CN113825498A - 包括透明质酸和血浆蛋白的改进冻干制剂及其用途 - Google Patents

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J·迪德勒兹
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Abstract

本发明涉及包含血浆蛋白或其衍生物、透明质酸或其衍生物和任选的一种或多种其他药物活性成分例如可乐定或其衍生物的冻干药物制剂，其中该冻干药物制剂的特征在于少于15分钟的重构时间。本发明还涉及制备这些制剂的方法及其在治疗肌肉骨骼疾病例如骨或关节疾病中的用途。

Description

包括透明质酸和血浆蛋白的改进冻干制剂及其用途
领域
本发明的方面广义地属于医学治疗领域，更具体地涉及药物制剂或组件套装产品及其用于治疗疾病(例如肌肉骨骼疾病，更具体地骨或关节疾病)的用途。
背景
肌肉骨骼疾病为一组影响骨骼、肌肉、软骨、肌腱、韧带和其他结缔组织的疾病。这些疾病可能会随着时间的推移而发展或者为过度使用肌肉骨骼系统或外伤导致的结果。近来，人们一直专注于开发用于局部递送的液体制剂，且特别是药物活性成分的骨内或骨周围或关节内或关节周围递送以避免系统副作用(WO2014/049063)。这些液体制剂可以包含经溶剂/去污剂处理的血浆和糖胺聚糖。施用后，制剂可能表现出凝胶稠度，保留药物活性成分并逐渐释放它们。
因此，实现注射过程中降低制剂的黏度并原位恢复黏度是一个具有挑战性的方面。几种制剂在水性环境中不稳定，即使暴露时间短，因此需要以粉末或冻干状态包装、储存和运输，以使产品在其贮存期限内保持稳定。然而，目前适合于局部施用的冻干药物制剂的特征在于长重构时间，导致繁琐的重构过程，对于临床实践中的应用其并不最佳适合。此外，缓慢的重构引入了施用部分重构的制剂的风险，导致身体受影响部位中存在不令人满意的药物活性成分的浓度。
因此，对具有更快重构时间的进一步和/或改进的冻干药物制剂存在持续需求。
概述
正如举例说明本发明的某些代表性实施方案的实施例中所证明的，本发明涉及改进的冻干药物制剂，其具有短重构时间(≤15min)，解决了上述本领域中的一个或多个问题。该发现是预料不到的，尤其因为在冻干本领域已知用于治疗肌肉骨骼疾病的包含透明质酸和血浆蛋白的药物制剂时，得到冻干产品，其特征在于长重构时间，使得它们在常规实践中的应用麻烦。
本发明人发现，与现有技术相比，本发明的制剂、方法和套装产品提供了一个或多个优点。本发明允许显著改善冻干制剂，特别是用于治疗肌肉骨骼疾病的冻干制剂的重构时间。施用这些制剂的医务人员这些制剂在他们的实践中不再受长重构时间限制，因此对于患者和医务人员改进了使用本发明的制剂、方法和套装产品的便利性。此外，较短的重构时间确保将最佳的活性药物剂量提供给患者，因为使用具有较长重构时间的制剂存在风险，仅部分重构的制剂施用于患者。
本发明的第一方面提供包含血浆或其衍生物和透明质酸或其衍生物的冻干药物制剂，其中该制剂在水溶液中重构时具有15分钟或更少的重构时间。
优选地，本发明提供包含冻干血浆和透明质酸或其衍生物的冻干药物制剂，其中该制剂在水溶液中重构时具有15分钟或更少的重构时间并且被配置用于注射。
本发明的另一方面提供组件套装产品，其包含：(a)本申请中所述的冻干药物制剂；(b)包含水溶液的注射器；以及(c)优选地，至少一个针头。在某些实施方案中，所述注射器可以为在一个隔室中包含本申请中所述的冻干药物制剂并且在第二隔室中包含水溶液的双腔注射器。
本发明的另一方面提供制备本申请中所述的冻干药物制剂的方法，其包括下列步骤：
(a)混合血浆蛋白或其衍生物、透明质酸或其衍生物和水溶液，由此得到具有20mg/ml至50mg/ml浓度的血浆蛋白或其衍生物和4mg/ml至8mg/ml浓度的透明质酸或其衍生物的散装混合物；
(b)通过蒸汽灭菌或过滤灭菌将该散装混合物灭菌，由此得到无菌混合物；以及
(c)冻干所述无菌混合物，由此得到所述的冻干药物制剂。
优选地，本发明提供制备本申请中所述的冻干药物制剂的方法，其包括下列步骤：
(a)混合血浆和透明质酸或其衍生物，由此得到散装混合物；
(b)通过蒸汽灭菌或过滤灭菌将该散装混合物灭菌，由此得到无菌混合物；以及
(c)冻干所述无菌混合物，由此得到所述的冻干药物制剂；
其中步骤(a)包含如下步骤：(a1)将透明质酸或衍生物溶于水溶液，由此得到第一溶液；(a2)制备包含血浆和任选的α-2肾上腺素能受体激动剂的第二溶液；(a3)混合第一溶液和第二溶液，得到所述的散装混合物。
本发明的另一方面涉及通过如本申请中所述方法可得到或得到的冻干药物制剂。
本发明的另一方面提供本申请中所述的冻干药物制剂，其用于治疗肌肉骨骼疾病，优选其中将冻干药物制剂与水溶液混合，然后施用。
在以下部分和所附权利要求中描述本发明的上述方面和其他方面以及优选实施方案。所附权利要求的主题在此具体并入本说明书中。
附图简述
图1.包含根据本发明实施方案的冻干药物制剂的三个小瓶的视觉外观。
图2.示意图表示代表性的水合曲线，其说明了通过包括混合以1:1(v/v)比例的第一溶液和第二溶液与中分子量HA的方法制备的根据本发明实施方案的5种冻干药物制剂的重量时间函数。
实施方案的描述
如本申请中所用，单数形式“一种”、“一个”和“该”包括单数和复数对应物，除非上下文中另有明确描述。
本申请中所用的术语“包含”(comprising，comprises或comprised of)与“包括”(including,includes或contains)同义，并且是包容性的或开放式的，并且不排除额外的、未列举的成员、要素或方法步骤。该术语还包括“由…组成”和“基本上由…组成”，它们在专利术语中享有充分确定的含义。
以端点描述的数值范围包括包含在相应范围内的所有数字和分数，以及所描述的端点。这适用于数值范围，无论它们由表述“从……到……”或表述“介于……和……之间”或其他表述引入。
本申请中所用的术语“约”或“大约”在涉及可测量的数值例如参数、量、短暂期限等时意指包括所具体说明的值的变化和从所具体说明的值的变化，例如所具体说明的值的和从所具体说明的值的+/-10％或更少，优选+/-5％或更少，更优选+/-1％或更少，还更优选+/-0.1％或更少的变化，其在这种变化适合实施在所公开的发明的范围内。应理解，修饰语“约”或“大约”所指的值本身也具体，且优选被公开。
鉴于术语“一个(种)或多个(种)”或“至少一个(种)”，例如一个或多个成员或一组成员中的至少一个成员本身是清楚的，作为进一步举例说明，该术语尤其包括对所述成员的任何一个，或任何两个或更多个所述成员，例如，所述成员中的任何≥3、≥4、≥5、≥6或≥7等，直至所有所述成员。在另一个实例中，“一个(种)或多个(种)”或“至少一个(种)”是指1、2、3、4、5、6、7或更多。
包括本申请中对本发明背景的讨论以解释本发明的上下文。这不应被视为承认所提及的任何材料在截至任何权利要求的优先权日已在任何国家公开、已知或为公知常识的一部分。
在整个本公开中，通过鉴别引用参考各种出版物、专利和公开的专利说明书。本说明书中引用的所有文件均通过引用以其全部内容并入本申请。特别地，通过引用并入本申请中具体提及的此类文件的教导或部分。
除非另有定义，否则用于公开本发明的所有术语，包括技术术语和科学术语，都具有本发明所属领域的普通技术人员通常所理解的含义。作为进一步指导，包括术语定义以更好地理解本发明的教导。当与本发明的特定方面或本发明的特定实施方案相关地定义特定术语时，这种含意或含义意在适用于整个本说明书，即也适用于本发明的其他方面或实施方案的上下文中，另有定义的除外。
在以下段落中，更详细地定义了本发明的不同方面或实施方案。除非有明确相反的说明，否则如此定义的每个方面或实施方案可以与任何其他方面或实施方案组合。特别地，被显示为优选或有利的任何特征可以与被显示为优选或有利的任何其他一个或多个特征组合。
在整个本说明书中提及“一个实施方案”，“一个实施方案”意指结合实施方案描述的特定特征、结构或特性包括在本发明的至少一种实施方案中。因此，在整个本说明书中在不同位置出现短语“在一种实施方案中”或“在一个实施方案中”不一定全部指同一实施方案，但可以指同一实施方案。此外，在一个或多个实施方案中，特定特征、结构或特性可以以对本领域技术人员而言从本公开中显而易见的任何适当的方式组合。此外，尽管本申请中描述的一些实施方案包括在其它实施方案中包括的一些特征但不包括其他特征，但是正如本领域技术人员所理解的，不同实施方案的特征的组合意在本发明的范围内，并且形成不同的实施方案。例如，在所附的权利要求中，任何要求保护的实施方案可以以任何组合使用。
早期开发的包含血浆蛋白和透明质的液体药物制剂(特别是用于治疗肌肉骨骼疾病)(WO2014049063)的冻干特征在于长重构时间，其不便于在临床实践中常规使用。如在举例说明本发明的某些代表性实施方案的实施例中所证明的，本发明人开发了改进的冻干药物制剂和得到所述制剂的方法，其具有短重构时间(≤15min)，从而解决了本领域中的一个或多个上述问题。
术语“冻干”或“冷冻干燥”在本申请中可以互换使用并且是指通过冻干得到的样品、制剂或产品的条件和/或状态。冻干，也称作冷冻干燥或为深冷脱水过程，其包括冷冻产品而不破坏物质的物理结构。冻干至少包含冷冻步骤和升华步骤。升华步骤可以包含两个干燥阶段：一级干燥步骤和二级干燥步骤。冻干可用于制造药物产品及其中间体。在冷冻过程中，材料被冷却到其中材料的固相、液相和气相可能存在的某一温度。活性药物产品成分(API)可以被冻干以实现化学稳定性，允许室温储存。这与使用热蒸发水的传统方法不同。冻干的优点可以是但不限于改进的无菌处理、提高干粉的稳定性、在不过度加热产品的情况下除去水以及提高干燥状态下产品的稳定性。一般而言，再水化的冻干产品的质量极佳，并且没有表现出劣于非冻干产品的(治疗)特性。
术语“药物制剂”、“药物组合物”或“药物制品”在本申请中可以互换使用。同样，术语“制剂”、“组合物”或“制品”在本申请中可以互换使用。在整个本说明书中，本申请涉及的绝对量对应于一次施用剂量中存在的量，另有明确描述的除外。
优选地，冻干药物制剂为可溶性或可溶解的制剂。当在水溶液中重构时，冻干药物制剂有利地溶解，例如当重构时，全部和基本上全部，例如至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、至少99.5％或100％的冻干药物制剂溶解或溶化。
如本申请中所用，“重构”是指通过向冻干物质中加入溶剂，使冻干物质再水化，然后搅拌溶剂和冻干物质的混合物，使干燥、冻干、脱水或浓缩的物质恢复至其原始或液态的过程。被重构的物质可以是产品、制剂、样品、原材料或任何生物材料或可以为产品、制剂、样品、原材料或任何生物材料的一部分，但当然不限于落入这些术语的共同定义下的物质。可以用肉眼视觉评估重构。当观察到均匀的溶液时，认为冻干物质被重构。特别地，具有混浊外观的溶液被视为适度地重构。
或者，可以通过基于阻抗的方法评估重构。在这样的方法中，由于在重构或溶解过程中固体材料溶解，重构介质阻抗的微小变化被检测到。将双电极针注入稀释剂中，并在添加的稀释剂中连续监测阻抗信号变化。它测定浓度水平，因为阻抗取决于允许电流流动的离子载体的数量和迁移率。含有单电荷离子的液体传导的电流(I)可以表示为：I＝NqμU/L2，其中N为液体中的离子数，q为元电荷，μ为平均离子迁移率，U为施加的电位，L为传导路径的长度。电阻可以表示为R＝L2/Nqμ。电阻表示阻抗信号(Z)的实部，它也取决于电抗(X)，而电抗(X)又取决于施加的AC频率(f)和溶液容量(c)：
Figure BDA0003350653740000071
在重构过程中溶解的冻干物的所有成分都会导致阻抗信号的变化。重构的终点定义为阻抗变化小于1欧姆持续至少7秒。
术语“水溶液”是指任何包含水或其中溶剂为水的溶液。此外，“水溶液”用于描述显示与水或水溶液有共性的溶液，其不限于特征，例如外观、气味、颜色、味道、黏度、pH、吸光度或特定温度下的物理状态。
术语“重量百分比”、“质量百分比”、“重量百分比(％)”、“重量％”或“wt％”表示物质的质量比制剂总质量(即质量分数)，其中分母为100。除非另有说明，否则本申请提供与冻干药物制剂总重量相比的wt％。
在本申请中可以互换使用的术语“缓冲成分”、“缓冲溶液”或“缓冲剂”是指包含弱酸及其共轭碱或者弱碱及其共轭酸的混合物的水溶液。缓冲溶液的特征在于当向该溶液中加入有限量的强酸或强碱时，它们保持溶液的pH值几乎恒定的手段。在pH值发生显著变化之前可以添加到缓冲溶液中的强酸或强碱的量取决于所使用的特定缓冲溶液，并且通常称为缓冲容量。可以使用本领域技术人员已知的Henderson-Hasselbalch方程估计缓冲溶液的pH。
如本申请中所定义，可使用本领域技术人员已知的各种方法测量制剂的pH。可以使用pH指示剂，其通过摄取或释放H+离子而变色，其中它们产生的颜色表示特定的pH值。或者，可以使用pH计，其测量pH电极和参比电极之间的电位差。电位差与溶液的酸度或pH值相关。
本发明的第一方面提供包含血浆蛋白或其衍生物和透明质酸或其衍生物的冻干药物制剂，其中该制剂在水溶液中重构时具有15分钟或更少，优选10分钟或更少，更优选5分钟或更少的重构时间。在具体实施方案中，冻干药物制剂包含冻干血浆和透明质酸或其衍生物，其中该制剂在水溶液中重构时具有15分钟或更少，优选10分钟或更少，更优选5分钟或更少的重构时间。
