CN113831296A - 1-苯基-3-(4-(嘧啶-5-基氨基)苯基)丙-2-烯-1-酮类化合物及其用途 - Google Patents

1-苯基-3-(4-(嘧啶-5-基氨基)苯基)丙-2-烯-1-酮类化合物及其用途 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种1‑苯基‑3‑(4‑(嘧啶‑5‑基氨基)苯基)丙‑2‑烯‑1‑酮类化合物或其药学上可接受的盐具有化学式(I)的化合物
Figure DDA0003181982650000011
其中R1、R2、R3和R4分别为氢或羟基，R5和R6为含有C1‑16烷基或C2‑16烯基。本发明的化合物对Aβ蛋白的聚集具有很好的抑制效果，通过抑制Aβ蛋白的聚集保护神经细胞活性，通过抑制细胞脂质过氧化水平，抑制细胞铁死亡。有希望进一步开发用于治疗阿尔茨海默症等，或是作为铁死亡抑制剂治疗与细胞铁死亡相关的疾病。

Description

1-苯基-3-(4-(嘧啶-5-基氨基)苯基)丙-2-烯-1-酮类化合物 及其用途
技术领域
本发明涉及医药化学领域，具体地说，涉及一种1-苯基-3-(4-(嘧啶-5-基氨基)苯基)丙-2-烯-1-酮类化合物、制备方法及其用途。
背景技术
阿尔兹海默症是在1907年由Alois Alzheimer首先提出的一种慢性，进行性和不可逆的神经退行性疾病。尽管100多年来对AD的药物研发付出了巨大的努力，人们仍无法治愈这种致命疾病。AD的特征是导致不可逆转的记忆力减退，语言障碍，严重的行为异常和学习障碍。迄今为止，美国食品药品监督管理局(FDA)批准的治疗AD药物有三种乙酰胆碱酯酶(AChE)抑制剂，多奈哌齐，卡巴拉汀和加兰他敏和一种NMDA受体(NMDAR)拮抗剂美金刚。此外，2019年11月，中国国家药品监督管理局批准了上海绿谷药业有限公司研发的治疗AD的新药低聚果糖酸钠(GV-971)。用于改善轻度至中度AD患者的认知功能障碍。散发性AD的发病机制仍不清楚，其发病机制至今仍未阐明。Aβ蛋白聚集形成的淀粉样斑块是AD早期最主要的病理特征，β-淀粉样蛋白在脑内的聚集会产生神经毒性造成神经细胞的死亡并推进AD疾病的恶化，β-淀粉样蛋白假说是目前AD药物研发的主流治疗靶点，因此确定Aβ蛋白聚集抑制为设计药物的核心靶点。
最新研究表明，AD与铁死亡密切相关。铁死亡是12年新发现的由谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)控制的细胞内微环境的氧化扰动引起的一种调节性细胞死亡，可被铁螯合物和亲脂性抗氧化剂抑制。铁死亡的特点是铁失调和脂质过氧化物积累和活性氧(ROS)的增多，这也是AD的病理特征。多个AD临床研究药物如自由基捕获抗氧化剂生育酚和铁螯合剂DFO被证实是铁死亡抑制剂。因此，抑制铁死亡已经成为治疗AD的新靶点。针对细胞内ROS介导的氧化损伤的神经保护策略将是治疗AD一种有意义方式。因此，我们选择抑制氧化损伤导致的细胞铁死亡和Aβ蛋白聚集作为药物设计和筛选的靶点。
发明内容
为了克服现有技术上的问题，本发明提供一种1-苯基-3-(4-(嘧啶-5-基氨基)苯基)丙-2-烯-1-酮类化合物、制备方法及其用途，对Aβ蛋白的聚集和细胞铁死亡具有很好的抑制效果，用于治疗阿尔茨海默症和与细胞铁死亡相关的疾病。
本发明提供以下技术方案：
一种1-苯基-3-(4-(嘧啶-5-基氨基)苯基)丙-2-烯-1-酮类化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于，具有化学式(I)的化合物，
Figure BDA0003181982630000021
其中，R1、R2、R3和R4分别为氢或羟基，R5和R6分别为C1-16烷基或C2-16烯基。
进一步地，当R1为氢、R2为羟基、R3为氢、R4为氢，R5为甲基，R6为甲基，该化合物是(E)-3-(4-((2-(二甲氨基)嘧啶-5-基)氨基)苯基)-1-(3-羟基苯基)丙-2-烯-1-酮。
进一步地，当R1为氢、R2为羟基、R3为氢、R4为羟基，R5为甲基，R6为甲基，该化合物是(E)-3-(4-((2-(二甲氨基)嘧啶-5-基)氨基)苯基)-1-(3,5-二羟基苯基)丙-2-烯-1-酮。
进一步地，当R1为羟基、R2为羟基、R3为羟基、R4为氢，R5为甲基，R6为甲基，该化合物是(E)-3-(4-((2-(二甲氨基)嘧啶-5-基)氨基)苯基)-1-(2,3,4-三羟基苯基)丙-2-烯-1-酮。
进一步地，在制备用于预防和治疗阿尔茨海默病药物中的应用。
进一步地，在制备用于细胞铁死亡抑制剂中的应用。
一种药物组合物，包含化合物和药学上可接受的载体或赋形剂。
一种具有治疗阿尔茨海默病药的药物，1-苯基-3-(4-(嘧啶-5-基氨基)苯基)丙-2-烯-1-酮类化合物，或其溶剂化物、立体异构体、互变异构体及前药。
一种制备化合物的制备方法，包括以下步骤：
步骤1将苯乙酮与对溴苯甲醛发生醛酮缩合反应，得到查尔酮类化合物；
步骤2产物与2,5-二氨基嘧啶发生取代反应，得到1-苯基-3-(4-(嘧啶-5-基氨基)苯基)丙-2-烯-1-酮类化合物。
进一步地，若步骤二中苯乙酮为3,5-二羟基苯乙酮或2,3,4-三羟基苯乙酮，在步骤1前还包括步骤0：将多羟基苯乙酮与溴甲基甲醚反应，处理得甲氧甲基保护的苯乙酮；
在步骤2后还包括步骤3向产物中滴加HCI水溶液反应脱去甲氧甲基，得到目标终产物。
进一步地，步骤0中，将3,5-二羟基苯乙酮或2,3,4-三羟基苯乙酮溶解在无水丙酮中，加入3倍当量的碳酸钾，冰浴条件下缓慢滴加3倍当量的溴甲基甲醚，之后回流反应4小时，冷却至室温后，处理得甲氧甲基保护的苯乙酮；
步骤1中，以浓度比例10％的KOH水溶液作为催化剂，常温条件下反应48-96h后，缓慢滴加浓度比例10％的HCI水溶液，将pH值调整至7；
