CN113817057B - 一种抗siglec15抗体及其应用 - Google Patents

一种抗siglec15抗体及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种抗siglec15抗体或其抗原结合片段及其用途以及药物组合物。本发明提供的抗siglec15抗体能够特异性地与siglec15结合，促进T细胞的增殖，激活T细胞分泌细胞因子。

Description

一种抗siglec15抗体及其应用
技术领域
本发明属于肿瘤免疫疗法和分子免疫学领域，具体涉及一种抗siglec15抗体及其应用。
背景技术
肿瘤免疫治疗已成为肿瘤治疗的一个最重要的手段，只有在识别癌细胞后，免疫系统才能够有效的进攻癌细胞，癌变是正常体细胞失去正常细胞调节功能，基因突变累计到一定程度的结果，但是，癌细胞能够把自己伪装成正常体细胞，巧妙的避开了免疫系统的攻击。肿瘤免疫治疗通过增强人体的免疫功能，使T细胞能更好的识别癌细胞，从而起到杀死癌细胞的作用。
T细胞的激活需要抗原启动，而细胞表面的配体-受体的相互作用则可向T细胞传导正向或者负向信号，从而决定了免疫反应的方向。通过操控这些正向或者负向反应，则可选择性地放大免疫反应，从而达到消除肿瘤的目的。除了免疫反应的程度外，产生和执行反应的位置在肿瘤免疫治疗中也是至关重要的。在肿瘤微环境(TME)中选择性地扩大或者恢复免疫反应，是高效的癌症免疫治疗方法，并且没有过多的副作用。
2019年著名科学期刊《自然医学(Nature Medicine)》刊登了耶鲁大学医学院陈列平团队的这一研究报告，报告题目《Siglec-15as an immune suppressor and potentialtarget for normalization cancer immunotherapy》。正是由于抗siglec15抗体的抗癌作用可能与PD-1/PD-L1抗体是互补的，那些对PD-1/PD-L1抗体不响应的肿瘤，抗siglec15抗体可能就是它们的克星。科学研究团队通过研究发现siglec15这个跨膜蛋白可以持续抑制T细胞的活性，并且表现出了符合癌症免疫疗法的主要特性。简单来说，对绝大多数肿瘤而言，有PD-L1高表达就没有siglec15；有siglec15高表达就没有PD-L1。这将产生一种的与PD-L1互补的新的免疫检查点siglec15抑制剂抗癌新药。
此外，siglec15是较新的免疫调节靶点，在肿瘤微环境能抑制免疫反应。siglec15在肿瘤微环境中的M2型巨噬细胞以及在包括肺癌、卵巢癌和头颈癌等在内多种人体肿瘤细胞中的表达上调，且其表达与PD-L1是互斥的。现有技术表明，siglec15在体外和体内都能抑制抗原特异性T细胞反应。siglec15于抑制对癌症的免疫反应中发挥关键作用，通过阻断siglec15与其配体之间的相互作用而抑制siglec15活性。
siglec15有潜力成为是一系列免疫治疗新靶点中的第一个，来帮助对当前免疫治疗无反应的肿瘤患者。现阶段的研究表明，siglec15敲除小鼠没有发生自身免疫病或其他疾病，这表明，siglec15的阻断在正常细胞上并不会产生严重的副作用。目前关于第一个阻断siglec15免疫抑制性的新药的临床试验也正在进行。
本发明将siglec15作为免疫治疗的靶点，开发了新的抗siglec15抗体。
发明内容
针对现有问题的不足，本发明的第一个目的是提供一种抗siglec15抗体或其抗原结合片段。
本发明的第二个目的是提供上述抗siglec15抗体或其抗原结合片段的编码基因。
本发明的第三个目的是提供上述抗siglec15抗体或其抗原结合片段的应用。
本发明的第四个目的是提供一种药物组合物。
本发明解决其技术问题采用的技术方案是：
一种抗siglec15抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段结合区域全部或部分包含在SEQ ID NO：183或SEQ ID NO：184所述的氨基酸序列内。
优选的，所述抗体以1nM或更小的KD结合siglec15。
更优选的，所述抗体以1pM或更小的KD结合siglec15。
优选的，所述抗体为鼠源抗体、纳米抗体、嵌合抗体、全人抗体、人源化抗体或抗体偶联物。
优选的，所述抗体为单特异性、双特异性、多特异性抗体或抗体偶联物。
优选的，所述双特异性抗体包括上述任一所述的抗体或其抗原结合片段，以及针对其他抗原和/或其他抗原表位的抗体或抗原结合片段。
更优选的，所述双特异性抗体为抗siglec15/CD3双特异性抗体、抗siglec15/PD-1双特异性抗体、抗siglec15/PD-L1双特异性抗体或抗siglec15/CD16A双特异性抗体。
优选的，所述抗体为单克隆抗体。
一种抗siglec15抗体或其抗原结合片段，包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含重链互补决定区CDR1、CDR2和CDR3，所述轻链可变区包含轻链互补决定区CDR1、CDR2和CDR3，其中，
(a)重链可变区的CDR1，选自SEQ ID NO：41-50，189，207，225的任一氨基酸序列，或与SEQ ID NO：41-50，189，207，225的任一氨基酸序列具有至少50％、60％、70％、80％、85％、90％、95％或以上同一性的序列，或与SEQ ID NO：41-50，189，207，225的任一氨基酸序列相比具有一个或多个(优选2个或3个)保守氨基酸突变(优选置换、插入或缺失)的氨基酸序列；
(b)重链可变区的CDR2，选自SEQ ID NO：51-60，190，208，226的任一氨基酸序列，或与SEQ ID NO：51-60，190，208，226的任一氨基酸序列具有至少50％、60％、70％、80％、85％、90％、95％或以上同一性的序列，或与SEQ ID NO：51-60，190，208，226的任一氨基酸序列相比具有一个或多个(优选2个或3个)保守氨基酸突变(优选置换、插入或缺失)的氨基酸序列；
(c)重链可变区的CDR3，选自SEQ ID NO：61-70，191，209，227的任一氨基酸序列，或与SEQ ID NO：61-70，191，209,227的任一氨基酸序列具有至少50％、60％、70％、80％、85％、90％、95％或以上同一性的序列，或与SEQ ID NO：61-70，191，209，227的任一氨基酸序列相比具有一个或多个(优选2个或3个)保守氨基酸突变(优选置换、插入或缺失)的氨基酸序列；
(d)轻链可变区的CDR1，选自SEQ ID NO：71-80，192，210，228的任一氨基酸序列，或与SEQ ID NO：71-80，192，210，228的任一氨基酸序列具有至少50％、60％、70％、80％、85％、90％、95％或以上同一性的序列，或与SEQ ID NO：71-80，192，210，228的任一氨基酸序列相比具有一个或多个(优选2个或3个)保守氨基酸突变(优选置换、插入或缺失)的氨基酸序列；
(e)轻链可变区的CDR2，选自SEQ ID NO：81-90，193，211，229的任一氨基酸序列，或与SEQ ID NO：81-90，193，211，229的任一氨基酸序列具有至少50％、60％、70％、80％、85％、90％、95％或以上同一性的序列，或与SEQ ID NO：81-90，193，211，229的任一氨基酸序列相比具有一个或多个(优选2个或3个)保守氨基酸突变(优选置换、插入或缺失)的氨基酸序列；
(f)轻链可变区的CDR3，选自SEQ ID NO：91-100，194，212，230的任一氨基酸序列；或与SEQ ID NO：91-100，194，212，230的任一氨基酸序列具有至少50％、60％、70％、80％、85％、90％、95％或以上同一性的序列，或与SEQ ID NO：91-100，194，212，230的任一氨基酸序列相比具有一个或多个(优选2个或3个)保守氨基酸突变(优选置换、插入或缺失)的氨基酸序列。
优选的，所述重链可变区还包括框架区FR；所述的框架区FR包括：
(a)选自SEQ ID NO：101、SEQ ID NO：109、SEQ ID NO：117、SEQ ID NO：125、SEQ IDNO：133、SEQ ID NO：141、SEQ ID NO：149、SEQ ID NO：157SEQ ID NO：165、SEQ ID NO：173、SEQ ID NO：195、SEQ ID NO：213和SEQ ID NO：231任一氨基酸序列、
或与SEQ ID NO：101、SEQ ID NO：109、SEQ ID NO：117、SEQ ID NO：125、SEQ IDNO：133、SEQ ID NO：141、SEQ ID NO：149、SEQ ID NO：157SEQ ID NO：165、SEQ ID NO：173、SEQ ID NO：195、SEQ ID NO：213和SEQ ID NO：231给出的任一氨基酸序列具有至少50％、60％、70％、80％、85％、90％、95％或以上同一性的序列、
或与SEQ ID NO：101、SEQ ID NO：109、SEQ ID NO：117、SEQ ID NO：125、SEQ IDNO：133、SEQ ID NO：141、SEQ ID NO：149、SEQ ID NO：157SEQ ID NO：165、SEQ ID NO：173、SEQ ID NO：195、SEQ ID NO：213和SEQ ID NO：231的任一氨基酸序列相比具有一个或多个(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9、10个)保守氨基酸突变(优选置换、插入或缺失)的氨基酸序列所示的FR1，
(b)选自SEQ ID NO：102、SEQ ID NO：110、SEQ ID NO：118、SEQ ID NO：126、SEQ IDNO：134、SEQ ID NO：142、SEQ ID NO：150、SEQ ID NO：158、SEQ ID NO：166、SEQ ID NO：174、SEQ ID NO：196、SEQ ID NO：214和SEQ ID NO：232任一氨基酸序列、
或与SEQ ID NO：102、SEQ ID NO：110、SEQ ID NO：118、SEQ ID NO：126、SEQ IDNO：134、SEQ ID NO：142、SEQ ID NO：150、SEQ ID NO：158、SEQ ID NO：166、SEQ ID NO：174、SEQ ID NO：196、SEQ ID NO：214和SEQ ID NO：232给出的任一氨基酸序列具有至少50％、60％、70％、80％、85％、90％、95％或以上同一性的序列、
或与SEQ ID NO：102、SEQ ID NO：110、SEQ ID NO：118、SEQ ID NO：126、SEQ IDNO：134、SEQ ID NO：142、SEQ ID NO：150、SEQ ID NO：158、SEQ ID NO：166、SEQ ID NO：174、SEQ ID NO：196、SEQ ID NO：214和SEQ ID NO：232的任一氨基酸序列相比具有一个或多个(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9、10个)保守氨基酸突变(优选置换、插入或缺失)的氨基酸序列所示的FR2，
(c)选自SEQ ID NO：103、SEQ ID NO：111、SEQ ID NO：119、SEQ ID NO：127、SEQ IDNO：135、SEQ ID NO：143、SEQ ID NO：151、SEQ ID NO：159、SEQ ID NO：167、SEQ ID NO：175、SEQ ID NO：197、SEQ ID NO：215和SEQ ID NO：233任一氨基酸序列、
或与SEQ ID NO：103、SEQ ID NO：111、SEQ ID NO：119、SEQ ID NO：127、SEQ IDNO：135、SEQ ID NO：143、SEQ ID NO：151、SEQ ID NO：159、SEQ ID NO：167、SEQ ID NO：175、SEQ ID NO：197、SEQ ID NO：215和SEQ ID NO：233给出的任一氨基酸序列具有至少50％、60％、70％、80％、85％、90％、95％或以上同一性的序列、
或与SEQ ID NO：103、SEQ ID NO：111、SEQ ID NO：119、SEQ ID NO：127、SEQ IDNO：135、SEQ ID NO：143、SEQ ID NO：151、SEQ ID NO：159、SEQ ID NO：167、SEQ ID NO：175、SEQ ID NO：197、SEQ ID NO：215和SEQ ID NO：233的任一氨基酸序列相比具有一个或多个(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9、10个)保守氨基酸突变(优选置换、插入或缺失)的氨基酸序列所示的FR3，
和
(d)选自SEQ ID NO：104、SEQ ID NO：112、SEQ ID NO：120、SEQ ID NO：128、SEQ IDNO：136、SEQ ID NO：144、SEQ ID NO：152、SEQ ID NO：160、SEQ ID NO：168、SEQ ID NO：176、SEQ ID NO：198、SEQ ID NO：216和SEQ ID NO：234、
或与SEQ ID NO：104、SEQ ID NO：112、SEQ ID NO：120、SEQ ID NO：128、SEQ IDNO：136、SEQ ID NO：144、SEQ ID NO：152、SEQ ID NO：160、SEQ ID NO：168、SEQ ID NO：176、SEQ ID NO：198、SEQ ID NO：216和SEQ ID NO：234给出的任一氨基酸序列具有至少50％、60％、70％、80％、85％、90％、95％或以上同一性的序列、
或与选自SEQ ID NO：104、SEQ ID NO：112、SEQ ID NO：120、SEQ ID NO：128、SEQID NO：136、SEQ ID NO：144、SEQ ID NO：152、SEQ ID NO：160、SEQ ID NO：168、SEQ ID NO：176、SEQ ID NO：198、SEQ ID NO：216和SEQ ID NO：234的任一氨基酸序列相比具有一个或多个(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9、10个)保守氨基酸突变(优选置换、插入或缺失)的氨基酸序列所示的FR4。
优选的，所述轻链可变区还包括框架区FR；所述的框架区FR包括：
(e)选自SEQ ID NO：105、SEQ ID NO：113、SEQ ID NO：121、SEQ ID NO：129、SEQ IDNO：137、SEQ ID NO：145、SEQ ID NO：153、SEQ ID NO：161、SEQ ID NO：169、SEQ ID NO：177、SEQ ID NO：199、SEQ ID NO：217和SEQ ID NO：235任一氨基酸序列、
或与SEQ ID NO：105、SEQ ID NO：113、SEQ ID NO：121、SEQ ID NO：129、SEQ IDNO：137、SEQ ID NO：145、SEQ ID NO：153、SEQ ID NO：161、SEQ ID NO：169、SEQ ID NO：177、SEQ ID NO：199、SEQ ID NO：217和SEQ ID NO：235给出的任一氨基酸序列具有至少50％、60％、70％、80％、85％、90％、95％或以上同一性的序列、
或与SEQ ID NO：105、SEQ ID NO：113、SEQ ID NO：121、SEQ ID NO：129、SEQ IDNO：137、SEQ ID NO：145、SEQ ID NO：153、SEQ ID NO：161、SEQ ID NO：169、SEQ ID NO：177、SEQ ID NO：199、SEQ ID NO：217和SEQ ID NO：235的任一氨基酸序列相比具有一个或多个(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9、10个)保守氨基酸突变(优选置换、插入或缺失)的氨基酸序列所示的FR1，
(f)选自SEQ ID NO：106、SEQ ID NO：114、SEQ ID NO：122、SEQ ID NO：130、SEQ IDNO：138、SEQ ID NO：146、SEQ ID NO：154、SEQ ID NO：162、SEQ ID NO：170、SEQ ID NO：178、SEQ ID NO：200、SEQ ID NO：218和SEQ ID NO：236任一氨基酸序列、
或与SEQ ID NO：106、SEQ ID NO：114、SEQ ID NO：122、SEQ ID NO：130、SEQ IDNO：138、SEQ ID NO：146、SEQ ID NO：154、SEQ ID NO：162、SEQ ID NO：170、SEQ ID NO：178、SEQ ID NO：200、SEQ ID NO：218和SEQ ID NO：236给出的任一氨基酸序列具有至少50％、60％、70％、80％、85％、90％、95％或以上同一性的序列、
或与SEQ ID NO：106、SEQ ID NO：114、SEQ ID NO：122、SEQ ID NO：130、SEQ IDNO：138、SEQ ID NO：146、SEQ ID NO：154、SEQ ID NO：162、SEQ ID NO：170、SEQ ID NO：178、SEQ ID NO：200、SEQ ID NO：218和SEQ ID NO：236的任一氨基酸序列相比具有一个或多个(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9、10个)保守氨基酸突变(优选置换、插入或缺失)的氨基酸序列所示的FR2，
(g)选自SEQ ID NO：107、SEQ ID NO：115、SEQ ID NO：123、SEQ ID NO：131、SEQ IDNO：139、SEQ ID NO：147、SEQ ID NO：155、SEQ ID NO：163、SEQ ID NO：171、SEQ ID NO：179、SEQ ID NO：201、SEQ ID NO：219和SEQ ID NO：237任一氨基酸序列、
或与SEQ ID NO：107、SEQ ID NO：115、SEQ ID NO：123、SEQ ID NO：131、SEQ IDNO：139、SEQ ID NO：147、SEQ ID NO：155、SEQ ID NO：163、SEQ ID NO：171、SEQ ID NO：179、SEQ ID NO：201、SEQ ID NO：219和SEQ ID NO：237给出的任一氨基酸序列具有至少50％、60％、70％、80％、85％、90％、95％或以上同一性的序列、
或与SEQ ID NO：107、SEQ ID NO：115、SEQ ID NO：123、SEQ ID NO：131、SEQ IDNO：139、SEQ ID NO：147、SEQ ID NO：155、SEQ ID NO：163、SEQ ID NO：171、SEQ ID NO：179、SEQ ID NO：201、SEQ ID NO：219和SEQ ID NO：237的任一氨基酸序列相比具有一个或多个(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9、10个)保守氨基酸突变(优选置换、插入或缺失)的氨基酸序列所示的FR3，
和
(h)选自SEQ ID NO：108、SEQ ID NO：116、SEQ ID NO：124、SEQ ID NO：132、SEQ IDNO：140、SEQ ID NO：148、SEQ ID NO：156、SEQ ID NO：164、SEQ ID NO：172、SEQ ID NO：180、SEQ ID NO：202、SEQ ID NO：220和SEQ ID NO：238、
或与SEQ ID NO：108、SEQ ID NO：116、SEQ ID NO：124、SEQ ID NO：132、SEQ IDNO：140、SEQ ID NO：148、SEQ ID NO：156、SEQ ID NO：164、SEQ ID NO：172、SEQ ID NO：180、SEQ ID NO：202、SEQ ID NO：220和SEQ ID NO：238给出的任一氨基酸序列具有至少50％、60％、70％、80％、85％、90％、95％或以上同一性的序列、
或与选自SEQ ID NO：108、SEQ ID NO：116、SEQ ID NO：124、SEQ ID NO：132、SEQID NO：140、SEQ ID NO：148、SEQ ID NO：156、SEQ ID NO：164、SEQ ID NO：172、SEQ ID NO：180、SEQ ID NO：202、SEQ ID NO：220和SEQ ID NO：238的任一氨基酸序列相比具有一个或多个(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9、10个)保守氨基酸突变(优选置换、插入或缺失)的氨基酸序列所示的FR4。
优选的，所述重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3分别由氨基酸序列SEQ ID NO：41、SEQ ID NO：51和SEQ ID NO：61组成，且所述轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3分别由SEQ IDNO：71、SEQ ID NO：81和SEQ ID NO：91组成。
更优选的，所述重链可变区包括框架区FR和上述重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3；更加优选的，所述的框架区FR包括：SEQ ID NO：101所示的FR1、SEQ ID NO：102所示的FR2、SEQ ID NO：103所示的FR3和SEQ ID NO：104所示的FR4。
更优选的，所述轻链可变区包括框架区FR和上述轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3；更加优选的，所述的框架区FR包括：SEQ ID NO：105所示的FR1、SEQ ID NO：106所示的FR2、SEQ ID NO：107所示的FR3和SEQ ID NO：108所示的FR4。
优选的，所述重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3分别由氨基酸序列SEQ ID NO：42、SEQ ID NO：52和SEQ ID NO：62组成，且所述轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3分别由SEQ IDNO：72、SEQ ID NO：82和SEQ ID NO：92组成。
更优选的，所述重链可变区包括框架区FR和上述重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3；更加优选的，所述的框架区FR包括：SEQ ID NO：109所示的FR1、SEQ ID NO：110所示的FR2、SEQ ID NO：111所示的FR3和SEQ ID NO：112所示的FR4。
更优选的，所述轻链可变区包括框架区FR和上述轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3；更加优选的，所述的框架区FR包括：SEQ ID NO：113所示的FR1、SEQ ID NO：114所示的FR2、SEQ ID NO：115所示的FR3和SEQ ID NO：116所示的FR4。
优选的，所述重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3分别由氨基酸序列SEQ ID NO：43、SEQ ID NO：53和SEQ ID NO：63组成，且所述轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3分别由SEQ IDNO：73、SEQ ID NO：83和SEQ ID NO：93组成。
更优选的，所述重链可变区包括框架区FR和上述重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3；更加优选的，所述的框架区FR包括：SEQ ID NO：117所示的FR1、SEQ ID NO：118所示的FR2、SEQ ID NO：119所示的FR3和SEQ ID NO：120所示的FR4。
更优选的，所述轻链可变区包括框架区FR和上述轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3；更加优选的，所述的框架区FR包括：SEQ ID NO：121所示的FR1、SEQ ID NO：122所示的FR2、SEQ ID NO：123所示的FR3和SEQ ID NO：124所示的FR4。
优选的，所述重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3分别由氨基酸序列SEQ ID NO：44、SEQ ID NO：54和SEQ ID NO：64组成，且所述轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3分别由SEQ IDNO：74、SEQ ID NO：84和SEQ ID NO：94组成。
更优选的，所述重链可变区包括框架区FR和上述重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3；更加优选的，所述的框架区FR包括：SEQ ID NO：125所示的FR1、SEQ ID NO：126所示的FR2、SEQ ID NO：127所示的FR3和SEQ ID NO：128所示的FR4。
更优选的，所述轻链可变区包括框架区FR和上述轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3；更加优选的，所述的框架区FR包括：SEQ ID NO：129所示的FR1、SEQ ID NO：130所示的FR2、SEQ ID NO：131所示的FR3和SEQ ID NO：132所示的FR4。
优选的，所述重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3分别由氨基酸序列SEQ ID NO：45、SEQ ID NO：55和SEQ ID NO：65组成，且所述轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3分别由SEQ IDNO：75、SEQ ID NO：85和SEQ ID NO：95组成。
更优选的，所述重链可变区包括框架区FR和上述重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3；更加优选的，所述的框架区FR包括：SEQ ID NO：133所示的FR1、SEQ ID NO：134所示的FR2、SEQ ID NO：135所示的FR3和SEQ ID NO：136所示的FR4。
更优选的，所述轻链可变区包括框架区FR和上述轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3；更加优选的，所述的框架区FR包括：SEQ ID NO：137所示的FR1、SEQ ID NO：138所示的FR2、SEQ ID NO：139所示的FR3和SEQ ID NO：140所示的FR4。
优选的，所述重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3分别由氨基酸序列SEQ ID NO：46、SEQ ID NO：56和SEQ ID NO：66组成，且所述轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3分别由SEQ IDNO：76、SEQ ID NO：86和SEQ ID NO：96组成。
更优选的，所述重链可变区包括框架区FR和上述重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3；更加优选的，所述的框架区FR包括：SEQ ID NO：141所示的FR1、SEQ ID NO：142所示的FR2、SEQ ID NO：143所示的FR3和SEQ ID NO：144所示的FR4。
更优选的，所述轻链可变区包括框架区FR和上述轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3；更加优选的，所述的框架区FR包括：SEQ ID NO：145所示的FR1、SEQ ID NO：146所示的FR2、SEQ ID NO：147所示的FR3和SEQ ID NO：148所示的FR4。
优选的，所述重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3分别由氨基酸序列SEQ ID NO：47、SEQ ID NO：57和SEQ ID NO：67组成，且所述轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3分别由SEQ IDNO：77、SEQ ID NO：87和SEQ ID NO：97组成。
更优选的，所述重链可变区包括框架区FR和上述重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3；更加优选的，所述的框架区FR包括：SEQ ID NO：149所示的FR1、SEQ ID NO：150所示的FR2、SEQ ID NO：151所示的FR3和SEQ ID NO：152所示的FR4。
更优选的，所述轻链可变区包括框架区FR和上述轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3；更加优选的，所述的框架区FR包括：SEQ ID NO：153所示的FR1、SEQ ID NO：154所示的FR2、SEQ ID NO：155所示的FR3和SEQ ID NO：156所示的FR4。
