ES2966023T3 - Un método para la preparación de una composición formadora de gel - Google Patents

Abstract

La presente invención se refiere a un método para la preparación de una composición formadora de gel para administración parenteral, dicho método comprende las etapas de mezclar una mezcla de plasma derivado de mamífero y ácido hialurónico o una sal o éster del mismo con una fuente de calcio, y en donde dicha fuente de calcio se añade a dicha mezcla de manera que la concentración de calcio esté entre 0,2 y 1,4 mg/ml. La invención también se refiere a una composición obtenida mediante el método. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN

Un método para la preparación de una composición formadora de gel

Campo de la invención

La presente invención se refiere a un método para la preparación de una composición formadora de gel para administración por vía parenteral. La presente invención pertenece al campo técnico de las ciencias médicas y veterinarias.

Antecedentes

Las enfermedades o trastornos musculoesqueléticos pueden afectar a huesos, músculos, articulaciones, cartílagos, tendones, ligamentos y otros tejidos conectivos que sostienen y unen los tejidos y los órganos entre sí. Estas enfermedades pueden aparecer con el tiempo o pueden ser el resultado, por ejemplo, de un uso excesivo del sistema musculoesquelético o de un traumatismo. Las enfermedades musculoesqueléticas son difíciles de diagnosticar y/o tratar debido a la estrecha relación del sistema musculoesquelético con otros sistemas internos.

Otras y/o mejores formulaciones farmacéuticas están diseñadas para el tratamiento de sistemas musculoesqueléticos en una administración localizada. Las formulaciones particulares de interés presentan o alcanzan una consistencia de gel tras la administración. Estas formulaciones incluyen a menudo ingredientes farmacéuticos activos y/o células terapéuticas.

El documento EP 2 900 247 describe una formulación farmacéutica que comprende plasma tratado con disolvente/detergente (plasma S/D) y ácido hialurónico.

El documento EP 2 185 163 describe un método para el tratamiento de una articulación, en donde dicho método comprende la infiltración de un compuesto en la articulación y dicho compuesto comprende al menos una sustancia procedente de la sangre.

El documento WO 2013076 160 describe una formulación formadora de gel que comprende un glucosaminoglucano, un agente de liberación sostenida y uno o más ingredientes farmacéuticos activos.

El documento US2012171179 describe composiciones farmacéuticas para la prevención de enfermedades de huesos y cartílagos. La composición comprende células madre procedentes del tejido adiposo, PRP, HA y cloruro de calcio.

El documento WO2014/035721 está dirigido a plasma modificado para ser utilizado como hidrogel en la cicatrización de heridas y otras aplicaciones.

El documento WO2009/016451 está dirigido a métodos para tratar enfermedades o dolores articulares, basados en la infiltración articular con sustancias procedentes de la sangre, tales como PRP y plasma rico en factores de crecimiento. A la composición puede añadírsele HA.

Aunque las composiciones formadoras de gel de la técnica anterior tienen propiedades mejoradas, diseñadas para el tratamiento del sistema musculoesquelético, las propiedades de gelificación de las composiciones formadoras de gel son variables. Estas propiedades a menudo se ven afectadas por los diferentes procedimientos de tratamiento en la preparación de la composición. Debido al modo de administración previsto, debería disponerse de una composición formadora de gel reproducible con propiedades de gelificación controladas.

Por tanto, sigue existiendo en la técnica la necesidad de un método para la preparación de la composición formadora de gel y de una composición formadora de gel mejorada con una gelificación controlada. La presente invención tiene como objetivo resolver los problemas y desventajas mencionados anteriormente.

Compendio de la invención

La presente invención y las realizaciones de la misma sirven para proporcionar una solución a una o más de las desventajas mencionadas anteriormente. Con este fin, la presente invención se refiere a un método para la preparación de una composición formadora de gel para administración por vía parenteral según la reivindicación 1.

El método descrito en la presente invención hace posible la preparación de una composición formadora de gel y permite una gelificación gradual y controlada de la composición.

Las realizaciones preferidas del método se muestran en cualquiera de las reivindicaciones 2 a 13.

En un segundo aspecto, la presente invención se refiere a una composición según la reivindicación 14. Más particularmente, la composición como se describe en el presente documento proporciona un proceso de gelificación óptimo para que la composición pueda manipularse y administrarse de forma segura y la composición gelifique en el sitio de la lesión y establezca un entorno favorable a las células y una liberación sostenida de los ingredientes farmacéuticos activos comprendidos en la composición.

En un tercer aspecto, la presente invención se refiere a la composición para uso según la reivindicación 15. Las realizaciones preferidas de este uso se muestran en las reivindicaciones 16-18.

Definiciones

A menos que se defina lo contrario, todos los términos utilizados para describir la invención, incluidos los términos técnicos y científicos, tienen el significado comúnmente entendido por un experto en la técnica a la que pertenece esta invención. A modo de orientación adicional, se incluyen definiciones de términos para apreciar mejor las enseñanzas de la presente invención.

Como se usan en el presente documento, los siguientes términos tienen los siguientes significados:

"Un/una" y "el/la", como se usan en este documento, se refieren a referentes tanto en singular como en plural, a menos que el contexto indique claramente lo contrario. A modo de ejemplo, "un compartimento" se refiere a uno o a más de un compartimento.

"Aproximadamente", como se usa en el presente documento, referido a un valor medible tal como un parámetro, una cantidad, una duración temporal y similares, pretende abarcar variaciones de /- el 20% o menos, preferiblemente /-el 10% o menos, más preferiblemente /- el 5% o menos, incluso más preferiblemente /- el 1% o menos y aún más preferiblemente /- el 0,1% o menos del valor especificado, en la medida en que tales variaciones sean apropiadas para realizarse en la invención descrita. Sin embargo, debe entenderse que el valor mismo al que se refiere el modificador "aproximadamente" también está específicamente descrito.

"Comprender", "que comprende" y "comprende", como se usan en el presente documento, son sinónimos de "incluir", "que incluye", "incluye" o "contener", "que contiene", y son términos inclusivos o abiertos que especifican la presencia de lo que sigue, por ejemplo, un componente, y no excluyen ni impiden la presencia de otros componentes, particularidades, elementos, miembros o etapas no mencionados, conocidos en la técnica o descritos en la misma.

Además, los términos primero, segundo, tercero y similares en la descripción y en las reivindicaciones se utilizan para distinguir entre elementos similares y no necesariamente para describir un orden secuencial o cronológico, a menos que se especifique. Debe entenderse que los términos así utilizados son intercambiables en circunstancias apropiadas y que las realizaciones de la invención descritas en el presente documento pueden funcionar en otras secuencias distintas de las descritas o ilustradas en el presente documento.

La mención de intervalos numéricos por puntos finales incluye todos los números y fracciones englobados dentro de ese intervalo, así como los puntos finales mencionados.

La expresión "% en peso", aquí y en toda la descripción, a menos que se defina lo contrario, se refiere al peso relativo del componente respectivo con respecto al peso total de la formulación.

Aunque los términos "uno o más", como uno o más miembros de un grupo de miembros, son claros de por sí, para mayor ilustración, el término abarca, entre otros, una referencia a uno cualquiera de dichos miembros, o a dos o más cualesquiera de dichos miembros, tales como, por ejemplo, 3 o más, 4 o más, 5 o más, 6 o más, 7 o más, etc. cualesquiera de dichos miembros y hasta la totalidad de dichos miembros.

Los términos "formulación", "composición" o "preparación" pueden usarse de manera intercambiable en el presente documento.

El término "plasma" debe entenderse como una fracción obtenida de una muestra de sangre completa, provista de o puesta en contacto con un anticoagulante, por ejemplo, CPDA-1 (que comprende citrato, fosfato, dextrosa y/o adenosina), heparina, citrato, oxalato o EDTA. Los componentes celulares de la muestra de sangre, es decir, los glóbulos blancos y rojos, se separan del componente líquido, es decir, el plasma, mediante una técnica adecuada, por ejemplo, centrifugación o aféresis. Posteriormente, el plasma puede tratarse opcionalmente con un disolvente/detergente, por ejemplo, para eliminar virus. El tratamiento con disolvente/detergente permite la eliminación de células y/o restos celulares, por ejemplo, membranas lipídicas, lípidos y/o fosfolípidos. Esto normalmente se denomina plasma tratado con disolvente/detergente (plasma S/D). El plasma no sometido al tratamiento con disolvente/detergente puede etiquetarse como plasma no tratado o plasma nativo. En una realización de la presente invención, el plasma no está tratado y, sin querer ceñirse a ninguna teoría, se entiende que dicho plasma comprende células, lípidos y/o fosfolípidos. Como consecuencia, dicho plasma tiene las mismas características de composición que el plasma nativo o similares. El "plasma" de la presente invención procede preferiblemente de mamíferos.