步骤2中，以三(二亚苄基茚丙酮)二钯pb2dba3作为催化剂，并在5-二叔丁基膦-1′,3′,5′-三苯基-1′H-[1,4′]二吡唑BippyPhos的作用下进行反应，反应条件为110℃、6h、无水无氧；
步骤3中，向甲醇混合液中缓慢滴加10％HCI水溶液，回流条件下反应20分钟。
进一步地，原料为3-羟基苯乙酮，通过步骤1、2，制得权利要求2所述化合物；原料为3,5-二羟基苯乙酮，通过步骤0、1、2、3，制得权利要求3所述化合物；原料为2,3,4-三羟基苯乙酮，通过步骤0、1、2、3，得到权利要求4所述化合物。
采用上述技术方案，本发明具有如下有益效果：
1、本发明提供了极性极高，合成分离难度较大的1-苯基-3-(4-(嘧啶-5-基氨基)苯基)丙-2-烯-1-酮类化合物的合成和分离纯化方法。
2、本发明合成的化合物，经实验证明对Aβ蛋白的聚集具有很好的抑制效果，通过抑制Aβ蛋白的聚集保护神经细胞活性，其具有抑制Aβ蛋白聚集的药物活性，其中化合物A-N-5的效果明显优于阳性药姜黄素和EGCG的效果，可为开发阿尔兹海默症药物提供先导化合物。
3、本发明合成的化合物已证实通过抑制细胞脂质过氧化水平，抑制细胞铁死亡。有希望进一步开发作为铁死亡抑制剂，治疗与细胞铁死亡相关的疾病。
附图说明
图1是本发明化合物A-C-3的1H NMR谱图；
图2是本发明化合物A-C-3的13C NMR谱图；
图3是本发明化合物A-C-5的1H NMR谱图；
图4是本发明化合物A-C-5的13C NMR谱图；
图5是本发明化合物A-M-1的1H NMR谱图；
图6是本发明化合物A-M-1的13C NMR谱图；
图7是本发明化合物A-M-2的1H NMR谱图；
图8是本发明化合物A-M 2的13C NMR谱图；
图9是本发明化合物A-M-4的1H NMR谱图；
图10是本发明化合物A-M-4的13C NMR谱图；
图11是本发明化合物A-M-5的1H NMR谱图；
图12是本发明化合物A-M-5的13C NMR谱图；
图13是本发明化合物A-N-1的1H NMR谱图；
图14是本发明化合物A-N-1的13C NMR谱图；
图15是本发明化合物A-N-2的1H NMR谱图；
图16是本发明化合物A-N-2的13C NMR谱图；
图17是本发明化合物A-N-4的1H NMR谱图；
图18是本发明化合物A-N-4的13C NMR谱图；
图19是本发明化合物A-N-5的1H NMR谱图；
图20是本发明化合物A-N-5的13C NMR谱图；
图21为采用ThT法检测1-苯基-3-(4-(嘧啶-5-基氨基)苯基)丙-2-烯-1-酮类化合物的活性的实验结果图；
图22为1-苯基-3-(4-(嘧啶-5-基氨基)苯基)丙-2-烯-1-酮类化合物的细胞毒性的实验结果图；
图23为高浓度下1-苯基-3-(4-(嘧啶-5-基氨基)苯基)丙-2-烯-1-酮类化合物对Aβ蛋白聚集引起的毒性抑制程度的实验结果图；
图24为低浓度下1-苯基-3-(4-(嘧啶-5-基氨基)苯基)丙-2-烯-1-酮类化合物对Aβ蛋白聚集引起的毒性抑制程度的实验结果图；
图25为1-苯基-3-(4-(嘧啶-5-基氨基)苯基)丙-2-烯-1-酮类化合物对Aβ蛋白引起的脂质过氧化水平的抑制程度的实验结果图；
图26为1-苯基-3-(4-(嘧啶-5-基氨基)苯基)丙-2-烯-1-酮类化合物对RSL-3引起的脂质过氧化水平的抑制程度的实验结果图；
图27为本发明化合物A-N-5与Aβ1-42蛋白分子对接的2D模型图；
图28为本发明化合物A-N-5与Nrf2蛋白分子对接的2D模型图。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，下面结合附图及实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的结构图及具体实施例仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
实施例1
一种1-苯基-3-(4-(嘧啶-5-基氨基)苯基)丙-2-烯-1-酮类化合物或其药学上可接受的盐，具有化学式(I)的化合物，
Figure BDA0003181982630000051
其中，R1、R2、R3和R4分别为氢或羟基，R5和R6为含有C1-16烷基或C2-16烯基。
本发明提供一种药物组合物，包含上述化合物以及药学上可接受的载体或赋形剂。本发明可单独使用或制成其他临床可用的不同剂型的药物，剂型包括散剂、注射剂、胶囊剂、丸剂、微胶囊、片剂、膜剂、软胶囊剂、膏剂、栓剂、气雾剂、酊剂、口服液、颗粒剂。可按照药物制剂学添加医学上可接受的药用辅料，包括填充剂、粘合剂、润湿剂、崩解剂、pH调节剂或润滑剂等。
该化合物在制备用于预防和治疗阿尔茨海默病药物中的应用，以及在制备用于细胞铁死亡抑制剂中的应用。本发明提供的1-苯基-3-(4-(嘧啶-5-基氨基)苯基)丙-2-烯-1-酮类化合物与现有已知具有较好作用的Aβ蛋白抑制剂相比，本发明在体外和细胞模型中展现了更好的抑制效果，同时还可以通过抑制脂质过氧化的作用，进而抑制细胞铁死亡。尤其是化合物(E)-3-(4-((2-(二甲氨基)嘧啶-5-基)氨基)苯基)-1-(2,3,4-三羟基苯基)丙-2-烯-1-酮，有希望进一步开发用于治疗阿尔兹海默症和与细胞铁死亡相关的疾病。
以抑制Aβ蛋白为靶点进行药物设计，抑制剂与Aβ蛋白结合位点通常为蛋白的β-折叠部分，形成氢键作用的原子主要为O、N、F原子，同时，具有刚性平面结构和共轭结构的化合物更易与Aβ蛋白结合。通过高通量筛选的两种铁死亡抑制剂ferrostatin-1和liproxstatin-1都是芳香胺结构，二芳基胺类衍生物是铁死亡的有效抑制剂。通过对二芳基胺的氮杂类似物进行修饰，可以实现良好的稳定性和更高的反应性。二芳基胺结构中，仲胺N-H键的解离能越低，分子与脂质过氧自由基(LOO·)的反应速率常数kinh越大。发明人通过在仲胺的对位引入供电子基团-N(CH3)2，来降低N-H的解离能，将反应速率常数kinh提高1-2个数量级。从而提高分子与脂质过氧自由基的反应速率。
