CN113881596B - 一种用于促进红豆杉扦插生根和生长的多元微生物肥及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明属于微生物技术领域与林木种苗的快速繁殖技术领域，具体公开了一种用于促进红豆杉扦插生根和生长的多元微生物肥及其应用，该多元微生物肥核心是从红豆杉根际土壤中分离得到的两株功能菌——菌株128和菌株45，并添加水溶性辅料，该肥料包括以下重量份的组分：微生物菌剂3‑11份、聚谷氨酸2‑4份、渗透剂2‑7份、尿素1‑3份和黄腐酸钾1‑3份，其中微生物菌剂包括伯克霍尔德氏菌菌剂和/或副伯克霍尔德氏菌菌剂。本发明多元微生物肥可以明显使红豆杉扦插、移栽、生长过程中炭疽病、茎腐病等发病率降低，显著提高红豆杉扦插、育苗、移栽存活效率和植株品质，作为一种非农药非激素肥料，具有广阔的应用前景。

Description

一种用于促进红豆杉扦插生根和生长的多元微生物肥及其 应用

技术领域

本发明属于微生物技术领域与林木种苗的快速繁殖技术领域，更具体地，涉及一种用于促进红豆杉扦插生根和生长的多元微生物肥及其应用。

背景技术

红豆杉中次生代谢产物紫杉醇是全球临床上最优秀的天然抗肿瘤药物，除了具有药用价值外，红豆杉还可以净化空气、制作园艺盆景，极具绿化价值和观赏价值。但红豆杉作为裸子植物，自然条件下生长速度缓慢，红豆杉的人工规模化种植受到了越来越多的关注。红豆杉主要以扦插的方式进行育苗，需要在大棚内度过较长的扶苗期，但与此同时也为病虫害的发生与蔓延创造了“温床”，炭疽病和茎腐病是红豆杉扦插过程中的主要病害，严重影响扦插存活率，一旦染病会造成很大经济损失，已成为发展红豆杉人工种植的一大障碍。

对于育苗技术，目前主要采用生根粉来进行预处理，也有专利开发了促进生根的微生物菌肥，但均无相应的抵抗病原菌功能。现有的一些植物杀菌剂如多菌灵等来控制和防治炭疽病和茎腐病，对生态环境安全构成严重威胁。利用微生物防治植物病害能够很好地避免这一问题。因此，急需一种具有促生根和抑制红豆杉炭疽病和茎腐病发生的防病促生有益菌肥。

本专利旨在提供一种多元微生物专用肥，其中包括对于炭疽病和茎腐病拮抗效果较好的生防菌株，能有效解决红豆杉植株扦插过程中易感病的难题以及在扦插过程中由于根系的大量切除而使得植物代谢平衡受到破坏，影响了根系对水分和营养元素的吸收的问题，有效抑制土壤中炭疽病等多种病原菌的生长和烂根、根腐病、苗枯等病害的发生，提高红豆杉的扦插效率。

发明内容

针对现有技术的缺陷，本发明的目的在于提供一种用于促进红豆杉扦插生根和生长的多元微生物肥及其应用，通过添加筛选的功能菌株吡咯伯克霍尔德氏菌128和/或耐咖啡因伯克霍尔德氏菌45，有效加快扦插之后红豆杉根部细胞的分裂，并能针对性地改善红豆杉扦插过程中的炭疽病和茎腐病，旨在解决红豆杉扦插过程生根慢、生根率低、炭疽病和茎腐病导致的成活率低的问题。

为实现上述目的，本发明提供了一种伯克霍尔德氏菌，所述伯克霍尔德氏菌为吡咯伯克霍尔德氏菌(Burkholderiapyrrocinia)128，所述吡咯伯克霍尔德氏菌128于2021年10月11日保藏于中国典型培养物保藏中心(China Center for Type CultureCollection，简称CCTCC)，地址为湖北省武汉市武昌珞珈山武汉大学，邮编430072，其保藏编号为CCTCCNo:20211258。

按照本发明的另一方面，提供了一种副伯克霍尔德氏菌，所述副伯克霍尔德氏菌为耐咖啡因伯克霍尔德氏菌(Paraburkholderiacaffeinilytica)45，所述耐咖啡因伯克霍尔德氏菌45于2021年10月11日保藏于中国典型培养物保藏中心，其保藏编号为CCTCCNo:20211259。

