CN113813888B - 基于竞争反应实现溶胶-凝胶-溶胶自主转变的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及基于竞争反应实现溶胶‑凝胶‑溶胶自主转变的方法,该方法基于竞争反应体系进行,所述的竞争反应体系中同时包括生物酶和生物相容性材料,生物相容性材料相互间形成超分子相互作用形成凝胶,酶促反应促使凝胶瓦解,在同一体系中形成凝胶与凝胶瓦解相互竞争,实现体系从溶胶到凝胶再到溶胶的连续性自主转变。本发明的转变方法无需外部刺激,在竞争反应体系内部设置了自主进行溶胶‑凝胶‑溶胶转变的开关,赋予了软物质材料以自主性或自适应性,广泛应用于生物医药领域,并且成本低,无毒无害。

Description

基于竞争反应实现溶胶-凝胶-溶胶自主转变的方法
技术领域
本发明涉及基于竞争反应实现溶胶-凝胶-溶胶自主转变的方法,属于医药用高分子材料领域。
背景技术
水凝胶作为一种用作组织工程中的支架材料受到了广泛的研究。由于水凝胶的三维网络中充斥着大量的水分,使材料整体具有流体的性质,这与充盈有大量水分的机体组织极其相似,利于营养物质的传输和细胞代谢产物的排出,使得水凝胶具有良好的生物相容性。其中可注射水凝胶在凝胶前处于流动的溶液状态,可以很容易地充满整个不规则的缺损部位,手术创伤非常微小且易于操作,最适合用于构建力学强度较低的软组织器官。
超分子水凝胶主要是指聚合物或小分子通过物理作用相互作用而结合在一起而形成的凝胶,与化学交联不同的是,物理作用的可逆性使得凝胶-溶胶之间的转变是易于实现的,这种凝胶-溶胶之间的转变可以拓展水凝胶在形状记忆、药物递送等领域的应用,但在最初的研究中通常采用外部环境的改变(例如:温度和酸碱度的改变)来实现凝胶-溶胶之间转变。但这些转变的方式是较为被动的,总是依赖于外部刺激来诱导体系发生变化,没有自主调节的能力。在生命体内实现组装态与非组装态间的可逆性切换则更加的智能,例如细胞骨架是一种高度动态的结构体系,通过耗散-自组装过程形成,连续的能量输入保证组装结构的暂时性存在,但当能量移除时,则会回到非组装态。研究者受到受自然界能量耗散自组装系统的启发,在2010年Jan H.van Esch首次提出瞬态水凝胶的概念,在该体系中研究者选择非生物活性的化学试剂实现了体系从溶胶到凝胶再到溶胶的转变,为了更进一步模拟生命系统,研究者将生物催化反应网络引入水凝胶体系中,主要是各类酶促反应的引入,包括糜蛋白酶、酯酶以及脲酶等,但在目前报道的研究工作中,但这些酶的价格往往较为昂贵,会导致成本过高,或者体系设计的设计中引入尿素这种对生命体不友好的物质,并不能真正适用于组织工程、生物医药领域。
发明内容
针对现有技术的不足,本发明提供一种基于竞争性反应实现溶胶-凝胶-溶胶自主转变的方法,该方法利用竞争性反应实现了从溶胶到凝胶再到溶胶的自主转变,且所选用的原材料均为生物相容的,对生命体友好的,更为重要的是选用的原材料物美价廉,较为适合应用于生产生活。
术语解释:
Pluronic:聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物
室温:25±2℃
本发明是通过如下技术方案实现的:
基于竞争反应实现溶胶-凝胶-溶胶自主转变的方法,该方法基于竞争反应体系进行,所述的竞争反应体系中同时包括生物酶和生物相容性材料,生物相容性材料相互间形成超分子相互作用形成凝胶,酶促反应促使凝胶瓦解,在同一体系中形成凝胶与凝胶瓦解相互竞争,实现体系从溶胶到凝胶再到溶胶的连续性自主转变。
根据本发明优选的,所述生物酶为α-淀粉酶、β-淀粉酶或γ-淀粉酶中的一种。
根据本发明优选的,生物相容性材料为相互间形成超分子相互作用的聚合物和环形低聚糖。
进一步优选的,聚合物为聚乙二醇或含有聚乙二醇链段的Pluronic。
进一步优选的,聚乙二醇为聚乙二醇4000、聚乙二醇6000、聚乙二醇8000、聚乙二醇10000或聚乙二醇20000。
进一步优选的,含有聚乙二醇链段的Pluronic为F-127、F-68、P-123或P-105。
F-127、F-68、P-123或P-105均为常规市购产品。
根据本发明优选的,环形低聚糖为6-12个D-吡喃葡萄糖构成的环糊精。