此外，供电子基团除-N(CH3)2，还可以为N(C1-16-烷基)2或N(C2-16-烯基)2，随着供电子基团中烷基或烯基链的增长，其供电子效应逐渐增加，从而提高反应速率常数，本发明制备方法适用于供电子基团侧链改变为N(C1-16-烷基)2或N(C2-16-烯基)2的情况。
本发明提供了一种1-苯基-3-(4-(嘧啶-5-基氨基)苯基)丙-2-烯-1-酮类化合物的制备方法，包括如下步骤：
Figure BDA0003181982630000061
1)先将苯乙酮与对溴苯甲醛在乙醇溶液中，10％KOH水溶液催化，常温条件下反应48-96小时后，缓慢滴加10％HCI水溶液调节pH＝7，处理后得到对应的查尔酮化合物。
2)然后将步骤1)的产物与N2,N2-二甲基-2,5-二氨基嘧啶反应，采用钯催化剂pb2dba3并在BippyPhos的作用下进行。反应在110℃反应6个小时，为减少副产物，反应要在无水无氧条件下进行。
3)若步骤1)中苯乙酮为3,5-二羟基苯乙酮或2,3,4-三羟基苯乙酮，则进行步骤1)前需使用溴甲基甲醚进行羟基保护。
4)将3,5-二羟基苯乙酮或2,3,4-三羟基苯乙酮溶解在无水丙酮中，加入3倍当量的碳酸钾，冰浴条件下缓慢滴加3倍当量的溴甲基甲醚，之后回流反应4小时，冷却至室温后，处理得甲氧甲基保护的苯乙酮。
5)将步骤2)得到的含有甲氧甲基保护的产物溶解在甲醇中，缓慢滴加10％HCI水溶液，回流条件下反应20分钟，经处理得到目标终产物。
实施例2
(E)-3-(4-((2-(二甲氨基)嘧啶-5-基)氨基)苯基)-1-(3-羟基苯基)丙-2-烯-1-酮的制备路线如下：
Figure BDA0003181982630000062
一、(E)-3-(4-溴苯基)-1-(3-羟基苯基)丙-2-烯-1-酮(A-C-3)的制备
其中，在本发明的步骤一中，将0.27g(2mmol)3-羟基苯乙酮加入乙醇(20mL)中搅拌至完全溶解，之后依次加入KOH水溶液(10％w/v，10mL)和0.44g(2.4mmol)对溴苯甲醛。将混合物在室温下反应72h。
通过TLC检测反应完成后，用HCl水溶液(10％v/v)将反应混合物pH调至7，分别用水和乙酸乙酯洗涤萃取3次。减压蒸馏得到的粗产物通过硅胶柱色谱法使用乙酸乙酯/石油醚(1：10至1:3梯度洗脱)作为洗脱剂纯化，得到0.25g黄色固体，(E)-3-(4-溴苯基)-1-(3-羟基苯基)丙-2-烯-1-酮(简称为：A-C-3)，产率42.7％。
A-C-3为黄色固体粉末，HRMS质谱(ESI)m/z：C15H11BrO2(M+)，理论计算值：302.9976；测试值：303.0014[M+H]+。
A-C-3的分析数据如图1、2所示，经测定，化合物A-C-3的1H NMR为：(400MHz,CD3OD)δ7.68(d,J＝1.0Hz,2H),7.62(d,J＝8.6Hz,2H),7.59-7.52(m,3H),7.45-7.41(m,1H),7.35(t,J＝7.9Hz,1H),7.05(ddd,J＝8.1,2.5,0.9Hz,1H)。
图2所示的13C NMR谱图，13C NMR为：(100MHz,CD3OD)δ190.65,157.77,143.10,139.20,134.03,131.89,129.90,129.53,124.33,122.56,120.10,119.67,114.46。
二、(E)-3-(4-((2-(二甲氨基)嘧啶-5-基)氨基)苯基)-1-(3-羟基苯基)丙-2-烯-1-酮(A-C-5)的制备
在步骤二中，在N2氛围中向干燥的烧瓶中依次加入18.3mg(0.02mmol)Pb2dba3，40.48mg(0.08mmol)Bippyphos，叔戊醇(2mL)，8.41mg(0.15mmol)KOH和0.02mL H2O，将混合物室温搅拌20min后，加入30.3mg A-C-3(0.1mmol)和11.0mg(0.08mmol)N2,N2-二甲基-2,5-二氨基嘧啶，之后将混合物在102℃回流6h。
通过TLC检测反应完成后，减压蒸馏得到粗产物，通过硅胶柱色谱法使用乙酸乙酯/石油醚(1：5至2:1梯度洗脱)作为洗脱剂纯化得到13.3mg红棕色粘稠液体，(E)-3-(4-((2-(二甲氨基)嘧啶-5-基)氨基)苯基)-1-(3-羟基苯基)丙-2-烯-1-酮(简称：A-C-5)，产率37.7％。
A-C-5为红棕色粘稠液体，HRMS质谱(ESI)m/z：C21H20N4O2(M+)，理论计算值：361.1620；测试值：361.1653[M+H]+，结构式如下：
Figure BDA0003181982630000071
A-C-5分析数据如图3、4所示，经测定，化合物A-C-5的1H NMR为：(700MHz,DMSO-d6)δ9.71(s,1H),8.23(m,3H),7.57(m,5H),7.35(m,2H),6.99(s,1H),6.73(s,2H),3.10(s,6H)。
13C NMR为：(175MHz,DMSO-d6)δ188.80,159.37,157.73,153.82,149.30,144.70,139.78,131.07,129.79,124.97,124.21,119.81,119.31,117.10,114.53,113.13,37.05。
实施例3
(E)-1-(3,5-二羟基苯基)-3-(4-((2-(二甲氨基)嘧啶-5-基)氨基)苯基)丙-2-烯-1-酮(A-M-5)的制备路线为：
Figure BDA0003181982630000081
一、1-(3,5-二(甲氧基甲氧基)苯基)乙烷-1-酮(A-M-1)的制备
在本发明制备方法的步骤一中，将0.76g(5mmol)3,5-二羟基苯乙酮和1.86g(15mmol)K2CO3在无水丙酮(50mL)中搅拌至完全溶解，冰浴条件下缓慢滴加溴甲基甲醚2.48g(20mmol)，将反应混合物在冰浴上冷却30min，然后在60℃回流4h。通过TLC检测反应完成后，将反应混合物冷却至室温，分别用水和乙酸乙酯洗涤萃取3次。将减压蒸馏得到的粗产物通过硅胶柱色谱法纯化，使用乙酸乙酯/石油醚(1:5)作为洗脱剂，得到0.42g无色液体1-(3,5-二(甲氧基甲氧基)苯基)乙烷-1-酮(简称：A-M-1)。