按照本发明的另一方面，提供了一种用于促进红豆杉扦插生根和生长的多元微生物肥，其包括以下重量份的组分：微生物菌剂3-11份、聚谷氨酸2-4份、渗透剂2-7份、尿素1-3份和黄腐酸钾1-3份，其中所述微生物菌剂包括伯克霍尔德氏菌菌剂和副伯克霍尔德氏菌菌剂中的至少一种。

优选地，所述伯克霍尔德氏菌为吡咯伯克霍尔德氏菌(Burkholderiapyrrocinia)128。

优选地，所述副伯克霍尔德氏菌为耐咖啡因伯克霍尔德氏菌(Paraburkholderiacaffeinilytica)45。

优选地，所述微生物菌剂包括以下重量份的组分：所述伯克霍尔德氏菌菌剂4-6份和所述耐咖啡因伯克霍尔德氏菌菌剂3-5份。

优选地，所述伯克霍尔德氏菌菌剂和所述耐咖啡因伯克霍尔德氏菌菌剂中有效活菌浓度均大于或等于2×10⁹cfu/g。

优选地，所述渗透剂为脂肪醇聚氧乙烯醚和脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠中的至少一种。

优选地，所述伯克霍尔德氏菌菌剂或耐咖啡因伯克霍尔德氏菌菌剂的制备方法包括如下步骤：将菌种子液按10％-15％(v/v)的比例接种于灭菌的发酵培养基中发酵，发酵条件为28℃-30℃、180r/min-250r/min，通气条件为在发酵开始后200m³/h～250m³/h、发酵6h后320m³/h～360m³/h、发酵12h后420m³/h～470m³/h、发酵24h后520m³/h～560m³/h、发酵36小时后为600m³/h～630m³/h，直至发酵终点；发酵过程中定时吸取少量发酵液进行芽孢计数，当95％以上的营养体形成芽孢，且芽孢含量达到3×10⁸cfu/mL以上，终止发酵；添加赋形剂，直接喷雾干燥成菌粉。

进一步优选地，所述发酵培养基包括如下组分：玉米粉13.0g/L，葡萄糖5.0g/L，豆饼粉20.5g/L，鱼粉5.0g/L，CaCO₃ 7.0g/L，(NH₄)₂SO₄ 1.0g/L，K₂HPO₄ 0.3g/L，MgSO₄·7H₂O0.2g/L，MnSO₄·H₂O 0.2g/L。

按照本发明的另一方面，还提供了一种多元微生物肥在红豆杉扦插生根和生长中的应用。

优选地，将红豆杉枝条或种苗放入所述多元微生物肥溶液中进行浸泡处理后，再进行扦插或移栽，并每隔5-7天对红豆杉叶面及根茎部喷施所述多元微生物肥溶液。

总体而言，通过本发明所构思的以上技术方案与现有技术相比，具有以下有益效果：

(1)本发明从红豆杉根际土壤中分离得到两株有益菌，吡咯伯克霍尔德氏菌(Burkholderiapyrrocinia)128和耐咖啡因伯克霍尔德氏菌(Paraburkholderiacaffeinilytica)45，能够分泌抗菌物质，有效抑制土壤中炭疽病病原菌的生长，并具有分泌吲哚乙酸、固氮解磷等促进植物生长的能力。

(2)本发明以筛选的两株有益菌为主要成分，辅以能增强植物辅酶活性的生理活性物质聚谷氨酸、能增强多元复合微生物菌剂渗入植物组织的高效渗透剂、能提供氮源被作物吸收利用的尿素以及能螯合常量及微量营养物质使其更好地为植物利用的黄腐酸钾等物质共同作用，具有改良红豆杉扦插生根过程中土壤生态环境、提高扦插存活效率和植株品质的作用。作为一种非农药非激素肥料，大大减少了农药化合物以及激素对环境和植物所造成的副作用，并大大降低人工种植成本。

