CN113861189A

CN113861189A - 喹啉衍生物，其药学上可接受的盐及其使用方法

Info

Publication number: CN113861189A
Application number: CN202111030654.5A
Authority: CN
Inventors: B.加达姆
Original assignee: Hengyi Biomedical Technology Shanghai Co Ltd; vTv Therapeutics LLC
Current assignee: Hengyi Biomedical Technology Shanghai Co Ltd; vTv Therapeutics LLC
Priority date: 2020-06-29
Filing date: 2020-07-17
Publication date: 2021-12-31
Also published as: JP7137040B2; US20230265089A1; CN111808098B; EP4175955A1; KR20220004023A; JP2022537595A; TW202208364A; CN111808098A; EP4175955A4; WO2022005494A1; AU2020456223A1; CA3183465A1; KR20230066650A

Abstract

本发明涉及化合物反式‑4‑[1‑(3‑氯苯基)‑7‑甲氧基‑2,4‑二氧代‑嘧啶并[5,4‑c]喹啉‑3‑基]环己烷甲酸，其药学上可接受的盐及它们作为治疗剂的用途，包括在治疗炎性障碍中的用途。

Description

喹啉衍生物，其药学上可接受的盐及其使用方法

本申请是申请日为2020年7月17日、申请号为202010702357.X、发明名称为“喹啉衍生物，其药学上可接受的盐及其使用方法”的发明专利申请的分案申请。

技术领域

本发明涉及化合物反式-4-[1-(3-氯苯基)-7-甲氧基-2,4-二氧代-嘧啶并[5,4-c]喹啉-3-基]环己烷甲酸、其药学上可接受的盐及它们作为治疗TNF-α或PDE4介导的疾病的治疗剂的用途。

背景技术

肿瘤坏死因子-α(TNF-α)，也称为TNF、DIF、TNF-α、TNFA和TNFSF2，是一种从26kd前体形式加工成17kd可溶形式的细胞相关的细胞因子。已经表明TNF-α是人和动物中炎症、发烧和急性期应答的主要调节剂，与急性感染和休克过程中观察到的那些相似。已经表明过量的TNF-α是致命的。目前对如下情况存在大量证据：通过使用可溶性TNF受体或用特异性中和抗体来阻断TNF-α的作用在各种情况中是有益的，这些情况包括自身免疫疾病，如类风湿性关节炎(RA)、非胰岛素依赖性糖尿病(NIDDM或II型糖尿病)和克罗恩病。

磷酸二酯酶(PDE)包括负责第二信使环腺苷单磷酸(cAMP)和环鸟苷单磷酸(cGMP)的水解和灭活的酶的超家族。已经鉴定出不同的PDE家族(PDE1、PDE2、PDE3、PDE4等)，它们在底物优选性、催化活性、对内源性激活剂和抑制剂的敏感性和编码基因上有差异。

PDE4同工酶家族对环状AMP具有高亲和力，但对环状GMP具有弱亲和力。由PDE4抑制引起的环状AMP水平提高与多种炎症和免疫细胞中的细胞激活抑制有关，这些细胞包括淋巴细胞、巨噬细胞、嗜碱性粒细胞、嗜中性粒细胞和嗜酸性粒细胞。此外，PDE4抑制降低了细胞因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的释放。

鉴于这些生理效应，最近公开了不同化学结构的PDE4抑制剂用于治疗慢性或急性炎性疾病和已知可通过抑制PDE4缓解的其他病理状况、疾病及障碍。

认为PDE4抑制剂可用于治疗和/或预防哺乳动物(例如，人)的各种疾病/病症，尤其是炎性和/或过敏性疾病，例如：哮喘、慢性阻塞性肺疾病(COPD)(例如慢性支气管炎和/或肺气肿)、特应性皮炎、荨麻疹、过敏性鼻炎、过敏性结膜炎、春季结膜炎、嗜酸性肉芽肿、银屑病、类风湿关节炎、脓毒性休克、溃疡性结肠炎、克罗恩病、心肌和脑的再灌注损伤、慢性肾小球肾炎、内毒素性休克、成人呼吸窘迫综合征、多发性硬化、认知损伤(例如，在神经系统障碍中，例如阿尔茨海默症)、抑郁或疼痛。通常将溃疡性结肠炎和/或克罗恩病统称为炎性肠病。

此外，认为抑制TNF-α产生的化合物通过基于治疗干预的机制能够用于多种疾病和障碍中。认为TNF-α抑制剂可用于包括但不限于以下疾病：病毒性、酒精性或药物诱发的急性或暴发性肝炎、脂肪肝、酒精性和非酒精性、病毒性和非病毒性肝炎、肝硬化、自身免疫性肝炎、慢性活动性肝炎、威尔逊病、重症肌无力、特发性口炎性腹泻、自身免疫性炎性肠病、溃疡性结肠炎、克罗恩病、炎性肠病、内分泌性眼病、格雷夫斯病、结节病、原发性胆汁性肝硬化、胰腺炎、肾炎、内毒素休克、脓毒性休克、血液动力学休克、脓毒综合征、缺血后再灌注损伤、疟疾、分枝杆菌感染、脑膜炎、银屑病、哮喘、慢性阻塞性肺疾病(COPD)、嗜酸性粒细胞增多、充血性心力衰竭、纤维化疾病、囊性纤维化、肺纤维化、肝纤维化、肾纤维化、恶病质、移植物排斥、移植排斥、癌症、涉及血管生成的疾病、自身免疫疾病、强直性脊柱炎、自身免疫性脑脊髓炎、自身免疫性造血系统疾病、溶血性贫血、再生障碍性贫血、单纯红细胞性贫血、特发性血小板减少症、系统性红斑狼疮(SLE)、多发性软骨炎、硬皮病、韦格纳肉芽肿病、皮肌炎、赖特氏综合征、非传染性葡萄膜炎、自身免疫性角膜炎、干燥性角膜结膜炎、春季角膜结膜炎、间质性肺纤维化、银屑病关节炎、银屑病和其他良性或恶性增殖性皮肤病、特应性皮炎、荨麻疹、神经变性疾病、帕金森病、阿尔茨海默症、急性和慢性多发性硬化、癌症、病毒感染(例如SARS、MERS或COVID-19)、人免疫缺陷病毒(HIV)、恶病质、血栓形成、皮肤炎性疾病、骨关节炎(OA)、骨质疏松症、RA、肺气肿、慢性支气管炎、过敏性鼻炎、辐射损伤、高氧肺泡损伤、牙周病、非胰岛素依赖性糖尿病(II型糖尿病)和胰岛素依赖性糖尿病(青少年或I型糖尿病)。

由于PDE4抑制剂独特的作用机制，使得上游抑制多种细胞因子信号传导途径并调节促炎性/抗炎性的平衡，因此所述PDE4抑制剂可为治疗呼吸道病毒感染(例如SARS、MERS或COVID-19治疗)的有用的治疗选择。此外，PDE4抑制剂可特异性改善气道和肺部炎症，并保护患者免受由于相关的急性肺损伤和严重的呼吸衰竭而导致的插管和高死亡率。

