CN113874522A - 固相附着用组合物、利用该组合物的固相载体以及该固相载体的生产方法和使用方法 - Google Patents

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Abstract

本发明以确立如下手段为课题：使基因扩增反应液与将不溶性载体粒子固定化的固相部分直接接触、将其在该固相上展开来进行检测的情况下，抑制检测对象核酸与不溶性载体粒子的结合物中的检测灵敏度的降低，本发明人发现：通过在用于含有不溶性载体粒子以附着于固相的组合物的组成中含有成分(1)水溶性的两性表面活性剂、或、水溶性的非离子性表面活性剂、和成分(2)水性溶剂，从而能够抑制所述的显著的检测灵敏度的降低。本发明提供(A)用于含有胶乳等不溶性载体粒子以附着于固相的组合物、(B)使用了本发明的组合物的固相载体的生产方法、(C)具有包含基本上将水分去除的该固相附着用组合物的样品接触部的固相载体、和(D)该固相载体的使用方法。

Description

固相附着用组合物、利用该组合物的固相载体以及该固相载 体的生产方法和使用方法
技术领域
本发明为涉及用于检测规定的物质的固相载体的发明。本发明特别涉及具有在进行核酸的检测时可直接使样品接触以进行检测的样品接触部的固相载体、其使用方法、生产方法、和用于设置上述固相载体的样品接触部的固相附着用组合物。
背景技术
近年来，以特定的核酸为标的进行检测、与该核酸具有的属性建立联系在疾病的检测、动植物的品种的鉴定、食品的品质和原产地的确定、亲子鉴定、犯罪的证明等各种用途中进行。
该核酸的检测技术通过采用PCR法等核酸扩增法可容易地使本来微量的核酸扩增到可检测量，从而急速地发展，目前为止已提供了各种的技术。
其中，为了兼具核酸检测的简便化和高精度化，提供了在固相上进行该核酸检测的技术(专利文献1、2、3)。
专利文献1的技术是检测采用核酸扩增法得到的双链DNA扩增产物的核酸检测方法，该扩增产物具有对于特定物质的结合部位，是通过进行对于该特定物质的结合，使该DNA扩增产物浓缩，从而进行所期望的核酸检测的技术，将其在展开介质(固相)上进行的方式已作为主要的形态予以公开。
专利文献2的技术是通过在生成核酸扩增产物时使用的引物的一部分引入可抑制或停止聚合酶反应的进行的部位从而提高生成的真正核酸(日文：真正核酸)扩增产物生成的产率、以目标核酸的固相检测的灵敏度提高为目的的技术。
专利文献3的技术是为了进一步提高真正核酸扩增片段生成的产率而在核酸扩增反应中使用了具有与真正核酸扩增产物的核酸延伸区域特异地杂交的标记区域的目标核酸识别探针的方法。
现有技术文献
专利文献
专利文献1：WO2009/034842号国际公开公报
专利文献2：WO2013/038534号国际公开公报
专利文献3：WO2016/129609号国际公开公报
发明内容
发明要解决的课题
专利文献1-3的技术依次显示出固相中的核酸检测技术的进步，分别使目标核酸(检测对象核酸)扩增的收率提高。一般地，固相中的目标核酸(检测对象核酸)的检测在不需要特殊的设备、装置的方面，简便性优异，但在检测灵敏度的方面仍有问题。
为了补偿这点，暂时在固相外的试管中制备将扩增反应液、展开液、胶乳等不溶性载体粒子混合的“展开样品液”，通过在其中浸渍固相(条带)，从而使检测对象核酸与不溶性载体粒子的结合物扩散移动到固相上的检测部，产生检测信号(例如专利文献3的实施例)。
但是，该方案在实用上烦杂。
因此，目标在于使扩增反应液与将不溶性载体粒子固定的固相部分直接接触、使其在该固相上展开来进行检测的简化手段的确立。
用于解决课题的手段
本发明人为了解决上述的课题，进一步进行了研究。其结果发现：通过使用于含有胶乳等不溶性载体粒子以附着于固相的组合物的组成成为规定的内容，从而即使直接将固相浸渍于扩增反应液来进行上述结合物的扩散移动，也可抑制检测灵敏度的降低，充分地获得所期望的检测信号。
本发明提供(A)用于含有胶乳等不溶性载体粒子以附着于固相的组合物(本发明的组合物)、(B)使用了本发明的组合物的固相载体的生产方法(本发明的生产方法)、(C)具有包含将水分基本上除去的该固相附着用组合物的样品接触部的固相载体(本发明的固相载体)、和(D)该固相载体的使用方法(本发明的使用方法)。
(A)本发明的组合物
本发明的组合物是含有下述的成分(1)和(2)的、用于使检测对象核酸可结合的不溶性载体粒子附着于固相的组合物。
(1)水溶性的两性表面活性剂或水溶性的非离子性表面活性剂、
(2)水性溶剂
在本发明的组合物中，通过使上述(1)的表面活性剂为水溶性的两性表面活性剂、特别是以胆酸为母核的水溶性的两性表面活性剂，从而本发明的固相载体的常温下的保存成为可能。
进而，本发明的组合物除此之外，可含有(3)脲或其盐，可与该(3)一起或者分开地含有(4)糖类和/或(5)氨基酸。
成为本发明的组合物的应用对象的“固相”为用于以溶剂作为移动相而展开以进行色谱的固相载体。本发明的组合物是用于使“检测对象核酸可结合的不溶性载体粒子”附着于该固相的组合物。通过使用本发明的组合物，从而能够抑制溶剂展开后的色谱的灵敏度的降低。
(B)本发明的生产方法
本发明的生产方法是核酸检测用的固相的生产方法，其中，将本发明的组合物和检测对象核酸可结合的不溶性载体粒子混合，使该混合物附着于固相，进行干燥。
(C)本发明的固相载体
本发明的固相载体为具有样品接触部和检测部的固相载体，在上述样品接触部中，“本发明的组合物的成分(1)和检测对象核酸可结合的不溶性载体粒子”附着，在上述检测部，“与在固相载体中移动的检测对象核酸与不溶性载体粒子的结合物接触而产生信号的物质”附着。
本发明的固相载体为用于以溶剂作为移动相而展开进行色谱的固相载体。样品接触部为用于样品的接触的固相载体中的机构。
(D)本发明的使用方法
