CN113907189A - 蝇蛆养殖废料的应用及蝇蛆代谢物的提取方法 - Google Patents
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Abstract
本申请涉及蝇蛆养殖领域,公开了蝇蛆养殖废料的应用及蝇蛆代谢物的提取方法,所述蝇蛆养殖废料的应用,是将所述蝇蛆养殖废料用于提取蝇蛆代谢物,不仅将蝇蛆养殖废料得到有效利用,并且还降低了蝇蛆代谢物的提取成本和处理成本。
Description
技术领域
本申请涉及蝇蛆养殖领域,主要涉及蝇蛆养殖废料的应用及蝇蛆代谢物的提取方法。
背景技术
全世界昆虫种类约有125万种,其中我国约有20多万种。昆虫很早就被广泛应用于人类的食品、药品、化妆品等领域中,为人类社会提供很多有益的产品。昆虫虫体营养价值高,富含蛋白质、脂肪及多种氨基酸、维生素和微量元素,但昆虫的经济价值远不止于此,其分泌的代谢物在工业、农业、医学领域中也有巨大的应用价值。
昆虫代谢物是指昆虫在生长和繁殖过程中,由其身体分泌或伴生菌分泌的次生代谢产物,包括分泌物、排泄物、昆虫毒素及内含的生物活性物质的总和。昆虫代谢物具有很高的经济及社会价值,被广泛地应用在食品、医疗、饲料、化工、害虫防治、环境保护、仿生技术、观赏等领域。然而,当前世界昆虫在饲料中应用的主流还是集中在昆虫虫体本身,还没有完全注意到昆虫代谢物的优势,昆虫所生产的代谢物被白白地浪费,使得昆虫的整体利用价值大打折扣。
家蝇(Musca damestica)属于双翅目,蝇科,是一种完全变态昆虫。其幼虫——蝇蛆,虫体营养价值高,且由于其体外消化的特点,在体外养殖食料中附着有大量的代谢产物,代谢物中含有大量的抗菌肽、有益伴生菌、凝集素、壳聚糖、酶等生物活性物质,它们具有强化动物消化能力、提高动物免疫力、维系动物胃肠道健康、净化养殖环境的等优点,从蝇蛆养殖废料中提取出的浓缩代谢物,其成分更纯、效用更强,无论在科研还是新产品开发等方面都更有优势。但目前,对于蝇蛆养殖废料的处理一般是灭活后用作有机肥或生产沼气,灭活工序不仅需要消耗能源,而且灭活工序不彻底还存在环境污染问题。目前,尚未有人提出过在蝇蛆养殖废料中提取蝇蛆代谢物的想法以及出现一种在蝇蛆养殖废料中提取蝇蛆代谢物的工艺,使得蝇蛆养殖废料得不到有效利用。
因此,现有技术还有待于改进和发展。
发明内容
鉴于上述现有技术的不足,本申请的目的在于提供蝇蛆养殖废料的应用及蝇蛆代谢物的提取方法,旨在解决现有蝇蛆养殖废料不能有效利用的问题。
本申请的技术方案如下:
一种蝇蛆养殖废料的应用,其中,将所述蝇蛆养殖废料用于提取蝇蛆代谢物。
传统的蝇蛆代谢物的提取,是以蝇蛆为原料进行提取的,本申请首次提出利用蝇蛆养殖废料进行提取,不仅将蝇蛆养殖废料得到有效利用,并且还降低了蝇蛆代谢物的提取成本和处理成本。
一种蝇蛆代谢物的提取方法,其中,包括以下步骤:
(1)烘干蝇蛆养殖废料;
(2)对所述蝇蛆养殖废料进行粉碎;
(3)将粉碎后的所述蝇蛆养殖废料浸泡在乙酸溶液中,固液分离,收集第一上清液;
(4)将固液分离后的固体浸泡在乙醇溶液中,固液分离,收集第二上清液;
(5)将所述第一上清液与所述第二上清液混合,水浴加热,冷却,离心,收集第三上清液;
(6)将第三上清液进行脱水干燥。
本发明通过多段萃取的方式将蝇蛆代谢物分离、纯化出来,并制成冷冻固体,利于后续的保存、研究以及工业化生产的使用。
所述的蝇蛆代谢物的提取方法,其中,在步骤(1)中,所述烘干的温度为105~130℃,烘干至所述蝇蛆养殖废料的水分含量≤5%。将烘干温度控制在105~130℃是因为该温度可以确保物料中的水分在较短时间内挥发完全,又能保证有机物不会有较大损失。
所述的蝇蛆代谢物的提取方法,其中,在步骤(2)中,加入液氮进行辅助粉碎。
所述的蝇蛆代谢物的提取方法,其中,所述对所述蝇蛆养殖废料进行粉碎的过程具体包括以下步骤:
