CN113812672A - 一种含透明质酸钠的电子烟烟油及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种含透明质酸钠的电子烟烟油及其制备方法，属于烟草制品技术领域。本发明提供的雾化液中至少含有透明质酸钠和大豆异黄酮；其中，所述透明质酸钠的浓度为5～200mg/mL。本发明提高了雾化所摄入的透明质酸钠浓度，为呼吸摄入透明质酸钠进而发挥透明质酸钠的生理功效奠定了坚实基础。本发明设计的电子烟油通过透明质酸钠和大豆异黄酮的复配，对于皮肤角质层含水量的提升效果明显，仅雾化吸入一周即可使得皮肤角质层含水量提高至47.5％，使皮肤更润滑富有弹性，能有效改善皮肤状况。

Description

一种含透明质酸钠的电子烟烟油及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种含透明质酸钠的电子烟烟油及其制备方法，属于烟草制品技术领域。

背景技术

电子烟萌芽于20世纪初，和传统烟草制品不同，电子烟是通过雾化器雾化电子烟烟液形成气溶胶，将尼古丁以及致香物质等雾化并送达吸食者，以获得与吸食传统卷烟相同的生理感受。其研发创新主要集中在对各种特色风味的模拟方面，如水果香型、特殊香型、奶油焦糖风味等，但是在功能性的开发方面还存在局限性。

透明质酸钠，化学式为(C₁₄H₂₀NO₁₁Na)_n，是人体内一种固有的成分，是一种葡聚糖醛酸，没有种属特异性，它广泛存在于结缔组织、神经组织和皮肤组织中，具有防皱、抗皱、美容保健和恢复皮肤生理功能的作用。

2021年1月8日，卫健委发布了《关于蝉花子实体(人工培植)等15种“三新食品”的公告》，正式批准透明质酸钠成为新食品原料。在此之前透明质酸钠作为新资源食品适用范围局限于保健食品原料，其应用领域主要集中在医药、临床诊断和化妆品行业，在食品中的应用还处于起步阶段。有研究证明，通过口服的方式摄取透明质酸钠，透明质酸钠在肠道内会被消化酶降解成小分子量的单糖或非单糖，最终以小分子量的单糖或非单糖的形式在小肠内被吸收，再进入糖代谢途径，根据自身代谢需要转化为能量或其他作用，而几乎不会在体内重新合成透明质酸。因此，通过口服透明质酸钠的食用方式难以有效发挥透明质酸钠的美容及保健的功效。

随着大健康概念的兴起与发展，消费趋势趋向天然健康和日常保健美容。电子烟作为新型烟草制品遵循卷烟的有关管理办法，而烟草也属于食品大类。因此在电子烟烟油中添加透明质酸钠，以开发一种具有改善皮肤状态功效的复配电子烟烟油，打造具有美容及保健作用的功能性电子烟产品势必是个市场的下一个风口。

