有无相应的免疫反应,颜色反应的深浅与标本中相应抗体或抗原的量呈正比。此种显色反应可通过ELISA检测仪进行定量测定,这样就将酶化学反应的敏感性和抗原抗体反应的特异性结合起来,使ELISA方法成为一种既特异又敏感的检测方法。
在一个具体示例中,上述检测标记物为辣根过氧化物酶,试剂盒还包括TMB底物。
在一个具体示例中,上述试剂盒还包括去唾液酸糖蛋白受体片段sH2a,其可作为标准品,用于标准曲线的绘制等。
在一个具体示例中,上述试剂盒还包括固相载体、包被缓冲液和洗涤缓冲液中的一种或多种。可选地,上述固相载体为磁性颗粒、胶乳粒子、酶标板或微流控芯片,但不限于此,可根据需要选择其他常规的固相载体。
在一个具体示例中,上述活动期肝病包括活动期乙肝病毒型肝炎、活动期乙肝肝硬化和活动期自身免疫性肝病等。
在一个具体示例中,所述产品用于通过检测样本中去唾液酸糖蛋白受体片段sH2a的含量诊断受试者是否患有活动期肝病。
在一个具体示例中,所述样本选自血浆、全血、淋巴液、尿液、汗液、粘液、痰液和唾液中的一种或多种。
在一个具体示例中,去唾液酸糖蛋白受体片段sH2a的制备方法包括以下步骤:将sH2a基因片段装载至表达载体上得到重组质粒,将重组质粒转入真核细胞中,转染18~22h添加转染增强剂,5~7天收集上清,利用滤膜过滤上清液,然后进行纯化得到sH2a重组蛋白。
在一个具体示例中,上述纯化包括以下步骤:将滤膜过滤所得滤液进行非变性条件下的Ni-NTA 亲和层析,平衡缓冲液为50mM PBS、10mM 咪唑、150mM NaCl,pH 7.2~7.4,上样完毕后,清洗10mL;用50mM PBS、250mM 咪唑、150mM NaCl,pH7.2~7.4洗脱,收集洗脱液;利用10kDa超滤管浓缩蛋白溶液,保存于50mM PBS(pH 7.2~7.4)缓冲液中,-80℃保存。
下面主要结合具体实施方式和附图对去唾液酸糖蛋白受体片段sH2a在诊断活动期肝病中的应用作进一步详细的说明。
实施例1sH2a重组蛋白表达及纯化鉴定
蛋白表达:NCBI搜索人源ASGPR2序列,选择胞外段即sH2a氨基酸序列合成基因并优化为哺乳动物表达密码子,同时装载至pcDNA3.1载体上。将获取的sH2a重组质粒(pcDNA3.1-sH2a-His)转入真核哺乳动物细胞中,并以pcDNA3.1空载体作为阴性对照,转染18~22h添加转染增强剂,5~7天收集上清,利用0.22µm滤膜过滤上清液。
蛋白纯化:将所得滤液进行非变性条件下的Ni-NTA 亲和层析,平衡缓冲液为50mMPBS、10mM 咪唑、150mM NaCl,pH7.2~7.4。上样完毕后,清洗10mL;用50mM PBS、250mM 咪唑、150mM NaCl,pH7.2~7.4洗脱,收集洗脱液。利用10kD超滤管浓缩蛋白溶液,将蛋白保存于pH7.2~7.4 50mM PBS缓冲液中,-80℃保存。纯化的蛋白进行SDS-PAGE电泳纯度鉴定,分子量大小在35~40kDa,灰度分析表明蛋白纯度达到95%以上,如图1所示。
sH2a重组蛋白活性鉴定:将sH2a重组蛋白用包被缓冲液(pH9.6)稀释至1μg/mL加入微孔板,每孔100μL,4℃包被过夜,拍干的微孔板中包被抗体并加入150~200μL酶标板稳定剂,37℃孵育1~2小时。弃去封闭液并拍干,37℃干燥20~40min;梯度稀释捕获抗体和酶标抗体(浓度为0~200ng/mL),37℃孵育0.5~1小时,洗涤后加入羊抗兔IgG-HRP(100ng/mL),37℃孵育0.5~1小时,洗涤后显色。检测发现捕获抗体和检测抗体在100ng/mL时的OD值大于1.0,蛋白与抗体的反应曲线R2>0.99,蛋白的反应活性满足要求,如表1所示。
表1 sH2a真核蛋白活性鉴定
实施例2 sH2a抗体配对