优选的，所述重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3分别由氨基酸序列SEQ ID NO：48、SEQ ID NO：58和SEQ ID NO：68组成，且所述轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3分别由SEQ IDNO：78、SEQ ID NO：88和SEQ ID NO：98组成。
更优选的，所述重链可变区包括框架区FR和上述重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3；更加优选的，所述的框架区FR包括：SEQ ID NO：157所示的FR1、SEQ ID NO：158所示的FR2、SEQ ID NO：159所示的FR3和SEQ ID NO：160所示的FR4。
更优选的，所述轻链可变区包括框架区FR和上述轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3；更加优选的，所述的框架区FR包括：SEQ ID NO：161所示的FR1、SEQ ID NO：162所示的FR2、SEQ ID NO：163所示的FR3和SEQ ID NO：164所示的FR4。
优选的，所述重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3分别由氨基酸序列SEQ ID NO：49、SEQ ID NO：59和SEQ ID NO：69组成，且所述轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3分别由SEQ IDNO：79、SEQ ID NO：89和SEQ ID NO：99组成。
更优选的，所述重链可变区包括框架区FR和上述重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3；更加优选的，所述的框架区FR包括：SEQ ID NO：165所示的FR1、SEQ ID NO：166所示的FR2、SEQ ID NO：167所示的FR3和SEQ ID NO：168所示的FR4。
更优选的，所述轻链可变区包括框架区FR和上述轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3；更加优选的，所述的框架区FR包括：SEQ ID NO：169所示的FR1、SEQ ID NO：170所示的FR2、SEQ ID NO：171所示的FR3和SEQ ID NO：172所示的FR4。
优选的，所述重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3分别由氨基酸序列SEQ ID NO：50、SEQ ID NO：60和SEQ ID NO：70组成，且所述轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3分别由SEQ IDNO：80、SEQ ID NO：90和SEQ ID NO：100组成。
更优选的，所述重链可变区包括框架区FR和上述重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3；更加优选的，所述的框架区FR包括：SEQ ID NO：173所示的FR1、SEQ ID NO：174所示的FR2、SEQ ID NO：175所示的FR3和SEQ ID NO：176所示的FR4。
更优选的，所述轻链可变区包括框架区FR和上述轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3；更加优选的，所述的框架区FR包括：SEQ ID NO：177所示的FR1、SEQ ID NO：178所示的FR2、SEQ ID NO：179所示的FR3和SEQ ID NO：180所示的FR4。
优选的，所述重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3分别由氨基酸序列SEQ ID NO：189、SEQ ID NO：190和SEQ ID NO：191组成，且所述轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3分别由SEQID NO：192、SEQ ID NO：193和SEQ ID NO：194组成。
更优选的，所述重链可变区包括框架区FR和上述重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3；更加优选的，所述的框架区FR包括：SEQ ID NO：195所示的FR1、SEQ ID NO：196所示的FR2、SEQ ID NO：197所示的FR3和SEQ ID NO：198所示的FR4。
更优选的，所述轻链可变区包括框架区FR和上述轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3；更加优选的，所述的框架区FR包括：SEQ ID NO：199所示的FR1、SEQ ID NO：200所示的FR2、SEQ ID NO：201所示的FR3和SEQ ID NO：202所示的FR4。
优选的，所述重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3分别由氨基酸序列SEQ ID NO：207、SEQ ID NO：208和SEQ ID NO：209组成，且所述轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3分别由SEQID NO：210、SEQ ID NO：211和SEQ ID NO：212组成。
更优选的，所述重链可变区包括框架区FR和上述重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3；更加优选的，所述的框架区FR包括：SEQ ID NO：213所示的FR1、SEQ ID NO：214所示的FR2、SEQ ID NO：215所示的FR3和SEQ ID NO：216所示的FR4。
更优选的，所述轻链可变区包括框架区FR和上述轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3；更加优选的，所述的框架区FR包括：SEQ ID NO：217所示的FR1、SEQ ID NO：218所示的FR2、SEQ ID NO：219所示的FR3和SEQ ID NO：220所示的FR4。
优选的，所述重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3分别由氨基酸序列SEQ ID NO：225、SEQ ID NO：226和SEQ ID NO：227组成，且所述轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3分别由SEQID NO：228、SEQ ID NO：229和SEQ ID NO：230组成。
更优选的，所述重链可变区包括框架区FR和上述重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3；更加优选的，所述的框架区FR包括：SEQ ID NO：231所示的FR1、SEQ ID NO：232所示的FR2、SEQ ID NO：233所示的FR3和SEQ ID NO：234所示的FR4。
更优选的，所述轻链可变区包括框架区FR和上述轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3；更加优选的，所述的框架区FR包括：SEQ ID NO：235所示的FR1、SEQ ID NO：236所示的FR2、SEQ ID NO：237所示的FR3和SEQ ID NO：238所示的FR4。
优选的，本发明提供一种抗体，其重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别为：SEQ ID NO：41、SEQ ID NO：51和SEQ ID NO：61；重链可变区的FR1、FR2、FR3和FR4的氨基酸序列分别为SEQ ID NO：101、SEQ ID NO：102、SEQ ID NO：103和SEQ ID NO：104；轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别为：SEQ ID NO：71、SEQ ID NO：81和SEQ ID NO：91；轻链可变区的FR1、FR2、FR3和FR4的氨基酸序列分别为SEQ ID NO：105、SEQ ID NO：106、SEQ ID NO：107和SEQ ID NO：108。
优选的，本发明提供一种抗体，其重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别为：SEQ ID NO：42、SEQ ID NO：52和SEQ ID NO：62；重链可变区的FR1、FR2、FR3和FR4的氨基酸序列分别为SEQ ID NO：109、SEQ ID NO：110、SEQ ID NO：111和SEQ ID NO：112；轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别为：SEQ ID NO：72、SEQ ID NO：82和SEQ ID NO：92；轻链可变区的FR1、FR2、FR3和FR4的氨基酸序列分别为SEQ ID NO：113、SEQ ID NO：114、SEQ ID NO：115和SEQ ID NO：116。
优选的，本发明提供一种抗体，其重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别为：SEQ ID NO：43、SEQ ID NO：53和SEQ ID NO：63；重链可变区的FR1、FR2、FR3和FR4的氨基酸序列分别为SEQ ID NO：117、SEQ ID NO：118、SEQ ID NO：119和SEQ ID NO：120；轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别为：SEQ ID NO：73、SEQ ID NO：83和SEQ ID NO：93；轻链可变区的FR1、FR2、FR3和FR4的氨基酸序列分别为SEQ ID NO：121、SEQ ID NO：122、SEQ ID NO：123和SEQ ID NO：124。
优选的，本发明提供一种抗体，其重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别为：SEQ ID NO：44、SEQ ID NO：54和SEQ ID NO：64；重链可变区的FR1、FR2、FR3和FR4的氨基酸序列分别为SEQ ID NO：125、SEQ ID NO：126、SEQ ID NO：127和SEQ ID NO：128；轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别为：SEQ ID NO：74、SEQ ID NO：84和SEQ ID NO：94；轻链可变区的FR1、FR2、FR3和FR4的氨基酸序列分别为SEQ ID NO：129、SEQ ID NO：130、SEQ ID NO：131和SEQ ID NO：132。
优选的，本发明提供一种抗体，其重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别为：SEQ ID NO：45、SEQ ID NO：55和SEQ ID NO：65；重链可变区的FR1、FR2、FR3和FR4的氨基酸序列分别为SEQ ID NO：133、SEQ ID NO：134、SEQ ID NO：135和SEQ ID NO：136；轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别为：SEQ ID NO：75、SEQ ID NO：85和SEQ ID NO：95；轻链可变区的FR1、FR2、FR3和FR4的氨基酸序列分别为SEQ ID NO：137、SEQ ID NO：138、SEQ ID NO：139和SEQ ID NO：140。
优选的，本发明提供一种抗体，其重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别为：SEQ ID NO：46、SEQ ID NO：56和SEQ ID NO：66；重链可变区的FR1、FR2、FR3和FR4的氨基酸序列分别为SEQ ID NO：141、SEQ ID NO：142、SEQ ID NO：143和SEQ ID NO：144；轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别为：SEQ ID NO：76、SEQ ID NO：86和SEQ ID NO：96；轻链可变区的FR1、FR2、FR3和FR4的氨基酸序列分别为SEQ ID NO：145、SEQ ID NO：146、SEQ ID NO：147和SEQ ID NO：148。
优选的，本发明提供一种抗体，其重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别为：SEQ ID NO：47、SEQ ID NO：57和SEQ ID NO：67；重链可变区的FR1、FR2、FR3和FR4的氨基酸序列分别为SEQ ID NO：149、SEQ ID NO：150、SEQ ID NO：151和SEQ ID NO：152；轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别为：SEQ ID NO：77、SEQ ID NO：87和SEQ ID NO：97；轻链可变区的FR1、FR2、FR3和FR4的氨基酸序列分别为SEQ ID NO：153、SEQ ID NO：154、SEQ ID NO：155和SEQ ID NO：156。
优选的，本发明提供一种抗体，其重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别为：SEQ ID NO：48、SEQ ID NO：58和SEQ ID NO：68；重链可变区的FR1、FR2、FR3和FR4的氨基酸序列分别为SEQ ID NO：157、SEQ ID NO：158、SEQ ID NO：159和SEQ ID NO：160；轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别为：SEQ ID NO：78、SEQ ID NO：88和SEQ ID NO：98；轻链可变区的FR1、FR2、FR3和FR4的氨基酸序列分别为SEQ ID NO：161、SEQ ID NO：162、SEQ ID NO：163和SEQ ID NO：164。
优选的，本发明提供一种抗体，其重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别为：SEQ ID NO：49、SEQ ID NO：59和SEQ ID NO：69；重链可变区的FR1、FR2、FR3和FR4的氨基酸序列分别为SEQ ID NO：165、SEQ ID NO：166、SEQ ID NO：167和SEQ ID NO：168；轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别为：SEQ ID NO：79、SEQ ID NO：89和SEQ ID NO：99；轻链可变区的FR1、FR2、FR3和FR4的氨基酸序列分别为SEQ ID NO：169、SEQ ID NO：170、SEQ ID NO：171和SEQ ID NO：172。
优选的，本发明提供一种抗体，其重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别为：SEQ ID NO：50、SEQ ID NO：60和SEQ ID NO：70；重链可变区的FR1、FR2、FR3和FR4的氨基酸序列分别为SEQ ID NO：173、SEQ ID NO：174、SEQ ID NO：175和SEQ ID NO：176；轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别为：SEQ ID NO：80、SEQ ID NO：90和SEQ ID NO：100；轻链可变区的FR1、FR2、FR3和FR4的氨基酸序列分别为SEQ ID NO：177、SEQ ID NO：178、SEQ ID NO：179和SEQ ID NO：180。
优选的，本发明提供一种抗体，其重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别为：SEQ ID NO：189、SEQ ID NO：190和SEQ ID NO：191；重链可变区的FR1、FR2、FR3和FR4的氨基酸序列分别为SEQ ID NO：195、SEQ ID NO：196、SEQ ID NO：197和SEQ ID NO：198；轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别为：SEQ ID NO：192、SEQ ID NO：193和SEQID NO：194；轻链可变区的FR1、FR2、FR3和FR4的氨基酸序列分别为SEQ ID NO：199、SEQ IDNO：200、SEQ ID NO：201和SEQ ID NO：202。
优选的，本发明提供一种抗体，其重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别为：SEQ ID NO：207、SEQ ID NO：208和SEQ ID NO：209；重链可变区的FR1、FR2、FR3和FR4的氨基酸序列分别为SEQ ID NO：213、SEQ ID NO：214、SEQ ID NO：215和SEQ ID NO：216；轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别为：SEQ ID NO：210、SEQ ID NO：211和SEQID NO：212；轻链可变区的FR1、FR2、FR3和FR4的氨基酸序列分别为SEQ ID NO：217、SEQ IDNO：218、SEQ ID NO：219和SEQ ID NO：220。
优选的，本发明提供一种抗体，其重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别为：SEQ ID NO：225、SEQ ID NO：226和SEQ ID NO：227；重链可变区的FR1、FR2、FR3和FR4的氨基酸序列分别为SEQ ID NO：231、SEQ ID NO：232、SEQ ID NO：233和SEQ ID NO：234；轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别为：SEQ ID NO：228、SEQ ID NO：229和SEQID NO：230；轻链可变区的FR1、FR2、FR3和FR4的氨基酸序列分别为SEQ ID NO：235、SEQ IDNO：236、SEQ ID NO：237和SEQ ID NO：238。
一种抗siglec15抗体或其抗原结合片段，包括重链可变区和轻链可变区；其中：
(a)所述重链可变区具有SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：17、SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：25、SEQ ID NO：29、SEQ ID NO：33、SEQ IDNO：37、SEQ ID NO：185、SEQ ID NO：203和SEQ ID NO：221给出的任一氨基酸序列，
或与SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：17、SEQID NO：21、SEQ ID NO：25、SEQ ID NO：29、SEQ ID NO：33、SEQ ID NO：37、SEQ ID NO：185、SEQ ID NO：203和SEQ ID NO：221给出的氨基酸序列具有至少50％、60％、70％、80％、85％、90％、95％或以上同一性的序列，
或与SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：17、SEQID NO：21、SEQ ID NO：25、SEQ ID NO：29、SEQ ID NO：33、SEQ ID NO：37、SEQ ID NO：185、SEQ ID NO：203和SEQ ID NO：221的任一氨基酸序列相比具有一个或多个(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9、10个)保守氨基酸突变(优选置换、插入或缺失)的氨基酸序列；
(b)所述轻链可变区具有SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：23、SEQ ID NO：27、SEQ ID NO：31、SEQ ID NO：35、SEQ IDNO：39、SEQ ID NO：187、SEQ ID NO：205和SEQ ID NO：223给出的氨基酸序列；
或与SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：23、SEQ ID NO：27、SEQ ID NO：31、SEQ ID NO：35、SEQ ID NO：39、SEQ ID NO：187、SEQ ID NO：205和SEQ ID NO：223给出的氨基酸序列具有至少50％、60％、70％、80％、85％、90％、95％或以上同一性的序列，
或与SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：23、SEQ ID NO：27、SEQ ID NO：31、SEQ ID NO：35、SEQ ID NO：39、SEQ ID NO：187、SEQ ID NO：205和SEQ ID NO：223的任一氨基酸序列相比具有一个或多个(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9、10个)保守氨基酸突变(优选置换、插入或缺失)的氨基酸序列。
更优选的，所述重链可变区和轻链可变区选自如下(1)-(13)中的任一种氨基酸序列：
(1)SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：3；
(2)SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：7；
(3)SEQ ID NO：9和SEQ ID NO：11；
(4)SEQ ID NO：13和SEQ ID NO：15；
(5)SEQ ID NO：17和SEQ ID NO：19；
(6)SEQ ID NO：21和SEQ ID NO：23；
(7)SEQ ID NO：25和SEQ ID NO：27；
(8)SEQ ID NO：29和SEQ ID NO：31；
(9)SEQ ID NO：33和SEQ ID NO：35；
(10)SEQ ID NO：37和SEQ ID NO：39；
(11)SEQ ID NO：185和SEQ ID NO：187；
(12)SEQ ID NO：203和SEQ ID NO：205；
(13)SEQ ID NO：221和SEQ ID NO：223。
本发明还保护融合蛋白，其包含上述任一项所述的抗体或其抗原结合片段。
本发明还保护编码上述任一所述的抗siglec15抗体的基因。
优选的，所述基因选自如下(1)～(13)中的任一种：
(1)含有如SEQ ID NO：2所述的编码抗体重链可变区的核苷酸序列，以及如SEQ IDNO：4所示的编码所述抗体轻链可变区的核苷酸序列；
(2)含有如SEQ ID NO：6所述的编码抗体重链可变区的核苷酸序列，以及如SEQ IDNO：8所示的编码所述抗体轻链可变区的核苷酸序列；
(3)含有如SEQ ID NO：10所述的编码抗体重链可变区的核苷酸序列，以及如SEQID NO：12所示的编码所述抗体轻链可变区的核苷酸序列；
(4)含有如SEQ ID NO：14所述的编码抗体重链可变区的核苷酸序列，以及如SEQID NO：16所示的编码所述抗体轻链可变区的核苷酸序列；
(5)含有如SEQ ID NO：18所述的编码抗体重链可变区的核苷酸序列，以及如SEQID NO：20所示的编码所述抗体轻链可变区的核苷酸序列；
(6)含有如SEQ ID NO：22所述的编码抗体重链可变区的核苷酸序列，以及如SEQID NO：24所示的编码所述抗体轻链可变区的核苷酸序列；
(7)含有如SEQ ID NO：26所述的编码抗体重链可变区的核苷酸序列，以及如SEQID NO：28所示的编码所述抗体轻链可变区的核苷酸序列；
(8)含有如SEQ ID NO：30所述的编码抗体重链可变区的核苷酸序列，以及如SEQID NO：32所示的编码所述抗体轻链可变区的核苷酸序列；
(9)含有如SEQ ID NO：34所述的编码抗体重链可变区的核苷酸序列，以及如SEQID NO：36所示的编码所述抗体轻链可变区的核苷酸序列；
(10)含有如SEQ ID NO：38所述的编码抗体重链可变区的核苷酸序列，以及如SEQID NO：40所示的编码所述抗体轻链可变区的核苷酸序列；
(11)含有如SEQ ID NO：186所述的编码抗体重链可变区的核苷酸序列，以及如SEQID NO：188所示的编码所述抗体轻链可变区的核苷酸序列；
(12)含有如SEQ ID NO：204所述的编码抗体重链可变区的核苷酸序列，以及如SEQID NO：206所示的编码所述抗体轻链可变区的核苷酸序列；
(13)含有如SEQ ID NO：222所述的编码抗体重链可变区的核苷酸序列，以及如SEQID NO：224所示的编码所述抗体轻链可变区的核苷酸序列。
更优选的，本发明提供一种抗体，其重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO：1；重链可变区的DNA序列为SEQ ID NO：2；轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO：3；轻链可变区的DNA序列为SEQ ID NO：4。
更优选的，本发明提供一种抗体，其重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO：5；重链可变区的DNA序列为SEQ ID NO：6；轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO：7；轻链可变区的DNA序列为SEQ ID NO：8。
更优选的，本发明提供一种抗体，其重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO：9；重链可变区的DNA序列为SEQ ID NO：10；轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO：11；轻链可变区的DNA序列为SEQ ID NO：12。
更优选的，本发明提供一种抗体，其重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO：13；重链可变区的DNA序列为SEQ ID NO：14；轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO：15；轻链可变区的DNA序列为SEQ ID NO：16。
更优选的，本发明提供一种抗体，其重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO：17；重链可变区的DNA序列为SEQ ID NO：18；轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO：19；轻链可变区的DNA序列为SEQ ID NO：20。
更优选的，本发明提供一种抗体，其重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO：21；重链可变区的DNA序列为SEQ ID NO：22；轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO：23；轻链可变区的DNA序列为SEQ ID NO：24。
更优选的，本发明提供一种抗体，其重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO：25；重链可变区的DNA序列为SEQ ID NO：26；轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO：27；轻链可变区的DNA序列为SEQ ID NO：28。
更优选的，本发明提供一种抗体，其重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO：29；重链可变区的DNA序列为SEQ ID NO：30；轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO：31；轻链可变区的DNA序列为SEQ ID NO：32。
更优选的，本发明提供一种抗体，其重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO：33；重链可变区的DNA序列为SEQ ID NO：34；轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO：35；轻链可变区的DNA序列为SEQ ID NO：36。
更优选的，本发明提供一种抗体，其重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO：37；重链可变区的DNA序列为SEQ ID NO：38；轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO：39；轻链可变区的DNA序列为SEQ ID NO：40。