发明内容

为了开发一种具有改善皮肤状态功效的复配电子烟烟油，本发明进行了系统的研究。

本发明采用如下技术方案：

本发明的第一目的在于提供一种雾化液，所述雾化液中至少含有透明质酸钠和大豆异黄酮；其中，所述透明质酸钠的浓度为5～200mg/mL。

在本发明的一种实施方式中，所述透明质酸钠的浓度为100～200mg/mL溶剂。

在本发明的一种实施方式中，所述透明质酸钠与所述大豆异黄酮的质量比为4:1。

在本发明的一种实施方式中，所述雾化液中还含有维生素E。

在本发明的一种实施方式中，所述透明质酸钠与所述维生素E的质量比为2:1。

在本发明的一种实施方式中，所述大豆异黄酮和维生素E，其浓度分别为25mg/mL溶剂和50mg/mL溶剂。

在本发明研究过程中发现，透明质酸钠添加至电子烟烟油中经常出现难以完全溶解的问题，导致电阻丝加热烟油时透明质酸钠无法随之雾化进而被人体吸收。

在本发明的一种实施方式中，所述雾化液的溶剂含有丙二醇和甘油；所述雾化液中还含有乳化剂，所述乳化剂与所述透明质酸钠的质量比为0.05～0.5:1。

在本发明的一种实施方式中，所述乳化剂为食品级乳化剂或医用级乳化剂。

在本发明的一种实施方式中，所述乳化剂包括但不限于磷脂或吐温。

在本发明的一种实施方式中，所述磷脂包括但不限于大豆磷脂、鸡蛋磷脂、乳磷脂和其他来源的磷脂中的任一种。

在本发明的一种实施方式中，所述丙二醇和所述甘油的质量比为(3～7)：(7～3)。

在本发明的一种实施方式中，所述雾化液中，所述丙二醇和甘油的质量比为1:1。

在本发明的一种实施方式中，所述雾化液中，所述丙二醇和甘油的质量比为3:7。

在本发明的一种实施方式中，所述雾化液中，所述丙二醇和甘油的质量比为7:3。

在本发明的一种实施方式中，所述透明质酸钠的相对分子质量为1k～400kDa。

在本发明的一种实施方式中，所述透明质酸钠的相对分子质量为1k～10k Da。

在本发明的一种实施方式中，所述透明质酸钠的相对分子质量为3k Da。

本发明的第二目的在于提供一种电子烟烟油，包括前述的雾化液和尼古丁盐，所述电子烟烟油中尼古丁盐的浓度为：(0.1～5g)/100g雾化液。

本发明的第三目的在于提供前述电子烟烟油的制备方法，包括如下步骤：

(1)将透明质酸钠、乳化剂按比例在加热条件下充分溶解于含有丙二醇和甘油的雾化液溶剂中，溶解后均质剪切得到混合物A；

(2)向混合物A中按比例添加大豆异黄酮、维生素E和尼古丁盐，充分混合、离心取上清液即为电子烟烟油。

在本发明的一种实施方式中，步骤(1)中加热条件：40～70℃。

在本发明的一种实施方式中，所述雾化液中，步骤(1)中加热条件为50℃。

在本发明的一种实施方式中，步骤(1)中均质剪切条件：剪切速率为10k～40krpm，剪切时间为1～30min。

在本发明的一种实施方式中，步骤(1)中添加乳化剂大豆磷脂之后进行均质剪切，以助溶和提高乳化稳定性，其中大豆磷脂的添加量为(基于透明质酸钠质量)0.01～10倍，剪切速率为10k～40k rpm，剪切时间为1～30min。

在本发明的一种实施方式中，步骤(1)中均质剪切条件：剪切速率为30000rpm，剪切时间为10min。

在本发明的一种实施方式中，步骤(2)中离心参数：9000～12000r/min，离心力3000～5000G，2～5min。

本发明的第四目的在于提供前述的雾化液在制备口鼻吸入式护肤产品中应用。

相较于现有技术，本发明的有益效果：

(1)通过口服的方式摄取透明质酸钠，透明质酸钠在肠道内会被消化酶降解成小分子量的单糖或非单糖，最终以小分子量的单糖或非单糖的形式在小肠内被吸收，再进入糖代谢途径，根据自身代谢需要转化为能量或其他作用，几乎不会在体内重新合成透明质酸。而注射透明质酸钠会有皮肤感染、局部淤血肿胀的风险。与口服或注射透明质酸钠的方式相比，雾化吸入透明质酸钠具有更高的吸收速度及良好的安全性。

(2)本发明利用了大豆异黄酮作为一种雌激素可以促进真皮层纤维母细胞增殖，有利于刺激体内透明质酸形成的性质，本发明研究发现，透明质酸钠复配大豆异黄酮的电子烟烟油对比单独使用透明质酸钠电子烟烟油，对于皮肤角质层含水量的提升效果更明显，仅雾化吸入一周即可使得皮肤角质层含水量提高至47.5％，使皮肤更润滑富有弹性；透明质酸钠复配大豆异黄酮及维生素E的电子烟烟油，能明显提升小鼠背部皮肤角质层含水量(四周内小鼠背部皮肤角质层含水量提升至50％左右)，对UVB引起的皮肤光损伤的保护作用，从而改善由紫外辐照引发的皮肤老化问题，协同改善皮肤状况。

