CN113826582A - 急性痛风性关节炎病症结合大鼠模型的造模及评价方法 - Google Patents
急性痛风性关节炎病症结合大鼠模型的造模及评价方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN113826582A CN113826582A CN202111190196.1A CN202111190196A CN113826582A CN 113826582 A CN113826582 A CN 113826582A CN 202111190196 A CN202111190196 A CN 202111190196A CN 113826582 A CN113826582 A CN 113826582A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- damp
- rat
- gouty arthritis
- parts
- acute gouty
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 201000005569 Gout Diseases 0.000 title claims abstract description 52
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 title claims abstract description 44
- 238000011552 rat model Methods 0.000 title claims abstract description 41
- 206010018634 Gouty Arthritis Diseases 0.000 title claims abstract description 40
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 title claims abstract description 20
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 title claims description 17
- 241000700159 Rattus Species 0.000 claims abstract description 78
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 claims abstract description 71
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims abstract description 42
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 23
- 210000000544 articulatio talocruralis Anatomy 0.000 claims abstract description 20
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 18
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims abstract description 15
- 235000012907 honey Nutrition 0.000 claims abstract description 12
- 210000003414 extremity Anatomy 0.000 claims abstract description 9
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 claims abstract description 6
- 210000002435 tendon Anatomy 0.000 claims abstract description 6
- 230000035622 drinking Effects 0.000 claims abstract description 5
- 244000052769 pathogen Species 0.000 claims abstract description 5
- 230000005856 abnormality Effects 0.000 claims description 32
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 claims description 25
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 23
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 18
- 210000004706 scrotum Anatomy 0.000 claims description 18
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 claims description 17
- 210000003608 fece Anatomy 0.000 claims description 13
- 102000003777 Interleukin-1 beta Human genes 0.000 claims description 12
- 108090000193 Interleukin-1 beta Proteins 0.000 claims description 12
- 230000005021 gait Effects 0.000 claims description 12
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 12
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 11
- 206010024642 Listless Diseases 0.000 claims description 10
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 claims description 10
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 claims description 9
- 208000017971 listlessness Diseases 0.000 claims description 9
- 102000011899 Aquaporin 2 Human genes 0.000 claims description 8
- 108010036221 Aquaporin 2 Proteins 0.000 claims description 8
- 206010012735 Diarrhoea Diseases 0.000 claims description 8
- 235000019733 Fish meal Nutrition 0.000 claims description 8
- LEHOTFFKMJEONL-UHFFFAOYSA-N Uric Acid Chemical compound N1C(=O)NC(=O)C2=C1NC(=O)N2 LEHOTFFKMJEONL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 239000004467 fishmeal Substances 0.000 claims description 8
- 239000005018 casein Substances 0.000 claims description 7
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 claims description 7
- 239000013078 crystal Substances 0.000 claims description 7
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 7
- 230000004044 response Effects 0.000 claims description 7
- 239000001763 2-hydroxyethyl(trimethyl)azanium Substances 0.000 claims description 6
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 235000019743 Choline chloride Nutrition 0.000 claims description 6
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 claims description 6
- 241000209140 Triticum Species 0.000 claims description 6