(3)本发明通过合理的肥料配比，有效抑制红豆杉扦插过程中的炭疽病和茎腐病等病原菌的感染，从而提高扦插成活率，最终显著提高红豆杉扦插育苗效率，并且解决出根慢、生根少等难题，所得的红豆杉扦插苗根系发达，生长强壮，质量好，适合工厂化生产红豆杉扦插苗，更有利于红豆杉的繁殖，为进一步大量生产紫杉醇提供前提。

(4)本发明多元微生物肥应用于红豆杉扦插或移栽，不仅能促进红豆杉的生根，还能有效抑制病害的发展，增强红豆杉的抗病性能。对提高红豆杉扦插存活率效果尤为显著，存活率达到95％以上，比市面上的杀菌剂化合物处理提高20个百分点以上。

附图说明

图1为本发明实施例1中菌株128、菌株45和大肠杆菌在PDA平板上对炭疽病病原菌拮抗作用结果图；

图2为本发明实施例1中菌株128、菌株45和大肠杆菌在LB平板上对炭疽病病原菌拮抗作用结果图；

图3为本发明实施例1中构建菌株128的16SrDNA序列系统发育进化树；

图4为本发明实施例1中构建菌株45的16SrDNA序列系统发育进化树；

图5为本发明实施例3中田间实验第45天实验组的效果图。

具体实施方式

为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

本发明从红豆杉根际土壤中分离出两种菌株，编号128的菌株经鉴定为吡咯伯克霍尔德氏菌(Burkholderiapyrrocinia)，吡咯伯克霍尔德氏菌128于2021年10月11日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCCNo:20211258；编号45的菌株经鉴定为耐咖啡因伯克霍尔德氏菌(Paraburkholderiacaffeinilytica)，耐咖啡因伯克霍尔德氏菌45于2021年10月11日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCCNo:20211259。

本发明提供的用于促进红豆杉扦插生根和生长的多元微生物肥，包括以下重量份的组分：微生物菌剂3-11份、聚谷氨酸2-4份、渗透剂2-7份、尿素1-3份和黄腐酸钾1-3份，其中微生物菌剂包括伯克霍尔德氏菌菌剂和副伯克霍尔德氏菌菌剂中的至少一种。优选地，所述渗透剂为脂肪醇聚氧乙烯醚(AEO)和脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠(AES)中的至少一种。

一些实施例中，所述伯克霍尔德氏菌为本发明筛选的吡咯伯克霍尔德氏菌(Burkholderiapyrrocinia)128，所述副伯克霍尔德氏菌为本发明筛选的耐咖啡因伯克霍尔德氏菌(Paraburkholderiacaffeinilytica)45。

一些实施例中，所述微生物菌剂包括以下重量份的组分：所述伯克霍尔德氏菌菌剂4-6份和所述耐咖啡因伯克霍尔德氏菌菌剂3-5份。

一些实施例中，所述伯克霍尔德氏菌菌剂和所述耐咖啡因伯克霍尔德氏菌菌剂中有效活菌浓度均大于或等于2×10⁹cfu/g。

本发明中伯克霍尔德氏菌菌剂或耐咖啡因伯克霍尔德氏菌菌剂的制备方法包括如下步骤：将各菌种子液按10％-15％(v/v)的比例分别接种于灭菌的发酵培养基中发酵，发酵条件为28℃-30℃、180r/min-250r/min，通气条件为在发酵开始后200m³/h～250m³/h、发酵6h后320m³/h～360m³/h、发酵12h后420m³/h～470m³/h、发酵24h后520m³/h～560m³/h、发酵36小时后为600m³/h～630m³/h，直至发酵终点；发酵过程中根据菌体生长状况定时吸取少量发酵液，用血球计数板测定芽孢数并进行镜检，当95％以上的营养体形成芽孢，且芽孢含量达到3×10⁸cfu/mL以上，终止发酵；添加赋形剂，直接喷雾干燥成菌粉。

优选地，所述发酵培养基包括如下组分：玉米粉13.0g/L，葡萄糖5.0g/L，豆饼粉20.5g/L，鱼粉5.0g/L，CaCO₃ 7.0g/L，(NH₄)₂SO₄ 1.0g/L，K₂HPO₄ 0.3g/L，MgSO₄·7H₂O 0.2g/L，MnSO₄·H₂O 0.2g/L。

