CN113801860A - 蛋白质CGTase作为环糊精糖基转移酶的应用 - Google Patents
蛋白质CGTase作为环糊精糖基转移酶的应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN113801860A CN113801860A CN202010547407.1A CN202010547407A CN113801860A CN 113801860 A CN113801860 A CN 113801860A CN 202010547407 A CN202010547407 A CN 202010547407A CN 113801860 A CN113801860 A CN 113801860A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- dna molecule
- protein
- seq
- nucleotide
- coding region
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 108010025880 Cyclomaltodextrin glucanotransferase Proteins 0.000 title claims abstract description 44
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 claims abstract description 25
- 239000008107 starch Substances 0.000 claims abstract description 25
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 claims abstract description 25
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 claims abstract description 3
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 claims description 200
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 claims description 180
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 107
- 229920000858 Cyclodextrin Polymers 0.000 claims description 106
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 101
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 claims description 100
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 96
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 96
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical group C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims description 64
- GDSRMADSINPKSL-HSEONFRVSA-N gamma-cyclodextrin Chemical compound OC[C@H]([C@H]([C@@H]([C@H]1O)O)O[C@H]2O[C@@H]([C@@H](O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O3)[C@H](O)[C@H]2O)CO)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]3O[C@@H]1CO GDSRMADSINPKSL-HSEONFRVSA-N 0.000 claims description 41
- WHGYBXFWUBPSRW-FOUAGVGXSA-N beta-cyclodextrin Chemical compound OC[C@H]([C@H]([C@@H]([C@H]1O)O)O[C@H]2O[C@@H]([C@@H](O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O3)[C@H](O)[C@H]2O)CO)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]3O[C@@H]1CO WHGYBXFWUBPSRW-FOUAGVGXSA-N 0.000 claims description 40
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 claims description 40
- HFHDHCJBZVLPGP-RWMJIURBSA-N alpha-cyclodextrin Chemical compound OC[C@H]([C@H]([C@@H]([C@H]1O)O)O[C@H]2O[C@@H]([C@@H](O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O3)[C@H](O)[C@H]2O)CO)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]3O[C@@H]1CO HFHDHCJBZVLPGP-RWMJIURBSA-N 0.000 claims description 37
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 claims description 30
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims description 27
- HFHDHCJBZVLPGP-UHFFFAOYSA-N schardinger α-dextrin Chemical compound O1C(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(O)C2O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC2C(O)C(O)C1OC2CO HFHDHCJBZVLPGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 23
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 claims description 17
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 13
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 12
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 12
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 12
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims description 10
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 claims description 9
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 claims description 9
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 claims description 9
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 229960003767 alanine Drugs 0.000 claims description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 4
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 3
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 claims description 3
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 claims description 3
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims description 3
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 3
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 claims description 3
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 3
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 3
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 claims description 3
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 claims description 3
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 claims description 3
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims description 3
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims description 3
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims description 3
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 claims description 3
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims description 3
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 claims description 3
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 claims description 3
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 claims description 3
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 claims description 3
- 235000009697 arginine Nutrition 0.000 claims description 3
- 229960003121 arginine Drugs 0.000 claims description 3
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 claims description 3
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 claims description 3
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 claims description 3
- 229960005261 aspartic acid Drugs 0.000 claims description 3
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 3
- 230000000593 degrading effect Effects 0.000 claims description 3
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 claims description 3
- 229960002989 glutamic acid Drugs 0.000 claims description 3
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 claims description 3
- 235000004554 glutamine Nutrition 0.000 claims description 3
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229960002743 glutamine Drugs 0.000 claims description 3
- 229960002449 glycine Drugs 0.000 claims description 3
- 235000014705 isoleucine Nutrition 0.000 claims description 3
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 claims description 3
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 235000005772 leucine Nutrition 0.000 claims description 3
- 229960003136 leucine Drugs 0.000 claims description 3
- 235000018977 lysine Nutrition 0.000 claims description 3
- 229960003646 lysine Drugs 0.000 claims description 3
- 235000006109 methionine Nutrition 0.000 claims description 3
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 claims description 3
- 229960004452 methionine Drugs 0.000 claims description 3
- 229960002429 proline Drugs 0.000 claims description 3
- 235000004400 serine Nutrition 0.000 claims description 3
- 229960001153 serine Drugs 0.000 claims description 3
- 235000008521 threonine Nutrition 0.000 claims description 3
- 229960002898 threonine Drugs 0.000 claims description 3
- 235000014393 valine Nutrition 0.000 claims description 3
- 229960004295 valine Drugs 0.000 claims description 3
- 239000004474 valine Substances 0.000 claims description 3
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 claims description 2
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 claims description 2
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 claims description 2
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 claims description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 8