在每1kg所述蝇蛆养殖废料中加入100~300mL的所述液氮,将所述蝇蛆养殖废料与所述液氮混合均匀后,粉碎至过30目筛。
所述的蝇蛆代谢物的提取方法,其中,在步骤(3)中,所述乙酸溶液的浓度为0.4~0.6mol/L,每1kg的所述蝇蛆养殖废料加入8~12L所述乙酸溶液,所述浸泡时间为20~30h。
所述的蝇蛆代谢物的提取方法,其中,在步骤(3)和步骤(4)中,所述固液分离的方式为离心分离,所述离心分离的过程为在2~6℃、6000~10000rpm的高速冷冻离心机中离心30~50min。
所述的蝇蛆代谢物的提取方法,其中,在步骤(4)中,所述乙醇溶液为纯度为95%的工业乙醇,每1kg的所述固体加入8~12L所述乙醇溶液,所述浸泡时间为20~30h。
所述的蝇蛆代谢物的提取方法,其中,在步骤(5)中,所述离心的过程为在2~6℃、10000~14000rpm的高速冷冻离心机中离心50~70min。
所述的蝇蛆代谢物的提取方法,其中,在步骤(6)中,所述脱水干燥的方式为真空冷冻干燥,在-40℃~-60℃下处理1~2h。
有益效果:本申请中提供蝇蛆养殖废料的应用,将所述蝇蛆养殖废料用于提取蝇蛆代谢物,不仅将蝇蛆养殖废料得到有效利用,并且还降低了蝇蛆代谢物的提取成本和处理成本。
具体实施方式
本申请提供蝇蛆养殖废料的应用及蝇蛆代谢物的提取方法,为使本申请的目的、技术方案及效果更加清楚、明确,以下对本申请进一步详细说明。应当理解,此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本申请,并不用于限定本申请。
此外,本申请提供了的各种特定的工艺和材料的例子,但是本领域普通技术人员可以意识到其他工艺的应用和/或其他材料的使用。
在蝇蛆养殖过程中,养殖料主要为水、麸皮、豆粕、白砂糖、奶粉等,将前述几种原料混合就可以用于养殖蝇蛆。经过养殖之后,需要废弃的蝇蛆养殖废料中除了剩余的养殖料以外,还有蝇蛆排泄物、蝇蛆代谢物等。蝇蛆养殖废料中有水、蛋白质、脂肪、各种常量元素、微量元素、多糖、淀粉、单糖、氨基酸、核苷酸、有机酸、益生菌、蛋白质酶、脂肪酶、淀粉酶、某些多糖酶、谷氨酰胺、凝集素、脂肪酸分子、糖蛋白、蝇蛆排泄物、毒素等等。
本申请提供一种蝇蛆养殖废料的应用,将蝇蛆养殖废料用于提取蝇蛆代谢物。传统的蝇蛆代谢物的提取,是以蝇蛆为原料进行提取的,本发明所提供的方案与现有技术相比,不仅将蝇蛆养殖废料得到有效利用,并且还降低了蝇蛆代谢物的提取成本和处理成本。
具体地,针对蝇蛆代谢物的应用,本发明中还提供一种蝇蛆代谢物的提取方法,包括以下步骤:
(1)烘干蝇蛆养殖废料。
在步骤(1)中,将蝇蛆养殖废料进行烘干,烘干的温度优选为105-130℃,烘干至蝇蛆养殖废料的水分含量≤5%。
将烘干温度控制在105~130℃是因为该温度可以确保物料中的水分在较短时间内挥发完全,又能保证有机物不会有较大损失。烘干水分保持≤5%,是因为蝇蛆养殖废料脂肪含量较高,在此情况下物料水分含量越高,质地则越坚韧越难以粉碎,因此为了保证后续提取率,在此步骤中将蝇蛆养殖废料的水分控制在含量≤5%,确保物料易于粉碎,利于后续提取蝇蛆代谢物。
(2)对蝇蛆养殖废料进行粉碎。
在步骤(2)中,粉碎过程中优选为加入少量液氮进行辅助粉碎,提高出粉率,有利于后续蝇蛆代谢物的提取。进一步地,每1kg蝇蛆养殖废料可以加入约100~300mL的液氮,将蝇蛆养殖废料与液氮混合均匀后粉碎至过30目筛即可。
(3)将粉碎后的蝇蛆养殖废料浸泡在乙酸溶液中,固液分离,收集第一上清液。
在步骤(3)中,乙酸溶液的浓度可以为0.4~0.6mol/L,每1kg的蝇蛆养殖废料加入8~12L乙酸溶液,浸泡时间可以为20~30h。由于在步骤(2)中将蝇蛆养殖废料粉碎至过30目筛,此步骤中通过浸泡20~30h左右,即可充分使蝇蛆代谢物充分地溶解于乙酸溶液中。
固液分离的方式可以为离心分离,具体地,可以将浸泡液整体送入高速冷冻离心机,在2~6℃、6000-10000rpm的高速冷冻离心机中离心30-50min进行固液分离。