本发明的使用方法是固相载体的使用方法，是在样品接触部中，“本发明的组合物的成分(1)和检测对象核酸可结合的不溶性载体粒子”附着，在检测部，与在固相载体中移动的检测对象核酸和不溶性载体粒子的结合物接触而产生信号的物质附着的固相载体的使用方法，其中，使有可能含有检测对象核酸的样品接触所述样品接触部，检测通过从所述样品接触部在固相载体中移动的、检测对象核酸与不溶性载体粒子的结合物与所述检测部的接触而产生的检测对象核酸的信号。
通过进行本发明的使用方法，从而能够抑制上述样品的固相载体中的移动导致的、上述信号的检测灵敏度的、与现有方法的比较中的降低。该检测灵敏度的降低的抑制基于如上所述在固相载体的样品接触部的制备时使用了本发明的组合物。
发明的效果
根据本发明，提供具有在进行核酸的检测时可直接使样品接触以进行检测的样品接触部的固相载体、其使用方法、生产方法、以及用于设置上述固相载体的样品接触部的固相附着用组合物。
具体实施方式
(A)本发明的组合物
如上所述，本发明的组合物为可含有下述成分(1)和(2)、此外可含有(3)脲或其盐、可与该(3)一起或分别地含有(4)糖类和/或(5)氨基酸的、用于使检测对象核酸可结合的不溶性载体粒子附着于固相的组合物。
(I)检测对象核酸可结合的不溶性载体粒子
检测对象核酸可结合的不溶性载体粒子为具有与本发明的固相载体接触的样品中的检测对象核酸可结合的功能的不溶性载体粒子(以下也称为“结合用载体粒子”)。
对于成为结合用载体粒子的基础的不溶性载体粒子而言，例如可列举出胶乳粒子、二氧化硅粒子、金属胶体粒子等。作为金属胶体，可例示金胶体、银胶体、铜胶体等，优选金胶体。对金属胶体的粒径并无特别限定，大致为1-50nm的范围。金属胶体粒子通过在本发明的固相载体的检测部处凝集，从而能够作为其着色积累的显色信号通过目视容易地捕捉。
胶乳为该不溶性载体粒子的优选的形态。胶乳也称为聚合物乳液，是聚合物在水等水性溶剂中分散而成的，该水性溶剂成为连续相，圆球或近似球的形状的聚合物粒子成为不连续相。所谓胶乳粒子，是构成该胶乳的不连续相的聚合物粒子。在本说明书中，作为包含胶乳粒子的整体的表示，使用“胶乳”。
胶乳例如可列举出聚苯乙烯胶乳、极低羧酸改性胶乳、亲水基局部存在化胶乳等物理吸附用胶乳；羧酸改性胶乳、氨基改性胶乳、羟基改性胶乳、缩水甘油基改性胶乳、醛改性胶乳、酰胺改性胶乳等化学结合用胶乳；着色胶乳、高比重聚苯乙烯胶乳、磁性胶乳等。根据这些胶乳的各自的特性，可在本发明中使用。
作为本发明中优选的胶乳之一，可列举出实施了青色、红色、绿色、橙色等着色的着色胶乳。通过着色胶乳在本发明的固相载体的检测部凝集，从而作为其着色累积的显色信号，能够通过目视容易地捕捉到。
对胶乳粒子的粒径并无特别限定，可从大致0.01-1μm的平均粒径中广泛地选择。
二氧化硅粒子优选与胶乳同样地实施了着色。通过着色二氧化硅粒子在本发明的固相载体的检测部凝集，从而作为其着色累积的显色信号，能够通过目视容易地捕捉到。
对二氧化硅粒子的粒径并无特别限定，可从大致1nm-2μm的平均粒径中广泛地选择。
上述不溶性载体粒子具有检测对象核酸可结合的功能。该功能由与检测对象核酸具有的结合功能的组合确定。即，上述不溶性载体粒子具有的结合功能与后述的检测对象核酸具有的结合功能(以下也称为“对载体粒子结合功能”)成组地起作用，上述不溶性载体粒子的结合功能为该组的第1部分。
作为该成组地起作用的结合功能，例如可列举出氢键、离子键、静电的结合、疏水结合、物理的相互结合等，具体地，可列举出有机化合物-有机化合物相互作用、蛋白质-蛋白质相互作用、蛋白质-核苷酸相互作用、核苷酸-核苷酸相互作用、有机化合物-蛋白质相互作用等。而且，作为更具体的组要素，可列举出亲和素(链霉亲和素)-生物素系统产生的结合功能、使用了标签碱基序列等的核酸之间产生的结合功能、FITC和抗FITC产生的结合功能、抗地谷新配基(DIG)-地谷新配基(DIG)、标签氨基酸序列和特异抗体等的抗原抗体反应产生的结合功能等。
另外，上述不溶性载体粒子可与对于上述的检测对象核酸的结合功能另外地具有与后述的检测部中的结合功能成组的结合功能(以下也称为“对检测部结合功能”)。作为不溶性载体粒子的对检测部结合功能，可列举出与对于上述的检测对象核酸的结合功能同样的结合功能。
结合载体粒子具有上述的结合功能中的任一者或两者作为上述的第1部分。
不溶性载体粒子中的、上述的第1部分的附加可使用与不溶性载体粒子的种类和该部分相符的常规方法进行，由此能够制备结合用载体粒子。
结合用载体粒子优选在使用时与本发明的组合物混合使用。相对于本发明的组合物的结合用载体粒子的添加量可根据载体粒子的种类、其他测定体系的内容自由地选择，并无特别限定，作为组合物中的含量，通常为0.01-2质量％，优选为0.02-1质量％。例如，在实施例中使用的着色胶乳粒子的情形的该含量优选0.01-1质量％，更优选为0.02-0.5质量％，特别优选为0.04-0.2质量％。
(II)本发明的组合物的成分
(1)水溶性的两性表面活性剂或水溶性的非离子性表面活性剂(成分(1))
对上述的水溶性的两性表面活性剂并无特别限定，能够列举出以胆酸为母核的两性表面活性剂、羧酸型两性表面活性剂、磺酸型两性表面活性剂、硫酸酯盐型两性表面活性剂等。这些中，对于以胆酸为母核的水溶性的表面活性剂将后述。
对上述的水溶性的非离子性表面活性剂并无特别限定，能够列举出聚乙二醇型非离子性表面活性剂、多元醇脂肪酸酯型非离子性表面活性剂等。在该水溶性非离子性表面活性剂中，包含实施例中使用的聚氧乙烯山梨糖醇酯(Tween20：注册商标)。
特别地，通过使用以胆酸为母核的水溶性的两性表面活性剂作为成分(1)，从而本发明的固相载体的常温管理成为可能。所谓常温，设想25℃左右，在实用上，为非冷藏状态下的保存。
对以胆酸为母核的水溶性的两性表面活性剂并无特别限定，优选地，可例示CHAPS(3-[(3-胆酰胺基丙基)二甲氨基]丙磺酸盐)、CHAPSO(3-[(3-胆酰胺基丙基)二甲基氨基]-2-羟基丙磺酸盐)。这些以胆酸为母核的水溶性的表面活性剂可单独地配合，也可组合地配合。
以胆酸为母核的水溶性的两性表面活性剂可采用常规方法制造，也可使用市售品。
