CN113897445B

CN113897445B - 与猪肌间脂肪相关的分子标记及其应用

Info

Publication number: CN113897445B
Application number: CN202111436662.XA
Authority: CN
Inventors: 孙加节; 林泽堃; 谢芳; 张永亮; 江青艳; 习欠云; 陈婷; 罗君谊
Original assignee: South China Agricultural University
Current assignee: South China Agricultural University
Priority date: 2021-11-29
Filing date: 2021-11-29
Publication date: 2023-05-16
Anticipated expiration: 2041-11-29
Also published as: CN113897445A

Abstract

本发明公开一种与猪肌间脂肪相关的分子标记及其应用，属于家畜分子标记制备技术领域。本发明利用10×Genomics单细胞RNA测序技术检测不用品种猪背部肌肉组织，筛选获得肌间脂肪细胞特异性表达基因SNCA，SNCA基因或其编码蛋白可作为猪肌间脂肪的分子标记，用于鉴定猪肌间脂肪组织以及评价猪肌间脂肪含量，具有较高的特异性和准确性，在猪肌间脂肪含量调控相关的分子标记辅助育种中具有重要的应用价值，对于培育具有优良肉品质性状的动物品种与肉品质的改良具有重要意义。

Description

与猪肌间脂肪相关的分子标记及其应用

技术领域

本发明属于家畜分子标记制备技术领域，具体涉及一种与猪肌间脂肪相关的分子标记及其应用。

背景技术

猪肉是我国居民日常膳食的主要肉类来源，猪肉品质性状改良是家畜育种工作中的最主要研究方向。目前，国内商品猪主要是从国外引进的瘦肉型猪种及其杂交后代，引进品种具有生长速度快，胴体瘦肉率及饲料转化率高等优点；但与我国地方猪种相比，猪抗应激能力与肉品质却显著降低了。近年来，随着消费者对肉品质要求的日益提高，亟需改善肉质，培育优质肉猪。

肌间脂肪含量与猪肉品质密切相关，肌间脂肪在组织结构上是比较特殊的脂肪组织，其含量的多少表现为肌肉间大理石花纹的评分，并且与猪肉的风味、嫩度和多汁性等性状密切相关，是决定猪肉品质的重要指标之一。与皮下脂肪和内脏脂肪不同，肌间脂肪解剖学上分离困难，很难对其进行特异性研究和评价。因此，开发肌间脂肪组织或细胞相关的分子标记对于肉猪育种以及提高猪肉品质具有重要意义。

发明内容

为了克服现有技术的缺点与不足，本发明的目的在于提供一种与猪肌间脂肪相关的分子标记及其应用。

为实现上述目的，本发明利用10×Genomics单细胞RNA测序技术检测1日龄长白猪与广东特色品种蓝塘猪背部肌肉组织混合细胞亚群，对获得的转录组数据进行分析，筛选出肌间脂肪细胞特异性表达基因，初步确定肌间脂肪细胞候选标识基因，最后通过荧光定量PCR技术在猪更大群体中发现α-突触核蛋白基因(α-synuclein，SNCA)与肌间脂肪含量显著相关，确定SNCA可作为猪肌间脂肪的特异性分子标记，用于评价猪肌间脂肪含量的高低。

本发明的目的通过下述技术方案实现：

第一方面，本发明提供SNCA基因或其编码蛋白作为猪肌间脂肪细胞特异性分子标记的应用。

第二方面，本发明提供SNCA基因、其编码蛋白或检测所述SNCA基因或其编码蛋白表达的产品在分析猪肌间脂肪含量中的应用。

所述分析猪肌间脂肪含量具体可为判断肌间脂肪含量的高低。

第三方面，本发明提供SNCA基因、其编码蛋白或检测所述SNCA基因或其编码蛋白表达的产品在辅助鉴别猪肌间脂肪组织或肌间脂肪细胞中的应用。

第四方面，本发明提供SNCA基因、其编码蛋白或检测所述SNCA基因或其编码蛋白表达的产品在猪肌间脂肪含量调控的分子标记辅助育种中的应用。

第五方面，本发明提供SNCA基因、其编码蛋白或检测所述SNCA基因或其编码蛋白表达的产品在提高猪肌间脂肪含量或改善猪肉品质中的应用。

本发明中，所述SNCA基因或其编码蛋白为非人动物的基因或其突变体。

优选地，所述SNCA基因或其编码蛋白为猪的基因或其突变体。

所述猪SNCA基因Ensembl(https://asia.ensembl.org/index.html)登录号为ENSSSCG00000009203，氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示，核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示，cDNA序列如SEQ ID NO：2中第365bp～787bp所示。