因此，一方面涉及包含冻干血浆和透明质酸或其衍生物的冻干药物制剂，其中该制剂在水溶液中重构时具有15分钟或更少，优选10分钟或更少，更优选5分钟或更少的重构时间。
术语“冻干药物制剂”、“冻干制剂”、“冻干饼状物”、“饼状物”和“制剂”在本申请中可以互换使用，并且是指本申请中教导的冻干药物制剂。
在实施方案中，本发明提供包含血浆蛋白或其衍生物和透明质酸或其衍生物的冻干药物制剂，其中该制剂包含约30％至约80％重量的血浆蛋白或其衍生物，其中当在水溶液中重构时，制剂具有15分钟或更少的重构时间并且被配置用于注射。
如本申请中所定义的“血浆蛋白”是指血浆衍生的蛋白质或可以存在于血浆中和/或在血浆中可检测到的蛋白质。除非整个本申请件中另有明确描述，否则血浆蛋白不限于人血浆蛋白。包含在药物制剂中的血浆蛋白可以包含天然来源于血浆的任意蛋白质或修饰的蛋白质。如本申请中所用，术语“血浆蛋白”还包括合成的血浆蛋白或血浆蛋白衍生物。
本申请中所描述的叙述“血浆蛋白衍生物”或“血浆蛋白的衍生物”是指来源于血浆的单一蛋白，例如本申请中所列出的血浆蛋白的任何单一一种。
在某些实施方案中，血浆蛋白或其衍生物可以来源于血浆。在某些实施方案中，血浆蛋白或其衍生物可以来源于冻干血浆。在某些实施方案中，血浆蛋白或其衍生物可以为冻干血浆的一部分。在某些实施方案中，冻干血浆包含血浆蛋白或其衍生物。
术语“血浆”具有常规定义的含义。血浆可以是常规定义的任何血浆，例如新鲜血浆、新鲜冷冻血浆、解冻冷冻血浆或来自冷冻血浆的冷冻沉淀物、冷冻上清液或浓缩物及其稀释产物。术语“血浆”还包括PRP(富含血小板的血浆)或血浆替代品。血浆通常得自全血样本，提供有抗凝剂(例如肝素，柠檬酸盐，草酸盐或EDTA)或与抗凝剂(例如肝素，柠檬酸盐，草酸盐或EDTA)接触。随后，通过适当的技术，典型地通过离心，将血样的细胞成分与液体成分(血浆)分离。因此，术语“血浆”是指不构成人体或动物体一部分的组合物。在某些实施方案中，血浆可以来自温血动物，例如哺乳动物，例如人。
术语“富含血小板的血浆(PRP)”是指富集血小板的血浆。典型地，PRP可以包含约1.0x106个血小板/微升，而全血样本中的血小板浓度可以为约1.5x105至3.5x105/微升。因此，如本申请中预期的血浆可以包含小于约1.5x105至1.0x106个血小板/微升。
在实施方案中，血浆不为富含血小板的血浆。在实施方案中，在用于本申请中教导的用于制备冻干药物制剂的方法中之前，血浆不经受进一步富集或分级分离步骤。在实施方案中，血浆可以具有基本上与以常规方式，例如如上所述得到的血浆相同的组成。
在某些实施方案中，冻干药物制剂包含冻干血浆。在某些实施方案中，冻干药物制剂包含冻干血浆，该冻干血浆又包含血浆蛋白或其衍生物。在某些实施方案中，冻干药物制剂包含冻干经溶剂/去污剂处理的(S/D)血浆。在某些实施方案中，冻干药物制剂包含血浆蛋白，该血浆蛋白为经溶剂/去污剂处理的(S/D)血浆蛋白。在某些实施方案中，S/D血浆蛋白来源于温血动物，例如哺乳动物，例如人。
在某些实施方案中，血浆可以为S/D血浆。在某些实施方案中，血浆蛋白为经溶剂/去污剂处理的(S/D)血浆蛋白，优选人S/D血浆蛋白。
在某些实施方案中，血浆蛋白或其衍生物可以来源于S/D血浆。在某些实施方案中，血浆蛋白或其衍生物可以为冻干S/D血浆的一部分。在某些实施方案中，冻干S/D血浆包含血浆蛋白或其衍生物。
术语“经溶剂/去污剂处理的血浆”、“S/D处理的血浆”或“S/D血浆”一般是指可通过包括以下步骤的方法获得或通过该方法得到的脱细胞血浆：(a)用溶剂和去污剂处理血浆和(b)过滤经溶剂/去污剂处理的血浆。
步骤(a)中处理的血浆可以是常规定义的任何血浆，例如新鲜血浆、新鲜冷冻血浆、解冻冷冻血浆或来自冷冻血浆的冷冻沉淀物、冷冻上清液或浓缩物及其稀释产物。血浆通常得自全血样本，或得自通过血采集术得到的样本。
用于制备S/D血浆的溶剂优选为二烷基磷酸酯或三烷基磷酸酯，两者均具有含1-10个碳原子，尤其2-10个碳原子的烷基。溶剂的示例性实例可包括磷酸三-(正丁基)酯、磷酸三-(叔丁基)酯、磷酸三-(正己基)酯、磷酸三-(2-乙基己基)酯或磷酸三-(正癸基)酯。优选的溶剂是磷酸三(正丁基)酯。用于处理步骤(a)的溶剂例如二烷基磷酸酯或三烷基磷酸酯优选以约0.01mg/ml至约100mg/ml且优选约0.1mg/ml至约10mg/ml的量使用。换句话说，用于处理步骤(a)的二烷基磷酸酯或三烷基磷酸酯优选以约0.001％w/v至约10％w/v且优选约0.01％w/v至约1％w/v的量使用。
用于制备S/D血浆的去污剂优选为无毒的去污剂。关注的非离子型去污剂包括当每100毫升溶液中加入1克去污剂时，在常温下将至少0.1％重量的脂肪分散在含有该脂肪的水溶液中的那些。示例性的去污剂实例可以包括脂肪酸的聚氧乙烯衍生物、山梨糖醇酐偏酯，例如，商业上称为“
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80”、“
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20”或“聚山梨酯80”的那些产品和非离子型油溶性水去污剂，例如以商标“曲通TM X 100”(氧乙基化烷基苯酚)商业销售的去污剂。还想到的是脱氧胆酸钠以及“两性物质”，它们是合成的两性离子去污剂，称为“磺基甜菜碱”，例如N-十二烷基-N,N-甲基-2-铵基-1乙磺酸盐及其同系物或非离子型去污剂，例如辛基-β-D-吡喃葡萄糖苷。去污剂的量可以在约0.001％v/v至约10％v/v，优选约0.01％v/v至1.5％v/v的范围内。
用溶剂和去污剂的处理优选在-5℃至70℃之间，优选在0℃至60℃之间的温度进行。这种处理(接触)的时间为至少1分钟，优选至少1小时，一般为4至24小时。该处理通常在大气压下有效，但也可采用低于大气压和高于大气压的压力。
通常，在处理之后，去除溶剂例如三烷基磷酸酯和去污剂。溶剂和去污剂可以通过任何适用于从血浆中分离溶剂和去污剂的技术来去除。当非离子型去污剂与溶剂例如三烷基磷酸酯一起使用时，可以通过以下方式去除它们：(1)使用保留血浆蛋白的微孔膜例如TEFLON渗滤；(2)在色谱或亲和色谱支持物上吸收期望的血浆成分；(3)沉淀，例如，通过盐析出血浆蛋白；(4)冻干等。可以如下去除溶剂例如二烷基磷酸酯或三烷基磷酸酯：(a)从抗血友病因子(AHF)中去除可以通过用2.2摩尔浓度(M)甘氨酸和2.0M氯化钠沉淀AHF来实现(b)从纤连蛋白中去除可以通过在不溶性明胶柱上结合纤连蛋白且洗涤不含试剂的所结合的纤连蛋白来实现。
过滤步骤(b)通常使用1μm滤器进行以除去细胞和碎片，然后使用0.2μm滤器进行无菌过滤。
在某些实施方案中，S/D处理包含至少一种溶剂和/或通过使用油的去污剂提取步骤。优选地，油为大豆油或蓖麻油。在某些实施方案中，血浆在S/D处理之前或之后通过另外的方法进一步处理。在另外的实施方案中，这些方法可以包括紫外线(UV)-辐射单独或与光化学活性剂结合。UV辐射可以选自包含UVA(波长约315nm至约400nm)、UVB(波长约280至约315nm)、UVC(波长100nm至280nm)的组。光化学活性剂可以选自包含补骨脂素，例如氨托沙林和核黄素的组。在某些实施方案中，可以通过本领域技术人员已知并且整个文献(Updateon pathogen inactivation treatment of plasma,with the INTERCEPT Blood System：Current position on methodological,clinical and regulatory aspects.Irsch J.,Transfus.Apher.Sci.,2015)中所述的INTERCEPT系统处理血浆。
术语“S/D血浆”包括血浆，该血浆包含降低浓度或活性的纤溶酶抑制剂，例如等于或小于0.60IU/ml或等于或小于0.50IU/ml的纤溶酶抑制剂，例如纤溶酶抑制剂水平0.20至0.30IU/ml，更具体地为0.22至0.25IU/ml。
与新鲜冷冻血浆(FFP)相比时，S/D血浆可以包含减少量和/或活性的一种或多种纤溶酶抑制剂、蛋白质S、因子XI、因子V、因子VIII、因子X、α2抗纤溶酶、抗胰蛋白酶、vonWillebrand因子(vWF)和裂解von Willebrand因子的蛋白酶(VWFCP)，其也被称作解联蛋白和金属蛋白酶，具有血小板反应蛋白1型模体、成员13(ADAMTS-13)、肿瘤坏死因子-α(TNFα)，白细胞介素-8(IL-8)、白细胞介素-10(IL-10)(Benjamin和McLaughlin,2012,Svae等人,2007；Beeck和Hellstern,1998；Doyle等人,2003；Mast等人,1999,Theusinger等人,2011)和/或可以包含增加量和/或活性的因子VII(Doyle等人,2003)。
血浆，例如S/D血浆可以如本领域中已知的那样热灭活，特别是去除补体。当本发明的药物制剂使用被治疗的受试者的自体血浆，例如S/D血浆时，可能不必要热灭活血浆，例如S/D血浆。如果血浆，例如S/D血浆对被治疗的受试者至少是部分同种异体的，则热灭活血浆，例如S/D血浆可能是有利的。血浆，例如S/D血浆可以为被治疗的受试者自体的。涉及血浆，例如S/D血浆的术语“自体”表示从接触血浆，例如S/D血浆或用血浆，例如S/D血浆治疗的同一受试者中获得血浆，例如S/D血浆。备选地或另外地，血浆，例如S/D血浆也可以是与被治疗的受试者“同源”或“同种异体”的，即从不是接触血浆，例如S/D血浆或用血浆，例如S/D血浆治疗的受试者的一个或多个(合并的)受试者获得。有利地，同种异体血浆，例如S/D血浆是可商购的，因此是不受限制的血浆来源。在某些实施方案中，血浆，例如S/D血浆可以来源于温血动物，例如哺乳动物，例如人。
在某些实施方案中，一种或多种血浆蛋白可以属于包括下列各项的非限制性组：白蛋白、球蛋白、纤维蛋白原、调节蛋白和凝血因子。在另外的实施方案中，血浆蛋白可以为下列各项的一种或多种：前白蛋白(转甲状腺素蛋白)、α1抗胰蛋白酶、α1酸性糖蛋白、α1胎蛋白、α2巨球蛋白、γ球蛋白、β2微球蛋白、结合球蛋白、血浆铜蓝蛋白、补体成分3、补体成分4、C反应蛋白(CRP)、脂蛋白(乳糜微粒、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白和极低密度脂蛋白)、转铁蛋白、凝血酶原、甘露糖结合性凝集素、甘露聚糖结合性凝集素(MBL)或甘露聚糖结合性蛋白(MBP)。在另外的实施方案中，血浆蛋白的天然存在的组成可以维持原样并用作所述药物制剂中的成分。血浆组成和血浆蛋白的浓度范围是本领域技术人员公知的。在另外的实施方案中，可能从一个血浆蛋白的集合中分离出一种血浆蛋白或一组血浆蛋白以包括在制剂中。在另外的实施方案中，可能从一个血浆蛋白的集合中分离出一种血浆蛋白或一组血浆蛋白以从药物制剂中排除。
血浆或血浆蛋白可以来源于单个供血者。在另外的实施方案中，血浆或血浆蛋白可以来源于至少两个供体的血浆蛋白混合物。在另外的实施方案中，可以给血浆补充额外的蛋白质。在另外的实施方案中，一种或多种血浆蛋白包含翻译后修饰。在甚至进一步的实施方案中，在与血浆的细胞成分分离之后引入了对一种或多种血浆蛋白的翻译后修饰。在另外的实施方案中，至少一种血浆蛋白的相对浓度在与细胞成分分离之前或之后发生了改变。在某些实施方案中，血浆蛋白来源于属于一定年龄的供血者。在进一步的实施方案中，血浆蛋白来源于具有已知基因型的供血者。在另外的实施方案中，血浆蛋白来源于血清或包含血清蛋白。例如，就接受制剂的受试者而言，血清可以为同种异体的或自体的。优选地，血清可以为人血清，使得进一步包含人血清的药物制剂特别适合施用于人受试者。在某些实施方案中，血清可以从经溶剂/去污剂处理的血浆中获得。S/D血浆可以被适当地处理以对抗抗凝剂的作用，例如允许纤维蛋白原转化为纤维蛋白并形成凝块。在某些实施方案中，血清可以来源于温血动物，例如哺乳动物，例如人。
在实施方案中，冻干药物制剂包含冻干血清。因此，在特定的方面或实施方案中，冻干药物制剂包含冻干血清和透明质酸或其衍生物，其中该制剂在水溶液中重构时具有15分钟或更少，优选10分钟或更少，更优选5分钟或更少的重构时间。
因此，一方面涉及包含冻干血浆和/或冻干血清和透明质酸或其衍生物的冻干药物制剂，其中该制剂在水溶液中重构时具有15分钟或更少，优选10分钟或更少，更优选5分钟或更少的重构时间。在实施方案中，所述的制剂被配制用于注射。
在某些实施方案中，制剂包含约70％至约99.9％重量的冻干血浆和/或冻干血清。在某些实施方案中，制剂包含约70％至约99％重量的冻干血浆和/或冻干血清，优选约75％至约99％重量或约80％至约97％重量的冻干血浆和/或冻干血清。例如，制剂包含约70％至约95％重量或约70％至约90％重量的冻干血浆和/或冻干血清。
在某些实施方案中，冻干血清包含血浆蛋白或其衍生物。