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 abstract description 3
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 abstract 2
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 66
- 229940080345 gamma-cyclodextrin Drugs 0.000 description 40
- 239000001116 FEMA 4028 Substances 0.000 description 39
- 235000011175 beta-cyclodextrine Nutrition 0.000 description 39
- 229960004853 betadex Drugs 0.000 description 39
- 229920001450 Alpha-Cyclodextrin Polymers 0.000 description 36
- 229940043377 alpha-cyclodextrin Drugs 0.000 description 36
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 28
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 28
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 28
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 28
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 21
- 239000000047 product Substances 0.000 description 19
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 18
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 17
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- 150000001294 alanine derivatives Chemical group 0.000 description 14
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 9
- 238000000034 method Methods 0.000 description 9
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 7
- 230000031700 light absorption Effects 0.000 description 7
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 7
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 7
- KZMAWJRXKGLWGS-UHFFFAOYSA-N 2-chloro-n-[4-(4-methoxyphenyl)-1,3-thiazol-2-yl]-n-(3-methoxypropyl)acetamide Chemical compound S1C(N(C(=O)CCl)CCCOC)=NC(C=2C=CC(OC)=CC=2)=C1 KZMAWJRXKGLWGS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 6
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 5
- 238000011160 research Methods 0.000 description 5
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 4
- 108010055629 Glucosyltransferases Proteins 0.000 description 4
- 102000000340 Glucosyltransferases Human genes 0.000 description 4
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 4
- 229940097362 cyclodextrins Drugs 0.000 description 4
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 4
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 4
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 4
- 125000002791 glucosyl group Chemical group C1([C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O1)CO)* 0.000 description 4
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 4
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 4
- BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N isopropyl beta-D-thiogalactopyranoside Chemical compound CC(C)S[C@@H]1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N 0.000 description 4
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 4
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241001198387 Escherichia coli BL21(DE3) Species 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 3
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- XBGGUPMXALFZOT-UHFFFAOYSA-N glycyl-L-tyrosine hemihydrate Natural products NCC(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 XBGGUPMXALFZOT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 3
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 3
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- TZFQICWZWFNIKU-KKUMJFAQSA-N Asn-Leu-Tyr Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 TZFQICWZWFNIKU-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 2
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000008300 Mutant Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010021466 Mutant Proteins Proteins 0.000 description 2
- DWPXHLIBFQLKLK-CYDGBPFRSA-N Pro-Pro-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@H]1NCCC1 DWPXHLIBFQLKLK-CYDGBPFRSA-N 0.000 description 2
- PURRNJBBXDDWLX-ZDLURKLDSA-N Ser-Thr-Gly Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)NCC(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)N)O PURRNJBBXDDWLX-ZDLURKLDSA-N 0.000 description 2
- 108010028230 Trp-Ser- His-Pro-Gln-Phe-Glu-Lys Proteins 0.000 description 2
- HKYTWJOWZTWBQB-AVGNSLFASA-N Tyr-Glu-Asp Chemical compound OC(=O)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 HKYTWJOWZTWBQB-AVGNSLFASA-N 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 108010069205 aspartyl-phenylalanine Proteins 0.000 description 2
- 108010047857 aspartylglycine Proteins 0.000 description 2
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 2
- RYYVLZVUVIJVGH-UHFFFAOYSA-N caffeine Chemical compound CN1C(=O)N(C)C(=O)C2=C1N=CN2C RYYVLZVUVIJVGH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 2
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 description 2
- -1 cyclic oligosaccharide Chemical class 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 2
- 108010063718 gamma-glutamylaspartic acid Proteins 0.000 description 2
- 108010042598 glutamyl-aspartyl-glycine Proteins 0.000 description 2
- 108010044374 isoleucyl-tyrosine Proteins 0.000 description 2
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 229920001542 oligosaccharide Polymers 0.000 description 2
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 1
- 108010044087 AS-I toxin Proteins 0.000 description 1
- MKZCBYZBCINNJN-DLOVCJGASA-N Ala-Asp-Phe Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 MKZCBYZBCINNJN-DLOVCJGASA-N 0.000 description 1
- NKJBKNVQHBZUIX-ACZMJKKPSA-N Ala-Gln-Asp Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O NKJBKNVQHBZUIX-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- YIGLXQRFQVWFEY-NRPADANISA-N Ala-Gln-Val Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O YIGLXQRFQVWFEY-NRPADANISA-N 0.000 description 1
- HXNNRBHASOSVPG-GUBZILKMSA-N Ala-Glu-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O HXNNRBHASOSVPG-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- NBTGEURICRTMGL-WHFBIAKZSA-N Ala-Gly-Ser Chemical compound C[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O NBTGEURICRTMGL-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- LBYMZCVBOKYZNS-CIUDSAMLSA-N Ala-Leu-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O LBYMZCVBOKYZNS-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- WUHJHHGYVVJMQE-BJDJZHNGSA-N Ala-Leu-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O WUHJHHGYVVJMQE-BJDJZHNGSA-N 0.000 description 1
- BHFOJPDOQPWJRN-XDTLVQLUSA-N Ala-Tyr-Gln Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](Cc1ccc(O)cc1)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O BHFOJPDOQPWJRN-XDTLVQLUSA-N 0.000 description 1
- PGNNQOJOEGFAOR-KWQFWETISA-N Ala-Tyr-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)C)CC1=CC=C(O)C=C1 PGNNQOJOEGFAOR-KWQFWETISA-N 0.000 description 1
- 239000004382 Amylase Substances 0.000 description 1
- 102000013142 Amylases Human genes 0.000 description 1
- 108010065511 Amylases Proteins 0.000 description 1
- PEFFAAKJGBZBKL-NAKRPEOUSA-N Arg-Ala-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O PEFFAAKJGBZBKL-NAKRPEOUSA-N 0.000 description 1
- TTXYKSADPSNOIF-IHRRRGAJSA-N Arg-Asp-Phe Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O TTXYKSADPSNOIF-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- YKBHOXLMMPZPHQ-GMOBBJLQSA-N Arg-Ile-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O YKBHOXLMMPZPHQ-GMOBBJLQSA-N 0.000 description 1