本发明中，所述检测所述SNCA基因或其编码蛋白表达的产品包括利用荧光定量PCR技术、杂交技术或芯片技术检测所述SNCA基因或其编码蛋白表达的产品。

利用荧光定量PCR技术检测SNCA基因表达的产品包括用于特异性扩增SNCA基因的引物和/或探针。利用杂交技术检测所述SNCA基因或其编码蛋白表达的产品包括与SNCA基因或其编码蛋白特异性结合的核酸或抗体。利用芯片技术检测所述SNCA基因或其编码蛋白表达的产品包括核酸芯片或蛋白芯片。

具体地，利用荧光定量PCR技术检测SNCA基因表达的产品包括上游引物和下游引物，上游引物(Forward primer)为序列表中SEQ ID NO：3；下游引物(Reverse primer)为序列表中SEQ ID NO：4。

进一步，使用荧光定量PCR法检测SNCA标记物时，可以采用SYBR Green荧光染料法。

具体的，所述的检测SNCA基因表达的产品包括针对上述SNCA基因的反转录试剂、特异性引物、内参引物、SYBR Green荧光定量PCR反应液。

其中，所述的特异性引物包括上游引物和下游引物，上游引物(Forward primer)为序列表中SEQ ID NO：3；下游引物(Reverse primer)为序列表中SEQ ID NO：4。

所述的内参引物包括GAPDH内参基因的上游引物和下游引物，上游引物序列为SEQID NO：5，下游引物序列为SEQ ID NO：6；

本发明所述应用包括通过检测所述SNCA基因或其编码蛋白的表达水平，判断猪肌间脂肪含量的高低。

具体地，若待测样品的SNCA基因或其编码蛋白的表达水平显著高于对照样品，则与对照样品相比，待测样品中肌间脂肪的含量较高。

第六方面，本发明还提供一种检测猪肌间脂肪含量高低的方法，包括如下步骤：检测猪中SNCA基因或其编码蛋白的表达水平，根据SNCA基因或其编码蛋白的的表达水平判断猪肌间脂肪含量的高低。

所述判断是否含有肌间脂肪或肌间脂肪含量高低的标准如下：若猪的SNCA基因或其编码蛋白的表达水平显著高于对照样品，则与对照样品相比，猪中肌间脂肪的含量较高。

具体包括如下步骤：

1)提取猪肌肉组织总RNA；

2)通过反转录随机引物在反转录酶的作用下将SNCA基因反转录成cDNA；

3)在荧光实时定量PCR仪上将步骤2)获得的cDNA和内参基因进行扩增检测；

4)通过溶解曲线分析，2^-ΔΔCt法进行相对定量。

本发明相对于现有技术具有如下的优点及效果：

本发明发现SNCA基因在猪肌间脂肪细胞中特异性表达，SNCA基因或其编码蛋白可作为猪肌间脂肪的分子标记，用于鉴定猪肌间脂肪组织以及评价猪肌间脂肪含量，具有较高的特异性和准确性，在猪肌间脂肪含量调控相关的分子标记辅助育种中具有重要的应用价值，对于培育具有优良肉品质性状的动物品种与肉品质的改良具有重要意义。

附图说明

图1是实施例1中长白猪与蓝塘猪背部肌肉组织细胞分群t-SNE分析；其中，FAPs表示纤维脂肪前体细胞，Tenocyte-like cells表示腱细胞，Endothelial cells表示内皮细胞，B cells表示免疫B细胞，T cells表示免疫T细胞，SMMCs表示平滑肌细胞，MuSCs表示肌肉干细胞，Myoblast表示成肌细胞，Myocyte表示肌细胞，Myofiber表示肌纤维，IMF表示肌间脂肪细胞，Understudied cells表示未知细胞。