本发明提供的多元微生物肥的制备方法包括如下步骤：将以下重量份的组分：微生物菌剂3-11份、聚谷氨酸2-4份、渗透剂2-7份、尿素1-3份和黄腐酸钾1-3份混合均匀，加入去离子水充分溶解，制得多元微生物液态肥。

本发明制备的多元微生物肥可应用于红豆杉扦插生根和生长中，具体地，在红豆杉枝条扦插时，将红豆杉枝条放入上述多元微生物液态肥中进行浸泡处理，然后按照生产上的常规要求扦插到育苗床中，促进红豆杉枝条生根。在红豆杉苗移栽时，将红豆杉种苗根系放入所述多元微生物液态肥中进行浸泡处理，然后按照生产上的常规要求种植到田间，每隔5-7天对红豆杉叶面及根茎部喷施所述多元微生物肥溶液。本领域技术人员容易理解的，本发明多元微生物肥同样也适用于其他难生根的乔木、灌木、草本植物的扦插或移栽，防治炭疽病和茎腐病等病害，并促进其生根、生长。

本发明多元微生物肥中的吡咯伯克霍尔德氏菌(Burkholderiapyrrocinia)128和耐咖啡因伯克霍尔德氏菌(Paraburkholderiacaffeinilytica)45能分泌抗菌物质——低分子量抗生素以及抗菌蛋白或多肽等活性物质，能显著抑制红豆杉炭疽病和茎腐病病菌，具有抗病、杀菌作用，能增强植物的抗逆性。且吡咯伯克霍尔德氏菌128能迅速抢占扦插条伤口的营养空间生长存活，大量繁殖成为优势菌群，控制植物根际营养和资源，使根腐、立枯、流胶、灰霉等病原菌丧失生存空间和条件。

微生物肥中的载体物质聚谷氨酸、渗透剂、尿素、黄腐酸钾等施入土壤后，菌群代谢产生的植物内源酶和植物生长调节剂经过根系进入植物体内，促进叶片光合作用，利于植物生长。聚谷氨酸还能调节土壤酸碱性，并结合有毒的重金属，将其过滤，整合植物营养、土壤中的有效成分，增强植物的抗病性。聚谷氨酸等的添加可以显著提高根系活力和根系ATP酶活性，促进根系发育，增加根系干重。渗透剂使喷洒在作物机体上的多元微生物肥能快速地润湿、渗透和铺展在枝叶机体的各个角落，使附着在作物上的农药或肥料减少流失，减少对土地的污染，充分发挥药效，促进吸收。

本发明多元微生物肥中各组分对提高红豆杉扦插生根和生长效率的作用相辅相成，可作为根际保护屏障、增强植株产生抗逆性、杀菌作用、促进植株根系生长。

以下结合具体实施例，对上述技术方案详细说明。

以下实施例中，所采用的方法，如无特殊说明，均为本领域常用方法。所使用的菌株(除本发明筛选菌株外)、培养基、生化试剂等材料如无特殊说明，均可从商业途径获得。

实施例1促进红豆杉生根、生长的有益微生物的筛选及鉴定

1、菌株初筛

采样地：湖北省咸宁市红豆杉种植地

根际细菌分离：手动将健康红豆杉的根部松散的土壤去除，将带有少量土壤的根放入含有100mL 0.85％无菌生理盐水且带玻璃珠的三角瓶中，震荡30min，使根际土壤从根部解离，得到混浊液。静置5min，吸取100μL用无菌生理盐水进行梯度稀释。制备完成后吸取100μL不同浓度的稀释液涂平板(LB、TSA培养基)，恒温培养箱培养，进行菌种分离。

细菌纯化：将上述接种完成的平板放置于28℃的培养箱中培养1d-2d，挑选培养基中生长旺盛、形态不同的菌落进行多次纯化并进行编号。然后进行液体培养，制备成甘油菌后，放于-80℃保存。