- COXMUHNBYCVVRG-DCAQKATOSA-N Arg-Leu-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O COXMUHNBYCVVRG-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- AOHKLEBWKMKITA-IHRRRGAJSA-N Arg-Phe-Ser Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N AOHKLEBWKMKITA-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- UIUXXFIKWQVMEX-UFYCRDLUSA-N Arg-Phe-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O UIUXXFIKWQVMEX-UFYCRDLUSA-N 0.000 description 1
- SLQQPJBDBVPVQV-JYJNAYRXSA-N Arg-Phe-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O SLQQPJBDBVPVQV-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 1
- DNLQVHBBMPZUGJ-BQBZGAKWSA-N Arg-Ser-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(O)=O DNLQVHBBMPZUGJ-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- BECXEHHOZNFFFX-IHRRRGAJSA-N Arg-Ser-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O BECXEHHOZNFFFX-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- SYFHFLGAROUHNT-VEVYYDQMSA-N Arg-Thr-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O SYFHFLGAROUHNT-VEVYYDQMSA-N 0.000 description 1
- CGWVCWFQGXOUSJ-ULQDDVLXSA-N Arg-Tyr-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O CGWVCWFQGXOUSJ-ULQDDVLXSA-N 0.000 description 1
- KXFCBAHYSLJCCY-ZLUOBGJFSA-N Asn-Asn-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O KXFCBAHYSLJCCY-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- XSGBIBGAMKTHMY-WHFBIAKZSA-N Asn-Asp-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)NCC(O)=O XSGBIBGAMKTHMY-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- HJRBIWRXULGMOA-ACZMJKKPSA-N Asn-Gln-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O HJRBIWRXULGMOA-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- WONGRTVAMHFGBE-WDSKDSINSA-N Asn-Gly-Gln Chemical compound C(CC(=O)N)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(=O)N)N WONGRTVAMHFGBE-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- SUEIIIFUBHDCCS-PBCZWWQYSA-N Asn-His-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O SUEIIIFUBHDCCS-PBCZWWQYSA-N 0.000 description 1
- ZMUQQMGITUJQTI-CIUDSAMLSA-N Asn-Leu-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O ZMUQQMGITUJQTI-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- UYCPJVYQYARFGB-YDHLFZDLSA-N Asn-Phe-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O UYCPJVYQYARFGB-YDHLFZDLSA-N 0.000 description 1
- YUOXLJYVSZYPBJ-CIUDSAMLSA-N Asn-Pro-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O YUOXLJYVSZYPBJ-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- VHQSGALUSWIYOD-QXEWZRGKSA-N Asn-Pro-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O VHQSGALUSWIYOD-QXEWZRGKSA-N 0.000 description 1
- NPZJLGMWMDNQDD-GHCJXIJMSA-N Asn-Ser-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O NPZJLGMWMDNQDD-GHCJXIJMSA-N 0.000 description 1
- PIABYSIYPGLLDQ-XVSYOHENSA-N Asn-Thr-Phe Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O PIABYSIYPGLLDQ-XVSYOHENSA-N 0.000 description 1
- JPPLRQVZMZFOSX-UWJYBYFXSA-N Asn-Tyr-Ala Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 JPPLRQVZMZFOSX-UWJYBYFXSA-N 0.000 description 1
- GHWWTICYPDKPTE-NGZCFLSTSA-N Asn-Val-Pro Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N GHWWTICYPDKPTE-NGZCFLSTSA-N 0.000 description 1
- CASGONAXMZPHCK-FXQIFTODSA-N Asp-Asn-Arg Chemical compound C(C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)N)CN=C(N)N CASGONAXMZPHCK-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- ZELQAFZSJOBEQS-ACZMJKKPSA-N Asp-Asn-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O ZELQAFZSJOBEQS-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- VBVKSAFJPVXMFJ-CIUDSAMLSA-N Asp-Asn-His Chemical compound C1=C(NC=N1)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)N VBVKSAFJPVXMFJ-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- RDRMWJBLOSRRAW-BYULHYEWSA-N Asp-Asn-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O RDRMWJBLOSRRAW-BYULHYEWSA-N 0.000 description 1
- DXQOQMCLWWADMU-ACZMJKKPSA-N Asp-Gln-Ser Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O DXQOQMCLWWADMU-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- RRKCPMGSRIDLNC-AVGNSLFASA-N Asp-Glu-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O RRKCPMGSRIDLNC-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- YDJVIBMKAMQPPP-LAEOZQHASA-N Asp-Glu-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O YDJVIBMKAMQPPP-LAEOZQHASA-N 0.000 description 1
- DTNUIAJCPRMNBT-WHFBIAKZSA-N Asp-Gly-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(O)=O DTNUIAJCPRMNBT-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- WBDWQKRLTVCDSY-WHFBIAKZSA-N Asp-Gly-Asp Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O WBDWQKRLTVCDSY-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- TZOZNVLBTAFJRW-UGYAYLCHSA-N Asp-Ile-Asp Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)N TZOZNVLBTAFJRW-UGYAYLCHSA-N 0.000 description 1
- KQBVNNAPIURMPD-PEFMBERDSA-N Asp-Ile-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O KQBVNNAPIURMPD-PEFMBERDSA-N 0.000 description 1
- YFSLJHLQOALGSY-ZPFDUUQYSA-N Asp-Ile-Lys Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)N YFSLJHLQOALGSY-ZPFDUUQYSA-N 0.000 description 1
- JNNVNVRBYUJYGS-CIUDSAMLSA-N Asp-Leu-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O JNNVNVRBYUJYGS-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- DWOGMPWRQQWPPF-GUBZILKMSA-N Asp-Leu-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O DWOGMPWRQQWPPF-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- LIVXPXUVXFRWNY-CIUDSAMLSA-N Asp-Lys-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O LIVXPXUVXFRWNY-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- NZWDWXSWUQCNMG-GARJFASQSA-N Asp-Lys-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)N)C(=O)O NZWDWXSWUQCNMG-GARJFASQSA-N 0.000 description 1
- SAKCBXNPWDRWPE-BQBZGAKWSA-N Asp-Met-Gly Chemical compound CSCC[C@@H](C(=O)NCC(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)N SAKCBXNPWDRWPE-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- RRUWMFBLFLUZSI-LPEHRKFASA-N Asp-Met-Pro Chemical compound CSCC[C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)N RRUWMFBLFLUZSI-LPEHRKFASA-N 0.000 description 1
- GPPIDDWYKJPRES-YDHLFZDLSA-N Asp-Phe-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O GPPIDDWYKJPRES-YDHLFZDLSA-N 0.000 description 1
- RSMZEHCMIOKNMW-GSSVUCPTSA-N Asp-Thr-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O RSMZEHCMIOKNMW-GSSVUCPTSA-N 0.000 description 1
- SQIARYGNVQWOSB-BZSNNMDCSA-N Asp-Tyr-Phe Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O SQIARYGNVQWOSB-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 1
- QOJJMJKTMKNFEF-ZKWXMUAHSA-N Asp-Val-Ser Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O QOJJMJKTMKNFEF-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- BLGNLNRBABWDST-CIUDSAMLSA-N Cys-Leu-Asp Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)N BLGNLNRBABWDST-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- XZWYTXMRWQJBGX-VXBMVYAYSA-N FLAG peptide Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 XZWYTXMRWQJBGX-VXBMVYAYSA-N 0.000 description 1
- ZPDVKYLJTOFQJV-WDSKDSINSA-N Gln-Asn-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)NCC(O)=O ZPDVKYLJTOFQJV-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- RKAQZCDMSUQTSS-FXQIFTODSA-N Gln-Asp-Gln Chemical compound C(CC(=O)N)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)O)N RKAQZCDMSUQTSS-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- IXFVOPOHSRKJNG-LAEOZQHASA-N Gln-Asp-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O IXFVOPOHSRKJNG-LAEOZQHASA-N 0.000 description 1