在某些实施方案中，制剂包含至少约30％重量的血浆蛋白或其衍生物，例如至少约40％重量、至少约50％重量、至少约60％、至少约70％重量、至少约80％重量或至少约90％重量的血浆蛋白或其衍生物。在某些实施方案中，制剂包含约30％至约90％重量的血浆蛋白或其衍生物。在某些实施方案中，制剂包含约30％至约80％重量的血浆蛋白或其衍生物、约40％至约75％重量，特别是约50％至约70％重量或约55％至约60％重量的血浆蛋白或其衍生物。例如，制剂包含约40％至约70％重量或约45％至约65％重量的血浆蛋白或其衍生物。优选地，血浆蛋白为经溶剂/去污剂处理的(S/D)血浆蛋白，特别是人S/D血浆蛋白。在某些实施方案中，血浆蛋白或其衍生物以约30wt％至约80wt％，优选约40wt％至约75wt％，更优选约50wt％至约70wt％，例如约55wt％至约65wt％的重量百分比包含在药物制剂中。
术语“透明质酸”或“HA”可以与“透明质素”、“透明质酸盐”或“透明质酸钠”互换使用。术语“透明质酸”是指由通过交替β-1,4和β-1,3糖苷键连接的D-葡糖醛酸和N-乙酰基-D-葡糖胺组成的二糖的阴离子非硫酸化聚合物。透明质酸和衍生物属于糖胺聚糖类。特别地，冻干药物制剂包含透明质酸纤维或其衍生物。
术语“糖胺聚糖”或“粘多糖”是指由重复二糖单元组成的无支链极性多糖。由于它们的吸水特性，它们可用作润滑剂或减震剂。如本申请中所用，润滑剂通过减少相互接触的表面之间的摩擦而发挥作用。
在某些实施方案中，透明质酸衍生物为透明质酸的盐、透明质酸与脂族、杂环或脂环族系列的醇的酯或透明质酸的硫酸化形式。
透明质酸衍生物包括，但不限于透明质酸盐，例如透明质酸钠或透明质酸与脂族、杂环或脂环族系列的醇的酯或透明质酸的硫酸化形式或包含透明质酸的试剂的组合。不受限制，适合的衍生物可以为透明质酸的盐，例如优选透明质酸钠。
在如本申请中教导的制剂或方法的某些实施方案中，透明质酸或其衍生物包含具有0.2MDa至4.5MDa，优选0.5MDa至1.5MDa或0.5MDa至1.2MDa分子量的纤维，基本上由具有0.2MDa至4.5MDa，优选0.5MDa至1.5MDa或0.5MDa至1.2MDa分子量的纤维组成，或由具有0.2MDa至4.5MDa，优选0.5MDa至1.5MDa或0.5MDa至1.2MDa分子量的纤维组成。
术语“(相对)分子质量”和“分子量”在本申请中可以互换使用并且是指分子的质量。
在具体实施方案中，透明质酸或其衍生物可以具有约0.2MDa至约8MDa或更大的分子量，例如约0.2MDa至约6MDa或约0.4MDa至约6MDa。在其他具体实施方案中，透明质酸或其衍生物可以具有0.2MDa至约4.5MDa或约0.4MDa至约4.5MDa的分子量。在还其他具体实施方案中，透明质酸或其衍生物可以具有约0.2MDa至约2.0MDa、更具体地0.4MDa至约1.5MDa、甚至更具体地约0.5MDa至约1.2MDa的分子量。在某些实施方案中，透明质酸或其衍生物可以具有约0.6MDa至约1.0MDa的分子量。有利地，包含具有约0.5MDa至约1.2MDa，优选约0.6MDa至约1.0MDa的分子量的透明质酸或其衍生物的冻干药物制剂允许在重构时得到均匀的注射用制剂。此外，重构的制剂具有令人满意的注射黏度并且在施用后提供足够的原位黏度。
因此，另一方面提供包含冻干血浆和透明质酸或其衍生物的冻干药物制剂，其中透明质酸或其衍生物包含具有0.5MDa至1.2MDa分子量的纤维，其中该制剂在水溶液中重构时具有15分钟或更少的重构时间。优选地，透明质酸或其衍生物包含具有0.6MDa至1.0MDa分子量的纤维。这类冻干药物制剂允许重构后得到均匀的注射用制剂。
优选地，HA或其衍生物具有低多分散性指数(PDI)，多分散性指数为聚合物群体的均匀性的量度，或者换句话说，为聚合物群体中的分子量分布，并且如本领域技术人员已知的，根据聚合物的重均分子量与数均分子量之比进行计算。更具体地，HA或其衍生物具有约1.50或更小例如约1.40或更小、约1.30或更小、约1.20或更小或1.10或更小的多分散性指数。
在某些实施方案中，使用透明质酸或其衍生物的单一聚合物形式。在另外的实施方案中，在优选的制剂中可以使用不同相对浓度的不同长度的透明质酸或其衍生物。在另外的实施方案中，透明质酸的不同衍生物存在于制剂中，在特定实施方案中，在药物制剂制备过程中修饰透明质酸或其衍生物。
在某些实施方案中，透明质酸可以与至少一种透明质酸衍生物组合存在于药物制剂中。透明质酸和衍生物的组合可以包括，但不限于透明质酸和例如透明质酸盐，例如透明质酸酯，例如透明质酸的脂族，例如杂环或脂环族系列的醇，例如透明质酸的任意硫酸化形式。在某些实施方案中，超过两种透明质酸衍生物可以存在于药物制剂中。
进一步预期的是结合任意透明质酸细胞受体，包括，但绝不限于CD44受体、HA介导的运动受体(RHAMM)和细胞间黏附分子-1(ICAM-1)的透明质酸衍生物。
在某些实施方案中，对应于一次施用剂量的冻干药物制剂包含1mg至100mg的透明质酸或其衍生物。例如，对应于一次施用剂量的制剂可以包含2mg至90mg或5至75mg的透明质酸或其衍生物，优选2mg至50mg的透明质酸或其衍生物，更优选5mg至45mg、5mg至40mg、5mg至35mg、5mg至30mg或5mg至25mg的透明质酸或其衍生物。
在某些实施方案中，冻干药物制剂包含约5.0％至约20.0％重量的透明质酸或其衍生物。例如，冻干药物制剂包含约7.5％至约15.0％重量或约10.0％至约12.5％重量的透明质酸或其衍生物。
在某些实施方案中，冻干药物制剂包含至少一种另外的糖胺聚糖，其中糖胺聚糖选自透明质酸及其衍生物、蛋白聚糖及其衍生物、硫酸软骨素、硫酸角质素、脱乙酰壳多糖及其衍生物、壳多糖及其衍生物。在另外的实施方案中，超过一种糖胺聚糖可以存在于制剂中。
术语“硫酸软骨素”是指由N-乙酰半乳糖胺和葡糖醛酸组成的二糖聚合物，N-乙酰半乳糖胺和葡糖醛酸各自都可以在不同位置和以不同数量被硫酸化。硫酸软骨素可以选自软骨素-4-硫酸、软骨素-6-硫酸、软骨素-2,6-硫酸、软骨素-4,6-硫酸。
本申请中所想到的冻干制剂典型地为淡黄白色饼状物。本申请中所想到的冻干制剂为无菌饼状物。
本申请中所用的“重构时间”是指将水溶液加到冻干制剂(例如加在冻干制剂的上面、内部或下面)时刻和得到均质重构产物时刻之间的时间。优选通过将水溶液加入冻干制剂，等待直到冻干制剂水化，此后混合再水化的制剂得到均匀的重构产物，进行重构。可以通过滚动小瓶(例如在手之间或以机械方式)或通过上下振动小瓶(例如用手或以机械方式)进行混合。优选地，当全部或基本全部水化，例如至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、至少99.5％或100％的冻干制剂吸收了水溶液时，冻干制剂被水化。
在某些实施方案中，通过将冻干制剂与水溶液例如适合于注射的水混合得到重构。在另外的实施方案中，可以通过搅拌溶剂-冻干制剂混合物，例如通过搅拌、振动、倾析、翻转、倒转或旋转包含药物制剂的小瓶，促进重构。在另外的实施方案中，在将制剂施用于患者之前立即进行重构。在甚至进一步的优选实施方案中，在施用之前进行至少一种额外的操作。在再另外的实施方案中，重构至少部分地在注射器中获得。
不受限制，冻干药物制剂的重构时间可以为约15分钟(min)或更少、约12min或更少、约10min或更少、约8min或更少、约7min或更少、约6min或更少、约5min或更少、约4.5min或更少、约4min或更少、约3.5min或更少、约3min或更少、约2.5min或更少、约2min或更少、约1.5min或更少或约1min或更少。重构时间在本申请中称作将水溶液添加至冻干制剂中的时刻和通过用肉眼评估或阻抗测量得出结论溶解了全部冻干产品的时刻之间的时间。在另外的实施方案中，可以通过物理搅拌包含药物制剂的小瓶进一步改进重构时间。
在某些实施方案中，冻干药物制剂的重构时间可以为约2秒至约15分钟、约10秒至约15分钟、约30秒至约10分钟、约1分钟至约8分钟、约2分钟至约8分钟、约4分钟至约8分钟或约4分钟至约6分钟。
在某些实施方案中，冻干药物制剂具有0.04g/cm3至0.08g/cm3或0.05g/cm3至0.07g/cm3的密度，例如0.062g/cm3的密度。
可以通过将冻干药物制剂的重量除以冻干药物制剂的体积确定(例如计算)冻干药物制剂的密度。可以通过从包含冻干饼状物的小瓶重量中扣除空瓶重量计算重量。可以通过测量冻干饼状物尺寸并且计算体积来确定体积。例如，冻干饼状物可以具有圆柱体形状，且可以通过测量冻干饼状物的高度和直径并且计算体积来确定体积。
在实施方案中，透明质酸或其衍生物可以具有约0.5MDa至约1.2MDa的分子量，且冻干药物制剂可以具有0.04g/cm3至0.08g/cm3的密度。在某些实施方案中，透明质酸或其衍生物可以具有约0.6MDa至约1.0MDa的分子量，且冻干药物制剂可以具有0.04g/cm3至0.08g/cm3的密度。在某些实施方案中，冻干药物制剂包含约30％至约80％重量的血浆蛋白和约5.0％至约20.0％重量的透明质酸或其衍生物，透明质酸或其衍生物具有约0.5MDa至约1.2MDa的分子量，且冻干药物制剂具有0.04g/cm3至0.08g/cm3的密度。在某些实施方案中，冻干药物制剂包含约30％至约80％重量的血浆蛋白和约5.0％至约20.0％重量的透明质酸或其衍生物，透明质酸或其衍生物具有约0.6MDa至约1.0MDa的分子量，且冻干药物制剂具有0.04g/cm3至0.08g/cm3的密度。这类冻干药物制剂具有令人满意的重构时间，例如约15分钟(min)或更少、约10min或更少、约5min或更少或约2min或更少的重构时间，同时在重构后具有允许易于通过注射施用的黏度并且在施用后提供充分的润滑作用。
因此，一方面涉及包含冻干血浆和透明质酸或其衍生物的冻干药物制剂，其中透明质酸或其衍生物具有约0.5MDa至约1.2MDa的分子量，特别是约0.6MDa至约1.0MDa的分子量，且该制剂具有0.04g/cm3至0.08g/cm3的密度。在实施方案中，制剂包含约30％至约80％重量的血浆蛋白和约5.0％至约20.0％重量的透明质酸或其衍生物。
在某些实施方案中，冻干后制剂的残留水分的百分比为约5.0％或更少、约4.0％或更少、约3.0％或更少、约2.5％或更少。
在重构本申请中所想到的冻干制剂时，重构的制剂为黄色、无菌、无热原、黏弹的均匀溶液。术语“无热原”是指制剂没有引起发热或产生发热的特性。“黏弹的”或“黏弹性”是材料在进行变形时表现出黏性和弹性二者特征的特性。在某些实施方案中，重构的药物制剂可以进一步被表征为约100cP或更高，约200cP或更高、约250cP或更高，例如200cP至500cP或250cP至400cP的黏度。这种黏度有利地允许易于通过注射施用，同时在施用后提供充分的润滑作用。
因此，另一方面提供一种包含冻干血浆和透明质酸或其衍生物的冻干药物制剂，其中该制剂在水溶液中重构时具有15分钟或更少的重构时间，且其中重构的药物制剂的特征在于200cP至500cP的黏度；优选250cP至400cP的黏度。这类冻干药物制剂在重构后有利地允许易于通过注射施用，同时在施用后提供充分的润滑作用。
术语“黏度”是指流体在给定速率下对变形的抵抗力的量度。
可以用黏度计测定黏度。例如，可以根据供应商的方法使用VISCTM黏度计(RheoSense,CA,USA)评估黏度。例如，可以将传感器筒，例如HB02放入黏度计中。然后，可以将样品加载到进一步固定在黏度计上的一次性移液管中。高级参数可以是下列参数的一个或多个：剪切速率＝111.6s-1；测量体积＝30μl；初始体积＝15μl；暂停时间＝5s；以及传感器范围＝60至5000cP。由于温度是众所周知的影响黏度的参数，因此每次测量优选必须在25.0±0.1℃进行。在每次使用microVISCTM之前，可以测量参比油的黏度以评估设备的校准。
测量芯片可以包含由硼硅玻璃构成的矩形细缝流动通道，具有均匀的横截面积。样品可以通过流动通道以恒定流速注入，其中固定在底座内的多个压力传感器监测从入口到出口的压降。压降可能与边界壁处的剪应力相关。剪切速率和剪应力可以与矩形细缝的几何形状和允许黏度测量的流速直接相关。例如，
Figure BDA0003350653740000201
芯片可以通过测量液体流经其矩形细缝微流体通道时的压降来评估黏度。黏度数据可以被导出到microVISCTM control2.0软件中。
在实施方案中，冻干药物制剂可以以每克制剂约10毫升至约14毫升水溶液在水溶液中重构。在实施方案中，冻干药物制剂可以以每克制剂约11毫升至约13毫升的水溶液在水溶液中重构。例如，冻干药物制剂可以以每克制剂约12毫升的水溶液在水溶液中重构。冻干药物制剂的单位剂量(例如典型地约190mg至约230mg)典型地可以在2.4毫升体积的水溶液中重构。重构冻干制剂后，可以测定重构制剂的黏度。
在实施方案中，冻干药物药剂在水溶液中以每克制剂约10毫升至约14毫升水溶液重构时，其特征在于200cP至500cP的黏度；优选250cP至400cP的黏度。在实施方案中，冻干药物制剂在水溶液中以每克制剂约11毫升至约13毫升水溶液重构时，其特征在于200cP至500cP的黏度；优选250cP至400cP的黏度。在实施方案中，冻干药物制剂在水溶液中以每克制剂约12毫升水溶液重构时，其特征在于200cP至500cP的黏度；优选250cP至400cP的黏度。