El término "plasma fresco congelado" debe entenderse como un plasma congelado a -18 °C o menos dentro de las doce horas después de su preparación como se indica en la definición de plasma.

El término "plasma de aféresis" debe entenderse como un plasma obtenido mediante plasmaféresis, una tecnología médica en la que la sangre se extrae del donante, se hace pasar a través de un aparato (es decir, una aféresis) que separa el plasma de la sangre total y devuelve el líquido restante directamente al donante. El plasma sometido a aféresis se pone en contacto con anticoagulantes como CPDA 1, ACD, heparina, citrato, oxalato o EDTA.

El término "plasma centrifugado" debe entenderse como un plasma obtenido por centrifugación de la sangre total puesta en contacto con un anticoagulante que permite la separación del plasma de la sangre total. El plasma sometido a centrifugación puede ponerse en contacto con anticoagulantes como CPDA 1, ACD, heparina, citrato, oxalato o EDTA.

El término "agente formador de gel", tal como se pretende a lo largo de esta especificación, abarca agentes capaces de formar un material sólido gelatinoso (gel). En particular, los agentes formadores de gel forman un gel cuando se combinan con o se exponen a materiales y/o condiciones conducentes a la formación de un gel, por ejemplo, pero sin limitación, cuando se disuelven o dispersan en una fase líquida adecuada, tal como una solución acuosa.

El término "ácido hialurónico" puede utilizarse de manera intercambiable con “hialuronato”. El término "ácido hialurónico" se refiere a un polímero aniónico no sulfatado de disacáridos, compuesto por ácido D-glucurónico y N-acetil-D-glucosamina, unidos mediante enlaces glucosídicos p-1,4 y p-1,3 alternos. Los derivados del ácido hialurónico incluyen, pero no se limitan a sales de hialuronato, tales como hialuronato de sodio, o un éster del ácido hialurónico con un alcohol de la serie alifática, heterocíclica o cicloalifática, o una forma sulfatada del ácido hialurónico o una combinación de agentes que contienen ácido hialurónico.

Los términos "sujeto" o "paciente" se usan de manera intercambiable y se refieren a animales, preferiblemente animales de sangre caliente, más preferiblemente vertebrados, aún más preferiblemente mamíferos. Los pacientes preferidos son sujetos equinos, bovinos, porcinos, ovinos, caninos y felinos.

El término "un sujeto que necesita tratamiento" incluye sujetos que se beneficiarían del tratamiento de una afección determinada, particularmente una enfermedad musculoesquelética tal como una enfermedad ósea o una enfermedad articular. Alternativa o adicionalmente, dicha enfermedad puede afectar a tendones y/o ligamentos. Dichos sujetos pueden incluir, sin limitación, aquellos a los que se les ha diagnosticado dicha afección, aquellos propensos a padecer dicha afección y/o aquellos en los que debe prevenirse dicha afección.

El término "tratamiento" abarca tanto el tratamiento terapéutico de una enfermedad o afección ya presente, como también medidas profilácticas o preventivas, cuyo objetivo es prevenir o disminuir las posibilidades de incidencia de una afección no deseada, así como prevenir las posibilidades de progresión de la enfermedad o afección. Los resultados clínicos beneficiosos o deseados pueden incluir, sin limitación, el alivio de uno o más síntomas o uno o más marcadores biológicos, la reducción de la extensión de la enfermedad, un estado estabilizado de la enfermedad, el retraso o la ralentización de la progresión de la enfermedad, la mejora o la atenuación del estado de la enfermedad, y similares. El término "tratamiento" también puede significar prolongar la supervivencia, en comparación con la supervivencia esperada si no se recibe tratamiento.

El término "liberación sostenida", como se usa en el presente documento, se refiere en sentido amplio a la liberación de un compuesto de una composición durante un período de tiempo extendido, prolongado o aumentado, en comparación con la liberación de dicho compuesto de una composición de referencia, tal como una composición conocida en la técnica anterior. Como se usa en el presente documento, la liberación sostenida se refiere a la liberación prolongada de uno o más de los compuestos de la composición, concretamente del plasma de mamífero o de uno o más ingredientes farmacéuticos activos adicionales. Por ejemplo, se sabe de la técnica anterior que la semivida del ácido hialurónico de alto peso molecular en la articulación de la rodilla es de aproximadamente 10 a 15 horas. La liberación sostenida, como se usa en el presente documento, se refiere así a la liberación extendida de ácido hialurónico de la presente composición, por ejemplo, la liberación durante uno o más días, tal como durante 2 días, 3 días, 4 días, 5 días, 6 días, o durante una o más semanas, tal como durante 1,5 semanas, 2 semanas, 3 semanas, o durante uno o más meses. Por tanto, este término también puede abarcar específicamente la liberación extendida, la liberación retrasada o la liberación controlada.

El término "compuesto farmacéutico" se refiere en sentido amplio a un compuesto, sustancia o componente que, cuando se proporciona en una cantidad eficaz, logra un resultado o resultados terapéuticos y/o profilácticos deseados. Normalmente, un ingrediente farmacéutico activo puede lograr dicho o dichos resultados a través de la interacción con células u organismos vivos y/o su modulación. El término "compuesto farmacéutico" también abarca cualquier sal, éster, N-óxido o profármaco farmacológicamente activo del compuesto o sustancia del título.

El término "administración local" como se usa en el presente documento se refiere a una administración por vía parenteral en o en las proximidades de un sitio específico dentro del cuerpo.

A menos que se defina lo contrario, todos los términos utilizados para describir la invención, incluidos los términos técnicos y científicos, tienen el significado comúnmente entendido por un experto en la técnica a la que pertenece esta invención. A modo de orientación adicional, se incluyen definiciones de los términos utilizados en la descripción para apreciar mejor las enseñanzas de la presente invención. Los términos o definiciones utilizados en el presente documento se proporcionan únicamente para ayudar a comprender la invención.

La referencia a lo largo de esta especificación a "una realización" significa que una particularidad, estructura o característica concreta descrita en relación con la realización está incluida en al menos una realización de la presente invención. Por tanto, la aparición de la expresión "en una realización" en varios lugares a lo largo de esta especificación no se refiere siempre necesariamente a la misma realización, pero puede hacerlo. Además, las particularidades, estructuras o características concretas pueden combinarse de cualquier manera adecuada en una o más realizaciones, como resultará evidente para un experto en la técnica a partir de esta descripción. Además, si bien algunas realizaciones descritas en el presente documento incluyen algunas, pero no otras de las particularidades incluidas en otras realizaciones, las combinaciones de particularidades de diferentes realizaciones deben estar dentro del alcance de la invención y forman diferentes realizaciones, como lo entenderán los expertos en la técnica. Por ejemplo, en las siguientes reivindicaciones, cualquiera de las realizaciones reivindicadas puede utilizarse en cualquier combinación.

Descripción detallada de la invención

La presente invención se refiere a un método para la preparación de una composición formadora de gel. La preparación de una composición formadora de gel es en general un proceso delicado en el que la calidad, la cantidad y la actividad de cada uno de los compuestos dentro de la composición son cruciales. El método de la presente invención es ventajoso ya que la gelificación de la composición formadora de gel está controlada, se produce de manera estable y permite la administración por vía parenteral.

En un primer aspecto, se proporciona un método para la preparación de una composición formadora de gel para administración por vía parenteral, en donde dicho método comprende la etapa de mezclado de una mezcla de plasma procedente de mamíferos, que comprende lípidos y/o fosfolípidos, y ácido hialurónico o una sal o éster del mismo con una solución de calcio, en donde la concentración de calcio en la composición formadora de gel resultante está entre 0,2 y 1,4 mg/ml y la concentración del ácido hialurónico o una sal o éster del mismo en dicha composición formadora de gel está entre 0,10 y 200 mg/ml.

En una realización, la mezcla del plasma procedente de mamíferos y ácido hialurónico o una sal o éster del mismo es una mezcla preparada previamente. En otra realización, la mezcla del plasma procedente de mamíferos y ácido hialurónico o una sal o éster del mismo puede prepararse antes de la etapa de mezclado de dicha solución de calcio. La solución de calcio se le añade a dicha mezcla. Se ha descubierto que la secuencia de etapas ayuda a la gelificación uniforme y estable de dicha composición formadora de gel. Una gelificación gradual y controlada es una necesidad absoluta, considerando que dicha composición tiene como finalidad ser administrada por vía parenteral. Además, la concentración total de dicho calcio en la composición formadora de gel debe estar entre 0,2 y 1,4 mg/ml para obtener el efecto deseado.