进一步优选的,环形低聚糖为α-环糊精、β-环糊精或γ-环糊精。
根据本发明优选的,竞争反应体系中淀粉酶的浓度为3mg/mL~100mg/mL。
进一步优选的,竞争反应体系中淀粉酶的浓度为40mg/mL~60mg/mL。
根据本发明优选的,竞争反应体系中聚合物的浓度为20mg/mL~200mg/mL。
进一步优选的,竞争反应体系中聚合物的浓度为100mg/mL~160mg/mL。
根据本发明优选的,竞争反应体系中环形低聚糖的浓度为20mg/mL~120mg/mL。
进一步优选的,竞争反应体系中环形低聚糖的浓度为60mg/mL~80mg/mL。
根据本发明优选的,竞争反应体系中溶剂为水。
本发明的原理如下:
本发明的自主转变方法基于竞争反应体系进行,竞争反应体系中同时包括生物酶和生物相容性材料,生物相容性材料为相互间形成超分子相互作用的聚合物和环形低聚糖,聚合物分子与环形低聚糖通过超分子相互作用形成项链状结晶包合物,这些超分子相互作用包括主客体相互作用、氢键作用以及疏水相互作用,当体系中聚合物及环形低聚糖到达一定浓度时,体系可以形成水凝胶。由于酶促反应的存在,体系中的环形低聚糖被水解,聚合物分子与环形低聚糖的之间的相互作用减弱,最终不足以支撑体系凝胶网络的存在,凝胶再次转变为溶胶;成胶反应速率快,酶促反应持续时间长,且二者作用效率不同;总之通过超分子相互作用以及酶促反应的竞争作用,体系完成从溶胶到凝胶再到溶胶的连续性自主转变。
根据本发明优选的,争反应体系中所选择的聚合物为聚乙二醇(4000、6000、8000、10000、20000等)或含有聚乙二醇链段的Pluronic(F-127、F-68、P-123、P-105等),不同分子量的聚乙二醇或Pluronic与环糊精通过主客体相互作用、氢键、聚合物分子间缠绕等形成模量高、稳定的超分子水凝胶,同时体系中存在生物酶,通过聚合物与环形低聚糖的超分子相互作用以及淀粉酶水解环糊精的酶促反应,实现溶胶-凝胶-溶胶的转变。
有益效果
1、本发明的转变方法所涉及的组分均为生物相容性良好材料,聚乙二醇/环糊精超分子水凝胶以及Pluronic/环糊精超分子水凝胶由于其具有无毒、良好的水溶性以及可生物降解等优点被广泛应用于生物医药领域,并且成本低,无毒无害。
2、本发明以酶促反应作为实现凝胶到溶胶转化的方式,生物酶具有底物特异性,且能够在较为温和的环境下实现高效反应。
3、本发明的转变方法无需外部刺激,在竞争反应体系内部设置了自主进行溶胶-凝胶-溶胶转变的开关,赋予了软物质材料以自主性或自适应性。
附图说明
图1为实施例1、对比例1不同体系能否自主完成溶胶-凝胶-溶胶自主转变的过程图,通过小瓶倒置法来判断是否形成凝胶,A为实施例1,B为对比例1。
图2为实施例2、对比例2不同体系中能否自主完成溶胶-凝胶-溶胶自主转变的过程图,A为实施例2,B为对比例2。
具体实施方式
下面通过具体实施例对本发明的技术方案作进一步说明,但本发明的保护范围并不仅限于此。
实施例中涉及的材料,若无特殊说明,均为普通市售产品。
实施例1中,200mg/mL F-127溶液的配置方法:在冰浴环境中,向20g F-127中加入60mL去离子水,搅拌均匀,并定容至100mL,放入冰箱储存备用。
实施例2中,300mg/mL F-68溶液的配置方法:在冰浴环境中,向30g F-68中加入60mL去离子水,搅拌均匀,并定容至100mL,放入冰箱储存备用。
实施例1
基于竞争反应实现溶胶-凝胶-溶胶自主转变的方法,该方法基于竞争反应体系进行,
配置竞争反应体系:
室温下在离心管中加入1mL去离子水,加入100mgα-淀粉酶溶解完全,加入1mL的200mg/mL的F-127溶液,室温下混合均匀,再向离心管中加入160mgα-环糊精搅拌均匀。
上述组分混合均匀后,F-127与环糊精通过超分子相互作用在20min左右形成凝胶,同时加入体系内的α-淀粉酶水解环糊精使得凝胶逐渐瓦解,最终得到,F-127与葡萄糖以及淀粉酶共同存在的混合溶液,进而完成一个从溶胶到凝胶再到溶胶的完整自主转变过程。测试结果见图1A所示。
对比例1
同实施例1所述的方法,不同之处在于,该体系中不加入α-淀粉酶,其余按实施例1进行。