A-M-1为无色液体HRMS质谱(ESI)m/z：C12H16O5(M+)，理论计算值：241.1031；测试值：241.1075[M+H]+。
图5、6为化合物A-M-1的分析结果，A-M-1的1H NMR为：
(400MHz,CDCl3)δ7.27(d,J＝2.3Hz,2H),6.94(t,J＝2.3Hz,1H),5.20(s,4H),3.49(s,6H),2.57(s,3H)。
13C NMR为：(100MHz,CDCl3)δ197.44,158.38,139.24,109.55,109.52,94.53,56.19,26.76。
二、(E)-1-(3,5-二(甲氧基甲氧基)苯基)-3-(4-溴苯基)丙-2-烯-1-酮(A-M-2)的制备
在本发明制备方法的步骤一中，将0.48g(2mmol)A-M-1加入乙醇(20mL)中搅拌至完全溶解，之后依次加入KOH水溶液(10％w/v，10mL)和0.44g(2.4mmol)对溴苯甲醛。将混合物在室温下反应72h。通过TLC检测反应完成后，用HCl水溶液(10％v/v)将反应混合物PH调至7，分别用水和乙酸乙酯洗涤萃取3次。减压蒸馏得到的粗产物通过硅胶柱色谱法使用乙酸乙酯/石油醚(1:10至1:3梯度洗脱)作为洗脱剂纯化，得到0.70g浅黄色固体(E)-1-(3,5-二(甲氧基甲氧基)苯基)-3-(4-溴苯基)丙-2-烯-1-酮(简称：A-M-2)，产率86.6％。
A-M-2为浅黄色固体，HRMS质谱(ESI)m/z：C19H19BrO5(M+)，理论计算值：407.0449；测试值：407.0482[M+H]+。
图7、8为化合物A-M-2的分析结果，A-M-2的1H NMR为：(400MHz,CDCl3)δ7.81(d,J＝15.5Hz,2H),7.66-7.40(m,5H),6.65(s,1H),6.58(s,1H),5.23(s,4H),3.49(s,6H)；
13C NMR为：(100MHz,CDCl3)δ191.74,166.32,163.84,143.16,133.69,132.28,131.32,129.89,125.02,120.86,114.87,108.36,104.01,94.06,56.45。
三、(E)-3-(4-((2-(二甲氨基)嘧啶-5-基)氨基)苯基)-1-(3,5-二(甲氧基甲氧基)苯基)丙-2-烯-1-酮(A-M-4)的制备
在本发明制备方法的步骤二中，在N2氛围中向干燥的烧瓶中依次加入18.3mg(0.02mmol)Pb2dba3，40.48mg(0.08mmol)Bippyphos，叔戊醇(2mL)，8.41mg(0.15mmol)KOH和0.02mL H2O，将混合物室温搅拌20min后，加入40.7mg A-M-2(0.1mmol)和11.0mg(0.08mmol)N2,N2-二甲基-2,5-二氨基嘧啶，之后将混合物在102℃回流6h。通过TLC检测反应完成后，减压蒸馏得到粗产物，通过硅胶柱色谱法使用乙酸乙酯/石油醚(1：5至2:1梯度洗脱)作为洗脱剂纯化得到6.00mg红棕色粘稠液体E)-3-(4-((2-(二甲氨基)嘧啶-5-基)氨基)苯基)-1-(3,5-二羟基苯基)丙-2-烯-1-酮(简称：A-M-4)，产率12.9％。
图9、10为化合物A-M-4的分析结果，A-M-4的1H NMR为：(400MHz,DMSO-d6)δ8.30(s,2H),8.26(s,1H),7.78-7.47(m,4H),7.37(d,J＝2.2Hz,2H),6.93(s,1H),6.77(d,J＝8.6Hz,2H),5.28(s,4H),3.41(s,6H),3.14(s,6H).
13C NMR为：(100MHz,DMSO-d6)δ188.53,159.77,158.42,154.19,149.81,145.67,140.87,131.68,125.33,124.57,117.22,113.51,109.62,109.14,94.52,56.26,37.44.
四、(E)-3-(4-((2-(二甲氨基)嘧啶-5-基)氨基)苯基)-1-(3,5-二羟基苯基)丙-2-烯-1-酮(A-M-5)的制备
在本发明制备方法的步骤三中，将甲氧甲基保护的23.2mg(0.05mmol)A-M-4加入甲醇中，并缓慢滴加2mL HCl(10％v/v水溶液)。在N2氛围中将反应混合物回流30min。通过TLC检测反应完成并冷却至室温。将粗产物减压浓缩后，用3*50mL乙酸乙酯洗涤粗产物，过滤干燥后得到7.50mg红色粉末状固体(E)-1-(3,5-二羟基苯基)-3-(4-((2-(二甲氨基)嘧啶-5-基)氨基)苯基)丙-2-烯-1-酮(简称：A-M-5)，产率39.8％。
A-M-5为红色粉末状固体，HRMS质谱(ESI)m/z：C21H20N4O3(M+)，理论计算值：377.1569；测试值：377.1609[M+H]+，结构式如下：
Figure BDA0003181982630000101
图11、12为A-M-5分析结果，化合物A-M-5的1H NMR为：(700MHz,DMSO-d6)δ8.36(s,2H),7.64(d,J＝8.3Hz,2H),7.58(d,J＝15.4Hz,1H),7.43(d,J＝15.4Hz,1H),6.90(s,2H),6.80(d,J＝8.2Hz,2H),6.49(s,1H),3.16(s,6H).
13C NMR为：(175MHz,DMSO-d6)δ189.36,159.10,157.74,153.20,149.04,144.78,140.74,131.32,125.63,125.02,117.94,113.87,107.20,106.75,37.72.
