CN113866412A - 一种灵敏的总前列腺特异性抗原检测试剂盒 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及生化检测技术领域，具体涉及一种灵敏的总前列腺特异性抗原检测试剂盒。所述检测试剂盒包括试剂R1和试剂R2，试剂R1中含有缓冲液、复合稳定剂、复配表面活性剂溶液、ε‑聚赖氨酸盐酸盐，试剂R2中含有缓冲液、兔抗人PSA多克隆抗体包被的胶乳颗粒溶液、复配表面活性剂溶液、ε‑聚赖氨酸盐酸盐。所述复合稳定剂包含明胶、聚乙二醇、海藻糖、L‑阿拉伯糖、氯化盐。本发明显著改善了试剂的稳定性和线性范围，显著增强了试剂的灵敏度和准确度。
Description
技术领域
本发明属于生化检测技术领域，具体涉及一种灵敏的总前列腺特异性抗原检测试剂盒。
背景技术
前列腺特异抗原(PSA，Prostate specific antigen)是前列腺相关的一种抗原。PSA是一种分子量为32kD的单链糖蛋白，由前列腺上皮细胞分泌产生，是一种酷似糜蛋白酶的丝氨酸蛋白酶。正常情况下PSA泌入精液，在精囊包的分裂和精液的液化上发挥生理作用。正常时仅有极低水平的PSA存在于血液中，血清中PSA浓度的增加预示前列腺发生病理变化或受到创伤。在绝大多数前列腺癌患者中PSA水平升高。前列腺抗原的主要生理功能是可防止精液凝固，具有极高的组织器官特异性，是目前诊断前列腺癌的首选标志物。
临床中对于总前列腺特异性抗原(PSA)检测主要有前列腺按摩、超声检验和穿刺活检等，但这几种方法不易量化、易受操作者技术影响、灵敏度及患者的接受度低。
发明内容
本发明提供一种灵敏的总前列腺特异性抗原检测试剂盒，采用优化的胶乳增强免疫比浊法，有效增强了试剂的分析灵敏度和抗干扰能力，具有灵敏度高，稳定性好、线性范围宽等特点。
为解决上述技术问题，本发明提供技术方案如下：
一种灵敏的总前列腺特异性抗原检测试剂盒，包括试剂R1和试剂R2，所述试剂R1的成分和含量为：
所述试剂R2的成分和含量为：
所述复合稳定剂的成分和含量为：
进一步的，所述缓冲液为ADA-TAPSO缓冲液、磷酸盐缓冲液、甘氨酸缓冲液中的一种。
进一步的，所述复配表面活性剂溶液的成分及含量如下：
辛基酚聚氧乙烯醚基二甲基十四烷基氯化铵 5-15g/L，
聚氧丙烯聚氧乙烯甘油醚 10-30g/L，
十六醇乳酸酯 3-10g/L。
进一步的，所述聚乙二醇为聚乙二醇6000、聚乙二醇8000、聚乙二醇10000中的一种。
进一步的，所述氯化盐为氯化锂、氯化钠、氯化钙中的一种。
进一步的，所述兔抗人PSA多克隆抗体包被的胶乳颗粒溶液的制备步骤如下：
步骤1：取72nm羧基胶乳颗粒0.3-0.7mg、188nm羧基胶乳颗粒0.1-0.4mg，加入ADA-TAPSO溶液5mL，搅拌混匀，得羧基胶乳颗粒缓冲体系；
步骤2：于步骤1得到的羧基胶乳颗粒缓冲体系中分别加入0.5-1mg EDC，25℃振荡12h；
步骤3：在步骤2所得液体中加入兔抗人PSA多克隆抗体，37℃振荡5-8h，加入BSA溶液，25℃振荡10-12h，然后超声30min-50min，最终得到兔抗人PSA多克隆抗体包被的胶乳颗粒溶液。
进一步的，该试剂盒使用全自动生化分析仪利用终点法进行测定，检测主波长为570nm，R1试剂和R2试剂的比例为3:1。
本发明检测的基本原理为：将兔抗人PSA多克隆抗体吸附于乳胶颗粒上，通过孵育使稀释的人血清中的特异性抗原与抗体结合，孵育后产生的吸光度变化量与检测样本中的特异性抗原浓度成正比。
本发明的有益效果在于：
(1)本发明采用优化的胶乳增强免疫比浊法，无需离心、超声，简单方便，且偶联效率和分析灵敏度更高。采用72nm与188nm粒径羧基微球联用，通过科学配比，大大增强了试剂盒的反应灵敏度和线性范围，使得试剂盒的重复性和抗干扰能力更强。
(2)采用复配表面活性剂溶液及复合稳定剂，通过科学配比，促进并维持抗体稳定，防止体系浑浊，显著增强了试剂盒的稳定性。
(3)该试剂盒操作简便快速，适用于自动化分析，使用方便，完全可以满足临床需要。