(4)将固液分离后的固体浸泡在乙醇溶液中,固液分离,收集第二上清液。
在步骤(4)中,乙醇溶液可以为纯度为95%的工业乙醇,成本低。在步骤(4)中,每1kg的固体加入8~12L乙醇溶液,浸泡时间可以为20~30h,此步骤中通过浸泡24h,即可充分使蝇蛆代谢物充分地溶解于乙醇溶液中。
在步骤(4)中,由于固体是步骤(3)中固液分离后得到的,固体可能会存在块状,因此,为了使固体内的蝇蛆代谢物能充分溶于乙醇溶液中,将固液分离后的固体浸泡在乙醇溶液中后,优选为,还包括以下步骤:
对浸泡有固体的乙醇溶液进行搅拌或振荡,使固体充分分散在乙醇溶液中,再进行固液分离,收集第二上清液,丢弃固体。
在步骤(4)中,固液分离的方式可以为离心分离,具体地,可以将浸泡液整体送入高速冷冻离心机,2~6℃、6000-10000rpm的高速冷冻离心机中离心30-50min进行固液分离。
(5)将第一上清液与第二上清液混合,90~100℃水浴加热0.8~1.2h,冷却,离心,收集第三上清液。
在步骤(5)中,将步骤(4)分离后所得的固体丢弃,然后将得到的第一上清液与第二上清液混合均匀。
水浴加热的过程中可以将第一上清液和第二上清液的混合液置于90~100℃恒温水浴箱中水浴加热0.8~1.2h。水浴加热可让上清液中的水分迅速蒸发和挥发,达到浓缩的目的。因为后续步骤中需要对上清液进行冷冻干燥,浓缩的目的是在此过程中尽量让水分蒸发和挥发,减少后续干燥过程中的机器负重。
冷却为迅速冷却室温。迅速冷却的方式可以为在自然环境中冷却。为避免高温对高速冷冻离心机造成损伤,因此,需要将混合液冷却至室温再进行离心。
离心的过程可以为将第一上清液和第二上清液的混合液送入高速冷冻离心机,在2~6℃、10000-14000rpm的高速冷冻离心机中离心50-70min进行固液分离。此步骤的离心分离主要是进一步分离出混合液中的残存大分子物质。
(6)将第三上清液进行脱水干燥。
在步骤(6)中,脱水干燥的方式优选为采用真空冷冻干燥。真空冷冻干燥可以迅速将液体固化成粉末并真空分装保存。
将第三上清液送入真空冷冻干燥机,在-40℃~-60℃情况下处理约1~2h后获得冷冻干燥浓缩固体,此固体即为蝇蛆代谢物浓缩物,置于-20℃冰柜保存即可。
本发明中所提供的蝇蛆代谢物的提取方法,是从蝇蛆养殖废料中提取蝇蛆代谢物的提取方法,将经过干燥的蝇蛆养殖废料,进行粉碎,将粉碎后的蝇蛆养殖废料浸泡在乙酸中一段时间后固液分离,去除大分子物质,收集上清液,再使用乙醇浸泡分离后固体,将固体中的剩余生物活性物质萃取出来,最后将两份上清液合并,得到蝇蛆代谢物液,最后可以通过冷冻干燥技术进行浓缩,得到蝇蛆代谢物浓缩物。
传统的昆虫资源利用主要集中在昆虫虫体养殖及虫体应用领域,而昆虫的代谢产物却缺乏应有的重视而被随意抛弃,不但造成优质资源的浪费,还有污染环境的可能。昆虫养殖后的养殖废料中含有大量有益的昆虫代谢物,包括抗菌肽、益生菌、酶、甲壳素等生物活性物质,具有很好的功能性作用,在动物养殖中的应用大有可为,在饲料产业中可作为饲料添加剂的主要原料,本发明通过多段萃取的方式将其分离、纯化出来,并制成冷冻固体,利于后续的保存、研究以及工业化生产的使用。
以下通过具体实施例对本发明做进一步说明。
实施例1
将新鲜的蝇蛆养殖废料放置于烘箱,115℃烘焙至水分含量≤5%。
将烘干的蝇蛆养殖废料进行粉碎,此过程中加入少量液氮辅助粉碎,每1kg蝇蛆养殖废料加入200mL的液氮。
将粉碎好的蝇蛆养殖废料浸泡在0.5mol/L的乙酸溶液中,每1kg的蝇蛆养殖废料加入10L乙酸溶液,浸泡24h后,将浸泡液整体送入高速冷冻离心机,在4℃,8000rpm的高速冷冻离心机中离心40min进行固液分离,收集上清液,编号为A。
将分离后所得的固体浸泡在纯度为95%的工业乙醇中,每1kg的固体加入10L乙醇溶液,浸泡24h后,浸泡液整体送入高速冷冻离心机,在4℃、8000rpm的高速冷冻离心机中离心40min进行固液分离,收集上清液,编号为B。