实施例4
(E)-3-(4-((2-(二甲氨基)嘧啶-5-基)氨基)苯基)-1-(2,3,4-三羟基苯基)丙-2-烯-1-酮的制备路线如下：
Figure BDA0003181982630000102
一、1-(2-羟基-3,4-二(甲氧基甲氧基)苯基)乙烷-1-酮(A-N-1)的制备
在本发明制备方法的步骤一中，将0.84g(5mmol)2,3,4-三羟基苯乙酮和1.86g(15mmol)K2CO3在无水丙酮(50mL)中搅拌至完全溶解，冰浴条件下缓慢滴加溴甲基甲醚2.48g(20mmol)，将反应混合物在冰浴上冷却30min，然后在60℃回流4h。通过TLC检测反应完成后，将反应混合物冷却至室温，分别用水和乙酸乙酯洗涤萃取3次。将减压蒸馏得到的粗产物通过硅胶柱色谱法纯化，使用乙酸乙酯/石油醚(1:5)作为洗脱剂，得到0.41g白色固体1-(2-羟基-3,4-二(甲氧基甲氧基)苯基)乙烷-1-酮(简称：A-N-1)，产率32.5％。
A-N-1为白色固体，HRMS质谱(ESI)m/z：C12H16O6(M+)，理论计算值：257.0980；测试值：257.1011[M+H]+。
图13、14是A-N-1的分析结果，化合物A-N-1的1H NMR为：(400MHz,CDCl3)δ7.48(d,J＝9.1Hz,1H),6.72(d,J＝9.1Hz,1H),5.28(s,2H),5.19(s,2H),3.64(s,3H),3.51(s,3H),2.57(s,3H).
13C NMR为：(100MHz,CDCl3)δ203.17,157.12,156.04,133.54,126.78,115.56,105.86,97.74,94.33,56.99,56.21,37.25,26.20.
二、(E)-3-(4-溴苯基)-1-(2-羟基-3,4-二(甲氧基甲氧基)苯基)丙-2-烯-1-酮(A-N-2)的制备
在本发明的步骤一中，将0.51g(2mmol)A-N-1加入乙醇(20mL)中搅拌至完全溶解，之后依次加入KOH水溶液(10％w/v，10mL)和0.44g(2.4mmol)对溴苯甲醛。将混合物在室温下反应72h。通过TLC检测反应完成后，用HCl水溶液(10％v/v)将反应混合物PH调至7，分别用水和乙酸乙酯洗涤萃取3次。减压蒸馏得到的粗产物通过硅胶柱色谱法使用乙酸乙酯/石油醚(1：10至1:3梯度洗脱)作为洗脱剂纯化，得到0.55g黄色固体(E)-3-(4-溴苯基)-1-(2-羟基-3,4-二(甲氧基甲氧基)苯基)丙-2-烯-1-酮(简称：A-N-2)，产率65.1％。
A-N-2为黄色固体，HRMS质谱(ESI)m/z：C19H19BrO6(M+)，理论计算值：423.0399；测试值：423.0435[M+H]+。
图15、16为A-N-2的分析结果，1H NMR为：(400MHz,CDCl3)δ13.20(s,1H),7.81(d,J＝15.5Hz,1H),7.64(d,J＝9.2Hz,1H),7.60-7.43(m,5H),6.76(d,J＝9.1Hz,1H),5.26(d,J＝31.5Hz,4H),3.59(d,J＝55.2Hz,6H).
13C NMR为：(100MHz,CDCl3)δ192.37,158.69,156.57,143.48,134.08,133.61,132.31,129.96,126.09,125.15,120.80,116.04,106.17,98.05,94.64,57.32,56.55.
三、(E)-3-(4-((2-(二甲氨基)嘧啶-5-基)氨基)苯基)-1-(2-羟基-3,4-二(甲氧基甲氧基)苯基)丙-2-烯-1-酮(A-N-4)的制备
在本发明的步骤二中，在N2氛围中向干燥的烧瓶中依次加入18.3mg(0.02mmol)Pb2dba3，40.48mg(0.08mmol)Bippyphos，叔戊醇(2mL)，8.41mg(0.15mmol)KOH和0.02mLH2O，将混合物室温搅拌20min后，加入42.3mg A-N-2(0.1mmol)和11.0mg(0.08mmol)N2,N2-二甲基-2,5-二氨基嘧啶，之后将混合物在102℃回流6h。通过TLC检测反应完成后，减压蒸馏得到粗产物，通过硅胶柱色谱法使用乙酸乙酯/石油醚(1：5至2:1梯度洗脱)作为洗脱剂纯化得到19.6mg红棕色粘稠液体(E)-3-(4-((2-(二甲氨基)嘧啶-5-基)氨基)苯基)-1-(2-羟基-3,4-二(甲氧基甲氧基)苯基)丙-2-烯-1-酮(简称：A-N-4)，产率41.7％。
A-N-4为红棕色粘稠液体，HRMS质谱(ESI)m/z：C25H28N4O6(M+)，理论计算值：481.2081；测试值：481.2042[M+H]+，分子式为。
图17、18为A-N-4的分析结果，化合物A-N-4的1H NMR为：(700MHz,CD3OD)δ8.23(s,1H),8.21(s,1H),7.83(d,J＝9.2Hz,1H),7.78(d,J＝15.2Hz,1H),7.62-7.55(m),7.53(d,J＝15.2Hz,1H),7.29(d,J＝8.5Hz,1H),6.90-6.72(m,3H),5.41-5.20(m,2H),5.18-4.99(m,2H),3.62-3.44(m,6H),3.17(s,3H),3.15(s,3H).
13C NMR为：(175MHz,CD3OD)δ194.15,155.21,154.61,150.99,148.42,146.87,134.90,132.15,129.04,127.41,126.12,123.79,117.26,116.38,114.78,114.52,99.31,99.02,95.85,95.71,94.12,57.49,56.73,37.71,37.68.