更优选的，本发明提供一种抗体，其重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO：185；重链可变区的DNA序列为SEQ ID NO：186；轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO：187；轻链可变区的DNA序列为SEQ ID NO：188。
更优选的，本发明提供一种抗体，其重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO：203；重链可变区的DNA序列为SEQ ID NO：204；轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO：205；轻链可变区的DNA序列为SEQ ID NO：206。
更优选的，本发明提供一种抗体，其重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO：221；重链可变区的DNA序列为SEQ ID NO：222；轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO：223；轻链可变区的DNA序列为SEQ ID NO：224。
本发明还保护上述基因的重组载体、表达盒、转基因细胞系或重组菌。
本发明还保护上述重组载体、表达盒、转基因细胞系或重组菌在制备抗siglec15抗体中的应用。
本发明还保护上述任一所述的抗体或其抗原结合片段在如下(a)或(b)中的应用：
(a)抑制癌细胞迁移的药物中的应用；
治疗癌症的药物中的应用。
优选的，所述药物可以与一种或多种药物同时、分开或依次施用。
本发明还保护上述抗体或其抗原结合片段在制备药物中的应用，所述应用为如下(a)或(b)：
(a)检测癌细胞；
(b)结合癌细胞。
更优选的，所述癌为肺癌、肝癌、黑色素瘤、恶性胶质瘤、头颈癌、结肠直肠癌、胃癌、前列腺癌、卵巢癌、膀胱癌、胰腺癌、胃癌、结肠癌、宫颈癌及相关肿瘤。
本发明还保护一种药物组合物，其包含上述任一所述的抗体或其抗原结合片段和可接受的载体、稀释剂或赋形剂。
有益效果
本发明提供的抗siglec15抗体能够特异性地与siglec15结合，促进T细胞的增殖，激活T细胞分泌细胞因子；上述功能接近或超过目前siglec15单抗的水准。
附图说明
图1a和图1b为抗siglec15抗体逆转人siglec15介导的对人T细胞增殖抑制的结果；
图2a和图2b为抗siglec15抗体逆转人siglec15介导的对人T细胞激活抑制的结果；
图3为嵌合单克隆抗体与CHOK1.hS15稳定表达细胞系结合FACS结果；
图4为嵌合单克隆抗体与鼠siglec-his蛋白的结合ELISA结果；
图5为小鼠给药后肿瘤体积的曲线图。
具体实施方式
以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。
提供以下定义以帮助理解本文中阐述的发明。
在本说明书中，“抗体”是指天然的免疫球蛋白或者通过部分或完全合成而制备的免疫球蛋白。抗体可从天然存在该抗体的血浆或血清等的天然资源、或者产生抗体的杂交瘤细胞的培养上清中分离。备选地，可通过使用基因重组等的技术部分或完全地合成。优选的抗体包括，例如，免疫球蛋白的同种型或这些同种型的亚类的抗体。已知人免疫球蛋白包括IgGl、IgG2、IgG3、IgG4、IgAl、IgA2、IgD、IgE、IgM这9种类别(同种型)。在这些同种型中，本发明的抗体可以包括IgGl、IgG2、IgG3、IgG4。
本发明中“Siglec-15”、“siglec-15”、“Siglec15”和“siglec15”等可互换使用，“抗Siglec-15抗体”、“抗siglec-15抗体”、“抗Siglec 15抗体”和“抗siglec15抗体”等可互换使用。
制作具有所需结合活性的抗体的方法是本领域技术人员已知的。下面，例示与属于唾液酸结合免疫球蛋白样凝集素家族的siglec15结合的抗体(抗siglec15抗体)的制作方法。
抗siglec15抗体可以使用公知的方法以多克隆或单克隆抗体的形式获得。作为抗siglec15抗体，可以优选制备来源于哺乳动物的单克隆抗体。这些来源于哺乳动物的单克隆抗体包含由杂交瘤产生的抗体或由宿主细胞所产生的抗体，所述宿主细胞通过基因工程技术用携带抗体基因的表达载体转化。
产生单克隆抗体的杂交瘤，可以通过使用公知技术，例如以如下方式来制作。具体地，使用siglec15蛋白质作为致敏性抗原，按照常规的免疫方法对哺乳动物进行免疫。利用常规的细胞融合法使获得的免疫细胞与公知的亲本细胞相融合。然后，利用常规的筛选法，通过筛选产生单克隆抗体的细胞，可以选择产生抗siglec15抗体的杂交瘤。
具体而言，单克隆抗体的制作例如以如下方式来进行。首先，表达在RefSeq登记号NM_213602.3(SEQ ID NO：181)中公开了其核苷酸酸序列的siglec15基因以产生用于制备抗体的致敏性抗原的RefSeq登记号NP_998767.1(SEQ ID NO：182)所表示的siglec15蛋白质。即，将编码siglec15的基因序列插入到已知的表达载体中，并用该载体转化适当的宿主细胞。用公知的方法从该宿主细胞中或培养上清中纯化所需的人siglec15蛋白质。为了从培养上清中获得可溶型的siglec15，例如，代替SEQ ID NO:182所表达的siglec15蛋白质，使从SEQ ID NO：182所表示的siglec15多肽序列中缺失了构成相当于为了使siglec15锚定于细胞膜上所使用的跨膜序列和胞内序列的264-328氨基酸的蛋白质表达。另外，经纯化的天然的siglec15蛋白质也同样可以用作致敏性抗原。
纯化的siglec15蛋白可被用作致敏性抗原以用于哺乳动物中的免疫。siglec15的部分肽也可被用作致敏性抗原。在此情况中，所述部分肽也可以通过化学合成自人siglec15氨基酸序列获得。此外，其也可以通过将siglec15基因的一部分整合到表达载体中并将其表达而获得。此外，其也可以通过使用蛋白酶将siglec15蛋白降解获得，但是用作部分肽的siglec15肽的区域和尺寸不特别地受限于具体实施方案。作为优选的区域，可以选择来自对应于SEQ ID NO:182的氨基酸序列中的位置24至358处的氨基酸的氨基酸序列的任何序列。组成被用作致敏性抗原的肽的氨基酸的数目为至少五个以上，或优选地例如，六个以上，或七个以上。更具体地，由8至50个残基或优选地10至30个残基组成的肽可被用作致敏性抗原。
备选地，可以将siglec15蛋白质的所需的部分多肽或肽与不同的多肽融合而成的融合蛋白质作为致敏性抗原来利用。为了制备用作致敏性抗原的融合蛋白质，例如可以优选利用抗体的Fc片段和肽标签等。表达融合蛋白质的载体可以通过使编码所需的两种或其以上的多肽片段的基因在符合读框内进行融合，并将该融合基因如上述插入到表达载体中来制作。融合蛋白质的制作方法记载于Molecular Cloning 2nd ed.(Sambrook,J等,Molecular Cloning 2nd ed.,9.47～9.58(1989)Cold Spring Harbor Lab.Press)中。用作致敏性抗原的siglec15的获得方法和使用siglec15的免疫方法也具体地记载于WO2003/000883，WO2004/022754，WO2006/006693中。
作为用该致敏性抗原免疫的哺乳动物，不限于特定的动物。但优选考虑与用于细胞融合的亲本细胞的适合性来进行选择。一般来说优选使用啮齿类的动物如小鼠、大鼠和仓鼠、兔和猴。
按照公知的方法利用致敏性抗原对上述的动物进行免疫。例如，作为一般的方法，通过向哺乳动物的腹腔内、足底或皮下注射给予致敏性抗原来实施免疫。具体地，用PBS(磷酸盐缓冲盐水)，生理盐水等适当稀释致敏抗原。如果需要，将常规佐剂如弗氏完全佐剂与抗原混合，并将混合物乳化。然后，以4至21天的间隔将致敏抗原多次给予哺乳动物。在致敏性抗原的免疫时可以使用适当的载体，特别是在使用分子量较小的部分肽作为致敏性抗原的情况下，将与白蛋白、钥孔虫戚血兰素等的载体蛋白质结合而成的该致敏性抗原肽用于免疫有时也为理想的情况。
另外，产生所需抗体的杂交瘤也可以使用DNA免疫以如下方式来制作。DNA免疫是指，在施用了已在免疫动物中使编码抗原蛋白质的基因能够表达的方式构建的载体DNA的该免疫动物中，通过使致敏性抗原在该免疫动物的活体内表达，而赋予免疫刺激的免疫方法。与对免疫动物施用蛋白质抗原的一般免疫方法相比较，DNA免疫期待以下的优越性：维持siglec15这样的膜蛋白质的结构而能够赋予免疫刺激；以及无需纯化免疫抗原。
为了通过DNA免疫获得本发明的单克隆抗体，首先，对免疫动物施用表达siglec15蛋白质的DNA。编码siglec15的DNA可以通过PCR等公知的方法来合成。所得DNA被插入到适当的表达载体中，并对免疫动物进行施用。作为表达载体，可以适合利用例如PCDNA3.1等市售的表达载体。作为将载体施用到活体内的方法，可以利用通常使用的方法。例如，通过将吸附有表达载体的金颗粒用基因枪导入到免疫动物个体的细胞内来进行DNA免疫。识别siglec15的抗体的制作也可以使用国际公开WO2003/104453所记载的方法来制作。
在如上所述免疫哺乳动物后，在血清中证实了siglec15结合抗体滴度的增加。然后，从哺乳动物收集免疫细胞，然后进行细胞融合。作为优选的免疫细胞，特别是可以使用脾细胞。
作为与上述免疫细胞相融合的细胞，可以使用哺乳动物的骨髓瘤细胞。骨髓瘤细胞优选具备用于筛选的适当的选择标记。选择标记是指在特定的培养条件下能够(或者不能够)存活的特性。公知的选择标记有：缺乏次黄嘌呤-鸟嘌呤-磷酸核糖转移酶(以下省略为缺乏HGPRT)、或者缺乏胸苷激酶(以下省略为缺乏TK)等。具有缺乏HGPRT或TK的细胞具有次黄嘌呤-氨基蝶呤-胸苷敏感性(以下省略为HAT敏感性)。HAT敏感性的细胞虽然在HAT选择培养中不能进行DNA合成而死亡。但如果与正常的细胞相融合，则利用正常细胞的补救途径可以持续DNA的合成，因此在HAT选择培养中也可以增殖。
缺乏HGPRT或缺乏TK的细胞分别可以在含有6-硫鸟嘌呤、8-氮鸟嘌呤、或者5'-溴脱氧尿苷的培养基中选择。将这些嘧啶类似物摄入到DNA中的正常细胞将死亡。同时，不摄入这些嘧啶类似物的、缺乏这些酶的细胞可以在选择培养中存活。此外被称为G418抗性的选择标记通过新霉素抗性基因赋予对2-脱氧链霉胺类抗生素(庆大霉素类似物)的抗性。适合于细胞融合的各种骨髓瘤细胞是公知的。
例如，可以优选使用包括以下细胞的骨髓瘤细胞：P3(P3x63Ag8.653)(J.Immunol.(1979)123(4),1548-1550)；
P3x63Ag8U.1(Current Topics in Microbiology and Immunology(1978)81,1-7)；
NS-1(C.Eur.J.Immunol.(1976)6(7)，511-519)；
MPC-11(Cell(1976)8(3),405-415)；
SP2/0(Nature(1978)276(5685),269-270)；
F0(J.Immunol.Methods(1980)35(1～2),1-21)；
S194/5.XX0.BU.1(J.Exp.Med.(1978)148(1),313-323)；
R210(Nature(1979)277(5692),131-133)等。
基本上是按照公知的方法、例如Kohler和Milstein等人的方法(MethodsEnzymol.(1981)73,3-46)等，来进行上述免疫细胞与骨髓瘤细胞的细胞融合。
更具体而言，例如可以在细胞融合促进剂的存在下，在常规的营养培养液中实施上述细胞融合。融合促进剂包括例如聚乙二醇(PEG)和仙台病毒(HVJ)。根据需要可以添加例如二甲基亚砜等的辅助剂以进一步提高融合效率。
免疫细胞与骨髓瘤细胞的使用比例可以任意设定。例如，相对于骨髓瘤细胞优选使用1～10倍的免疫细胞。作为用于上述细胞融合的培养液，可以使用例如适合于上述骨髓瘤细胞株增殖的RPMI1640培养液、MEM培养液、以及该种的细胞培养中使用的常规的培养液。并且可以适合添加胎牛血清(FCS)等的血清补液。
就细胞融合而言，可以将上述免疫细胞与骨髓瘤细胞的规定量在上述培养液中充分混合。再以通常30％～60％(w/v)的浓度添加预先加热到37℃左右的PEG溶液(例如平均分子量1,000～6,000左右)。通过对混合液进行缓慢混合可以形成所需的融合细胞(杂交瘤)。接着，逐渐添加上述例举的适当培养液到细胞中，并且将其重复离心以除去上清。可以除去不利于杂交瘤生长的细胞融合剂等。
如此获得的杂交瘤可以用常规的选择培养液、例如HAT培养液(含有次黄嘌呤、氨基蝶呤和胸苷的培养液)进行培养来选择。使用上述HAT培养液的培养持续到所需杂交瘤以外的细胞(非融合细胞)死亡的足够时间。通常，所述足够的时间为数天至数周。接着，可以利用常规的有限稀释法实施产生所需抗体的杂交瘤的筛选和单一克隆。
如此获得的杂交瘤可以通过利用基于在细胞融合中使用的骨髓瘤所具有的选择标记的选择培养液来进行选择。例如具有缺乏HGPRT或TK的细胞可以通过用HAT培养液(含有次黄嘌呤、氨基蝶呤和胸苷的培养液)进行培养来选择。即，在将HAT敏感性的骨髓瘤细胞用于细胞融合的情况下，在HAT培养液中，与正常细胞成功进行细胞融合的细胞可以选择性地增殖。使用上述HAT培养液的培养持续到使所需杂交瘤以外的细胞(非融合细胞)死亡的足够时间。具体而言，通常可以通过数天至数周的培养，选择所需的杂交瘤。接着，可以利用常规的有限稀释法实施产生所需抗体的杂交瘤的筛选和单一克隆。
可以通过基于抗原抗体反应的公知筛选方法来实施所需抗体的筛选和单一克隆。例如，结合于siglec15的单克隆抗体，可以结合于在细胞表面表达的siglec15。这样的单克隆抗体，例如可以通过荧光激活细胞分选术(FACS)进行筛选。FACS是指通过用激光分析与荧光抗体接触的细胞，测定各细胞所发出的荧光进而使结合于细胞表面的抗体的测定成为可能的系统。
为了通过FACS对产生本发明的单克隆抗体的杂交瘤进行筛选，首先制备表达siglec15的细胞。用于筛选的优选细胞为强制表达siglec15的哺乳动物细胞。用作对照，可以使用未转化的哺乳动物细胞作为宿主细胞来选择性地检测对细胞表面的siglec15的抗体的结合活性。即，通过选择产生不结合于宿主细胞、结合于强制表达siglec15的细胞的抗体的杂交瘤，可以获得产生siglec15抗体的杂交瘤。
备选地，抗体对于固定的表达siglec15的细胞的结合活性可以基于ELISA的原理进行评价。例如，使表达siglec15的细胞固定在ELISA板的孔内。通过使杂交瘤的培养上清与孔内的固定的细胞相接触，来检测结合于固定细胞上的抗体。当单克隆抗体为小鼠由来的情况下，结合于细胞上的抗体可以通过抗小鼠免疫球蛋白抗体来检测。通过上述筛选而选择的、具有抗原结合能的、产生所需抗体的杂交瘤，可以通过有限稀释法等进行克隆。
如此制作的产生单克隆抗体的杂交瘤可以在常规的培养液中继代培养。另外，该杂交瘤可以在液态氮中长期保存。
将该杂交瘤按照常规的方法进行培养，可以从其培养上清中获得所需的单克隆抗体。或者将杂交瘤施用于与其具有适应性的哺乳动物并进行增殖，可以从其腹水中获得单克隆抗体。前者的方法适合于获得高纯度的抗体。
由从该杂交瘤等的抗体产生细胞克隆的抗体基因所编码的抗体也可以被适合地利用。通过将克隆的抗体基因插入到适当的载体并导入到宿主中，由该基因所编码的抗体得以表达。用于抗体基因的分离、向载体插入基因、以及宿主细胞的转化的方法，例如通过Vandamme等人已经确立(Eur.J.Biochem.(1990)192(3),767-775)。如下所述，重组抗体的制备方法也是公知的。
例如，可以从表达抗siglec15抗体的杂交瘤细胞中制备编码抗siglec15抗体的可变区(V区)的cDNA。为此，通常先从杂交瘤中提取总RNA。作为用于从细胞提取mRNA的方法，可以利用例如以下所述的方法：
胍超速离心法(Biochemistry(1979)18(24),5294-5299)；和AGPC法(Anal.Biochem.(1987)162(1),156-159)。
所提取的mRNA可以使用mRNA提纯试剂盒(GE Healthcare Bioscience)等来进行纯化。或者，如QuickPrep mRNA提纯试剂盒(GE Healthcare Bioscience)等这样的用于从细胞直接提取总mRNA的试剂盒也得以市售。可以使用这样的试剂盒从杂交瘤中获得mRNA。可以使用逆转录酶由所制备的mRNA合成编码抗体V区的cDNA。cDNA可以使用AMV ReverseTranscriptase First-strand cDNA Synthesis Kit(生化学工业社)等来合成。另外，为了合成和扩增cDNA，可以适当利用SMART RACE cDNA扩增试剂盒(Clontech)和基于PCR的5'-RACE法(Proc.Natl.Acad.Sci.USA(1988)85(23),8998-9002；Nucleic Acids Res.(1989)17(8),2919-2932)。并且，在这样的cDNA的合成的过程中，可以在cDNA的两末端导入后述的适当的限制酶位点。
由所得PCR产物纯化作为目标的cDNA片段，接着使其与载体DNA相连接。如此，重组载体得以制作，将其导入到大肠杆菌等中。选择菌落后，可以由形成该菌落的大肠杆菌制备所需的重组载体。而且，关于该重组载体是否具有作为目标的cDNA核苷酸序列，可以利用公知的方法、例如双脱氧核苷酸链终止法等来确认。
为了分离编码可变区的基因，利用使用了可变区基因扩增用引物的5'-RACE法是简便的。首先以由杂交瘤细胞提取的RNA为模板合成cDNA,获得5'-RACE cDNA文库。可以适当使用SMART RACE cDNA扩增试剂盒等市售的试剂盒来合成5'-RACE cDNA文库。
以所得5'-RACE cDNA文库为模板，通过PCR法扩增抗体基因。基于公知的抗体基因序列可以设计小鼠抗体基因扩增用引物。这些引物的核苷酸序列依赖于免疫球蛋白的亚类而不同。因此，优选地是预先使用Iso Strip小鼠单克隆抗体同种型试剂盒(RocheDiagnostics)等的市售试剂盒来决定亚类。
具体而言，可以利用能够扩增编码作为重链的Y1、Y 2a、Y 2b、Y 3作为轻链的k链和&链的基因的引物以分离编码小鼠IgG的基因。为了扩增IgG的可变区基因，通常可以利用在与可变区相近的恒定区位点退火的引物作为3'侧引物。另一方面，连接到5'RACE cDNA文库构建试剂盒的引物用作5'侧引物。
利用如此扩增的PCR产物，可以重构由重链和轻链的组合而组成的免疫球蛋白。以重构的免疫球蛋白的siglec15结合活性为指标，可以筛选所需的抗体。例如以分离对抗siglec15的抗体为目的时，进一步优选的是抗体与siglec15的结合为特异性的。与siglec15结合的抗体例如可以通过以下步骤进行筛选：
(1)将含有由杂交瘤分离的cDNA所编码的V区的抗体与表达siglec15的细胞相接触；
(2)检测表达siglec15的细胞与抗体结合；和
(3)选择与表达siglec15的细胞结合的抗体。
检测抗体与表达siglec15的细胞结合的方法是公知的。具体而言，能够通过前面所述的FACS等技术检测到抗体与表达siglec15的细胞的结合。为了评价抗体的结合活性可以适当利用表达siglec15的细胞的固定样品。
作为以结合活性为指标的抗体的筛选方法还包括使用噬菌体载体的淘选方法。在抗体基因是从表达多克隆抗体的细胞群的重链和轻链亚类文库分离的情况下，利用噬菌体载体的筛选方法是有利的。编码重链和轻链的可变区的基因可以通过用适当的接头序列进行连接来形成单链Fv(scFv)。通过将编码scFv的基因插入到噬菌体载体可以获得scFv呈现于表面的噬菌体。该噬菌体与目的抗原接触。通过收集与抗原结合的噬菌体，可以分离编码具有目标结合活性的scFv的DNA。根据需要重复该过程，可以浓缩具有所需结合活性的scFv。
分离编码目标抗siglec15抗体的V区的cDNA后，通过识别插入到该cDNA两末端的限制酶位点的限制酶来消化该cDNA。优选的限制酶识别并切割出现在抗体基因的核苷酸序列中的频率低的核苷酸序列。并且优选将赋予粘性末端的限制酶切位点导入到载体中以将单拷贝的消化片段以正确的方向插入。如上所述消化编码抗siglec15抗体的V区的cDNA，并将其插入合适的表达载体中以构建抗体表达载体。在这种情况下，如果编码抗体恒定区(C区)的基因和编码上述V区的基因符合读框地融合，则获得嵌合抗体。本文中，“嵌合抗体”是指恒定区的起点不同于可变区的起点的抗体。因此，除了小鼠-人等的异种嵌合抗体之外，人-人同种嵌合抗体也包含在本发明的嵌合抗体中。通过向已经具有恒定区的表达载体中插入上述V区基因，可以构建嵌合抗体表达载体。具体地，例如，切除上述V区基因的限制酶的识别序列可以适当地置于携带编码所需抗体恒定区(C区)的DNA的表达载体的5'侧。通过使利用相同组合的限制酶消化的两基因符合读框的融合来构建嵌合抗体表达载体。
为了制备抗siglec15抗体，抗体基因被插入到表达载体中使所述基因在表达控制区的控制下表达。用于表达抗体的表达控制区包含例如增强子和启动子。另外，可以在氨基末端附加适当的信号序列使得表达的抗体分泌到细胞外。此外还附接其他适合的信号序列。所表达的多肽在上述序列的羧基末端部分被切割，并且产生的多肽可以作为成熟多肽分泌到细胞外。接着，通过用该表达载体来转化适当的宿主细胞，可以获得表达编码抗siglec15抗体的DNA的重组细胞。
为了表达抗体基因，编码抗体重链(H链)和轻链(L链)的DNA分别被插入到不同的表达载体中。通过用插入有H链和L链的载体共转染相同的宿主细胞，可以表达具备H链和L链的抗体分子。或者能够利用其中插入编码H链和L链的DNA的单一表达载体转化宿主细胞(参照国际公开WO94/11523)。
通过将所分离的抗体基因导入到适当的宿主用来制备抗体的宿主细胞/表达载体的各自组合是公知的。这些表达系统均可以应用于包含本发明的抗体可变区的结构域的分离。用作宿主细胞的适当的真核细胞包括动物细胞、植物细胞、或者真菌细胞。具体而言，动物细胞包括例如以下细胞：
(1)哺乳类细胞：CHO、COS、骨髓瘤、幼仓鼠肾(BHK)、Hela、Vero等；
(2)两栖类细胞：非洲爪蟾卵母细胞等；和
(3)昆虫细胞：sf9、sf21、Tn5等。
此外，作为植物细胞，使用来源于烟草(Nicotiana)属如烟草(Nicotianatabacum)的细胞的抗体基因表达系统是已知的。愈伤组织培养的细胞可以适当地用于转化植物细胞。
此外，以下细胞可用作真菌细胞：
酵母：酵母属(Saccharomyces)如酿酒酵母(Saccharomyces serevisiae)、毕赤酵母属(Pichia)如巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)；
丝状真菌：曲霉属(Aspergillus)如黑曲霉(Aspergillus niger)。
另外，利用原核细胞的抗体基因表达系统也是公知的。例如，使用细菌细胞的情况下，可以适当利用大肠杆菌(E.coli)、枯草杆菌等的细菌细胞。通过转化向这些细胞中导入包含目标抗体基因的表达载体。通过将所转化的细胞在体外进行培养，可以从该转化细胞的培养物中获得所需的抗体。
除了上述宿主细胞外，转基因动物也可用于产生重组抗体。即，从导入了编码所需抗体的基因的动物可以获得该抗体。例如，抗体基因可以通过符合读框的插入到编码乳汁中固有产生的蛋白质的基因的内部来构建融合基因。作为分泌到乳汁中的蛋白质，可以利用例如山羊B酪蛋白等。含有插入了抗体基因的融合基因的DNA片段被注入到山羊的胚胎中，并且然后该胚胎被导入到雌性山羊体内。由接受了胚胎的山羊生出转基因山羊，从该转基因山羊(或其后代)产生的乳汁中可以作为与乳汁蛋白质的融合蛋白质获得所需抗体。另外，为了使转基因山羊产生的含有所需抗体的乳汁量增加，可以对转基因山羊施用激素(Ebert,K.M等，Bio/Technology(1994),12(7),699-702)。
当将本文中所述的抗原结合分子施用于人时，来源于已被人工修饰而减小针对人等的异源抗原性的遗传重组抗体的结构域可被合适地用作包含抗体可变区的抗原结合分子的结构域。此种遗传重组的抗体包括，例如，人源化抗体。这些经修饰的抗体通过已知方法被合适地制备。
用于产生包括本文所述的抗体可变区的抗原结合分子的结构域的抗体可变区通常由三个互补决定区(CDR)形成，所述三个互补决定区由四个框架区(FR)分开。CDR实质上是决定抗体的结合特异性的区。CDR的氨基酸序列富有多样性。另一方面，构成FR的氨基酸序列，即使在具有不同的结合特异性的抗体之间，也大多显示出高的同一性。因此，通常认为通过移植CDR可以将某抗体的结合特异性移植到其他抗体。
人源化抗体也被称为重构(reshaped)人抗体。具体而言，将非人动物抗体、例如小鼠抗体的CDR移植到人抗体的人源化抗体等是公知的。也已知为了获得人源化抗体的常规的基因重组方法。具体而言，作为将小鼠的抗体的CDR移植到人的FR的方法，例如重叠序列延伸PCR(overlap extension PCR)是公知的。在重叠序列延伸PCR中，在用于合成人抗体的FR的引物上附加编码想要移植的小鼠抗体CDR的核苷酸序列。对于4个FR分别准备引物。通常认为当将小鼠CDR移植到人FR中时,选择与小鼠的FR同一性高的人FR对于维持CDR的功能是有利的。即，通常优选利用包含与想要移植的小鼠CDR相邻的FR的氨基酸序列同一性高的氨基酸序列的人FR。
另外，要连接的核苷酸序列设计成相互符合读框的相接连。利用各自的引物合成各自的人FR。其结果，获得在各FR上附加了编码小鼠CDR的DNA的产物。各产物的编码小鼠CDR的核苷酸序列设计成相互重叠。然后，进行互补链合成反应以使用人抗体基因作为模板使合成的产物的重叠CDR区退火。经由该反应通过小鼠CDR序列连接人FR。
使用与其5'或3'末端退火的引物(其添加有合适的限制酶识别序列)扩增其中最终连接三个CDR和四个FR的全长V区基因。人源化抗体的表达载体可以通过将如上所述获得的DNA和编码人抗体C区的DNA插入表达载体中以使它们符合读框地连接来产生。将重组载体转染宿主以建立重组细胞后，培养重组细胞，表达编码人源化抗体的DNA，在细胞培养物中产生人源化抗体(参见欧洲专利公开号EP239400和国际专利公开号WO1996/002576)。
通过定性或定量测量和评估如上所述产生的人源化抗体的抗原结合活性,可以适当地选择人抗体FR，其允许CDR在通过CDR连接时形成有利的抗原结合位点。FR中的氨基酸残基可以根据需要被置换，使得重构的人抗体的CDR形成合适的抗原结合位点。例如，通过应用用于将小鼠CDR移植到人FR中的PCR方法，可以将氨基酸序列突变引入FR。具体而言，可以将部分核苷酸序列突变导入到FR退火的引物中。核苷酸序列突变被导入到利用这样的引物合成的FR中。通过将取代了氨基酸的突变型抗体的抗原结合活性利用上述的方法进行测定和评估，可以选择具有所需性质的突变FR序列(Sato,K.等,Cancer Res,1993,53,851-856)。
备选地，将具有人抗体基因的所有组成成分(repertorie)的转基因动物(参照国际专利公开号WO1993/012227，WO1992/003918，WO1994/002602，WO1994/025585，WO1996/034096，WO1996/033735)作为免疫动物，通过DNA免疫可以获得所需的人抗体。
此外，还已知使用人抗体文库通过淘选制备人抗体的技术。例如，通过噬菌体展示方法将人抗体的V区表达为噬菌体表面上的单链抗体(scFv)。可以选择表达与抗原结合的scFv的噬菌体。编码与抗原结合的人抗体V区的DNA序列可以通过分析所选噬菌体的基因来确定。测定与抗原结合的scFv的DNA序列。通过使该V区序列与所需人抗体C区的序列符合读框的融合并且插入到适当的表达载体中，能够制作表达载体。将表达载体导入适于表达的细胞，例如上述那些。可以通过在细胞中表达人编码抗体的基因来产生人抗体。这些方法是已经公知的(参照国际专利公开号WO1992/001047，WO1993/006213，WO1993/011236，WO1993/019172，WO1995/001438，WO1995/015388)。
包含具有siglec15结合活性的抗体可变区的结构域。
本文中，短语“包含具有siglec15结合活性的抗体可变区的结构域”是指以下抗体部分，其包含特异性结合上述siglec15蛋白或siglec15蛋白的部分肽的全部或部分并且还与其互补的区域。可以从一种或多种抗体的可变结构域提供包含抗体可变区的结构域。优选地，包含抗体可变区的结构域包含抗体轻链和重链可变区(VL和VH)。此种包含抗体可变区的结构域的合适的实例包括“单链Fv(scFv)”、“单链抗体”、“Fv”、“单链Fv2(scFv2)”、“Fab”、“F(ab’)2”等。
本发明的抗原结合分子中的含抗体可变区的结构域可以结合相同的表位。本文中，相同的表位可以存在于包含SEQ ID NO：182氨基酸序列的蛋白质中。备选地，本发明的抗原结合分子中的含抗体可变区的结构域可以分别结合不同的表位。本文中，不同的表位可以存在于包含SEQ ID NO：182的氨基酸序列的蛋白质中。
更加优选的，本申请一种抗siglec15抗体或其抗原结合片段，所述抗体结合表位，所述表位全部或部分包含在SEQ ID NO：183或SEQ ID NO：184所述的氨基酸序列内。
特异性
“特异性”表示参与特异性结合的分子之一不显示任何与不同于结合伙伴分子中的一个或数个的分子的显著结合。此外，在含抗体可变区的结构域对抗原中的多个表位中的特定表位具有特异性时，也使用该术语。当含抗体可变区的结构域所结合的表位被包含在数个不同抗原中时,包含含抗体可变区的结构域的抗原结合分子可以结合具有所述表位的各种抗原。
表位
“表位”意指抗原中的抗原决定簇，并且是指在本说明书中公开的包含抗体可变区的抗原结合分子的结构域所结合的抗原位点。因此，例如可以根据其结构来定义表位。另外，也可以根据识别该表位的抗原结合分子中的抗原结合活性来定义该表位。当抗原是肽或多肽时，表位可以由形成表位的氨基酸残基指定。或者，当表位是糖链时，表位可以通过其特定的糖链结构来确定。
线性表位是含有其一级氨基酸序列被识别的表位。这种线性表位通常在其特定序列中含有至少三个，最常见的至少五个，例如约8至10或6至20个氨基酸。