在某些实施方案中，药物制剂可以被表征为约200毫渗摩尔(mOsm)/kg或更高、约220mOsm/kg或更高、约240mOsm/kg或更高、约260mOsm/kg或更高、约280mOsm/kg或更高或约300mOsm/kg或更高的同渗质量摩尔浓度。
在某些实施方案中，冻干制剂还包含α-2肾上腺素能受体激动剂，优选其中α-2肾上腺素能受体激动剂为可乐定或其衍生物。
在具体实施方案中，冻干药物制剂还包含α-2肾上腺素能受体激动剂，优选其中α-2肾上腺素能受体激动剂选自可乐定及其衍生物。
术语“α-2肾上腺素能受体激动剂”或“α-2肾上腺素能受体激动剂”是指介导腺苷酸环化酶活性抑制的物质。α-2肾上腺素能受体激动剂对α-2肾上腺素能受体具有至少部分选择性。在某些实施方案中，α-2肾上腺素能受体可以不是所述物质的唯一靶标。在另外的实施方案中，药物制剂包含多于一种α-2肾上腺素能受体激动剂。在另外的实施方案中，不同的α-2肾上腺素能受体激动剂具有协同作用。在另外的实施方案中，α-2肾上腺素能受体激动剂为与任何天然α-2肾上腺素能受体配体相比对α-2肾上腺素能受体具有改进亲和力的合成化合物。在某些实施方案中，α-2肾上腺素能受体激动剂参与与α-2肾上腺素能受体的共价相互作用。在另外的实施方案中，α-2肾上腺素能受体激动剂不与α-2肾上腺素能受体发生物理相互作用和/或通过与天然α-2肾上腺素能受体配体相互作用和/或影响其细胞表达水平起作用。α-2肾上腺素能受体激动剂通过镇痛和抗炎作用缓解疼痛。本申请中所定义的“镇痛”是指止痛、减轻疼痛或缓解疼痛的特性。镇痛成分或化合物用于实现镇痛、缓解疼痛。
在某些实施方案中，α-2肾上腺素能受体激动剂可以选自可乐定及其衍生物，包括2,6-二甲基可乐定、4-叠氮基可乐定、4-羧基可乐定-甲基3,5-二氯酪氨酸、4-羟基可乐定、4-碘可乐定、烯丙尼定、阿可乐定、氯乙基可乐定、可乐定4-异硫氰酸盐、可乐定4-甲基异硫氰酸盐、可乐定受体、可乐定-置换性物质、羟基苯乙酰基氨基可乐定、N,N'-二甲基可乐定、对-氨基可乐定和噻美尼定；咪唑烷，包括咪唑啉、英普咪定、地托咪定、美托咪定、右美托咪定、左旋咪唑、氯沙坦、洛非西定、咪康唑、萘甲唑啉、尼立达唑、硝基咪唑、昂丹司琼、羟甲唑啉、酚妥拉明、四咪唑、甲巯唑啉、替扎尼定、妥拉唑啉、咪噻芬；咪唑类，包括4-(3-丁氧基-4-甲氧基苄基)咪唑烷-2-酮、尿刊酸、氨基-咪唑甲酰胺、安他唑啉、生物素、双(4-甲基-1-高哌嗪基硫代羰基)二硫化物、卡比马唑、西咪替丁、克霉唑、肌酐、达卡巴嗪、右美托咪定、益康唑、伊诺昔酮、依替咪唑、依托咪酯、法倔唑、氟司必林、咪唑克生、米伐折醇；胍类，包括胍丁胺、倍他尼动、双胍、西咪替丁、肌酸、加贝酯、胍乙啶、硫酸胍乙啶、胍氯芳、胍法辛、胍、胍诺沙苄、英普咪定、碘-3苄基胍、甲基胍、米托胍腙、亚硝基胍、吡那地尔、罗贝胍、磺胺咪、扎那米韦；α-甲基去甲麻黄碱、氮
Figure BDA0003350653740000223
克唑、5-溴-6-(2咪唑烷-2-基氨基)喹喔啉、富马酸福莫特罗、吲哚拉明、6-烯丙基-2-氨基-5,6,7,8-四氢4H-噻唑并[4,5-d]氮杂
Figure BDA0003350653740000224
二HCl、尼麦角林、利美尼定和赛拉嗪。
在某些实施方案中，冻干药物制剂可以包含可乐定。在某些实施方案中，冻干药物制剂包含可乐定和至少一种可乐定衍生物。在另外的实施方案中，可以将可乐定添加到制剂中或其可以作为可乐定HCl存在于制剂中。
在另外的实施方案中，可乐定作为包含下列各项的非限制性组的一种或多种存在于制剂中：Arkamin、Aruclonin、盐酸可乐定(Atensina)、Catapin、氯压定、盐酸可乐定(Catapresan)、可乐宁、Chianda、可乐定(Chlofazoline)、可乐定(Chlophazolin)、Clonid-Ophtal、血压得平、可乐定(Clonidina)、
Figure BDA0003350653740000225
可乐定、盐酸可乐定、盐酸可乐定、Clonidini、可乐定(Clonidinum)、Clonigen、Clonistada、Clonnirit、Clophelinum、可乐定(Dixarit)、盐酸可乐定注射剂(Duraclon)、Edolglau、可乐定(Haemiton)、Hypodine、Hypolax、Iporel、可乐定(Isoglaucon)、Jenloga、Kapvay、Klofelino、Kochaniin、Melzin、Menograine、Normopresan、Paracefan、Pinsanidine、Run Rui和盐酸可乐定制剂(Winpress)。
在某些实施方案中，对应于一次施用剂量的冻干药物制剂可以包含1μg至500μg的α-2肾上腺素能受体激动剂或25至400μg或50至250μg的α-2肾上腺素能受体激动剂。在某些实施方案中，冻干制剂可以包含50μg至150μg，例如约60μg、约70μg、约80μg、约90μg、约100μg、约110μg或约120μg的α-2肾上腺素能受体激动剂。优选地，对应于一次施用剂量的制剂包含2μg至250μg的α-2肾上腺素能受体激动剂，更优选5μg至125μg的α-2肾上腺素能受体激动剂。
在某些实施方案中，对应于一次施用剂量的制剂可以包含：
-1mg至100mg的透明质酸或其衍生物，优选2mg至50mg的透明质酸或其衍生物，更优选5mg至40mg的透明质酸或其衍生物；以及
-任选地1μg至500μg的α-2肾上腺素能受体激动剂，优选2μg至250μg的α-2肾上腺素能受体激动剂，更优选5μg至125μg的α-2肾上腺素能受体激动剂。
在某些实施方案中，冻干药物制剂可以包含约0.01％至约0.1％重量的α-2肾上腺素能受体激动剂，例如可乐定或其衍生物。例如，冻干药物制剂可以包含约0.05％至约0.1％重量的α-2肾上腺素能受体激动剂，例如可乐定或其衍生物。
在某些实施方案中，冻干药物制剂还包含至少一种盐。在某些实施方案中，所述的盐为钙盐。在某些实施方案中，所述盐可以为(二)氯化钙(CaCl2)。
可以将Ca2+加入到本发明的药物组合物中，例如，以增强它们的原位凝固和/或胶凝作用(例如，其中发现或预期在施用部位发现的Ca2+浓度不足以单独促进组合物的凝固/胶凝)，或在施用前或施用后在体外实现一定程度的凝固/胶凝(例如改善产品的注射能力和/或完整性)。在此类实施方案中，可以典型地以约0.1至5wt％，优选约0.5wt％至约3.0wt％，更优选约0.5wt％至2.0wt％(以相对于制剂的总重的钙)加入Ca2+。
Ca2+可以通过在药物组合物中加入适量的药学上可接受的钙盐，优选可溶性钙盐而被适当地包括在药物组合物中。这类Ca2+盐可以与无机酸或有机酸形成。此类盐的实例包括(二)氯化钙(CaCl2)、甘油磷酸钙、磷酸钙、碳酸氢钙、柠檬酸钙、硫酸钙、乳酸钙、葡糖酸钙、抗坏血酸钙及其混合物。特别优选的是CaCl2，其显示有利的良好溶解性并且在注射溶液中耐受性良好。
本申请中预想的对应于一次施用剂量的药物制剂可以包括约1mg至约10mgCaCl2，优选约2mg至8mg，优选约3mg至约7mg CaCl2。在某些实施方案中，预想用于关节内或关节周围施用的产品可以包括约1mg至约10mg CaCl2，优选约2mg至约7mg，更优选约5mgCaCl2。在某些另外的实施方案中，预想用于骨内或骨周围施用的产品可以包括约1mg至约10mg CaCl2，优选约2mg至约7mg，更优选约5mg CaCl2。
在某些实施方案中，冻干药物制剂可以包含约1.5％至约3.0％重量的盐，特别是钙盐，例如氯化钙。例如，冻干药物制剂可以包含约2.0％至约3.0％重量的盐，特别是钙盐，例如氯化钙。
在某些实施方案中，冻干药物制剂还包含至少一种缓冲溶液，该缓冲溶液包含弱酸及其共轭碱，或反之亦然(即弱碱及其共轭酸)以缓冲组合物的pH。
在某些实施方案中，冻干药物制剂还包含至少一种缓冲成分，特别是被配置在药物应用中安全使用的缓冲成分。在某些实施方案中，缓冲剂可以为酸性缓冲剂。在可替代性实施方案中，缓冲剂可以为碱性缓冲剂。在另外可替代性实施方案中，缓冲剂可以为磷酸盐缓冲液，例如磷酸缓冲盐水(PBS)。
在某些实施方案中，冻干药物制剂可以包含约0.1％至约2.0％重量的缓冲成分。例如，冻干药物制剂可以包含约0.5％至约1.0％重量的缓冲成分。
在某些实施方案中，缓冲成分可以选自非限制性实例的组，该组包含4-(环己基氨基)-1-丁磺酸(CABS)、N-环己基-3-氨基丙磺酸(CAPS)、2-氨基-2-甲基-1-丙醇(AMP)、N-环己基-2-羟基-3-氨基丙磺酸(CAPSO)、N-环己基-2-氨基乙磺酸(CHES)、N-(1,1-二甲基-2-羟基乙基)-3-氨基-2-羟基丙磺酸(AMPSO)、N-三(羟基甲基)甲基-4-氨基丁磺酸(TABS)、2-氨基-2-甲基-1,3-丙二醇(AMPD)、[三(羟基甲基)甲基氨基]丙磺酸(TAPS)、N-(2-羟基乙基)哌嗪-N′-(4-丁磺酸)(HEPBS)、2-(双(2-羟基乙基)氨基)乙酸(二(羟乙基)甘氨酸)、N-(2-羟基-1,1-双(羟基甲基)乙基)甘氨酸(三(羟甲基)甲基甘氨酸)、3-[4-(2-羟基乙基)哌嗪-1-基]丙-1-磺酸(EPPS)、三乙醇胺(TEA)、哌嗪-1,4-双(2-羟基丙磺酸)二水合物(POPSO)、N-(羟基乙基)哌嗪-N'-2-羟基丙磺酸(HEPPSO)、三(羟基甲基)氨基甲烷(氨基丁三醇)、3-[[1,3-二羟基-2-(羟基甲基)丙-2-基]氨基]-2-羟基丙-1-磺酸(TAPSO)、4-(N-吗啉代)丁磺酸(MOBS)、3-双(2-羟基乙基)氨基-2-羟基丙-1-磺酸(DIPSO)、4-(2-羟基乙基)-1-哌嗪乙磺酸(HEPES)、2-[[1,3-二羟基-2-(羟基甲基)丙-2-基]氨基]乙磺酸(TES)、3-(N-吗啉代)丙磺酸(MOPS)、2-[双(2-羟基乙基)氨基]乙磺酸(BES)、双-三丙烷(BTP)、3-(N-吗啉代)羟基丙磺酸(MOPSO)、哌嗪-N,N′-双(2-乙磺酸)(PIPES)、N-(2-乙酰氨基)-2-氨基乙磺酸(ACES)、2-[(2-氨基-2-氧代乙基)-(羧基甲基)氨基]乙酸(ADA)、2-[双(2-羟基乙基)氨基]-2-(羟基甲基)丙-1,3-二醇(双-Tris)、2-(N-吗啉代)乙磺酸(MES)。这些缓冲溶液的组成及其制备方法描述在本领域中，因此为本领域技术人员所公知。
在某些实施方案中，缓冲成分可以被酸性成分例如盐酸(HCl)替代。
在某些实施方案中，冻干药物制剂还包含至少一种酸性成分。
在某些实施方案中，酸性成分为盐酸(HCl)。
在某些实施方案中，冻干药物制剂可以包含约0.1％至约2.0％重量的酸性成分，例如HCl。例如，冻干药物制剂可以包含约0.5％至约1.0％重量的酸性成分，例如HCl。
在实施方案中，所述制剂还可以包含至少一种盐，优选其中所述的盐为钙盐，更优选其中所述的盐为氯化钙；和/或可以进一步包含至少一种缓冲成分或酸性成分，优选其中所述的酸性成分为盐酸。
在某些实施方案中，冻干药物制剂包含S/D血浆蛋白和透明质酸。在某些实施方案中，冻干药物制剂包含S/D血浆蛋白、透明质酸和可乐定或其衍生物。在某些实施方案中，冻干药物制剂包含S/D血浆蛋白、透明质酸和任选地可乐定或其衍生物、(二)氯化钙和/或盐酸。
在某些实施方案中，冻干药物制剂包含S/D血浆蛋白、透明质酸、可乐定或其衍生物、(二)氯化钙和盐酸。
在某些实施方案中，冻干药物制剂包含约30％至约80％重量的血浆蛋白或其衍生物；以及约5.0％至约20.0％重量的透明质酸或其衍生物。在某些实施方案中，冻干药物制剂包含约30％至约80％重量的血浆蛋白或其衍生物；约5.0％至约20.0％重量的透明质酸或其衍生物；以及约0.01％至约0.1％重量的α-2肾上腺素能受体激动剂。
在某些实施方案中，冻干药物制剂包含约30％至约80％重量的血浆蛋白或其衍生物；以及约5.0％至约20.0％重量的透明质酸或其衍生物；以及任选地约0.01％至约0.1％重量的α-2肾上腺素能受体激动剂；约1.5％至约3.0％重量的盐；和/或约0.1％至约2.0％重量的缓冲成分或酸性成分。在某些实施方案中，冻干药物制剂包含：约40％至约75％重量的血浆蛋白或其衍生物；以及约5.0％至约20.0％重量的透明质酸或其衍生物；以及任选地约0.01％至约0.1％重量的α-2肾上腺素能受体激动剂；约1.5％至约3.0％重量的盐；和/或约0.1％至约2.0％重量的缓冲成分或酸性成分。在某些实施方案中，冻干药物制剂包含约40％至约75％重量的血浆蛋白或其衍生物；以及约10.0％至约12.5％重量的透明质酸或其衍生物；以及任选地约0.05％至约0.1％重量的α-2肾上腺素能受体激动剂；约2.0％至约3.0％重量的盐；和/或约0.5％至约1.0％重量的缓冲成分或酸性成分。在某些实施方案中，冻干药物制剂包含约50％至约70％重量的血浆蛋白或其衍生物；以及约10.0％至约12.5％重量的透明质酸或其衍生物；以及任选地约0.05％至约0.1％重量的α-2肾上腺素能受体激动剂；约2.0％至约3.0％重量的盐；和/或约0.5％至约1.0％重量的缓冲成分或酸性成分。