采用3μg/mL捕获抗体包被酶标板,加入不同浓度(6.25~200ng/mL)的sH2a校准品,37℃孵育1小时,洗涤后加入100μL浓度为10ng/mL的HPR标记的检测抗体,并于37℃孵育1小时,洗涤后加入TMB底物显色液并测定各孔OD值。从结果上看,捕获抗体(厂家:SinoBiological,货号:13908-R002)和检测抗体(厂家:Thermo,货号:MA5-29046)配对良好,可用于双抗夹心体系构建,如表2所示。
表2
实施例3 sH2a试剂盒及sH2a校准曲线绘制
sH2a试剂盒包括前述捕获抗体、检测抗体和sH2a校准品等。首先将捕获抗体用包被缓冲液(pH9.6)稀释至3μg/mL,按每孔100μL加入酶标板中,4℃孵育过夜;将sH2a校准品蛋白用蛋白质稳定剂稀释分别稀释至0ng/mL、6.25ng/mL、12.5ng/mL、25ng/mL、50ng/mL、100ng/mL、200ng/mL,并按照顺序将校准品加入预包被酶标板中,每孔100μL,37℃孵育1小时;用洗涤液清洗4次,加入辣根过氧化物酶标记的检测抗体,浓度10ng/mL,每孔100μL,37℃孵育1小时;再用洗涤液清洗4次,加入TMB底物显色液并测定各孔OD值。以标准品含量自变量(X),以其相对应的吸光值(A)作因变量(Y),以logistic四参数法拟合得到回归方程将待测样本测得的OD值代入回归方程,求得相对应的sH2a抗原含量。校准曲线线性范围6.25~200ng/mL,如图2所示为sH2a检测试剂盒校准曲线。上述sH2a检测试剂盒采用双抗夹心法,方法操作简便易行,检测快速灵敏,所用酶标仪简单、普及,价格低廉,该检测试剂盒线性范围达到6.25~200ng/mL,最低检测限可达5ng/mL。
实施例4 sH2a试剂盒临床性能验证1
从医院收集300例活动期肝病血浆样本(乙肝病毒型肝炎100例、乙肝肝硬化100例、自身免疫性肝病100例),同时从血站收集200例健康献血人员血浆。使用前述sH2a检测试剂盒(捕获抗体、检测抗体、sH2a校准品等)检测活动期肝病及健康人血浆中的sH2a浓度。样本浓度散点图显示,sH2a对活动期肝病和健康人检测结果的区分具有统计学意义且具有显著性差异,如图3所示。ROC曲线统计结果显示,曲线下面积为0.9583,以65.77ng/mL作为检测参考值,sH2a检测试剂盒特异性为94.50%,灵敏度为85.33%,如图4所示。
实施例5 sH2a试剂盒临床性能验证2
从医院收集200例非活动期肝病血浆样本(乙肝病毒型肝炎80例、乙肝肝硬化60例、自身免疫性肝病60例),同时从血站收集200例健康献血人员血浆。使用前述sH2a检测试剂盒检测非活动期肝病及健康人血浆中的sH2a浓度。样本浓度散点图显示,非活动期肝病和健康人之间sH2a含量无显著性差异,如图5所示。
实施例6 sH2a试剂盒临床性能验证3
从医院收集300例活动期肝病血浆样本(乙肝病毒型肝炎100例、乙肝肝硬化100例、自身免疫性肝病100例)、200例非活动期肝病血浆样本(乙肝病毒型肝炎80例、乙肝肝硬化60例、自身免疫性肝病60例)、200例其他类型肝病血浆样本(药物性肝炎100例、脂肪肝100例);同时从血站收集200例健康献血人员血浆。使用前述sH2a检测试剂盒检测活动期肝病、非活动期肝病、其他类型肝病及健康人血浆中的sH2a浓度。样本浓度散点图显示,活动期肝病和健康人之间sH2a含量存在显著性差异,非活动期肝病及其他类型肝病和健康人之间sH2a含量无显著性差异,如图6所示。
实施例7 sH2a试剂盒临床性能验证4
从医院收集100例活动期肝病血清样本(乙肝病毒型肝炎50例、乙肝肝硬化30例、自身免疫性肝病20例)、100例非活动期肝病血清样本(乙肝病毒型肝炎50例、乙肝肝硬化30例、自身免疫性肝病20例);同时从血站收集100例健康献血人员血清。使用前述sH2a检测试剂盒检测活动期肝病、非活动期肝病、其他类型肝病及健康人血清中的sH2a浓度。样本浓度散点图显示,活动期肝病和健康人之间sH2a含量存在显著性差异,非活动期肝病和健康人之间sH2a含量无显著性差异,如图7所示。
实施例8 sH2a试剂盒临床性能验证5