图2是实施例1中SNCA基因在各细胞亚群中的表达水平；其中，FAPs表示纤维脂肪前体细胞，Tenocyte-like cells表示腱细胞，Endothelial cells表示内皮细胞，B cells表示免疫B细胞，T cells表示免疫T细胞，SMMCs表示平滑肌细胞，MuSCs表示肌肉干细胞，Myoblast表示成肌细胞，Myocyte表示肌细胞，Myofiber表示肌纤维，IMF表示肌间脂肪细胞。

图3是实施例2中荧光定量PCR检测猪肌肉组织SNCA基因的相对表达量。LT表示蓝塘猪，LW表示长白猪。

具体实施方式

下面结合实施例及附图对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。

本领域的普通技术人员可以理解：在不脱离本发明的原理和宗旨的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由权利要求及其等同物限定。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件或按照厂商所建议的条件实施检测。

实施例1基于10×Genomics单细胞RNA测序技术获得猪肌间脂肪细胞特异表达基因SNCA

由于畜禽肌间脂肪组织在解剖学上分离比较困难，普通转录组测序技术无法实现对猪肌间脂肪组织的特异性分析，而10×Genomics单细胞RNA测序技术基于Gemcode微流体平台，可以将单个肌间脂肪细胞与含有10×barcode信息的凝胶珠包裹在油滴内，形成一个“油包水”的结构(GEMs)，在GEMs中细胞裂解释放mRNA，通过逆转录产生用于测序的cDNA，通过高通量测序得到单个细胞的基因表达情况。

1)选取胴体肉品质差异较大的瘦肉型长白猪和广东特色品种脂肪型蓝塘猪作为研究对象；选3例1日龄长白猪与3例1日龄蓝塘猪分别取它们的背部肌肉组织，用预冷的生理盐水反复冲洗干净后，置于冰上的细胞培养皿中，加入含10％FBS的RPMI 1640细胞培养液，用于单细胞解离。

2)用预冷的无血清RPMI 1640细胞培养液清洗上述组织样本3次后，用无菌眼科手术剪和镊子将组织剪碎，加入血管单细胞消化液(450U/mL Collagenase I、250U/mLCollagenase XI、120U/mL Hyaluronidase、120U/mL DNase I)于37℃恒温水浴锅中消化1h。消化得到的单细胞悬液经70μm和40μm细胞筛依次过滤，然后加入RPMI 1640细胞培养液，4℃，500g离心5min。然后按照试剂盒说明书去死细胞、去碎片。使用Countstar对细胞活性进行鉴定，确定单细胞悬液中活细胞数目在85％以上，细胞总数大于10⁵个。

3)基于Gemcode微流体平台，将单个细胞与含有10×barcode信息、酶和引物的凝胶珠包裹在油滴内，形成GEMs，在GEMs中细胞裂解释放mRNA，并通过逆转录产生cDNA，cDNA与10×barcode连在一起，然后进行上机测序。使用Illumina HiSeq 4000进行单细胞转录组测序，文库构建和测序均使用标准技术流程。

4)单个细胞的所有mRNA进行高通量测序后，软件分析细胞内所有基因的表达模式，使用Seurat软件(https://cran.r-project.org/web/packages/Seurat/index.html)进行主成分分析降维后，利用非线性降维算法t-SNE来调整数据，将多维数据降为二维空间。在二维空间里，细胞之间的基因表达情况越相似，在图中的距离也就越靠近。因此点之间的距离可以决定是否属于相同的细胞类型，然后用k-means算法来把细胞聚类分群。亚群分好后，需要借助标记基因来注释鉴定细胞类型，首先可以借助Cell Marker网站来找到人和鼠肌肉组织中不同细胞类型的标记基因，还可以查阅文献，从已经报导的肌肉组织不同细胞中表达的基因作为参考。通过热图展现出亚群中高表达基因的表达情况，与已报道的标记基因进行比对，鉴定出每个亚群的细胞类型。结果如图1所示。