在某些实施方案中，冻干药物制剂包含约30％至约80％重量的血浆蛋白或其衍生物；约5.0％至约20.0％重量的透明质酸或其衍生物；约0.01％至约0.1％重量的α-2肾上腺素能受体激动剂；约1.5％至约3.0％重量的盐；以及约0.1％至约2.0％重量的缓冲成分或酸性成分。
在具体实施方案中，根据本发明的冻干制剂包含30wt％至约80wt％的血浆蛋白或其衍生物，5.0-20.0wt％的透明质酸或其衍生物和优选0.01至0.1wt％的如本申请中所想到的α-2肾上腺素能受体激动剂，优选可乐定或可乐定衍生物；和/或1.0至5.0wt％的盐，优选本申请中所想到的钙盐，更优选氯化钙，其中wt％相对于冻干制剂的总重量。更具体地，冻干制剂包含30wt％至70wt％的血浆蛋白或其衍生物，5.0至15.0wt％的透明质酸或其衍生物，且优选0.05至0.1wt％的如本申请中所想到的α-2肾上腺素能受体激动剂和/或1.5至3.0wt％的盐，优选本申请中所想到的钙盐，其中wt％相对于冻干制剂的总重量。
在其它实施方案中，冻干药物制剂还包含一种或多种另外的药物活性成分或可以与一种或多种另外的药物活性成分共同施用。
本申请中所称的“药物活性成分”或“API”应根据世界卫生组织对该术语的定义进行解释：在成品药物产品(FPP)中使用的物质，预想提供药理活性，或在疾病的诊断、治愈、缓解、治疗或预防中以其他方式具有直接作用，或在人类中恢复、纠正或改善生理机能中具有直接作用。
在某些实施方案中，在冻干前将至少一种活性药物成分添加到制剂中。在这种情况下，每种活性成分的释放可以相同或不同，例如，诸如在两种活性成分的组合的情况下，其中第一种活性成分作为速释形式提供，第二种活性成分作为控释形式提供。类似地，对于相同的活性成分，也可以获得速释和控释形式的组合，以便提供快速和持续的效果。在另外的实施方案中，在重构过程中加入至少一种活性药物成分。在还另外的实施方案中，在向患者施用之前即刻添加另外的活性药物制剂。在某些实施方案中，药物制剂至少包含两种另外的药物活性成分。在另外的实施方案中，在药物制剂的制造过程中在不同时间点添加不同的另外的药物活性成分。
在另外的实施方案中，冻干药物制剂还包含一种或多种另外的药物活性成分，或可以与一种或多种另外的药物活性成分共同施用，其中该一种或多种药物活性成分各自独立地选自：细胞组合物、药物活性化合物、蛋白质、肽和小有机分子。
本发明的适用性不限于任何药物活性成分或药物活性成分类别。药物活性成分可以本身是药理活性的，或者可以在体内通过化学或酶促过程转化为药理活性物质，即药物活性成分可以是前药。本发明的药物制剂可以特别适用于稳定性差的药物活性成分。稳定性差的药物活性成分的示例性非限制性实例包括肽和蛋白质，例如生长因子、肽样活性成分、抗体和疫苗、小干扰RNA(siRNA)、DNA、激素等。
本申请中所用的术语“生长因子”是指一种生物活性物质，它影响各种细胞类型的增殖、生长、分化、存活和/或迁移，并可能影响生物的发育、形态和功能变化，无论单独还是受其他物质调节。生长因子典型地可以通过作为配体与存在于对生长因子有反应的细胞中的受体(例如表面或胞内受体)结合而起作用。本申请中的生长因子可以特别是包含一个或多个多肽链的蛋白质实体。作为实例而不限制，术语“生长因子”包括成纤维细胞生长因子(FGF)家族、骨形态发生蛋白(BMP)家族、血小板衍生生长因子(PDGF)家族、转化生长因子β(TGFβ)家族、神经生长因子(NGF)家族、表皮生长因子(EGF)家族、胰岛素样生长因子(IGF)家族、生长分化因子(GDF)家族、肝细胞生长因子(HGF)家族、造血生长因子(HeGFs)、血小板衍生内皮细胞生长因子(PD-ECGF)、血管生成素、血管内皮生长因子(VEGF)家族、糖皮质类固醇等的成员。
术语“药物活性成分”还包括标题化合物或物质的任意药理活性盐、酯、N-氧化物或前药。
特别地，冻干药物制剂还可以包含一种或多种具有成骨或成软骨、骨或软骨诱导和/或骨或软骨传导特性的物质。在优选的实施方案中，此类物质可以选自包含下列各项或由下列各项组成的组：成纤维细胞生长因子(FGF)，优选FGF-2，转化生长因子β(TGFB)，优选TGFB-1，血小板衍生生长因子(PDGF)、白细胞介素-8(IL-8)、骨形态发生蛋白(BMP)，例如BMP-2、BMP-4、BMP-6和BMP-7中的任何一种或多种、甲状旁腺素(PTH)、甲状旁腺激素相关蛋白(PTHrp)、VEGF和干细胞因子(SCF)。任何一种这样的物质可以以足以在施用于受试者时实现其期望的成骨、骨诱导和/或骨传导作用，同时尽可能避免不想要的副作用的浓度包括在药物组合物中。
典型地，但不限制，任意一种这类物质可以包含在药物制剂中，其浓度为0.01ng/mg至1mg/mg，例如0.1ng/mg至100μg/mg，例如1ng/mg至50μg/mg。
术语“骨诱导”是指成分例如肽生长因子募集未成熟细胞例如干细胞、MSC并刺激这些细胞分化为前成骨细胞和成熟的成骨细胞，从而形成骨组织的能力。本发明的药物组合物可以进一步包含具有骨诱导特性的成分例如骨诱导蛋白或肽，例如骨形态发生蛋白，例如BMP-2、BMP-7或BMP-4；水凝胶或生物聚合物，例如透明质酸或其衍生物、胶原蛋白、纤维蛋白原、骨粘连蛋白或骨钙蛋白。优选地，所述药物组合物还可包含透明质酸或其衍生物、胶原蛋白或纤维蛋白原。
术语“骨传导”是指成分用作支架的能力，在该支架上骨细胞可以附着、迁移、生长和产生新骨。药物组合物还可以包含具有骨传导特性的成分，例如骨传导支架或基质或表面，例如但不限于磷酸三钙、羟基磷灰石、羟基磷灰石/磷酸三钙颗粒的组合(HA/TCP)、明胶、聚-乳酸、聚乳酸乙醇酸、透明质酸、脱乙酰壳多糖、聚-L-赖氨酸或胶原蛋白。
根据本发明的药物制剂可以进一步包括补充生物活性因子或骨诱导蛋白或与它们共同施用，例如骨形态发生蛋白，例如BMP-2、BMP-7或BMP-4，或任何其他生长因子。其他潜在的伴随成分包括无机钙或磷酸盐来源，其适合于辅助骨再生(WO 00/07639)。如果期望，则可以在载体基质或材料上施用细胞制备物以提供改进的组织再生。例如，该材料可以是水凝胶或生物聚合物，例如明胶、胶原蛋白、透明质酸或其衍生物、骨粘连蛋白、纤维蛋白原或骨钙蛋白。生物材料可以根据标准技术合成(例如Mikos等人Biomaterials 14:323,1993；Mikos等人Polymer 35:1068,1994；Cook等人J.Biomed.Mater.Res.35:513,1997)。
典型地，将冻干药物制剂与至少一种水溶液混合，然后施用，优选其中水溶液为注射用水。
本申请中所定义的“注射用水”、“注射用水(aqua ad iniectabilia)”、“注射用水(aqua ad injectionem)”、“WFI”或“注射用水(aqua ad ini)”是指没有任何明显污染的适合于给人注射的水。如本申请中所定义，水被认为是无菌的和/或加入其他物质以使溶液基本上等渗。在某些实施方案中，水溶液可以是生理盐水或等渗盐水溶液。
盐水是氯化钠在水中的混合物并且如本领域技术人员已知在医学中具有多种用途。普通盐水溶液每升溶液含有约9克无菌盐。在某些实施方案中，每升盐的量可以不同。
在某些实施方案中，将另外的活性药物成分添加到水溶液中，然后与冻干药物制剂混合。在另外的实施方案中，水溶液包含至少一种药物赋形剂。在另外的实施方案中，水溶液可以具有约10℃至约37℃的温度。
在某些实施方案中，用于重构冻干药物制剂的水溶液可以包含生物材料。作为指导而非限制，这种生物材料可以为可以包含充质干细胞(MSC)、骨原细胞、成骨细胞、骨细胞、成软骨细胞和/或软骨细胞的细胞组合物。因此，药物制剂允许递送此类细胞组合物。本发明药物制剂的这种黏性品质可以确保局部递送并为递送的细胞提供适合的支持环境。
本申请中所用的术语“充质干细胞”或“MSC”是指成体、中胚层衍生的干细胞，其能够产生间充质谱系，典型地具有两个或更多个间充质谱系的细胞，例如骨细胞(骨)、软骨细胞(软骨)、肌细胞(肌肉)、腱细胞(肌腱)、成纤维细胞(结缔组织)、脂肪细胞(脂肪)和基质细胞(骨髓基质)谱系。MSC可以从例如骨髓、小梁骨、血液、脐带、胎盘、胎儿卵黄囊、皮肤(真皮)，特别是胎儿和青少年皮肤、骨外膜和脂肪组织分离。在例如美国专利No.5,486,359、No.5,811,094、No.5,736,396、No.5,837,539或美国专利No.5,827,740中描述了人MSC、它们的分离、体外扩增和分化。本领域中描述的并且通过本领域中描述的任何方法分离的任何MSC都可以适用于本发明的药物制剂。
术语MSC还包括MSC的子代，例如通过得自动物或人受试者的生物样品的MSC的体外或离体增殖(繁殖)得到的子代。
优选的MSC具有产生至少成骨(骨)谱系的细胞的潜力，例如，例如骨原细胞和/或前成骨细胞和/或成骨细胞和/或骨细胞等或至少成软骨(软骨)谱系的细胞，例如，软骨形成细胞和/或成软骨细胞和/或软骨细胞等。
术语“干细胞”一般是指未特化或相对较少特化和增殖-感受态细胞，其能够自我更新，即可以增殖而不分化，并且该细胞或其子代可以产生至少一种相对更特化的细胞类型。该术语包括能够基本上无限自我更新的干细胞，即，其中干细胞的子代或其至少一部分基本上保留了未特化或相对较少特化的表型、分化潜能和母体干细胞的增殖能力，以及显示有限自我更新的干细胞，即与母细胞相比，子代或其部分进一步增殖和/或分化的能力明显降低。作为实例而非限制，干细胞可以产生子代，这些子代可以沿着一个或多个谱系分化以产生越来越多的相对更特化的细胞，其中这些子代和/或越来越多的相对更特化的细胞本身可以为本申请定义的干细胞，甚或产生终末分化的细胞，即可以是有丝分裂后的完全特化的细胞。
本申请中所用的术语“成体干细胞”是指在胎儿阶段或出生后，例如诸如实现成年后存在于生物中或从生物中获得(例如分离自)的干细胞。
如本申请中所用，“骨原细胞”可以特别包含早期和晚期骨原细胞。“成骨细胞”可以特别包含前成骨细胞、成骨细胞和骨细胞，并且该术语可以更优选地表示前成骨细胞和成骨细胞。所有这些术语本身是众所周知的，并且如本申请中所使用的，典型地可以指具有成骨表型的细胞，并且它们能够促进或能够发育成能够促进骨材料或骨基质形成的细胞。
通过进一步指导而非限制，骨原细胞和成骨细胞以及包含骨原细胞和/或成骨细胞的细胞群可以表现出以下特征：
a)细胞包含Runx2的表达，Runx2是一种多功能转录因子，其在成骨细胞分化过程中调节成骨细胞分化和许多胞外基质蛋白基因的表达；
b)细胞包含下列至少一种的表达：碱性磷酸酶(ALP)，更具体地为骨-肝-肾型的ALP；且更优选还包含一种或多种额外的骨标志物的表达，例如骨钙蛋白(OCN)、原胶原1型氨基末端前肽(P1NP)、骨粘连蛋白(ON)、骨桥蛋白(OP)和/或骨涎蛋白(BSP)和/或一种或多种额外的骨基质蛋白，例如饰胶蛋白聚糖和/或护骨蛋白(OPG)；
c)细胞基本上不表达CD45(例如低于约10％，优选低于约5％，更优选低于约2％的细胞可以表达CD45)；
d)细胞显示出矿化外部环境或合成含钙胞外基质的能力的证据(例如，当暴露于成骨性培养基时；参见Jaiswal等人J Cell Biochem,1997,第64卷,295-312)。可以例如通过在45Ca2+中培养、洗涤和再培养，然后确定细胞内存在或沉积入胞外基质中的任何放射性(US5,972,703)，或使用基于茜素红的矿化测定法(参见，例如Gregory等人AnalyticalBiochemistry,2004,第329卷,77-84)，常规测量细胞内钙积累和基质蛋白中的沉积；
e)细胞基本上不向脂肪细胞谱系(例如脂肪细胞)或软骨细胞谱系(例如软骨细胞)的细胞分化。可以使用本领域中建立的标准分化诱导条件(例如，参见Pittenger等人Science,1999,第284卷,143-7)和测定方法(例如，当诱导时，脂肪细胞典型地被油红O染色，显示脂质积累；软骨细胞典型地用爱茜蓝或番红O染色)，测试向这类细胞谱系的分化不存在。基本上缺乏向脂肪生成和/或软骨生成分化的倾向典型地可以意指，当应用于相应的测试时，小于20％或小于10％或小于5％或小于1％的测试细胞显示脂肪生成或软骨生成分化的迹象。
所述细胞还可以包含一种或多种细胞募集因子例如IL6和/或VEGF的表达。
如本申请中所用，“成软骨性细胞”可以特别地包含成软骨细胞，即在胞外基质分泌中活跃的年轻(不成熟、未成熟)软骨细胞。成软骨细胞被认为由充质干细胞分化而来。术语“软骨细胞”更具体地是指维持软骨基质所必需的成熟软骨细胞。这些术语本身是众所周知的，并且如本申请中所使用的，典型地可以指具有软骨形成表型的细胞，并且可以促进或能够发育成可以促进软骨或软骨基质形成的细胞。
其中细胞被称为对特定标志物(或表达或包含其表达)为阳性，这意指本领域技术人员将得出不同信号的存在或证据的结论，例如可通过逆转录聚合酶链反应进行抗体检测或进行检测，对于该标志物，当进行适当的测量时，与适合的对照进行比较。在该方法允许对标志物进行定量评估的情况下，阳性细胞平均可产生与对照显著不同的信号，例如但不限于，比对照细胞产生的此类信号高至少1.5倍，例如至少2倍，至少4倍，至少10倍，至少20倍，至少30倍，40倍，至少50倍，甚或更高。