En una realización de la composición formadora de gel, dicha composición comprende aproximadamente del 50 al 99% en peso de plasma, más preferiblemente aproximadamente del 60 al 99% en peso, más preferiblemente aproximadamente del 70 al 99% en peso, más preferiblemente aproximadamente del 80 al 99% en peso, más preferiblemente aproximadamente del 90 al 99% en peso, más preferiblemente aproximadamente el 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% en peso de plasma.

En una realización, un componente principal de la composición es plasma procedente de mamíferos.

En una realización preferida de la invención, dicho plasma procede de mamíferos, más preferiblemente procede de sangre equina, bovina, porcina, ovina, canina o felina.

Preferiblemente, el plasma puede ser plasma de mamíferos, de modo que la composición formadora de gel que comprende plasma de mamíferos es particularmente adecuada para administración a sujetos mamíferos. Preferiblemente el plasma es alogénico. El proceso de extracción de plasma alogénico está bien establecido y muy estandarizado con respecto al uso de anticoagulantes, técnicas de separación y procesamiento, fuerza centrífuga, temperatura y tiempo, lo que se traduce en una cantidad muy predecible de células y componentes sólidos. Preferiblemente el plasma es plasma alogénico equino, bovino, porcino, ovino, canino o felino.

En una realización, el plasma puede incluir plasma centrifugado o de aféresis. El plasma de mamíferos puede ser plasma fresco congelado. Preferiblemente, el plasma de mamíferos de la presente invención es plasma fresco de aféresis congelado.

En una realización, dicho plasma es un plasma no tratado con disolvente/detergente.

El plasma procedente de mamíferos incluye plasma extraído de donantes únicos o múltiples de mamíferos tales como equinos, bovinos, porcinos, ovinos, caninos o felinos, en bolsas de plástico o botellas de vidrio y separado de las células sanguíneas por los medios descritos anteriormente. Después de la extracción, el plasma procedente de mamíferos se almacena a -18 °C o menos, preferiblemente por debajo de -18 °C.

El plasma comprende lípidos y/o fosfolípidos, que pueden incluir, pero no se limitan a uno o más esfingolípidos, fosfatidilserinas, fosfatidilcolinas, fosfatidiletanolaminas, colesterol, ésteres de colesterol, triglicéridos, diacilglicéridos, lecitina, liposomas, lípidos plasmáticos menores y combinaciones de los mismos. Los lípidos y/o fosfolípidos plasmáticos favorecen la formación de complejos con factores de coagulación sanguínea, lo que desencadena la cascada de coagulación de la sangre.

Los lípidos y/o fosfolípidos pueden añadirse externamente a la composición. En la presente invención, dicho plasma procedente de mamíferos también será una fuente de lípidos y/o fosfolípidos.

Hay diversos métodos analíticos disponibles para la determinación de las concentraciones y características de los lípidos y/o fosfolípidos plasmáticos. La cromatografía es un procedimiento analítico para separar y analizar los lípidos. La cromatografía en capa fina (CCF), la cromatografía de gases (CG) y la cromatografía líquida de alta presión (HPLC) se utilizan a menudo para la evaluación de los lípidos y/o fosfolípidos plasmáticos. La espectrometría es también una técnica conocida para evaluar los lípidos y/o fosfolípidos plasmáticos en el plasma, al igual que la espectrometría de masas o la espectroscopia de resonancia magnética nuclear (RMN). El ensayo de inmunoadsorción enzimática (ELISA) también es una técnica para evaluar los lípidos y/o los fosfolípidos plasmáticos en el plasma.

Los lípidos y/o fosfolípidos plasmáticos se cuantifican preferiblemente mediante la técnica de HPLC. Se establecen límites para la cantidad de lípidos plasmáticos en del plasma de la presente invención, lo que hace posible la reproducibilidad de la calidad del plasma.

En la presente invención, dicho plasma comprende lípidos y/o fosfolípidos. Preferiblemente, el plasma comprende lípidos y/o fosfolípidos, en donde dicha concentración total de lípidos y/o fosfolípidos está entre 0,2 y 7 mg/ml. Más preferiblemente, la concentración total de lípidos y/o fosfolípidos en el plasma está entre 0,4 y 6 mg/ml, más preferiblemente entre 0,5 y 5 mg/ml. Sin querer ceñirse a ninguna teoría, se entiende que dichos lípidos y/o fosfolípidos tienen actividades procoagulantes en el plasma y permiten al menos parcialmente una mejor gelificación de la composición formadora de gel.

En una realización adicional, dicho plasma comprende lípidos plasmáticos menores. Sin querer ceñirse a ninguna teoría, se entiende que dichos lípidos plasmáticos menores tienen actividades procoagulantes en el plasma y permiten al menos parcialmente una mejor gelificación de la composición formadora de gel.

En una realización preferida de la invención, dichos lípidos plasmáticos menores se eligen preferiblemente del grupo formado por palmitoiletanolamida (PEA), estearoiletanolamida (SEA) y araquidonoiletanolamida (AEA).

En una realización, la concentración total de lípidos plasmáticos menores en el plasma de mamíferos está entre 5 y 50 nmol/l, más preferiblemente entre 6 y 30 nmol/l.

En una realización más preferida de la invención, dicha composición comprende PEA, SEA y AEA, en donde cada uno de los lípidos está presente en una concentración de entre 0,2 y 14 nmol/l. En una realización adicional, cada lípido plasmático menor está presente en una concentración de entre 0,5 y 12 nmol/l, más preferiblemente entre 0,8 y 8,5 nmol/l.

La actividad de gelificación del plasma puede medirse evaluando parámetros de coagulación, preferiblemente TTP y TTPa, y/o factores de coagulación, preferiblemente el factor VIII y el fibrinógeno.

En una realización, el plasma utilizado tiene una actividad del factor antihemofílico (factor VIII) superior al 75%. Los ensayos para cuantificar la actividad del factor VIII se conocen en la técnica y pueden incluir ensayos basados en coágulos, ensayos cromogénicos o inmunoensayos tales como ELISA. En una realización, dicha actividad del factor antihemofílico (factor VIII) se mide por un método de detección de coágulos mediante un sistema de detección basado en la viscosidad como el analizador semiautomático de laboratorio STart® o el automático STA R Max® 2, ambos de Stago (Cupaiolo R., Govaerts D., Blauwaert M., Cauchie P.,Performance evaluation of a new Stago® automated haemostasis analyser: The STA R Max® 2. Int. J. Lab. Hematol.2019; 41(6): 731-737. doi: 10.1111/ijlh.13100). En resumen, dicho método utiliza el aumento de la viscosidad del plasma que se analiza para la detección de coágulos. El cambio de la viscosidad se mide monitorizando la amplitud de oscilación de una bola de acero en una cubeta especialmente diseñada. El movimiento de la bola de acero está impulsado por dos bobinas activadoras que funcionan alternativamente para inducir y mantener una oscilación natural. Cuando se añade el reactivo inicial, la detección y el cronómetro se ponen en marcha de manera inmediata y simultánea. Al oscilar la bola hacia la izquierda y la derecha, se mide la amplitud del movimiento. El cronómetro mide el tiempo de coagulación de la muestra. La amplitud se monitoriza durante todo el proceso de coagulación. La amplitud permanece constante mientras no haya coágulos. A medida que se desarrollan los coágulos, la viscosidad aumenta y la amplitud disminuye. Para determinar el tiempo de coagulación se utiliza un algoritmo.

En una realización, el plasma utilizado tiene una concentración de fibrinógeno (factor I) que oscila entre 0,25 y 3 g/l. En una realización, el plasma utilizado tiene una actividad del tiempo de tromboplastina parcial activado (TTPa) que varía entre 12 y 65 segundos y/o una actividad del tiempo de tromboplastina parcial (TTP) que vería entre 5 y 17 segundos. El método adecuado para medir el TTP(a) es un método de detección de coágulos mediante un sistema de detección basado en la viscosidad como el analizador semiautomático de laboratorio STart® de Stago, descrito anteriormente. En una realización preferida adicional, dicho plasma reúne todas las particularidades anteriores. Los ensayos para cuantificar el factor VIII, la concentración de fibrinógeno, la actividad TTPa y la actividad TTP son conocidos por el experto.

El fibrinógeno circula como glucoproteína plasmática soluble en el plasma. El fibrinógeno participa en la formación de fibrina y promueve la coagulación de la sangre formando puentes y activando las plaquetas sanguíneas a través de su unión.