5)为了鉴定猪肌间脂肪细胞亚群的标记基因，使用Seurat的Findmarkers函数对猪肌间脂肪细胞亚群的所有细胞与所有其他类型的细胞进行对比。标记基因的筛选条件为：目标亚群或对照亚群中，基因在10％以上的细胞中有表达；基因表达倍数logFC≥0.26且P值≤0.01，SNCA基因在各细胞亚群中的表达水平如图2所示。

其中，长白猪和蓝塘猪均在文献“蓝塘猪与长白猪正反交F1代胴体性状和肉品质的比较.华南农业大学学报,2015,36(5):1-6”中公开。

实施例2荧光定量PCR技术验证SNCA基因作为猪肌间脂肪的分子标记试剂：

反转录试剂盒：PrimeScript^TM RT reagent Kit with gDNA Eraser(PerfectReal Time)，#RR047Q，Takara；

定量PCR试剂：

Fast qPCR Mix，#RR430A，Takara。

相关实验物品去RNase处理：

1)将所有玻璃器皿应用前均用DEPC冲洗侵泡，120℃高压20min，180℃高温烤干2小时以上。

2)将塑料器皿(如：EP管/枪头)使用前需用0.1％DEPC水侵泡过夜，后控干液体，120℃高压20min，烤箱烤干备用。

总RNA提取：

选取50例瘦肉型长白猪肌肉组织和50例脂肪型蓝塘猪肌肉组织，参照Invitrogen试剂盒说明书采用TRIzol法进行，具体步骤如下：

1)取黄豆粒大小的肌肉组织样置于液氮预冷的研钵中，加入液氮迅速研磨成粉；

2)待无明显颗粒存在，转移粉末状组织至1.5mL离心管中；

3)加入1mL Trizol，迅速剧烈震荡，室温孵育10min，使细胞裂解完全；

4)加入200μL氯仿，用力上下摇动90s，放置冰上孵育5min；

5)4℃，12,000r/min离心15min，将上清液转移至另一个新的1.5mL离心管中；

6)加入等体积异丙醇，混匀，静置10min沉淀RNA；

7)4℃，12,000r/min离心10min，弃上清；

8)75％乙醇洗涤沉淀二次，室温下自然干燥5min；

9)加50μL DNase I混合液，75℃溶解5min，-80℃保存备用。

用1.2％琼脂糖凝胶电泳初步检测总RNA的完整性；安捷伦生物分析仪Agilent2100(Agilent Technologies,Santa Clara,CA,USA)进一步检测总RNA的质量和溶度，取1μL样品在70℃变性2min后，进行Agilent 2100检测。

cDNA合成及质量检测

1)总RNA检测合格后立即进行cDNA的合成，反转录使用的是大连宝生物公司的反转录试剂盒(PrimeScript^TM RT reagent Kit with gDNA Eraser)，首先按下表在0.2mLPCR管中配制去基因组反应体系，总反应体系为10μL，然后42℃放置2分钟。

5×gDNA Eraser Buffer	2μL
		gDNA Erase	1μL
总RNA	1000ng
		<![CDATA[RNase-free dH<sub>2</sub>O]]>	加至10μL

2)在上述反应液中依次加入5×PrimeScript Buffer 4μL，PrimeScript RTEnzyme Mix I 1μL，随机6碱基反转录引物0.5μL，及RNase-free dH₂O 4.5μL，共计20μL。37℃反应30分钟，85℃反应15秒终止。然后加入180μL RNase free dH₂O稀释至200μL储存在-20℃，用于后续试验。

定量分析

1)本试验用大连宝生物公司

Fast qPCR Mix试剂进行实时定量PCR分析。每个样品设置3个重复，每对引物设置3个阴性对照。以GAPDH作为内参基因，反应体系及条件如下表：

2×SYBR Premix Ex Taq II	12.5μL
		上游引物(10μM)	1μL
下游引物(10μM)	1μL
		cDNA	1.5μL
<![CDATA[RNase-free dH<sub>2</sub>O]]>	Up to 25μL
		反应体系	25μL