(3)本发明利用透明质酸钠、大豆异黄酮和维生素E能够随着烟液雾化被口腔、鼻黏膜吸收快速进入血液。其中透明质酸钠在随血液被运输到相应部位，可以起到美容保湿、润滑关节及促进伤口愈合等作用。大豆异黄酮(SI)和维生素E(VE)作为体内抗氧化剂被人体吸收后，可被自由基或过氧化脂质氧化，避免自由基和过氧化脂质对正常细胞的造成损伤，有效减少紫外线引起的皮肤损伤和老化。本发明设计的电子烟油通过透明质酸钠、大豆异黄酮和维生素E的复配，利用三者的协同作用，产生抵抗紫外诱导的光损伤及损伤修复的保健功效。

(4)通过调整大豆磷脂的添加量，改善了大分子量透明质酸钠的溶解度(从只能溶解2mg/mL到溶解5mg/mL)，小分子量透明质酸钠的溶解度从10mg/mL提高到200mg/mL。其中优化参数：大豆磷脂添加量为透明质酸钠的0.1倍(质量计)，剪切均质速度为30 000rpm，剪切时间为10min。

(5)本发明通过对透明质酸钠的分子量进行优选、结合乳化剂及均质等助溶手段，极大地提升了透明质酸钠在电子烟烟油中的溶解度，首次发现并克服了透明质酸钠难溶于电子烟烟油溶剂而难以应用于电子烟产品中的技术障碍，提高了雾化所摄入的透明质酸钠浓度，为呼吸摄入透明质酸钠进而发挥透明质酸钠的生理功效奠定了坚实基础。

附图说明

图1对比例1的400k Da分子量的HA配制HA浓度为10mg/mL电子烟油的溶解效果(A：新制备；B：静置沉淀后)。

图2对比例2的加入2mg大豆磷脂均质后HA的溶解情况(A：均质后；B：静置沉淀后)。

图3实施例1的加入20mg大豆磷脂均质后HA的溶解情况(A：均质后；B：静置沉淀后)。

图4实施例2的加入0.1g大豆磷脂均质后的HA溶解情况(A：均质后；B：静置沉淀后)。

图5实施例3的加入0.2g大豆磷脂均质后的HA溶解情况(A：均质后；B：静置沉淀后)。

图6对比例3的加入1g大豆磷脂均质后的HA溶解情况(A：均质后；B：静置沉淀后)。

图7不同浓度的400k Da HA在烟油溶剂中的溶解效果(A:0.5mg/mL、B:1mg/mL、C：10mg/mL)。

图8不同浓度的3k Da HA在烟油溶剂的溶解效果(A:0.5mg/mL、B:1mg/mL、C：10mg/mL)。

图9实施例6的小鼠背部皮肤角质层含水量变化(HA与SI复配)。

图10实施例7的小鼠背部皮肤角质层含水量变化(HA和VE复配)。

图11实施例8的小鼠背部皮肤角质层含水量变化(HA、SI和VE复配)。

图12实施例9的小鼠背部皮肤组织中SOD含量。

图13实施例9的小鼠背部皮肤组织病理学图像：A为空白组；B为模型组；C为中剂量组。

具体实施方式

下述实施例中所涉及的食品级甘油和丙二醇购自连云港新爱食品科技有限公司，所涉及的尼古丁盐购自深圳波顿香料有限公司，所涉及的大豆磷脂购自北京源华美磷脂科技有限公司。

为方便表述，后文中的透明质酸钠：简写为HA；大豆异黄酮：简写为SI；维生素E：简写为VE。

对比例1：大分子量HA在烟油溶剂中的溶解

将200mg的400k Da分子量的HA加入20mL的烟油溶剂(丙二醇与甘油的质量比为1:1)中，震荡混匀，充分溶解得到HA浓度为10mg/mL的乳浊液，且底部有不溶的HA沉淀，如图1A所示；经过一段时间的静置沉淀，体系变得清亮，而底部产生更多的HA沉淀(约160mg)，如图1B所示。