可以使用本领域中已知的任何适合的免疫学技术，例如免疫细胞化学或亲和吸附、蛋白质印迹分析、FACS、ELISA等，或通过任何适合的酶活性的生化测定法(例如对于ALP)，或通过任何用于测量标记mRNA数量的适合技术，例如RNA印迹法、半定量或定量RT-PCR等，检测上述细胞特异性标志物的表达。本公开中列出的标志物的序列数据是已知的并且可以从公共数据库，例如GenBank(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/)中获取。
细胞组合物的细胞可以为动物细胞，优选温血动物细胞，更优选哺乳动物细胞，例如人细胞或非人哺乳动物细胞，其最优选人细胞。在某些实施方案中，所述的药物制剂作为组件套装产品中的一部分提供。组件套装产品可以包含在一个或多个容器或储存小瓶中包含的本发明的任何实施方案中定义的冻干药物制剂，特别是每个小瓶对应于一个治疗剂量，包含水溶液的注射器。优选地，组件套装产品还包含至少一个针头。组件套装产品可以包含本申请中所述的任何实施方案中定义的药物制剂。
在某些实施方案中，注射器和/或针头的数量可以根据储存小瓶中所含的冻干药物制剂的数量进行调整。在某些实施方案中，该套装产品可以另外包含消毒剂和/或抗炎成分。抗炎成分可以选自治疗流体、喷雾剂、洗剂、霜剂、软膏剂、凝胶剂、树胶剂、绷带、皮肤贴剂、膏药。抗炎成分在现有技术中已有描述。在另外的实施方案中，该套装产品可以包含重构冻干制剂的说明书和/或施用说明书。在再另外的实施方案中，冻干制剂包含在双室注射器中并在注射器中完全重构。在进一步的实施方案中，冻干制剂包含在多室注射器，例如双室注射器中，其在一个室中包含冻干药物组合物，而在第二室中包含水溶液。
在再另外的实施方案中，组件套装产品可以包含多于一个小瓶。在某个实施方案中，该套装产品包含具有不同冻干药物制剂的小瓶，其中透明质酸或其衍生物和/或血浆蛋白或其衍生物在不同剂型之间可以变化。在另外的实施方案中，小瓶的不同之处在于冻干药物制剂包含不同的α-2肾上腺素能受体激动剂和/或盐和/或缓冲成分或酸性成分。在某些实施方案中，该套装产品包含允许测试重构程度的另外的部件。在再另外的实施方案中，该套装产品包含至少一个绷带、皮肤贴剂或膏药。
另一方面涉及制备如本申请中所教导的冻干药物制剂的方法，其包括下列步骤：
(a)混合血浆蛋白或其衍生物、透明质酸或其衍生物和水溶液，由此得到具有20mg/ml至50mg/ml浓度的血浆蛋白或其衍生物和4mg/ml至8mg/ml浓度的透明质酸或其衍生物的散装混合物；
(b)通过蒸汽灭菌或过滤灭菌将该散装混合物灭菌，由此得到无菌混合物；以及
(c)冻干该无菌混合物，由此得到所述的冻干药物制剂。
优选地，一方面涉及制备如本申请中所定义的冻干药物制剂的方法，其包括下列步骤：
(a)混合血浆，例如S/D血浆和透明质酸或其衍生物，由此得到具有20mg/ml至50mg/ml浓度的血浆蛋白和4mg/ml至8mg/ml浓度的透明质酸或其衍生物的散装混合物；
(b)通过蒸汽灭菌或过滤灭菌将该散装混合物灭菌，由此得到无菌混合物；以及
(c)冻干该无菌混合物，由此得到所述的冻干药物制剂。
在另一方面，本发明提供用于制备冻干药物制剂的工艺或方法，其包括下列步骤：
(a)混合血浆蛋白或其衍生物，优选S/D血浆蛋白、透明质酸或其衍生物和水溶液，由此得到散装混合物；
(b)将该散装混合物灭菌，由此得到无菌混合物；以及
(c)冻干所述无菌混合物，由此得到所述的冻干药物制剂。
因此，一方面提供用于制备冻干药物制剂的方法，其包括下列步骤：
(a)混合血浆，优选S/D血浆，以及透明质酸或其衍生物，由此得到散装混合物；
(b)将该散装混合物灭菌，由此得到无菌混合物；以及
(c)冻干所述无菌混合物，由此得到所述的冻干药物制剂。
此外，一方面提供用于制备冻干药物制剂的方法，其包括下列步骤：
(a)混合血浆，优选S/D血浆，以及透明质酸或其衍生物，由此得到散装混合物；
(b)将该散装混合物灭菌，由此得到无菌混合物；以及
(c)冻干所述无菌混合物，由此得到所述的冻干药物制剂；
其中步骤(a)包含下列步骤：(a1)将透明质酸或衍生物溶于水溶液，由此得到第一溶液；(a2)制备包含血浆和任选的α-2肾上腺素能受体激动剂的第二溶液；以及(a3)混合第一溶液和第二溶液，得到所述的散装混合物。
在实施方案中，散装混合物具有20mg/ml至50mg/ml浓度的血浆蛋白和4mg/ml至8mg/ml浓度的透明质酸或其衍生物。
典型地通过搅拌、振动、倾析、翻转、倒置、搅动或旋转透明质酸和/或其衍生物与水溶液得到透明质酸或其衍生物的混合。在实施方案中，第一溶液可以包含约1.0至30mg/ml透明质酸或其衍生物，优选约2.0至20mg/ml，更优选约4.0至16.0mg/ml透明质酸或其衍生物，例如约8.0至12.0mg/ml透明质酸或其衍生物。散装混合物特别地包含约1.0至15mg/ml透明质酸或其衍生物，优选约2.0至10mg/ml，更优选约4.0至8.0mg/ml透明质酸或其衍生物。
在某些实施方案中，将血浆蛋白，优选S/D血浆蛋白作为S/D血浆提供。优选地，散装混合物包含在药物制剂中约70％至约99.9％重量的S/D血浆，优选约75％至约99％，或优选约80％至约97％重量的S/D血浆。优选地，第二溶液包含约70％至约100％重量的血浆蛋白，例如S/D血浆蛋白，优选约75％至约99％，或优选约80％至约97％重量的血浆蛋白，例如S/D血浆蛋白。散装混合物特别地包含20mg/ml至50mg/ml血浆蛋白或血浆蛋白衍生物。
在实施方案中，第二溶液可以包含约20％(v/v)至约100％(v/v)的血浆，例如S/D血浆。例如，第二溶液可以包含约40％(v/v)至约99％(v/v)、约50％(v/v)至约98％(v/v)、约60％(v/v)至约97％(v/v)、约70％(v/v)至约96％(v/v)或约80％(v/v)至约95％(v/v)的血浆，例如S/D血浆。
在实施方案中，散装混合物可以包含至多50％(v/v)的血浆，例如S/D血浆。在实施方案中，散装混合物可以包含约10％(v/v)至约50％(v/v)的血浆，例如S/D血浆。例如，散装混合物可以包含约20％(v/v)至约49％(v/v)、约25％(v/v)至约48％(v/v)、约30％(v/v)至约47％(v/v)、约35％(v/v)至约46％(v/v)或约40％(v/v)至约45％(v/v)的血浆，例如S/D血浆。
在某些实施方案中，散装混合物还包含如下成分的一种或多种：
-本申请中所述的α-2肾上腺素能受体激动剂，优选可乐定或其衍生物；
-盐，优选钙盐，例如二氯化钙；和/或
-缓冲成分或酸性成分，优选HCl。
因此，在某些实施方案中，步骤(a)还包含如下步骤：混合α-2肾上腺素能受体激动剂，优选可乐定和/或盐，优选钙盐，和/或缓冲成分或酸性成分，优选HCl，由此得到散装混合物，其中如本申请中所想到的α-2肾上腺素能受体激动剂，优选可乐定或可乐定衍生物的浓度为20μg/ml至35μg/ml，和/或其中盐，优选钙盐，更优选二氯化钙的浓度为0.5mg/ml至1.5mg/ml。
在某些实施方案中，步骤(a)可以进一步包含混合α-2肾上腺素能受体激动剂、盐和/或缓冲成分或酸性成分，由此得到散装混合物，其具有20μg/ml至35μg/ml浓度的α-2肾上腺素能受体激动剂、0.5mg/ml至1.5mg/ml浓度的盐和/或0.05mg/ml至3.0mg/ml浓度的缓冲成分或酸性成分。
在某些实施方案中，散装混合物还包含一种或多种另外的成分，包括，但不限于药物赋形剂、血清和/或其他血液组分，另外的活性药物成分，其选自药物活性化合物、蛋白质、肽和小有机分子。
在某些实施方案中，步骤(a)包含步骤(a1)将透明质酸或衍生物溶于水溶液，由此得到第一溶液；步骤(a2)制备包含血浆蛋白的第二溶液；以及步骤(a3)混合第一溶液和第二溶液，得到所述的散装混合物。
在某些实施方案中，步骤(a)包含下列步骤：(a1)将透明质酸或衍生物溶于水溶液，由此得到第一溶液；(a2)制备包含血浆蛋白和α-2肾上腺素能受体激动剂的第二溶液；以及(a3)混合第一溶液和第二溶液，得到所述的散装混合物。
在某些实施方案中，步骤(a)包含下列步骤：(a1)将透明质酸或衍生物溶于水溶液，由此得到第一溶液；(a2)制备包含血浆和/或血清的第二溶液；以及(a3)混合第一溶液和第二溶液，得到所述的散装混合物。
在某些实施方案中，步骤(a)包含下列步骤：(a1)将透明质酸或衍生物溶于水溶液，由此得到第一溶液；(a2)制备包含血浆和/或血清和α-2肾上腺素能受体激动剂的第二溶液；以及(a3)混合第一溶液和第二溶液，得到所述的散装混合物。
在某些实施方案中，步骤(a)包含将透明质酸或衍生物溶于水溶液的步骤，由此得到第一溶液的步骤。在某些实施方案中，首先将透明质酸或其衍生物溶于水溶液，得到第一溶液，然后与第二溶液混合。将透明质酸或衍生物溶于水溶液的步骤可以持续至少10小时，例如至少12小时、至少14小时、至少16小时或至少18小时。该步骤允许完全水化透明质酸或其衍生物。
在某些实施方案中，步骤(a)包含制备包含血浆蛋白的第二溶液的步骤。在某些实施方案中，步骤(a)包含制备包含血浆和/或血清的第二溶液的步骤。在某些实施方案中，第二溶液还包含另外的成分，例如上述非限制性实例，包括本申请中所述的α-2肾上腺素能受体激动剂，优选可乐定或其衍生物，盐和酸性成分。因此，在某些实施方案中，所述的方法包括(a2)制备包含血浆蛋白、本申请中所述的α-2肾上腺素能受体激动剂，优选可乐定或其衍生物、盐和酸性成分的第二溶液。在某些实施方案中，将包含透明质酸或其衍生物的第一溶液与包含如下成分的第二溶液混合：血浆蛋白,优选S/D血浆；本申请中所述的2肾上腺素能受体激动剂，优选可乐定或其衍生物；盐；以及酸性成分。在实施方案中，所述的方法包括(a2)制备包含血浆和/或血清、本申请中所述的α-2肾上腺素能受体激动剂，优选可乐定或其衍生物、盐和酸性成分的第二溶液。在某些实施方案中，将包含透明质酸或其衍生物的第一溶液与包含如下成分的第二溶液混合：血浆和/或血清，优选S/D血浆；本申请中所述的2肾上腺素能受体激动剂，优选可乐定或其衍生物；盐；以及酸性成分。所述盐可以为，但不限于钙盐，例如二氯化钙(CaCl2或CaCl2.2H2O)。酸性成分可以为，但不限于氯化氢(HCl)。应当理解，合并上述第一溶液和第二溶液得到散装混合物。
在某些实施方案中，步骤(a)包含混合第一溶液和第二溶液得到散装混合物的步骤。在某些实施方案中，第一溶液和第二溶液以至少1:1(v/v)的比例，例如1.5:1、2:1、3:1、4:1(v/v)或更大的比例混合。在某些实施方案中，第一溶液和第二溶液以1:1(v/v)之比混合。由此，得到的冻干药物制剂具有令人满意的密度，因此允许快速和均匀地重构冻干药物制剂。
短语“以1:1(v/v)的比例混合第一溶液和第二溶液”是指混合等体积的第一溶液和第二溶液。有利地，混合等体积的第一溶液和第二溶液。
在某些实施方案中，灭菌方法为过滤灭菌。如本申请中所用，术语“过滤器灭菌”、“过滤灭菌”或“微孔过滤”是指以使样品、混合物或制剂灭菌为目标的方法。在某些实施方案中，应用膜得到过滤，允许基于大小排除成分和/或生物。
进一步预想的是过滤方法，其中所使用的过滤材料可以包括尼龙、聚碳酸酯、纤维素、醋酸酯、聚偏二氟乙烯(PVDF)和聚醚砜(PES)。这些材料的特征在于蛋白质保留、流速和可浸出材料的存在方面的差异。
在某些实施方案中，灭菌方法为通过蒸汽灭菌。在本申请中，使制剂暴露于升高温度的饱和蒸汽，例如约121℃至约134℃。以指导而非限制，蒸汽灭菌可以通过使用高压灭菌器来实现。在某些实施方案中，蒸汽灭菌的温度为约125至约130℃。在某些实施方案中，可以组合不同的灭菌方法。在另外的实施方案中，不同的灭菌方法连续进行。在某些实施方案中，使制剂经受蒸汽灭菌条件约3至约30分钟。在某些实施方案中，使制剂经受蒸汽灭菌条件约10至约20分钟。
如本申请中所用的术语“高压灭菌器”是指能够达到升高的温度和与大气压不同的压力的压力室。实现灭菌所需的灭菌时间可以变化，取决于多个参数，例如需要被灭菌的材料的数量和性质。本领域技术人员已知蒸汽灭菌时间可以与使用的蒸汽灭菌温度成反比。
以进一步指导而非限制，冻干可以按照以下步骤进行：将散装溶液的等分部分灌装单独无菌容器并在无菌条件下部分加塞容器，将部分加塞的容器运送到冻干机并在无菌条件下装载入腔室，通过将部分加塞的容器放在冻干腔室中冷却的搁料架上或在另一个腔室中预冷冻来冷冻溶液，对腔室施加真空并加热搁料架以便从冷冻状态蒸发水，且最终通过可以安装在冻干装置中的液压或螺杆加塞机制完成小瓶加塞。在某些实施方案中，在冻干过程开始时不对样品进行部分加塞，而在冻干后进行完全加塞。
术语“塞子”是指小瓶的密封物，其阻止冻干制剂脱离小瓶和/或允许容纳小瓶内部的无菌环境。可替代的术语可以是盖子、盖、密封件、波纹密封件或任何允许封闭小瓶的工具。
使用多种参数、其重复、通过组合或通过附加步骤，冻干步骤是可能的。可以调整冻干过程中单个或多个冷冻步骤的温度和/或持续时间以在升华前获得特定尺寸的冰晶。在可以在约0.1毫巴至0.005毫巴或约0.1毫巴至约0.01毫巴范围内的减压下进行干燥相。