因此，仍然需要鉴定和开发抑制PDE4酶活性和/或TNF-α产生的新化合物。

发明内容

本文公开了化合物I及其药学上可接受的盐、它们的制备和它们作为PDE4活性的抑制剂的用途以及在各种医学病症的治疗中的用途。

在一个方面，本发明提供了反式-4-[1-(3-氯苯基)-7-甲氧基-2,4-二氧代-嘧啶并[5,4-c]喹啉-3-基]环己烷甲酸(“化合物I”)及其药学上可接受的盐。在一个实施方案中，本发明提供了化合物I及其HCl盐。

在另一方面，本发明提供了药物组合物，其包含化合物I或其药学上可接受的盐和药学上可接受的载体。

在另一方面，本发明提供了制备化合物I或其药学上可接受的盐的方法。

在另一方面，本发明提供了治疗由TNF-α或PDE4介导的障碍的方法，其包括向有此需要的受试者给药化合物I或其药学上可接受的盐，或向有此需要的受试者给药包含化合物I或其药学上可接受的盐和药学上可接受的载体的药物组合物。在一个实施方案中，本发明提供了治疗选自以下疾病的方法：COPD、特应性皮炎、银屑病、IBD和克罗恩病。

在另一方面，本发明提供了化合物I或其药学上可接受的盐，其用于制备用于治疗由TNF-α或PDE4介导的疾病的药物。

本发明的这些或其他方面和实施方案在下文中进行更详尽地描述。

发明详述

定义

如文本所用，化合物I或式(I)化合物是指具有如下所示结构的化合物：

其可被确定为反式-4-[1-(3-氯苯基)-7-甲氧基-2,4-二氧代-嘧啶并[5,4-c]喹啉-3-基]环己烷甲酸。

除非另有说明，否则本文所描述的结构也意指包括差别仅在于存在一个或多个同位素富集的原子的化合物。例如，具有本结构的化合物，但氢原子被氘或氚替代，或碳原子被富含¹³C-或¹⁴C的碳取代，这些都在本发明的范围内。

本文所用术语“治疗有效量”表示将引起所寻求对象的治疗响应的化合物I或其药学上可接受的盐的量。在一个实施方案中，治疗响应可以是在受试者的个体细胞、组织、器官中抑制PDE4酶活性和/或抑制TNF-α产生。在一个实施方案中，通过给予每天小于1克或小于100毫克的剂量的化合物可以在受试者中获得治疗有效量。在另一个实施方案中，施用的剂量水平为每天大于1毫克的化合物。在一个实施方案中，所施用的化合物I或其药学上可接受的盐的剂量为1至100毫克、或1至50毫克、或10至50毫克、或30至50毫克。在其他实施方案中，化合物I或其药学上可接受的盐的剂量为1至20毫克，或5至15毫克或10至20毫克或20至30毫克。

如文本所用术语“治疗”是指针对受试者所遭受的特定病症或障碍的全部治疗方法，包括减轻或缓解由该障碍引起的一种或多种症状，从而延迟该障碍的发作或进展。

术语“受试者”可以指任何哺乳动物，例如但不限于人类。在一个实施方案中，受试者是人。在另一实施方案中，受试者是表现出需要治疗的病症的一种或多种症状特征的人。术语“受试者”并不必须是在任何医院、诊所或研究机构具有任何特定身份的人(例如，作为入院患者，研究参与者等)。在一个实施方案中，该受试者可以是“有此需要的受试者”。

“药学上可接受的载体”是本领域普遍接受的用于向哺乳动物例如人类递送生物活性剂的介质。这些载体通常是根据本领域普通技术人员能力范围内的许多因素来配制的。这些方法包括但不限于所配制活性剂的类型和性质；含药剂的组合物要施用的受试者；组合物的预期给药途径；和所靶向的治疗性适应症。药学上可接受的载体包括水性和非水性液体介质，以及各种固体和半固体剂型。此类载体除活性成分外还可以包含多种不同的成分和添加剂，由于各种原因(例如活性剂的稳定化)而将这些额外成分包含在制剂中，这是本领域普通技术人员众所周知的。合适的药学上可接受的载体及其选择所涉及的因素的描述可在各种容易获得的来源中找到，例如，Remington's Pharmaceutical Sciences，第17版，Mack Publishing Company，Easton，Pa.1985，其内容并入本文作为参考。

术语“药学上可接受的盐”是指由药学上可接受的无机和有机酸和碱制备的盐。例如，化合物I可与多种无机和有机酸反应形成药学上可接受的酸加成盐，例如但不限于盐酸、氢溴酸、氢碘酸、硫酸、磷酸、甲酸、乙酸、丙酸、柠檬酸、酒石酸和苯甲酸。药学上可接受的碱加成盐可以从无机碱和有机碱制备。从无机碱衍生的盐，例如包括钠盐、钾盐、锂盐、铵盐、钙盐和镁盐。从有机碱衍生的盐包括但不限于伯、仲和叔胺的盐。此类胺的具体实例包括，例如，异丙胺、三甲胺、二乙胺、三(异丙基)胺、三(正丙基)胺、乙醇胺、2-二甲基氨基乙醇、氨丁三醇、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、咖啡因、普鲁卡因、胆碱、甜菜碱和乙二胺。这种药学上可接受的盐和制备它们的常用方法是本领域众所周知的。参见，例如，P.Stahl等人，HANDBOOK OF PHARMACEUTICAL SALTS:PROPERTIES,SELECTION AND USE,(VCHA/Wiley-VCH,2002)；S.M.Berge，等人，"Pharmaceutical Salts"，Journal of PharmaceuticalSciences，第66卷，No.1，1977年1月。

1.化合物

在一个方面，本发明提供了化合物I或其药学上可接受的盐。在一个实施方案中，本发明提供了化合物I。在另一实施方案中，本发明提供了化合物I的药学上可接受的盐。在另一实施方案中，本发明提供了化合物I的酸式盐。在另一实施方案中，本发明提供了化合物I的HCl酸盐。

在另一方面，本发明提供了下式化合物

其中R¹为任选被卤素取代1-3次的(C1-C6)烷基。在一个实施方案中，R¹为甲基或叔丁基。

2.药物组合物

在一个实施方案中，本发明提供了药物组合物，其包含化合物I。在另一实施方案中，本发明提供了药物组合物，其包含化合物I的药学上可接受的盐。在另一实施方案中，本发明提供了药物组合物，其包含化合物I的酸式盐。在另一实施方案中，本发明提供了药物组合物，其包含化合物I的HCl酸盐。