与线性表位相反，“构象表位”是其中含有表位的一级氨基酸序列不是识别的表位的唯一决定簇的表位(例如，构象表位的一级氨基酸序列不一定被表位限定抗体识别)。与线性表位相比，构象表位可含有更多数量的氨基酸。构象表位识别抗体识别肽或蛋白质的三维结构。例如，当蛋白质分子折叠并形成三维结构时，形成构象表位的氨基酸和/或多肽主链变得对齐，并且表位可被抗体识别。用于确定表位构象的方法包括例如X射线晶体学，二维核磁共振，位点特异性自旋标记和电子顺磁共振，但不限于此。例如参考下面举例说明用于确认测试抗原结合分子与表位结合的方法，所述测试抗原结合分子包含含有具有siglec15结合活性的抗体可变区的结构域，以及也可以根据下面的实施例适当地进行确认测试抗原结合分子与表位结合的方法。
例如，下面可以确认包含含有具有siglec15结合活性的抗体可变区的结构域的测试抗原结合分子对siglec15分子中存在的线性表位的识别。为了上述目的，合成包含构成siglec15细胞外结构域的氨基酸序列的线性肽。所述肽可以是化学合成的。备选地，其可以通过使用编码对应于胞外结构域的氨基酸序列的siglec15的cDNA中的区域的遗传工程方法获得。接下来，评估包含构成细胞外结构域的氨基酸序列的线性肽和包含含有具有siglec15结合活性的抗体可变区的结构域的测试抗原结合分子之间的结合活性。例如，使用固定的线性肽作为抗原的ELISA能够评估抗原结合分子对肽的结合活性。备选地,可以基于线性肽在抗原结合分子与表达siglec15的细胞的结合中引起的抑制水平来阐明对线性肽的结合活性。这些测试可以阐明抗原结合分子对线性肽的结合活性。
此外，以下可以确认包含含有具有siglec15结合活性的抗体可变区的结构域的测试抗原结合分子对表位的三维结构的识别。制备表达siglec15的细胞以用于上述目的。例如，当包含含有具有siglec15结合活性的抗体可变区的结构域的测试抗原结合分子接触表达siglec15的细胞时，其与所述细胞紧密结合，但是另一方面，存在这样的情况，其中抗原结合分子基本上不结合固定的包含构成siglec15的胞外结构域的氨基酸序列的线性肽。在这些情况中，“基本上不结合”是指，相对于对表达人siglec15的细胞的结合活性，结合活性为80％以下，通常为50％以下,优选为30％以下，并且特别优选为15％以下。
作为测定含有siglec15抗原结合结构域的测试抗原结合分子与表达siglec15的细胞的结合活性的方法，例如可以举出：Antibodies：A Laboratory Manual记载的方法(EdHarlow,David Lane,Cold Spring Harbor Laboratory(1988)359-420)。BR，可以基于使用表达siglec15的细胞为抗原的ELISA或荧光激活细胞分选术(FACS)的原理进行评价。
在ELISA格式中，含有siglec15抗原结合结构域的测试抗原结合分子与表达siglec15的细胞的结合活性可以通过比较由酶反应生成的信号水平来定量地进行评价。即，在固定有表达siglec15的细胞的ELISA板上加入测试抗原结合分子。然后，利用识别测试抗原结合分子的酶标记抗体检测与细胞结合的测试抗原结合分子。或者，当使用FACS时,制备测试抗原结合分子的稀释系列，可以确定表达siglec15的细胞的抗体结合效价，以比较测试抗原结合分子对表达siglec15的细胞的结合活性。
可以使用流式细胞仪检测测试抗原结合分子与悬浮在缓冲液等中的细胞表面上表达的抗原的结合。作为流式细胞仪，已知例如以下的装置：
FACSCantoTMII；FACSAriaTM；FACSArrayTM；FACSVantageTM SE；FACSCaliburTM(均为BD Biosciences的商品名)；EPICS ALTRA HyPerSort；Cytomics FC 500；EPICS XL-MCLADC EPICS XL ADC；Cell Lab Quanta/Cell Lab Quanta SC(均为Beckman Coulter的商品名)。
用于测定含有siglec15抗原结合结构域的测试抗原结合分子对抗原的结合活性的优选方法包括，例如，以下方法。首先，使表达siglec15的细胞与测试抗原结合分子反应，然后用识别多肽复合物的FITC标记的第二抗体染色。用合适的缓冲液适当稀释测试抗原结合分子，以制备所需浓度的复合物。例如，以l0ug/ml至10ng/ml之间的任意浓度来使用。接着，使用FACS Calibur(BD)测定荧光强度和细胞计数。通过使用CELL QUEST软件(BD)分析获得的荧光强度，即几何平均值，反映了与细胞结合的抗体的量。也就是说，测试抗原结合分子的结合活性(由结合的测试抗原结合分子的量表示)可以通过测量几何平均值来确定。
可以基于两个复合物之间对相同表位的竞争来评估含有siglec15抗原结合结构域的测试抗原结合分子是否与另一个抗原结合分子共享共同表位。抗原结合分子之间的竞争由交叉阻断测定等来检测。例如，竞争性ELISA测定是优选的交叉阻断测定。
具体地，在交叉阻断测定中，将固定在微量滴定板孔中的siglec15蛋白在存在或不存在候选竞争物抗原结合分子的情况下预温育，然后向其中加入测试抗原结合分子。在孔中与siglec15蛋白结合的测试抗原结合分子的量与竞争结合相同表位的候选竞争物抗原结合分子的结合能力间接相关。即，竞争物抗原结合分子与相同表位的亲和力越大，测试抗原结合分子与包被有siglec15蛋白质的孔的结合活性越降低。
经由siglec15蛋白质与孔结合的测试抗原结合分子的量能通过预先标记抗原结合分子容易地测定。例如，使用抗生物素蛋白/过氧化物酶缀合物和适当的底物测定生物素标记的抗原结合分子。利用过氧化物酶等的酶标记的交叉阻断测定特别被称为“竞争性ELISA测定”。抗原结合分子能够利用能被检测或者测量的其他标记物质来标记。具体而言，放射标记或者荧光标记等是公知的。
在不存在竞争物抗原结合分子的情况下进行的对照实验中的结合活性相比，当候选竞争物抗原结合分子能将含有siglec15抗原结合结构域的测试抗原结合分子的结合阻断至少20％，优选至少20至50％，更优选至少50％时，确定测试抗原结合分子基本上结合竞争物抗原结合分子结合的相同表位，或竞争结合相同表位。
当已经鉴定出由含有siglec15抗原结合结构域的测试抗原结合分子结合的表位的结构时，可以通过比较测试和对照抗原结合分子针对通过将氨基酸突变导入形成表位的肽中而制备的肽的结合活性来评估这两种抗原结合分子是否共享共同表位。
为了测量上述结合活性，例如，在上述ELISA形式中比较测试和对照抗原结合分子对导入突变的线性肽的结合活性。除了ELISA方法之外,还可以通过在柱中流动测试和对照抗原结合分子，然后定量在洗脱溶液中洗脱的抗原结合分子来确定对与柱结合的突变肽的结合活性。用于将突变肽吸附到柱上的方法，例如，以GST融合肽的形式，是已知的。
备选地，当鉴定的表位是构象表位时，可以通过以下方法评估测试和对照抗原结合分子是否共享共同表位。首先，制备表达siglec15的细胞和表达具有导入表位的突变的siglec15的细胞。将测试和对照抗原结合分子加入到通过将这些细胞悬浮在合适的缓冲液如PBS中制备的细胞悬浮液中。然后，用缓冲液适当洗涤细胞悬浮液，并向其中加入识别测试和对照抗原结合分子的FITC标记的抗体。使用FACS Calibur(BD)测定荧光强度和用标记抗体染色的细胞数。使用合适的缓冲液适当稀释测试和对照多肽复合物，并以所需浓度使用。例如，它们可以以l0ug/ml至10ng/ml的浓度使用。通过使用CELL QUEST软件(BD)分析确定的荧光强度，即几何平均值,反映了与细胞结合的标记抗体的量。也就是说，测试和对照抗原结合分子的结合活性(由结合的标记抗体的量表示)可以通过测量几何平均值来确定。
在上述方法中，抗原结合分子是否“基本上不与表达突变体siglec15的细胞结合”可以通过例如以下方法评估。首先，用标记的抗体染色与表达突变体siglec15的细胞结合的测试和对照抗原结合分子。然后，确定细胞的荧光强度。当FACS Calibur用于通过流式细胞术进行荧光检测时，可以使用CELL QUEST软件分析测定的荧光强度。根据存在和不存在抗原结合分子的几何平均值，可以根据下式计算比较值(δGeo-平均)，以确定由于抗原结合分子结合的结果荧光强度增加的比率。
δGeo-平均＝Geo-平均(在抗原结合分子存在下)/Geo-平均(在不存在抗原结合分子的情况下)
通过上述分析确定的几何平均值比较值(突变体siglec15分子的δGeo-平均)(反映了与表达突变体siglec15的细胞结合的测试抗原结合分子的量)与δGeo-平均比较值(反映了与表达siglec15的细胞结合的测试抗原结合分子的量)进行比较。在这种情况下，用于确定表达siglec15的细胞和表达突变体siglec15的细胞的δGeo-平均比较值的测试抗原结合分子的浓度特别优选调整为相等或基本相等。已经证实识别siglec15中的表位的抗原结合分子用作对照抗原结合分子。
如果表达突变体siglec15的细胞的测试抗原结合分子的δGeo-平均比较值小于表达siglec15的细胞的测试抗原结合分子的δGeo-平均比较值至少80％，优选50％，更优选30％，特别优选15％，则测试多肽复合物“基本上不与表达突变体siglec15的细胞结合”。用于确定Geo-平均(几何平均)值的公式在CELL QUEST软件用户指南(BD biosciences)中描述。当比较显示比较值基本相等时，可以确定测试和对照抗原结合分子的表位相同。
可变片段(Fv)
本文中，术语“可变片段(Fv)”是指抗体衍生的抗原结合结构域的最小单位，其由一对抗体轻链可变区(VL)和抗体重链可变区(VH)构成。1988年，Skerra和Pluckthun发现，通过在细菌信号序列下游插入抗体基因并在大肠杆菌中诱导该基因的表达，可以从大肠杆菌周质部分制备同源和活性抗体(Science(1988)240(4855),1038-1041)。在由周质级分制备的Fv中，VH以与抗原结合的方式与VL结合。
在此，Fv优选包括，例如，一对作为抗原结合分子等的Fv，其包含：
scFv，单链抗体和sc(Fv)2
本文中，术语“scFv”，“单链抗体”和“sc(Fv)2”均指单个多肽链的抗体片段，其含有源自重链和轻链的可变区，但没有恒定区。通常，单链抗体还在VH和VL结构域之间含有多肽接头，这使得能够形成被认为允许抗原结合的所需结构oPluckthun在"ThePharmacology of Monoclonal Antibodies,Vol.113,Rosenburg and Moore,eds.,Springer-Verlag,New York,269-315(1994)"中详细讨论了单链抗体。还参见国际专利公开WO 1988/001649；美国专利号US4,946,778和US5,260,203。在具体实施方案中，单链抗体可以是双特异性的和/或人源化的。
本发明的BMK1选自专利CN110035769A中siglec15结合分子5G12。
以下通过更具体的实施例来说明本发明。
实施例1：动物免疫
用重组人siglec15-Fc蛋白(Acro，Cat：SG5-H5253)作为免疫原，免疫SD大鼠，为避免大鼠反应不佳或免疫过程中死亡，可同时免疫3～4只。提前3天采取阴性血清，首次免疫，以皮下免疫、腹腔免疫和足底免疫方式多点注射60μg经弗氏完全佐剂充分乳化的重组人siglec-Fc蛋白，第12天以皮下免疫和足底免疫方式多点注射30μg经弗氏完全佐剂充分乳化的重组人siglec15-Fc蛋白进行二次免疫，两周后、再两周后以二次免疫相同的方式注射30μg免疫原进行第四次免疫。6天后，通过在1：100至1：1000000的不同稀释度下，在重组人siglec15-Fc蛋白包被的ELISA板中对从尾部放血收集的血清进行试验来评估抗血清滴度。当效价结果满足要求，在>1：1000000的稀释度下检测到抗人siglec15抗体时，可收获大鼠脾脏和淋巴结，进行细胞融合。
实施例2：细胞融合
骨髓瘤细胞SP2/0(ATCC)于融合前一天将细胞传代，使实验时细胞处于对数生长期，融合前将细胞收集于离心管中，经100转/分离心8分钟，弃上清液并加入10mL无血清1640培养基将细胞混匀备用。实验用B淋巴细胞和淋巴结细胞取自经重组人siglec15-Fc蛋白四次免疫的SD大鼠，融合前将大鼠处死取出脾脏和淋巴结，加入10mL无血清1640培养基将细胞压磨过网，得细胞悬液经1000转/分离心8分钟，弃上清液并加入无血清1640培养基将细胞混匀备用。融合体选择培养中所用的饲养细胞取自未经免疫的动物腹腔中的巨噬细胞；融合前将收集的巨噬细胞悬液经100转/分离心8分钟，弃上清液并加入25mL HAT选择培养基混匀，分装于2块24孔培养板中，以辅助新的杂种—B淋巴细胞杂交瘤生长。
将B淋巴细胞和骨髓瘤细胞按1:1混合，将其悬浮液以1000转/分离心8分钟，取沉淀，用PM液洗两次。再取沉淀加PM液至1.2mL，向三个多电极小池各注入0.4mL细胞悬浮液。对每个电极小池依次施加如下电场条件：电介质电泳之交流电场——正弦信号频率为1MHz，振幅为250V/cm，施加30秒钟；然后立即加穿孔RC电脉冲——幅度为5kV/cm，脉冲宽度为20μs，脉冲个数为3，时间间隔为l秒钟。室温下静置10分钟，再用总量为5mL的PFM液将融合物冲洗取出，于37℃温育30分钟。然后经100转/分离心8分钟，取沉淀，加入250ml HAT混匀并分注于24孔培养板(己有饲养细胞104个/孔)，放入CO2培养箱于37℃培养。
实施例3：间接ELISA方法筛选阳性克隆
采用间接ELISA方法筛选阳性细胞克隆。方阵试验确定检测抗原人siglec15-his蛋白(Acro或Sino；Cat：SG5-H52H3、Cat：13976-H08H)、鼠siglec15-his蛋白(Acro；Cat：SG5-H52H7)、猴siglec15-his蛋白(Acro；Cat：SG5-C52H6)的包被浓度。检测抗原包被缓冲液横向梯度稀释，每孔50μL包被ELISA板，4℃过夜；PBST洗涤3次，每孔加入200μL封闭液，4℃过夜；免疫鼠血清纵向倍比稀释，每孔50μL，正常大鼠血清同样倍数稀释作为阴性对照，37℃孵育2h；用PBST洗第三次，加入工作浓度的酶标二抗，每孔50μL，37℃孵育1.5h，PBST洗涤后，TMB显色，酶联检测仪测定OD450的值，判定检测抗原的最佳包被浓度。
采用建好的间接ELISA方法检测杂交瘤细胞分泌的抗体情况。具体方法如下：将杂交瘤细胞培养上清加入预先包被好的ELISA板中，50μL/孔，以SP2/0细胞上清作为阴性对照，免疫多抗血清作为阳性对照，37℃水浴2h；PBST洗涤3次；加入工作浓度的HRP标记的羊抗鼠IgG和IgM抗体，50μL/孔，37℃水浴1.5h；洗涤后，TMB显色10min，显示终止后酶标仪测定OD450读数。被测孔OD450读数大于阴性对照两倍以上判定为阳性。
实施例4：FACS方法进一步筛选阳性克隆
用携带人siglec15、猴siglec15或小鼠siglec15的慢病毒载体转导入CHOK1和小鼠MC38肿瘤细胞系。分选细胞以建立人siglec15、猴siglec15和小鼠siglec15稳定表达细胞系，CHOK1.hS15、CHOK1.cS15和MC38.mS15。分别将100μL FACS缓冲液中的1×105个稳定表达细胞等分至独立的管中，并添加100uL融合上清。将细胞在4℃下孵育30分钟，然后用过量FACS缓冲液洗涤两次。将细胞重新悬浮于100μL FACS缓冲液中，并将0.005μg抗鼠IgG-PE二抗添加到样品中，孵育30分钟并用过量FACS缓冲液洗涤两次。将细胞在固定缓冲液中固定，随后通过流式细胞术进行分析。FACS方法筛选出与人siglec15特异性结合，且与鼠、猴有种属交叉反应的抗体。
采用两轮有限稀释法进行杂交瘤细胞的单克隆化，通过ELISA和FACS检测方法确定亚克隆细胞产生抗体与人、鼠、猴siglec15蛋白的亲和力。
实施例5：抗体的生产和纯化
获得稳定的杂交瘤细胞系后，主要采用体外培养法获取单抗。将细胞株扩增至在T75培养瓶内，培养至细胞覆盖率为80-90％，将细胞上清液弃去，加入30mL杂交瘤-SFM(Gibco)，37℃，5％CO2培养。培养2-3天后添加30mL杂交瘤-SFM，细胞活率低于30％则可添加新鲜的活细胞。培养6-7天，待细胞存活率低于20％，低速离心后收集培养上清，4℃储存备用。
用rProteinA sepharose Fast Flow(GE公司)亲和层析柱纯化抗体：①装柱，将购买的ProteinA填料适量装于重力层析柱中用平衡缓冲液(0.1M Tris溶液，pH7.0)冲洗至平衡；②上样，将经过0.22μm滤膜过滤的杂交瘤细胞培养上清加入装好的层析柱中，控制流速1滴/秒；③平衡，上完样液后使用平衡缓冲液冲洗至平衡；④洗脱，加入洗脱缓冲液(0.1M柠檬酸溶液，pH3.0)冲洗柱子并收集洗脱液；⑤再生，洗脱完成后加入平衡缓冲液冲洗柱子至平衡，2倍柱体积的20％乙醇冲洗后置于4℃保存。最后采用SDS-PAGE法鉴定抗体纯度，紫外微量分光光度计法测定抗体浓度。
实施例6：单克隆抗体亚型鉴定
将免疫原溶液稀释成1μg/mL包被酶标板，每孔加100μL，4℃包被过夜，倾空液体，用含0.05％Tween的PBS(PBS-T)洗板3次，每孔加入200μL封闭液(含2％BSA的PBS-T溶液)，37℃孵育1h。倾空液体，用PBS-T清洗3次。每孔加入稀释5倍的0.1mL杂交瘤细胞株培养液上清，37℃孵育1h。倾空液体，用PBS-T清洗3次。用封闭液1：400稀释HRP标记的羊抗鼠(κ，λ，IgM，IgG1，IgG1，IgG2b，IgG3，IgA)抗体(SouthernBiotech公司)，每孔分别加入0.1mL，37℃孵育1h。倾空液体，用PBS-T清洗3次。每孔加100μL TMB(3,3',5,5'-四甲基联苯胺)(湖州英创生物科技有限公司)底物(A、B等体积混合溶液)进行显色，室温反应15min，每孔加入50μL1N HCl溶液终止显色反应，然后酶标仪测定450nm波长下的OD值。
结果显示，本发明单克隆抗体为Kappa或是Lambda型轻链单克隆抗体。
实施例7：抗siglec15抗体逆转人siglec15介导的对人T细胞的抑制
将抗人CD3抗体(OKT3克隆)包被在96孔平底组织培养板，在4℃下过夜。吸出PBS和未结合的OKT3，立即将10μg/mL的hsiglec15-hFc或对照加入到96孔平底组织培养板中，然后将来自健康人供体的全PBMC(PBMC先用1uM CFSE标记10min)及24μg/mL的抗siglec15抗体添加到孔中。将板在37℃CO2培养箱中孵育72小时。取出少量上清液用于细胞因子分析后，将细胞在4℃下用CD8荧光mAb染色60分钟。细胞在FACS缓冲液中洗涤两次，接着固定以通过流式细胞术进行分析。用MSD ELISA试剂盒评估条件化上清液中的IFNγ水平。结果如图1a和图1b所示。
结果显示，对阳性克隆细胞进行T细胞功能检测，发现人siglec15会抑制T细胞功能，抗siglec15抗体可以逆转人siglec15介导的对人T细胞的抑制。可以促进CD8+T细胞的增殖，促进IFNγ的释放，且大部分都达到或超过对照抗体的逆转抑制效应。
实施例8：抗siglec15抗体与siglec15亲和力验证
设备：Biacore 8K(GE)。
传感器芯片：CM5芯片(GE)。
(1)固定：
活化剂准备：在使用前立即混合400mM EDC和100mM NHS(GE)制备。
以10μL/m in的流速激活CM5传感器芯片420s。然后用30μg/ml的抗大鼠Fc IgG在10mM NaAc(pH4.5)中以10μL/min的流速注入通道。用1M乙醇胺-盐酸(GE)以10μL/min的流速灭活芯片420s。
(2)样品捕获：
运行缓冲液1×HBS-EP+(10mM HEPES，150mM NaCl，3mM EDTA，0.05％吐温20，pH7.4)中的样品用抗大鼠Fc IgG以10μL/min的流速捕获到Fc2上。将10nm的人Siglec15-his蛋白(Acro；Cat：SG5-H52H3)和运行缓冲液以30min的流速依次注入Fc1-Fc2，结合180s，然后解离3600s。每解离后注入10mM甘氨酸(pH1.5)作为再生缓冲液。
(3)再生：
用10mM甘氨酸(pH1.5)再生芯片。
(4)数据分析：
从测试结果图中减去参考通道Fc1和缓冲通道的结果图。实验数据符合1：1结合模型。用分子量35kDa计算人siglec15-his蛋白的摩尔浓度。
结果见表1，抗siglec15抗体与siglec15间SPR亲和力高，达到1pM。
表1
样品 ka(1/Ms) kd(1/s) KD(M)
ms-01 1.42E+06 <1.00E-05 <7.04E-12
ms-02 5.50E+05 <1.00E-05 <1.82E-11
ms-03 9.91E+05 <1.00E-05 <1.01E-11
ms-04 1.47E+06 <1.00E-05 <6.80E-12
ms-05 3.99E+05 <1.00E-05 <2.51E-11
ms-06 4.97E+05 <1.00E-05 <2.01E-11
ms-07 1.17E+06 <1.00E-05 <8.55E-12
ms-08 9.94E+05 <1.00E-05 <1.01E-11
ms-09 1.81E+06 1.40E-05 7.77E-12
ms-10 5.77E+05 4.21E-05 7.30E-11
实施例9：单克隆抗体的测序
选取10个抗siglec15抗体与siglec15 SPR亲和力最佳的单克隆抗体进行测序；并最终获得了ms-01、ms-02、ms-03、ms-04、ms-05、ms-06、ms-07、ms-08、ms-09和ms-10的氨基酸/核苷酸序列。
(1)ms-01重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别为：SEQ ID NO：41、SEQ ID NO：51和SEQ ID NO：61；
ms-01重链可变区的FR1、FR2、FR3和FR4的氨基酸序列分别为SEQ ID NO：101、SEQID NO：102、SEQ ID NO：103和SEQ ID NO：104；
ms-01重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO：1；
ms-01重链可变区的DNA序列为SEQ ID NO：2；
ms-01轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别为：SEQ ID NO：71、SEQID NO：81和SEQ ID NO：91；
ms-01轻链可变区的FR1、FR2、FR3和FR4的氨基酸序列分别为SEQ ID NO：105、SEQID NO：106、SEQ ID NO：107和SEQ ID NO：108；
ms-01轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO：3；
ms-01轻链可变区的DNA序列为SEQ ID NO：4。
(2)ms-02重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别为：SEQ ID NO：42、SEQ ID NO：52和SEQ ID NO：62；
ms-02重链可变区的FR1、FR2、FR3和FR4的氨基酸序列分别为SEQ ID NO：109、SEQID NO：110、SEQ ID NO：111和SEQ ID NO：112；
ms-02重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO：5；
ms-02重链可变区的DNA序列为SEQ ID NO：6；
ms-02轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别为：SEQ ID NO：72、SEQID NO：82和SEQ ID NO：92；
ms-02轻链可变区的FR1、FR2、FR3和FR4的氨基酸序列分别为SEQ ID NO：113、SEQID NO：114、SEQ ID NO：115和SEQ ID NO：116；
ms-02轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO：7；
ms-02轻链可变区的DNA序列为SEQ ID NO：8。
(3)ms-03重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别为：SEQ ID NO：43、SEQ ID NO：53和SEQ ID NO：63；
ms-03重链可变区的FR1、FR2、FR3和FR4的氨基酸序列分别为SEQ ID NO：117、SEQID NO：118、SEQ ID NO：119和SEQ ID NO：120；
ms-03重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO：9；
ms-03重链可变区的DNA序列为SEQ ID NO：10；
ms-03轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别为：SEQ ID NO：73、SEQID NO：83和SEQ ID NO：93；
ms-03轻链可变区的FR1、FR2、FR3和FR4的氨基酸序列分别为SEQ ID NO：121、SEQID NO：122、SEQ ID NO：123和SEQ ID NO：124；
ms-03轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO：11；
ms-03轻链可变区的DNA序列为SEQ ID NO：12。
(4)ms-04重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别为：SEQ ID NO：44、SEQ ID NO：54和SEQ ID NO：64；
ms-04重链可变区的FR1、FR2、FR3和FR4的氨基酸序列分别为SEQ ID NO：125、SEQID NO：126、SEQ ID NO：127和SEQ ID NO：128；
ms-04重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO：13；
ms-04重链可变区的DNA序列为SEQ ID NO：14；
ms-04轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别为：SEQ ID NO：74、SEQID NO：84和SEQ ID NO：94；
ms-04轻链可变区的FR1、FR2、FR3和FR4的氨基酸序列分别为SEQ ID NO：129、SEQID NO：130、SEQ ID NO：131和SEQ ID NO：132；
ms-04轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO：15；
ms-04轻链可变区的DNA序列为SEQ ID NO：16。
(5)ms-05重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别为：SEQ ID NO：45、SEQ ID NO：55和SEQ ID NO：65；
ms-05重链可变区的FR1、FR2、FR3和FR4的氨基酸序列分别为SEQ ID NO：133、SEQID NO：134、SEQ ID NO：135和SEQ ID NO：136；
ms-05重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO：17；
ms-05重链可变区的DNA序列为SEQ ID NO：18；
ms-05轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别为：SEQ ID NO：75、SEQID NO：85和SEQ ID NO：95；
ms-05轻链可变区的FR1、FR2、FR3和FR4的氨基酸序列分别为SEQ ID NO：137、SEQID NO：138、SEQ ID NO：139和SEQ ID NO：140；
ms-05轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO：19；
ms-05轻链可变区的DNA序列为SEQ ID NO：20；
(6)ms-06重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别为：SEQ ID NO：43、SEQ ID NO：53和SEQ ID NO：63；
ms-06重链可变区的FR1、FR2、FR3和FR4的氨基酸序列分别为SEQ ID NO：141、SEQID NO：142、SEQ ID NO：143和SEQ ID NO：144；
ms-06重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO：21；
ms-06重链可变区的DNA序列为SEQ ID NO：22；
ms-06轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别为：SEQ ID NO：76、SEQID NO：86和SEQ ID NO：96；
ms-06轻链可变区的FR1、FR2、FR3和FR4的氨基酸序列分别为SEQ ID NO：145、SEQID NO：146、SEQ ID NO：147和SEQ ID NO：148；
ms-06轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO：23；
ms-06轻链可变区的DNA序列为SEQ ID NO：24。
(7)ms-07重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别为：SEQ ID NO：47、SEQ ID NO：57和SEQ ID NO：67；
ms-07重链可变区的FR1、FR2、FR3和FR4的氨基酸序列分别为SEQ ID NO：149、SEQID NO：150、SEQ ID NO：151和SEQ ID NO：152；
ms-07重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO：25；
ms-07重链可变区的DNA序列为SEQ ID NO：26；
ms-07轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别为：SEQ ID NO：77、SEQID NO：87和SEQ ID NO：97；