- 235000021307 Triticum Nutrition 0.000 claims description 6
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 claims description 6
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 claims description 6
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 claims description 6
- 235000014121 butter Nutrition 0.000 claims description 6
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 claims description 6
- 239000011575 calcium Substances 0.000 claims description 6
- 229960003178 choline chloride Drugs 0.000 claims description 6
- SGMZJAMFUVOLNK-UHFFFAOYSA-M choline chloride Chemical compound [Cl-].C[N+](C)(C)CCO SGMZJAMFUVOLNK-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 6
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 claims description 6
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 6
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 claims description 6
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 claims description 6
- 238000000227 grinding Methods 0.000 claims description 6
- 230000006996 mental state Effects 0.000 claims description 6
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 6
- 239000004575 stone Substances 0.000 claims description 6
- 238000001931 thermography Methods 0.000 claims description 6
- LOGFVTREOLYCPF-KXNHARMFSA-N (2s,3r)-2-[[(2r)-1-[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-3-hydroxybutanoic acid Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H]1CCCN1C(=O)[C@@H](N)CCCCN LOGFVTREOLYCPF-KXNHARMFSA-N 0.000 claims description 5
- 102000018932 HSP70 Heat-Shock Proteins Human genes 0.000 claims description 5
- 108010027992 HSP70 Heat-Shock Proteins Proteins 0.000 claims description 5
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 claims description 5
- 101000839464 Leishmania braziliensis Heat shock 70 kDa protein Proteins 0.000 claims description 5
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 claims description 5
- 230000036285 pathological change Effects 0.000 claims description 5
- 231100000915 pathological change Toxicity 0.000 claims description 5
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 claims description 5
- 239000011734 sodium Substances 0.000 claims description 5
- 230000002485 urinary effect Effects 0.000 claims description 5
- 206010017577 Gait disturbance Diseases 0.000 claims description 4
- 239000003833 bile salt Substances 0.000 claims description 4
- 206010016256 fatigue Diseases 0.000 claims description 4
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 claims description 4
- 239000010871 livestock manure Substances 0.000 claims description 4
- 230000003340 mental effect Effects 0.000 claims description 4
- 238000000465 moulding Methods 0.000 claims description 4
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 claims description 4
- 238000012545 processing Methods 0.000 claims description 4
- 238000011158 quantitative evaluation Methods 0.000 claims description 4
- 230000000405 serological effect Effects 0.000 claims description 4
- 230000008925 spontaneous activity Effects 0.000 claims description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 4
- 210000002268 wool Anatomy 0.000 claims description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 3
- TVWHNULVHGKJHS-UHFFFAOYSA-N Uric acid Natural products N1C(=O)NC(=O)C2NC(=O)NC21 TVWHNULVHGKJHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 238000009835 boiling Methods 0.000 claims description 3
- 238000001816 cooling Methods 0.000 claims description 3
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 3
- 210000002683 foot Anatomy 0.000 claims description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 3
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 239000002184 metal Substances 0.000 claims description 3
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 claims description 3
- 230000010355 oscillation Effects 0.000 claims description 3
- 239000011148 porous material Substances 0.000 claims description 3
- 238000005057 refrigeration Methods 0.000 claims description 3
- 238000007790 scraping Methods 0.000 claims description 3