对分离菌株进行分泌吲哚乙酸(IAA)、解磷能力测定，筛选出潜在功能菌，再从这些菌株里面筛选出能够抑制病原菌的拮抗菌。

通过对分离菌株进行促生指标的性能评价，共获得29株具有分泌IAA能力的菌株、15株具有解磷能力的菌株。从这些功能菌株中进一步筛选病原菌的拮抗菌。

2、抑菌实验复筛

采用平板对峙培养法，从完全被炭疽病病原菌(Colletotrichumgloeosporioides)菌丝覆盖的PDA培养基平板上切下直径为0.6cm的菌丝盘，放置在距新的PDA培养基平板或LB培养基平板边缘2cm处。将细菌悬浮液于平板中间划线，大肠杆菌DH5α作为对照。生长7d后，记录菌落半径。并计算抑菌率(等于(对照组病菌直径-试验组病菌直径)/对照组病菌直径×100％)。实验重复三次。发现，编号128、45菌株均具有较强的抑制红豆杉炭疽病和茎腐病病原菌生长的效果。

通过平板对峙实验发现，菌株128、菌株45均对病原菌有显著抑制作用，其中菌株128抑病能力更强。从图1和图2可以看出，与对照组相比，实验组中病原菌的半径明显减小。表明所筛功能菌株可产生抑菌活性物质。

3、菌株鉴定

对筛选得到的菌株128和菌株45进行16SrDNA测序，序列结果分别如SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示。

接着，对这两株功能菌进行多序列比对，构建系统发育进化树，如图3和图4所示，分析发现，菌株128与Burkholderiapyrrocinia聚为一支，且序列相似度为99.24％，因此鉴定该菌为吡咯伯克霍尔德氏菌(Burkholderiapyrrocinia)128；菌株45与Paraburkholderiacaffeinilytica聚为一支，且序列相似度为99.93％，因此鉴定该菌为耐咖啡因伯克霍尔德氏菌(Paraburkholderiacaffeinilytica)45。

4、菌株128和菌株45菌液喷施防效测定

选用两个月红豆杉扦插苗于温室内采用喷施法进行防效测定。将病原菌、功能菌分别挑取菌株单菌落接种于50mL LB液体培养基中，分别于28℃、180r/min振荡培养24h、12h备用。首先对植株进行喷涂细菌悬液(菌液浓度为10⁶cfu/mL)，24h后喷施病原菌孢子悬浮液，无菌水作为空白对照，每个处理20株，实验重复三次。

红豆杉扦插苗喷施菌液实验结果也表明，本实施例筛选得到的两株功能菌对红豆杉扦插苗的炭疽病和茎腐病具有很好的防治效果。

实施例2多元微生物肥的制备

本实施例将抑菌效果较好的菌株，辅配以聚谷氨酸、渗透剂、尿素和黄腐酸钾，形成多元微生物专用肥。

本实施例使用的发酵培养基包括如下成分：玉米粉13.0g/L，葡萄糖5.0g/L，豆饼粉20.5g/L，鱼粉5.0g/L，CaCO₃ 7.0g/L，(NH₄)₂SO₄ 1.0g/L，K₂HPO₄ 0.3g/L，MgSO₄·7H₂O0.2g/L，MnSO₄·H₂O 0.2g/L，其余成分为水。

取保种的吡咯伯克霍尔德氏菌128和耐咖啡因伯克霍尔德氏菌45的菌液按照10％体积百分比分别接种到灭菌的含有发酵培养基的摇瓶中发酵，发酵条件为：28℃、250r/min的转数下培养，通气条件为：在发酵开始后250m³/hr、发酵6h后为360m³/h、发酵12h后为470m³/h、发酵24h后为560m³/h、发酵36h后为630m³/h，直至发酵终点；发酵过程中根据菌体生长状况定时吸取少量发酵液，用血球计数板测定芽孢数并进行镜检，当95％的营养体形成芽孢，芽孢含量达到3×10⁸cfu/mL，终止发酵，添加占发酵液质量百分比为20％的赋形剂，直接喷雾干燥成菌粉，菌粉有效活菌数：≥2×10⁹cfu/g。

称取50g的吡咯伯克霍尔德氏菌128菌粉、40g的耐咖啡因伯克霍尔德氏菌45菌粉、30g的聚谷氨酸、50g的渗透剂脂肪醇聚氧乙烯醚(AEO)、20g的尿素和20g的黄腐酸钾混合均匀，加入去离子水定容至1L，制得1L的多元微生物液态肥。该多元微生物液态肥可用于红豆杉扦插育苗过程防治炭疽病和茎腐病等病害，并促进其生根和生长。