对比例2：添加2mg大豆磷脂并均质对大分子量HA在烟油溶剂中的溶解效果的影响

添加大豆磷脂作为表面活性剂促进HA在烟油溶剂(丙二醇：甘油＝5：5)中的溶解。具体地：向对比例1的体系中添加基于HA质量的0.01倍(2mg)的大豆磷脂，20k rpm剪切速率下，均质10min。参见图2，静置沉淀后，底部沉淀高度略微降低，底部沉淀约150mg，表明该剂量下的大豆磷脂对透明质酸钠溶解改善不明显。

实施例1：添加20mg大豆磷脂并均质对大分子量HA在烟油溶剂中的溶解效果改善

参照对比例2，区别仅在于，大豆磷脂的添加量为基于HA质量的0.1倍(20mg)的大豆磷脂。参见图3，静置沉淀后，底部沉淀约130mg，表明该剂量下的大豆磷脂对透明质酸钠溶解有所改善。

实施例2：添加0.1g大豆磷脂并均质对大分子量HA在烟油溶剂中的溶解效果改善

参照对比例2，区别仅在于，大豆磷脂的添加量为基于HA质量的0.5倍(0.1g)的大豆磷脂。参见图4，静置沉淀后，底部沉淀约110mg，表明该剂量下的大豆磷脂对透明质酸钠溶解得到很大改善。

实施例3：添加0.2g大豆磷脂并均质对大分子量HA在烟油溶剂中的溶解效果改善

参照对比例2，区别仅在于，大豆磷脂的添加量为基于HA质量的1倍(0.2g)的大豆磷脂。参见图5，静置沉淀后，底部沉淀约100mg，对比实施例2溶解性能有所提高，但是较多大豆磷脂的加入使体系呈现黄色，而且体系漂浮着不溶解的大豆磷脂。后续需要将大豆磷脂从体系中分离出来，才能应用于电子烟烟油。

对比例3：添加1g大豆磷脂并均质对大分子量HA在烟油溶剂中的溶解效果的影响

参照对比例2，区别仅在于，大豆磷脂的添加量为基于HA质量的5倍(1g)的大豆磷脂。参见图6，静置沉淀后，底部沉淀仍约为100mg，溶液呈现更深的黄色，且体系中出现更多不溶解的大豆磷脂。

本发明研究发现，通过调整大豆磷脂的添加量，可以极大改善大分子量透明质酸钠(分子量为400k Da)在烟油溶剂(丙二醇与甘油的质量比为1:1)中的溶解度(从只能溶解2mg/mL到溶解5mg/mL)，其中优化参数：大豆磷脂添加量为透明质酸钠的0.1倍(质量计)，剪切均质速度为30 000rpm，剪切时间为10min。

实施例4：使用小分子量的HA进行溶解

用小分子量的HA替代大分子量的HA溶解在(丙二醇与甘油的质量比为1:1)中，不同浓度的400kDa HA在烟油溶剂中的溶解效果(A:0.5mg/mL、B:1mg/mL、C：10mg/mL)如图7所示，不同浓度的3k Da HA在烟油溶剂的溶解效果(A:0.5mg/mL、B:1mg/mL、C：10mg/mL)如图8所示。对比两者的溶解效果，发现用小分子量的HA整个体系更加清澈明亮且离心管底部没有沉淀累积，说明小分子量的HA溶解度更高。

对3k Da HA在烟油溶剂(丙二醇与甘油的质量比为1:1)中的最高浓度(形成澄清溶液)进行了测试，结果表明3k Da HA在烟油溶剂(丙二醇与甘油的质量比为1:1)中的最高浓度为10mg/mL。

而配合添加大豆磷脂及均质促进溶解(大豆磷脂的添加量为HA质量的0.01～10倍，剪切速率为10k～40k rpm，剪切时间为1～30min)后，在优化条件(大豆磷脂的添加量为HA质量的0.1倍，剪切速率为30000rpm，剪切时间为10min)下，3k Da HA在烟油溶剂(丙二醇与甘油的质量比为1:1)中的浓度可进一步提升至200mg/mL。