ms-07轻链可变区的FR1、FR2、FR3和FR4的氨基酸序列分别为SEQ ID NO：153、SEQID NO：154、SEQ ID NO：155和SEQ ID NO：156；
ms-07轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO：27；
ms-07轻链可变区的DNA序列为SEQ ID NO：28。
(8)ms-08重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别为：SEQ ID NO：48、SEQ ID NO：58和SEQ ID NO：68；
ms-08重链可变区的FR1、FR2、FR3和FR4的氨基酸序列分别为SEQ ID NO：157、SEQID NO：158、SEQ ID NO：159和SEQ ID NO：160；
ms-08重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO：29；
ms-08重链可变区的DNA序列为SEQ ID NO：30；
ms-08轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别为：SEQ ID NO：78、SEQID NO：88和SEQ ID NO：98；
ms-08轻链可变区的FR1、FR2、FR3和FR4的氨基酸序列分别为SEQ ID NO：161、SEQID NO：162、SEQ ID NO：163和SEQ ID NO：124；
ms-08轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO：31；
ms-08轻链可变区的DNA序列为SEQ ID NO：32。
(9)ms-09重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别为：SEQ ID NO：49、SEQ ID NO：59和SEQ ID NO：69；
ms-09重链可变区的FR1、FR2、FR3和FR4的氨基酸序列分别为SEQ ID NO：165、SEQID NO：166、SEQ ID NO：167和SEQ ID NO：168；
ms-09重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO：33；
ms-09重链可变区的DNA序列为SEQ ID NO：34；
ms-09轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别为：SEQ ID NO：79、SEQID NO：89和SEQ ID NO：99；
ms-09轻链可变区的FR1、FR2、FR3和FR4的氨基酸序列分别为SEQ ID NO：169、SEQID NO：170、SEQ ID NO：171和SEQ ID NO：172；
ms-09轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO：35；
ms-09轻链可变区的DNA序列为SEQ ID NO：36。
(10)ms-10重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别为：SEQ ID NO：50、SEQ ID NO：60和SEQ ID NO：70；
ms-10重链可变区的FR1、FR2、FR3和FR4的氨基酸序列分别为SEQ ID NO：173、SEQID NO：174、SEQ ID NO：175和SEQ ID NO：176；
ms-10重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO：37；
ms-10重链可变区的DNA序列为SEQ ID NO：38；
ms-10轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别为：SEQ ID NO：80、SEQID NO：90和SEQ ID NO：100；
ms-10轻链可变区的FR1、FR2、FR3和FR4的氨基酸序列分别为SEQ ID NO：177、SEQID NO：178、SEQ ID NO：179和SEQ ID NO：180；
ms-10轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO：39；
ms-10轻链可变区的DNA序列为SEQ ID NO：40。
实施例10：嵌合单克隆抗体的重组生产
基因合成轻链可变区与人IgG恒定区DNA片段为轻链DNA，基因合成重链可变区与人IgG恒定区的DNA片段为重链DNA。利用分子克隆技术，插入PSH1.0载体中，构建成哺乳动物细胞表达质粒，利用电转染或脂质体等转染方式，导入宿主细胞株-CHO细胞，利用细胞fed-batch等培养发酵方式进行细胞培养，取发酵液上清进行亲和层析、离子交换层析等一系列步骤的纯化，最终纯化得到人-鼠嵌合的单克隆抗体。对纯化后的人-鼠嵌合的单克隆抗体检测表达量、纯度、内毒素等。
10条嵌合抗体ch-01、ch-02、ch-03、ch-04、ch-05、ch-06、ch-07、ch-08、ch-09和ch-10的重链恒定区的氨基酸序列相同，为：
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
10条嵌合抗体ch-01、ch-02、ch-03、ch-04、ch-05、ch-06、ch-07、ch-08、ch-09和ch-10的轻链恒定区的氨基酸序列相同，为：
RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
依照实施例4的FACS检测方法，检测人-鼠嵌合抗siglec15抗体与CHOK1.hS15稳定表达细胞系的结合情况，结果见图3。依照实施例3的ELISA检测方法，检测人-鼠嵌合抗siglec15抗体与鼠siglec15-his蛋白的结合情况，结果见图4。
结果显示，嵌合抗siglec15抗体与CHOK1.hS15稳定表达细胞系的结合活性EC50在0.1～100nM之间。嵌合抗siglec15抗体与鼠siglec15-his蛋白的结合活性EC50在0.01～0.05nM之间。人-鼠嵌合抗siglec15抗体具有人鼠交叉反应，结合活性与对照抗体相当或优于对照抗体。
实施例11：体内药效实验
在小鼠结肠癌细胞系MC38移植肿瘤C57BL/6-hsiglec15人源化小鼠模型中，对嵌合抗体ch-08进行体内抗肿瘤药效评价。
小鼠结肠癌MC38细胞体外单层培养，培养条件为RPMI1640培养基中加10％胎牛血清，2mm谷氨酰胺，37℃ 5％CO2培养。一周两次用胰酶-EDTA进行常规消化处理传代。当细胞饱和度为80％-90％时，收取细胞，计数，接种。将0.1mL(5x105cells)MC38细胞皮下接种于每只小鼠的右后背，肿瘤平均体积达到60mm3时开始分组给药。
分别给与分组后的荷瘤小鼠腹腔注射抗体ch-08、BMK1-hu IgG1和PBS，每周给药2次，每次10.0mg/kg，共给药5次。
化合物的抑瘤疗效用TGI(％)评价。TGI(％)的计算公式为：TGI(％)＝【1-(某处理组给药结束时平均瘤体积－该处理组开始给药时平均瘤体积)/(溶剂对照组治疗结束时平均瘤体积－溶剂对照组开始治疗时平均瘤体积)】×100％。
小鼠结肠癌细胞系MC38移植瘤模型荷瘤鼠给予抗体的肿瘤生长曲线如图5所述，其中横坐标表示开始治疗后的天数，纵坐标表示肿瘤体积，肿瘤抑瘤率TGI(％)见表2。
表2
抗体 TGI(％) P
PBS -
BMK1-hu IgG1 27.28 NS
ch-08 68.76 NS
由表2可知，嵌合抗体ch-08有较高的肿瘤抑制作用，其效果显著优于BMK1-huIgG1和PBS组。
实施例12：抗体的可变区翻译后修饰热点去除
ms-08重链可变区氨基酸序列如下，CDR1、CDR2和CDR3依次为下划线处的氨基酸序列：
EVQLVESDGGLVQPGRSLKLSCAASGFTFSDYYLAWVRQAPTKGLEWVASVSYDGITNYYRDSVKGRFTISRDNAKSTLSLQMDSLRSEDTATYYCARQDWEGGFAYWGQGTLVTVSS
在CDR2区域存在天冬氨酸异构化热点，现对其进行突变产生如下三条序列：
(1)ms-08-p1重链可变区氨基酸序列如下，CDR1、CDR2和CDR3依次为下划线处的氨基酸序列：
EVQLVESDGGLVQPGRSLKLSCAASGFTFSDYYLAWVRQAPTKGLEWVASVSYDGITNYYRDSVKGRFTISRDNAKSTLSLQMDSLRSEDTATYYCARQDWEGGFAYWGQGTLVTVSS
(2)ms-08-p2重链可变区氨基酸序列如下，CDR1、CDR2和CDR3依次为下划线处的氨基酸序列：
EVQLVESDGGLVQPGRSLKLSCAASGFTFSDYYLAWVRQAPTKGLEWVASVSYQGITNYYRDSVKGRFTISRDNAKSTLSLQMDSLRSEDTATYYCARQDWEGGFAYWGQGTLVTVSS
(3)ms-08-p3重链可变区氨基酸序列如下，CDR1、CDR2和CDR3依次为下划线处的氨基酸序列：
EVQLVESDGGLVQPGRSLKLSCAASGFTFSDYYLAWVRQAPTKGLEWVASVSYDAITNYYRDSVKGRFTISRDNAKSTLSLQMDSLRSEDTATYYCARQDWEGGFAYWGQGTLVTVSS
基因合成轻链可变区与人IgG恒定区DNA片段为轻链DNA，基因合成重链可变区与人IgG恒定区的DNA片段为重链DNA。利用分子克隆技术，插入PSH1.0载体中，构建成哺乳动物细胞表达质粒，利用电转染或脂质体等转染方式，导入宿主细胞株-CHO细胞，利用细胞fed-batch等培养发酵方式进行细胞培养，取发酵液上清进行亲和层析、离子交换层析等一系列步骤的纯化，最终纯化得到人-鼠嵌合的单克隆抗体。对纯化后的人-鼠嵌合的单克隆抗体检测表达量、纯度、内毒素等。
由此得到以下三条嵌合抗体ch-08-p1、ch-08-p2、ch-08-p3。
其中，三条嵌合抗体ch-08-p1、ch-08-p2、ch-08-p3重链恒定区的氨基酸序列都相同，为：
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
三条嵌合抗体ch-08-p1、ch-08-p2、ch-08-p3轻链全长的氨基酸序列与ch-08相同。
实施例13：修饰后的抗siglec15抗体与siglec15亲和力验证
依照实施例8的检测方法，检测修饰后的抗siglec15抗体与siglec15的亲和力，结果如表3所示。
表3
嵌合抗体 KD(M)
ch-08 2.29E-11
ch-08-p1 3.30E-11
ch-08-p2 4.72E-11
ch-08-p3 2.28E-11
由表3可知，嵌合抗体ch-08-p1、ch-08-p2、ch-08-p3都有较好的亲和力。
本发明的保护内容不局限于以上实施例。在不背离发明构思的精神和范围下，本领域技术人员能够想到的变化和优点都被包括在本发明中，并且以所附的权利要求为保护范围。
序列表
<110> 盛禾（中国）生物制药有限公司
<120> 一种抗siglec15抗体及其应用
<160> 238
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
Gln Val Gln Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Gln Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Pro Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Thr Tyr
20 25 30
His Val His Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Val Met Trp Ser Asp Gly Asp Thr Ser Tyr Asn Ser Ala Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Leu Ser Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu
65 70 75 80
Lys Met Lys Ser Leu Gln Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Asp His Gln Asp Asn Gly Gly Tyr Ala His Phe Asp Phe Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Val Met Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 2
<211> 363
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
caggtgcagc tgaaggagtc aggacctggc ctggtgcagc cctcacagac cccgtctctc 60
acctgcactg tctctgggtt ctcattaact acctatcatg tgcactgggt tcgacagcct 120
ccaggaaaag gtctggagtg gatgggagta atgtggagtg atggagacac atcatataat 180
tcagctctca aatcccgact gagcatcagt agggacacct ccaagagcca agtcttctta 240
aaaatgaaga gtctgcaaac tgaagacaca gccacttact actgtgccag agatcatcag 300
gacaacggag ggtatgccca ctttgatttc tggggccaag gagtcatggt cacagtctcc 360
tca 363
<210> 3
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
Asn Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Leu Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Leu Ser Cys Lys Gly Ser Gln Asn Ile Asn Asn Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Val Gly Glu Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asn Thr Asp Ser Leu Gln Thr Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Val Ala Ser Tyr Phe Cys Phe Gln Tyr Asn Ser Gly Trp Thr
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Asn Leu Glu Leu Lys
100 105
<210> 4
<211> 318
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 4
aacatccagc tgacccagtc tccttcactc ctgtctgcat ctgtgggaga cagagtcact 60
cttagctgca aaggaagtca gaatattaac aattacttag cctggtacca acaaaaggtt 120
ggagaagctc ccaaactcct gatatataat acagacagtt tgcaaacggg catcccatca 180
aggttcagtg gcagtggatc tggtacagat tactcactca ccatcagcag cctgcagcct 240
gaagatgttg cctcatattt ctgctttcag tataacagcg ggtggacgtt cggtggaggc 300
accaacctgg aattgaaa 318
<210> 5
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 5
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Ala Trp Val Arg Gln Ser Pro Lys Lys Gly Leu Gly Trp Val
35 40 45
Ala Ser Ile Asp Tyr Asp Gly Tyr Asn Thr Tyr Tyr Gly Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Ser Ala Lys Ser Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg His Asp Ser Arg Phe Gly Ser Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Val Met Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 6
<211> 360
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 6
gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttagtgcagc ctggaaggtc cctgaaactc 60
tcctgtgcag cctcaggatt cactttcagt gactattaca tggcctgggt ccgccagtct 120
ccaaagaagg gtctggggtg ggtcgcatcc attgattatg acggttataa cacttactat 180
ggagactccg tgaagggccg attcactata tccagagata gtgcaaaaag caccctatac 240
ctgcaaatga gcagtctgag gtctgaggac acggccactt attattgtgc aagacatgac 300
tctcgcttcg ggtccctctt tgattactgg ggccaaggag tcatggtcac agtctcctca 360
<210> 7
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 7
Asp Val Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Asn Leu Ala Ala Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Ser Val Ser Ile Asn Cys Lys Ala Gly Lys Ser Ile Ser Lys Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Pro Asn Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Gly Ser Thr Leu Gln Ser Gly Thr Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Arg Asn Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Gly Leu Tyr Tyr Cys Gln Gln His Asn Glu Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 8
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 8
gatgtccaga tgacccagtc tccatctaat cttgctgcct ctcctggaga aagtgtttcc 60
atcaattgca aggcaggtaa gagcattagc aagtatttag cctggtatca acagaaacct 120
ggaaaaccaa ataagcttct tatctactct gggtcaactt tgcaatctgg aactccatcg 180
aggttcagtg gcagtggatc tggtacagat ttcactctca ccatcagaaa cctggagcct 240
gaagattttg gactctatta ctgtcaacag cataatgaat acccgctcac gttcggttct 300
gggaccaagc tggagatcaa a 321
<210> 9
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 9
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Asn Met Ala Trp Val Arg Gln Ala Pro Lys Arg Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Thr Ile Ser Tyr Asp Gly Gly Tyr Thr Tyr Tyr Arg Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Phe Ser Arg Asp Asn Ala Lys Val Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Leu Glu Asn Tyr Trp Tyr Phe Asp Phe Trp Gly Pro Gly Thr
100 105 110
Met Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 10
<211> 354
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 10
gaggtacagc tggtggagtc tgggggaggc ttagtgcagc ctggaaggtc cctgaaactc 60
tcctgtgcag cctcaggatt cactttcagt gactataaca tggcctgggt ccgccaggct 120
ccaaagaggg gtctggagtg ggtcgcaacc attagttatg atggtggtta cacttactat 180
cgagactccg tgaagggccg attcaccttc tccagagata atgcaaaagt caccctatac 240
ctgcaaatgg acagtctgag gtctgaggac acggccactt atttctgtgc aaggcttgag 300
aactactggt actttgactt ctggggccca ggaaccatgg tcaccgtgtc ctca 354
<210> 11
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 11
Asp Ile Val Met Thr Gln Gly Ala Leu Pro Asn Pro Val Pro Ser Gly
1 5 10 15
Glu Ser Val Ser Ile Thr Cys Arg Ser Ser Lys Ser Leu Leu Tyr Ser
20 25 30
Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Asn Trp Tyr Leu Gln Arg Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Trp Met Ser Thr Arg Ala Ser Gly Val Ser
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Gly Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Gly Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly
85 90 95
Leu Asp Phe Pro Leu Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 12
<211> 336
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 12
gatattgtga tgacccaggg tgcactcccc aatcctgtcc cttctggaga gtcagtttcg 60
atcacctgca ggtctagtaa gagcctgctg tacagcgatg gcaagacata cttgaattgg 120
tatctgcaga ggccaggaca gtctcctcag ctcctgatct attggatgtc tacccgtgca 180
tcaggagtct cagacaggtt cagtggcggt gggtcaggaa cagatttcac actgaaaatc 240
agtggcgtgg aggctgaaga tgtgggtgtg tattactgtc agcaaggtct agactttccg 300
ctcacgttcg gttctgggac caagctggag atcaaa 336
<210> 13
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 13
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Asp Met Ala Trp Val Arg Gln Ala Pro Thr Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Phe Ile Ser Pro Ser Gly Gly Asn Thr Tyr Tyr Arg Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Val Ser Arg Asp Asn Ala Lys Ser Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Thr Ala Arg Val Tyr Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Val Met Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 14
<211> 357
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 14
gaggtgcaat tggtggagtc tgggggaggc ttagtgcagc ctggaaggtc cctgaaactc 60
tcctgtgcag cctcaggatt cactttcagt aactatgaca tggcctgggt ccgccaggct 120
ccaacgaagg gtctggagtg ggtcgcattc attagtccta gtggtggtaa cacttactat 180
cgagactccg tgaagggccg attcactgtc tccagagata atgcaaaaag taccctatac 240
ctgcaaatgg acagtctgag gtctgaggac acggccactt attactgtgc aagaactgcc 300
cgggtatact actactttga ttactggggc caaggagtca tggtcacagt ctcctca 357
<210> 15
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 15
Asp Ile Arg Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Met Ser Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Ser Leu Thr Cys Gln Ser Ser Gln Gly Phe Gly Asn Tyr
20 25 30
Leu Ser Trp Tyr Gln His Lys Pro Gly Lys Pro Pro Lys Pro Met Ile
35 40 45
Tyr Tyr Ala Thr Asn Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Arg Ser Gly Ser Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Ser
65 70 75 80
Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Asp Glu Tyr Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
100 105
<210> 16
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 16
gacatccgtt tgacccagtc tccatcctcc atgtctgcat ctctgggaga cagagtcagt 60
cttacttgcc agtcaagcca gggctttgga aattatttaa gctggtacca gcataaacca 120
gggaaacctc ctaagcctat gatttattat gcaaccaact tggcagatgg ggtcccatca 180