四、(E)-3-(4-((2-(二甲氨基)嘧啶-5-基)氨基)苯基)-1-(2,3,4-三羟基苯基)丙-2-烯-1-酮(A-N-5)的制备
在本发明制备方法的步骤三中，将甲氧甲基保护的24mg(0.05mmol)A-N-4加入甲醇中，并缓慢滴加2mL HCl(10％v/v水溶液)。在N2氛围中将反应混合物回流30min。通过TLC检测反应完成并冷却至室温。将粗产物减压浓缩后，用3*50mL乙酸乙酯洗涤粗产物，过滤干燥后得到10.7mg红色粉末状固体(E)-3-(4-((2-(二甲氨基)嘧啶-5-基)氨基)苯基)-1-(2,3,4-三羟基苯基)丙-2-烯-1-酮(简称：A-N-5)，产率55.2％。
A-N-5为红色固体粉末，HRMS质谱(ESI)m/z：C21H20N4O4(M+)，理论计算值：393.1518；测试值：393.1559[M+H]+，结构式如下：
Figure BDA0003181982630000121
图19、20为A-N-5的分析结果，化合物A-N-5的1H NMR为：(700MHz,DMSO-d6)δ13.70(s,1H),8.35(s,1H),8.34(s,1H),7.69(m,J＝8.1Hz,3H),7.40(d,J＝8.1Hz,1H),7.17-7.07(m,2H),6.90-6.81(m,2H),6.56(d,J＝8.8Hz,1H),6.45(d,J＝8.9Hz,1H),3.16(s,6H)。
13C NMR为：(175MHz,DMSO-d6)δ192.39,154.09,152.85,149.33,144.79,132.92,131.72,128.73,128.41,125.51,124.92,123.74,122.62,117.84,116.47,114.79,114.13,113.79,108.10,37.68。
实施例5
采用ThT法检测以本发明实施例2、3、4制得1-苯基-3-(4-(嘧啶-5-基氨基)苯基)丙-2-烯-1-酮类化合物对Aβ蛋白聚集程度的影响。
ThT检测方法：1)将Aβ1-42蛋白溶于1mL 1,1,1,3,3,3-六氟-2-丙醇(HFIP)中并用N2吹干，然后配置成1mM的DMSO溶液。
2)将Aβ1-42蛋白(25μM)置于10μM磷酸盐缓冲液(pH 7.4)中，加入不同浓度的抑制剂(0，10μM，25μM)，用磷酸盐缓冲液稀释每个样品至100μL，在37℃下孵育7天，将相应浓度的化合物A-N-5、A-M-5、A-C-5和阳性药姜黄素和EGCG分别加入对应的孔中，设置三组平行。
3)将样品置于96孔板并加入硫黄素-T(0.5mM)，使用荧光酶标仪(λex＝440nm；λem＝485nm)进行荧光强度的测量。使用式(1-Fi/Fc)×100％计算聚集的抑制百分率，其中Fi和Fc分别是在有和没有抑制剂的情况下减去背景后获得的荧光强度。每个实验独立重复至少3次。
检测结果如图21所示，所测试的化合物对Aβ蛋白聚集的抑制活性：化合物A-N-5>A-M-5>A-C-5，其中化合物A-N-5的抑制率为99.1％到95.8％，高于阳性对照EGCG(75.9％)和姜黄素(59.4％)。由结果可知，三种化合物可以很好的抑制Aβ蛋白聚集，该靶点方向在延缓老年痴呆病情发展的同时，有望改善病情甚至阻止病情发展。化合物A-N-5对Aβ蛋白聚集具有极高的抑制效果，有希望进一步开发用于治疗阿尔茨海默症。
实施例6
通过细胞实验检测本发明实施例2、3、4制备的1-苯基-3-(4-(嘧啶-5-基氨基)苯基)丙-2-烯-1-酮类化合物的细胞毒性和化合物对Aβ蛋白聚集引起的毒性抑制程度的影响。
1、检测细胞毒性的细胞实验方法：1)HT22细胞生长至对数期，以5×103细胞/100μL/孔铺至96孔板，使细胞粘附24小时后，用不同浓度的化合物处理细胞24h，每个浓度设置6个复孔。2)根据制造商说明使用MTS法(MTS assay；Promega)测定细胞活力，每孔加入20μLMTS，避光孵育4h后在荧光酶标仪上测量490nm和560nm处的吸光度。3)细胞活力与每个孔的吸光度成正比，并设置阴性对照组进行标准化。每组至少三个复孔计算细胞存活率的平均值±标准差(mean±standard)。
化合物的毒性结果如图22所示，由图22可知，测试化合物在40μM浓度下均无细胞毒性作用，化合物活性测试浓度低于20μM，因此，化合物可以继续进行活性测试。
2、检测Aβ蛋白聚集细胞实验方法：
1)SH-SY5Y细胞生长至对数期，以2×104细胞/100μL/孔铺至96孔板，使细胞粘附24小时后，用不同浓度的化合物处理细胞，每个浓度设置6个复孔，2)4h后加入15μM Aβ1-42蛋白，之后放入培养箱孵育48h。根据制造商说明使用MTS法(MTS assay；Promega)测定细胞活力，每孔加入20μL MTS，避光孵育4h后在荧光酶标仪上测量490nm和560nm处的吸光度。3)细胞活力与每个孔的吸光度成正比，并设置6个不加化合物只加Aβ1-42蛋白的复孔为阴性对照组，设置化合物EGCG和姜黄素为阳性对照。每组至少三个复孔计算细胞存活率的平均值±标准差(mean±standard)。
化合物的活性结果如图23和图24所示，由图可知，化合物A-N-5在20μM和10μM的浓度下可以帮助细胞几乎完全抑制Aβ蛋白聚集引起的毒性。在所有测试浓度范围的作用下，其活性优于阳性药姜黄素和EGCG。当其浓度降至1μM和0.5μM的时候，也依然显示出优于阳性对照EGCG的活性效果。与三羟基查尔酮化合物(E)-3-(4-溴苯基)-1-(2,3,4-三羟基苯基)丙-2-烯-1-酮(A-N-3)相比，A-N-5在相同浓度下，有更好的活性效果。因此，化合物A-N-5通过抑制Aβ蛋白聚集，降低了Aβ蛋白聚集引起的神经细胞死亡，与查尔酮化合物相比活性有明显的提升，有希望进一步开发用于治疗阿尔茨海默症。
实施例7
通过细胞实验检测本发明实施例2、3、4化合物对细胞铁死亡的抑制程度的影响。
1.细胞实验检测对erastin引起的铁死亡的抑制程度的影响的方法：
1)HT22细胞生长至对数期，以5×103细胞/100μL/孔铺至96孔板，使细胞粘附24小时后，用不同浓度的实施例2、3、4制备的化合物处理细胞，每个浓度设置6个复孔，孵育4h后加入浓度为10μM的铁死亡激发剂erastin。
2)使用MTS法(MTS assay；Promega)测定细胞活力，每孔加入20μL MTS，避光孵育4h后在荧光酶标仪上测量490nm和560nm处的吸光度。
3)细胞活力与每个孔的吸光度成正比，并设置6个不加化合物只加erastin蛋白的复孔为阴性对照组。每组至少三个复孔计算细胞存活率的平均值±标准差(mean±standard)。