附图说明
图1为本发明的实施例1-3与对比例1的试剂盒稳定性对比曲线图。
具体实施方式
为了使本发明实现的技术手段、达成目的与功效易于明白了解，下面结合具体实施例对本发明进行进一步说明：
实施例1
本实施例所提供的总前列腺特异性抗原检测试剂盒，包括试剂R1和试剂R2：
(1)试剂R1的组分包括：
所述试剂R2的成分和含量为：
(2)本实施例试剂盒的使用方法：
本实施例描述的总前列腺特异性抗原检测试剂盒，在使用时采用具有双试剂功能的全自动生化分析仪，如日立7180全自动分析仪等，利用终点法进行测定。将R1和R2按照3:1的比例放置到对应的试剂位上，在样品盘的对应位置放置好蒸馏水、标准品和样本，操作如表1。
表1试剂检测方法表
计算：总前列腺特异性抗原(PSA)含量(ng/mL)＝(ΔA测定÷ΔA标准)×C标准
实施例2
本实施例所描述的总前列腺特异性抗原检测试剂盒，包括试剂R1和试剂R2(检测方法同实施例1)：
试剂R1的组分包括：
所述试剂R2的成分和含量为：
实施例3
本实施例所描述的总前列腺特异性抗原检测试剂盒，包试剂R1和试剂R2(检测方法同实施例1)：
试剂R1的组分包括：
所述试剂R2的成分和含量为：
对比例1
本对比例采用市场常见的国家食品药品监督管理局认可的总前列腺特异性抗原检测试剂盒。该试剂盒未采用双胶乳颗粒联用，也未添加复合稳定剂和复配表面活性剂溶液。
试验一准确度对比试验
取具有溯源性的高值质控物(靶值54.11ng/mL)、低值质控物(靶值9.05ng/mL)各一份，分别用实施例1-3和对比例1-3配方配制试剂，制得总前列腺特异性抗原检测试剂盒进行对照检测，各检测5次，计算平均值，与质控物靶值进行对照。结果见表1-1(单位：ng/mL)及表1-2(单位：ng/mL)。
表1-1高值质控物准确度试验数据表
| 实施例1 | 实施例2 | 实施例3 | 对比例1 | |
| 最大值 | 54.18 | 54.14 | 54.13 | 60.78 |
| 最小值 | 53.83 | 53.90 | 53.78 | 55.48 |
| 平均值 | 54.06 | 54.11 | 54.13 | 58.91 |
表1-2低值质控物准确度试验数据表
| 实施例1 | 实施例2 | 实施例3 | 对比例1 | |
| 最大值 | 9.12 | 9.14 | 9.08 | 9.29 |
| 最小值 | 8.88 | 8.83 | 8.87 | 8.68 |
| 平均值 | 9.10 | 9.07 | 9.05 | 8.78 |
由表1-1及表1-2中检测结果可知，与对比例1相比，实施例1、实施例2、实施例3配方配制试剂盒检测数值更接近靶值，平均值与靶值的差值在0.5以内，具有更高的准确度，这说明本发明通过优化总前列腺特异性抗原抗体包被胶乳颗粒的制备方法，添加复配表面活性剂溶液和复合稳定剂，科学配比，优化了反应体系，极大的提高了试剂的准确度。
试验二试剂灵敏度的对比试验
取具有溯源性的校准品由低到高稀释出7个浓度样本，分别用实施例1-3和对比例1配方配制试剂，制得总前列腺特异性抗原检测试剂盒进行对照检测，将检测结果与理论浓度相比较，结果见表2(单位：ng/mL)。
表2灵敏度对比试验数据表
| 理论浓度 | 实施例1 | 实施例2 | 实施例3 | 对比例1 |
| 0.5 | 0.55 | 0.48 | 0.55 | 0.10 |
| 1 | 1.02 | 0.98 | 1.04 | 0.76 |
| 10 | 10.06 | 10.08 | 9.91 | 9.00 |
| 50 | 50.13 | 50.18 | 50.10 | 50.55 |
| 100 | 100.60 | 100.63 | 100.47 | 100.42 |
| 150 | 80.74 | 80.75 | 80.77 | 71.88 |
| 300 | 300.63 | 300.12 | 300.78 | 246.36 |