agattcagtg gcagtaggtc tgggtcagat tattctctca ccatcagcag cctggagtct 240
gaagatacag caatctatta ctgtctacag tatgatgagt acccgtggac gttcggtgga 300
ggcaccaagc tggaattgaa a 321
<210> 17
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 17
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Asn Met Ala Trp Val Arg Gln Ala Pro Lys Ser Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Thr Ile Ser Tyr Asp Gly Phe Tyr Thr Tyr Tyr Arg Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Phe Ser Arg Asp Asn Ala Lys Ile Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Leu Asp Asn Tyr Trp Tyr Phe Asp Phe Trp Gly Pro Gly Thr
100 105 110
Met Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 19
<211> 354
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 19
gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttagtgcagc ctggaaggtc cctgaaactc 60
tcctgtacag cctccggatt cactttcagt gactataaca tggcctgggt ccgccaggct 120
ccaaagagcg gtctggagtg ggtcgcaacc attagttatg atggttttta tacttactat 180
cgagactccg tgaagggccg attcaccttc tccagagata atgcaaaaat caccctatac 240
ctgcaaatgg acagtctgag gtctgaggac acggccactt attactgtgc aagacttgac 300
aactactggt actttgactt ctggggccca ggaaccatgg tcaccgtgtc ctca 354
<210> 19
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 19
Asp Ile Val Met Thr Gln Gly Ala Leu Pro Asn Pro Val Pro Ser Gly
1 5 10 15
Glu Ser Val Ser Ile Thr Cys Arg Ser Thr Lys Ser Leu Leu Tyr Ser
20 25 30
Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Asn Trp Tyr Leu Gln Arg Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro His Leu Leu Ile Tyr Trp Met Ser Thr Arg Ala Ser Gly Val Ser
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Gly Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Gly Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly
85 90 95
Leu Asp Phe Pro Leu Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 20
<211> 336
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 20
gatattgtga tgacccaggg tgcactcccc aatcccgtcc cttctggaga gtcagtttcg 60
atcacctgca ggtctaccaa gagcctgctg tacagcgatg gcaagacata cttgaattgg 120
tatctgcaga ggccaggaca gtctcctcac ctcctgatct attggatgtc tacccgtgca 180
tcaggagtct cagacaggtt cagtggcggt gggtcaggaa cagatttcac actgaaaatc 240
agtggcgtgg aggctgagga tgtgggtgtg tattactgtc agcaaggtct agattttccg 300
ctcacgttcg gttctgggac caagctggag atcaaa 336
<210> 21
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 21
Gln Val Gln Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Gln Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Leu Ser Leu Thr Ser Asn
20 25 30
Ser Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Val Ile Trp Ser Asn Gly Gly Thr Asn Tyr Asn Ser Ala Ile Lys
50 55 60
Ser Arg Leu Ser Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu
65 70 75 80
Lys Met Asn Ser Leu Gln Thr Glu Asp Thr Ala Met Tyr Phe Cys Ala
85 90 95
Arg Asn Trp Asp Tyr Asp Gly Ser Tyr Tyr Tyr Gly Val Leu Asp Ala
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Ala Ser Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 22
<211> 369
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 22
caagtgcaac taaaggagtc aggacctggt ctggtacagc catcacagac cctatctctc 60
acctgcactg tctccgggtt atcattaact agcaatagtg taagctggat tcggcagcct 120
ccaggaaagg gtctggagtg gatgggagta atatggagta atggaggtac aaattataac 180
tcagctatca aatcccgact gagcatcagc agggacacct cgaagagcca agttttctta 240
aagatgaaca gtctgcaaac tgaagacaca gccatgtact tctgtgccag aaattgggac 300
tatgatggta gttattacta cggtgttctg gatgcctggg gtcaaggagc ttcagtcact 360
gtctcctca 369
<210> 23
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 23
Gly Ile Arg Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Thr Val Asn Ile Glu Cys Leu Ala Ser Glu Gly Ile Tyr Ser Asp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro Gln Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Asp Asn Leu Gln Asn Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Glu Ser Gly Thr Gln Tyr Ser Leu Lys Ile Asn Ser Leu Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Val Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Asn Ile Tyr Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
100 105
<210> 24
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 24
ggtatccgga tgacacagtc tccagcttcc ctgtctgcat ctctgggaga aactgtcaac 60
atcgaatgtc tagcaagtga gggcatttac agtgatttgg catggtatca gcagaagcca 120
gggaaatctc ctcagctcct gatctatgat gcagataact tacaaaatgg ggtcccttca 180
cggtttagtg gcagtgaatc tggcactcag tattctctaa aaataaacag cctgcaatct 240
gaggatgtcg cgacttattt ctgtcaacaa tataacattt atccgtacac gtttggagct 300
gggaccaagc tggaactgaa a 321
<210> 25
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 25
Gln Val Gln Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Gln Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
His Val Gln Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Met Trp Asn Asp Gly Asp Thr Ser Tyr Asn Ser Ala Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Leu Ser Ile Thr Arg Asp Thr Ser Lys Arg Gln Val Phe Leu
65 70 75 80
Lys Met Thr Ser Leu Gln Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Gly Gly Ser Phe Tyr Thr Gly Asp Val Gly Asp Tyr Phe Asp Tyr
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Val Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 26
<211> 369
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 26
caggtgcagc tgaaggagtc aggacctggc ctggtgcagc cctcacagac cctgtctctc 60
acctgcactg tctctgggtt ttcatttacc aactatcatg ttcaatgggt tcgccagcct 120
ccaggaaaag gtctggagtg gatgggaata atgtggaatg atggagacac ctcatataat 180
tctgctctca aatcccgact gagcatcacc agggacacct ccaagagaca agttttctta 240
aaaatgacca gtctgcagac tgaagacaca gccacttact actgtgccag agggggctct 300
ttctacactg gtgacgttgg agactacttt gattactggg gccaaggagt cacggtcaca 360
gtctcctca 369
<210> 27
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 27
Asn Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Leu Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Leu Ser Cys Lys Ala Gly Gln Asn Ile Asn Asn Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Leu Gly Glu Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asn Ala Asn Ser Leu Gln Thr Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Val Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Phe Ser Trp Asn Thr
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Met Lys
100 105
<210> 28
<211> 318
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 28
aacatccaga tgacccagtc tccttcacta ctgtctgcat ctgtgggaga cagagtcact 60
ctcagctgca aagcaggtca gaatattaac aattacttag cctggtatca gcaaaaactt 120
ggagaagctc ccaaactcct gatatataat gcaaacagtt tgcaaacggg catcccatca 180
aggttcagtg gcagtggatc tggcactgat ttcacactca ccatcagcag cctgcagcct 240
gaagatgttg ccacatattt ctgccagcag tatttcagtt ggaacacgtt tggaggtggg 300
accaagttgg aaatgaaa 318
<210> 29
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 29
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Asp Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Val Arg Gln Ala Pro Thr Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Ser Val Ser Tyr Asp Gly Ile Thr Asn Tyr Tyr Arg Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Ser Thr Leu Ser
65 70 75 80
Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gln Asp Trp Glu Gly Gly Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 30
<211> 354
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 30
gaagtgcagc tggtggagtc tgatggaggc ttagtgcagc ctggaaggtc cctaaaactc 60
tcctgtgcag cctcaggatt cactttcagt gactattatc tggcctgggt ccgccaggct 120
ccaacgaagg ggctggagtg ggtcgcaagc gttagttatg atggtattac caattattat 180
cgagactccg tgaagggccg cttcactatc tccagagata atgcgaaaag caccctatcc 240
ctgcaaatgg acagtctgag gtctgaggac acggccactt attactgtgc aagacaggac 300
tgggaagggg ggtttgctta ctggggccaa ggcactctgg tcactgtctc ttca 354
<210> 31
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 31
Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Ala Ser Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser Leu Leu His Ser
20 25 30
Pro Gly Leu Thr Tyr Val Phe Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Arg Ser
35 40 45
Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Arg Val Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Arg Gly Ser Gly Ser Glu Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Ile Tyr Tyr Cys Gly Gln Leu
85 90 95
Leu Glu Asn Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 32
<211> 336
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 32
gatattgtga tgactcaaac tcccctctct ctatctgtca cgcctggagc gtcagcttcc 60
atctcctgca gatctagtaa gagtctgcta catagtcctg gcctcactta cgtgttttgg 120
taccttcaga agccagggag gtctcctcgg ctcctgatat atcgggtgtc caaccttgcc 180
tcaggagttc ctgacaggtt tcgtggcagt gggtcagaaa cagattttac actgaaaatc 240
agtagggtgg aggctgagga tgttggcatt tattactgtg gacagcttct agaaaatcca 300
ttcacgttcg gctcagggac gaagttggaa ataaaa 336
<210> 33
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 33
Glu Val Gln Val Val Glu Ser Asp Gly Gly Phe Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Ala Trp Val Arg Gln Ala Pro Thr Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Ala Ile Ser Tyr Asp Gly Ile Thr Thr Tyr Tyr Arg Asp Ser Val
50 55 60
Met Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Gln Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg His Asp Trp Glu Gly Gly Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 34
<211> 354
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 34
gaagtgcagg tggtggagtc tgatggaggc ttcgtgcagc ctgggaggtc cctaaaactc 60
tcctgtgcag cctcaggatt cactttcagt gactattaca tggcctgggt ccgccaggct 120
ccaacgaagg ggctggagtg ggtcgcagcc atcagttatg atggtattac cacttattat 180
cgcgactccg tgatgggccg attcactatc tccagagata atgcacaaaa caccctatac 240
ctgcaaatgg acagtctgag gtctgaggac acggccactt attactgtac aagacacgac 300
tgggaagggg ggtttgctta ctggggccaa ggcactctag tcactgtctc ttca 354
<210> 35
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 35
Gly Ile Val Met Thr Gln Ala Pro Leu Ser Val Ser Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Ser Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser Leu Leu His Ser
20 25 30
Ser Gly Ile Thr Tyr Val Phe Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Lys Ser
35 40 45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Arg Met Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Glu Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Met Glu Ala Glu Asp Val Gly Ile Tyr Tyr Cys Gly Gln Leu
85 90 95
Leu Glu Asn Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 36
<211> 336
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 36
ggtattgtga tgactcaagc tccactctct gtatctgtca ctcctggaga gtcagcttcc 60
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ttcacgttcg gctcagggac gaagttggaa ataaaa 336
<210> 37
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 37
Gln Val Gln Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Gln Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Pro Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
His Val Gln Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Met Trp Ser Asp Gly Asp Thr Ser His Asn Pro Asp Leu Arg
50 55 60
Ser Arg Leu Ser Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu
65 70 75 80
Lys Met Ser Ser Leu Gln Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Gly Gly Ser Tyr Tyr Thr Gly Asp Val Gly Asn Tyr Phe Asp Tyr
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Val Met Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 38
<211> 369
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 38
caggtgcagc tgaaggagtc aggacctggc ctggtgcagc cctcacagac cctgtctctc 60
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gtctcctca 369
<210> 39
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 39
Asn Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Leu Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Leu Ser Cys Lys Ala Gly Gln Asn Ile Asn Asn Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Leu Gly Glu Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asn Ala Asn Ser Leu Gln Thr Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Val Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Tyr Ser Trp Asn Thr
85 90 95
Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
100 105
<210> 40
<211> 318
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 40
aacatccaga tgacccagtc tccttcacta ctgtctgcat ctgtgggaga cagagtcact 60
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<210> 41
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 41
Gly Phe Ser Leu Thr Thr Tyr His Val His
1 5 10
<210> 42
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 42
Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr Tyr Met Ala
1 5 10
<210> 43
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 43
Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr Asn Met Ala
1 5 10
<210> 44
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 44
Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr Asp Met Ala
1 5 10
<210> 45
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 45
Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr Asn Met Ala
1 5 10
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<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 46