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 claims description 3
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 3
- 229910021642 ultra pure water Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 239000012498 ultrapure water Substances 0.000 claims description 3
- 229940116269 uric acid Drugs 0.000 claims description 3
- 238000012795 verification Methods 0.000 claims description 3
- 238000005303 weighing Methods 0.000 claims description 3
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 claims description 2
- MUPFEKGTMRGPLJ-RMMQSMQOSA-N Raffinose Natural products O(C[C@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O[C@@]2(CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O2)O1)[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-RMMQSMQOSA-N 0.000 claims 1
- MUPFEKGTMRGPLJ-UHFFFAOYSA-N UNPD196149 Natural products OC1C(O)C(CO)OC1(CO)OC1C(O)C(O)C(O)C(COC2C(C(O)C(O)C(CO)O2)O)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- MUPFEKGTMRGPLJ-ZQSKZDJDSA-N raffinose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O2)O)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-ZQSKZDJDSA-N 0.000 claims 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 abstract description 7
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 abstract 1
- 210000003423 ankle Anatomy 0.000 description 12
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 8
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 8
- 230000008859 change Effects 0.000 description 6
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 6
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 5
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 5
- 235000019197 fats Nutrition 0.000 description 5
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 4
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 4
- 210000004209 hair Anatomy 0.000 description 4
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 4
- 101710163595 Chaperone protein DnaK Proteins 0.000 description 3
- 101710178376 Heat shock 70 kDa protein Proteins 0.000 description 3
- 101710152018 Heat shock cognate 70 kDa protein Proteins 0.000 description 3
- 208000002193 Pain Diseases 0.000 description 3
- 230000036760 body temperature Effects 0.000 description 3
- 230000002354 daily effect Effects 0.000 description 3
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 3
- 239000004519 grease Substances 0.000 description 3
- 230000006371 metabolic abnormality Effects 0.000 description 3
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 3
- 208000006820 Arthralgia Diseases 0.000 description 2
- 208000031636 Body Temperature Changes Diseases 0.000 description 2
- 206010006784 Burning sensation Diseases 0.000 description 2
- 206010062717 Increased upper airway secretion Diseases 0.000 description 2
- 244000046052 Phaseolus vulgaris Species 0.000 description 2
- 235000010627 Phaseolus vulgaris Nutrition 0.000 description 2
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 2
- 230000002146 bilateral effect Effects 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 2
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 2
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 230000003203 everyday effect Effects 0.000 description 2
- 235000021552 granulated sugar Nutrition 0.000 description 2
- 230000037308 hair color Effects 0.000 description 2
- 206010020718 hyperplasia Diseases 0.000 description 2
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 2
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 description 2
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 2
- 210000004969 inflammatory cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 210000001503 joint Anatomy 0.000 description 2
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 2
- 208000026435 phlegm Diseases 0.000 description 2
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 2
- 210000001258 synovial membrane Anatomy 0.000 description 2
- 201000004384 Alopecia Diseases 0.000 description 1
- 208000031295 Animal disease Diseases 0.000 description 1