- CITDWMLWXNUQKD-FXQIFTODSA-N Gln-Gln-Asn Chemical compound C(CC(=O)N)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)N CITDWMLWXNUQKD-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- LWDGZZGWDMHBOF-FXQIFTODSA-N Gln-Glu-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O LWDGZZGWDMHBOF-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- YRWWJCDWLVXTHN-LAEOZQHASA-N Gln-Ile-Gly Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)NCC(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)N)N YRWWJCDWLVXTHN-LAEOZQHASA-N 0.000 description 1
- ITZWDGBYBPUZRG-KBIXCLLPSA-N Gln-Ile-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O ITZWDGBYBPUZRG-KBIXCLLPSA-N 0.000 description 1
- MQJDLNRXBOELJW-KKUMJFAQSA-N Gln-Pro-Phe Chemical compound N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](Cc1ccccc1)C(O)=O MQJDLNRXBOELJW-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- UBRQJXFDVZNYJP-AVGNSLFASA-N Gln-Tyr-Ser Chemical compound C1=CC(=CC=C1C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)N)N)O UBRQJXFDVZNYJP-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- SZXSSXUNOALWCH-ACZMJKKPSA-N Glu-Ala-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O SZXSSXUNOALWCH-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- SYDJILXOZNEEDK-XIRDDKMYSA-N Glu-Arg-Trp Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(O)=O SYDJILXOZNEEDK-XIRDDKMYSA-N 0.000 description 1
- ZOXBSICWUDAOHX-GUBZILKMSA-N Glu-Asn-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O ZOXBSICWUDAOHX-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- PCBBLFVHTYNQGG-LAEOZQHASA-N Glu-Asn-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N PCBBLFVHTYNQGG-LAEOZQHASA-N 0.000 description 1
- DSPQRJXOIXHOHK-WDSKDSINSA-N Glu-Asp-Gly Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)NCC(O)=O DSPQRJXOIXHOHK-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- AUTNXSQEVVHSJK-YVNDNENWSA-N Glu-Glu-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O AUTNXSQEVVHSJK-YVNDNENWSA-N 0.000 description 1
- ITBHUUMCJJQUSC-LAEOZQHASA-N Glu-Ile-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(O)=O ITBHUUMCJJQUSC-LAEOZQHASA-N 0.000 description 1
- KRRFFAHEAOCBCQ-SIUGBPQLSA-N Glu-Ile-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O KRRFFAHEAOCBCQ-SIUGBPQLSA-N 0.000 description 1
- FBEJIDRSQCGFJI-GUBZILKMSA-N Glu-Leu-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O FBEJIDRSQCGFJI-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- YKBUCXNNBYZYAY-MNXVOIDGSA-N Glu-Lys-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O YKBUCXNNBYZYAY-MNXVOIDGSA-N 0.000 description 1
- RFTVTKBHDXCEEX-WDSKDSINSA-N Glu-Ser-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(O)=O RFTVTKBHDXCEEX-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- HZISRJBYZAODRV-XQXXSGGOSA-N Glu-Thr-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O HZISRJBYZAODRV-XQXXSGGOSA-N 0.000 description 1
- QCMVGXDELYMZET-GLLZPBPUSA-N Glu-Thr-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O QCMVGXDELYMZET-GLLZPBPUSA-N 0.000 description 1
- MXJYXYDREQWUMS-XKBZYTNZSA-N Glu-Thr-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O MXJYXYDREQWUMS-XKBZYTNZSA-N 0.000 description 1
- JLCYOCDGIUZMKQ-JBACZVJFSA-N Glu-Trp-Phe Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC2=CNC3=CC=CC=C32)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N JLCYOCDGIUZMKQ-JBACZVJFSA-N 0.000 description 1
- BKMOHWJHXQLFEX-IRIUXVKKSA-N Glu-Tyr-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CC=C(C=C1)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N)O BKMOHWJHXQLFEX-IRIUXVKKSA-N 0.000 description 1
- VSVZIEVNUYDAFR-YUMQZZPRSA-N Gly-Ala-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)CN VSVZIEVNUYDAFR-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- OVSKVOOUFAKODB-UWVGGRQHSA-N Gly-Arg-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)CCCN=C(N)N OVSKVOOUFAKODB-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- DUYYPIRFTLOAJQ-YUMQZZPRSA-N Gly-Asn-His Chemical compound C1=C(NC=N1)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)NC(=O)CN DUYYPIRFTLOAJQ-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- LXXLEUBUOMCAMR-NKWVEPMBSA-N Gly-Asp-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CC(=O)O)NC(=O)CN)C(=O)O LXXLEUBUOMCAMR-NKWVEPMBSA-N 0.000 description 1
- JPWIMMUNWUKOAD-STQMWFEESA-N Gly-Asp-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(=C1)C(=CN2)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)NC(=O)CN JPWIMMUNWUKOAD-STQMWFEESA-N 0.000 description 1
- GNPVTZJUUBPZKW-WDSKDSINSA-N Gly-Gln-Ser Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O GNPVTZJUUBPZKW-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- QSVCIFZPGLOZGH-WDSKDSINSA-N Gly-Glu-Ser Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O QSVCIFZPGLOZGH-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- CUYLIWAAAYJKJH-RYUDHWBXSA-N Gly-Glu-Tyr Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 CUYLIWAAAYJKJH-RYUDHWBXSA-N 0.000 description 1
- JSNNHGHYGYMVCK-XVKPBYJWSA-N Gly-Glu-Val Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O JSNNHGHYGYMVCK-XVKPBYJWSA-N 0.000 description 1
- QITBQGJOXQYMOA-ZETCQYMHSA-N Gly-Gly-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)CN QITBQGJOXQYMOA-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 1
- SXJHOPPTOJACOA-QXEWZRGKSA-N Gly-Ile-Arg Chemical compound NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N SXJHOPPTOJACOA-QXEWZRGKSA-N 0.000 description 1
- AAHSHTLISQUZJL-QSFUFRPTSA-N Gly-Ile-Ile Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O AAHSHTLISQUZJL-QSFUFRPTSA-N 0.000 description 1
- UHPAZODVFFYEEL-QWRGUYRKSA-N Gly-Leu-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)CN UHPAZODVFFYEEL-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- WDEHMRNSGHVNOH-VHSXEESVSA-N Gly-Lys-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)CN)C(=O)O WDEHMRNSGHVNOH-VHSXEESVSA-N 0.000 description 1
- OMOZPGCHVWOXHN-BQBZGAKWSA-N Gly-Met-Ser Chemical compound CSCC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)NC(=O)CN OMOZPGCHVWOXHN-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- OHUKZZYSJBKFRR-WHFBIAKZSA-N Gly-Ser-Asp Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O OHUKZZYSJBKFRR-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- CSMYMGFCEJWALV-WDSKDSINSA-N Gly-Ser-Gln Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(N)=O CSMYMGFCEJWALV-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- SOEGEPHNZOISMT-BYPYZUCNSA-N Gly-Ser-Gly Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(O)=O SOEGEPHNZOISMT-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- WNGHUXFWEWTKAO-YUMQZZPRSA-N Gly-Ser-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CN WNGHUXFWEWTKAO-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- ZLCLYFGMKFCDCN-XPUUQOCRSA-N Gly-Ser-Val Chemical compound CC(C)[C@H](NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CN)C(O)=O ZLCLYFGMKFCDCN-XPUUQOCRSA-N 0.000 description 1
- PYFHPYDQHCEVIT-KBPBESRZSA-N Gly-Trp-Gln Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O PYFHPYDQHCEVIT-KBPBESRZSA-N 0.000 description 1
- YGHSQRJSHKYUJY-SCZZXKLOSA-N Gly-Val-Pro Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)CN YGHSQRJSHKYUJY-SCZZXKLOSA-N 0.000 description 1
- JBCLFWXMTIKCCB-UHFFFAOYSA-N H-Gly-Phe-OH Natural products NCC(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 JBCLFWXMTIKCCB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VOKCBYNCZVSILJ-KKUMJFAQSA-N His-Asn-Tyr Chemical compound C1=CC(=CC=C1C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)NC(=O)[C@H](CC2=CN=CN2)N)O VOKCBYNCZVSILJ-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- 108010093488 His-His-His-His-His-His Proteins 0.000 description 1