Gly Leu Ser Leu Thr Ser Asn Ser Val Ser
1 5 10
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<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 47
Gly Phe Ser Phe Thr Asn Tyr His Val Gln
1 5 10
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<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 48
Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr Tyr Leu Ala
1 5 10
<210> 49
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 49
Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr Tyr Met Ala
1 5 10
<210> 50
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 50
Gly Phe Pro Phe Thr Asn Tyr His Val Gln
1 5 10
<210> 51
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 51
Val Met Trp Ser Asp Gly Asp Thr Ser Tyr Asn Ser Ala Leu Lys Ser
1 5 10 15
<210> 52
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 52
Ser Ile Asp Tyr Asp Gly Tyr Asn Thr Tyr Tyr Gly Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 53
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 53
Thr Ile Ser Tyr Asp Gly Gly Tyr Thr Tyr Tyr Arg Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 54
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 54
Phe Ile Ser Pro Ser Gly Gly Asn Thr Tyr Tyr Arg Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 55
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 55
Thr Ile Ser Tyr Asp Gly Phe Tyr Thr Tyr Tyr Arg Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 56
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 56
Val Ile Trp Ser Asn Gly Gly Thr Asn Tyr Asn Ser Ala Ile Lys Ser
1 5 10 15
<210> 57
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 57
Ile Met Trp Asn Asp Gly Asp Thr Ser Tyr Asn Ser Ala Leu Lys Ser
1 5 10 15
<210> 58
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 58
Ser Val Ser Tyr Asp Gly Ile Thr Asn Tyr Tyr Arg Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 59
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 59
Ala Ile Ser Tyr Asp Gly Ile Thr Thr Tyr Tyr Arg Asp Ser Val Met
1 5 10 15
Gly
<210> 60
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 60
Ile Met Trp Ser Asp Gly Asp Thr Ser His Asn Pro Asp Leu Arg Ser
1 5 10 15
<210> 61
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 61
Asp His Gln Asp Asn Gly Gly Tyr Ala His Phe Asp Phe
1 5 10
<210> 62
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 62
His Asp Ser Arg Phe Gly Ser Leu Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 63
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 63
Leu Glu Asn Tyr Trp Tyr Phe Asp Phe
1 5
<210> 64
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 64
Thr Ala Arg Val Tyr Tyr Tyr Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 65
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 65
Leu Asp Asn Tyr Trp Tyr Phe Asp Phe
1 5
<210> 66
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 66
Asn Trp Asp Tyr Asp Gly Ser Tyr Tyr Tyr Gly Val Leu Asp Ala
1 5 10 15
<210> 67
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 67
Gly Gly Ser Phe Tyr Thr Gly Asp Val Gly Asp Tyr Phe Asp Tyr
1 5 10 15
<210> 68
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 68
Gln Asp Trp Glu Gly Gly Phe Ala Tyr
1 5
<210> 69
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 69
His Asp Trp Glu Gly Gly Phe Ala Tyr
1 5
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<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 70
Gly Gly Ser Tyr Tyr Thr Gly Asp Val Gly Asn Tyr Phe Asp Tyr
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<210> 71
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 71
Lys Gly Ser Gln Asn Ile Asn Asn Tyr Leu Ala
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<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 72
Lys Ala Gly Lys Ser Ile Ser Lys Tyr Leu Ala
1 5 10
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<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 73
Arg Ser Ser Lys Ser Leu Leu Tyr Ser Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Asn
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<210> 74
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 74
Gln Ser Ser Gln Gly Phe Gly Asn Tyr Leu Ser
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<210> 75
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 75
Arg Ser Thr Lys Ser Leu Leu Tyr Ser Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Asn
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<210> 76
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 76
Leu Ala Ser Glu Gly Ile Tyr Ser Asp Leu Ala
1 5 10
<210> 77
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 77
Lys Ala Gly Gln Asn Ile Asn Asn Tyr Leu Ala
1 5 10
<210> 78
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 78
Arg Ser Ser Lys Ser Leu Leu His Ser Pro Gly Leu Thr Tyr Val Phe
1 5 10 15
<210> 79
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 79
Arg Ser Ser Lys Ser Leu Leu His Ser Ser Gly Ile Thr Tyr Val Phe
1 5 10 15
<210> 80
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 80
Lys Ala Gly Gln Asn Ile Asn Asn Tyr Leu Ala
1 5 10
<210> 81
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 81
Asn Thr Asp Ser Leu Gln Thr
1 5
<210> 82
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 82
Ser Gly Ser Thr Leu Gln Ser
1 5
<210> 83
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 83
Trp Met Ser Thr Arg Ala Ser
1 5
<210> 84
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 84
Tyr Ala Thr Asn Leu Ala Asp
1 5
<210> 85
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 85
Trp Met Ser Thr Arg Ala Ser
1 5
<210> 86
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 86
Asp Ala Asp Asn Leu Gln Asn
1 5
<210> 87
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 87
Asn Ala Asn Ser Leu Gln Thr
1 5
<210> 88
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 88
Arg Val Ser Asn Leu Ala Ser
1 5
<210> 89
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 89
Arg Met Ser Asn Leu Ala Ser
1 5
<210> 90
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 90
Asn Ala Asn Ser Leu Gln Thr
1 5
<210> 91
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 91
Phe Gln Tyr Asn Ser Gly Trp Thr
1 5
<210> 92
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 92
Gln Gln His Asn Glu Tyr Pro Leu Thr
1 5
<210> 93
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 93
Gln Gln Gly Leu Asp Phe Pro Leu Thr
1 5
<210> 94
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 94
Leu Gln Tyr Asp Glu Tyr Pro Trp Thr
1 5
<210> 95
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 95
Gln Gln Gly Leu Asp Phe Pro Leu Thr
1 5
<210> 96
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 96
Gln Gln Tyr Asn Ile Tyr Pro Tyr Thr
1 5
<210> 97
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 97
Gln Gln Tyr Phe Ser Trp Asn Thr
1 5
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<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 98
Gly Gln Leu Leu Glu Asn Pro Phe Thr
1 5
<210> 99
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 99
Gly Gln Leu Leu Glu Asn Pro Phe Thr
1 5
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Arg Leu Ser Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu Lys
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Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser
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Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Arg Ser Gly Ser Asp Tyr Ser
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Gly Val Ser Asp Arg Phe Ser Gly Gly Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
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Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Glu Ser Gly Thr Gln Tyr Ser
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Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Glu Thr Asp Phe Thr
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<400> 172
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<400> 174
Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met Gly
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<400> 175
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<400> 176
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<211> 23
<212> PRT
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<400> 177
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 178
Trp Tyr Gln Gln Lys Leu Gly Glu Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
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<210> 179
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 179
Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
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Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Val Ala Thr Tyr Phe Cys
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<210> 180
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 180
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1 5 10
<210> 181
<211> 987
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 181
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gtgagaacta aaatagatac tacggagaac ttgctcaaca cagaggtgca cagctcgcca 120
gcgcagcgct ggtccatgca ggtgccaccc gaggtgagcg cggaggcagg cgacgcggca 180
gtgctgccct gcaccttcac gcacccgcac cgccactacg acgggccgct gacggccatc 240
tggcgcgcgg gcgagcccta tgcgggcccg caggtgttcc gctgcgctgc ggcgcggggc 300
agcgagctct gccagacggc gctgagcctg cacggccgct tccggctgct gggcaacccg 360
cgccgcaacg acctctcgct gcgcgtcgag cgcctcgccc tggctgacga ccgccgctac 420
ttctgccgcg tcgagttcgc cggcgacgtc catgaccgct acgagagccg ccacggcgtc 480
cggctgcacg tgacagccgc gccgcggatc gtcaacatct cggtgctgcc cagtccggct 540
cacgccttcc gcgcgctctg cactgccgaa ggggagccgc cgcccgccct cgcctggtcc 600
ggcccggccc tgggcaacag cttggcagcc gtgcggagcc cgcgtgaggg tcacggccac 660
ctagtgaccg ccgaactgcc cgcactgacc catgacggcc gctacacgtg tacggccgcc 720
aacagcctgg gccgctccga ggccagcgtc tacctgttcc gcttccatgg cgccagcggg 780
gcctcgacgg tcgccctcct gctcggcgct ctcggcttca aggcgctgct gctgctcggg 840
gtcctggccg cccgcgctgc ccgccgccgc ccagagcatc tggacacccc ggacacccca 900
ccacggtccc aggcccagga gtccaattat gaaaatttga gccagatgaa cccccggagc 960
ccaccagcca ccatgtgctc accgtga 987
<210> 182
<211> 328
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 182
Met Glu Lys Ser Ile Trp Leu Leu Ala Cys Leu Ala Trp Val Leu Pro
1 5 10 15
Thr Gly Ser Phe Val Arg Thr Lys Ile Asp Thr Thr Glu Asn Leu Leu
20 25 30
Asn Thr Glu Val His Ser Ser Pro Ala Gln Arg Trp Ser Met Gln Val
35 40 45
Pro Pro Glu Val Ser Ala Glu Ala Gly Asp Ala Ala Val Leu Pro Cys
50 55 60
Thr Phe Thr His Pro His Arg His Tyr Asp Gly Pro Leu Thr Ala Ile
65 70 75 80
Trp Arg Ala Gly Glu Pro Tyr Ala Gly Pro Gln Val Phe Arg Cys Ala
85 90 95
Ala Ala Arg Gly Ser Glu Leu Cys Gln Thr Ala Leu Ser Leu His Gly
100 105 110
Arg Phe Arg Leu Leu Gly Asn Pro Arg Arg Asn Asp Leu Ser Leu Arg
115 120 125
Val Glu Arg Leu Ala Leu Ala Asp Asp Arg Arg Tyr Phe Cys Arg Val
130 135 140
Glu Phe Ala Gly Asp Val His Asp Arg Tyr Glu Ser Arg His Gly Val
145 150 155 160
Arg Leu His Val Thr Ala Ala Pro Arg Ile Val Asn Ile Ser Val Leu
165 170 175
Pro Ser Pro Ala His Ala Phe Arg Ala Leu Cys Thr Ala Glu Gly Glu
180 185 190
Pro Pro Pro Ala Leu Ala Trp Ser Gly Pro Ala Leu Gly Asn Ser Leu
195 200 205
Ala Ala Val Arg Ser Pro Arg Glu Gly His Gly His Leu Val Thr Ala
210 215 220
Glu Leu Pro Ala Leu Thr His Asp Gly Arg Tyr Thr Cys Thr Ala Ala
225 230 235 240
Asn Ser Leu Gly Arg Ser Glu Ala Ser Val Tyr Leu Phe Arg Phe His
245 250 255
Gly Ala Ser Gly Ala Ser Thr Val Ala Leu Leu Leu Gly Ala Leu Gly
260 265 270
Phe Lys Ala Leu Leu Leu Leu Gly Val Leu Ala Ala Arg Ala Ala Arg
275 280 285
Arg Arg Pro Glu His Leu Asp Thr Pro Asp Thr Pro Pro Arg Ser Gln
290 295 300
Ala Gln Glu Ser Asn Tyr Glu Asn Leu Ser Gln Met Asn Pro Arg Ser
305 310 315 320
Pro Pro Ala Thr Met Cys Ser Pro
325
<210> 183
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 183
Pro Ala Gln Arg Trp Ser Met Gln Val Pro Pro Glu Val Ser Ala Glu
1 5 10 15
Ala Gly Asp Ala Ala Val Leu Pro Cys Thr Phe Thr His Pro His Arg
20 25 30
His Tyr Asp Gly Pro Leu Thr Ala Ile Trp Arg Ala Gly Glu Pro Tyr
35 40 45
Ala Gly Pro Gln Val Phe Arg Cys Ala Ala Ala Arg Gly Ser Glu Leu
50 55 60
Cys Gln Thr Ala Leu Ser Leu His Gly Arg Phe Arg Leu Leu Gly Asn
65 70 75 80
Pro Arg Arg Asn Asp Leu Ser Leu Arg Val Glu Arg Leu Ala Leu Ala
85 90 95
Asp Asp Arg Arg Tyr Phe Cys Arg Val Glu Phe Ala Gly Asp Val His
100 105 110
Asp Arg Tyr Glu Ser Arg His
115
<210> 184
<211> 84
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 184
Pro Arg Ile Val Asn Ile Ser Val Leu Pro Ser Pro Ala His Ala Phe
1 5 10 15
Arg Ala Leu Cys Thr Ala Glu Gly Glu Pro Pro Pro Ala Leu Ala Trp
20 25 30
Ser Gly Pro Ala Leu Gly Asn Ser Leu Ala Ala Val Arg Ser Pro Arg
35 40 45
Glu Gly His Gly His Leu Val Thr Ala Glu Leu Pro Ala Leu Thr His
50 55 60
Asp Gly Arg Tyr Thr Cys Thr Ala Ala Asn Ser Leu Gly Arg Ser Glu
65 70 75 80
Ala Ser Val Tyr
<210> 185
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 185
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Asp Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Val Arg Gln Ala Pro Thr Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Ser Val Ser Tyr Glu Gly Ile Thr Asn Tyr Tyr Arg Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Ser Thr Leu Ser
65 70 75 80
Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gln Asp Trp Glu Gly Gly Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 186
<211> 354
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 186
gaagtgcagc tggtggagtc tgatggaggc ttagtgcagc ctggaaggtc cctaaaactc 60
tcctgtgcag cctcaggatt cactttcagt gactattatc tggcctgggt ccgccaggct 120
ccaacgaagg ggctggagtg ggtcgcaagc gttagttatg aaggtattac caattattat 180
cgagactccg tgaagggccg cttcactatc tccagagata atgcgaaaag caccctatcc 240
ctgcaaatgg acagtctgag gtctgaggac acggccactt attactgtgc aagacaggac 300
tgggaagggg ggtttgctta ctggggccaa ggcactctgg tcactgtctc ttca 354
<210> 187
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 187
Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Ala Ser Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser Leu Leu His Ser
20 25 30
Pro Gly Leu Thr Tyr Val Phe Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Arg Ser
35 40 45
Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Arg Val Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Arg Gly Ser Gly Ser Glu Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Ile Tyr Tyr Cys Gly Gln Leu
85 90 95
Leu Glu Asn Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 188
<211> 336
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 188
gatattgtga tgactcaaac tcccctctct ctatctgtca cgcctggagc gtcagcttcc 60
atctcctgca gatctagtaa gagtctgcta catagtcctg gcctcactta cgtgttttgg 120
taccttcaga agccagggag gtctcctcgg ctcctgatat atcgggtgtc caaccttgcc 180
tcaggagttc ctgacaggtt tcgtggcagt gggtcagaaa cagattttac actgaaaatc 240
agtagggtgg aggctgagga tgttggcatt tattactgtg gacagcttct agaaaatcca 300
ttcacgttcg gctcagggac gaagttggaa ataaaa 336
<210> 189
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 189
Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr Tyr Leu Ala
1 5 10
<210> 190
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 190
Ser Val Ser Tyr Glu Gly Ile Thr Asn Tyr Tyr Arg Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 191
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 191
Gln Asp Trp Glu Gly Gly Phe Ala Tyr
1 5
<210> 192
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 192
Arg Ser Ser Lys Ser Leu Leu His Ser Pro Gly Leu Thr Tyr Val Phe
1 5 10 15
<210> 193
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 193
Arg Val Ser Asn Leu Ala Ser
1 5
<210> 194
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 194
Gly Gln Leu Leu Glu Asn Pro Phe Thr
1 5
<210> 195
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 195
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Asp Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser
20 25
<210> 196
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 196
Trp Val Arg Gln Ala Pro Thr Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala
1 5 10
<210> 197
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 197
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Ser Thr Leu Ser Leu Gln
1 5 10 15
Met Asp Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Arg
20 25 30
<210> 198
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 198
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 199
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 199
Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Ala Ser Ala Ser Ile Ser Cys
20
<210> 200
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 200
Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Arg Ser Pro Arg Leu Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 201
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 201
Gly Val Pro Asp Arg Phe Arg Gly Ser Gly Ser Glu Thr Asp Phe Thr
1 5 10 15
Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Ile Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 202
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 202
Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
1 5 10
<210> 203
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 203
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Asp Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Val Arg Gln Ala Pro Thr Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Ser Val Ser Tyr Gln Gly Ile Thr Asn Tyr Tyr Arg Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Ser Thr Leu Ser
65 70 75 80
Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gln Asp Trp Glu Gly Gly Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 204
<211> 354
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 204
gaagtgcagc tggtggagtc tgatggaggc ttagtgcagc ctggaaggtc cctaaaactc 60
tcctgtgcag cctcaggatt cactttcagt gactattatc tggcctgggt ccgccaggct 120
ccaacgaagg ggctggagtg ggtcgcaagc gttagttatc agggtattac caattattat 180
cgagactccg tgaagggccg cttcactatc tccagagata atgcgaaaag caccctatcc 240
ctgcaaatgg acagtctgag gtctgaggac acggccactt attactgtgc aagacaggac 300
tgggaagggg ggtttgctta ctggggccaa ggcactctgg tcactgtctc ttca 354
<210> 205
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 205
Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Ala Ser Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser Leu Leu His Ser
20 25 30
Pro Gly Leu Thr Tyr Val Phe Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Arg Ser
35 40 45
Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Arg Val Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Arg Gly Ser Gly Ser Glu Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Ile Tyr Tyr Cys Gly Gln Leu
85 90 95
Leu Glu Asn Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 206
<211> 336
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 206
gatattgtga tgactcaaac tcccctctct ctatctgtca cgcctggagc gtcagcttcc 60
atctcctgca gatctagtaa gagtctgcta catagtcctg gcctcactta cgtgttttgg 120
taccttcaga agccagggag gtctcctcgg ctcctgatat atcgggtgtc caaccttgcc 180
tcaggagttc ctgacaggtt tcgtggcagt gggtcagaaa cagattttac actgaaaatc 240
agtagggtgg aggctgagga tgttggcatt tattactgtg gacagcttct agaaaatcca 300
ttcacgttcg gctcagggac gaagttggaa ataaaa 336
<210> 207
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 207
Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr Tyr Leu Ala
1 5 10
<210> 208
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 208
Ser Val Ser Tyr Gln Gly Ile Thr Asn Tyr Tyr Arg Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 209
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 209
Gln Asp Trp Glu Gly Gly Phe Ala Tyr
1 5
<210> 210
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 210
Arg Ser Ser Lys Ser Leu Leu His Ser Pro Gly Leu Thr Tyr Val Phe
1 5 10 15
<210> 211
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 211
Arg Val Ser Asn Leu Ala Ser
1 5
<210> 212
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 212
Gly Gln Leu Leu Glu Asn Pro Phe Thr
1 5
<210> 213
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 213
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Asp Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser
20 25
<210> 214
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 214
Trp Val Arg Gln Ala Pro Thr Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala
1 5 10
<210> 215
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 215
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Ser Thr Leu Ser Leu Gln
1 5 10 15
Met Asp Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Arg
20 25 30
<210> 216
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 216
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 217
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 217
Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Ala Ser Ala Ser Ile Ser Cys
20
<210> 218
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 218
Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Arg Ser Pro Arg Leu Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 219
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 219
Gly Val Pro Asp Arg Phe Arg Gly Ser Gly Ser Glu Thr Asp Phe Thr
1 5 10 15
Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Ile Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 220
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 220
Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
1 5 10
<210> 221
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 221
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Asp Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Val Arg Gln Ala Pro Thr Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Ser Val Ser Tyr Asp Ala Ile Thr Asn Tyr Tyr Arg Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Ser Thr Leu Ser
65 70 75 80
Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gln Asp Trp Glu Gly Gly Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 222
<211> 354
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 222
gaagtgcagc tggtggagtc tgatggaggc ttagtgcagc ctggaaggtc cctaaaactc 60
tcctgtgcag cctcaggatt cactttcagt gactattatc tggcctgggt ccgccaggct 120
ccaacgaagg ggctggagtg ggtcgcaagc gttagttatg atgcaattac caattattat 180
cgagactccg tgaagggccg cttcactatc tccagagata atgcgaaaag caccctatcc 240
ctgcaaatgg acagtctgag gtctgaggac acggccactt attactgtgc aagacaggac 300
tgggaagggg ggtttgctta ctggggccaa ggcactctgg tcactgtctc ttca 354
<210> 223
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 223
Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Ala Ser Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser Leu Leu His Ser
20 25 30
Pro Gly Leu Thr Tyr Val Phe Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Arg Ser
35 40 45
Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Arg Val Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Arg Gly Ser Gly Ser Glu Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Ile Tyr Tyr Cys Gly Gln Leu
85 90 95
Leu Glu Asn Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 224
<211> 336
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 224
gatattgtga tgactcaaac tcccctctct ctatctgtca cgcctggagc gtcagcttcc 60
atctcctgca gatctagtaa gagtctgcta catagtcctg gcctcactta cgtgttttgg 120
taccttcaga agccagggag gtctcctcgg ctcctgatat atcgggtgtc caaccttgcc 180
tcaggagttc ctgacaggtt tcgtggcagt gggtcagaaa cagattttac actgaaaatc 240
agtagggtgg aggctgagga tgttggcatt tattactgtg gacagcttct agaaaatcca 300
ttcacgttcg gctcagggac gaagttggaa ataaaa 336
<210> 225
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 225
Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr Tyr Leu Ala
1 5 10
<210> 226
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 226
Ser Val Ser Tyr Asp Ala Ile Thr Asn Tyr Tyr Arg Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 227
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 227
Gln Asp Trp Glu Gly Gly Phe Ala Tyr
1 5
<210> 228
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 228
Arg Ser Ser Lys Ser Leu Leu His Ser Pro Gly Leu Thr Tyr Val Phe
1 5 10 15
<210> 229
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 229
Arg Val Ser Asn Leu Ala Ser
1 5
<210> 230
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 230
Gly Gln Leu Leu Glu Asn Pro Phe Thr
1 5
<210> 231
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 231
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Asp Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser
20 25
<210> 232
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 232
Trp Val Arg Gln Ala Pro Thr Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala
1 5 10
<210> 233
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 233
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Ser Thr Leu Ser Leu Gln
1 5 10 15
Met Asp Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Arg
20 25 30
<210> 234
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 234
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 235
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 235
Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Ala Ser Ala Ser Ile Ser Cys
20
<210> 236
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 236
Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Arg Ser Pro Arg Leu Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 237
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 237
Gly Val Pro Asp Arg Phe Arg Gly Ser Gly Ser Glu Thr Asp Phe Thr
1 5 10 15
Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Ile Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 238
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 238
Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
1 5 10

Claims (4)

1.一种抗siglec15抗体或其抗原结合片段，包含重链可变区和轻链可变区，其特征在于，所述重链可变区包含重链互补决定区CDR1、CDR2和CDR3，所述轻链可变区包含轻链互补决定区CDR1、CDR2和CDR3，其中，所述重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3分别由氨基酸序列SEQID NO：225、SEQ ID NO：226和SEQ ID NO：227组成，且所述轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3分别由SEQ ID NO：228、SEQ ID NO：229和SEQ ID NO：230组成。
2.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述重链可变区还包括框架区FR；所述的框架区FR包括：氨基酸序列如SEQ ID NO：157所示的FR1，氨基酸序列如SEQ ID NO：158所示的FR2，氨基酸序列如SEQ ID NO：159所示的FR3，氨基酸序列如SEQ IDNO：160所示的FR4。
3.根据权利要求2所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述轻链可变区还包括框架区FR；所述的框架区FR包括：氨基酸序列如SEQ ID NO：161所示的FR1，氨基酸序列如SEQ ID NO：162所示的FR2，氨基酸序列如SEQ ID NO：163所示的FR3，氨基酸序列如SEQ IDNO：164所示的FR4。
4.一种抗siglec15抗体或其抗原结合片段，包括重链可变区和轻链可变区；其特征在于，所述重链可变区和轻链可变区的氨基酸序列分别如SEQ ID NO：221和SEQ ID NO：223所示。
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