其中，针对SNCA基因的特异性引物包括上游引物和下游引物，上游引物序列为SEQID NO：3，下游引物序列为SEQ ID NO：4。

GAPDH内参基因的上游引物和下游引物，上游引物序列为SEQ ID NO：5，下游引物序列为SEQ ID NO：6。

2)实时定量PCR反应条件：首先95℃预变性30秒；40个循环，每个循环95℃变性5秒，60℃退火30秒；循环结束后记录65～95℃范围内的溶解曲线。

3)基因表达丰度用2^-ΔΔCt法表示，在长白猪和蓝塘猪肌肉组织中SNCA相对表达结果见图3。根据图3可知，SNCA在蓝塘猪肌肉组织中表达量极显著高于长白猪。

上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

<110> 华南农业大学

<120> 与猪肌间脂肪相关的分子标记及其应用

<160> 6

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 140

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> SNCA基因的编码蛋白的氨基酸序列

<400> 1

Met Asp Val Phe Met Lys Gly Leu Ser Lys Ala Lys Glu Gly Val Val

1 5 10 15

Ala Ala Ala Glu Lys Thr Lys Gln Gly Val Ala Glu Ala Ala Gly Lys

20 25 30

Thr Lys Glu Gly Val Leu Tyr Val Gly Ser Lys Thr Lys Glu Gly Val

35 40 45

Val His Gly Val Thr Thr Val Ala Glu Lys Thr Lys Glu Gln Val Thr

50 55 60

Asn Val Gly Glu Ala Val Val Thr Gly Val Thr Ala Val Ala Gln Lys

65 70 75 80

Thr Val Glu Gly Ala Gly Ser Ile Ala Ala Ala Thr Gly Phe Gly Lys

85 90 95

Lys Asp Gln Leu Gly Lys Asn Glu Glu Gly Ala Pro Gln Glu Gly Ile

100 105 110

Leu Glu Asp Met Pro Val Asp Pro Asp Asn Glu Ala Tyr Glu Met Pro

115 120 125

Ser Glu Glu Gly Tyr Gln Asp Tyr Glu Pro Glu Ala

130 135 140

<210> 2

<211> 1699

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> SNCA基因的核苷酸序列

<220>

<222> (365)..(787)