Preferiblemente, el plasma de mamífero de la presente invención tiene una concentración total de fibrinógeno de entre 0,25 y 3 g/l, más preferiblemente de entre 0,3 y 2,5 g/l, más preferiblemente de entre 0,4 y 2,1 g/l. Los documentos de la técnica anterior prefieren un plasma desfibrinado; sin embargo, la presente invención requiere plasma de mamífero con una concentración mínima de fibrinógeno de 0,25 g/l.

La concentración de proteína total del plasma de mamífero de la presente invención está preferiblemente entre 10 y 100 g/l, preferiblemente entre 15 y 85 g/l, más preferiblemente entre 20 y 80 g/l. Sin querer ceñirse a una teoría, se cree que los niveles de proteína por encima de esta concentración pueden dar lugar a problemas de obstrucción cuando se administran a un sujeto.

En una realización más preferida, dicho plasma tiene una concentración de glóbulos blancos (GB) de menos de 200 millones/l, preferiblemente una concentración de GB de entre 3 y 145 millones/l, más preferiblemente de entre 5 y 85 millones/l, deseablemente entre 10 y 50 millones/l.

El plasma procedente de mamíferos comprende glóbulos blancos, también denominados leucocitos, en una cantidad que no interfiere con la gelificación de la composición.

En una realización particularmente preferida, dicho plasma tiene una concentración de plaquetas sanguíneas (PS) de menos de 50.000 millones/l, preferiblemente una concentración de PS de entre 1.000 y 35.000 millones/l, más preferiblemente una concentración de PS de entre 2.000 y 20.000 millones/l.

Las plaquetas sanguíneas, también denominadas trombocitos, ayudan en el proceso de coagulación de la sangre. Además, las plaquetas contienen cientos de proteínas, conocidas como factores de crecimiento. Estos factores de crecimiento procedentes de las plaquetas son útiles en medicina regenerativa, en particular para estimular la reparación de defectos en huesos, cartílagos, tendones o ligamentos o para reemplazar huesos, cartílagos, tendones o ligamentos dañados. La concentración de plaquetas es menor que en la sangre completa. Aunque otros documentos de la técnica anterior prefieren el uso de plasma rico en plaquetas para mejorar la cicatrización de heridas, la concentración de plaquetas es específicamente menor.

El método de la presente invención comprende la etapa de mezclado de una mezcla de plasma procedente de mamíferos y ácido hialurónico (un glucosaminoglucano) o una sal o éster del mismo con una solución de calcio.

En una realización, la composición comprende uno o más glucosaminoglucanos adicionales. En ciertas realizaciones, el glucosaminoglucano adicional puede seleccionarse del grupo que consta de un proteoglucano y derivados del mismo, un sulfato de condroitina, un sulfato de queratán, un quitosano y derivados del mismo, una quitina y derivados de la misma; o mezclas de los anteriores.

El ácido hialurónico desempeña un papel importante en el organismo biológico, en primer lugar, como soporte mecánico de las células de muchos tejidos, tales como la piel, los tendones, los músculos y los cartílagos y, por tanto, es el componente principal de la matriz extracelular. Pero el ácido hialurónico también desempeña otras funciones en procesos biológicos, tales como la hidratación de los tejidos, la lubricación de las partes móviles, la migración celular, la función y la diferenciación celular.

En la presente composición, la presencia de ácido hialurónico ayudará en procesos biológicos tales como la hidratación de los tejidos, la organización de los proteoglucanos, la diferenciación celular, la proliferación celular y la angiogénesis. Los derivados del ácido hialurónico mantienen todas las propiedades de dicho glucosaminoglucano, con la ventaja de poder procesarse de diversas formas y tener tiempos de solubilidad y degradación que varían según el tipo y porcentaje de derivación. Los derivados del ácido hialurónico pueden ser una sal del ácido hialurónico, un éster del ácido hialurónico con un alcohol de la serie alifática, heterocíclica o cicloalifática, o una forma sulfatada del ácido hialurónico. Sin limitación, los derivados adecuados pueden ser sales del ácido hialurónico tales como preferiblemente hialuronato de sodio.

En una realización preferida de la presente invención, dicho ácido hialurónico o una sal o éster del mismo tiene un peso molecular inferior a 1.800 kg/mol (1.800 kDa), más preferiblemente de entre 700 y 1.600 kg/mol (700 y 1.600 kDa), lo más preferiblemente de entre 700 y 1.000 kg/mol (700 y 1.000 kDa).

Preferiblemente, el ácido hialurónico o una sal o éster del mismo tiene un peso molecular alto. Por un peso molecular alto del ácido hialurónico o una sal o éster debe entenderse un peso molecular de entre 700 y 1.000 kg/mol (700 y 1.000 kDa). Por ejemplo, inyectar ácido hialurónico de peso molecular alto es eficaz para restaurar la integridad mecánica de las articulaciones afectadas por la osteoartritis. Con preferencia particular, el ácido hialurónico o sal o éster del mismo tiene una distribución de tamaños estrecha. Se ha observado que los intervalos de peso molecular como se describen en la realización garantizan una afinidad adecuada por los receptores del ácido hialurónico y una mejor estimulación de la biosíntesis del ácido hialurónico. Deseablemente, el ácido hialurónico o una sal o éster del mismo tiene un peso molecular alto y una distribución de tamaños estrecha. Además, el ácido hialurónico o una sal o éster del mismo con un peso molecular de entre 700 y 1.000 kg/mol (700 y 1.000kDa) mejora la viabilidad celular de las células circundantes una vez implantado o inyectado en el tejido que necesita tratamiento. Asimismo, se ha descubierto que el ácido hialurónico de entre 700 y 1.000 kg/mol (700 y 1.000 kDa) hace posible la calidad y reproducibilidad de los lotes de producto preparados.

El ácido hialurónico o una sal o éster del mismo de peso molecular alto presenta mejores propiedades viscoelásticas que el de peso molecular bajo. El ácido hialurónico o una sal o éster del mismo con un peso molecular alto según la presente realización mezclado con el plasma de la presente invención presenta propiedades viscoelásticas aún mejores debido a la composición más bien nativa del plasma. Estas excelentes propiedades viscoelásticas son de considerable interés, especialmente teniendo en cuenta la necesidad de absorber considerables variaciones de presión como las que se producenin vivo, por ejemplo, en las articulaciones.

Preferiblemente, el ácido hialurónico o una sal o éster del mismo es un ácido hialurónico de cadena lineal no ramificada.

El ácido hialurónico se produce de manera natural y no tiene especificidad de especie ni de órgano, incluso cuando se implanta o se inyecta en un cuerpo vivo. El ácido hialurónico muestra excelente biocompatibilidad. Por tanto, el ácido hialurónico podría ser de origen animal o biofermentativo. Una fuente bien conocida de ácido hialurónico en la técnica es la cresta de gallo. Preferiblemente el ácido hialurónico es de origen biofermentativo.

En la presente invención, la composición formadora de gel comprende ácido hialurónico o una sal o éster del mismo en una concentración que varía de aproximadamente 0,10 a 200 mg/ml, preferiblemente de aproximadamente 1 a 100 mg/ml, más preferiblemente de aproximadamente 2 a 50 mg/ml, más preferiblemente de aproximadamente 4 a 20 mg/ml.

En una realización, el ácido hialurónico o una sal o éster del mismo está preferiblemente esterilizado. El ácido hialurónico puede esterilizarse con vapor o por filtración. Preferiblemente, el ácido hialurónico se esteriliza por filtración, ya que la esterilización con vapor puede afectar el intervalo de distribución de pesos moleculares de las fibras de ácido hialurónico. Preferiblemente, el ácido hialurónico se solubiliza y se esteriliza por filtración.

Preferiblemente, el plasma de mamíferos se esteriliza a través de un filtro estéril.

La esterilización por filtración del plasma de mamíferos y el ácido hialurónico tiene efectos beneficiosos sobre la calidad y la reproducibilidad de la preparación de la composición formadora de gel.

Se prepara la mezcla de al menos el plasma según una de las realizaciones descritas anteriormente y ácido hialurónico. El plasma procedente de mamíferos y el ácido hialurónico o una sal o éster del mismo se mezclan, para dar lugar a una mezcla de plasma y ácido hialurónico.

En una realización, dicha mezcla se criodeseca. Como resultado, se obtiene un producto liofilizado. La criodesecación también puede conocerse en la técnica como liofilización. Los siguientes términos "producto liofilizado” y "mezcla criodesecada" se usan de manera intercambiable en el presente documento.

En una realización preferida, la mezcla de plasma y ácido hialurónico se diluye antes de la criodesecación. Preferiblemente dicha mezcla se solubiliza al menos 4 veces, preferiblemente al menos 3 veces, más preferiblemente al menos 2 veces, deseablemente 2 veces en solución acuosa para reducir la viscosidad del producto y facilitar las etapas de fabricación posteriores.