在另一实施方案中，本发明提供前述实施方案中任一项的药物组合物且其进一步包含一种或多种另外的治疗剂。所述一种或多种另外的治疗剂选自类固醇、环氧合酶抑制剂、非甾体类抗炎药或TNF-α抗体，例如例如乙酰水杨酸、丁苯羟酸(bufexamac)、双氯芬酸钾、舒林酸、双氯芬酸钠、酮咯酸氨丁三醇、托美汀、布洛芬、萘普生、萘普生钠、噻洛芬酸(tiaprofen acid)、氟比洛芬、甲芬那酸、尼氟酸(nifluminic acid)、甲氯芬那酸、吲哚美辛、普各洛美他辛、酮洛芬、萘丁美酮、扑热息痛、吡罗昔康、替诺昔康、尼美舒利、保泰松、曲马多、二丙酸倍氯米松、倍他米松、倍氯米松、布地奈德、氟替卡松、莫米松、地塞米松、氢化可的松、甲泼尼龙、泼尼松龙、强的松、去炎松、塞来昔布、罗非昔布、英夫利昔单抗、来氟米特、依那西普、甲氨蝶呤、柳氮磺胺吡啶、抗淋巴细胞免疫球蛋白、抗胸腺细胞免疫球蛋白、硫唑嘌呤、环孢菌素、他克莫司物质(tacrolimus substances)、子囊霉素、雷帕霉素或莫罗莫那-CD3。

本发明还提供了上述任一实施方案的药物组合物，其包含治疗有效量化合物I或其药学上可接受的盐。

根据本发明的另一方面，还提供了一种制备药物制剂的方法，该方法包括将化合物I或其药学上可接受的盐与一种或多种药学上可接受的载体混合。

可以以含有预定量的活性成分/单位剂量的单位剂型来提供药物制剂。作为非限制性实例，这样的单位可以含有0.5mg～l g的化合物I或其药学上可接受的盐，这取决于待治疗的疾病、给药途径和患者的年龄、体重和一般状况。典型的单位剂型是含有日剂量或亚剂量(如上文所述)或其适当分数的活性成分的剂型。可以通过制药领域中公知的任一种方法来制备这样的药物制剂。

在一个实施方案中，药物组合物的单个剂型可以包含化合物I或其药学上可接受的盐，其量为大于1mg的化合物I或其药学上可接受的盐。在另一个实施方案中，所述药物组合物可以包含化合物I或其药学上可接受的盐，其量为1至100mg、或1至50mg、或10至50mg、或30至50mg。在其他实施方案中，所述药物组合物可以包含化合物I或其药学上可接受的盐，其量为1至20mg、或5至15mg、或10至20mg、或20至30mg。

可以将药物制剂进行改变以适于通过任何合适途径来给药，例如，通过口服(包括含服或舌下)、直肠、鼻、局部(包括含服、舌下或经皮)、阴道或胃肠外(包括皮下、肌内、静脉内或皮内)途径。可以通过制药领域已知的任何方法来制备这样的制剂，例如，通过使活性成分与载体或赋形剂缔合。举例来说，并且不是用来限制本发明，对于认为使用本发明的化合物是有用的特定病症和障碍来说，特定的给药途径与其他相比是更优先的。

适于口服给药的药物制剂可以呈现为离散单位，如胶囊或片剂；粉末或颗粒；溶液或混悬剂，它们各自含有水性或非水性液体；可食泡沫或搅打物；或水包油型液体乳剂或油包水型液体乳剂。例如，对于片剂或胶囊形式的口服给药，可以将活性药物成分与口服的、无毒药学可接受的惰性载体(如乙醇、甘油、水等)混合。通常，通过将化合物粉碎成合适的微细尺寸并与合适的药物载体(如可食用的碳水化合物，例如，淀粉或甘露醇)混合来制备粉末。调味剂、防腐剂、分散剂和着色剂也可以存在。

可以通过制备粉末、液体或混悬液的混合物并用明胶或其他一些适合的外壳材料包囊来制备胶囊。在包囊前，可以将助流剂和润滑剂例如硅胶、滑石粉、硬脂酸镁、硬脂酸钙或固体聚乙二醇加入混合物中。还可以加入崩解剂或增溶剂，如琼脂、碳酸钙或碳酸钠，以提高在摄入胶囊后药物的利用度。此外，期望或需要时，还可以将合适的粘合剂、润滑剂、崩解剂和着色剂掺入混合物中。合适的粘合剂的实例包括淀粉、明胶、天然糖类(如葡萄糖或β-乳糖、玉米甜昧剂)、天然和合成胶(如阿拉伯胶、西黄蓍胶或海藻酸钠)、羧甲基纤维素、聚乙二醇、蜡等。

这些剂型中使用的润滑剂包括，例如，油酸钠、硬脂酸钠、硬脂酸镁、苯甲酸钠、乙酸钠、氯化钠等。崩解剂包括但不限于，淀粉、甲基纤维素、琼脂、膨润土、黄原胶等。

例如，通过制备粉末混合物、制粒或重压法(slugging)、添加润滑剂和崩解剂、压制成片剂来配制片剂。可以通过将适当粉碎的化合物与如上所述的稀释剂或基质混合来制得粉末混合物。任选的成分包括粘合剂，如羧甲基纤维素、海藻酸盐、明胶或聚乙烯吡咯烷酮；溶液缓凝剂(solution retardant)，如石蜡；再吸收加速剂，如季盐；和/或吸附剂，如膨润土、高岭土或磷酸二钙。粉末混合物可以用粘合剂湿法制粒，粘合剂例如是糖浆、淀粉糊、阿拉伯胶粘液或纤维素或聚合材料的溶液，并压制通过筛网。作为制粒的可替换方案，可以将粉末混合物通过压片机，结果，未完全形成的块状物粉碎成颗粒。可以通过加入硬脂酸、硬脂酸盐、滑石粉或矿物油，将颗粒润滑以防止颗粒粘着在形成片剂的模具上。然后将润滑的混合物压制成片剂。本发明的化合物还可以与自由流动的惰性载体混合并直接压制成片剂，而不必通过制粒或重压步骤。可以提供由虫胶隔离层、糖衣或聚合物包衣和蜡抛光层组成的透明或不透明的保护涂层。可以将染料加入这些涂层中，以区别不同的单位剂量。

在适当的情况下，用于口服给药的单位剂型制剂可以是微囊化的。还可以制得制剂以使其延长或持续释放，例如通过将颗粒材料涂覆或包埋于聚合物、蜡等中。

可以以单位剂型形式制备口服液体，例如溶液、糖浆或酏剂，使得给定的量含有预定量的化合物。例如，可以通过将化合物溶解于适当调味的水溶液中制得糖浆，而通过使用无毒醇媒介物制得酏剂。通常通过将化合物分散于无毒媒介物中来配制混悬液。还可以加入增溶剂和乳化剂，例如乙氧基化异硬脂醇和聚氧乙烯山梨糖醇醚，防腐剂；风味添加剂，例如薄荷油，或天然甜味剂，糖精，或其他人造甜味剂等。