- MRVZCDSYLJXKKX-ACRUOGEOSA-N His-Tyr-Phe Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC2=CC=C(C=C2)O)NC(=O)[C@H](CC3=CN=CN3)N MRVZCDSYLJXKKX-ACRUOGEOSA-N 0.000 description 1
- SCHZQZPYHBWYEQ-PEFMBERDSA-N Ile-Asn-Glu Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)O)N SCHZQZPYHBWYEQ-PEFMBERDSA-N 0.000 description 1
- WNQKUUQIVDDAFA-ZPFDUUQYSA-N Ile-Gln-Met Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)O)N WNQKUUQIVDDAFA-ZPFDUUQYSA-N 0.000 description 1
- JXMSHKFPDIUYGS-SIUGBPQLSA-N Ile-Glu-Tyr Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(C=C1)O)C(=O)O)N JXMSHKFPDIUYGS-SIUGBPQLSA-N 0.000 description 1
- GQKSJYINYYWPMR-NGZCFLSTSA-N Ile-Gly-Pro Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)NCC(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)N GQKSJYINYYWPMR-NGZCFLSTSA-N 0.000 description 1
- RIVKTKFVWXRNSJ-GRLWGSQLSA-N Ile-Ile-Gln Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)O)N RIVKTKFVWXRNSJ-GRLWGSQLSA-N 0.000 description 1
- QHUREMVLLMNUAX-OSUNSFLBSA-N Ile-Thr-Val Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)O)N QHUREMVLLMNUAX-OSUNSFLBSA-N 0.000 description 1
- HQLSBZFLOUHQJK-STECZYCISA-N Ile-Tyr-Arg Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(C=C1)O)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)O)N HQLSBZFLOUHQJK-STECZYCISA-N 0.000 description 1
- GNXGAVNTVNOCLL-SIUGBPQLSA-N Ile-Tyr-Gln Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(C=C1)O)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)O)N GNXGAVNTVNOCLL-SIUGBPQLSA-N 0.000 description 1
- YWCJXQKATPNPOE-UKJIMTQDSA-N Ile-Val-Glu Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)O)N YWCJXQKATPNPOE-UKJIMTQDSA-N 0.000 description 1
- APQYGMBHIVXFML-OSUNSFLBSA-N Ile-Val-Thr Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)O)N APQYGMBHIVXFML-OSUNSFLBSA-N 0.000 description 1
- 102000036770 Islet Amyloid Polypeptide Human genes 0.000 description 1
- 108010041872 Islet Amyloid Polypeptide Proteins 0.000 description 1
- LPHGQDQBBGAPDZ-UHFFFAOYSA-N Isocaffeine Natural products CN1C(=O)N(C)C(=O)C2=C1N(C)C=N2 LPHGQDQBBGAPDZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PMGDADKJMCOXHX-UHFFFAOYSA-N L-Arginyl-L-glutamin-acetat Natural products NC(=N)NCCCC(N)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(O)=O PMGDADKJMCOXHX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FADYJNXDPBKVCA-UHFFFAOYSA-N L-Phenylalanyl-L-lysin Natural products NCCCCC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 FADYJNXDPBKVCA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RCFDOSNHHZGBOY-UHFFFAOYSA-N L-isoleucyl-L-alanine Natural products CCC(C)C(N)C(=O)NC(C)C(O)=O RCFDOSNHHZGBOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000880493 Leptailurus serval Species 0.000 description 1
- WSGXUIQTEZDVHJ-GARJFASQSA-N Leu-Ala-Pro Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1CCC[C@@H]1C(O)=O WSGXUIQTEZDVHJ-GARJFASQSA-N 0.000 description 1
- HBJZFCIVFIBNSV-DCAQKATOSA-N Leu-Arg-Asn Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O HBJZFCIVFIBNSV-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- CCQLQKZTXZBXTN-NHCYSSNCSA-N Leu-Gly-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O CCQLQKZTXZBXTN-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 1
- VGPCJSXPPOQPBK-YUMQZZPRSA-N Leu-Gly-Ser Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O VGPCJSXPPOQPBK-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- IEWBEPKLKUXQBU-VOAKCMCISA-N Leu-Leu-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O IEWBEPKLKUXQBU-VOAKCMCISA-N 0.000 description 1
- DAYQSYGBCUKVKT-VOAKCMCISA-N Leu-Thr-Lys Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O DAYQSYGBCUKVKT-VOAKCMCISA-N 0.000 description 1
- ISSAURVGLGAPDK-KKUMJFAQSA-N Leu-Tyr-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O ISSAURVGLGAPDK-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- VUBIPAHVHMZHCM-KKUMJFAQSA-N Leu-Tyr-Ser Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 VUBIPAHVHMZHCM-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- AAKRWBIIGKPOKQ-ONGXEEELSA-N Leu-Val-Gly Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)NCC(O)=O AAKRWBIIGKPOKQ-ONGXEEELSA-N 0.000 description 1
- FMFNIDICDKEMOE-XUXIUFHCSA-N Leu-Val-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O FMFNIDICDKEMOE-XUXIUFHCSA-N 0.000 description 1
- GJJQCBVRWDGLMQ-GUBZILKMSA-N Lys-Glu-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O GJJQCBVRWDGLMQ-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- INMBONMDMGPADT-AVGNSLFASA-N Lys-Met-Met Chemical compound CSCC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)N INMBONMDMGPADT-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- IMDJSVBFQKDDEQ-MGHWNKPDSA-N Lys-Tyr-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CC=C(C=C1)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)N IMDJSVBFQKDDEQ-MGHWNKPDSA-N 0.000 description 1
- SJDQOYTYNGZZJX-SRVKXCTJSA-N Met-Glu-Leu Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O SJDQOYTYNGZZJX-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- YYEIFXZOBZVDPH-DCAQKATOSA-N Met-Lys-Asp Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O YYEIFXZOBZVDPH-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- CNAGWYQWQDMUGC-IHRRRGAJSA-N Met-Phe-Asn Chemical compound CSCC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)N CNAGWYQWQDMUGC-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- BJPQKNHZHUCQNQ-SRVKXCTJSA-N Met-Pro-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@H](CCSC)N BJPQKNHZHUCQNQ-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- CIIJWIAORKTXAH-FJXKBIBVSA-N Met-Thr-Gly Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(O)=O CIIJWIAORKTXAH-FJXKBIBVSA-N 0.000 description 1
- 101710135898 Myc proto-oncogene protein Proteins 0.000 description 1
- 102100038895 Myc proto-oncogene protein Human genes 0.000 description 1
- SITLTJHOQZFJGG-UHFFFAOYSA-N N-L-alpha-glutamyl-L-valine Natural products CC(C)C(C(O)=O)NC(=O)C(N)CCC(O)=O SITLTJHOQZFJGG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KZNQNBZMBZJQJO-UHFFFAOYSA-N N-glycyl-L-proline Natural products NCC(=O)N1CCCC1C(O)=O KZNQNBZMBZJQJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- UHRNIXJAGGLKHP-DLOVCJGASA-N Phe-Ala-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O UHRNIXJAGGLKHP-DLOVCJGASA-N 0.000 description 1
- IWRZUGHCHFZYQZ-UFYCRDLUSA-N Phe-Arg-Tyr Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 IWRZUGHCHFZYQZ-UFYCRDLUSA-N 0.000 description 1
- WPTYDQPGBMDUBI-QWRGUYRKSA-N Phe-Gly-Asn Chemical compound N[C@@H](Cc1ccccc1)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O WPTYDQPGBMDUBI-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- MCIXMYKSPQUMJG-SRVKXCTJSA-N Phe-Ser-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O MCIXMYKSPQUMJG-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- BPIMVBKDLSBKIJ-FCLVOEFKSA-N Phe-Thr-Phe Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 BPIMVBKDLSBKIJ-FCLVOEFKSA-N 0.000 description 1
- CQZNGNCAIXMAIQ-UBHSHLNASA-N Pro-Ala-Phe Chemical compound C[C@H](NC(=O)[C@@H]1CCCN1)C(=O)N[C@@H](Cc1ccccc1)C(O)=O CQZNGNCAIXMAIQ-UBHSHLNASA-N 0.000 description 1
- HAAQQNHQZBOWFO-LURJTMIESA-N Pro-Gly-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@@H]1CCCN1 HAAQQNHQZBOWFO-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- WVXQQUWOKUZIEG-VEVYYDQMSA-N Pro-Thr-Asn Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O WVXQQUWOKUZIEG-VEVYYDQMSA-N 0.000 description 1