从医院收集100例活动期肝病全血样本(乙肝病毒型肝炎50例、乙肝肝硬化30例、自身免疫性肝病20例)、100例非活动期肝病全血样本(乙肝病毒型肝炎50例、乙肝肝硬化30例、自身免疫性肝病20例);同时从血站收集100例健康献血人员全血。使用前述sH2a检测试剂盒检测活动期肝病、非活动期肝病、其他类型肝病及健康人全血中的sH2a浓度。样本浓度散点图显示,活动期肝病和健康人之间sH2a含量存在显著性差异,非活动期肝病和健康人之间sH2a含量无显著性差异,如图8所示。
综上可知,本发明提供了一种灵敏度高、特异性好的可用于诊断活动期肝病的标志物sH2a,通过对生物样品中的去唾液酸糖蛋白受体片段sH2a的含量进行测定,能够很好地鉴别诊断活动期肝病,从而应用于活动期肝病的早期诊断、鉴别诊断,并为疾病治疗提供有力依据。
以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合,为使描述简洁,未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述,然而,只要这些技术特征的组合不存在矛盾,都应当认为是本说明书记载的范围。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式,其描述较为具体和详细,但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是,对于本领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明构思的前提下,还可以做出若干变形和改进,这些都属于本发明的保护范围。因此,本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。
Claims (12)
1.去唾液酸糖蛋白受体片段sH2a作为标志物在制备用于诊断活动期肝病的产品中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用,其特征在于,所述产品为试剂盒、检测试纸条或检测芯片。
3.根据权利要求2所述的应用,其特征在于,所述试剂盒包括捕获抗体,所述捕获抗体能够特异性结合所述去唾液酸糖蛋白受体片段sH2a。
4.根据权利要求2所述的应用,其特征在于,所述试剂盒包括检测抗体,所述检测抗体能够特异性结合所述去唾液酸糖蛋白受体片段sH2a,且所述检测抗体上标记有检测标记物。
5.根据权利要求4所述的应用,其特征在于,所述检测标记物为荧光标记、化学发光标记、电子致密标记、金属粒子、放射性标记、发色团标记或酶标记。
6.根据权利要求4所述的应用,其特征在于,所述检测标记物为罗丹明、荧光素、量子点、地高辛标记探针、放射性同位素、荧光微球、胶体金、吖啶酯、荧光素酶、辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、β-半乳糖苷酶或葡萄糖-6-磷酸脱氢酶。
7.根据权利要求2~6任一项所述的应用,其特征在于,所述试剂盒还包括所述去唾液酸糖蛋白受体片段sH2a。
8.根据权利要求2~6任一项所述的应用,其特征在于,所述试剂盒还包括固相载体、包被缓冲液和洗涤缓冲液中的一种或多种。
9.根据权利要求8所述的应用,其特征在于,所述固相载体为磁性颗粒、胶乳粒子、酶标板或微流控芯片。
10.根据权利要求1~6任一项所述的应用,其特征在于,所述活动期肝病包括活动期乙肝病毒型肝炎、活动期乙肝肝硬化和活动期自身免疫性肝病。
11.根据权利要求1~6任一项所述的应用,其特征在于,所述产品用于通过检测去唾液酸糖蛋白受体片段sH2a的含量诊断受试者是否患有活动期肝病。
12.根据权利要求11所述的应用,其特征在于,所述检测采用的样本选自血浆、全血、血清和尿液中的一种或多种。
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