用于药物溶液制剂的合适包装可以是所有批准的可用于胃肠外使用的容器，如塑料和玻璃容器、即用型注射器等。在一个实施方案中，容器是密封的玻璃容器，如小瓶或安瓿。气密性玻璃小瓶是密封玻璃容器的一个实例。根据本发明的一个实施方案，在密封的玻璃容器中提供了无菌可注射溶液，该溶液包含在生理学可接受的溶剂中的化合物I或其药学上可接受的盐，并且为了稳定性其具有合适的pH。本发明化合物的酸式盐在水溶液中的溶解度可能大于它们的游离碱对应物，但将该酸式盐加入水溶液中时，溶液的pH太低，使得不适于给药。因此，pH在pH4.5以上的溶液制剂可以在给药前与pH高于7的稀释液混合，使得所给药的组合制剂的pH为pH 4.5或更高。在一个实施方案中，稀释液包含药学上可接受的碱，如氢氧化钠，并且所给药的组合制剂的pH在pH 5.0～7.0之间。在将溶液通过灭菌过滤器之前，可以将一种或多种其他成分加入溶液中，这些成分例如是共溶剂、张力调节剂、稳定剂和防腐剂，例如之前所列举的种类。

适于局部给药的药物制剂可以配制成膏剂、霜剂、混悬液、洗液、粉末、溶液、糊剂、凝胶、喷雾剂、气溶胶或油。

对于眼睛或其他外部组织(例如嘴和皮肤)的治疗，可以作为局部膏剂或霜剂来施用制剂。配制于膏剂中时，可以将活性成分与石蜡或水可混溶性膏剂基质一起使用。或者可以将活性成分与水包油型霜剂基质或油包水型基质一起配入霜剂中。适于局部给药于眼睛的药物制剂包括滴眼剂，其中将活性成分溶解或混悬于合适的载体中，尤其是含水溶剂中。

适于在口中局部给药的药物制剂包括锭剂(lozenges)、糖锭剂(pastilles)和漱口剂。

适于鼻给药的药物制剂(其中载体是固体)包括具有例如20～500微米粒径的粗粉。以采用吸入的方式来给药粉末，即，通过从靠近鼻子的装有粉末的容器，通过鼻通道快速吸入。其中载体是液体的、作为鼻喷雾剂或作为滴鼻剂来给药的合适制剂包括活性成分的水性溶液或油性溶液。

适于通过吸入给药的药物制剂包括细颗粒粉尘或细雾，这可以通过各种类型的计量剂量的加压气雾剂、喷雾器或吸入器来产生。

此外，本发明的组合物还可以栓剂的形式用于直肠给药本发明的化合物。可以通过将药物与合适的非刺激性赋形剂混合来制备这种组合物，该赋形剂在常温下是固体的，但在直肠温度下是液体的，并因此将在直肠中熔化，以释放药物。例如，这样的材料包括可可脂和聚乙二醇。适于直肠给药的药物制剂可以作为栓剂或作为灌肠剂存在。

适于胃肠外给药的药物制剂包括含水和无水无菌注射液，其可以含有抗氧化剂、缓冲剂、杀菌剂和使得制剂与预期的接受者的血液等渗的溶质；含水和无水无菌混悬液，其可以包含助悬剂和增稠剂。可以在单位剂型或多剂量的容器中提供制剂，这些容器例如为密封的安瓿和小瓶，并且可以贮存于冷冻干燥(冻干)条件下，临用前只需要加入无菌液体载体，例如注射用水。

即时注射液和混悬液可以从无菌粉末、颗粒和片剂制得。

除了以上特别提及的成分，本发明制剂可以包括适于目标制剂类型的本领域常规的其他试剂。例如，适于口服给药的制剂可以包括调味剂或着色剂。

3.合成方法

化合物I及其盐酸盐的制备方法在以下实施例部分中描述。

在另一方面，本发明提供了制备化合物I或其盐的方法，该方法包括将化合物

水解，其中R¹为(C1-C6)烷基，其任选被卤素取代1-3次。在一个实施方案中，R¹为甲基或叔丁基。在另一实施方案中，R¹为乙基。

在另一方面，本发明提供了制备化合物I的药学上可接受的酸式盐的方法，其包括将化合物I与药学上可接受的酸在适合的溶剂中反应。在一个实施方案中，所述药学上可接受的酸为盐酸。在其他实施方案中，化合物I与盐酸反应形成化合物I的HCl盐。

4.治疗方法

在另一方面，本发明提供了一种治疗方法，其包括向有此需要的受试者给药化合物I或其药学上可接受的盐，或给药药物组合物，其包含化合物I或其药学上可接受的盐和药学上可接受的载体。在一个实施方案中，所述方法包括给药治疗有效量的化合物I或其药学上可接受的盐。

本发明药物组合物可以按每剂或每天小于1g化合物I或其药学上可接受的盐的剂量水平施用。在另一实施方案中，施用的剂量水平为每剂或每天大于1mg的化合物I或其药学上可接受的盐。可与载体材料组合以产生单一剂量的活性成分的量将根据所治疗的主体和具体的给药方式而变化。例如，在一个非限制性实施方案中，旨在向人口服施用的剂量单位形式，例如片剂或胶囊剂，可包含少于100mg的化合物I或其药学上可接受的盐以及适当和方便量的载体材料。在另一实施方案中，每天施用的剂量水平为大于1mg的化合物I或其药学上可接受的盐。在一个实施方案中，化合物I或其药学上可接受的盐的施用剂量为1至100mg，或1至50mg，或10至50mg，或30至50mg。在其他实施方案中，化合物I或其药学上可接受的盐的给药剂量为1至20mg、或5至15mg、或10至20mg、或20至30mg。

临床医生可以根据被治疗的对象具体的临床状况来确定每天或每个时期的剂量和/或每天(一天一次，一天两次等)或每个时期(一周一次，一周两次等)的给药频率。因此，应理解，任何特定受试者的具体剂量水平和给药频率可取决于多种因素，例如但不限于年龄、体重、总体健康、性别、饮食、给药时间、给药途径、排泄率、药物组合以及接受治疗的特定疾病的严重程度。