- DGDCSVGVWWAJRS-AVGNSLFASA-N Pro-Val-His Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)O)NC(=O)[C@@H]2CCCN2 DGDCSVGVWWAJRS-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- WDXYVIIVDIDOSX-DCAQKATOSA-N Ser-Arg-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CO)CCCN=C(N)N WDXYVIIVDIDOSX-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- VAUMZJHYZQXZBQ-WHFBIAKZSA-N Ser-Asn-Gly Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)NCC(O)=O VAUMZJHYZQXZBQ-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- OJPHFSOMBZKQKQ-GUBZILKMSA-N Ser-Gln-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CO OJPHFSOMBZKQKQ-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- UIGMAMGZOJVTDN-WHFBIAKZSA-N Ser-Gly-Ser Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O UIGMAMGZOJVTDN-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- MQQBBLVOUUJKLH-HJPIBITLSA-N Ser-Ile-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O MQQBBLVOUUJKLH-HJPIBITLSA-N 0.000 description 1
- QYSFWUIXDFJUDW-DCAQKATOSA-N Ser-Leu-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O QYSFWUIXDFJUDW-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- KCNSGAMPBPYUAI-CIUDSAMLSA-N Ser-Leu-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O KCNSGAMPBPYUAI-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- IXZHZUGGKLRHJD-DCAQKATOSA-N Ser-Leu-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O IXZHZUGGKLRHJD-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- VXYQOFXBIXKPCX-BQBZGAKWSA-N Ser-Met-Gly Chemical compound CSCC[C@@H](C(=O)NCC(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)N VXYQOFXBIXKPCX-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- GDUZTEQRAOXYJS-SRVKXCTJSA-N Ser-Phe-Asn Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)N GDUZTEQRAOXYJS-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- KZPRPBLHYMZIMH-MXAVVETBSA-N Ser-Phe-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O KZPRPBLHYMZIMH-MXAVVETBSA-N 0.000 description 1
- CKDXFSPMIDSMGV-GUBZILKMSA-N Ser-Pro-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O CKDXFSPMIDSMGV-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- JCLAFVNDBJMLBC-JBDRJPRFSA-N Ser-Ser-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O JCLAFVNDBJMLBC-JBDRJPRFSA-N 0.000 description 1
- LSHUNRICNSEEAN-BPUTZDHNSA-N Ser-Val-Trp Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)N LSHUNRICNSEEAN-BPUTZDHNSA-N 0.000 description 1
- ODRUTDLAONAVDV-IHRRRGAJSA-N Ser-Val-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O ODRUTDLAONAVDV-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- PXQUBKWZENPDGE-CIQUZCHMSA-N Thr-Ala-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)N PXQUBKWZENPDGE-CIQUZCHMSA-N 0.000 description 1
- TZKPNGDGUVREEB-FOHZUACHSA-N Thr-Asn-Gly Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)NCC(O)=O TZKPNGDGUVREEB-FOHZUACHSA-N 0.000 description 1
- OJRNZRROAIAHDL-LKXGYXEUSA-N Thr-Asn-Ser Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O OJRNZRROAIAHDL-LKXGYXEUSA-N 0.000 description 1
- SLUWOCTZVGMURC-BFHQHQDPSA-N Thr-Gly-Ala Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(O)=O SLUWOCTZVGMURC-BFHQHQDPSA-N 0.000 description 1
- GMXIJHCBTZDAPD-QPHKQPEJSA-N Thr-Ile-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)N GMXIJHCBTZDAPD-QPHKQPEJSA-N 0.000 description 1
- IHAPJUHCZXBPHR-WZLNRYEVSA-N Thr-Ile-Tyr Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(C=C1)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)N IHAPJUHCZXBPHR-WZLNRYEVSA-N 0.000 description 1
- PCMDGXKXVMBIFP-VEVYYDQMSA-N Thr-Met-Asn Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O PCMDGXKXVMBIFP-VEVYYDQMSA-N 0.000 description 1
- FDQXPJCLVPFKJW-KJEVXHAQSA-N Thr-Met-Tyr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(C=C1)O)C(=O)O)N)O FDQXPJCLVPFKJW-KJEVXHAQSA-N 0.000 description 1
- HSQXHRIRJSFDOH-URLPEUOOSA-N Thr-Phe-Ile Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O HSQXHRIRJSFDOH-URLPEUOOSA-N 0.000 description 1
- XKWABWFMQXMUMT-HJGDQZAQSA-N Thr-Pro-Glu Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O XKWABWFMQXMUMT-HJGDQZAQSA-N 0.000 description 1
- IEZVHOULSUULHD-XGEHTFHBSA-N Thr-Ser-Val Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O IEZVHOULSUULHD-XGEHTFHBSA-N 0.000 description 1
- KZTLZZQTJMCGIP-ZJDVBMNYSA-N Thr-Val-Thr Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O KZTLZZQTJMCGIP-ZJDVBMNYSA-N 0.000 description 1
- 101710150448 Transcriptional regulator Myc Proteins 0.000 description 1
- DXDMNBJJEXYMLA-UBHSHLNASA-N Trp-Asn-Asp Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O)=CNC2=C1 DXDMNBJJEXYMLA-UBHSHLNASA-N 0.000 description 1
- WACMTVIJWRNVSO-CWRNSKLLSA-N Trp-Asp-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CC(=O)O)NC(=O)[C@H](CC2=CNC3=CC=CC=C32)N)C(=O)O WACMTVIJWRNVSO-CWRNSKLLSA-N 0.000 description 1
- SAKLWFSRZTZQAJ-GQGQLFGLSA-N Trp-Ile-Ser Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)N SAKLWFSRZTZQAJ-GQGQLFGLSA-N 0.000 description 1
- OGZRZMJASKKMJZ-XIRDDKMYSA-N Trp-Leu-Asp Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)N OGZRZMJASKKMJZ-XIRDDKMYSA-N 0.000 description 1
- GDPDVIBHJDFRFD-RNXOBYDBSA-N Trp-Tyr-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O GDPDVIBHJDFRFD-RNXOBYDBSA-N 0.000 description 1
- TZXFLDNBYYGLKA-BZSNNMDCSA-N Tyr-Asp-Tyr Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 TZXFLDNBYYGLKA-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 1
- FQNUWOHNGJWNLM-QWRGUYRKSA-N Tyr-Cys-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O FQNUWOHNGJWNLM-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- XQYHLZNPOTXRMQ-KKUMJFAQSA-N Tyr-Glu-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O XQYHLZNPOTXRMQ-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- QAYSODICXVZUIA-WLTAIBSBSA-N Tyr-Gly-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O QAYSODICXVZUIA-WLTAIBSBSA-N 0.000 description 1
- MVYRJYISVJWKSX-KBPBESRZSA-N Tyr-His-Gly Chemical compound C1=CC(=CC=C1C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC2=CN=CN2)C(=O)NCC(=O)O)N)O MVYRJYISVJWKSX-KBPBESRZSA-N 0.000 description 1
- ARJASMXQBRNAGI-YESZJQIVSA-N Tyr-Leu-Pro Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC2=CC=C(C=C2)O)N ARJASMXQBRNAGI-YESZJQIVSA-N 0.000 description 1
- RCMWNNJFKNDKQR-UFYCRDLUSA-N Tyr-Pro-Phe Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 RCMWNNJFKNDKQR-UFYCRDLUSA-N 0.000 description 1
- XGZBEGGGAUQBMB-KJEVXHAQSA-N Tyr-Pro-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@H](CC2=CC=C(C=C2)O)N)O XGZBEGGGAUQBMB-KJEVXHAQSA-N 0.000 description 1
- SOAUMCDLIUGXJJ-SRVKXCTJSA-N Tyr-Ser-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O SOAUMCDLIUGXJJ-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- NUQZCPSZHGIYTA-HKUYNNGSSA-N Tyr-Trp-Gly Chemical compound C1=CC=C2C(=C1)C(=CN2)C[C@@H](C(=O)NCC(=O)O)NC(=O)[C@H](CC3=CC=C(C=C3)O)N NUQZCPSZHGIYTA-HKUYNNGSSA-N 0.000 description 1
- REJBPZVUHYNMEN-LSJOCFKGSA-N Val-Ala-His Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)O)NC(=O)[C@H](C(C)C)N REJBPZVUHYNMEN-LSJOCFKGSA-N 0.000 description 1
- ZLFHAAGHGQBQQN-AEJSXWLSSA-N Val-Ala-Pro Chemical compound C[C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@H](C(C)C)N ZLFHAAGHGQBQQN-AEJSXWLSSA-N 0.000 description 1
- ZLFHAAGHGQBQQN-GUBZILKMSA-N Val-Ala-Pro Natural products CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O ZLFHAAGHGQBQQN-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- UDLYXGYWTVOIKU-QXEWZRGKSA-N Val-Asn-Arg Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)O)N UDLYXGYWTVOIKU-QXEWZRGKSA-N 0.000 description 1