- 241000721047 Danaus plexippus Species 0.000 description 1
- 206010013954 Dysphoria Diseases 0.000 description 1
- 102000000589 Interleukin-1 Human genes 0.000 description 1
- 108010002352 Interleukin-1 Proteins 0.000 description 1
- 241000282376 Panthera tigris Species 0.000 description 1
- 241000167686 Reichardia Species 0.000 description 1
- 206010041349 Somnolence Diseases 0.000 description 1
- 230000003044 adaptive effect Effects 0.000 description 1
- 206010003246 arthritis Diseases 0.000 description 1
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 1
- 230000006399 behavior Effects 0.000 description 1
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 1
- 210000000845 cartilage Anatomy 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 230000027288 circadian rhythm Effects 0.000 description 1
- 230000003749 cleanliness Effects 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 239000002131 composite material Substances 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000013872 defecation Effects 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 239000003651 drinking water Substances 0.000 description 1
- 235000020188 drinking water Nutrition 0.000 description 1
- 210000005069 ears Anatomy 0.000 description 1
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 description 1
- 208000024963 hair loss Diseases 0.000 description 1
- 230000003676 hair loss Effects 0.000 description 1
- 210000003128 head Anatomy 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 208000021760 high fever Diseases 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 238000007689 inspection Methods 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 239000002932 luster Substances 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 238000005065 mining Methods 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 235000021590 normal diet Nutrition 0.000 description 1
- 230000010349 pulsation Effects 0.000 description 1
- 235000021251 pulses Nutrition 0.000 description 1
- 230000003014 reinforcing effect Effects 0.000 description 1
- 230000035807 sensation Effects 0.000 description 1
- 238000009589 serological test Methods 0.000 description 1
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 210000005222 synovial tissue Anatomy 0.000 description 1
- 210000002437 synoviocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000035922 thirst Effects 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K67/00—Rearing or breeding animals, not otherwise provided for; New or modified breeds of animals
- A01K67/02—Breeding vertebrates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K10/00—Animal feeding-stuffs
- A23K10/10—Animal feeding-stuffs obtained by microbiological or biochemical processes
- A23K10/16—Addition of microorganisms or extracts thereof, e.g. single-cell proteins, to feeding-stuff compositions
- A23K10/18—Addition of microorganisms or extracts thereof, e.g. single-cell proteins, to feeding-stuff compositions of live microorganisms
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K10/00—Animal feeding-stuffs
- A23K10/20—Animal feeding-stuffs from material of animal origin
- A23K10/22—Animal feeding-stuffs from material of animal origin from fish
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K10/00—Animal feeding-stuffs
- A23K10/30—Animal feeding-stuffs from material of plant origin, e.g. roots, seeds or hay; from material of fungal origin, e.g. mushrooms
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K20/00—Accessory food factors for animal feeding-stuffs
- A23K20/10—Organic substances
- A23K20/105—Aliphatic or alicyclic compounds
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K20/00—Accessory food factors for animal feeding-stuffs
- A23K20/10—Organic substances
- A23K20/142—Amino acids; Derivatives thereof
- A23K20/147—Polymeric derivatives, e.g. peptides or proteins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K20/00—Accessory food factors for animal feeding-stuffs
- A23K20/10—Organic substances
- A23K20/158—Fatty acids; Fats; Products containing oils or fats