本发明的另一个实施方案包括通过给予化合物I或其药学上可接受的盐来抑制有此需要的受试者中TNF-α活性的方法。

本发明的另一个实施方案包括通过给予化合物I或其药学上可接受的盐来抑制有此需要的受试者中的PDE4的方法。

本发明的另一个实施方案包括通过给予化合物I或其药学上可接受的盐来治疗由TNF-α的活性介导的病症或障碍的方法。

本发明的另一个实施方案包括通过给予化合物I或其药学上可接受的盐来治疗由PDE4介导的病症或障碍的方法。

本发明的另一个实施方案包括通过施用化合物I或其药学上可接受的盐治疗炎性疾病的方法。作为非限制性实例，炎性疾病可包括病毒性、酒精性或药物诱发的急性或暴发性肝炎、脂肪肝、酒精性和非酒精性、病毒性和非病毒性肝炎、肝硬化、自身免疫性肝炎、慢性活动性肝炎、威尔逊病、重症肌无力、特发性口炎性腹泻、自身免疫性炎性肠病、溃疡性结肠炎、克罗恩病、炎性肠病、内分泌性眼病、格雷夫斯病、结节病、原发性胆汁性肝硬化、胰腺炎、肾炎、内毒素休克、脓毒性休克、血液动力学休克、脓毒综合征、缺血后再灌注损伤、疟疾、分枝杆菌感染、脑膜炎、银屑病、哮喘、慢性阻塞性肺疾病(COPD)、嗜酸性粒细胞增多、充血性心力衰竭、纤维化疾病、囊性纤维化、肺纤维化、肝纤维化、肾纤维化、恶病质、移植物排斥、移植物抗宿主病、移植排斥、癌症、涉及血管生成的疾病、自身免疫疾病、强直性脊柱炎、自身免疫性脑脊髓炎、自身免疫性造血系统疾病、溶血性贫血、再生障碍性贫血、单纯红细胞性贫血、特发性血小板减少症、系统性红斑狼疮(SLE)、多发性软骨炎、硬皮病、韦格纳肉芽肿病、皮肌炎、赖特氏综合征、非传染性葡萄膜炎、自身免疫性角膜炎、干燥性角膜结膜炎、春季角膜结膜炎、间质性肺纤维化、银屑病关节炎、银屑病和其他良性或恶性增殖性皮肤病、特应性皮炎、荨麻疹、神经变性疾病、帕金森病、阿尔茨海默症、急性和慢性多发性硬化、癌症、病毒感染(例如SARS、MERS或COVID-19)、人免疫缺陷病毒(HIV)、恶病质、血栓形成、皮肤炎性疾病、骨关节炎(OA)、骨质疏松症、RA、肺气肿、慢性支气管炎、过敏性鼻炎、辐射损伤、高氧肺泡损伤、牙周病、非胰岛素依赖性糖尿病(II型糖尿病)和胰岛素依赖性糖尿病(青少年或I型糖尿病)。

在另一实施方案中，这种治疗涉及通过抑制PDE4介导的疾病。这种病症包括各种病症，尤其是在哺乳动物(例如人)中的炎性和/或过敏性疾病，例如：哮喘、慢性阻塞性肺疾病(COPD)(例如慢性支气管炎和/或肺气肿)、特应性皮炎、荨麻疹、过敏性鼻炎、过敏性结膜炎、春季结膜炎、嗜酸性肉芽肿、银屑病、类风湿关节炎、脓毒性休克、溃疡性结肠炎、克罗恩病、心肌和脑的再灌注损伤、慢性肾小球肾炎、内毒素性休克、成人呼吸窘迫综合征、多发性硬化、认知损伤(例如在神经系统障碍中例如阿尔茨海默症)、抑郁或疼痛。溃疡性结肠炎和/或克罗恩病统称为炎性肠病。

在本发明的一个实施方案中，在哺乳动物(例如人)中的所述炎性和/或过敏性疾病为慢性阻塞性肺疾病(COPD)、哮喘、银屑病或类风湿关节炎。在另一实施方案中，本发明提供了治疗以下疾病的方法，所述疾病选自COPD、特应性皮炎、银屑病、IBD和克罗恩病。

本发明的化合物也可以与其他常规抗炎或免疫抑制剂组合施用，例如类固醇、环氧合酶抑制剂、非甾体抗炎药、TNF-α抗体或其他TNF-结合蛋白，例如乙酰水杨酸、丁苯羟酸、双氯芬酸钾、舒林酸、双氯芬酸钠、酮咯酸氨丁三醇、托美汀、布洛芬、萘普生、萘普生钠、噻洛芬酸、氟比洛芬、甲芬那酸、尼氟酸、甲氯芬那酸、吲哚美辛、普各洛美他辛、酮洛芬、萘丁美酮、扑热息痛、吡罗昔康、替诺昔康、尼美舒利、保泰松、曲马多、二丙酸倍氯米松、倍他米松、倍氯米松、布地奈德、氟替卡松、莫米松、地塞米松、氢化可的松、甲泼尼龙、泼尼松龙、强的松、去炎松、塞来昔布、罗非昔布、英夫利昔单抗、来氟米特、依那西普、甲氨蝶呤、柳氮磺胺吡啶、抗淋巴细胞免疫球蛋白、抗胸腺细胞免疫球蛋白、硫唑嘌呤、环孢菌素、他克莫司物质、子囊霉素、雷帕霉素、阿达木单抗、莫罗莫那-CD3或其他调节T细胞功能的抗体或融合蛋白，例如阿巴西普、阿法西普和依法珠单抗。

如上所述，本发明的化合物可以单独使用或与其他治疗剂组合使用。这样的药物活性剂的组合可以一起给药或分开给药，当分开给药时，可以同时或以任何次序按序进行给药。选择化合物或药物的用量以及给药的相对时间，以获得所需的治疗效果。本发明的通式化合物(包括其盐)与其他治疗剂的组合给药可以伴随以下方式来组合给药：(1)包含两种化合物的单一组合物，或(2)各自包含一种化合物的分开的药物组合物。或者，可以以有序的方式分开给药组合药剂，其中首先给药一种治疗剂，随后给药另一种，或反之。这样的按序给药可以间隔短或间隔长。本发明的化合物可以用于各种障碍和病症的治疗中，同样地，本发明的化合物也可以与在那些障碍或病症的治疗或预防中有用的各种其他适合的治疗剂组合使用。

5.在制备药物的方法中的用途

在另一方面，本发明提供了化合物I或其药学上可接受的盐在制备用于治疗炎性疾病的药物中的用途。作为非限制性实例，炎性疾病可包括病毒性、酒精性或药物诱发的急性或暴发性肝炎、脂肪肝、酒精性和非酒精性、病毒性和非病毒性肝炎、肝硬化、自身免疫性肝炎、慢性活动性肝炎、威尔逊病、重症肌无力、特发性口炎性腹泻、自身免疫性炎性肠病、溃疡性结肠炎、克罗恩病、炎性肠病、内分泌性眼病、格雷夫斯病、结节病、原发性胆汁性肝硬化、胰腺炎、肾炎、内毒素休克、脓毒性休克、血液动力学休克、脓毒综合征、缺血后再灌注损伤、疟疾、分枝杆菌感染、脑膜炎、银屑病、哮喘、慢性阻塞性肺疾病(COPD)、嗜酸性粒细胞增多、充血性心力衰竭、纤维化疾病、囊性纤维化、肺纤维化、肝纤维化、肾纤维化、恶病质、移植物排斥、移植物抗宿主病、移植排斥、癌症、涉及血管生成的疾病、自身免疫疾病、强直性脊柱炎、自身免疫性脑脊髓炎、自身免疫性造血系统疾病、溶血性贫血、再生障碍性贫血、单纯红细胞性贫血、特发性血小板减少症、系统性红斑狼疮(SLE)、多发性软骨炎、硬皮病、韦格纳肉芽肿病、皮肌炎、赖特氏综合征、非传染性葡萄膜炎、自身免疫性角膜炎、干燥性角膜结膜炎、春季角膜结膜炎、间质性肺纤维化、银屑病关节炎、银屑病和其他良性或恶性增殖性皮肤病、特应性皮炎、荨麻疹、神经变性疾病、帕金森病、阿尔茨海默症、急性和慢性多发性硬化、癌症、病毒感染(例如SARS、MERS或COVID-19)、人免疫缺陷病毒(HIV)、恶病质、血栓形成、皮肤炎性疾病、骨关节炎(OA)、骨质疏松症、RA、肺气肿、慢性支气管炎、过敏性鼻炎、辐射损伤、高氧肺泡损伤、牙周病、非胰岛素依赖性糖尿病(II型糖尿病)和胰岛素依赖性糖尿病(青少年或I型糖尿病)。