En otra realización, dicha mezcla de plasma y ácido hialurónico se criodeseca antes de la adición de dicha solución de calcio.

La criodesecación de dicha mezcla aumenta la vida útil. La criodesecación de dicha mezcla proporciona un producto liofilizado y estable durante meses. El producto liofilizado puede almacenarse, enviarse y reconstituirse fácilmente para inyección. El producto liofilizado es estable a una temperatura de entre 15 y 25 °C. Tener un producto liofilizado con estabilidad a temperatura ambiente es beneficioso para el médico. El producto puede transportarse o manipularse fácilmente, sin deterioro sustancial de la calidad del producto. No es necesario ningún recipiente de refrigeración especial.

En una realización preferida, la solución de calcio se añade después de haber criodesecado la mezcla de plasma y ácido hialurónico. La solución de calcio se añade preferiblemente después de haber criodesecado la mezcla de plasma y ácido hialurónico y después de enriquecer posiblemente la mezcla con uno o más compuestos farmacéuticos.

Posteriormente, una vez que la mezcla de plasma y ácido hialurónico se ha preparado y criodesecado para obtener dicho producto liofilizado, se añade la solución de calcio, de manera que la concentración final de calcio en la composición formadora de gel esté entre 0,2 y 1,4 mg/ml. Preferiblemente, la concentración total de dicho calcio en dicha composición está entre 0,4 y 1,2 mg/ml, más preferiblemente entre 0,6 y 1,0 mg/ml, más preferiblemente entre 0,65 y 0,95 mg/ml, más preferiblemente entre 0,7 y 0,9 mg/ml, más preferiblemente entre 0,75 y 0,85 mg/ml.

La solución de calcio de la presente invención hace posible la gelificación de la composición formadora de gel. Dicha fuente de calcio puede seleccionarse de entre una cantidad adecuada de sales de calcio farmacéuticamente aceptables, preferiblemente sales de calcio solubles. Tales sales de Ca2+ pueden estar formadas con ácidos inorgánicos u orgánicos. Los ejemplos de tales sales incluyen cloruro de calcio (CaCL), glicerofosfato de calcio, fosfato de calcio, hidrogenocarbonato de calcio, sulfato de calcio, lactato de calcio, gluconato de calcio, ascorbato de calcio y mezclas de los mismos. Se prefiere particularmente cloruro de calcio, que presenta ventajosamente buena solubilidad y se tolera bien en soluciones inyectables.

En la presente invención, la fuente de calcio es una solución de calcio. Preferiblemente, la solución de calcio se prepara añadiendo una fuente de calcio, preferiblemente cloruro de calcio, a una solución ácida, tal como, por ejemplo, una solución de cloruro de hidrógeno. Preferiblemente, el pH final de la solución ácida en la composición está entre 1 y 4, más preferiblemente entre 1,5 y 2,5.

Dichas soluciones ácidas son preferiblemente ácidos farmacéuticamente aceptables. Los ácidos farmacéuticamente aceptables pueden incluir, pero no se limitan a (i) un ácido inorgánico tal como ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido yodhídrico y similares, (ii) un ácido orgánico mono, di o tricarboxílico (por ejemplo, ácido fórmico, ácido acético, ácido adípico, ácido algínico, ácido cítrico, ácido ascórbico, ácido aspártico, ácido benzoico, ácido butírico, ácido alcanfórico, ácido glucónico, ácido glucurónico, ácido galacturónico, ácido glutámico, ácido heptanoico, ácido hexanoico, ácido fumárico, ácido láctico, ácido lactobiónico, ácido malónico, ácido maleico, ácido nicotínico, ácido oxálico, ácido pamoico, ácido pectínico, ácido 3-fenilpropiónico, ácido pícrico, ácido piválico, ácido propiónico, ácido succínico, ácido tartárico, ácido undecanoico y similares) o (iii) un ácido sulfónico (por ejemplo, ácido bencenosulfónico, bisulfato de sodio, ácido sulfúrico, ácido alcanforsulfónico, ácido dodecilsulfónico, ácido etanosulfónico, ácido metanosulfónico, ácido isetiónico, ácido naftalenosulfónico, ácido p-toluenosulfónico y similares).

En una realización de la invención dicha solución de calcio es una solución de cloruro de calcio. En una realización particularmente preferida de la invención, dicha solución de cloruro de calcio tiene un pH ácido, preferiblemente un pH de entre 1 y 4. Dicha solución de cloruro de calcio se mezcla preferiblemente con la mezcla criodesecada para disolver la mezcla antes de la administración. Dicha solución de cloruro de calcio hace posible la formación de un gel con altas propiedades cohesivas, lo que permite una integración óptima de la composición formadora de gel en el sitio de la lesión. Una vez mezclado, el pH de la composición es fisiológico, preferiblemente un pH de entre 5 y 8, más preferiblemente un pH de entre 6 y 7,8

La composición formadora de gel puede comprender uno o más compuestos farmacéuticos además del plasma de mamíferos y ácido hialurónico o una sal o éster del mismo. En otras realizaciones, el plasma y el glucosaminoglucano pueden ser los únicos compuestos de la composición; por tanto, en tales realizaciones la composición puede constar de o consistir esencialmente en plasma y glucosaminoglucano.

Dependiendo de la naturaleza del compuesto farmacéutico, dicho compuesto puede añadirse en diferentes momentos durante la preparación de la composición formadora de gel. En una realización, dichos compuestos farmacéuticos se mezclan con la mezcla de plasma y ácido hialurónico. En una realización, dichos compuestos farmacéuticos se mezclan con la mezcla de plasma y ácido hialurónico antes de criodesecar dicha mezcla. En una realización, dichos compuestos farmacéuticos se mezclan con la mezcla criodesecada de plasma y ácido hialurónico. En una realización preferida, dichos compuestos farmacéuticos se mezclan con la mezcla de plasma y ácido hialurónico, criodesecada o no, previamente a la adición de la solución de calcio.

En determinadas realizaciones, la composición puede comprender además ventajosamente uno o más compuestos farmacéuticos. La aplicabilidad de la presente invención no se limita a ningún compuesto farmacéutico o clase de compuesto farmacéutico. El compuesto farmacéutico puede ser farmacológicamente activo en sí mismo o puede convertirse en una especie farmacológicamente activa mediante un proceso químico o enzimático en el cuerpo, es decir, el compuesto farmacéutico puede ser un profármaco. La presente composición formadora de gel puede ser particularmente útil para compuestos farmacéuticos poco estables. Algunos ejemplos ilustrativos no limitantes de compuestos farmacéuticos poco estables incluyen péptidos y proteínas tales como factores de crecimiento, ingredientes activos de tipo peptídico, anticuerpos y vacunas, ARN interferente pequeño (ARNip), ADN, hormonas, etc.

Además, como componente farmacológico puede incluirse una combinación de dos o más compuestos farmacéuticos o combinaciones de dosis. En este caso, la liberación de cada compuesto puede ser idéntica o diferente como, por ejemplo, en el caso de una combinación de dos compuestos en los que el primero se presenta en una forma de liberación inmediata y el segundo en una forma de liberación controlada. De manera similar, también puede obtenerse una combinación de formas de liberación inmediata y liberación controlada para el mismo compuesto, con el fin de proporcionar un efecto rápido y sostenido.

En una realización de la presente invención, dicha composición formadora de gel comprende además uno o más compuestos farmacéuticos, en donde dichos compuestos se seleccionan del grupo que consta de un ingrediente farmacéutico activo, un agente antibiótico, una composición celular, una molécula orgánica pequeña, una proteína o un péptido.

En una realización preferida, dicho ingrediente farmacéutico activo es un agonista del receptor adrenérgico a2, preferiblemente clonidina.