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K20/00—Accessory food factors for animal feeding-stuffs
- A23K20/10—Organic substances
- A23K20/163—Sugars; Polysaccharides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K20/00—Accessory food factors for animal feeding-stuffs
- A23K20/20—Inorganic substances, e.g. oligoelements
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K20/00—Accessory food factors for animal feeding-stuffs
- A23K20/20—Inorganic substances, e.g. oligoelements
- A23K20/26—Compounds containing phosphorus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K50/00—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals
- A23K50/50—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals for rodents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K2227/00—Animals characterised by species
- A01K2227/10—Mammal
- A01K2227/105—Murine
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K2267/00—Animals characterised by purpose
- A01K2267/03—Animal model, e.g. for test or diseases
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Animal Husbandry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Physiology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Inorganic Chemistry (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Biodiversity & Conservation Biology (AREA)
- Birds (AREA)
- Mycology (AREA)
- Botany (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Marine Sciences & Fisheries (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
发明公开了一种湿热证急性痛风性关节炎病证结合大鼠模型的制备方式及其评价方法，包括以下步骤a、选用180±20g健康的雄性SPF级SD大鼠，饲以高脂高蛋白高糖饲料，自由进食，自由饮用200g•l‑1蜂蜜水，猪脂和白酒隔日交替灌胃连续21天，同时置于人工气候箱中8小时/天，持续21天获得湿热证模型；b、取步骤a获得的湿热证大鼠模型，在大鼠右踝关节两侧骨突部位进针，斜向下45°方向插入至胫骨肌腱内侧，向肢体远端方向注射MSU悬浮液制备湿热证急性痛风性关节炎大鼠模型；从三个维度通过检测大鼠指标对湿热证急性痛风性关节炎病证结合大鼠模型进行评价区分，证明该法成功的建立了一种湿热证急性痛风性关节炎大鼠病证结合模型。
Description
技术领域
本发明属于中医领域的关于病症动物模型构建技术领域，具体的说，公开了一种湿热证急性痛风性关节炎病症结合大鼠模型的造模及评价方法。
背景技术
古代医家对GA的病因病机和症状做出了探讨，为后世医学家提供了理论依据。传统医学将GA纳入痹证，《素问·痹论篇》明确指出“风、寒、湿三气”为其外因，认为风寒湿邪滞留经脉乃其病机。《丹溪心法》中指出“彼痛风者，大率因血得热……寒凉外搏，热血得寒，污浊凝涩，所以作痛”。《丹溪心法·痛风附肢节痛》指出“遍身骨节疼痛，状如虎咬，或赤肿灼热，痛有常处，或浑身壮热”，这与GA急性发作症状非常吻合。
古代医家将GA视为“富贵病”“帝王将相病”，现在随着中国经济水平的提高，人们的饮食和生活条件均发生了结构性的改变，因此GA的患病率逐年上升。94版《中医病症诊断疗效标准》根据病因病机将GA症型概括为四型：湿热蕴结型、瘀热阻滞型、痰浊阻滞型、肝肾阴虚型，其中湿热蕴结型的主症为患处卒然红肿热痛、拒按，触之灼热，得热则剧、得凉则舒，兼症伴口渴，舌红，苔黄腻，脉滑数。
发明内容
本发明要解决的技术问题是克服现有技术的不足，提供一种湿热证急性痛风性关节炎病症结合大鼠模型的造模及评价方法。
具体的技术方案为：
一种湿热证急性痛风性关节炎病症结合大鼠模型的造模方法，包括如下步骤：
S1.选用180±20g、6周龄、健康的雄性SPF级SD大鼠，饲以高脂高蛋白高糖饲料，自由进食，自由饮用200g·l-1蜂蜜水，猪脂和白酒隔日交替灌胃连续21天，其中白酒选用40-60°之间，本实施例选用52°红星二锅头，同时置于人工气候箱中8小时/天，所述人工气候箱的温度为32±2℃，相对湿度95％，21天后获得湿热证大鼠模型；
S2.取步骤S1获得的湿热证大鼠模型，在大鼠右踝关节两侧骨突部位进针，斜向下45°方向插入至胫骨肌腱内侧，向肢体远端方向注射MSU悬浮液，制备湿热证急性痛风性关节炎大鼠病证结合模型；
S3.所述步骤S2中的湿热证急性痛风性关节炎大鼠模型造模完成后，右踝关节出现红、肿、热、痛体征，三足跛行步态，红外热成像分析踝关节温度升高，CatWalk XT10.5动物步态分析及炎性因子与正常对照比较差异显著，则湿热证急性痛风性关节炎病证结合模型造模成功。
所述高脂高蛋白高糖饲料的成分为，按重量份表示，氯化胆碱0.2份，玉米25份，小麦35.5份，蜜糖酵母2.5份，磷酸氢钙2份，石粉1份，食盐0.3份，油2.5份，鱼粉20份，酪蛋白10份，另添加黄油15份，胆固醇1份，猪胆盐0.1份，绵砂糖15份。
所述步骤S2中，所述MSU悬浮液的制备方法为：用400ml超纯水加入4.5ml浓度为0.5mol·l-1的NaOH溶液中，煮沸后加入2g尿酸搅拌溶解；待温度降至60℃时用NaOH调PH至8.9，冷却，然后放置4℃冰箱冷藏过夜，盛入蒸发皿中经60℃干燥烘箱干燥，经高温灭菌后得到尿酸钠晶体粉末，用刮勺将其从蒸发皿中刮取下来用碾钵碾碎后用孔径250um的金属网筛过滤，然后用无菌EP管收集；并通过从急性痛风发作患者手足部位取出的痛风石在光学显微镜下与我们制备获取的MSU晶体鉴定是否一致，要最大程度的模拟人体内的痛风石的状态。用万分之一天平称取所需用量，以无菌生理盐水配成浓度为20mg·mL-1MSU混悬液，涡旋振荡，直至混悬液能被6号注射器针头吸取。
所述置于人工气候箱高温高湿环境的具体要求为：每日上午9点至下午5点将大鼠置于温度为32±2℃，相对湿度95％的人工气候箱中，每天统一时间为8小时。
一种湿热证急性痛风性关节炎病证结合大鼠模型的评价方法，选用以下指标，从三个维度对建立的湿热证急性痛风性关节炎病症结合大鼠模型进行湿热证的证验证：
第一维，根据人的证候诊断的四诊合参表现寻找大鼠一般状况指标对模型鼠进行定性评价，包括大鼠的证候表征神态，症状评分为：
I.精神状态
精神正常：喜动喜嗅，眼光有神，0分；
轻度异常：轻度倦怠，打斗减少，1分；
中度异常：精神倦怠，2分；
精神萎靡：弓背，蜷卧，自发活动明显减少，目无光彩，3分；
II毛色
米白色，均匀细密，柔顺有光泽，0分；
白中稍有黄色，稍乱，稍干燥，1分；
白中伴大部分黄色，乱，干燥，2分；
满目皆有黄色，毛枯躁，脏乱，3分；
III粪便
成形，粪质正常0分；
轻度异常：粪便软，含水量增加，可见反光，1分；
中度异常：粪便稀溏，部分不成形，2分；
明显异常：粪便稀溏，完全不成形，3分；
IV尿色
清亮透明,0分；
轻度异常：尿色清亮稍黄，1分；
中度异常：尿色淡黄，尿量减少，2分；
重度异常：尿色深黄，尿量明显减少，3分；
V阴囊颜色
正常没有松弛，0分；
阴囊颜色正常或略偏红，阴囊褶皱消失，1分；
阴囊颜色潮红，松弛下垂2分。
第二维为定量评价，确定以第1、8、15、21天中同一时刻用电子天平将每只大鼠称量三次并取平均值作为该大鼠该天体重数据；
第三维为微观指标和滑膜病理学改变，血清学指标：a.“湿”相关指标，水液代谢异常指标：大鼠尿液水通道蛋白-2(AQP2)；b.“热”相关指标，热休克蛋白70(HSP70)的测定；3.免疫-炎症反应指标检测，白细胞介素1β(IL-1β)；
S5.对以上指标进行观察及统计学分析，建立该病证结合大鼠模型“病”和“证”的评价体系：采用SPSS 20.0统计软件处理，各组指标数据均以(x±s)表示，数据用计量资料先进行正态检验，正态分布资料采用单因素方差分析，非正态分布资料先转换成正态分布再用单因素方差分析；进行组间比较，以P＜0.05为差异有统计学意义。
与现有技术相比，本发明的优点在于：