在另一实施方案中，本发明提供了化合物I或其药学上可接受的盐在制备在哺乳动物例如人中用于治疗炎性和/或过敏性疾病的药物中的用途，例如：哮喘、慢性阻塞性肺疾病(COPD)(例如慢性支气管炎和/或肺气肿)、特应性皮炎、荨麻疹、过敏性鼻炎、过敏性结膜炎、春季结膜炎、嗜酸性肉芽肿、银屑病、类风湿关节炎、脓毒性休克、溃疡性结肠炎、克罗恩病、心肌和脑的再灌注损伤、慢性肾小球肾炎、内毒素性休克、成人呼吸窘迫综合征、多发性硬化、认知损伤(例如在神经系统障碍中，例如阿尔茨海默症)、抑郁、或疼痛。溃疡性结肠炎和/或克罗恩病统称为炎性肠病。在一个实施方案中，在哺乳动物(例如人)中，所述炎性和/或过敏性疾病为慢性阻塞性肺疾病(COPD)、哮喘、类风湿关节炎或过敏性鼻炎。

化合物I或其药学上可接受的盐可与其他常规抗炎药或免疫抑制剂组合用于药物制备，所述其他常规抗炎药或免疫抑制剂例如类固醇、环氧合酶抑制剂、非甾体抗炎药、TNF-α抗体或其他TNF-结合蛋白，例如乙酰水杨酸、丁苯羟酸、双氯芬酸钾、舒林酸、双氯芬酸钠、酮咯酸氨丁三醇、托美汀、布洛芬、萘普生、萘普生钠、噻洛芬酸、氟比洛芬、甲芬那酸、尼氟酸、甲氯芬那酸、吲哚美辛、普各洛美他辛、酮洛芬、萘丁美酮、扑热息痛、吡罗昔康、替诺昔康、尼美舒利、保泰松、曲马多、二丙酸倍氯米松、倍他米松、倍氯米松、布地奈德、氟替卡松、莫米松、地塞米松、氢化可的松、甲泼尼龙、泼尼松龙、强的松、去炎松、塞来昔布、罗非昔布、英夫利昔单抗、来氟米特、依那西普、甲氨蝶呤、柳氮磺胺吡啶、抗淋巴细胞免疫球蛋白、抗胸腺细胞免疫球蛋白、硫唑嘌呤、环孢菌素、他克莫司物质、子囊霉素、雷帕霉素、阿达木单抗、莫罗莫那-CD3或其他调节T细胞功能的抗体或融合蛋白，例如阿巴西普、阿法西普和依法珠单抗。

本发明的其他实施方案包括化合物I或其药学上可接受的盐在制备用于在有此需要的受试者中抑制TNF-α活性的药物中的用途。

本发明的其他实施方案包括化合物I或其药学上可接受的盐在制备用于在有此需要的受试者中抑制PDE4的药物中的用途。

本发明的其他实施方案包括化合物I或其药学上可接受的盐在制备用于治疗由TNF-α的活性介导的病症或障碍的药物中的用途。

本发明的其他实施方案包括化合物I或其药学上可接受的盐在制备用于治疗由PDE4介导的病症或障碍的药物中的用途。

实施例

化合物I及其HCl盐的合成

步骤1：

向一个40mL反应小瓶中加入4-氯-8-甲氧基喹啉-3-甲酸乙酯(1.25g，4.7mmol)、间氯苯胺(0.69g，5.4mmol，1.15当量)、1-丁醇(10mL)和乙酸(0.3mL)。将该混合物在95℃搅拌5小时，IPC LCMS指示反应完成。真空除去1-丁醇，并将该混合物用乙酸乙酯(75mL)稀释。将有机层用饱和碳酸氢钠水溶液(25mL)洗涤，并浓缩至干。将该残余物通过快速柱色谱法纯化，用DCM/乙酸乙酯(1:0至1:1)洗脱，得到酯中间体4-(3-氯苯氨基)-8-甲氧基-喹啉-3-甲酸乙酯(1.05g)。产率62％。LCMS m/e 357.1(M+1)⁺；¹H NMR,300MHz(CDCl₃)δ1.45(t,3H),4.08(s,3H),4.44(q,2H),6.84(br d,1H),6.99(t,1H),7.04(dd,1H),7.05(d,1H),7.16(t,1H),7.20s,1H),7.22(dd,1H),9.29(s,1H),10.25(s,1H)ppm。

步骤2：

向250mL圆底烧瓶中加入步骤1中得到的酯(1.05g,2.94mmol)、THF/MeOH(40mL,1:1)、4N NaOH水溶液(3mL,12.0mmol)和水(17mL)。将该反应在60℃搅拌1.0小时，IPC LCMS指示反应完成。将该混合物浓缩至干，用2N HCl(8mL)酸化并用水(50mL)稀释。将该浆液过滤，并将湿滤饼用水洗涤。将该固体干燥18小时，得到步骤2的酸，4-(3-氯苯氨基)-8-甲氧基-喹啉-3-甲酸(0.77g)，产率79％。注意：加入几滴37％HCl用于NMR和LCMS分析。

LCMS m/e 329.0(M+1)⁺；¹H NMR,300MHz(d₆-DMSO)δ4.10(s,3H),7.34(m,1H),7.40(m,1H),7.45(d,1H),7.52(m,1H),7.76(m,1H),7.77(s,1H),7.78(dd,1H),8.80(s,1H),11.78(s,1H)ppm(COOH质子不可见)。

步骤3：

向一个40mL反应小瓶中加入步骤2的酸(0.73g,2.22mmol)、EDC-HCl(0.64g,3.33mmol 1.5eq)、HOBt(0.45g,3.33mmol.1.5eq)、4-二甲氨基吡啶(DMAP)(0.41g,3.33mmol,1.5eq)和无水DMF(9mL)。将该浆液在25℃搅拌30min并加入反式-4-氨基环己-1-甲酸叔丁酯(0.84g,4.21mmol,1.9eq)。将该混合物在25℃搅拌3小时。通过LCMS进行IPC分析，3小时后显示出16％的转化率。将该混合物在37℃搅拌24小时。在IPC分析显示97％转化率后，将该反应用乙酸乙酯(75ml)稀释并用盐水(3x 25mL)洗涤。将有机层浓缩至干。将该残余物通过硅胶快速柱色谱纯化，用乙酸乙酯/甲醇洗脱(100/0-100/10)，得到如下所示的酰胺1(0.96g)。产率84％。