2.细胞实验检测对RSL-3引起的铁死亡的抑制程度的影响的方法：
实施方法同上述方法，除了用500nM RSL-3代替erastin。
化合物的活性结果如下表1所示：
表1
Figure BDA0003181982630000141
备注：1)表中数值表示为三次实验的平均值±标准差；
2)IC50为半数抑制浓度，N代表化合物在10μM浓度下抑制率小于10％，即为无活性。
本发明的三种化合物在两种不同的铁死亡引发剂的细胞模型中，均表现了较好的抑制铁死亡的效果，其半数抑制率在2.65～0.39μm之间。而对照药物EGCG则不具备抑制铁死亡的效果。
实施例8
通过细胞实验检测化合物对脂质过氧化水平的抑制程度的影响。
1.细胞实验检测化合物对Aβ蛋白引起的脂质过氧化的抑制程度的影响的方法：1)SH-SY5Y细胞生长至对数期，以2×104细胞/100μL/孔铺至96孔板，使细胞粘附24小时后，用不同浓度的实施例2、3、4的化合物处理细胞，每个浓度设置6个复孔。2)4h后加入20μM Aβ1-42蛋白，之后放入培养箱孵育48h。设置6个不加化合物只加Aβ1-42蛋白的复孔，6个浓度为1mM马来酸二乙酯(DEM)复孔，6个不做任何处理复孔作为对照组。3)之后弃去孔中培养基，加入100μLPBS清洗后弃去，每孔加入20μL胰蛋白酶使细胞悬浮2min，加入80μL培养基终止胰蛋白酶作用，将同一组别六个复孔转移至15ml离心管离心后弃去上清，加入500μLPBS重悬后转移至流式细胞仪专用离心管，加入浓度为1μM的荧光指示剂BODIPY-C11581/591，避光孵育30min。4)使用流式细胞仪进行分析(λex＝488nm；λem＝525±25nm)，之后采用Flowjo(V10)软件进行数据分析和处理。平行试验进行三次，结果如图25所示。
2.细胞实验检测化合物对细胞铁死亡引起的脂质过氧化的抑制程度的影响的方法：
1)HT22细胞生长至对数期，以5×103细胞/100μL/孔铺至96孔板，使细胞粘附24小时后，用不同浓度的实施例2、3、4制备的化合物处理细胞，每个浓度设置6个复孔。
2)4h后加入10μm RSL3蛋白，之后放入培养箱孵育48h。设置6个不加化合物只加RSL3蛋白的复孔，6个浓度为1mM马来酸二乙酯(DEM)复孔，6个不做任何处理复孔作为对照组。
3)之后弃去孔中培养基，加入100μLPBS清洗后弃去，每孔加入20μL胰蛋白酶使细胞悬浮2min，加入80μL培养基终止胰蛋白酶作用，将同一组别六个复孔转移至15ml离心管离心后弃去上清，加入500μLPBS重悬后转移至流式细胞仪专用离心管，加入浓度为1μM的荧光指示剂BODIPY-C11581/591，避光孵育30min。
4)使用流式细胞仪进行分析(λex＝488nm；λem＝525±25nm)，之后采用Flowjo(V10)软件进行数据分析和处理。平行试验进行三次，结果如图26所示。
Aβ蛋白和RSL-3会显著提高细胞的脂质过氧化程度，而化合物A-N-5可以使脂质过氧化水平降低至正常细胞的水平，表明该系列化合物具有降低细胞脂质过氧化水平的功能。
实验例9
化合物与蛋白分子对接探究分子作用机制
1)化合物结构与蛋白质结构导入和预处理
使用ChemDraw Professional 15.0软件绘制所有分子结构，使用Chem3D 15.0软件转为3D结构并保存为.mol2格式，在Discovery Studio 3.1(DS)软件中点击File-New-Molecular Window，在工具栏中，点击Small Molecules-Prepare or Filter Ligands-Prepare Ligands，打开流程参数设置界面；将Input Ligands参数设置为structures:All，对所有的小分子进行处理，其余参数设置默认值；点击Run运行任务。
从蛋白质晶体结构数据库(PDB)(http://www.rcsb.org/)下载Aβ1-42蛋白晶体结构PDB格式文件(编码:1IYT)。在Discovery Studio 3.1中从File中打开下载的Aβ1-42蛋白，在系统视图中选中水分子并删除，在工具栏中依次点击Macromolecules-PrepareProtein-Clean Protein进行蛋白优化处理。之后进行氨基酸柔性设定，依次点击RecrptorLigand Interactions-Ligand Interactions，显示与配体具有相互作用的氨基酸，在显示界面中以此选择Define and Edit Binding Site，选择From Current Selection，得到对接位点并通过Attributes of SBD-Site-Sphere调整坐标和大小。
2)蛋白质柔性对接
在菜单栏依次点击View–Explorers-Protocols，在弹出的Protocols中依次点击Receptor Ligand Interactions-Dock Ligand，进入柔性对接。在参数设置栏中，点击Input Typed Protein Molecule，选择Aβ1-42为受体蛋白。点击Input Ligands，选择提前导入的全部配体分子。点击Input Site Sphere，选择binding-Sphere，指定活性位点。点击Generate Ligand Conformations设置对接参数，Conformation Method选择BEST。MaxHits to Save设置为3，Parallel Processing设置为True，TOP HITS设置为10，Randomconformations设置为10，Orientations to Refine设置为10。点击Run运行，得到对接结果。
3)对接结果分析处理
在任务栏中，双击完成的对接结果，点击View Results显示受体配体对接构象，在工具栏中依次点击Receptor-Ligand Interactions-View Interations-Analyze LigandPoses，分别点击Input Receptor和Input Ligands选中相应对接蛋白和配体构象，其余参数为默认值，点击Run运行任务。点击View Statistical Information查看与配体分子有相互作用的氨基酸残基。在对接结果的表格窗口中，设置-CDOCKER INTERACTION ENERGY为Top，设置Value为1，并选择Apply filter to each group of identical values，筛选对接结果中-CDOCKER INTERACTION ENERGY得分最高的对接构象。