1.本发明提供了建立一种湿热证急性痛风性关节炎病证结合大鼠模型的制备方式，设计了在普通纯化饲料基础上改良的高脂高蛋白高糖饲料，发明了高脂高蛋白高糖饲料加隔日灌服猪脂和白酒及被迫置于高温高湿的人造环境中模拟中医饮食失节、高温高湿的气候环境并选用6周龄雄性SD大鼠诱导21天，建立湿热证模型，其次通过大鼠右踝关节注射MSU晶体，建立了急性痛风性关节炎模型，二者合并从而制备了一种湿热证急性痛风性关节炎病证结合大鼠模型。并从三个维度进行湿热证型和疾病的评价，结果表明该方法可成功复制湿热证急性痛风性关节炎病证结合大鼠模型，而且该复制方法稳定性、重复性好，简单、客观，符合中医证型理论的指导；
2.本发明通过加强挖掘动物行为学的改变从而实现中医望闻问切在动物病证结合模型评价体系的运用解决了目前没有用于湿热证急性痛风性关节炎病证结合大鼠模型的不足，为规范、标准、科学的评价中医药提供了一种新方法，具有造模方法简单、易于操作和推广，贴近临床的特点。
附图说明
图1为对照组和模型组的体重变化对比图；
图2为对照组和模型组踝关节滑膜变化对比图；
具体实施方式
为了便于理解本发明，下文将结合较佳的实施例对本发明作更全面、细致地描述，但本发明的保护范围并不限于以下具体的实施例。
除非另有定义，下文中所使用的所有专业术语与本领域技术人员通常理解的含义相同。本文中所使用的专业术语只是为了描述具体实施例的目的，并不是旨在限制本发明的保护范围。
除有特别说明，本发明中用到的各种试剂、原料均为可以从市场上购买的商品或者可以通过公知的方法制得的产品。
本发明公开了一种湿热证急性痛风性关节炎病症结合大鼠模型的造模方法，包括如下步骤：
S1.选用180±20g、6周龄、健康的雄性SPF级SD大鼠，饲以高脂高蛋白高糖饲料，自由进食，自由饮用200g·l-1蜂蜜水，猪脂和白酒隔日交替灌胃连续21天，其中白酒选用40-60°之间，本实施例选用52°红星二锅头，同时置于人工气候箱中8小时/天，所述人工气候箱的温度为32±2℃，相对湿度95％，21天后获得湿热证大鼠模型；
S2.取步骤S1获得的湿热证大鼠模型，在大鼠右踝关节两侧骨突部位进针，斜向下45°方向插入至胫骨肌腱内侧，向肢体远端方向注射MSU悬浮液，制备湿热证急性痛风性关节炎大鼠病证结合模型；
S3.所述步骤S2中的湿热证急性痛风性关节炎大鼠模型造模完成后，右踝关节出现红、肿、热、痛体征，三足跛行步态，红外热成像分析踝关节温度升高，CatWalk XT10.5动物步态分析及炎性因子与正常对照比较差异显著，则湿热证急性痛风性关节炎病证结合模型造模成功；
S4.选用以下指标，从三个维度对建立的湿热证急性痛风性关节炎病症结合大鼠模型进行湿热证的证验证：
第一维，根据人的证候诊断的四诊合参表现寻找大鼠一般状况指标对模型鼠进行定性评价，包括大鼠的证候表征神态，症状评分为：
I.精神状态
精神正常：喜动喜嗅，眼光有神，0分；
轻度异常：轻度倦怠，打斗减少，1分；
中度异常：精神倦怠，2分；
精神萎靡：弓背，蜷卧，自发活动明显减少，目无光彩，3分；
II毛色
米白色，均匀细密，柔顺有光泽，0分；
白中稍有黄色，稍乱，稍干燥，1分；
白中伴大部分黄色，乱，干燥，2分；
满目皆有黄色，毛枯躁，脏乱，3分；
III粪便
成形，粪质正常0分；
轻度异常：粪便软，含水量增加，可见反光，1分；
中度异常：粪便稀溏，部分不成形，2分；
明显异常：粪便稀溏，完全不成形，3分；
IV尿色
清亮透明,0分；
轻度异常：尿色清亮稍黄，1分；
中度异常：尿色淡黄，尿量减少，2分；
重度异常：尿色深黄，尿量明显减少，3分；
V阴囊颜色
正常没有松弛，0分；
阴囊颜色正常或略偏红，阴囊褶皱消失，1分；
阴囊颜色潮红，松弛下垂2分。
第二维为定量评价，确定以第1、8、15、21天中同一时刻用电子天平将每只大鼠称量三次并取平均值作为该大鼠该天体重数据；
第三维为微观指标和滑膜病理学改变，血清学指标：a.“湿”相关指标，水液代谢异常指标：大鼠尿液水通道蛋白-2(AQP2)；b.“热”相关指标，热休克蛋白70(HSP70)的测定；3.免疫-炎症反应指标检测，白细胞介素1β(IL-1β)；
S5.对以上指标进行观察及统计学分析，建立该病证结合大鼠模型“病”和“证”的评价体系：采用SPSS 20.0统计软件处理，各组指标数据均以(x±s)表示，数据用计量资料先进行正态检验，正态分布资料采用单因素方差分析，非正态分布资料先转换成正态分布再用单因素方差分析；进行组间比较，以P＜0.05为差异有统计学意义。
所述高脂高蛋白高糖饲料，是证模型诱导的重要因素，在普通纯化饲料的基础上增加酪蛋白和鱼粉的含量，增加黄油和胆固醇，增加绵砂糖配制而成；其配方正常饲料：成分为氯化胆碱0.2份，玉米30份，小麦25.5份，蜜糖酵母2.5份，磷酸氢钙2份，石粉1份，生长预混料1份，食盐0.3份，油2.5份，鱼粉5份，豆粕20份，酪蛋白10份；高脂高蛋白高糖饲料的成分为，氯化胆碱0.2份，玉米25份，小麦35.5份，蜜糖酵母2.5份，磷酸氢钙2份，石粉1份，食盐0.3份，油2.5份，鱼粉20份，酪蛋白10份，另添加黄油15份，胆固醇1份，猪胆盐0.1份，绵砂糖15份，上述含量均为重量份。
所述步骤S2中，MSU悬浮液制备是“病”模型诱导的关键，其制备方法为：用400ml超纯水加入4.5ml浓度为0.5mol·l-1的NaOH溶液中，煮沸后加入2g尿酸搅拌溶解；待温度降至60℃时用NaOH调PH至8.9，冷却，然后放置4℃冰箱冷藏过夜，盛入蒸发皿中经60℃干燥烘箱干燥，经高温灭菌后得到尿酸钠晶体粉末，用刮勺将其从蒸发皿中刮取下来用碾钵碾碎后用孔径250um的金属网筛过滤，然后用无菌EP管收集；并通过从急性痛风发作患者手足部位取出的痛风石在光学显微镜下与我们制备获取的MSU晶体鉴定是否一致，要最大程度的模拟人体内的痛风石的状态。用万分之一天平称取所需用量，以无菌生理盐水配成浓度为20mg·mL-1MSU混悬液，涡旋振荡，直至混悬液能被6号注射器针头吸取。
4.根据权利要求1所述的湿热证急性痛风性关节炎病证结合大鼠模型的评价方法，其特征在于：所述置于人工气候箱高温高湿环境的具体要求为：每日上午9点至下午5点将大鼠置于温度为32±2℃，相对湿度95％的人工气候箱中，每天统一时间为8小时。
实施例1：
1.材料
1.1实验动物：SPF级雌性SD大鼠55只，6周龄，体重180±20g，由江西中医药大学实验动物科学技术中心提供，试验动物许可证编号：SYXK(赣)2017-0004。动物饲养条件：按昼夜节律自然照明，于SPF级实验动物屏障系统饲养，温度23±2℃，相对湿度3±3％。动物自由饮水、进食，适应性饲养一周后进行造模。
1.2饲料：正常基础维持饲料：成分为氯化胆碱0.2份，玉米30份，小麦25.5份，蜜糖酵母2.5份，磷酸氢钙2份，石粉1份，食盐0.3份，油2.5份，鱼粉5份，豆粕20份，酪蛋白10份；高脂高蛋白高糖饲料，在上述基础维持饲料基础上添加黄油、鱼粉和糖，具体成分为氯化胆碱0.2份，玉米25份，小麦35.5份，蜜糖酵母2.5份，磷酸氢钙2份，石粉1份，生长预混料1份，食盐0.3份，油2.5份，鱼粉20份，酪蛋白10份，另添加黄油15份，胆固醇1份，猪胆盐0.1份，绵糖15份。
1.3仪器：人工气候箱(MGC-350-HP-2上海一恒)、全自动生化仪(贝克曼AU480)、酶标仪(Thermo)、显微镜(IX37生物显微镜)、电子天平(AUY120岛津分析天平)、步态分析仪(CatWalk XT10.5)。
1.4大鼠动脉血血清学检测包括：a.包括“湿”相关指标，水液代谢异常指标：大鼠尿液水通道蛋白-2(AQP2)；b.“热”相关指标，热休克蛋白70(HSP70)的测定；c.免疫-炎症反应指标检测，白细胞介素1β(IL-1β)。
2.病证结合模型构建及分组
健康SD雄性大鼠55只，适应性喂养1周后按随机数字表法随机分为4组：正常对照组，湿热对照组，痛风对照组，模型组，除正常对照组10只外其余各组每组各15只。
正常对照组：在正常温湿度(温度23±2℃，相对湿度55±3％)环境下普通饲料喂养，自由饮水21d；
湿热对照组：给大鼠饲以高脂高蛋白高糖饲料，并在高脂高蛋白高糖饲料喂养的基础上，加用200g·l-1蜂蜜水自由饮用，且隔日上午按大鼠体质量灌服油脂1.5ml/100g，并与油脂隔日灌服52°白酒(红星二锅头)(前两次为0.5ml/100g，3-4次予0.8ml/100g，5-7次予1ml/100g，过程中根据动物状态进行调整)，油脂和白酒隔日交替，共持续21d，其中每日上午8点放入人工气候箱中[温度为(32±2)℃，相对湿度95％，八小时；
痛风对照组：在正常温湿度(温度23±2℃，相对湿度55±3％)环境下正常基础维持饲料喂养，自由饮水21d。在第18d上午大鼠进食前，用1ml一次性无菌注射器配5ml注射器针头，在大鼠右踝关节后外侧，用手触摸，感受两侧骨突部位。从肢体近端两骨突间进针，斜向下45°方向插入至胫骨肌腱内侧，向肢体远端方向注射MSU悬浮液，将0.2ml浓度为200mg·ml-1尿酸钠溶液注入到踝关节腔内，制备急性痛风性关节炎模型(注射MSU前首先以大鼠踝关节中点为界±1cm去除腿部毛发并且用记号笔绕踝关节中点一圈划线)。