实施例3田间促抗病促生根生长效果评价

本实施例设计了4个实验组和3个对照组，4个实验组即不添加两种微生物菌粉的纯辅料处理、不添加吡咯伯克霍尔德氏菌128菌粉的处理、不添加耐咖啡因伯克霍尔德氏菌45菌粉的处理以及菌粉和辅料全部添加的处理，4个实验组的肥料成分和3个对照组试剂具体如下：

实验一组：不添加两种微生物菌粉仅添加辅料，称取30g的聚谷氨酸、50g的渗透剂脂肪醇聚氧乙烯醚(AEO)、20g的尿素和20g的黄腐酸钾，加入去离子水至1L混匀，此实施组未加入抗病复合微生物菌剂。

实验二组：添加45菌粉和辅料，称取40g的耐咖啡因伯克霍尔德氏菌45菌粉、30g的聚谷氨酸、50g的渗透剂脂肪醇聚氧乙烯醚(AEO)、20g的尿素和20g的黄腐酸钾，加入去离子水至1L混匀。

实验三组：添加128菌粉和辅料，称取50g的吡咯伯克霍尔德氏菌128菌粉、30g的聚谷氨酸、50g的渗透剂脂肪醇聚氧乙烯醚(AEO)、20g的尿素和20g的黄腐酸钾，加入去离子水至1L混匀。

实验四组：添加128和45两种菌粉和辅料，称取50g的吡咯伯克霍尔德氏菌128菌粉、40g的耐咖啡因伯克霍尔德氏菌45菌粉、30g的聚谷氨酸、50g的渗透剂脂肪醇聚氧乙烯醚(AEO)、20g的尿素和20g的黄腐酸钾，加入去离子水至1L混匀。

对照一组：清水对照。

对照二组：市面上购得的杀菌剂——多菌灵，加去离子水稀释。

对照三组：市面上购得的生根粉，加去离子水稀释。

试验地不施有机肥。试验前组织人员进行整地，设置保护行(0.5m宽)，田间小区留观察道，试验地区划。每个试验点共设7个小区，前后左右每隔5cm扦插一株红豆杉，各处理不设重复。各小区应单灌单排，避免串排串灌。

每组均选择生长状况良好、株高一致的红豆杉扦插苗20条(共140条)，所有组别的应用方法均为：采集半木质化的红豆杉插穗，消毒修剪后，用上述7种处理的溶液进行蘸根处理，浸泡4h；然后扦插育苗，用新鲜的和蘸根的浓度相同的溶液对叶面及根茎部进行喷施，尽量做到均匀周到，每隔5-7天喷雾一次，对照组同样进行补喷处理，根据枝条变化记录枝条生根情况，60天以内观察记录结果。

表1红豆杉扦插生根效率记录表

结合表1和图5，实验结果表明：

(1)各组分(吡咯伯克霍尔德氏菌128、耐咖啡因伯克霍尔德氏菌45和辅料)对红豆杉扦插过程的病害防治及促生根存在明显的协同增效作用。

(2)单一的菌剂对于病害防治有一定的效果，但是总体效果不如实验四组。添加了本发明功能菌株的实验组(即实验二至四组)，病害防治效果均好于清水对照组、多菌灵处理组和实施一组，说明本发明中包含的两种炭疽病病原菌拮抗菌对于红豆杉扦插过程中病害的防治有很好的效果，且抗病效果明显高于市场上杀菌成分多菌灵。

(3)添加了微生物的实验二至四组，相比其他未加微生物的处理组以及对照三组(生根粉处理)均明显能缩短根分化时间，表现出促进生根的效果，说明本发明中的吡咯伯克霍尔德氏菌128和耐咖啡因伯克霍尔德氏菌45对于提高红豆杉扦插枝条的生根量、生根速度有一定的促进效果，加快插穗组织愈合缩短生根时间20％以上，生根率范围在80％～100％。

(4)本发明所述的用于防治红豆杉炭疽病和促其生根的多元微生物专用肥对多种红豆杉炭疽病病害具有防治或抑制作用，有效减少红豆杉扦插过程中植株菌核性根腐病的发生，能显著提高红豆杉扦插成活率，防治效果均达到75％以上。