就本发明的组合物中的上述表面活性剂的含量(作为一种或二种以上的表面活性剂的总量)而言，在没有配合下述成分(3)或(4)的情况下，相对于组合物，优选1.5-20质量％，特别优选为2-14质量％，极其优选为4-12质量％，最优选为8-10质量％。
(2)水性溶剂(成分(2))
水性溶剂为以水作为主体的溶剂，可列举出水、或者各种的缓冲液等。作为该缓冲液，只要在生物化学领域使用，适于结合用载体粒子的保存，不妨碍与样品接触时的结合用载体粒子的结合反应，则并无特别限定。具体地，可列举出磷酸缓冲液、醋酸缓冲液、硼酸缓冲液、Tris盐酸缓冲液、甘氨酸缓冲液、Good's缓冲液等。
本发明的组合物中的水性溶剂的含量为其他含有成分的余量。
(3)脲或其盐(成分(3))
对脲盐的种类并无特别限定，可例示盐酸盐等。
就本发明的组合物中的脲或脲盐的含量而言，相对于组合物，优选5-35质量％，特别优选为8-25质量％，极其优选为12-22质量％，最优选为12-21％。而且，配合该成分(3)时的、表面活性剂(成分(1))的含量(作为一种或二种以上的表面活性剂的总量)优选2-20质量％，特别优选为4-15质量％，极其优选为9-12质量％，最优选为10-12质量％。脲或脲盐特别是通过以与上述的以胆酸为母核的水溶性的两性表面活性剂的组合来使用，从而可提高至少冷藏保存下的固相上的显色信号的显色性，通过与后述的成分(4)和/或成分(5)的组合，能够提高常温保存下的固相上的显色信号的显色性。
本发明的组合物中的水性溶剂的含量为其他含有成分的余量。
(4)糖类(成分(4))
糖类是与下述的氨基酸一起在本发明的组合物中优选追加含有的成分之一。通过在本发明的组合物中将特别是上述的以胆酸为母核的水溶性的两性表面活性剂与糖类组合来配合，从而能够提高至少冷藏保存下的固相上的显色信号的显色性。另外，通过在本发明的组合物中将上述的脲或脲盐和糖类与上述以胆酸为母核的水溶性的两性表面活性剂组合来配合，从而能够提高冷藏保存下和常温保存下的固相上的显色信号的显色性。在本发明的组合物中与上述的以胆酸为母核的水溶性的两性表面活性剂组合来将糖类配合的情况下，也优选进一步与下述的氨基酸组合来配合。再有，在将上述的以胆酸为母核的水溶性的两性表面活性剂以外的水溶性非离子性表面活性剂或水溶性两性表面活性剂配合的情况下，也可将糖分组合来配合，其产生的固相上的显色信号的显色性上的优点目前没有发现。
对本发明的组合物中可配合的糖类并无特别限定，优选二糖类或单糖类。
作为二糖类，可列举出麦芽糖、纤维二糖、乳果糖、乳糖、蔗糖、海藻糖、纤维二糖等，但并不限于这些。这些中，优选海藻糖、蔗糖。
作为单糖类，可列举出D-葡萄糖、D-甘露糖、D-半乳糖、D-果糖等，但并不限于这些。这些中，优选D-葡萄糖。
就本发明的组合物中的糖类的含量而言，相对于组合物，优选1-15质量％，特别优选2.5-12质量％，极其优选为5-11质量％，最优选为5-10质量％。
(5)氨基酸(成分(5))
氨基酸是与上述的糖类一起在本发明的组合物中优选的追加含有成分之一。通过在本发明的组合物中将特别是上述的以胆酸为母核的水溶性的两性表面活性剂与氨基酸组合来配合，从而能够提高至少冷藏保存下的固相上的显色信号的显色性。通过在本发明的组合物中与上述的脲或脲盐一起将氨基酸和糖类与上述的以胆酸为母核的水溶性的两性表面活性剂组合来配合，从而能够提高冷藏保存下和常温保存下的固相上的显色信号的显色性。再有，在将上述的以胆酸为母核的水溶性的两性表面活性剂以外的水溶性非离子性表面活性剂或水溶性两性表面活性剂配合的情况下，可将氨基酸组合来配合，其产生的固相上的显色信号的显色性上的优点目前没有发现。
对本发明的组合物中可配合的氨基酸并无特别限定，例如可列举出L-丙氨酸、L-缬氨酸、L-亮氨酸、L-异亮氨酸、L-蛋氨酸、L-色氨酸、L-苯丙氨酸、L-脯氨酸、甘氨酸、L-丝氨酸、L-苏氨酸、L-半胱氨酸、L-酪氨酸、L-天冬酰胺、L-谷氨酰胺、L-赖氨酸、L-组氨酸、L-精氨酸、L-天冬氨酸、L-谷氨酸等。作为典型例，可列举出L-精氨酸、L-组氨酸、L-天冬氨酸、甘氨酸。
就本发明的组合物中的氨基酸的含量而言，相对于组合物，优选0.1-4质量％，特别优选为0.2-2质量％，最优选为0.4-2质量％。
配合上述糖类(成分(4))和/或氨基酸(成分(5))时的、本发明的组合物中的成分(1)的表面活性剂(优选上述的以胆酸为母核的水溶性的两性表面活性剂)的含量在组合物中没有配合脲或脲盐的情况下，与上述的“表面活性剂的单独配合的情形”的含量相同，在将脲或脲盐组合来配合的情况下，与上述的“将脲或脲盐组合来配合的情形”的含量相同。成分(4)和/或成分(5)与脲或脲盐的组合配合从本发明的固相载体的冷藏保存和常温保存下的显色信号的显色性的提高的观点出发，是特别优选的方案。
(6)其他成分
另外，BSA、酪蛋白、血清、脱脂牛奶等阻滞剂、阿拉伯树胶等稳定化剂、叠氮化钠等防腐剂、螯合剂等添加剂以基本上不损害本发明的效果的质的、量的限度，也能够在本发明的组合物中配合。
(III)其他
本发明的组合物的pH优选4-9左右，特别优选为6-9左右。
(B)本发明的固相载体和生产方法
如上所述，本发明的固相载体为用于进行色谱的载体，至少具有样品接触部和检测部。本发明的固相载体可将其自身用于色谱，也可在固定于其他支承体的状态下使用。
本发明的固相载体至少包含样品接触部和检测部在内连续地具有不阻碍检测对象核酸与不溶性载体粒子的结合反应并且通过该结合反应而生成的检测对象核酸与不溶性载体粒子的结合物(以下也称为“核酸粒子结合物”)自身可扩散的原料。其为在样品接触部生成的核酸粒子结合物可通过溶剂扩散而移动至检测部的形态。作为该原料，可列举出无纺布、滤纸、玻璃纤维、硝基纤维素纤维、聚酯砜过滤器、尼龙过滤器、聚偏氟乙烯过滤器、多孔材料(二氧化硅等)，但并不限于这些，可为单一物质，也可复合化。另外，就该原料部分或固相载体整体的形状而言，可列举出通常的固相色谱中所采用的形状，例如矩形的片状(片状)、长条状、细的棒状等，优选为长条状。