En una realización específica, el agonista del receptor adrenérgico a2 puede seleccionarse del grupo que consta de clonidina y derivados de la misma, tales como 2,6-dimetilclonidina, 4-azidoclonidina, 4-carboxiclonidina-metilo 3,5-diclorotirosina, 4-hidroxiclonidina, 4-yodoclonidina, alinidina, apraclonidina, cloroetilclonidina, 4-isotiocianato de clonidina, 4-metilisotiocianato de clonidina, receptor de clonidina, sustancia desplazadora de clonidina, hidroxifenacetilaminoclonidina, W,W'-dimetilclonidina, p-aminoclonidina y tiamenidina; imidazolidinas, tales como imidazolinas, impromidina, detomidina, medetomidina, dexmedetomidina, levamisol, losartán, lofexidina, miconazol, nafazolina, niridazol, nitroimidazoles, ondansetrón, oximetazolina, fentolamina, tetramisol, tiamazol, tizanidina, tolazolina, trimetafán; imidazoles, tales como 4-(3-butoxi-4-metoxibencil)imidazolidin-2-ona, ácido urocánico, aminoimidazolcarboxamida, antazolina, biotina, disulfuro de bis(4-metil-1-homopiperaziniltiocarbonilo), carbimazol, cimetidina, clotrimazol, creatinina, dacarbazina, dexmedetomidina, econazol, enoximona, etimizol, etomidato, fadrozol, fluspirileno, idazoxán, mivazerol; guanidinas, tales como agmatina, betanidina, biguanidas, cimetidina, creatina, gabexato, guanetidina, sulfato de guanetidina, guanclofina, guanfacina, guanidina, guanoxabenzo, impromidina, yodo-3-bencilguanidina, metilguanidina, mitoguazona, nitrosoguanidinas, pinacidil, robenidina, sulfaguanidina, zanamivir; ametilnorefedrina, azepexol, 5-bromo-6-(2-imidazolidin-2-ilamino)quinoxalina, fumarato de formoterol, indoramina, 6-alil-2-amino-5,6,7,8-tetrahidro-4H-tiazolo[4,5-d]azepina diHCl, nicergolina, rilmenidina, W-(2-bromo-6-fluorofenil)-4,5-dihidro-1 H-imidazol-2-amina y xilazina.

La clonidina es un agonista del receptor adrenérgico a2 de acción central. Generalmente se utiliza como antihipertensivo. La clonidina también se conoce comúnmente como 2,6-dicloro-W-2-imidazolidinilidenbencenamina (C9H9Cl2N3). La concentración de clonidina en la composición formadora de gel está preferiblemente entre 0,01 y 0,5 mg/ml, más preferiblemente entre 0,03 y 0,3 mg/ml, más preferiblemente entre 0,05 y 0,2 mg/ml. Dichas bajas concentraciones de clonidina o un derivado de la misma en la composición formadora de gel son eficaces en el tejido tratado. Estas bajas concentraciones de clonidina son eficaces en el tejido lesionado, ya que el gel forma una matriz ideal para que la clonidina permanezca activa y se libere lentamente en el tejido lesionado.

En una realización preferida, dicha composición celular comprende uno o más agentes antibióticos. En el contexto de la presente invención, un agente antibiótico es una sustancia que tiene la capacidad de inhibir el crecimiento de bacterias y otros microorganismos o de destruirlos. En una realización más preferida, el agente antibiótico se selecciona de las clases que constan de antibióticos betalactámicos, aminoglucósidos, antibióticos de tipoansa,antraquinonas, azoles antibióticos, glicopéptidos antibióticos, macrólidos, nucleósidos antibióticos, péptidos antibióticos, polienos antibióticos, poliéteres antibióticos, quinolonas, esteroides antibióticos, sulfonamidas, tetraciclina, ácidos dicarboxílicos, metales antibióticos, agentes oxidantes, sustancias que liberan radicales libres y/u oxígeno activo, agentes antimicrobianos catiónicos, compuestos de amonio cuaternario, biguanidas, triguanidas, bisbiguanidas y análogos y polímeros de los mismos, así como compuestos antibióticos de origen natural. Preferiblemente el agente antibiótico es un aminoglucósido, preferiblemente gentamicina.

En otra realización o realización adicional, dicha composición celular comprende células madre mesenquimatosas, células osteoprogenitoras, osteoblastos, osteocitos, condroblastos y/o condrocitos.

Las células madre mesenquimatosas (CMM) son capaces de experimentar una diferenciación osteogénica o condrogénica. Otras células ya están comprometidas con el linaje osteoblástico o condroblástico. Preferiblemente, las células de la composición celular de la presente invención pueden ser células animales, preferiblemente células de animales de sangre caliente, más preferiblemente células de mamíferos. Las células de mamíferos son preferiblemente de origen equino, bovino, porcino, ovino, canino o felino.

Sin limitación, la composición puede comprender una cantidad de células que varía de aproximadamente 0,05x106 a 5x109 células, preferiblemente de aproximadamente 0,5x106 a 1x109 células, más preferiblemente de aproximadamente 4x106 a 250x106 células.

En una realización, dicha composición celular se añade después de la liofilización de la mezcla de plasma y ácido hialuróni

En otra realización o realización adicional preferida, dicha molécula orgánica pequeña es un componente de un armazón o matriz con propiedades osteoconductoras, preferiblemente partículas de fosfato tricálcico (FTC).

Las matrices osteoconductoras permiten además una liberación sostenida de los compuestos farmacéuticos como, por ejemplo, clonidina, en la composición de la presente invención y favorecen la reparación ósea. La matriz permite la afluencia de células como se analiza anteriormente, para facilitar la formación de hueso y la reparación del sitio de la fractura. Las partículas de fosfato tricálcico son materiales minerales eficaces para proporcionar un armazón o matriz para el crecimiento óseo infiltrante. Preferiblemente, el FTC tiene un diámetro de partícula medio de entre aproximadamente 5 y 200 gm, más normalmente de entre aproximadamente 10 y 100 gm y deseablemente de entre aproximadamente 20 y 60 gm. Los métodos para medir el tamaño de las partículas de FTC son conocidos en la técnica y pueden incluir sedimentometría, centrifugación analítica y diversos tipos de espectrometría. En una realización, dicho tamaño de las partículas de FTC se mide mediante difracción láser. La concentración de FTC en la composición está preferiblemente entre 10 y 200 mg/ml, más preferiblemente entre 30 y 150 mg/ml, más preferiblemente entre 50 y 100 mg/ml. Las matrices osteoconductoras de la presente invención pueden adoptar cualquier forma y son maleables, cohesivas y pueden inyectarse en el sitio específico del tejido o cerca de él.

La composición formadora de gel de la presente invención puede comprender adicionalmente proteínas o (poli)péptidos. Las proteínas, péptidos y polipéptidos biológicamente activos adecuados para administración en la composición de la presente invención incluyen hormonas de crecimiento, factores de crecimiento y otros fragmentos biológicamente activos y derivados de los mismos. Las proteínas preferidas incluyen hormonas de crecimiento equinas, bovinas, porcinas, ovinas, caninas o felinas; y se pretende que abarquen aquellas de origen natural, sintético, recombinante o biosintético. Además, son adecuados para su incorporación en la composición de la invención metales o compuestos metálicos asociados con proteínas, péptidos y polipéptidos biológicamente activos, así como sales de ácidos, derivados y complejos y agentes antihidratantes.

La presente composición puede comprender, además de los compuestos farmacéuticos particularmente especificados en el presente documento, uno o más excipientes farmacéuticos. Los excipientes adecuados dependen de la forma de dosificación y de las identidades de dichos compuestos y pueden ser seleccionados por el experto. Los excipientes farmacéuticos no deben interferir con la actividad del plasma, el ácido hialurónico o los compuestos farmacéuticos.

En una realización, la composición puede comprender además sangre completa o un componente fraccionado de sangre completa. La adición de sangre completa o dicho componente fraccionado, preferiblemente de sangre completa, a la presente composición puede permitir mejorar al menos parcialmente las propiedades regenerativas. La composición que comprende sangre completa o dicho componente fraccionado de la misma comprende ventajosamente factores de crecimiento procedentes de plaquetas útiles en medicina regenerativa, en particular para estimular la reparación de defectos de huesos, cartílagos, tendones o ligamentos o para reemplazar huesos, cartílagos, tendones o ligamentos dañados. Por ejemplo, la sangre completa puede ser alogénica o autóloga con respecto al sujeto que recibe la formulación.

En una realización, la composición está desprovista o sustancialmente desprovista de suero.

En otra realización, la composición puede comprender además una o más sustancias con propiedades osteogénicas, osteoinductoras y/u osteoconductoras. En realizaciones preferidas, dicha sustancia puede seleccionarse del grupo que comprende o consta de un factor de crecimiento fibroblástico (FGF), preferiblemente FGF-2, un factor de crecimiento transformante p (TGFp), preferiblemente TGFp-1, un factor de crecimiento procedente de plaquetas (PDGF), interleucina-8 (IL-8), una proteína morfogenética ósea (BMP), por ejemplo una cualquiera o más de BMP-2, BMP-4, BMP-6 y BMP-7, la hormona paratiroidea (PTH), la proteína relacionada con la hormona paratiroidea (PTHrp) y el factor de células madre (SCF). Por tanto, en ciertas realizaciones, la proteína o el péptido farmacéutico activo puede ser un factor de crecimiento, preferiblemente un factor de crecimiento seleccionado del grupo que consta de un FGF, un TGFp, PDGF, IL-8, una BMP, PTH, PTHrp y SCF, más preferiblemente un factor de crecimiento seleccionado del grupo que consta de FGF-2, TGFp-1, PDGF, IL-8, BMP-2, BMP-4, BMP-6, BMP-7, PTH, PTHrp y SCF.