LCMS m/e 510.2(M)⁺；¹H NMR,300MHz(CDCl₃)δ1.24(m,2H),1.34(m,2H)1.44(s,9H),1.57(m,3H),2.05(br d,1H),2.17(m,1H),3.97(m,1H),4.08(s,3H),6.13(br d,1H),6.80(d,1H),6.89(t,1H),7.02(m,2H),7.14(t,1H),7.25(m,2H),8.84(s,1H),10.14(s,1H)ppm。

步骤4：

向一个40mL反应小瓶中加入步骤3的酰胺1(510mg,1.0mmol)、氯甲酸4-硝基苯酯(605mg,3.0mmol,3.0eq)、DMAP(489mg,4.0mmol,4.0eq)和NMP(5mL)。将该混合物在95℃搅拌18小时，且18小时后的IPC LCMS分析显示90％转化率。将该反应混合物用乙酸乙酯(75ml)稀释并用水(35mL)和盐水(2x35 mL)洗涤。将该有机层浓缩至干。将该残余物通过硅胶快速柱色谱纯化，用庚烷/乙酸乙酯(3:1-1:1)洗脱，得到如下所示的环脲1(350mg)。产率65.3％。

LCMS m/e 536.2(M)⁺；¹H NMR,300MHz(CDCl₃)δ1.45(s,9H),1.56(qd,2H),1.83(brd,2H),2.10(br d,2H),2.25(tt,1H),2.54(qd,2H),4.07(s,3H),4.92(tt,1H),6.48(dd,1H),7.06(dd,1H)7.10(t,1H),7.24(dd,1H),7.39(t,1H),7.50(t,1H),7.54(ddd,1H),9.54(s,1H)ppm。

步骤5：

向一个40mL反应小瓶中加入上一步中的环脲1(350mg)、AcOH(20mL)和6N HCl(10mL)。将该反应在20℃搅拌18小时，通过IPC LCMS，在18小时显示反应完成。将该反应用水(20mL)和DCM(75mL)稀释并分离各层。将有机层浓缩至干。将该残余物用乙酸乙酯(25mL)浆化。过滤浆液。将收集的固体用庚烷洗涤并在氮气流下在真空烘箱中干燥24小时，得到220mg化合物I，产率为70％。

LCMS m/e 480.1(M+1)⁺；

¹H NMR,300MHz(CDCl₃)δ1.64(dt,2H),1.88(br d,2H),2.20(br d,2H),2.42(tt,1H),2.58(dt,2H),4.07(s,3H),4.95(br t,1H),6.48(dd,1H),7.07(dd,1H),7.11(t,1H),7.26(m,1H),7.40(t,1H),7.48(t,1H)7.54(d,1H),9.55(s,1H)ppm(COOH和HCl质子不可见)。

¹H NMR,300MHz(d₆-DMSO)δ1.44(br dd,2H),1.79(br d,2H),2.04(br d,2H),2.20(br t,1H)2.40(br dd,2H),3.96(s,3H),4.1(br,水和/或HCl和/或COOH),4.74(br tt,1H),6.37(d,1H),7.20(t,1H),7.27(d,1H),7.52(dt,1H),7.61(t,1H),7.67(表观s,1H),7.68(表观d,1H),9.27(s,1H)ppm。

PDE4抑制测定

使用BPS BioSciences^TM的PDE4B2荧光偏振测定试剂盒(目录号60343)和PDE4D7TR-FRET测定试剂盒(目录号60708)来筛选化合物I的HCl盐，以抑制PDE4B2和PDE4D7酶。

根据BPS BioSciences产品信息，PDE4B2荧光偏振测定试剂盒测定是基于PDE4B2生成的荧光核苷酸单磷酸酯与结合剂的结合。磷酸二酯酶催化染料标记的环状单磷酸酯中磷酸二酯键的水解。珠子选择性结合核苷酸产物中的磷酸基团。相对于未反应的环状单磷酸酯，这增加了核苷酸的大小。在偏振测定中，具有与线性偏振激发光平行的吸收跃迁向量的染料分子被选择性地激发。附着在快速旋转的环状单磷酸酯上的染料将获得随机的取向并发出低偏振光。附着在缓慢旋转的核苷酸-珠子复合物上的染料将没有时间重新取向，因此将发出高偏振光。

根据BPS Biosciences产品信息，PDE4D7 TR-FRET测定法旨在使用TR-FRET(时间分辨荧光共振能量转移)技术鉴定PDE4D7的抑制剂。该测定法基于FAM标记的核苷酸单磷酸酯的生成(通过磷酸二酯酶)。这些磷酸基团与铽-标记的纳米颗粒结合，导致能量从铽转移到所述FAM，并在520nm处发出荧光信号。荧光强度的变化可以使用荧光板读数器轻松测量。

PDE4B2荧光偏振测定

用于获得以下描述的实验数据的PDE4B2荧光偏振测定的通用测定方案包括两个步骤：首先，将荧光标记的cAMP与含PDE4B2的样品培养1小时。第二，在反应混合物中加入结合剂以产生荧光偏振的变化，该变化可以使用配备有用于测量荧光偏振的荧光读取器来测量。详细方案如下：

步骤1：用PDE缓冲液将20μMFAM-Cyclic-3′,5′-AMP储备液稀释100倍，制成200nM溶液。仅做足够量的该测定；将剩余的20μM储备溶液等分储存在-20℃。将25μl的FAM-Cyclic-3′,5′-AMP(200nM)加入分别标明“阳性对照”、“测试抑制剂”和“底物对照”的各个孔中。分别向每个标有“底物对照”的孔中添加20μl的PDE测定缓冲液，向每个标有“空白”的孔中添加45μl的PDE测定缓冲液。向每个标有“测试抑制剂”的孔中添加5μl的抑制剂溶液。对于标有“阳性对照”、“底物对照”和“空白”的孔，添加5μl的不含抑制剂(抑制剂缓冲液)的相同溶液。在冰上融化PDE4B2。第一次融化后，短暂地旋转装有酶的管以回收该管中的全部内容物。将PDE4B2酶分装成一次性使用的等分试样。立即将剩余的未稀释酶等分保存在-70℃。注意：PDE4B2对冷冻/融化循环非常敏感。将PDE4B2在PDE缓冲液中稀释至7.5pg/μl(0.15ng/反应)*。通过将20μl的PDE4B2(7.5pg/μl)加入标有“阳性对照”和“测试抑制剂”的孔中来启动反应。*注意：最佳酶浓度可能因酶的比活性而变化。在室温下培养1小时。

第二步：将结合剂充分混合，并用结合剂稀释剂以1:100的比例稀释结合剂。在每个微孔中加入100μl稀释的结合剂。在室温下缓慢摇动培养1小时。在配备有荧光偏振测量功能的微量滴定板读取器上读取样品的荧光偏振，该读数器能够在485±5nm的波长范围内激发，并检测528±10nm的发射光。从所有其他值中减去空白值。