- GXAZTLJYINLMJL-LAEOZQHASA-N Val-Asn-Gln Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)O)N GXAZTLJYINLMJL-LAEOZQHASA-N 0.000 description 1
- IDKGBVZGNTYYCC-QXEWZRGKSA-N Val-Asn-Pro Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O IDKGBVZGNTYYCC-QXEWZRGKSA-N 0.000 description 1
- IQQYYFPCWKWUHW-YDHLFZDLSA-N Val-Asn-Tyr Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(C=C1)O)C(=O)O)N IQQYYFPCWKWUHW-YDHLFZDLSA-N 0.000 description 1
- ISERLACIZUGCDX-ZKWXMUAHSA-N Val-Asp-Ala Chemical compound C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)NC(=O)[C@H](C(C)C)N ISERLACIZUGCDX-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 1
- GMOLURHJBLOBFW-ONGXEEELSA-N Val-Gly-His Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)O)N GMOLURHJBLOBFW-ONGXEEELSA-N 0.000 description 1
- VHRLUTIMTDOVCG-PEDHHIEDSA-N Val-Ile-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)O)NC(=O)[C@H](C(C)C)N VHRLUTIMTDOVCG-PEDHHIEDSA-N 0.000 description 1
- OTJMMKPMLUNTQT-AVGNSLFASA-N Val-Leu-Arg Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)O)NC(=O)[C@H](C(C)C)N OTJMMKPMLUNTQT-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- BTWMICVCQLKKNR-DCAQKATOSA-N Val-Leu-Ser Chemical compound CC(C)[C@H]([NH3+])C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C([O-])=O BTWMICVCQLKKNR-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- FMQGYTMERWBMSI-HJWJTTGWSA-N Val-Phe-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CC=CC=C1)NC(=O)[C@H](C(C)C)N FMQGYTMERWBMSI-HJWJTTGWSA-N 0.000 description 1
- XBJKAZATRJBDCU-GUBZILKMSA-N Val-Pro-Ala Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O XBJKAZATRJBDCU-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- QZKVWWIUSQGWMY-IHRRRGAJSA-N Val-Ser-Phe Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 QZKVWWIUSQGWMY-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- SDHZOOIGIUEPDY-JYJNAYRXSA-N Val-Ser-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)C(C)C)C(O)=O)=CNC2=C1 SDHZOOIGIUEPDY-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 108010024078 alanyl-glycyl-serine Proteins 0.000 description 1
- 108010069020 alanyl-prolyl-glycine Proteins 0.000 description 1
- 108010086434 alanyl-seryl-glycine Proteins 0.000 description 1
- 108010005233 alanylglutamic acid Proteins 0.000 description 1
- 108010070944 alanylhistidine Proteins 0.000 description 1
- 235000019418 amylase Nutrition 0.000 description 1
- 108010008355 arginyl-glutamine Proteins 0.000 description 1
- 108010062796 arginyllysine Proteins 0.000 description 1
- 108010010430 asparagine-proline-alanine Proteins 0.000 description 1
- 108010093581 aspartyl-proline Proteins 0.000 description 1
- 108010038633 aspartylglutamate Proteins 0.000 description 1
- 235000019658 bitter taste Nutrition 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 229960001948 caffeine Drugs 0.000 description 1
- VJEONQKOZGKCAK-UHFFFAOYSA-N caffeine Natural products CN1C(=O)N(C)C(=O)C2=C1C=CN2C VJEONQKOZGKCAK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 1
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 239000013599 cloning vector Substances 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- FSXRLASFHBWESK-UHFFFAOYSA-N dipeptide phenylalanyl-tyrosine Natural products C=1C=C(O)C=CC=1CC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 FSXRLASFHBWESK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 230000001804 emulsifying effect Effects 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 238000001952 enzyme assay Methods 0.000 description 1
- 238000001976 enzyme digestion Methods 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 1
- 238000005187 foaming Methods 0.000 description 1
- 239000004088 foaming agent Substances 0.000 description 1
- 239000003205 fragrance Substances 0.000 description 1
- 108010000434 glycyl-alanyl-leucine Proteins 0.000 description 1
- 108010077435 glycyl-phenylalanyl-glycine Proteins 0.000 description 1
- 108010010147 glycylglutamine Proteins 0.000 description 1
- 108010020688 glycylhistidine Proteins 0.000 description 1
- 108010077515 glycylproline Proteins 0.000 description 1
- 108010087823 glycyltyrosine Proteins 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000005660 hydrophilic surface Effects 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 108010034529 leucyl-lysine Proteins 0.000 description 1
- 108010057821 leucylproline Proteins 0.000 description 1
- 108010017391 lysylvaline Proteins 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 1
- 108010034507 methionyltryptophan Proteins 0.000 description 1
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 231100000956 nontoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 125000004430 oxygen atom Chemical group O* 0.000 description 1
- 108010012581 phenylalanylglutamate Proteins 0.000 description 1
- 108010051242 phenylalanylserine Proteins 0.000 description 1
- 230000000704 physical effect Effects 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 108010020755 prolyl-glycyl-glycine Proteins 0.000 description 1
- 108010031719 prolyl-serine Proteins 0.000 description 1
- 108010070643 prolylglutamic acid Proteins 0.000 description 1
- 108010029020 prolylglycine Proteins 0.000 description 1
- 230000002633 protecting effect Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 238000012113 quantitative test Methods 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 238000007363 ring formation reaction Methods 0.000 description 1
- 108010026333 seryl-proline Proteins 0.000 description 1
- 238000002741 site-directed mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 210000000813 small intestine Anatomy 0.000 description 1
- 230000003381 solubilizing effect Effects 0.000 description 1
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 108010061238 threonyl-glycine Proteins 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 239000012137 tryptone Substances 0.000 description 1
- 108010051110 tyrosyl-lysine Proteins 0.000 description 1
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 1
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 1
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/10—Transferases (2.)
- C12N9/1048—Glycosyltransferases (2.4)
- C12N9/1051—Hexosyltransferases (2.4.1)
- C12N9/1074—Cyclomaltodextrin glucanotransferase (2.4.1.19)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
- C12P19/04—Polysaccharides, i.e. compounds containing more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic bonds
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
- C12P19/18—Preparation of compounds containing saccharide radicals produced by the action of a glycosyl transferase, e.g. alpha-, beta- or gamma-cyclodextrins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y204/00—Glycosyltransferases (2.4)
- C12Y204/01—Hexosyltransferases (2.4.1)
- C12Y204/01019—Cyclomaltodextrin glucanotransferase (2.4.1.19)
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Abstract
本发明公开了蛋白质CGTase作为环糊精糖基转移酶的应用。蛋白质CGTase从N端至C端依次包括区段1‑区段3，区段1的氨基酸序列如SEQ ID NO：1自N端起第1至247位所示，区段2为1个氨基酸残基，区段3的氨基酸序列如SEQ ID NO：1自N端起第249至699位所示。实验证明，蛋白质CGTase具有环糊精糖基转移酶活性，可降解淀粉。本发明具有重要的应用价值。
Description
技术领域
本发明属于生物技术领域，具体涉及蛋白质CGTase作为环糊精糖基转移酶的应用。
背景技术
环糊精(cyclodextrin，CD)是由环糊精糖基转移酶(cyclodextrin glucano-transferase，简称CGTases)与淀粉产生环化作用而生成的由六个及以上的葡萄糖单元通过α-(1,4)糖苷键连接而成的一类环状低聚化合物。较为常见的是α-环糊精(α-cyclodextrin，α-CD)、β-环糊精(β-cyclodextrin，β-CD)和γ-环糊精(γ-cyclodextrin，γ-CD)，分别由6个、7个和8个葡萄糖单元分子构成，这三种环糊精是工业上应用范围最广泛的三种环糊精。