En otra realización, dicha composición formadora de gel está configurada para administración por vía parenteral, preferiblemente para administración por vía intraósea, periósea, intraarticular, periarticular, o para administración por vía intratendinosa, peritendinosa, intraligamentosa o periligamentosa.

La composición según la presente invención está configurada preferiblemente para administración por vía parenteral. Por ejemplo, la composición puede estar en forma de una solución acuosa parenteralmente aceptable, sin pirógenos y con un pH, isotonicidad y estabilidad adecuados. La administración por vía parenteral tiene la ventaja de que puede realizarse una inyección local y el sitio de la lesión puede seleccionarse y tratarse específicamente. Dicho tratamiento específico mediante la composición de la presente invención es seguro y eficiente y no conlleva mediciones de funcionalidad complejas como los medicamentos para administración por vía oral. Dependiendo del sitio de la lesión, se prefieren diferentes localizaciones de las vías de administración. El experto en la materia está familiarizado con estas vías de administración. La composición formadora de gel se administra preferiblemente por inyección, mediante una aguja y una jeringa.

En una realización particular, la composición está configurada para administración por vía intraósea o periósea. La administración por vía intraósea generalmente se refiere a un método mediante el cual se administra un tratamiento, directa o indirectamente, en el hueso (trabecular o cortical). La administración por vía periósea generalmente se refiere a un método mediante el cual se administra un tratamiento en los alrededores de un hueso (especialmente alrededor del sitio de fractura/daño). En otra realización particular, la composición está configurada para administración por vía intraarticular o periarticular. La administración por vía intraarticular generalmente se refiere a un método mediante el cual se administra un tratamiento, directa o indirectamente, en la cápsula sinovial de una articulación. La administración periarticular generalmente se refiere a un método mediante el cual se administra un tratamiento en los alrededores de la cápsula sinovial de una articulación y/o el hueso subcondral. En una realización adicional, la composición está configurada para administración por vía intratendinosa o peritendinosa. En otra realización adicional, la composición está configurada para administración por vía intraligamentosa o periligamentosa.

Un segundo aspecto de la presente invención se refiere a una composición obtenida por el método de la presente invención. Ventajosamente, dicha composición gelificará dentro de los 30 minutos posteriores a la adición de dicha solución de calcio.

La composición formadora de gel cambia de sustancia líquida a sustancia gelatinosa en 30 minutos. Este margen de tiempo es suficiente para que un médico manipule la composición formadora de gel y la administre al sitio de la lesión de forma segura. Preferiblemente, la composición gelifica dentro de los 25 minutos posteriores a la adición de dicha solución de calcio, más preferiblemente la composición gelifica dentro de los 20 minutos posteriores a la adición de dicha solución de calcio. De este modo, el médico aún puede manipular la composición formadora de gel mientras todavía está líquida y la composición llega al sitio de la lesión en un estado casi gelatinoso, lo que hace posible una administración específica y una liberación sostenida de las sustancias biológicas incorporadas en la composición.

Por tanto, en una realización de la presente invención, la solución de calcio sólo se añade a la mezcla de plasma y ácido hialurónico justo antes de la administración de la composición final. De este modo puede lograrse una administración controlada de la composición.

En una realización, la composición de la presente invención es para uso en el tratamiento de enfermedades musculoesqueléticas, preferiblemente en donde la enfermedad musculoesquelética es una enfermedad ósea o una enfermedad articular.

Alternativa o adicionalmente, dicha enfermedad musculoesquelética puede afectar a tendones y/o ligamentos. También se pretende el uso de la composición formadora de gel como se describe anteriormente para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de una enfermedad musculoesquelética, preferiblemente una enfermedad ósea o una enfermedad articular. Alternativa o adicionalmente, dicha enfermedad musculoesquelética puede afectar a tendones y/o ligamentos. Además, se pretende un método para tratar una enfermedad musculoesquelética, preferiblemente una enfermedad ósea o una enfermedad articular (alternativa o adicionalmente, dicha enfermedad puede afectar tendones y/o ligamentos), en un sujeto que necesita dicho tratamiento, que comprende administrar a dicho sujeto una cantidad terapéutica o profilácticamente eficaz de la composición formadora de gel como se describe anteriormente.

En una realización, la presente invención se refiere a una composición o un kit para uso en el tratamiento de la osteoartritis. La osteoartritis es una inflamación de la articulación que empeora progresivamente y está causada por el deterioro del cartílago. En una articulación sana, el cartílago actúa como un cojín para permitir que la articulación se mueva suavemente en todo su margen de movimiento. En los casos de osteoartritis, este cojín de cartílago comienza a deteriorarse a causa de factores como la edad, lesiones, estrés repetitivo, enfermedad o predisposición genética. La pérdida de este cojín protector provoca dolor, inflamación, disminución del margen de movimiento y desarrollo de espolones óseos. El diagnóstico se basa normalmente en signos y síntomas, y se utilizan imágenes médicas y otras pruebas para respaldar o descartar otros problemas.

En una realización, la presente invención se refiere a una composición o un kit para usar en la prevención de la rotura del ligamento cruzado anterior (LCA). El ligamento cruzado anterior es uno de los estabilizadores más importantes dentro de la articulación de la rodilla, la articulación media de la pata trasera. La rotura del ligamento cruzado anterior es una de las causas más comunes de cojera y dolor de las extremidades traseras, así como de la posterior artritis de rodilla. Si bien los signos clínicos asociados con la ruptura del LCA varían, la afección causa invariablemente disfunción y dolor de las extremidades traseras. Una minoría de las roturas del LCA se debe a un traumatismo, mientras que la degeneración progresiva del ligamento se ha atribuido a una diversidad de factores que pueden clasificarse en sentido amplio como genéticos, conformacionales, ambientales, de origen inmunitario e inflamatorios. El diagnóstico de desgarros completos del LCA se logra fácilmente mediante una combinación de observaciones de la marcha, hallazgos del examen físico y radiografías (rayos X). Por el contrario, los desgarros parciales del LCA pueden ser más difíciles de diagnosticar. El uso de la presente composición o kit para tratar y/o prevenir la rotura parcial del ligamento cruzado anterior en un sujeto tal como un animal, reduce significativamente los signos de degeneración del ligamento y ayuda a prevenir la rotura completa del ligamento cruzado anterior, a la vez que reduce la incidencia de la enfermedad contralateral en sujetos con rotura unilateral del LCA.

En una realización, la presente invención se refiere a una composición o un kit para uso en el tratamiento de tendinopatías, tales como la tendinopatía del supraespinoso y la rotura del tendón de Aquiles. La tendinopatía es un tipo de trastorno del tendón que produce dolor, hinchazón y deterioro de la función. La tendinopatía del supraespinoso es un término utilizado para describir desgarros, tendinopatía calcificante, tendinosis y/o lesiones en y alrededor del tendón del músculo supraespinoso, y es una causa de cojera de las extremidades anteriores. El supraespinoso es un importante estabilizador pasivo de la articulación del hombro y es responsable de la extensión del hombro y el avance de la extremidad. La lesión del tendón del músculo supraespinoso provoca inflamación. El desgarro de las fibras del tendón y la inflamación resultante pueden dar lugar a la mineralización y la calcificación del tendón, que son fuente de dolor y cojera. La función principal del tendón de Aquiles es la progresión hacia adelante de las extremidades posteriores y contribuye al soporte pasivo del corvejón. La etiología de las lesiones del tendón de Aquiles suele ser traumática. Dependiendo del traumatismo, la gravedad de la lesión puede variar considerablemente y provocar estiramientos, laceraciones ligeras o parciales o una rotura completa.

Por consiguiente, un aspecto relacionado proporciona la composición formadora de gel que comprende plasma procedente de mamíferos y ácido hialurónico o una sal o éster del mismo para su uso como excipiente, preferiblemente como excipiente en una formulación farmacéutica configurada para administración por vía parenteral, más preferiblemente para administración por vía intraósea, periósea, intraarticular o periarticular, o para administración por vía intratendinosa, peritendinosa, intraligamentosa o periligamentosa.

La composición formadora de gel puede administrarse como una única dosis terapéuticamente eficaz o administrarse como múltiples dosis terapéuticamente eficaces de la composición para administración por vía parenteral, según el estado fisiopatológico del paciente y el protocolo establecido por el médico.