将分离后所得的固体丢弃,将A和B两种上清液混合均匀,并将其置于100℃恒温水浴箱中沸水煮1h,然后迅速冷却后送入高速冷冻离心机,在4℃、12000rpm的高速冷冻离心机中离心60min进行固液分离,收集上清液,编号为C。
将溶液C送入真空冷冻干燥机,在-50℃情况下处理1.5h后获得冷冻干燥浓缩固体,此固体即为蝇蛆代谢物的浓缩物,置于-20℃冰柜保存。
对制备得到的蝇蛆代谢物的浓缩物进行检测,其中各生物活性物质含量如表1所示。
表1
实施例2:抑菌实验
将实施例1制备得到的固体的蝇蛆代谢物的浓缩物用甲醇水溶液(质量浓度70%)配制成500mg/mL的溶液,作为试验组。
将购买的庆大霉素用甲醇水溶液(质量浓度70%)配制成15mg/mL的溶液,作为对照组。
将单独的甲醇水溶液(质量浓度70%)作为空白对照组。
制作含大肠杆菌的普通琼脂平板,并在琼脂平板上用牛津杯打孔,用于注入各组溶液进行比较。
将各组溶液注入后放置于37℃的生化培养箱中培养24h,培养结束后观察每组的抑菌圈大小来确定其抑菌能力,结果如表1所示。
表1 各组对大肠杆菌的抑菌情况
通过抑菌实验的结果可见,蝇蛆代谢物浓缩物的抑菌能力可达到庆大霉素的抑菌能力,因此其在动物保健方面应有较大的推广应用空间。
应当理解的是,本申请的应用不限于上述的举例,对本领域普通技术人员来说,可以根据上述说明加以改进或变换,所有这些改进和变换都应属于本申请所附权利要求的保护范围。
Claims (10)
1.一种蝇蛆养殖废料的应用,其特征在于,将所述蝇蛆养殖废料用于提取蝇蛆代谢物。
2.一种蝇蛆代谢物的提取方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)烘干蝇蛆养殖废料;
(2)对所述蝇蛆养殖废料进行粉碎;
(3)将粉碎后的所述蝇蛆养殖废料浸泡在乙酸溶液中,固液分离,收集第一上清液;
(4)将固液分离后的固体浸泡在乙醇溶液中,固液分离,收集第二上清液;
(5)将所述第一上清液与所述第二上清液混合,水浴加热,冷却,离心,收集第三上清液;
(6)将第三上清液进行脱水干燥。
3.根据权利要求2所述的蝇蛆代谢物的提取方法,其特征在于,在步骤(1)中,所述烘干的温度为105~130℃,烘干至所述蝇蛆养殖废料的水分含量≤5%。
4.根据权利要求2所述的蝇蛆代谢物的提取方法,其特征在于,在步骤(2)中,加入液氮进行辅助粉碎。
5.根据权利要求4所述的蝇蛆代谢物的提取方法,其特征在于,所述对所述蝇蛆养殖废料进行粉碎的过程具体包括以下步骤:
在每1kg所述蝇蛆养殖废料中加入100~300mL的所述液氮,将所述蝇蛆养殖废料与所述液氮混合均匀后,粉碎至过30目筛。
6.根据权利要求2所述的蝇蛆代谢物的提取方法,其特征在于,在步骤(3)中,所述乙酸溶液的浓度为0.4~0.6mol/L,每1kg的所述蝇蛆养殖废料加入8~12L所述乙酸溶液,所述浸泡时间为20~30h。
7.根据权利要求2所述的蝇蛆代谢物的提取方法,其特征在于,在步骤(3)和步骤(4)中,所述固液分离的方式为离心分离,所述离心分离的过程为在2~6℃、6000~10000rpm的高速冷冻离心机中离心30~50min。
8.根据权利要求2所述的蝇蛆代谢物的提取方法,其特征在于,在步骤(4)中,所述乙醇溶液为纯度为95%的工业乙醇,每1kg的所述固体加入8~12L所述乙醇溶液,所述浸泡时间为20~30h。
9.根据权利要求2所述的蝇蛆代谢物的提取方法,其特征在于,在步骤(5)中,所述离心的过程为在2~6℃、10000~14000rpm的高速冷冻离心机中离心50~70min。
10.根据权利要求2所述的蝇蛆代谢物的提取方法,其特征在于,在步骤(6)中,所述脱水干燥的方式为真空冷冻干燥,在-40℃~-60℃下处理1~2h。
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