如上所述，样品接触部能够通过在固相载体的预定部位优选涂布使上述的结合对象核酸可结合的不溶性载体粒子分散的本发明的组合物，使其干燥，将水分除去而设置。干燥可以是自然干燥，也可以是热风干燥，可以是加热器干燥，也可以是真空干燥。对固相载体中的样品接触部的位置并无特别限定。作为样品接触部的位置的一例，可列举出固相载体的端部或其附近。该方式在使本发明的固相载体接触有可能包含检测对象核酸的样品的情况下，可使样品接触部向着该样品，容易地使两者接触而优选。样品接触部通常为1处，也可在固相载体上设置2处以上。
检测部在样品接触部中的核酸粒子结合物的生成后，能够通过附加捕捉在固相载体上扩散移动的该核酸粒子结合物、产生捕捉信号的结合功能而设置。该结合功能与核酸粒子结合物的核酸或固相载体粒子具有的结合功能成组地起作用，通过两者接触并结合而产生所期望的捕捉信号。
作为该成组地起作用的结合功能，例如可列举出氢键、离子键、静电的结合、疏水结合、物理的相互结合等，具体地，可列举出有机化合物-有机化合物相互作用、蛋白质-蛋白质相互作用、蛋白质-核苷酸相互作用、核苷酸-核苷酸相互作用、有机化合物-蛋白质相互作用等。而且，作为更具体的组要素，可列举出亲和素(链霉亲和素)-生物素系统产生的结合功能、使用了标签碱基序列等的核酸之间产生的结合功能、FITC和抗FITC产生的结合功能、抗地谷新配基(DIG)-地谷新配基(DIG)、标签氨基酸序列和特异抗体等的抗原抗体反应产生的结合功能等。
作为上述检测部中的结合功能的优选的方式之一，可列举出可与核酸粒子结合物的附加于“核酸”的标签核酸杂交的核酸的使用。所谓可杂交，意指对于与该标签核酸序列一部分或全部互补的核酸粒子结合物，通过标签核酸与检测部的核酸形成双链(杂交)，从而可在检测部捕捉核酸粒子结合物。附加了该可杂交的核酸等捕捉信号产生机构的检测部可为1处，也可设置2处以上，成为通过1次操作进行多种核酸检测的方式。例如，可例示从样品接触部在移动相的下游方向上在1处或者以规定的间隔在2处以上设置检测部的方式。也可成为将为数更多的检测部以规定的间隔设置的阵列的形态。通过采用阵列的形态，能够进行检测对象核酸的完整的检测。另外，在载体上可包括多个划分的阵列区域。这些多个划分的阵列可为相同的内容，也可为不同的内容。
就附加捕捉信号的产生机构作为检测部的方法而言，可列举出维持移动相的固相上的连续性的粘贴、对于成为对于固相的信号产生机构的基础的物质例如上述的可杂交的核酸的、非共价结合性或共价结合性的3'末端或5'末端侧的固相载体的结合等。该核酸结合能够采用现有的方法、测位仪等器具进行。
只要可通过将核酸粒子结合物在检测部捕捉而产生某种信号，则对该信号的种类并无限定。例如，在使用有色的不溶性载体粒子作为不溶性载体粒子的方式中，通过该有色不溶性载体粒子与检测对象核酸结合的核酸粒子结合物被检测部捕捉而累积，从而检测部的颜色变深，能够通过目视或比较简单的机械分析，简便地检测样品中的检测对象核酸的存在。
除了上述以外，本发明的固相载体能够根据需要而具有其他机构。例如，可例示用于将没有被检测部捕捉而移动至下游的成分吸附捕捉的吸附部。
(C)本发明的使用方法
(1)核酸样品和检测对象核酸
本发明的使用方法包含如下工序：使有可能含有检测对象核酸的样品(以下也称为“核酸样品”)接触本发明的固相载体的样品接触部。
检测对象核酸为使用本发明的固相载体应检测其存在和/或量的核酸。对其分子量并无特别限定，从寡核苷酸到聚核苷酸成为检测对象。对核酸的种类也无限定，可以是天然核酸，也可以是人工核酸。进而，可以是单链或双链的DNA、RNA、DNA/RNA杂交种、DNA/RNA嵌合体等。更具体地，除了cDNA、基因组DNA、合成DNA、mRNA、全RNA、hnRNA、合成RNA等天然或合成的核酸以外，能够广泛地使肽核酸、吗啉代核酸、甲基膦酸核酸、S-寡核酸等人工合成核酸成为对象。在这些检测对象核酸中，优选DNA，并且最优选采用核酸扩增法生成的核酸扩增产物。也可根据需要将标记物质附加于检测对象核酸。作为标记，可列举出荧光物质、酶、放射性物质、显色物质等，标记的附加方法能够采用与标记的种类相符的常规方法。
核酸扩增产物通常为本来应成为检测对象核酸的天然核酸的、对于规定部分实施核酸扩增法而生成的人工核酸。对于成为扩增对象的天然核酸并无特别限定，例如，包含针对体质、遗传疾病、癌症等特定疾病的发病、疾病诊断、治疗预后、药物、治疗的选择等成为人类、非人类动物等生物中的基因上的指标的碱基或碱基序列，来自植物的核酸、来自病原菌、病毒等微生物的核酸也包含在检测对象核酸中。在检测对象核酸为RNA的情况下，能够使用RT-PCR法等。另外，也可将核酸扩增产物的规定部分进一步扩增(Nested PCR法等)。在核酸扩增产物等检测对象核酸中具有用于与不溶性载体粒子结合的结合功能(对载体粒子结合功能)是优选的方式，具有用于与本发明的固相载体的检测部结合的结合功能(对检测部结合功能)也是优选的方式。在检测对象核酸中，可只具有对载体粒子结合功能和对检测部结合功能中的一种，也可组合地具有二种。将这些结合功能的具体例与成组的“另一结合功能”一起选择。所谓“另一结合功能”，在对载体粒子结合功能的情况下为不溶性载体粒子具有的结合功能，在对检测部结合功能的情况下为检测部具有的结合功能。
对于该成组地起作用的结合功能，作为(A)(I)中的“不溶性载体粒子中对于检测对象核酸起作用的结合功能”和(B)中的“在检测部成组地起作用的结合功能”，如已经记载那样，检测对象核酸可具有这些组的第2部分。
与上述同样地，该结合功能例如可列举出氢键、离子键、静电的结合、疏水结合、物理的相互结合等，具体地，可列举出有机化合物-有机化合物相互作用、蛋白质-蛋白质相互作用、蛋白质-核苷酸相互作用、核苷酸-核苷酸相互作用、有机化合物-蛋白质相互作用等。而且，作为更具体的组要素，可列举出亲和素(链霉亲和素)-生物素系统产生的结合功能、使用了标签碱基序列等的核酸之间产生的结合功能、FITC和抗FITC抗体产生的结合功能、抗地谷新配基(DIG)抗体-地谷新配基(DIG)、标签氨基酸序列和特异抗体等的抗原抗体反应产生的结合功能等。