En una realización, la composición según la presente invención se administra por vía intraarticular o localmente en una o varias dosis terapéuticamente eficaces. La dosis se adapta a la articulación específica y al peso corporal del sujeto.

Específicamente, en el caso de tendinopatías, la composición según la presente invención se administra por vía periarticular, peritendinosa o intratendinosa en una o varias dosis terapéuticamente eficaces. La dosis se adapta al sitio específico y al peso corporal del sujeto.

También se pretende el uso de la composición que se describe anteriormente para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de una enfermedad musculoesquelética, preferiblemente una enfermedad ósea o una enfermedad articular, más preferiblemente osteoartritis, la prevención de la ruptura del LCA o tendinopatías tales como la tendinopatía del supraespinoso y la rotura del tendón de Aquiles.

La invención se describe con más detalle mediante los siguientes ejemplos que ilustran mejor la invención.

Ejemplos

La presente invención se ilustrará ahora con referencia a los siguientes ejemplos.

Ejemplo 1: Protocolo de preparación de la composición formadora de gel

La composición formadora de gel se prepara en diferentes lotes de producto. Además de preparar una composición formadora de gel con propiedades óptimas, cada lote de producto debe mostrar propiedades óptimas similares.

El plasma canino congelado preparado mediante aféresis se descongela a 37 °C durante 60 minutos, preferiblemente 40 minutos, más preferiblemente 30 minutos. Dicho plasma canino se filtra a través de un filtro con un tamaño dentro del intervalo de entre 0,4 gm y 5 gm, más preferiblemente de entre 0,6 gm y 1,2 gm y luego se esteriliza por filtración. El plasma canino filtrado y el ácido hialurónico se mezclan para constituir la mezcla. Dicha mezcla se solubiliza 4 veces, preferiblemente 3 veces y más preferiblemente 2 veces en solución acuosa para reducir la viscosidad del producto y facilitar las etapas de fabricación posteriores. A continuación, dicha mezcla se criodeseca en un proceso que dura de 72 a 120 horas. La duración del proceso se optimiza para obtener un producto liofilizado más aireado, que posteriormente pueda reconstituirse fácilmente. En una siguiente etapa, el polvo de cloruro de calcio se disuelve en una solución de cloruro de hidrógeno y el cloruro de calcio disuelto se esteriliza por filtración. En este caso, la solución de cloruro de hidrógeno actúa como diluyente del polvo de cloruro de calcio.

Ejemplo 2: Formulación de la composición formadora de gel antes de su uso

Se reconstituye un vial que comprende el producto liofilizado de plasma canino criodesecado y ácido hialurónico con la solución esterilizada de cloruro de calcio. El tiempo de resuspensión es de solo 5 minutos. Otras composiciones formadoras de gel tienen un tiempo de resuspensión superior a dos horas. Dicha mezcla criodesecada puede comprender clonidina en una concentración de entre 0,05 y 0,2 mg/ml. Esta composición una vez resuspendida puede administrarse por vía parenteral.

Ejemplo 3: Ejemplos comparativos de la composición formadora de gel

La composición formadora de gel incluye preferiblemente el 99% de plasma no tratado con S/D, 5-24 mg/ml de hialuronato de sodio, 0,05-0,2 mg/ml de clonidina, 0,6-1 mg/ml de cloruro de calcio y 0,4-0,65 mg/ml de HCl.

Al cambiar la concentración de cloruro de calcio de 0,10 mg/ml a 2 mg/ml se produce una gelificación rápida de la composición. En consecuencia, el médico no puede administrar adecuadamente la composición en el sitio de la lesión. Por otra parte, una concentración de 0,05 mg/ml de cloruro de calcio da lugar a una composición con una gelificación insuficiente, en el sentido de que la composición permanece líquida.

La concentración de ácido hialurónico o una sal o éster del mismo también afecta a la gelificación de la composición formadora de gel, lo que se muestra mediante una composición con una baja concentración de hialuronato de sodio (0,05 mg/ml) y una alta concentración de hialuronato de sodio (250 mg/ml). Se observaron resultados similares a los del cloruro de calcio.

También el plasma influye en la gelificación de la composición. De hecho, la presencia de lípidos y/o fosfolípidos en el plasma no tratado favorece el proceso de gelificación al desencadenar una cascada de coagulación. En caso de utilizar plasma tratado con disolvente-detergente se produce una gelificación insuficiente, debido a la falta de lípidos y/o fosfolípidos plasmáticos.

Las concentraciones y propiedades de dicho plasma, ácido hialurónico o una sal o éster del mismo y cloruro de calcio influyen en la gelificación de la composición formadora de gel y, por tanto, preferiblemente deben estar dentro de los intervalos descritos en la presente invención.

Claims (18)

REIVINDICACIONES

1. Un método para la preparación de una composición formadora de gel para administración por vía parenteral, en donde dicho método comprende la etapa de mezclado de una mezcla de plasma procedente de mamíferos que comprende lípidos y/o fosfolípidos y ácido hialurónico o una sal o éster del mismo con una solución de calcio, en donde la concentración de calcio en la composición formadora de gel resultante está entre 0,2 y 1,4 mg/ml y la concentración de ácido hialurónico o una sal o éster del mismo en dicha composición formadora de gel está entre 0,10 y 200 mg/ml.

2. El método según la reivindicación 1, caracterizado por que dicha solución de calcio es una solución de cloruro de calcio.

3. El método según la reivindicación 1 o 2, caracterizado por que dicha solución de cloruro de calcio tiene un pH ácido.

4. El método según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores 1-3, caracterizado por que dicha mezcla de plasma y ácido hialurónico se criodeseca antes de la adición de dicha solución de calcio.

5. El método según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores 1-4, caracterizado por que dichos lípidos y/o fosfolípidos están presentes en una concentración total de entre 0,2 y 7 mg/l.

6. El método según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores 1-5, caracterizado por que dichos lípidos comprenden lípidos plasmáticos menores, en donde dichos lípidos plasmáticos menores se eligen preferiblemente del grupo formado por palmitoiletanolamida (PEA), estearoiletanolamida (SEA), araquidonoiletanolamida (AEA), y en donde una concentración total de lípidos plasmáticos menores está entre 5 y 50 nmol/l.

7. El método según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores 1-6, caracterizado por que dicho plasma tiene una concentración de glóbulos blancos (GB) de menos de 200 mil/l, preferiblemente una concentración de GB de entre 3 y 145 millones/l, más preferiblemente entre 5 y 85 millones/l.

8. El método según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores 1-7, caracterizado por que dicho plasma tiene una concentración de plaquetas sanguíneas (PS) de menos de 50.000 millones/l, preferiblemente una concentración de PS de entre 1.000 y 35.000 millones/l, más preferiblemente una concentración de PS de entre 2.000 y 20.000 millones/l.

9. El método según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores 1 -8, caracterizado por que el ácido hialurónico o una sal o éster del mismo tiene un peso molecular inferior a 1.800 kg/mol (1.800 kDa), más preferiblemente de entre 700 y 1.600 kg/mol (700 y 1.600 kDa), más preferiblemente de 700 y 1.000 kg/mol (700 y 1.000 kDa).

10. El método según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores 1-9, caracterizado por que dicha mezcla de plasma y ácido hialurónico comprende además uno o más compuestos farmacéuticos elegidos del grupo formado por un ingrediente farmacéutico activo, un agente antibiótico, una composición celular, una molécula orgánica pequeña, una proteína y un péptido.

11. El método según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores 1-10, caracterizado por que dicho ingrediente farmacéutico activo es un agonista del receptor adrenérgico alfa-2, preferiblemente clonidina.

12. El método según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores 1-11, caracterizado por que dicha molécula orgánica pequeña es un componente de un armazón o matriz con propiedades osteoconductoras, preferiblemente partículas de fosfato tricálcico (FTC).

13. El método según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores 1-12, caracterizado por que dicha formulación formadora de gel está configurada para administración por vía parenteral, preferiblemente para administración por vía intraósea, periósea, intraarticular o periarticular o para administración por vía intratendinosa, peritendinosa, intraligamentosa o periligamentosa.

14. Una composición obtenida por el método según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores 1 a 13.

15. La composición según la reivindicación 14 para uso en el tratamiento de enfermedades musculoesqueléticas en un sujeto, en donde la enfermedad musculoesquelética es preferiblemente una enfermedad ósea o una enfermedad articular.

16. La composición para uso según la reivindicación 15 en el tratamiento de la osteoartritis.

17. La composición para uso según la reivindicación 15 en el tratamiento o la prevención de la rotura del ligamento cruzado anterior.

18. La composición para uso según la reivindicación 15 en el tratamiento de tendinopatías.