模型组：饲养方式与湿热对照组相同，即给大鼠饲以高脂高蛋白高糖饲料，并在高脂高糖饲料喂养的基础上，加用200g·l-1蜂蜜水自由饮用，且隔日上午按大鼠体质量灌服油脂1.5ml/100g，并与油脂隔日灌服52°白酒(红星二锅头)(前两次为0.5ml/100g，3-4次予0.8ml/100g，5-7次予1ml/100g，过程中根据动物状态进行调整)，油脂和白酒隔日交替，共持续21d，其中每日上午8点放入人工气候箱中[温度为(32±2)℃，相对湿度95％]8小时；在第18d上午大鼠进食前，用1ml一次性无菌注射器配5ml注射器针头，在大鼠右踝关节后外侧，用手触摸，感受两侧骨突部位。从肢体近端两骨突间进针，斜向下45°方向插入至胫骨肌腱内侧，向肢体远端方向注射MSU悬浮液，将0.2ml浓度为200mg·ml-1尿酸钠溶液注入到踝关节腔内。通过上述复合多因素造模方式制备湿热证急性痛风性关节炎病证结合大鼠模型。
3.观察指标
3.1一般状况观察
仔细观察大鼠的精神状态、毛发洁净度、皮毛光泽、粪便、尿液、阴囊形态等情况；
3.2体重的测量
确定以第1、8、15、21天同一时刻用电子天平每只大鼠称量三次并取平均值作为该大鼠该天体重。
3.3从三个维度对“证”和“病”的评价
造模21天完成后，通过三个维度的指标对湿热证急性痛风性关节炎病证结合大鼠模型的制备方式及其评价方法进行检测及评估，所述病证结合模型的判定通过观察右踝关节出现红、肿、热、痛体征，三足跛行步态，红外热成像分析踝关节温度升高，CatWalkXT10.5动物步态分析及检测炎性因子确认模型成功后，选用以下指标从以下三个维度对所建立的湿热证急性痛风性关节炎病证结合大鼠模型的制备方式及其评价方法进行“病”和“证”的验证：
第一维，根据人的证候诊断的四诊合参表现寻找大鼠一般状况指标对模型鼠进行定性评价，包括大鼠的证候表征神态，症状评分为：
I.精神状态
精神正常：喜动喜嗅，眼光有神，0分；
轻度异常：轻度倦怠，打斗减少，1分；
中度异常：精神倦怠，2分；
精神萎靡：弓背，蜷卧，自发活动明显减少，目无光彩，3分；
II毛色
米白色，均匀细密，柔顺有光泽，0分；
白中稍有黄色，稍乱，稍干燥，1分；
白中伴大部分黄色，乱，干燥，2分；
满目皆有黄色，毛枯躁，脏乱，3分；
III粪便
成形，粪质正常0分；
轻度异常：粪便软，含水量增加，可见反光，1分；
中度异常：粪便稀溏，部分不成形，2分；
明显异常：粪便稀溏，完全不成形，3分；
IV尿色
清亮透明,0分；
轻度异常：尿色清亮稍黄，1分；
中度异常：尿色淡黄，尿量减少，2分；
重度异常：尿色深黄，尿量明显减少，3分；
V阴囊颜色
正常没有松弛，0分；
阴囊颜色正常或略偏红，阴囊褶皱消失，1分；
阴囊颜色潮红，松弛下垂2分。
第二维为定量评价，确定以第1、8、15、21天中同一时刻用电子天平将每只大鼠称量三次并取平均值作为该大鼠该天体重数据；
第三维为微观指标和滑膜病理学改变，血清学指标：a.“湿”相关指标，水液代谢异常指标：大鼠尿液水通道蛋白-2(AQP2)；b.“热”相关指标，热休克蛋白70(HSP70)的测定；3.免疫-炎症反应指标检测，白细胞介素1β(IL-1β)；
3.4统计学分析
采用SPSS 20.0统计软件处理，各组指标数据均以(x±s)表示，数据用计量资料先进行正态检验，正态分布资料采用单因素方差分析，非正态分布资料先转换成正态分布再用单因素方差分析。进行组间比较，以P＜0.05为差异有统计学意义。
4.结果
4.1一般情况观察和体重变化分析
正常对照组:喂养期间精神状态好，活动正常，毛色柔顺亮泽，双目炯炯有神，体重增加平稳，饮食、大小便均正常。
湿热对照组：大鼠出现活动力减弱，毛发粗糙疏松、毛色暗淡，前7d体重逐渐增加随后增势缓慢，具体变化趋势见图1，且饮食减少尤其在14d后大部分出现精神倦怠、嗜睡，毛发枯槁潮湿结成呈缕状发结如穗、掉毛，阴囊松弛下垂，体重及饮食均减少，大便较正常组约1/3大小、量少甚至不成型、溏便。
痛风对照组：注射MSU后大鼠烦躁不安精神萎靡，反应迟钝。模型组：逐渐出现和湿热组类似症状，随后合并痛风组造模的症状。
4.2大鼠的证候表征神态评分
根据大鼠的证候表征神态，对各个组别在造模结束后进行不同证候表征评分，结果见表1。
表1各组大鼠证候积分
4.3大鼠“湿”证候指标AQP2水平比较
我们检测了各组大鼠血清中的AQP2水平，发现湿热对照组和模型组水平与正常对照组相比较低，且具有统计学意义，结果见表2。
表2各组大鼠AQP2水平比较(ng/ml)
4.4大鼠“热”证候指标HSP70水平比较
我们检测了各组大鼠血清中的HSP70水平，发现湿热对照组、痛风对照组及模型组水平与正常对照组相比较高，且具有统计学意义，结果见表3。
表3各组大鼠HSP70水平比较(ng/ml)
4.5大鼠免疫-炎症反应指标IL-1β水平比较
我们检测了各组大鼠血清中的IL-1β水平，发现痛风对照组和模型组水平明显高于正常对照组，且具有统计学意义，结果见表4。
表4各组大鼠IL-1β水平比较(pg/ml)
4.6红外热成像探测踝关节温度改变
我们检测了正常对照组和模型组大鼠左右踝关节的体温变化，发现正常对照组左右踝关节体温无明显变化，模型组右踝关节明显高于左踝关节，具体见图2。
图2右踝关节平均体温E3：28.79，左踝关节平均体温E4：23.25。
4.7 CatWalk XT10.5动物步态分析
表5模型组大鼠造模前后步态分析
4.8大鼠踝关节滑膜组织的病理学
我们对比了正常对照组和模型组踝关节滑膜变化，发现正常对照组滑膜上皮排列完整，未见增生，无炎症细胞浸润，软骨表面光滑完整；见图2中A。模型组见滑膜细胞增生，滑膜组织不完整，关节破坏严重，可见大量炎症细胞浸润，呈现明显的关节炎病理变化，提示造模成功；见图2中B。
注：A(正常对照组)，B(模型组)。
在本案例中，通过使用现代化仪器和量表评估大鼠体重变化、建立证候表征评分、红外热成像探测踝关节温度改变、大鼠进行步态分析以及动物血清血指标和滑膜病理实现了大鼠行为学和表征向中医望闻问切的转化。
综上所述：本发明提供了一种湿热证急性痛风性关节炎病证结合大鼠模型的制备方式及其评价方法，该法不仅稳定性好与痛风患者临床表象高度相似，且从“证”和“病”两方面均提出了规范、标准、科学的病症结合模型评价方法。
最后应说明的是：以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。
Claims (5)
1.一种湿热证急性痛风性关节炎病症结合大鼠模型的造模方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1.选用180±20g、6周龄、健康的雄性SPF级SD大鼠，饲以高脂高蛋白高糖饲料，自由进食，自由饮用200g•l-1蜂蜜水，猪脂和白酒隔日交替灌胃连续21天，其中白酒选用40-60°之间，本实施例选用52°红星二锅头，同时置于人工气候箱中8小时/天，所述人工气候箱的温度为32±2℃，相对湿度95%，21天后获得湿热证大鼠模型；
S2.取步骤S1获得的湿热证大鼠模型，在大鼠右踝关节两侧骨突部位进针，斜向下45°方向插入至胫骨肌腱内侧，向肢体远端方向注射MSU悬浮液，制备湿热证急性痛风性关节炎大鼠病证结合模型；
S3.所述步骤S2中的湿热证急性痛风性关节炎大鼠模型造模完成后，右踝关节出现红、肿、热、痛体征，三足跛行步态，红外热成像分析踝关节温度升高，CatWalk XT10.5动物步态分析及炎性因子与正常对照比较差异显著，则湿热证急性痛风性关节炎病证结合模型造模成功。
2.根据权利要求1所述的湿热证急性痛风性关节炎病症结合大鼠模型的造模方法，其特征在于，所述高脂高蛋白高糖饲料的成分为，按重量份表示，氯化胆碱0.2份，玉米25份，小麦35.5份，蜜糖酵母2.5份，磷酸氢钙2份，石粉1份，食盐0.3份，油2.5份，鱼粉20份，酪蛋白10份，另添加黄油15份，胆固醇1份，猪胆盐0.1份，绵砂糖15份。
3.根据权利要求1所述的湿热证急性痛风性关节炎病症结合大鼠模型的造模方法，其特征在于，所述步骤S2中，所述MSU悬浮液的制备方法为：用400ml超纯水加入4.5ml浓度为0.5mol•l-1的NaOH溶液中，煮沸后加入2g尿酸搅拌溶解；待温度降至60℃时用NaOH调PH至8.9，冷却，然后放置4℃冰箱冷藏过夜，盛入蒸发皿中经60℃干燥烘箱干燥，经高温灭菌后得到尿酸钠晶体粉末，用刮勺将其从蒸发皿中刮取下来用碾钵碾碎后用孔径250um的金属网筛过滤，然后用无菌EP管收集；并通过从急性痛风发作患者手足部位取出的痛风石在光学显微镜下与我们制备获取的MSU晶体鉴定是否一致，要最大程度的模拟人体内的痛风石的状态；用万分之一天平称取所需用量，以无菌生理盐水配成浓度为20mg•mL-1MSU混悬液，涡旋振荡，直至混悬液能被6号注射器针头吸取。
4.根据权利要求1所述的湿热证急性痛风性关节炎病证结合大鼠模型的造模方法，其特征在于：所述置于人工气候箱高温高湿环境的具体要求为：每日上午9点至下午5点将大鼠置于温度为32±2℃，相对湿度95%的人工气候箱中，每天统一时间为8小时。
5.根据权利要求1-4任一权利要求所述的湿热证急性痛风性关节炎病证结合大鼠模型的评价方法，其特征在于：
选用以下指标，从三个维度对建立的湿热证急性痛风性关节炎病症结合大鼠模型进行湿热证的证验证：
第一维，根据人的证候诊断的四诊合参表现寻找大鼠一般状况指标对模型鼠进行定性评价，包括大鼠的证候表征神态，症状评分为：
I．精神状态
精神正常：喜动喜嗅，眼光有神，0分；
轻度异常：轻度倦怠，打斗减少，1分；
中度异常：精神倦怠，2分；
精神萎靡：弓背，蜷卧，自发活动明显减少，目无光彩，3分；
II毛色
米白色，均匀细密，柔顺有光泽，0分；
白中稍有黄色，稍乱，稍干燥，1分；
白中伴大部分黄色，乱，干燥，2分；
满目皆有黄色，毛枯躁，脏乱，3分；
III粪便
成形，粪质正常 0分；
轻度异常：粪便软，含水量增加，可见反光，1分；
中度异常：粪便稀溏，部分不成形，2分；
明显异常：粪便稀溏，完全不成形，3分；
IV尿色
清亮透明,0分;
轻度异常：尿色清亮稍黄，1分；