作为核酸扩增法，可列举出PCR法或以PCR法为基础的方法(RT-PCR法、Nested PCR法等)、LAMP法、ICAN法等，但并不限于这些。也可以是将来提供的核酸扩增法。这些核酸扩增法中，PCR法或以PCR法为基础的方法是优选的方式之一。
将如上所述得到的样品原料直接或者经过必要的稀释、药品的添加来制备核酸样品。
(2)以核酸扩增产物作为检测对象核酸时的方案
如上所述，作为检测对象核酸优选的方案为核酸扩增产物，核酸扩增产物自身具有1种以上的结合功能是更优选的。对此时的方案并无限定，对于代表性的方案进行说明。
如上所述，作为核酸扩增法，PCR法为优选的方案之一。就PCR法的工序自身而言，能够按照常规方法进行。即，通过使用可将检测对象核酸的全部或一部分扩增的扩增用引物，在耐热性DNA聚合酶的存在下执行PCR的温度循环，从而能够得到所期望的核酸扩增产物。在检测对象核酸为RNA的情况下，能够进行在体系中使逆转录酶共存的RT-PCR。
作为将上述的结合功能赋予核酸扩增产物的方法，可列举出在基因的扩增时使用将所期望的结合功能连结的核酸扩增用引物。反向引物和正向引物这两者可具有结合功能，也可只任一者具有结合功能，优选两者具有结合功能，一者为对载体粒子结合功能，另一者为对检测部结合功能。
该结合功能可例示前面已述的结合功能，作为优选的例子，可列举出亲和素(链霉亲和素)-生物素系统产生的结合功能、FITC与抗FITC抗体产生的结合功能与使用了标签碱基序列等的核酸之间产生的结合功能的组合。这种情况下，作为不溶性载体粒子，优选使用着色粒子。
亲和素(链霉亲和素)-生物素系统产生的结合功能优选用作对载体粒子结合功能。即，通过将使用在5'末端附加了生物素或亲和素(链霉亲和素)的核酸扩增用引物的一者进行核酸扩增而得到的生物素或亲和素(链霉亲和素)结合的核酸扩增产物作为具有对载体粒子结合功能的检测对象核酸，使其与负载有亲和素(链霉亲和素)或生物素的不溶性载体粒子接触，从而能够得到采用亲和素(链霉亲和素)-生物素系统结合的核酸粒子结合物。负载有亲和素(链霉亲和素)或生物素的不溶性载体粒子、特别是胶乳的制备比较简便。与此同时，通过在另一核酸扩增用引物中在5'末端附加作为对检测部结合功能的标签核酸，从而能够得到在上述的采用亲和素(链霉亲和素)-生物素系统结合的核酸粒子结合物中在表面进一步具有标签核酸的核酸粒子结合物。如果上述具有标签核酸的核酸粒子结合物通过水性溶剂的扩散而接触具有可与该标签核酸的一部分或全部杂交的碱基序列的核酸的固相载体的检测部，则标签核酸与检测部的核酸形成双链，该核酸粒子结合物被检测部捕捉。这种情况下，如果对不溶性载体粒子进行着色，则该着色在检测部中累积，着色变得明显直至可目视的程度，其成为样品中的检测对象核酸的存在的信号。
对于具体的标签序列和与其杂交的核酸序列(探针)，例如能够按照专利文献2、3的公开。
另外，如专利文献2中所示那样，通过在生成核酸扩增产物时使用的核酸扩增用引物的标签序列与核酸扩增产物的本体之间引入可抑制或停止聚合酶反应的进行的部位，从而能够提高生成的真正核酸扩增产物生成的产率。进而，如专利文献3中所示那样，通过代替使用上述的附加了5'末端处的标签序列的基因扩增用引物，而使具有与真正核酸扩增产物的核酸延伸区域特异地杂交的标记区域、在3'末端具有标签序列的检测对象核酸识别探针在使用了上述的没有附加5'末端处的标签序列的基因扩增用引物与将亲和素(链霉亲和素)或生物素标记在5'末端附加的基因扩增用引物的核酸扩增反应中共存，使用该探针的标签序列作为对检测部结合功能，从而能够提高生成的真正核酸扩增产物生成的产率。
实施例
以下公开本发明的实施例。只要无特别说明，％为相对于配合对象的质量％。
以下的公开由阳性对照和实施例(包含比较例)构成。
[共同试剂]
下述试剂(a)、(b)为在阳性对照1和实施例中均使用的试剂。
(a)链霉亲和素涂覆着色胶乳(品名SA-Lx：藤仓化成株式会社制造)的0.5％着色胶乳液(以下也称为“着色胶乳液”)
(b)与下述的检测部的捕获DNA探针互补的碱基序列5’-AACGTCCAATAGTAACCAGAGCG(序列号1)的、在5’末端生物素标记的寡DNA(以下也称为“互补链寡核苷酸”)的TE溶液(10mM Tris、1mM EDTA)(以下也称为“互补链寡核苷酸溶液”)
[阳性对照1]
(1)色谱用条带(固相载体)的制作
对于作为固相载体的玻璃棉(Millipore公司制造)(8mm×2mm)，使用采用了日本特开2003-75305号公报中记载的排出单元(喷墨法)的日本ガイシ株式会社GENESHOT(注册商标)测位仪,使由以下所示的碱基序列构成的捕获DNA探针的TE溶液成为点，将其作为固相载体的“检测部”。作为合成寡DNA序列，使用5’-CGCTCTGGTTACTATTGGACGTT(序列号2)，制作展开型色谱用的条带。
(2)展开液
阳性对照1的展开液为下述的配合。在e中将a、b、c、d溶解，制备了阳性对照1的展开液。
Figure BDA0003376157710000161
(3)阳性对照1的检测方法
在上述的阳性对照1的展开液10μl(46.5质量份)中混合着色胶乳液(a)1.5μl(7质量份)和1×互补链寡DNA溶液(b)10μl(46.5质量份)，制成总量为21.5μl的检测用溶液。该检测用溶液形成了上述(a)与(b)的接触产生的核酸粒子结合物(涂覆于着色胶乳的链霉亲和素与在互补链寡DNA中标记的生物素之间的结合产生)。
将该检测用溶液放入管(2ml微管)中，在其中浸渍上述(1)的色谱用条带的端部，使含有上述的核酸粒子结合物的检测用溶液向着上述检测部展开，将该溶液与检测部的捕获DNA的接触产生的互补链DNA之间的双链DNA形成相伴的核酸粒子结合物的、与检测部捕捉相伴的显色的程度用Image Lab(BIO-RAD公司)数值化，将该值作为阳性对照值。
[实施例(包含比较例)]
A.组1
(1)共轭垫(固相载体)的制作