通过以上一系列的活性实验，结果表明合成的目标化合物均有较好的抑制Aβ蛋白聚集和细胞铁死亡的活性，为了探究化合物与Aβ蛋白和在铁死亡中的作用机制，同时对下一步的结构优化提供设计思路，选择三羟基化合物A-N-5，探究分子与蛋白的相互作用。
A-N-5与Aβ蛋白(PDB:1IYT)的分子对接，结果如图27所示，A-N-5与蛋白的相互作用能量为-38.0395kcal/mol，分析对接结果，A-N-5与蛋白的相互作用主要是氨基酸Lys16与羟基和苯环上的叔胺形成的氢键作用，与二芳胺连接的两个苯环的π-烷基和π-离子作用，Gln15与羰基的氢键作用，Phe19与左侧苯环形成的π-πT型作用和Phe20与羟基形成的氢键作用。分析化合物与蛋白的相互作用不难发现，A-N-5与蛋白的相互作用方式多样且形成更多的氢键作用。此外，A-N-5与Aβ蛋白的作用结合位置位于Aβ蛋白的核心拉链区，根据文献，Aβ蛋白的核心拉链区位于蛋白的16-21位氨基酸，是抑制Aβ蛋白聚集的关键作用位点，这也解释了合成化合物能较好抑制Aβ蛋白聚集的原因。
根据化合物的靶点设计思路，通过抑制脂质过氧化作用抑制达到抑制细胞铁死亡的活性作用，核因子红系2相关因子2(Nrf2)是抗氧化反应的关键调节剂。在正常细胞中，在氧化或亲电作用下，Nrf2从Keap1蛋白结合中释放出来并转移到细胞核中。在细胞核中，Nrf2转录抗氧化剂反应元件(ARE)依赖性基因，以平衡氧化介质并维持细胞氧化还原稳态。因此选择Nrf2(3WN7)蛋白与化合物A-N-5进行分子对接，探究其相互作用对抑制细胞铁死亡的作用机理。
结果如图28所示，化合物A-N-5与Nrf2蛋白的相互作用能量分别为-57.8726kcal/mol。分析对接结果，A-N-5与蛋白的相互作用主要是氨基酸Arg与左侧苯环的π-离子作用，Asn和Asp与仲胺和右侧苯环形成的氢键作用。化合物A-N-5与蛋白结合有较多的氢键作用，使其具有更强的相互作用力，这也解释了A-N-5有更好的抑制脂质过氧化和细胞铁死亡作用活性的原因。
本发明所涉及的化合物对Aβ蛋白的聚集具有很好的抑制效果，同时还可以抑制细胞铁死亡，其中化合物A-N-5的效果明显优于阳性药姜黄素和EGCG的效果，有希望进一步开发用于治疗阿尔茨海默症等，或是作为铁死亡抑制剂治疗与细胞铁死亡相关的疾病。分子对接的研究表明，化合物A-N-5与Aβ蛋白和Nrf2蛋白均具有较多的氢键作用和较强的相互作用力，解释了化合物活性较好的原因。
以上所述实施例仅表达了本发明的实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。

Claims (12)

1.一种1-苯基-3-(4-(嘧啶-5-基氨基)苯基)丙-2-烯-1-酮类化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于，具有化学式(I)的化合物，
Figure FDA0003181982620000011
其中，R1、R2、R3和R4分别为氢或羟基，R5和R6分别为C1-16烷基或C2-16烯基。
2.根据权利要求1所述的化合物，其特征在于，当R1为氢、R2为羟基、R3为氢、R4为氢，R5为甲基，R6为甲基，该化合物是(E)-3-(4-((2-(二甲氨基)嘧啶-5-基)氨基)苯基)-1-(3-羟基苯基)丙-2-烯-1-酮。
3.根据权利要求1所述的化合物，其特征在于，当R1为氢、R2为羟基、R3为氢、R4为羟基，R5为甲基，R6为甲基，该化合物是(E)-3-(4-((2-(二甲氨基)嘧啶-5-基)氨基)苯基)-1-(3,5-二羟基苯基)丙-2-烯-1-酮。
4.根据权利要求1所述的化合物，其特征在于，当R1为羟基、R2为羟基、R3为羟基、R4为氢，R5为甲基，R6为甲基，该化合物是(E)-3-(4-((2-(二甲氨基)嘧啶-5-基)氨基)苯基)-1-(2,3,4-三羟基苯基)丙-2-烯-1-酮。
5.根据权利要求1-4任意一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于，在制备用于预防和治疗阿尔茨海默病药物中的应用。
6.根据权利要求1-4任意一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于，在制备用于细胞铁死亡抑制剂中的应用。
7.一种药物组合物，包含根据权利要求1-4任一项所述化合物和药学上可接受的载体或赋形剂。
8.一种具有治疗阿尔茨海默病药的药物，其特征在于：含有权利要求1-4任意一项所述的1-苯基-3-(4-(嘧啶-5-基氨基)苯基)丙-2-烯-1-酮类化合物，或其溶剂化物、立体异构体、互变异构体及前药。
9.一种制备权利要求1-4所述化合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤1将苯乙酮与对溴苯甲醛发生醛酮缩合反应，得到查尔酮类化合物；
步骤2产物与2,5-二氨基嘧啶发生取代反应，得到1-苯基-3-(4-(嘧啶-5-基氨基)苯基)丙-2-烯-1-酮类化合物。
10.根据权利要求9所述的化合物的制备方法，其特征在于，若步骤二中苯乙酮为3,5-二羟基苯乙酮或2,3,4-三羟基苯乙酮，在步骤1前还包括步骤0：将多羟基苯乙酮与溴甲基甲醚反应，处理得甲氧甲基保护的苯乙酮；
在步骤2后还包括步骤3向产物中滴加HCI水溶液反应脱去甲氧甲基，得到目标终产物。
11.根据权利要求10所述的化合物的制备方法，其特征在于，步骤0中，将3,5-二羟基苯乙酮或2,3,4-三羟基苯乙酮溶解在无水丙酮中，加入3倍当量的碳酸钾，冰浴条件下缓慢滴加3倍当量的溴甲基甲醚，之后回流反应4小时，冷却至室温后，处理得甲氧甲基保护的苯乙酮；
步骤1中，以浓度比例10％的KOH水溶液作为催化剂，常温条件下反应48-96h后，缓慢滴加浓度比例10％的HCI水溶液，将pH值调整至7；
步骤2中，以三(二亚苄基茚丙酮)二钯pb2dba3作为催化剂，并在5-二叔丁基膦-1′,3′,5′-三苯基-1′H-[1,4′]二吡唑BippyPhos的作用下进行反应，反应条件为110℃、6h、无水无氧；
步骤3中，向甲醇混合液中缓慢滴加10％HCI水溶液，回流条件下反应20分钟。
12.根据权利要求10所述的化合物的制备方法，其特征在于，原料为3-羟基苯乙酮，通过步骤1、2，制得权利要求2所述化合物；原料为3,5-二羟基苯乙酮，通过步骤0、1、2、3，制得权利要求3所述化合物；原料为2,3,4-三羟基苯乙酮，通过步骤0、1、2、3，得到权利要求4所述化合物。
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