在另外的实施方案中，在冻干之前将散装混合物等分，使得所得小瓶包含对应于单次施用剂量的制剂的量。在可替代的实施方案中，在冻干后进行等分。在另外的实施方案中，不进行等分，并且所得的包含药物制剂的小瓶对应于超过一次的施用剂量。在还另外的实施方案中，所得小瓶包含高于对应于自然数施用剂量的体积的体积，以预期重构制剂对小瓶、注射器或塞子的壁的黏附作用。在另外的实施方案中，该额外体积可以是自然数施用剂量所需体积的约20％、所需体积的约15％、所需体积的约10％、所需体积的约5％,所需体积的约2％，所需体积的约1％。
在某些实施方案中，冻干药物制剂可通过本申请中所定义的方法得到或通过本申请中所定义的方法得到。
另一方面涉及可通过本申请中所述的任意实施方案得到或通过本申请中所述的任意实施方案得到的冻干药物制剂。
在某些实施方案中，冻干药物制剂包含透明质酸或其衍生物、血浆蛋白和α-2肾上腺素能受体激动剂。在另外的实施方案中，冻干药物制剂由或主要由透明质酸、血浆蛋白、可乐定、氯化钙和缓冲成分或酸性成分例如氯化氢组成。在特别优选的实施方案中，所述的药物制剂包含约30wt％至约80wt％血浆蛋白，包含5.0至20.0wt％具有约0.2MDa至4.5MDa，特别是约0.5MDa至约1.2MDa分子量的透明质酸纤维或其衍生物，具有约0.04至0.08mg/ml的密度，并且具有约9至约30的膨胀度，并且还包含0.01至0.1wt％的可乐定或可乐定衍生物和/或1.5至3.0wt％的钙盐，特别是氯化钙。
相关方面涉及如上所述的冻干药物制剂，其用作药物。
相关方面涉及如上所述的冻干药物制剂，其用于肌肉骨骼疾病的治疗(包括在整个本说明书中治疗和/或预防措施)。优选地，所述的肌肉骨骼疾病可以为骨病或关节病。
如本申请中所定义的“关节”、“关节”或“关节面”是指将骨骼系统连接成功能整体的身体中骨骼之间的连接。使用药物制剂治疗的适合关节可以选自包含单关节型关节、寡关节型或少关节型关节和多关节型关节的组。如本申请中所定义的关节可涉及包含纤维连接关节、软骨连接关节、滑膜关节或脊柱关节的功能分类组的一个或多个成员。关节可以选自由手关节、肘关节、腕关节、腋窝关节、胸锁关节、脊椎关节、颞下颌关节、骶髂关节、髋关节、膝关节或足关节组成的组。
另一方面提供治疗需要该治疗的受试者的肌肉骨骼疾病的方法，其包括对该受试者施用治疗有效量的本申请中教导的冻干药物制剂，其中将该冻干药物制剂与水溶液混合，然后施用。
另一方面提供如本申请中所教导的冻干药物制剂在制备用于治疗受试者的肌肉骨骼疾病的药物中的用途。
如本申请中所用的术语“肌肉骨骼疾病”是指任何类型的骨病、肌病、关节病或软骨营养不良，其治疗可受益于向患有该疾病的受试者施用本药物制剂。该术语还包括影响肌腱和/或韧带的疾病)。特别地，这样的疾病可以被表征为，例如减少的骨和/或软骨形成或过度的骨和/或软骨吸收，存在于骨中的成骨细胞或骨细胞和/或存在于软骨中的成软骨细胞或软骨细胞的数量、活力或功能下降，受试者的骨量和/或软骨量减少、骨变薄、骨强度或弹性受损等。
肌肉骨骼疾病的非限制性实例可以包括局部或系统性疾病，例如任何类型的骨质疏松症或骨质减少，例如原发性、绝经后、老年性、皮质激素诱导的、双膦酸盐诱导的和放疗诱导的骨质疏松症或骨质减少；任何继发性、单部位或多部位骨坏死；任何类型的骨折，例如非连接型、连接不良型、延迟连接型骨折或压迫、需要骨融合的病症(例如脊柱融合和重建)、颌面骨折、先天性骨缺损、骨重建，例如在外伤或癌症手术后，以及颅面骨重建；创伤性关节炎、局灶性软骨和/或关节缺损、局灶性退行性关节炎；骨关节炎、退行性关节炎、膝关节病和髋关节病；成骨不全；溶骨性骨癌；佩吉特(Paget)病、内分泌失调、低磷血症、低钙血症、肾性骨营养障碍、骨软化、动力缺失性骨病、甲状旁腺功能亢进症、原发性甲状旁腺功能亢进症、继发性甲状旁腺功能亢进症；牙周病；高-斯(Gorham-Stout)病和麦-奥(McCune-Albright)综合征；类风湿性关节炎；脊椎关节病，包括强直性脊柱炎、银屑病关节炎、肠病性关节病以及未分化脊椎关节炎和反应性关节炎；系统性红斑狼疮和相关综合征；硬皮病和相关疾病；干燥(Sjogren)综合征，系统性脉管炎，包括巨细胞动脉炎(Horton病)、高安(Takayasu)动脉炎、风湿性多肌痛、ANCA相关性血管炎(例如韦格纳(Wegener)肉芽肿、微观多脉管炎和Churg-Strauss综合征)、Behcet综合征和其他多动脉炎和相关疾病(例如结节性多动脉炎、Cogan综合征或Buerger病)；伴随其他系统性炎症性疾病的关节炎，包括淀粉样变性和结节病；结晶性关节病，包括痛风、焦磷酸钙二水化物疾病、与磷酸钙或草酸钙晶体的关节沉积相关的疾病或综合征；软骨钙质沉着症和神经性关节病；Felty综合征和Reiter综合征；莱姆(Lyme)病和风湿热。
在实施方案中，肌肉骨骼疾病可以为骨关节炎。
如本申请中所用，短语例如“需要治疗的受试者”包括将受益于指定病症，尤其是肌肉骨骼疾病的治疗的受试者。此类受试者可以包括，但不限于已被诊断患有所述病症的受试者、易于发展所述病症的受试者和/或其中所述病症将被预防的受试者。
术语“治疗”包括对已经发展的疾病或病症的治疗性处理，例如对已经发展的肌肉骨骼疾病的治疗，以及预防或防止措施，其中目的在于预防或减少不期望的病患发生的机会，例如防止肌肉骨骼疾病的发生、发展和进展。有益的或期望的临床结果可以包括但不限于一种或多种症状或一种或多种生物标志物的减少、疾病程度的减轻、疾病的稳定(即，不恶化)状态、疾病进展的延迟或减缓、疾病状态的改善或缓解等。如果不接受治疗，“治疗”也可以意指与预期的生存相比延长的生存期。
术语“预防有效量”是指研究人员、兽医、医生或其他临床工作者寻求的抑制或延迟受试者中病症发作的活性化合物或药用物质的量。
如本申请中所教导的制剂和方法允许在具有将受益于该治疗的肌肉骨骼疾病的受试者中施用治疗有效量的药物活性成分。如本申请中所用的术语“治疗有效量”是指外科医生、研究人员、兽医、医生或其他临床工作者寻求的受试者中引起生物学或药物反应的活性化合物或药用物质的量，其可以特别包括减轻被治疗的疾病或病症的症状。
本发明制剂中药物活性化合物或药物活性成分的适当治疗有效剂量可由有资格的临床医师适当考虑药物活性化合物或药物活性成分的性质、疾病状况和严重程度以及患者的年龄、体型和状况来确定。
在某些实施方案中，肌肉骨骼疾病可以影响腱和/或韧带。在某些实施方案中，本申请中所述的药物制剂可以为联合疗法策略的一部分，但不限于例如本领域技术人员已知的其他药物疗法，或例如运动疗法。在另外的实施方案中，冻干制剂用作预防症状发生的措施。在另外的实施方案中，可以将骨或关节疾病分类为进行性骨病或进行性关节病。在还另外的实施方案中，所述骨病或关节病为遗传性障碍或疾病。在还另外的实施方案中，所述骨病或关节病为与年龄相关的疾病。在还另外的实施方案中，使用冻干制剂的目的仅在于针对症状。
进一步预想的是治疗需要此类治疗的受试者的肌肉骨骼疾病的方法，其包括向所述受试者施用治疗或预防有效量的如上所述的药物制剂。在某些实施方案中，在多个时间点施用所述药物制剂。在另外的实施方案中，以固定的时间间隔彼此分开不同的施用。在其他实施方案中，不同施用之间的时间间隔以一定多重性增加。在还其他实施方案中，不同施用之间的时间间隔指数增加。在某些实施方案中，通过单独的注射入口位置施用一个治疗剂量的等分部分。
本申请还提供如下声明中所述的方面和实施方案：
声明1.包含血浆蛋白或其衍生物和透明质酸或其衍生物的冻干药物制剂，其中该制剂在水溶液中重构时具有15分钟或更少的重构时间。
声明2.根据声明1的冻干药物制剂，其中该制剂还包含α-2肾上腺素能受体激动剂，优选其中α-2肾上腺素能受体激动剂为可乐定或其衍生物。
声明3.根据声明1或2的冻干药物制剂，其中该制剂包含约30％至约80％重量的血浆蛋白或其衍生物。
声明4.根据声明1至3任意一项的冻干药物制剂，其中血浆蛋白为经溶剂/去污剂处理的(S/D)血浆蛋白，优选人S/D血浆蛋白，和/或其中透明质酸衍生物为透明质酸的盐、透明质酸与脂族、杂环或脂环族系列的醇的酯和透明质酸的硫酸化形式。
声明5.根据声明1至4任意一项的冻干药物制剂，其中透明质酸或其衍生物包含具有0.2MDa至4.5MDa，优选0.5MDa至1.2MDa的分子量的纤维。
声明6.根据声明1至5任意一项的冻干药物制剂，其还包含至少一种盐，优选其中所述的盐为钙盐，更优选其中所述的盐为氯化钙；和/或进一步包含至少一种缓冲成分或酸性成分，优选其中所述的酸性成分为盐酸。
声明7.根据声明1至6任意一项的冻干药物制剂，其还包含一种或多种药物活性成分。
声明8.根据声明7的冻干药物制剂，其中一种或多种药物活性成分各自独立地选自：细胞组合物、药物活性化合物、蛋白质、肽和小有机分子。
声明9.根据声明8的冻干药物制剂，其中所述细胞组合物包含充质干细胞(MSC)、骨原细胞、成骨细胞、骨细胞、成软骨细胞和/或软骨细胞。
声明10.根据声明8的冻干药物制剂，其中所述药物活性蛋白或肽为生长因子，优选选自由下列各项组成的组的生长因子：成纤维细胞生长因子(FGF)、转化生长因子β(TGFB)、血小板衍生生长因子(POGF)、白细胞介素-8(IL-8)、骨形态-20发生蛋白(BMP)、甲状旁腺激素(PTH)、甲状旁腺激素相关蛋白(PTHrp)和干细胞因子(SCF)；更优选选自由下列各项组成的组的生长因子：FGF-2、TGFB-1、POGF、IL-8、BMP-2、BMP-4、BMP-6、BMP-7、PTH、PTHrp和SCF。
声明11.根据声明1至10任意一项的冻干药物制剂，其还包含至少一种糖胺聚糖。
声明12.根据声明11的冻干药物制剂，其中另外的糖胺聚糖之一为硫酸软骨素。
声明13.根据声明1至12任意一项的冻干药物制剂，其还包含血清，优选人血清。
声明14.根据声明1至13任意一项的冻干药物制剂，其还包含全血蛋白或全血的分级分离的成分的蛋白，优选其中所述全血为人全血。
声明15.根据声明1至14任意一项的冻干药物制剂，其中对应于一次施用剂量的该制剂包含：
-1mg至100mg的透明质酸或其衍生物，优选2mg至50mg的透明质酸或其衍生物，更优选5mg至40mg的透明质酸或其衍生物；以及
-任选的1μg至500μg的α-2肾上腺素能受体激动剂，优选2μg至250μg的α-2肾上腺素能受体激动剂，更优选5μg至125μg的α-2肾上腺素能受体激动剂。
声明16.根据声明1至15任意一项的冻干药物制剂，其中该制剂包含：
-约30％至约80％重量的血浆蛋白或其衍生物；以及
-约5.0％至约20.0％重量的透明质酸或其衍生物；以及任选地
-约0.01％至约0.1％重量的α-2肾上腺素能受体激动剂；
-约1.5％至约3.0％重量的盐；和/或
-约0.1％至约2.0％重量的缓冲成分或酸性成分。
声明17.根据声明1至16任意一项的冻干药物制剂，其中该冻干制剂具有9至30的膨胀度。
声明18.根据方面1至17任意一项的冻干药物制剂，其被配置用于重构后肠胃外施用，优选用于骨内、骨周围、关节内或关节周围施用，或用于重构后腱内、腱周围、韧带内或韧带周围施用。
声明19.组件套装产品，其包含：
-根据声明1至18任意一项的冻干药物制剂；
-包含水溶液的注射器；以及
-优选地，至少一个针头。
声明20.制备根据声明1至18任意一项的冻干药物制剂的方法，其包括下列步骤：
(a)混合血浆蛋白或其衍生物、透明质酸或其衍生物和水溶液，由此得到散装混合物，其具有20mg/ml至50mg/ml浓度的血浆蛋白或其衍生物和4mg/ml至8mg/ml浓度的透明质酸或其衍生物；
(b)通过蒸汽灭菌或过滤灭菌将该散装混合物灭菌，由此得到无菌混合物；以及
(c)冻干该无菌混合物，由此得到所述的冻干药物制剂。
声明21.根据声明20的方法，其中步骤(a)还包含混合α-2肾上腺素能受体激动剂、盐和/或缓冲成分或酸性成分，由此得到散装混合物，其具有20μg/ml至35μg/ml浓度的α-2肾上腺素能受体激动剂、0.5mg/ml至1.5mg/ml浓度的盐和/或0.05mg/ml至3.0mg/ml浓度的缓冲成分或酸性成分。
声明22.根据声明20或21的方法，其中透明质酸或其衍生物包含具有0.2MDa至4.5MDa，优选0.5MDa至1.2MDa的分子量的纤维。
声明23.可通过根据声明20至22任意一项的方法得到或通过根据声明20至22任意一项的方法得到的冻干药物制剂，优选可通过根据声明20至22任意一项的方法得到或通过根据声明20至22任意一项的方法得到的根据声明1至18任意一项的冻干药物制剂。
声明24.根据声明1至18或23任意一项的冻干药物制剂，其用于治疗肌肉骨骼疾病，优选其中将冻干药物制剂与水溶液混合，然后施用。
声明25.根据声明24的应用的冻干药物制剂，优选其中肌肉骨骼疾病为骨病或关节病。
尽管已经结合其具体实施方案描述了本发明，但是明显对于本领域技术人员而言，根据上述说明，许多替代方案、变型和改变是显而易见的。因此，在如下所附权利要求的精神和宽范围内，预想包括所有这类替代方案、变型和改变。
本申请中公开的本发明的方面和实施方案进一步得到下列非限制性实施例支持。
实施例
实施例1-得到根据本发明的实施方案的冻干药物组合物的方法
通过混合5克HA纤维(0.6-1MDa)、500ml水、1.25ml可乐定HCl(20mg/ml)、476.25mlS/D血浆、10ml HCl(1M)和12.5ml CaCl2(80mg/ml)制备散装混合物。