对于作为固相载体的玻璃棉(Millipore公司制造)(8mm×2mm)，将作为上述的阳性对照用制作的色谱用条带的、从长度方向上看到的靠近检测部的一侧的端部到2mm在下述的配合的实施例或比较例的组合物10μl和着色胶乳游离液(a)1.5μl的混合物(该混合物中的着色胶乳粒子的含量为0.065质量％)中浸渍10秒，进而，使用干燥装置(EYELA公司)进行2小时的真空干燥，将该部分作为“样品接触部”，制成各个实施例或比较例的固相载体。
(2)试验方法
对于上述(1)中制作的实施例的固相载体，将在空气中在4℃或37℃下保存了2周的产物(以下分别称为“4℃产品”和“37℃产品”)作为试验品，在常温下将互补链寡核苷酸溶液(b)20μl作为核酸样品，进行了与该固相载体的样品接触部采用浸渍的接触。将4℃产品作为固相载体的冷藏保存模型，将37℃产品作为常温保存模型(加速试验)定位。在常温下进一步放置20分钟，充分地进行固相载体中的溶剂扩散，将检测部中的显色的程度用Image Lab(BIO-RAD公司)数值化，将该值作为相对于上述的阳性对照值的百分率进行了评价。
(实施例1)
实施例1的组合物为下述的配合。
Figure BDA0003376157710000181
＜制法等＞
在e中将a、b、c、d溶解，制备实施例1的组合物(10μl)，在其中加入着色胶乳液(a)(1.5μl)并搅拌，使其附着于固相载体的样品接触部，按照上述的要领制作使用了实施例1的组合物的固相载体。
＜试验结果＞
4℃产品的显色程度为100％，37℃产品的显色程度为80-90％。
(实施例2)
实施例2的组合物为下述的配合。
Figure BDA0003376157710000182
＜制法等＞
在e中将a、b、c、d溶解，制备实施例2的组合物(10μl)，在其中加入着色胶乳液(a)(1.5μl)并搅拌，使其附着于固相载体的样品接触部，按照上述的要领制作使用了实施例2的组合物的固相载体。
＜试验结果＞
4℃产品的显色程度为100％，37℃产品的显色程度为80-90％。
(实施例3)
实施例3的组合物为下述的配合。
Figure BDA0003376157710000191
＜制法等＞
在e中将a、b、c、d溶解，制备实施例3的组合物(10μl)，在其中加入着色胶乳液(a)(1.5μl)并搅拌，使其附着于固相载体的样品接触部，按照上述的要领制作使用了实施例3的组合物的固相载体。
＜试验结果＞
4℃产品的显色程度为100％，37℃产品的显色程度为80-90％。
(实施例4)
实施例4的组合物为下述的配合。
Figure BDA0003376157710000192
＜制法等＞
在e中将a、b、c、d溶解，制备实施例4的组合物(10μl)，在其中加入着色胶乳液(a)(1.5μl)并搅拌，使其附着于固相载体的样品接触部，按照上述的要领制作使用了实施例4的组合物的固相载体。
＜试验结果＞
4℃产品的显色程度为100％，37℃产品的显色程度为80-90％。
(实施例5)
实施例5的组合物为下述的配合。
Figure BDA0003376157710000201
＜制法等＞
在g中将a、b、c、d、e、f溶解，制备实施例5的组合物(10μl)，在其中加入着色胶乳液(a)(1.5μl)并搅拌，使其附着于固相载体的样品接触部，按照上述的要领制作使用了实施例5的组合物的固相载体。
＜试验结果＞
4℃产品的显色程度为100％，37℃产品的显色程度也为100％。
(实施例6)
实施例6的组合物为下述的配合。
Figure BDA0003376157710000202
＜制法等＞
在g中将a、b、c、d、e、f溶解，制备实施例6的组合物(10μl)，在其中加入着色胶乳液(a)(1.5μl)并搅拌，使其附着于固相载体的样品接触部，按照上述的要领制作使用了实施例6的组合物的固相载体。
＜试验结果＞
4℃产品的显色程度为100％，37℃产品的显色程度也为100％。
(实施例7)
实施例7的组合物为下述的配合。
Figure BDA0003376157710000211
＜制法等＞
在g中将a、b、c、d、e、f溶解，制备实施例7的组合物(10μl)，在其中加入着色胶乳液(a)(1.5μl)并搅拌，使其附着于固相载体的样品接触部，按照上述的要领制作使用了实施例7的组合物的固相载体。
＜试验结果＞
4℃产品的显色程度为100％，37℃产品的显色程度也为100％。
(实施例8)
实施例8的组合物为下述的配合。
Figure BDA0003376157710000212
Figure BDA0003376157710000221
＜制法等＞
在g中将a、b、c、d、e、f溶解，制备实施例8的组合物(10μl)，向其中加入着色胶乳液(a)(1.5μl)并搅拌，使其附着于固相载体的样品接触部，按照上述的要领制作使用了实施例8的组合物的固相载体。
＜试验结果＞
4℃产品的显色程度为100％，37℃产品的显色程度也为100％。
(实施例9)
实施例9的组合物为下述的配合。
Figure BDA0003376157710000222
＜制法等＞
在g中将a、b、c、d、e、f溶解，制备实施例9的组合物(10μl)，向其中加入着色胶乳液(a)(1.5μl)并搅拌，使其附着于固相载体的样品接触部，按照上述的要领制作使用了实施例9的组合物的固相载体。
＜试验结果＞
4℃产品的显色程度为100％，37℃产品的显色程度也为100％。
(实施例10)
实施例10的组合物为下述的配合。
Figure BDA0003376157710000231
＜制法等＞
在g中将a、b、c、d、e、f溶解，制备实施例10的组合物(10μl)，向其中加入着色胶乳液(a)(1.5μl)并搅拌，使其附着于固相载体的样品接触部，按照上述的要领制作使用了实施例10的组合物的固相载体。
＜试验结果＞
4℃产品的显色程度为100％，37℃产品的显色程度也为100％。
(实施例11)
实施例11的组合物为下述的配合。
Figure BDA0003376157710000232
＜制法等＞