由表2中检测结果可知，在样本浓度低至0.5ng/mL时，对比例1检测值为0.10，而实施例1、实施例2、实施例3配方配制试剂仍可以检测出样本的准确值；并且与对比例1相比，实施例1、实施例2、实施例3配方配制试剂检测接近线性下限的低值样本(0.5-10ng/mL)时的准确度更高。另外，在样本浓度在线性上限300ng/mL时，对比例1检测值为246.36ng/mL，测试值明显偏低，而实施例1、实施例2、实施例3配方配制试剂仍可以检测出样本的准确值，这表明实施例1、实施例2、实施例3配方配制试剂拥有更高的分析灵敏度、准确度及更宽的线性范围。因此，这说明本发明通过优化总前列腺特异性抗原抗体包被胶乳颗粒的制备方法，添加复配表面活性剂溶液和复合稳定剂，科学配比，优化了反应体系，极大的提高了试剂盒的分析灵敏度，增大了试剂盒的线性范围。
试验三试剂的稳定性对比试验
对实施例1-3和对比例1中试剂盒，分别均匀分装13组，每组的试剂量R1为18mL，R2为6mL，放置到2-8℃冰箱中，每月的同一天取出一组试剂检测总前列腺特异性抗原质控品(靶值为54.11ng/mL)，检测结果如图1所示，实施例1-3试剂在2-8℃储存条件下比对比例更加稳定。
由检测结果可知，在保存13个月时，对比例1检测数值为49.56ng/mL，与靶值相差4.55ng/mL，并且检测值呈现明显的随储存时间延长而降低趋势；而实施例1、实施例2、实施例3配方配制试剂检测数值为53.17-55.98ng/mL，与靶值相差0.94-1.87ng/mL；这表明实施例1、实施例2、实施例3配方配制试剂盒拥有更高的稳定性。因此，这说明本发明通过优化总前列腺特异性抗原抗体包被胶乳颗粒的制备方法，添加复配表面活性剂溶液和复合稳定剂，科学配比，优化了反应体系，极大的提高了试剂的稳定性。
综上所述，通过验证，本发明提供的试剂盒比对比例灵敏度高、线性范围宽，准确度高，是一种更加灵敏的总前列腺特异性抗原检测试剂盒。
Claims (7)
1.一种灵敏的总前列腺特异性抗原检测试剂盒，其特征在于，包括试剂R1和试剂R2，所述试剂R1的成分和含量为：
所述试剂R2的成分和含量为：
所述复合稳定剂的成分和含量为：
2.根据权利要求1所述的灵敏的总前列腺特异性抗原检测试剂盒，其特征在于，所述缓冲液为ADA-TAPSO缓冲液、磷酸盐缓冲液、甘氨酸缓冲液中的一种或多种。
3.根据权利要求1所述的灵敏的总前列腺特异性抗原检测试剂盒，其特征在于，所述复配表面活性剂溶液的成分及含量如下：
辛基酚聚氧乙烯醚基二甲基十四烷基氯化铵 5-15g/L，
聚氧丙烯聚氧乙烯甘油醚 10-30g/L，
十六醇乳酸酯 3-10g/L。
4.根据权利要求1所述的灵敏的总前列腺特异性抗原检测试剂盒，其特征在于，所述聚乙二醇为聚乙二醇6000、聚乙二醇8000、聚乙二醇10000中的一种或多种。
5.根据权利要求1所述的灵敏的总前列腺特异性抗原检测试剂盒，其特征在于，所述氯化盐为氯化锂、氯化钠、氯化钙中的一种或多种。
6.根据权利要求1所述的灵敏的总前列腺特异性抗原检测试剂盒，其特征在于，所述兔抗人PSA多克隆抗体包被的胶乳颗粒溶液的制备步骤如下：
步骤1：取72nm羧基胶乳颗粒0.3-0.7mg、188nm羧基胶乳颗粒0.1-0.4mg，加入ADA-TAPSO溶液5mL，搅拌混匀，得羧基胶乳颗粒缓冲体系；
步骤2：于步骤1得到的羧基胶乳颗粒缓冲体系中分别加入0.5-1mg EDC，25℃振荡12h；
步骤3：在步骤2所得液体中加入兔抗人PSA多克隆抗体，37℃振荡5-8h，加入BSA溶液，25℃振荡10-12h，然后超声30min-50min，最终得到兔抗人PSA多克隆抗体包被的胶乳颗粒溶液。
7.根据权利要求1所述的灵敏的总前列腺特异性抗原检测试剂盒，其特征在于，该试剂盒使用全自动生化分析仪利用终点法进行测定，检测主波长为570nm，R1试剂和R2试剂的比例为3:1。
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