通过本发明的方法添加0.1倍3k Da透明质酸钠的质量的大豆磷脂，调整优化参数后，可以实现10～200mg/mL的HA在电子烟油中的完全溶解，其中HA的分子量范围为1k～10kDa。

实施例5：复配电子烟烟油的制备

电子烟油(HA+SI+VE)的具体制备步骤如下：

(1)配制溶剂和溶质：

以质量比丙二醇：甘油＝1：1的混合物作为溶剂，以透明质酸钠和大豆磷脂为溶质；其中，透明质酸钠浓度为100mg/mL溶剂、大豆磷脂浓度为10mg/mL溶剂。在50℃条件下将溶质在溶剂中溶解后均质剪切，剪切速率为30000rpm，剪切时间为10min，得到雾化液；

(2)配制电子烟烟油

向雾化液中添加不大于5g/100g雾化液的尼古丁盐、25mg/mL雾化液的大豆异黄酮和50mg/mL雾化液的维生素E，得到混合物，将混合物置于离心机中离心；离心参数：10000r/min，离心力4000G，2min；离心结束后，取上清液即为电子烟烟油。

电子烟油(HA+SI)的具体制备步骤如下：

(1)配制溶剂和溶质：

以质量比丙二醇：甘油＝1：1的混合物作为溶剂，以透明质酸钠和大豆磷脂为溶质；其中，透明质酸钠浓度为100mg/mL溶剂、大豆磷脂浓度为10mg/mL溶剂。在50℃条件下将溶质在溶剂中溶解后均质剪切，剪切速率为30000rpm，剪切时间为10min，得到雾化液；

(2)配制电子烟烟油

向雾化液中添加不大于5g/100g雾化液的尼古丁盐和25mg/mL雾化液的大豆异黄酮，得到混合物，将混合物置于离心机中离心；离心参数：10000r/min，离心力4000G，2min；离心结束后，取上清液即为电子烟烟油。

电子烟油(HA+VE)的具体制备步骤如下：

(1)配制溶剂和溶质：

以质量比丙二醇：甘油＝1：1的混合物作为溶剂，以透明质酸钠和大豆磷脂为溶质；其中，透明质酸钠浓度为100mg/mL溶剂、大豆磷脂浓度为10mg/mL溶剂。在50℃条件下将溶质在溶剂中溶解后均质剪切，剪切速率为30000rpm，剪切时间为10min，得到雾化液；

(2)配制电子烟烟油

向雾化液中添加不大于5g/100g雾化液的尼古丁盐和50mg/mL雾化液的维生素E，得到混合物，将混合物置于离心机中离心；离心参数：10000r/min，离心力4000G，2min；离心结束后，取上清液即为电子烟烟油。

电子烟油(HA)的具体制备步骤如下：

(1)配制溶剂和溶质：

以质量比丙二醇：甘油＝1：1的混合物作为溶剂，以透明质酸钠和大豆磷脂为溶质；其中，透明质酸钠浓度为100mg/mL溶剂、大豆磷脂浓度为10mg/mL溶剂。在50℃条件下将溶质在溶剂中溶解后均质剪切，剪切速率为30000rpm，剪切时间为10min，得到雾化液；

(2)配制电子烟烟油

向雾化液中添加不大于5g/100g雾化液的尼古丁盐得到混合物，将混合物置于离心机中离心；离心参数：10000r/min，离心力4000G，2min；离心结束后，取上清液即为电子烟烟油。

电子烟油(SI)的具体制备步骤如下：

以质量比丙二醇：甘油＝1：1的混合物作为溶剂，向其中中添加不大于5g/100g溶剂的尼古丁盐和25mg/mL溶剂的大豆异黄酮得到混合物，将混合物置于离心机中离心；离心参数：10000r/min，离心力4000G，2min；离心结束后，取上清液即为电子烟烟油。

电子烟油(VE)的具体制备步骤如下：

以质量比丙二醇：甘油＝1：1的混合物作为溶剂，向其中中添加不大于5g/100g溶剂的尼古丁盐和50mg/mL溶剂的维生素E得到混合物，将混合物置于离心机中离心；离心参数：10000r/min，离心力4000G，2min；离心结束后，取上清液即为电子烟烟油。