在e中将a、b、c、d溶解，制备实施例11的组合物(10μl)，向其中加入着色胶乳液(a)(1.5μl)并搅拌，使其附着于固相载体的样品接触部，按照上述的要领制作使用了实施例11的组合物的固相载体。
＜试验结果＞
4℃产品的显色程度为100％，37℃产品的显色程度为0％。
B.组2
根据上述组1的实施例的结果，进一步扩大对象，进行了研究。本组2的试验品中的“共轭垫(固相载体)的制作方法”与组1相同。另外，按照与组1相同的要领，将“4℃产品”(冷藏保存模型)和“37℃产品”(常温保存模型)作为试验品(实施例或比较例)。各试验品的制作按照组1的实施例1-11进行。在试验中，在常温下，将互补链寡核苷酸溶液(b)20μl作为核酸样品，对该固相载体的样品接触部进行采用浸渍的接触，在常温下进一步放置20分钟，充分地进行了固相载体中的溶剂扩散。然后，对于检测部中的显色的程度，基于目视观察进行了评价。评价标准如下所述。
＜评价标准＞
另外进行使用了上述实施例1的配方的组合物的4℃产品的固相上的显色，将其作为阳性对照2，进行了表记为下述◎、○、△、×的框架的评价。
◎：与阳性对照2相比，显色性高
○：为与阳性对照2同等的显色性
△：与阳性对照2相比，显色性稍差，但对采用目视的显色信号的识别没有障碍
×：显色性差，对显色信号的识别有障碍
＜实施例12-17、比较例1-2：CHAPS单独例＞
实施例12的组合物为下述的配合。
Figure BDA0003376157710000241
实施例13-17和比较例1-2的组合物的配合除了CHAPS的配合量以外，与实施例12相同。将这些实施例和比较例中的CHAPS的配合量和评价结果示于表1中。
【表1】
CHAPS量 4℃产品评价 37℃产品评价
实施例12 2％ ○ ○
实施例13 4％ ○ ○
实施例14 8％ ○ ○
实施例15 10％ ○ ○
实施例16 12％ ○ ○
实施例17 14％ ○ ○
比较例1 0.5％ × ×
比较例2 1％ × ×
<实施例18-22、比较例3-4：CHAPSO单独例>
实施例18的组合物为下述的配合。
Figure BDA0003376157710000251
实施例19-22和比较例3-4的组合物的配合除了CHAPSO的配合量以外，与实施例18相同。将这些实施例和比较例中的CHAPSO的配合量和评价结果示于表2中。
【表2】
CHA P SO量 4℃产品评价 37℃产品评价
实施例18 2％ ○ ○
实施例19 4％ ○ △
实施例20 8％ ○ ○
实施例21 10％ ○ ○
实施例22 12％ ○ ○
比较例3 0.5％ × ×
比较例4 1％ × ×
<实施例23-25、比较例5：CHAPS·CHAPSO混合例>
实施例23的组合物为下述的配合。
Figure BDA0003376157710000261
实施例24-25和比较例5的组合物的配合除了CHAPS和CHAPSO的配合量以外，与实施例23相同。将这些实施例和比较例中的CHAPS和CHAPSO的配合量与评价结果示于表3中。
【表3】
CHAPS量 CHAPSO量 4℃产品评价 37℃产品评价
实施例23 1％ 1％ △ △
实施例24 2％ 2％ ○ ○
实施例25 4％ 4％ ○ ○
比较例5 0.5％ 0.5％ × ×
根据上述的实施例12-25的结果可知，将作为以胆酸为母核的水溶性的两面活性剂的、CHAPS和CHAPSO单独或组合地在本发明的组合物中在没有其他实质性的追加成分下配合的情况下，在冷藏保存下或常温下也能将本发明的固相载体在可实用的状态下保存。
<实施例26-30：CHAPS固定·脲改变例>
实施例26的组合物为下述的配合。
Figure BDA0003376157710000262
实施例27-30的组合物的配合除了脲的配合量以外，与实施例26相同。将这些实施例中的脲的配合量和评价结果示于表4中。应予说明，使脲的配合量为21质量％的例子(实施例1的配方：阳性对照2)的37℃产品的本试验中的评价与4℃产品相同，为“○”。
【表4】
脲量 4℃产品评价 37℃产品评价
实施例26 8％ ○ ○
实施例27 9％ ○ ○
实施例28 12％ ○ ○
实施例29 30％ ○ △
实施例30 31％ ○ △
<实施例31-34、比较例6：脲固定、CHAPS改变例>
实施例31的组合物为下述的配合。
Figure BDA0003376157710000271
实施例32-34和比较例6的组合物的配合除了CHAPS的配合量以外，与实施例31相同。将这些实施例和比较例中的CHAPS的配合量和评价结果示于表5中。
【表5】
CHAPS量 4℃产品评价 37℃产品评价
实施例31 2％ △ △
实施例32 4％ ○ ○
实施例33 10％ ◎ ○
实施例34 11％ ◎ ○
比较例6 1％ × ×
根据上述的实施例26-34的结果可知，在将脲组合而配合的情况下，可进一步提高冷藏保存下的固相上的显色信号的显色性。
<实施例35-45：氨基酸·糖的配合例>
(实施例35)
实施例35的组合物为下述的配合，4℃产品的评价为“◎”，37℃产品的评价为“○”。
Figure BDA0003376157710000281
(实施例36)
实施例36的组合物为下述的配合，4℃产品的评价为“◎”，37℃产品的评价也为“◎”。
Figure BDA0003376157710000282
(实施例37)
实施例37的组合物为下述的配合，4℃产品的评价为“◎”，37℃产品的评价也为“◎”。
Figure BDA0003376157710000283
(实施例38)
实施例38的组合物为下述的配合，4℃产品的评价为“◎”，37℃产品的评价为“○”。
Figure BDA0003376157710000291
(实施例39)
实施例39的组合物为下述的配合，4℃产品的评价为“◎”，37℃产品的评价为“○”。
Figure BDA0003376157710000292
(实施例40)
实施例40的组合物为下述的配合，4℃产品的评价为“◎”，37℃产品的评价为“○”。