PDE4D7 TR-FRET测定

用于获取以下描述的实验数据的PDE4D7 TR-FRET测定的通用测定方案包括两个步骤：首先，将荧光标记的cAMP与含有PDE4D7的样品培养1小时。其次，将结合剂和铽供体加入该反应混合物中，培养1小时。然后，可以使用荧光读取器测量荧光强度。详细操作步骤如下

步骤1：用PDE缓冲液将20μMFAM-Cyclic-3’,5’-AMP底物原液稀释100倍，制成200nM溶液。所制备的量仅足够用于该测定；将剩余的储备溶液等分储存在-20℃。将25μl的FAM-Cyclic-3’,5’-AMP(200nM)加入指定的“底物对照”、“阳性对照”和“测试抑制剂”的各孔中。向指定为“仅Tb的对照”的每个孔中添加25μl的PDE测定缓冲液。向指定为“测试抑制剂”的每个孔中添加5μl抑制剂溶液。将5μl不含抑制剂(抑制剂缓冲液)的相同溶液添加到“仅Tb对照”，“底物对照”和“阳性对照”中。在冰上融化PDE4D7。第一次融化后，短暂地旋转装有酶的管以回收该管中的全部内容物。将PDE4D7酶分装成一次性使用的等分试样。立即将剩余的未稀释酶等分保存在-80℃。将PDE缓冲液中的PDE4D7稀释成5pg/μl(100pg/反应)的PDE缓冲液。将20μl的PDE测定缓冲液添加到指定为“仅Tb-对照”和“底物对照”的孔中。通过向指定为“阳性对照”和“测试抑制剂”的孔中添加20μl的PDE4D7(5pg/μl)来启动反应。*注意：最佳酶浓度可能会随酶的比活性而变化。

步骤2：将等体积的结合缓冲液A和结合缓冲液B混合，制成结合稀释缓冲液。例如，将1ml的结合缓冲液A与1ml的结合缓冲液B混合。将结合剂充分混合，将结合剂用步骤1中制备的结合稀释缓冲液以1:50稀释。向步骤2中的混合物中添加Tb供体(1:1000稀释)。向每个孔中添加100μl。在室温缓慢摇动培养1小时。在具有TR-FRET功能的微孔板读数器中读取荧光强度。

使用上面描述的筛选程序，使用不同批次的化合物I*HCl，获得以下数据。还筛选了已知的PDE4抑制剂阿普斯特(Apremilast)。

Claims

1.具有式(I)的化合物：

或其药学上可接受的盐。

2.根据权利要求1的化合物，其中所述化合物为式(I)化合物。

3.根据权利要求1的化合物，其中所述化合物为式(I)化合物的酸式盐。

4.根据权利要求3的化合物，其中所述化合物为式(I)化合物的HCl盐。

5.药物组合物，其包含式(I)化合物：

或其药学上可接受的盐和药学上可接受的载体。

6.根据权利要求5的药物组合物，其包含式(I)化合物。

7.根据权利要求5的药物组合物，其包含式(I)化合物的酸式盐。

8.根据权利要求7的药物组合物，其包含式(I)化合物的HCl盐。

9.治疗受试者中的炎性疾病的方法，其包括给药式(I)化合物：

或其药学上可接受的盐，其中所述炎性疾病选自病毒性、酒精性或药物诱发的急性或暴发性肝炎、脂肪肝、酒精性和非酒精性、病毒性和非病毒性肝炎、肝硬化、自身免疫性肝炎、慢性活动性肝炎、威尔逊病、重症肌无力、特发性口炎性腹泻、自身免疫性炎性肠病、溃疡性结肠炎、克罗恩病、炎性肠病、内分泌性眼病、格雷夫斯病、结节病、原发性胆汁性肝硬化、胰腺炎、肾炎、内毒素休克、脓毒性休克、血液动力学休克、脓毒综合征、缺血后再灌注损伤、疟疾、分枝杆菌感染、脑膜炎、银屑病、哮喘、慢性阻塞性肺疾病(COPD)、嗜酸性粒细胞增多、充血性心力衰竭、纤维化疾病、囊性纤维化、肺纤维化、肝纤维化、肾纤维化、恶病质、移植物排斥、移植物抗宿主病、移植排斥、癌症、涉及血管生成的疾病、自身免疫疾病、强直性脊柱炎、自身免疫性脑脊髓炎、自身免疫性造血系统疾病、溶血性贫血、再生障碍性贫血、单纯红细胞性贫血、特发性血小板减少症、系统性红斑狼疮(SLE)、多发性软骨炎、硬皮病、韦格纳肉芽肿病、皮肌炎、赖特氏综合征、非传染性葡萄膜炎、自身免疫性角膜炎、干燥性角膜结膜炎、春季角膜结膜炎、间质性肺纤维化、银屑病关节炎、银屑病和其他良性或恶性增殖性皮肤病、特应性皮炎、荨麻疹、神经变性疾病、帕金森病、阿尔茨海默症、急性和慢性多发性硬化、癌症、病毒感染例如SARS、MERS或COVID-19、人免疫缺陷病毒(HIV)、恶病质、血栓形成、皮肤炎性疾病、骨关节炎(OA)、骨质疏松症、RA、肺气肿、慢性支气管炎、过敏性鼻炎、辐射损伤、高氧肺泡损伤、牙周病、非胰岛素依赖性糖尿病(II型糖尿病)和胰岛素依赖性糖尿病(青少年或I型糖尿病)。

10.治疗受试者的疾病的方法，其包括给药式(I)化合物：

或其药学上可接受的盐，其中所述疾病选自哮喘、慢性阻塞性肺疾病(COPD)(例如慢性支气管炎和/或肺气肿)、特应性皮炎、荨麻疹、过敏性鼻炎、过敏性结膜炎、春季结膜炎、嗜酸性肉芽肿、银屑病、类风湿关节炎、脓毒性休克、溃疡性结肠炎、克罗恩病、心肌和脑的再灌注损伤、慢性肾小球肾炎、内毒素性休克、成人呼吸窘迫综合征、多发性硬化、认知损伤(例如在神经系统障碍中，例如阿尔茨海默症)、抑郁、或疼痛。

11.根据权利要求10的方法，其中所述疾病为慢性阻塞性肺疾病(COPD)、哮喘、银屑病或类风湿关节炎。

12.用于合成式(I)化合物或其盐的方法：

其包括水解下式化合物

其中R¹为(C1-C6)烷基，其任选被卤素取代1-3次。

13.根据权利要求12的方法，其中R¹为甲基或叔丁基。

14.用于合成式(I)化合物的药学上可接受的酸式盐的方法：

其包括将式(I)化合物与药学上可接受的酸在适合的溶剂中反应。

15.根据权利要求14的方法，其中所述药学上可接受的酸为盐酸。

16.下式化合物

其中R¹为(C1-C6)烷基，其任选被卤素取代1-3次。