实施例6：含小分子量HA+SI的电子烟烟油雾化吸入对皮肤水分的改善

实施例6以实施例5所制备的电子烟油HA、电子烟油SI、电子烟油HA+SI为例，对电子烟烟油雾化吸入对皮肤水分的改善效果进行对比研究，具体步骤如下：

(1)实验对象及分组

选取40只6周龄的SKH-1-E无毛雄性小鼠，在温度为20±2℃和湿度55±5％下保持12h光暗循环适应一周，期间保持全部小鼠体重及角质层水分含量近似相同。然后将其中32只小鼠(给药组24只和对照组8只)用紫外灯光照射12周，累计4.7J/cm²的辐射剂量：第1周共照射3次，每次照射1min；第1周后随着周数的增加将每次照射的时间逐渐增加到4min，以建立人体皮肤日晒老化模型。剩下8只小鼠不经过紫外灯照射，作为空白组。

(2)实验方法

空白组(8只小鼠)和对照组(8只小鼠)均不接受电子烟烟油雾化暴露；而给药组的24只小鼠平均分为3组，通过IES-N口鼻式吸入暴露系统将实施例5制备的电子烟油HA、电子烟油SI、电子烟油HA+SI分别雾化让小鼠经鼻吸入，记作HA组、SI组和HA+SI组，各8只小鼠：每日将给药组小鼠放入暴露箱中，再将雾化气溶胶通入暴露箱；HA组HA剂量为4mg/kg；SI组SI剂量为1mg/kg；HA+SI组HA剂量为4mg/kg，SI剂量为1mg/kg，连续给予4周，每天1次。期间在每次给药前使用皮肤水分测试仪CM825测定所有组别背部皮肤中的角质层水分含量，每周测试2次，取平均值。

(3)实验结果

从图9可以看出：不接受紫外照射的小鼠(空白组)背部皮肤角质层含水量远远高于接受紫外照射的小鼠(对照组和给药组)。HA组、SI组和HA+SI组在通过电子烟雾化吸入HA和/或SI的4周内，相较未给药的对照组，小鼠背部皮肤角质层含水量均出现明显增加，且对皮肤的改善效果HA+SI组>HA组>SI组。特别是持续雾化吸入4周后，HA+SI组可将皮肤的水分含量相较对照组提升17.5％，远高于HA组的5％和SI组的0％。

结论：含HA、SI的电子烟烟液雾化吸入后对日晒老化的皮肤水分含量具有一定的提升作用。SI的效果不如HA，随着持续吸入时间的延长，SI对皮肤水分的提升效果逐渐降低，持续雾化吸入4周后相较未给药组没有明显改善。HA与SI复配可以显著提升老鼠皮肤水分含量且改善效果较为稳定，说明HA与SI复配效果优于单独给药。

实施例7：含小分子HA+VE的电子烟油雾化吸入对皮肤水分的改善

实施例7以实施例5所制备的电子烟油HA、电子烟油VE、电子烟油HA+VE为例，对电子烟烟油雾化吸入对皮肤水分的改善效果进行对比研究，具体步骤如下：

(1)实验对象及分组

选取40只6周龄的SKH-1-E无毛雄性小鼠，在温度为20±2℃和湿度55±5％下保持12h光暗循环适应一周，期间保持全部小鼠体重及角质层水分含量近似相同。然后将其中32只小鼠(给药组24只和对照组8只)用紫外灯光照射12周，累计4.7J/cm²的辐射剂量：第1周共照射3次，每次照射1min；第1周后随着周数的增加将每次照射的时间逐渐增加到4min，以建立人体皮肤日晒老化模型。剩下8只小鼠不经过紫外灯照射，作为空白组。