通过过滤将得到的散装混合物灭菌。在接下来的步骤中，将5ml已灭菌的散装混合物装入储存小瓶，然后进行冻干。在冻干阶段之后，将小瓶塞上塞子。图1显示了包含根据本发明的实施方案的冻干药物制剂的三个小瓶。冻干制剂是一种淡白黄色饼状物。在向有需要的患者注射之前，将储存小瓶中的药物制剂在2.4ml水中重构。
实施例2–对应于根据某些实施方案的一次施用剂量的重构冻干药物制剂的组成
透明质酸 25mg
S/D血浆(冻干S/D血浆) 188mg
可乐定 125μg
CaCl<sub>2</sub> 5mg
HCl 1.9mg
实施例3-对应于根据某些实施方案的冻干药物制剂的特征
蛋白质材料的重量百分比 61％
密度 0.062
实施例4.根据某些实施方案的不同制剂的重构时间
4.1不同分子量HA
生产具有不同分子量HA(高分子量(MW)：3.5–4.5MDa，中MW：0.6–1MDa，低MW：小于0.6MDa)和不同稀释因子的透明质酸(参见如下4.2)的组合物。
4.2散装混合物的不同稀释
制备了三种不同的散装混合物：将透明质酸纤维(1g)与95.25ml S/D血浆、5mg可乐定HCl(0.25ml的20mg/ml溶液)、200mg CaCl2(2.5ml的80mg/ml溶液)、72.92mg HCl(2ml的1M溶液)混合，得到第一散装混合物(未稀释，称作“1x”)。
此外，将透明质酸纤维(1g)与100ml H2O混合，得到第一溶液A。还将透明质酸纤维(1g)与200ml H2O混合，得到第一溶液B。通过混合95.25ml S/D血浆、5mg可乐定HCl(0.25ml的20mg/ml溶液)、200mg CaCl2(2.5ml的80mg/ml溶液)和72.92mg HCl(2ml的1M溶液)，制备了第二溶液。将第一溶液A(100ml)与第二溶液(100ml)以1:1(v/v)的比例混合，得到散装混合物，称作“2x”。将第一溶液B(200ml)与第二溶液(100ml)以2:1(v/v)的比例混合，得到散装混合物，称作“3x”。
4.3冷冻干燥的饼状物
将每个HA MW和稀释的散装混合物转移到小瓶中进行冻干。由饼状物重量/饼状物体积比测定冻干产品的密度。通过包含冻干饼状物的小瓶重量减去空瓶重量得到饼状物重量。使用如下公式计算饼状物体积：πx R2 x h，其中R为饼状物的半径，且h为饼状物的高度。
冷冻干燥前根据散装混合物的增加稀释，干燥干饼状物的密度降低：密度(1x)>密度(2x)>密度(3x)(表1)。通过稀释制备的冻干药物制剂具有0.04g/cm3至0.08g/cm3的密度。密度不受HA分子量影响(表1)。
表1：根据本发明的实施方案的冻干药物制剂的重量(g)、体积(cm3)和密度(g/cm3)(n＝15)；冻干前制剂的散装混合物：1x、2x或3x
Figure BDA0003350653740000491
通过包括稀释的方法(例如散装混合物2x和3x)制备的冻干药物制剂具有用于重构的最佳密度。鉴于此，优选通过包含稀释的方法(2x或3x)制备的冻干药物制剂以便得到具有令人满意的密度的饼状物。
饼状物吸收能力
通过测量随时间饼状物重量评估了不同冻干产品的吸收能力。简言之，将9.6ml水添加到冷冻干燥的饼状物上以确保其完全浸没。然后除去多余的水。在除去多余的水之后立即测量重量。将该过程重复几次。
代表重量为按时间函数的重量的水合曲线表明，根据本发明的实施方案的冻干药物制剂在30秒内完全水化。图2提供了代表性的水合曲线，其说明了通过将第一溶液和第二溶液以1:1(v/v)的比例(2x)和中分子量HA混合制备的根据本发明的实施方案的5种冻干药物制剂的按时间函数的重量。冻干药物制剂在少于30秒内完全水化(0秒后的第一个时间点为17秒至22秒)。
当根据HA分子量(HA低、中和高MW)比较冻干药物制剂的吸收能力时，具有中和高MW HA的冻干药物制剂的水化能力高于包含低MW HA的冻干药物制剂的水化能力(数据未显示)。
冻干药物制剂的水化能力随HA分子量增加而增加：吸收能力HA高MW≥吸收能力HA中MW>吸收能力HA低MW。水化能力随冻干药物制剂的密度降低而增加：吸收能力3x>吸收能力2x>吸收能力1x。
干燥的饼状物的重构时间(在水中)
使用注射器(死体积0.1ml)将2.4ml注射用水加入到每个冻干样品中。饼状物完全水化后，通过转动在手之间(2-4次混合操作)或用手上下振动将小瓶混合。混合仅持续约30秒。使用定时器评估重构时间。在加入水之后就开始重构时间并且在将产物完全再混悬之后停止。通过视觉检查评估重构。重构产物为淡黄色至黄色、浑浊和微黏的溶液。该溶液有时因振动包含气泡。
数据显示，对于高分子量HA，对于全部冻干药物制剂而言均匀重构是不可能的。因此，仅对包含低MW HA和中MW HA的冻干药物制剂进行重构时间的分析。
表2：根据本发明的实施方案的冻干药物制剂的水化时间(分:秒)、混合时间(分:秒)和重构时间(分:秒)(n＝5)；
冻干前制剂的散装混合物：1x、2x或3x
Figure BDA0003350653740000501
数据显示散装混合物的稀释减少了重构时间。当通过以1:1(v/v)(“2x”)或2:1(v/v)(“3x”)的比例混合第一溶液和第二溶液制备散装混合物时，得到了类似的重构时间(表2)。
鉴于上述数据，为了得到均匀的注射用制剂以及令人满意的重构时间，优选采用低或中分子量HA并且通过以1:1(v/v)(“2x”)的比例混合第一溶液与第二溶液制备的冻干药物制剂。
4.4用水重构的饼状物
制剂黏度
使用microVISCTM黏度计(RheoSense,CA,USA)，根据供应商的方法评估了黏度。
在每次使用microVISCTM前，测量了参比油的黏度以评估设备的校准。
首先将传感器筒HB02放入黏度计中。然后，将400μl样品装入一次性移液管中，进一步将该移液管固定在黏度计上。
高级参数为：
-剪切速率＝111.6s-1
-测量体积＝30μl
-启动体积＝15μl
-暂停时间＝5s
-传感器范围＝60至5000cP
由于温度是影响黏度的众所周知的参数，因此每次测量都必须在25.0±0.1℃进行。
测量芯片包含由硼硅玻璃构成的矩形细缝流动通道，具有均匀的横截面积。以恒定流速通过流动通道注入样品，其中固定在底座内的多个压力传感器监测从入口到出口的压降。压降与边界壁处的剪应力相关。剪切速率和剪应力与矩形细缝的几何形状和允许黏度测量的流速直接相关。
Figure BDA0003350653740000511
芯片通过测量测试液体流过其矩形细缝微流体通道时的压降来评估黏度。基于Hagen-Poiseuille流量，它是流变学原理的众所周知的应用(K.Walters,Rheometry,Chapman and Hall,London,1975)，它也被列入美国药典。
黏度数据被导出到microVISCTM control 2.0软件中。
表3中提供了黏度测量的结果。
表3：根据本发明的实施方案的冻干药物制剂的黏度(cP)、尺度(％)和R2(n＝5)；冻干前制剂的散装混合物：1x、2x或3x
Figure BDA0003350653740000521
黏度随HA MW重量增加而增加：黏度HA高MW>黏度HA中MW>黏度HA低MW。发现包含中分子量HA的重构制剂的注射最佳黏度为200cP至500cP。
黏度不受其他参数，例如散装混合物的稀释影响。
总之，包含中分子量HA并且通过以1:1(v/v)(“2x”)的比例混合第一溶液和第二溶液制备的冻干药物制剂具有令人满意的重构时间，同时在重构后具有既允许易于通过注射施用又在施用后提供充分的润滑作用的黏度。
蛋白质含量
使用商购试剂盒(来自Biorad的去污剂相容性蛋白质测定试剂盒,参考号500-0116)，基于制造商的推荐，通过比色法测定了蛋白质含量。简言之，使用蛋白质标准溶液稀释液(Biorad，快速启动牛血清白蛋白标准品，#500-020)完成了标准曲线。将5微升标准溶液和重构的饼状物溶液放入洁净和干燥的微孔板的孔中，并添加25微升/孔的试剂A。然后加入200微升试剂B，将微孔板搅拌5秒。温育15分钟后，在620nm处对平板读数。
表4中提供了蛋白质浓度测量的结果。
表4：根据本发明的实施方案的冻干药物制剂的蛋白质浓度(mg/ml)(n＝5)；冻干前制剂的散装混合物：1x、2x或3x
HA低MW HA中MW HA高MW
1x 平均值 53.16 53.95 48.35
SD 1.87 9.22 3.27
2x 平均值 50.43 45.24 40.59
SD 1.20 2.20 3.27
3x 平均值 48.99 50.08 50.70
SD 2.07 3.53 2.38
血浆蛋白的浓度平均为50mg/ml。因此，每种冻干制剂包含约120mg血浆蛋白(即50mg/ml x 2.4ml重构体积)。冻干制剂的总重量为约200mg，因此每个小瓶包含约60％wt的血浆蛋白。
样品与样品之间以及不同条件之间的变异性可能与实验本身(例如，原料的重量)有关。

Claims (17)

1.冻干药物制剂，其包含冻干血浆和透明质酸或其衍生物，其中该制剂在水溶液中重构时具有15分钟或更少的重构时间并且被配置用于注射。
2.根据权利要求1的冻干药物制剂，其中所重构的药物制剂的特征在于黏度为200cP至500cP；优选黏度为250cP至400cP。
3.根据权利要求1或2的冻干药物制剂，其中该制剂还包含α-2肾上腺素能受体激动剂，优选其中α-2肾上腺素能受体激动剂为可乐定或其衍生物。
4.根据权利要求1至3任意一项的冻干药物制剂，其中该制剂包含约30％至约80％重量的血浆蛋白。
5.根据权利要求1至4任意一项的冻干药物制剂，其中所述的血浆蛋白为经溶剂/去污剂处理的(S/D)血浆蛋白，优选人S/D血浆蛋白,和/或其中所述透明质酸的衍生物为透明质酸的盐、透明质酸与脂族、杂环或脂环族系列的醇的酯或透明质酸的硫酸化形式。
6.根据权利要求1至5任意一项的冻干药物制剂，其中所述的透明质酸或其衍生物包含具有0.2MDa至4.5MDa，优选0.5MDa至1.2MDa，更优选0.6MDa至1.0MDa分子量的纤维。
7.根据权利要求1至6任意一项的冻干药物制剂，其还包含至少一种盐，优选其中所述的盐为钙盐，更优选其中所述的盐为氯化钙；和/或还包含至少一种缓冲成分或酸性成分，优选其中所述的酸性成分为盐酸。
8.根据权利要求1至7任意一项的冻干药物制剂，其中对应于一次施用剂量的该制剂包含：
-1mg至100mg的透明质酸或其衍生物，优选2mg至50mg的透明质酸或其衍生物，更优选5mg至40mg的透明质酸或其衍生物；以及
-任选的1μg至500μg的α-2肾上腺素能受体激动剂，优选2μg至250μg的α-2肾上腺素能受体激动剂，更优选5μg至125μg的α-2肾上腺素能受体激动剂。
9.根据权利要求1至8任意一项的冻干药物制剂，其中该制剂包含：
-约30％至约80％重量的血浆蛋白；以及
-约5.0％至约20.0％重量的透明质酸或其衍生物；以及任选地
-约0.01％至约0.1％重量的α-2肾上腺素能受体激动剂；
-约1.5％至约3.0％重量的盐；和/或
-约0.1％至约2.0％重量的缓冲成分或酸性成分。
10.根据权利要求1至9任意一项的冻干药物制剂，其中该冻干制剂具有0.04g/cm3至0.08g/cm3的密度。
11.组件套装产品，其包含：
-根据权利要求1至10任意一项的冻干药物制剂；
-包含水溶液的注射器；以及
-优选地，至少一个针头。
12.制备根据权利要求1至10任意一项的冻干药物制剂的方法，其包括下列步骤：
(a)混合血浆和透明质酸或其衍生物，由此得到散装混合物；
(b)通过蒸汽灭菌或过滤灭菌将该散装混合物灭菌，由此得到无菌混合物；以及
(c)冻干所述无菌混合物，由此得到所述的冻干药物制剂；
其中步骤(a)包含下列步骤：(a1)将透明质酸或衍生物溶于水溶液，由此得到第一溶液；(a2)制备第二溶液，其包含血浆和任选的α-2肾上腺素能受体激动剂；以及(a3)混合第一溶液和第二溶液，得到所述的散装混合物。
13.根据权利要求12的方法，其中所述的散装混合物具有20mg/ml至50mg/ml浓度的血浆蛋白和4mg/ml至8mg/ml浓度的透明质酸或其衍生物。
14.根据权利要求12或13的方法，其中步骤(a)还包括混合α-2肾上腺素能受体激动剂、盐和/或缓冲成分或酸性成分，由此得到散装混合物，其具有20μg/ml至35μg/ml浓度的α-2肾上腺素能受体激动剂、0.5mg/ml至1.5mg/ml浓度的盐和/或0.05mg/ml至3.0mg/ml浓度的缓冲成分或酸性成分。
15.根据权利要求12至14任意一项的方法，其中所述的透明质酸或其衍生物包含具有0.2MDa至4.5MDa，优选0.5MDa至1.2MDa，更优选0.6MDa至1.0MDa的分子量的纤维。
16.可通过根据权利要求12至15任意一项的方法得到或通过根据权利要求12至15任意一项的方法得到的冻干药物制剂，优选可通过根据权利要求12至15任意一项的方法得到或通过根据权利要求12至15任意一项的方法得到的根据权利要求1至10任意一项的冻干药物制剂。
17.根据权利要求1至10或16任意一项的冻干药物制剂，其用于治疗肌肉骨骼疾病，优选其中将该冻干药物制剂与水溶液混合，然后施用。
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