<223> SNCA基因的cDNA序列

<400> 2

gggggcgggg agcggaggag aaggaggagg aagacgagga gaaggaccga gaccactaga 60

aggggaccca ggagaggggg cgagagacag agcgcagcga cgtgggggtg aggtgggtgc 120

ggggaggatc ggagttctca ggagccaagg gaatcagtgt ggtgtaaagg aattcattag 180

ccgggggcgg ggagcggagg agaaggagga ggaagacgag gagaaggacc gagaccacta 240

gaaggggacc caggagaggg ggcgagagac agagcgcagc gacgtggggg tgaggtgggt 300

gcggggagga tcggagttct caggagccaa gggaatcagt gtggtgtaaa ggaattcatt 360

agccatggat gtattcatga aaggactttc aaaagccaag gagggagtcg tggctgctgc 420

tgaaaaaacc aaacagggtg tggcagaagc agcgggaaag acaaaagagg gtgtgctcta 480

tgtaggatcc aaaaccaagg aaggagtggt tcatggtgtg acaacagtgg ctgagaagac 540

caaagagcaa gtgacaaatg ttggagaggc agtggtgaca ggggtgacag cggtagcaca 600

gaagacagtg gaaggagcag ggagcattgc agctgccact ggctttggca aaaaggatca 660

gctgggcaag aatgaagaag gagcccccca ggagggaatt ctggaagata tgcctgtgga 720

tcctgacaat gaagcttatg aaatgccttc cgaggaaggg tatcaggact atgaaccgga 780

agcctaaggg gtatctttgc tcccagtttc ctgagatctg ctgacagacg tgccatcctg 840

tccaagtgcc ccgttcccac ctgcccagtc gtgaccttct ctcaacgctt tcacagtgtc 900

ttttgaagtc ttccatgagc agtgactgga gtatctgtac ccgccccacc tcggttccgg 960

tgcttccctc tcactgaata tatggtagca gggtcttgtg tgctgtggct gttgtggctt 1020

cgaacctaaa atgtttaatg aaaaacacct aagtgactac cacttatttc taaatctatt 1080

ttttgttgct gttgagaaat tgtgagtgat ttactctcct aagatttaaa agtgtctttt 1140

caggattccg tcgaagaata atgatgtatg gcgaaatttg ttaatatata caatacttaa 1200

acatgtgagc atggaactat gcacctataa atattaacta tagggggtat ctttgctccc 1260

agtttcctga gatctgctga cagacgtgcc atcctgtcca agtgccccgt tcccacctgc 1320

ccagtcgtga ccttctctca acgctttcac agtgtctttt gaagtcttcc atgagcagtg 1380

actggagtat ctgtacccgc cccacctcgg ttccggtgct tccctctcac tgaatatatg 1440

gtagcagggt cttgtgtgct gtggctgttg tggcttcgaa cctaaaatgt ttaatgaaaa 1500

acacctaagt gactaccact tatttctaaa tctatttttt gttgctgttg agaaattgtg 1560

agtgatttac tctcctaaga tttaaaagtg tcttttcagg attccgtcga agaataatga 1620

tgtatggcga aatttgttaa tatatacaat acttaaacat gtgagcatgg aactatgcac 1680

ctataaatat taactatag 1699

<210> 3

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 针对SNCA基因的上游引物

<400> 3

ctgggcaaga atgaagaagg 20

<210> 4

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 针对SNCA基因的下游引物

<400> 4

caggaaactg ggagcaaaga 20

<210> 5

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 针对GAPDH内参基因的上游引物

<400> 5

ctgccgcctg gagaaacct 19

<210> 6

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 针对GAPDH内参基因的下游引物

<400> 6

gctgtagcca aattcattgt cg 22

Claims

1.SNCA基因或其编码蛋白作为猪肌间脂肪细胞特异性分子标记的应用，其特征在于：所述SNCA基因为猪的基因，所述的SNCA基因的编码蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。

2.SNCA基因、其编码蛋白或检测所述SNCA基因或其编码蛋白表达的产品的应用，其特征在于：所述应用为下列应用的任一种：

SNCA基因、其编码蛋白或检测所述SNCA基因或其编码蛋白表达的产品在分析猪肌间脂肪含量中的应用；

SNCA基因、其编码蛋白或检测所述SNCA基因或其编码蛋白表达的产品在辅助鉴别猪肌间脂肪组织或肌间脂肪细胞中的应用；

SNCA基因、其编码蛋白或检测所述SNCA基因或其编码蛋白表达的产品在猪肌间脂肪含量调控的分子标记辅助育种中的应用；

SNCA基因、其编码蛋白或检测所述SNCA基因或其编码蛋白表达的产品在提高猪肌间脂肪含量或改善猪肉品质中的应用；

所述SNCA基因为猪的基因，所述的SNCA基因的编码蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。

3.根据权利要求1～2任一项所述的应用，其特征在于：

所述的SNCA基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示，cDNA序列如SEQ ID NO：2中第365bp～787bp所示。

4.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：

所述检测所述SNCA基因或其编码蛋白表达的产品包括利用荧光定量PCR技术、杂交技术或芯片技术检测所述SNCA基因或其编码蛋白表达的产品。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于：

利用荧光定量PCR技术检测SNCA基因表达的产品包括上游引物和下游引物，上游引物为SEQ ID NO：3；下游引物为SEQ ID NO：4。

6.根据权利要求1～2任一项所述的应用，其特征在于：

通过检测所述SNCA基因或其编码蛋白的表达水平，判断猪肌间脂肪含量的高低。

7.一种检测猪肌间脂肪含量高低的方法，其特征在于：包括如下步骤：检测猪中SNCA基因或其编码蛋白的表达水平，根据SNCA基因或其编码蛋白的表达水平判断猪肌间脂肪含量的高低；

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于：

9.根据权利要求7或8所述的方法，其特征在于：具体包括如下步骤：

1）提取猪肌肉组织总RNA；

2）通过反转录随机引物在反转录酶的作用下将SNCA基因反转录成cDNA；

3）在荧光实时定量PCR仪上将步骤2）获得的cDNA进行扩增检测；

4）通过溶解曲线分析，2^-ΔΔCt法进行相对定量。