(2)实验方法

空白组(8只小鼠)和对照组(8只小鼠)均不接受电子烟烟油雾化暴露；而给药组的24只小鼠平均分为3组，通过IES-N口鼻式吸入暴露系统将实施例5制备的电子烟油HA、电子烟油VE、电子烟油HA+VE分别雾化让小鼠经鼻吸入，记作HA组、VE组和HA+VE组，各8只小鼠：每日将给药组小鼠放入暴露箱中，再将雾化气溶胶通入暴露箱；HA组HA剂量为4mg/kg；VE组VE剂量为2mg/kg；HA+SI组HA剂量为4mg/kg，VE剂量为2mg/kg，连续给予4周，每天1次。期间在每次给药前使用皮肤水分测试仪CM825测定所有组别背部皮肤中的角质层水分含量，每周测试2次，取平均值。

(3)实验结果

从图10可以看出：HA组和HA+VE组在通过电子烟雾化吸入HA(和VE)的4周内，相较未给药的对照组，小鼠背部皮肤角质层含水量均出现明显增加，同时HA组和HA+VE组对于皮肤水分的改善效果基本相当。而VE组在通过电子烟雾化吸入VE的4周内，相较未给药的对照组，小鼠背部皮肤角质层含水量没有明显改善。

结论：雾化吸入VE没有补水的作用。HA与VE复配，与单独HA雾化吸入对于提升老鼠皮肤水分含量的效果基本相当。

实施例8：HA+SI+VE复配电子烟油雾化吸入对皮肤水分的改善

实施例8以实施例5所制备的电子烟油HA+SI+VE为例，对电子烟烟油雾化吸入对皮肤水分的改善效果进行对比研究，具体步骤如下：

(1)实验对象及分组

选取24只6周龄的SKH-1-E无毛雄性小鼠，在温度为20±2℃和湿度55±5％下保持12h光暗循环适应一周，期间保持全部小鼠体重及角质层水分含量近似相同。然后将其中16只小鼠(给药组8只和对照组8只)用紫外灯光照射12周，累计4.7J/cm²的辐射剂量：第1周共照射3次，每次照射1min；第1周后随着周数的增加将每次照射的时间逐渐增加到4min，以建立人体皮肤日晒老化模型。剩下8只小鼠不经过紫外灯照射，作为空白组。

(2)实验方法

空白组和对照组不接收含透明质酸钠的烟油雾化暴露；而给药组通过IES-N口鼻式吸入暴露系统将透明质酸钠+大豆异黄酮+维生素E的烟油溶液雾化让小鼠经鼻吸入，记作HA+SI+VE组。每日将试验动物放入暴露箱中，再将雾化气溶胶通入暴露箱。HA、SI、VE按照4、1、2mg/kg的剂量给药，连续给予4周，每天一次。期间在每次给药前使用皮肤水分测试仪CM825测定所有组别背部皮肤中的角质层水分含量，每周测试两次。

空白组(8只小鼠)和对照组(8只小鼠)均不接受电子烟烟油雾化暴露；而给药组的8只小鼠通过IES-N口鼻式吸入暴露系统将实施例5制备的电子烟油HA+SI+VE雾化让小鼠经鼻吸入，记作HA+SI+VE组：每日将给药组小鼠放入暴露箱中，再将雾化气溶胶通入暴露箱；其中HA剂量为4mg/kg；SI剂量为1mg/kg；VE剂量为2mg/kg，连续给予4周，每天1次。期间在每次给药前使用皮肤水分测试仪CM825测定所有组别背部皮肤中的角质层水分含量，每周测试2次，取平均值。

(3)实验结果

对比图9、10、11中的曲线，HA、SI和VE复配的电子烟烟油经过雾化吸入，能明显提升小鼠背部皮肤角质层含水量(四周内小鼠背部皮肤角质层含水量提升至50％左右)，从而改善由紫外辐照引发的皮肤老化问题。

实施例9：HA+SI+VE复配电子烟油雾化吸入对UVB引起的皮肤光损伤的保护作用

实施例9以实施例5所制备的电子烟油HA+SI+VE为例，对UVB引起的皮肤光损伤的保护作用进行对比研究，具体步骤如下：

(1)实验对象及分组

将健康雌性昆明小鼠25只，体重15g左右。在温度为20±2℃和湿度55±5％下条件下适应性饲养1周后，控制每只小鼠体重约为20g左右，分为5组，每组5只，分别为空白组、模型组和给药的低、中、高剂量组。在试验前先用灭菌的手术剪和推刀剃尽小鼠背部的毛，脱毛面积约2cm×2cm。