本领域的技术人员容易理解，以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

SEQUENCE LISTING

<110> 华中科技大学

<120> 一种用于促进红豆杉扦插生根和生长的多元微生物肥及其应用

<160> 2

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 1587

<212> DNA

<213> 吡咯伯克霍尔德氏菌（Burkholderia pyrrocinia）

<400> 1

ccgggccagt gacagcttgc atgcctgcag gtcgacgatt tacggttacc ttgttacgac 60

ttcaccccag tcatgaatcc taccgtggtg accgtcctcc ttgcggttag actagccact 120

tctggtaaaa cccactccca tggtgtgacg ggcggtgtgt acaagacccg ggaacgtatt 180

caccgcggca tgctgatccg cgattactag cgattccagc ttcatgcact cgagttgcag 240

agtgcaatcc ggactacgat cggttttctg ggattagctc cccctcgcgg gttggcaacc 300

ctctgttccg accattgtat gacgtgtgaa gccctaccca taagggccat gaggacttga 360

cgtcatcccc accttcctcc ggtttgtcac cggcagtctc cttagagtgc tcttgcgtag 420

caactaagga caagggttgc gctcgttgcg ggacttaacc caacatctca cgacacgagc 480

tgacgacagc catgcagcac ctgtgtatcg gttctctttc gagcactccc acctctcagc 540

aggattccga ccatgtcaag ggtaggtaag gtttttcgcg ttgcatcgaa ttaatccaca 600

tcatccaccg cttgtgcggg tccccgtcaa ttcctttgag ttttaatctt gcgaccgtac 660

tccccaggcg gtcaacttca cgcgttagct acgttactaa ggaaatgaat ccccaacaac 720

tagttgacat cgtttagggc gtggactacc agggtatcta atcctgtttg ctccccacgc 780

tttcgtgcat gagcgtcagt attggcccca gggggctgcc ttcgccatcg gtattcctcc 840

acatctctac gcatttcact gctacacgtg gaattctacc cccctctgcc atactctagc 900

ctgccagtca ccaatgcagt tcccagggtt gagcccgggg atttcacatc ggtcttagca 960

aaccgcctgc gcacgcttta cgcccagtaa ttccgattaa cgctcgcacc ctacgtatta 1020

ccgcggctgc tggcacgtag ttagccggtg cttattcttc cggtaccgtc atcccccggc 1080

tatattagaa ccaaggattt ctttccggac aaaagtgctt tacaacccga aggccttctt 1140

cacacacgcg gcattgctgg atcaggcttt cgcccattgt ccaaaattcc ccactgctgc 1200

ctcccgtagg agtctgggcc gtgtctcagt cccagtgtgg ctggtcgtcc tctcagacca 1260

gctactgatc gtcgccttgg taggccttta ccccaccaac tagctaatca gccatcggcc 1320

aaccctatag cgcgaggccc gaaggtcccc cgctttcatc cgtagatcgt atgcggtatt 1380

aatccggctt tcgccgggct atcccccact acaggacatg ttccgatgta ttactcaccc 1440

gttcgccact cgccaccagg tgcaagcacc cgtgctgccg ttcgacttgc atgtgtaagg 1500

catgccgcca gcgttcaatc tgagccagga tcaaactcta atctctagag gatccccggg 1560

taccgagctc gaatcgttaa tgcaggc 1587

<210> 2

<211> 1587

<212> DNA

<213> 耐咖啡因伯克霍尔德氏菌（Paraburkholderia caffeinilytica）

<400> 2

gggcatttac cgaattcgag ctcggtaccc ggggatcctc tagagattag agtttgatcc 60

tggctcagat tgaacgctgg cggcatgcct tacacacgca agtcgaacgg cagcacggac 120

ttcggtctgg tggcgagtgg cgaacgggtg agtaatacat cggaacgtgt cctgtagtgg 180