中度异常：尿色淡黄，尿量减少，2分；
重度异常：尿色深黄，尿量明显减少，3分；
V阴囊颜色
正常没有松弛，0分；
阴囊颜色正常或略偏红，阴囊褶皱消失，1分；
阴囊颜色潮红，松弛下垂 2分；
第二维为定量评价，确定以第1、8、15、21天中同一时刻用电子天平将每只大鼠称量三次并取平均值作为该大鼠该天体重数据；
第三维为微观指标和滑膜病理学改变，血清学指标：a. “湿”相关指标，水液代谢异常指标：大鼠尿液水通道蛋白-2（AQP2）；b.“热”相关指标，热休克蛋白70（HSP70）的测定；3.免疫-炎症反应指标检测，白细胞介素1β（IL-1β）；
S5. 对以上指标进行观察及统计学分析，建立该病证结合大鼠模型“病”和“证”的评价体系：采用SPSS 20.0 统计软件处理，各组指标数据均以(x±s) 表示，数据用计量资料先进行正态检验，正态分布资料采用单因素方差分析，非正态分布资料先转换成正态分布再用单因素方差分析；进行组间比较，以 P＜0.05为差异有统计学意义。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202111190196.1A CN113826582A (zh) | 2021-10-13 | 2021-10-13 | 急性痛风性关节炎病症结合大鼠模型的造模及评价方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202111190196.1A CN113826582A (zh) | 2021-10-13 | 2021-10-13 | 急性痛风性关节炎病症结合大鼠模型的造模及评价方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN113826582A true CN113826582A (zh) | 2021-12-24 |
Family
ID=78968599
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202111190196.1A Pending CN113826582A (zh) | 2021-10-13 | 2021-10-13 | 急性痛风性关节炎病症结合大鼠模型的造模及评价方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN113826582A (zh) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN117653638A (zh) * | 2023-12-06 | 2024-03-08 | 广州中医药大学深圳医院(福田) | 一种急性痛风性关节炎小鼠模型的构建方法和应用 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20170002413A1 (en) * | 2014-01-17 | 2017-01-05 | The University Of Tokyo | Molecule associated with onset of gout, and method and kit for evaluating diathesis of uric acid-related diseases and inflammation-related diseases, and inspection object and drug |
| CN110199952A (zh) * | 2019-07-16 | 2019-09-06 | 江西中医药大学 | 一种用于女性肥胖研究的动物模型构建方法及其应用 |
-
2021
- 2021-10-13 CN CN202111190196.1A patent/CN113826582A/zh active Pending
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20170002413A1 (en) * | 2014-01-17 | 2017-01-05 | The University Of Tokyo | Molecule associated with onset of gout, and method and kit for evaluating diathesis of uric acid-related diseases and inflammation-related diseases, and inspection object and drug |
| CN110199952A (zh) * | 2019-07-16 | 2019-09-06 | 江西中医药大学 | 一种用于女性肥胖研究的动物模型构建方法及其应用 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| 尹明等: "痛风性关节炎湿热蕴结证大鼠模型建立的研究", 《湖南中医药大学学报》 * |
| 柳景红等: "痛风速效灵对急性痛风性关节炎模型大鼠步态和关节组织形态学影响的实验研究", 《现代中西医结合杂志》 * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN117653638A (zh) * | 2023-12-06 | 2024-03-08 | 广州中医药大学深圳医院(福田) | 一种急性痛风性关节炎小鼠模型的构建方法和应用 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Marcus et al. | Sex-specific determinants of increased left ventricular mass in the Tecumseh Blood Pressure Study. | |
| Squarzoni et al. | Ultrasonographic aspects and biometry of Striped owl’s eyes (Rhinoptynx clamator) | |
| CN110558285B (zh) | 一种用于脾虚湿盛证研究的动物模型构建方法及其应用 | |
| CN113826582A (zh) | 急性痛风性关节炎病症结合大鼠模型的造模及评价方法 | |
| CN109303784B (zh) | 痛风性关节炎动物模型的构建方法 | |
| CN106236311A (zh) | 一种大鼠劳损性膝骨关节炎模型建立的方法 | |
| CN106900652A (zh) | 一种高尿酸血症模型的构建方法 | |
| Shukla et al. | Molecular and physiological evaluation of pancreatic cancer-induced cachexia | |
| Kale et al. | Practical pharmacology & toxicology | |
| CN105079785A (zh) | 三结构域蛋白32（trim32）在治疗心肌肥厚中的功能及应用 | |
| CN108524553A (zh) | 一种亚急性高尿酸血症肾损害小鼠模型的构建方法 | |
| CN111328765B (zh) | 一种对脾气虚动物模型的评价方法 | |
| CN108498546B (zh) | 一种预防或治疗溃疡性结肠炎癌变的中药组合物及应用 | |
| CN106370833B (zh) | 一种用于评价化合物对病理状态下血管生成作用的方法 | |
| Alabdallah | Histological Comparison of Kidneys between Female and Male Quail Birds at Different age Stages | |
| CN116350732B (zh) | 用于治疗特发性肺纤维化缓解期的中药制剂及其制备方法 | |
| CN115136929A (zh) | 一种用于慢性肾脏病的大鼠模型构建方法 | |
| CN118662491A (zh) | 萘环类小分子化合物 | |
| Khamas et al. | Physical examination, anatomy, and physiology | |
| CN114766553A (zh) | 鲟鱼龙筋咀嚼片及其制备方法 | |
| NEER | Dr. GJ Christian MD (S) | |
| CN105079797A (zh) | 含i型血小板结合蛋白序列的解聚素样金属蛋白酶2在治疗心肌肥厚中的功能及应用 | |
| Chavan et al. | Human’s Bosom Buddy Beagle: As an Experimental Animal Model | |
| SPELLACY et al. | A newly recognized syndrome of connective tissue dysplasia in siblings (previously described as a variant of Morquio disease) | |
| Pitchappan et al. | Procedure for thymectomy in the lizard, Calotes versicolor |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20211224 |