室温下在离心管中加入1mL去离子水,加入1mL的200mg/mL的F-127溶液,再向离心管中加入160mgα-环糊精搅拌均匀,在组分混合均匀后,F-127与环糊精通过超分子相互作用在20min左右形成凝胶,但由于体系中未加入淀粉酶,所以得到的水凝胶是热力学稳定的,再完成溶胶到凝胶的转变后不能够自发的完成凝胶到溶胶的转变。测试结果见图1B所示。
实施例2
基于竞争反应实现溶胶-凝胶-溶胶自主转变的方法,该方法基于竞争反应体系进行,
配置竞争反应体系:
将80mgα-淀粉酶溶于1mL去离子水中,再加入1mL的300mg/mL的F-68溶液,室温下混合均匀,最后向其中加入140mgα-环糊精搅拌均匀。
在上述组分混合均匀后,F-68与环糊精通过超分子相互作用在15min左右形成凝胶,同时加入体系内的α-淀粉酶酶会水解环糊精使得凝胶内交联点逐渐减少,最终凝胶结构难以支撑,得到F-68与葡萄糖以及淀粉酶共同存在的混合溶液,完成了一个从溶胶到凝胶再到溶胶的完整自主转变过程。测试结果见图2A所示。
对比例2
同实施例2所述的方法,不同之处在于,该体系中不加入环糊精,其余按实施例2进行。
将80mgα-淀粉酶溶于1mL去离子水中,再加入1mL的300mg/mL的F-68溶液,室温下混合均匀,由于未加入α-环糊精,仅靠F-68分子间的疏水相互作用、氢键作用等并不能形成凝胶,更无法完成一个从溶胶到凝胶再到溶胶的自主转变过程。测试结果见图2B所示。
实施例3
基于竞争反应实现溶胶-凝胶-溶胶自主转变的方法,该方法基于竞争反应体系进行,
配置竞争反应体系:
室温下在离心管中加入1mL去离子水,加入160mg淀粉酶溶解完全,加入1mL的360mg/mL的F-127溶液,室温下混合均匀,再向离心管中加入120mgα-环糊精搅拌均匀。
上述组分混合均匀后,F-127与α-环糊精通过超分子相互作用在20min左右形成凝胶,同时加入体系内的淀粉酶水解环糊精使得凝胶逐渐瓦解,最终得到,F-127与葡萄糖以及淀粉酶共同存在的混合溶液,进而完成一个从溶胶到凝胶再到溶胶的完整自主转变过程。
实施例4
基于竞争反应实现溶胶-凝胶-溶胶自主转变的方法,该方法基于竞争反应体系进行,
配置竞争反应体系:
室温下在离心管中加入1mL去离子水,加入60mgβ-淀粉酶溶解完全,加入1mL的80mg/mL的聚乙二醇4000溶液,室温下混合均匀,再向离心管中加入100mgβ-环糊精搅拌均匀。

Claims (6)

1.基于竞争反应实现溶胶-凝胶-溶胶自主转变的方法,该方法基于竞争反应体系进行,所述的竞争反应体系中同时包括生物酶和生物相容性材料,生物相容性材料相互间形成超分子相互作用形成凝胶,酶促反应促使凝胶瓦解,在同一体系中形成凝胶与凝胶瓦解相互竞争,实现体系从溶胶到凝胶再到溶胶的连续性自主转变;
所述生物酶为α-淀粉酶、β-淀粉酶或γ-淀粉酶中的一种,
生物相容性材料为相互间形成超分子相互作用的聚合物和环形低聚糖,环形低聚糖为α-环糊精、β-环糊精或γ-环糊精,
聚合物为聚乙二醇或含有聚乙二醇链段的Pluronic。
2.根据权利要求1所述的基于竞争反应实现溶胶-凝胶-溶胶自主转变的方法,其特征在于,聚乙二醇为聚乙二醇4000、聚乙二醇6000、聚乙二醇8000、聚乙二醇10000或聚乙二醇20000,含有聚乙二醇链段的Pluronic为F-127、F-68、P-123或P-105。
3.根据权利要求1所述的基于竞争反应实现溶胶-凝胶-溶胶自主转变的方法,其特征在于,竞争反应体系中淀粉酶的浓度为3mg/mL~100mg/mL。
4.根据权利要求1所述的基于竞争反应实现溶胶-凝胶-溶胶自主转变的方法,其特征在于,竞争反应体系中聚合物的浓度为20mg/mL~200mg/mL。
5.根据权利要求1所述的基于竞争反应实现溶胶-凝胶-溶胶自主转变的方法,其特征在于,竞争反应体系中环形低聚糖的浓度为20mg/mL~120mg/mL。
6.根据权利要求1所述的基于竞争反应实现溶胶-凝胶-溶胶自主转变的方法,其特征在于,所述竞争反应体系中还包括有溶剂,溶剂为水。
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