(2)实验方法

空白组的老鼠不做紫外照射处理。模型组和给药组的老鼠用紫外灯光照射2周，第一周共3次每次照射1min；随后逐渐增加到4min，总共4.7J/cm²的辐射剂量。给药组通过IES-N口鼻式吸入暴露系统将电子烟油HA+SI+VE雾化让小鼠经鼻吸入。每日将给药组小鼠放入暴露箱中，再将雾化气溶胶通入暴露箱，HA、SI和VE分别按照4mg/kg、1mg/kg和2mg/kg的剂量作为高剂量组，2mg/kg、0.5mg/kg和1mg/kg为中剂量组，1mg/kg、0.25mg/kg和0.5mg/kg作为低剂量组，连续给予2周，每天一次。模型组不给药处理。最后一周小鼠眼眶取血离心取上清液测SOD的含量；并取下空白组、对照都和高剂量组小鼠背部脱毛处全层皮肤去除脂肪，做组织病理切片和HE染色。

(3)实验结果

SOD是需氧生物体内唯一以氧自由基为底物的金属酶能有效清除并阻止超氧自由基引发的自由基连锁反应，维持自由基清除和产生的动态平衡，保护皮下组织免受自由基的损害。

从图10中可以看出，经过紫外线照射后小鼠体内SOD含量明显降低，而雾化吸入低、中、高剂量的电子烟油HA+SI+VE的三组给药组小鼠对比模型组的SOD含量有了明显提高，低剂量组较对照组稍微有所提高，而中剂量组和高剂量组效果接近，从经济角度选择中剂量组作为最优配比。

观察图11的小鼠背部皮肤病理学图像发现，空白组的小鼠皮肤没有炎症反应，细胞有清晰的分层。而模型组小鼠皮肤局部组织炎症性坏死，创面见少部分表皮覆盖，真皮组织排列紊乱，且皮脂腺增殖异常。中剂量组组表皮厚度有所增加，较紫外模型组有所改善，真皮纤维卷曲断裂现象稍明显，表明HA+SI+VE复配电子烟油雾化吸入对UVB引起的皮肤光损伤的保护作用。

Claims (10)

1.一种雾化液，其特征在于，所述雾化液中至少含有透明质酸钠和大豆异黄酮；其中，所述透明质酸钠的浓度为5～200mg/mL。

2.根据权利要求1所述的雾化液，其特征在于，所述透明质酸钠与所述大豆异黄酮的质量比为4:1。

3.根据权利要求1所述的雾化液，其特征在于，所述雾化液中还含有维生素E。

4.根据权利要求3所述的雾化液，其特征在于，所述透明质酸钠与所述维生素E的质量比为2:1。

5.根据权利要求1所述的雾化液，其特征在于，所述雾化液的溶剂含有丙二醇和甘油；所述雾化液中还含有乳化剂，所述乳化剂与所述透明质酸钠的质量比为(0.05～0.5):1。

6.根据权利要求5所述的雾化液，其特征在于，所述乳化剂为食品级乳化剂或医用级乳化剂。

7.根据权利要求1所述的雾化液，其特征在于，所述透明质酸钠的相对分子质量为1k～400kDa。

8.一种电子烟烟油，其特征在于，包括权利要求1～7任一项所述的雾化液和尼古丁盐，所述电子烟烟油中尼古丁盐的浓度为：(0.1～5g)/100g雾化液。

9.权利要求8所述的电子烟烟油的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)将透明质酸钠、乳化剂按比例在加热条件下充分溶解于含有丙二醇和甘油的雾化液溶剂中，溶解后均质剪切得到混合物A；

(2)向混合物A中按比例添加大豆异黄酮、维生素E和尼古丁盐，充分混合、离心取上清液即为电子烟烟油。

10.权利要求1～8任一项所述的雾化液在制备口鼻吸入式护肤产品中应用。

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