Figure BDA0003376157710000293
(实施例41)
实施例41的组合物为下述的配合，4℃产品的评价为“◎”，37℃产品的评价为“○”。
Figure BDA0003376157710000301
(实施例42)
实施例42的组合物为下述的配合，4℃产品的评价为“◎”，37℃产品的评价为“○”。
Figure BDA0003376157710000302
(实施例43)
实施例43的组合物为下述的配合，4℃产品的评价为“◎”，37℃产品的评价为“○”。
Figure BDA0003376157710000303
(实施例44)
实施例44的组合物为下述的配合，4℃产品的评价为“◎”，37℃产品的评价为“○”。
Figure BDA0003376157710000311
(实施例45)
实施例45的组合物为下述的配合，4℃产品的评价为“◎”，37℃产品的评价为“○”。
Figure BDA0003376157710000312
根据上述的实施例35-45的结果可知，在将糖类和/或氨基酸组合而配合的情况下，可进一步提高至少冷藏保存下的固相上的显色信号的显色性，在常温保存下的上述显色信号的显色性的提高例也在脲配合例(实施例36、37)中发现。
＜实施例46-47：Tween20的配合例＞
(实施例46)
实施例46的组合物为下述的配合，4℃产品的评价为“○”，37℃产品的评价为“×”。
Figure BDA0003376157710000313
(实施例47)
实施例47的组合物为下述的配合，4℃产品的评价为“○”，37℃产品的评价为“×”。
Figure BDA0003376157710000321
根据上述的实施例46-47可知，在使用了水溶性的非离子性表面活性剂的情况下，在冷藏保存下在固相上可充分地确认显色信号。但是，常温保存下的显色信号非常弱，再次确认了对于常温保存而言实用困难。
序列表
<110> 藤仓化成株式会社
株式会社TBA
<120> 固相附着用组合物、利用该组合物的固相载体以及该固相载体的生产方法和使用方法
<130> PFKK12PCT
<150> JP 2019-100728
<151> 2019-05-29
<160> 2
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 寡DNA
<400> 1
aacgtccaat agtaaccaga gcg 23
<210> 2
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 寡DNA
<400> 2
cgctctggtt actattggac gtt 23

Claims (18)

1.用于使检测对象核酸可结合的不溶性载体粒子附着于固相的组合物，其含有下述的成分(1)和(2)：
(1)水溶性的两性表面活性剂、或、水溶性的非离子性表面活性剂、
(2)水性溶剂。
2.根据权利要求1所述的组合物，其中，所述两性表面活性剂为以胆酸作为母核的水溶性的两性表面活性剂。
3.根据权利要求1或2所述的组合物，其中，(1)以胆酸作为母核的水溶性的两性表面活性剂为CHAPS(3-[(3-胆酰胺基丙基)二甲氨基]丙磺酸盐)、或、CHAPSO(3-[(3-胆酰胺基丙基)二甲氨基]-2-羟基丙磺酸盐)。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的组合物，其还含有(3)脲或其盐。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的组合物，其还含有(4)糖类和/或(5)氨基酸。
6.根据权利要求5所述的组合物，其中，(4)糖类为海藻糖、D-葡萄糖、或者蔗糖。
7.根据权利要求5或6所述的组合物，其中，(5)氨基酸为L-精氨酸、L-组氨酸、L-天冬氨酸、或者甘氨酸。
8.核酸检测用的固相的生产方法，其中，将根据权利要求1-7中任一项所述的组合物和检测对象核酸可结合的不溶性载体粒子混合，使该混合物附着于固相，干燥。
9.根据权利要求8所述的生产方法，其中，不溶性载体粒子为胶乳粒子。
10.固相载体，为具有样品接触部和检测部的固相载体，在所述样品接触部中，水溶性的两性表面活性剂或者水溶性的非离子性表面活性剂和检测对象核酸可结合的不溶性载体粒子附着，在所述检测部，附着有在固相载体中移动的检测对象核酸和不溶性载体粒子的结合物接触而产生信号的物质。
11.根据权利要求10所述的固相载体，其中，在所述固相载体的端部或其附近具有固相载体的样品接触部。
12.根据权利要求10或11所述的固相载体，其中，所述两性表面活性剂为以胆酸作为母核的水溶性的两性表面活性剂。
13.固相载体的使用方法，是在样品接触部中，水溶性的两性表面活性剂或者水溶性的非离子性表面活性剂和检测对象核酸可结合的不溶性载体粒子附着，在检测部附着有在固相载体中移动的检测对象核酸和不溶性载体粒子的结合物接触而产生信号的物质的固相载体的使用方法，其中，使有可能含有检测对象核酸的样品接触所述样品接触部，检测通过从所述样品接触部在固相载体中移动的、检测对象核酸和不溶性载体粒子的结合物与所述检测部的接触而产生的检测对象核酸的信号。
14.根据权利要求13所述的固相载体的使用方法，其中，检测对象核酸具有用于与不溶性载体粒子结合的结合功能。
15.根据权利要求13或14所述的固相载体的使用方法，其中，检测对象核酸具有用于与固相载体的检测部结合的结合功能。
16.根据权利要求13-15中任一项所述的固相载体的使用方法，其中，检测对象核酸为采用核酸扩增法生成的核酸扩增产物。
17.根据权利要求16所述的固相载体的使用方法，其中，核酸扩增法为PCR法或以PCR法为基础的方法。
18.根据权利要求13-17中任一项所述的固相载体的使用方法，其中，所述两性表面活性剂为以胆酸作为母核的水溶性的两性表面活性剂。
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