gggatagccc ggcgaaagcc ggattaatac cgcatacgct ctacggagga aaggggggga 240

tcttaggacc tctcgctaca ggggcggccg atggcagatt agctagttgg tggggtaaag 300

gcctaccaag gcgacgatct gtagctggtc tgagaggacg accagccaca ctgggactga 360

gacacggccc agactcctac gggaggcagc agtggggaat tttggacaat gggcgcaagc 420

ctgatccagc aatgccgcgt gtgtgaagaa ggccttcggg ttgtaaagca cttttgtccg 480

gaaagaaaac ctccgcccta atatggtggg gggatgacgg taccggaaga ataagcaccg 540

gctaactacg tgccagcagc cgcggtaata cgtagggtgc aagcgttaat cggaattact 600

gggcgtaaag cgtgcgcagg cggttcgcta agacagatgt gaaatccccg ggcttaacct 660

gggaactgca tttgtgactg gcgggctaga gtatggcaga ggggggtaga attccacgtg 720

tagcagtgaa atgcgtagag atgtggagga ataccgatgg cgaaggcagc cccctgggcc 780

aatactgacg ctcatgcacg aaagcgtggg gagcaaacag gattagatac cctggtagtc 840

cacgccctaa acgatgtcaa ctagttgtcg ggtcttcatt gacttggtaa cgtagctaac 900

gcgtgaagtt gaccgccctg gggagtacgg tcgcaagatt aaaactcaaa ggaattgacg 960

gggacccgca caagcggtgg atgatgtgga ttaattcgat gcaacgcgaa aaaccttacc 1020

tacccttgac atgtatggaa ccctgctgag aggtgggggt gcccgaaagg gagccataac 1080

acaggtgctg catggctgtc gtcagctcgt gtcgtgagat gttgggttaa gtcccgcaac 1140

gagcgcaacc cttgtcccta gttgctacgc aagagcactc tagggagact gccggtgaca 1200

aaccggagga aggtggggat gacgtcaagt cctcatggcc cttatgggta gggcttcaca 1260

cgtcatacaa tggtcggaac agagggttgc caagccgcga ggtggagcca atcccagaaa 1320

accgatcgta gtccggatcg cactctgcaa ctcgagtgcg tgaagctgga atcgctagta 1380

atcgcggatc agcatgccgc ggtgaatacg ttcccgggtc ttgtacacac cgcccgtcac 1440

accatgggag tgggttttac cagaagtggc tagtctaacc gcaaggagga cggtcaccac 1500

ggtaggattc atgactgggg tgaagtcgta acaaggtaac cgtaaatcgt cgacctgcag 1560

gcatgcaagc ttggcacctg gcccccg 1587

Claims (8)

1. 一种副伯克霍尔德氏菌，其特征在于：所述副伯克霍尔德氏菌为耐咖啡因伯克霍尔德氏菌（Paraburkholderia caffeinilytica）45，其保藏编号为CCTCC No:20211259。

2.一种用于促进红豆杉扦插生根和生长的多元微生物肥，其特征在于，包括以下重量份的组分：微生物菌剂3-11份、聚谷氨酸2-4份、渗透剂2-7份、尿素1-3份和黄腐酸钾1-3份，其中所述微生物菌剂包括如权利要求1所述的副伯克霍尔德氏菌。

3. 根据权利要求2所述的多元微生物肥，其特征在于：所述微生物菌剂还包括伯克霍尔德氏菌，所述伯克霍尔德氏菌为吡咯伯克霍尔德氏菌（Burkholderia pyrrocinia）128，其保藏编号为CCTCC No:20211258。

4. 根据权利要求 3所述的多元微生物肥，其特征在于：所述微生物菌剂包括以下重量份的组分：所述伯克霍尔德氏菌菌剂4-6份和所述副伯克霍尔德氏菌菌剂3-5份。

5.根据权利要求3所述的多元微生物肥，其特征在于：所述伯克霍尔德氏菌菌剂和所述副伯克霍尔德氏菌菌剂中有效活菌浓度均大于或等于2×10⁹cfu/g。

6.根据权利要求2所述的多元微生物肥，其特征在于：所述渗透剂为脂肪醇聚氧乙烯醚和脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠中的至少一种。

7.权利要求2-6任一所述的多元微生物肥在红豆杉扦插生根和生长中的应用。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于：将红豆杉枝条或种苗放入所述多元微生物肥溶液中进行浸泡处理后，再进行扦插或移栽，并每隔5-7天对红豆杉叶面及根茎部喷施所述多元微生物肥溶液。