环糊精主要通过环糊精糖基转移酶催化淀粉生成。生成的产物是主要是α-CD、β-CD和γ-CD三种混合物，产物专一性差。不同来源的CGTases生成的三种产物比例不同，根据生成主要环糊精的种类，将CGTases分为α-CGTases、β-CGTases、γ-CGTases。目前对于β-CGTases的催化机理以及产物专一性的研究比较深入，但是对于α-CGTases和γ-CGTases的研究较少。目前，对CGTases研究方向主要是两个方面：一是从自然资源中寻找催化效果更好或专一性更高的α-CGTases和γ-CGTases野生型酶；二是对现有的α-CGTases和γ-CGTases通过定点突变、易错pcr等技术进行基因定向改造从而获得专一性提高的酶。
α-CD是由6个葡萄糖分子以α-1，4-糖苷键连接而成的环状寡聚糖。具有外部亲水、内部疏水的中空筒型结构，这种结构使环糊精能与特定大小、形状的疏水性客体分子形成稳定的包合物从而改变被包容物质的溶解度、挥发性及化学反应性能等理化性质，正是由于这种特殊的空腔结构使得环糊精在医药、食品、化妆品和环境保护等领域具有广泛的应用。α-CD有以下应用前景：(1)将水不溶性或溶解度低的化合物制成水溶解度高的包封化合物；(2)使包封的化合物具有良好的稳定性(如保色、保香、耐热、耐酸、耐水解、抗氧化、防挥发等)；(3)去除异味作用(吸附食品中气味和苦味)；(4)除去食品中不需要的成分(如咖啡因、胆固醇等)；(5)具有乳化、发泡作用，可作乳化剂和发泡剂；(6)使液体状、油状、挥发性物料固化。目前，由于尚未发现有高转化活力和高产物专一性高的α-CGTase，使得α-CD产品的成本和价格比β-CD高出很多，限制了其在工业上的应用。
β-CD是由7个葡萄糖分子以α-1，4-糖苷键连接而成的环状寡聚糖。主体构型像个中间有空洞，两端不封闭的筒。在空洞结构中，其中葡萄糖C2位和C3位的仲羟基位于圆筒外侧上边缘，葡萄糖C6位伯羟基位于圆筒的外侧下边缘，这些羟基共同构成环糊精的亲水性表面，所以外部具有亲水性；而圆筒内部则是通过位于C3和C5上的非极性的氢原子和醚键中的氧原子共同构成环糊精的疏水性空腔，所以内部空腔具有疏水性。因为这个特殊的圆筒结构，β-CD可与许多无机、有机分子结合成主客体包合物,并能改变被包合物的化学和物理性质，具有保护、稳定、增溶客体分子和选择性定向分子的特性，因而在食品、环境、医药、化妆用品、化学检测等方面都有广泛的应用，由于β-CD的溶解度低，制备相对简单，已经实现产业化规模应用，价格比α-CD和γ-CD便宜很多。
γ-CD跟β-CD相比具有更大的空腔，包含客体分子范围更广，能包含β-CD不能包裹的大分子物质。γ-CD具有比β-CD更好的水溶性，室温25℃时γ-CD溶解度为23.3％，而α-CD溶解度为13％，β-CD溶解度则只有1.88％。γ-CD同时安全性高，可以被人体内的唾液淀粉酶和胰异淀粉酶迅速且基本上完全消化，因此γ-CD在人体小肠内可以迅速的降解和吸收，但α-CD和β-CD则不能。γ-CD应用前景比β-CD更为广阔，但目前没有专一性较高的γ-CGTase，导致目前生产规模较小，价格高，限制了γ-CD的生产和应用。
γ-CD内腔最大，具有更广泛的包埋客体分子的能力，并且还有较高的水溶性和安全无毒性，使其在食品、生物医药和化妆品等领域具有很大的应用前景。因此，定向改造出具有高特异性的γ-CGTase具有重要研究意义。
发明内容
本发明的目的为提供新的环糊精糖基转移酶。
本发明首先保护蛋白质，可为如下a1)或a2)：
a1)从N端至C端依次包括区段1-区段3；
区段1的氨基酸序列如SEQ ID NO：1自N端起第1至247位所示；
区段2为1个氨基酸残基；
区段3的氨基酸序列如SEQ ID NO：1自N端起第249至699位所示；
a2)在a1)所示的蛋白质的N端或/和C端连接标签得到的融合蛋白质。
所述区段2中，氨基酸可为脯氨酸、谷氨酸、甘氨酸、天冬酰胺、甲硫氨酸、丙氨酸、精氨酸、赖氨酸、亮氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、丝氨酸、苏氨酸、天冬氨酸或谷氨酰胺。
为了使蛋白质便于纯化和检测，可在蛋白质的氨基末端或羧基末端连接上如表1所示的标签。
表1.标签的序列
| 标签 | 残基 | 序列 |
| Poly-Arg | 5-6(通常为5个) | RRRRR |
| Poly-His | 2-10(通常为6个) | HHHHHH |
| FLAG | 8 | DYKDDDDK |
| Strep-tag II | 8 | WSHPQFEK |
| c-myc | 10 | EQKLISEEDL |
上述蛋白质可人工合成，也可先合成其编码基因，再进行生物表达得到。
编码所述蛋白质的核酸分子也属于本发明的保护范围。
编码所述蛋白质的核酸分子可为c1)-c15)中的任一种：
c1)编码区或核苷酸序列是SEQ ID NO：2所示的DNA分子；
c2)编码区或核苷酸序列是DNA分子2；DNA分子2是将SEQ ID NO：2自5’末端起第742-744位核苷酸替换为CGA得到的；
c3)编码区或核苷酸序列是DNA分子3；DNA分子3是将SEQ ID NO：2自5’末端起第742-744位核苷酸替换为AAA得到的；
c4)编码区或核苷酸序列是DNA分子4；DNA分子4是将SEQ ID NO：2自5’末端起第742-744位核苷酸替换为CTT得到的；
c5)编码区或核苷酸序列是DNA分子5；DNA分子5是将SEQ ID NO：2自5’末端起第742-744位核苷酸替换为GTG得到的；
c6)编码区或核苷酸序列是DNA分子6；DNA分子6是将SEQ ID NO：2自5’末端起第742-744位核苷酸替换为ATT得到的；
c7)编码区或核苷酸序列是DNA分子7；DNA分子7是将SEQ ID NO：2自5’末端起第742-744位核苷酸替换为AAT得到的；
c8)编码区或核苷酸序列是DNA分子8；DNA分子8是将SEQ ID NO：2自5’末端起第742-744位核苷酸替换为TCA得到的；
c9)编码区或核苷酸序列是DNA分子9；DNA分子9是将SEQ ID NO：2自5’末端起第742-744位核苷酸替换为ACA得到的；
c10)编码区或核苷酸序列是DNA分子10；DNA分子10是将SEQ ID NO：2自5’末端起第742-744位核苷酸替换为GGA得到的；
c11)编码区或核苷酸序列是DNA分子11；DNA分子11是将SEQ ID NO：2自5’末端起第742-744位核苷酸替换为GAA得到的；
c12)编码区或核苷酸序列是DNA分子12；DNA分子12是将SEQ ID NO：2自5’末端起第742-744位核苷酸替换为ATG得到的；
c13)编码区或核苷酸序列是DNA分子13；DNA分子13是将SEQ ID NO：2自5’末端起第742-744位核苷酸替换为GAC得到的；
c14)编码区或核苷酸序列是DNA分子14；DNA分子14是将SEQ ID NO：2自5’末端起第742-744位核苷酸替换为CCC得到的；
c15)编码区或核苷酸序列是DNA分子15；DNA分子15是将SEQ ID NO：2自5’末端起第742-744位核苷酸替换为CAA得到的。
其中，所述核酸分子可以是DNA，如cDNA、基因组DNA或重组DNA；所述核酸分子也可以是RNA，如mRNA或hnRNA等。
其中，SEQ ID NO：2由2097个核苷酸组成，SEQ ID NO：2所示的核苷酸编码SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列。
本领域普通技术人员可以很容易地采用已知的方法，例如定向进化和点突变的方法，对本发明编码所述蛋白质的核苷酸序列进行突变。那些经过人工修饰的，具有与本发明分离得到的所述蛋白质的核苷酸序列75％或者更高同一性的核苷酸，只要编码所述蛋白质，均是衍生于本发明的核苷酸序列并且等同于本发明的序列。
这里使用的术语“同一性”指与天然核酸序列的序列相似性。“同一性”包括与本发明的编码SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列组成的蛋白质的核苷酸序列具有75％或更高，或80％或更高，或85％或更高，或90％或更高，或95％或更高同一性的核苷酸序列。同一性可以用肉眼或计算机软件进行评价。使用计算机软件，两个或多个序列之间的同一性可以用百分比(％)表示，其可以用来评价相关序列之间的同一性。
上述任一所述蛋白质命名为蛋白质CGTase。
编码所述蛋白质CGTase的核酸分子具体可为编码所述蛋白质CGTase的基因，命名为CGTase基因。
含有上述任一所述核酸分子的表达盒、重组载体或重组微生物也属于本发明的保护范围。
所述重组载体可为将编码所述蛋白质CGTase的基因插入出发质粒，得到的重组质粒。
所述出发质粒可为表达载体或克隆载体。所述表达载体可为载体pET-32a(+)。
所述重组载体具体可为重组质粒2—重组质粒16。
重组质粒2—重组质粒16可为将载体pET-32a(+)的限制性内切酶BamHI和XhoI之间的DNA小片段分别替换为双链DNA分子2、双链DNA分子3、双链DNA分子4、双链DNA分子5、双链DNA分子6、双链DNA分子7、双链DNA分子8、双链DNA分子9、双链DNA分子10、双链DNA分子11、双链DNA分子12、双链DNA分子13、双链DNA分子14、双链DNA分子15和双链DNA分子16，得到的重组质粒。
将SEQ ID NO：2自5’末端起第742-744位核苷酸(GCA)替换为CGA，得到双链DNA分子2。
将SEQ ID NO：2自5’末端起第742-744位核苷酸(GCA)替换为AAA，得到双链DNA分子3。
将SEQ ID NO：2自5’末端起第742-744位核苷酸(GCA)替换为CTT，得到双链DNA分子4。
将SEQ ID NO：2自5’末端起第742-744位核苷酸(GCA)替换为GTG，得到双链DNA分子5。
将SEQ ID NO：2自5’末端起第742-744位核苷酸(GCA)替换为ATT，得到双链DNA分子6。
将SEQ ID NO：2自5’末端起第742-744位核苷酸(GCA)替换为AAT，得到双链DNA分子7。
将SEQ ID NO：2自5’末端起第742-744位核苷酸(GCA)替换为TCA，得到双链DNA分子8。
将SEQ ID NO：2自5’末端起第742-744位核苷酸(GCA)替换为ACA，得到双链DNA分子9。
将SEQ ID NO：2自5’末端起第742-744位核苷酸(GCA)替换为GGA，得到双链DNA分子10。
将SEQ ID NO：2自5’末端起第742-744位核苷酸(GCA)替换为GAA，得到双链DNA分子11。
将SEQ ID NO：2自5’末端起第742-744位核苷酸(GCA)替换为ATG，得到双链DNA分子12。
将SEQ ID NO：2自5’末端起第742-744位核苷酸(GCA)替换为GAC，得到双链DNA分子13。
将SEQ ID NO：2自5’末端起第742-744位核苷酸(GCA)替换为CCC，得到双链DNA分子14。
将SEQ ID NO：2自5’末端起第742-744位核苷酸(GCA)替换为CAA，得到双链DNA分子15。
双链DNA分子16的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示。
所述重组微生物可为将所述重组载体导入出发微生物得到的重组菌。
所述出发微生物可为大肠杆菌。所述大肠杆菌具体可为大肠杆菌BL21(DE3)。
所述重组微生物具体可为将重组质粒2—重组质粒16分别导入大肠杆菌BL21(DE3)，得到的重组大肠杆菌。
本发明还保护上述任一所述蛋白质CGTase或上述任一所述核酸分子的应用，可为d1)-d6)中的至少一种：
d1)作为环糊精糖基转移酶的应用；
d2)制备环糊精糖基转移酶中的应用；
d3)生产环糊精中的应用；
d4)制备用于生产环糊精的产品中的应用；
d5)降解淀粉；
d6)制备用于降解淀粉的产品中的应用。
上述应用中，所述d1)或d2)中，环糊精糖基转移酶可为α-CGTase、β-CGTase和/或γ-CGTase。
上述应用中，所述d3)或d4)中，环糊精可为α-CD、β-CD和/或γ-CD。所述生产环糊精是以淀粉为底物。所述淀粉可为可溶性淀粉。
本发明还保护一种生产环糊精的方法，为采用上述任一所述蛋白质CGTase降解淀粉，从而获得环糊精。
上述方法中，所述环糊精可为α-CD、β-CD和/或γ-CD。
上述方法中，所述淀粉可为可溶性淀粉。
本发明还保护一种制备环糊精糖基转移酶(即上述任一所述蛋白质CGTase)的方法，包括如下步骤：
(1)发酵培养上述任一所述重组微生物，得到发酵液；
(2)从所述发酵液中分离环糊精糖基转移酶(即上述任一所述蛋白质CGTase)。
上述方法中，所述环糊精糖基转移酶可为α-CGTase、β-CGTase和/或γ-CGTase。
上述方法中，所述重组微生物可为将所述重组质粒2—所述重组质粒16分别导入大肠杆菌BL21(DE3)，得到的重组大肠杆菌。
上述方法中，所述“发酵培养上述任一所述重组微生物，得到发酵液”具体可为将重组大肠杆菌接种至发酵培养基，35-39℃(如35-37℃、37-39℃、35℃、37℃或39℃)、160-260rpm(如160-220rpm、220-260rpm、160rpm、220rpm或260rpm)振荡培养，得到OD600nm值为0.6-0.8(如0.6-0.7、0.7-0.8、0.6、0.7或0.8)的培养菌液1；向培养菌液1中加入IPTG，得到培养体系；该培养体系中，IPTG的浓度具体可为0.01mM；取培养体系，14-18℃(如14-16℃、16-18℃、14℃、16℃或18℃)、160-260rpm(如160-220rpm、220-260rpm、160rpm、220rpm或260rpm)振荡培养80h以上(如96h)，得到发酵液。
上述方法中，所述“从所述发酵液中分离环糊精糖基转移酶”具体可为将发酵液8000rpm离心15min，收集上清液。上清液中即含有环糊精糖基转移酶。
实验证明，蛋白质CGTase具有环糊精糖基转移酶活性(特别是γ-CGTase)，可降解淀粉。本发明详细研究了蛋白质CGTase第248位氨基酸对于环糊精糖基转移酶催化专一性的影响，对γ-CGTase的催化机理研究以及提高γ-CD专一性具有重要价值。本发明具有重要的应用价值。
附图说明
图1为α-CD标准曲线。
图2为β-CD标准曲线。
图3为γ-CD标准曲线。
具体实施方式
以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。
下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。
下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂公司购买得到的。
以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。
可溶性淀粉为浙江菱湖淀粉厂的产品。载体pET-32a(+)为Novagen公司的产品。大肠杆菌BL21(DE3)为北京全式金生物技术有限公司的产品，产品目录号为CD601-01。
α-CD标准品、β-CD标准品和γ-CD标准品均为大连美仑生物公司的产品，产品目录号依次为MB3077、MB1895和MB5536。
TB培养基：向适量蒸馏水中加入胰蛋白胨12g、酵母提取膏24g和甘油4mL，然后用蒸馏水定容至1L，121℃高压灭菌15min即可。
实施例1、蛋白质CGTase1及其15个突变蛋白的发现
一、CGTase1基因的发现
人工合成SEQ ID NO：2所示的CGTase1基因。
CGTase1基因编码SEQ ID NO：1所示的蛋白质CGTase1。
二、突变蛋白的获得
本发明的发明人对蛋白质CGTase1第248位进行饱和突变，得到包括缺失突变在内的15个突变蛋白。具体如下：
(1)将SEQ ID NO：2自5’末端起第742-744位核苷酸(GCA)缺失，得到双链DNA分子1。双链DNA分子1编码的蛋白命名为蛋白1。
即蛋白质CGTase1第248位的丙氨酸缺失后，得到蛋白1。
(2)将SEQ ID NO：2自5’末端起第742-744位核苷酸(GCA)替换为CGA，得到双链DNA分子2。双链DNA分子2编码的蛋白命名为蛋白2。
与蛋白质CGTase1相比，蛋白2的唯一不同在于将第248位的丙氨酸替换为精氨酸。
(3)将SEQ ID NO：2自5’末端起第742-744位核苷酸(GCA)替换为AAA，得到双链DNA分子3。双链DNA分子3编码的蛋白命名为蛋白3。
与蛋白质CGTase1相比，蛋白3的唯一不同在于将第248位的丙氨酸替换为赖氨酸。
(4)将SEQ ID NO：2自5’末端起第742-744位核苷酸(GCA)替换为CTT，得到双链DNA分子4。双链DNA分子4编码的蛋白命名为蛋白4。
与蛋白质CGTase1相比，蛋白4的唯一不同在于将第248位的丙氨酸替换为亮氨酸。
(5)将SEQ ID NO：2自5’末端起第742-744位核苷酸(GCA)替换为GTG，得到双链DNA分子5。双链DNA分子5编码的蛋白命名为蛋白5。
与蛋白质CGTase1相比，蛋白5的唯一不同在于将第248位的丙氨酸替换为缬氨酸。
(6)将SEQ ID NO：2自5’末端起第742-744位核苷酸(GCA)替换为ATT，得到双链DNA分子6。双链DNA分子6编码的蛋白命名为蛋白6。
与蛋白质CGTase1相比，蛋白6的唯一不同在于将第248位的丙氨酸替换为异亮氨酸。
(7)将SEQ ID NO：2自5’末端起第742-744位核苷酸(GCA)替换为AAT，得到双链DNA分子7。双链DNA分子7编码的蛋白命名为蛋白7。
与蛋白质CGTase1相比，蛋白7的唯一不同在于将第248位的丙氨酸替换为天冬酰胺。
(8)将SEQ ID NO：2自5’末端起第742-744位核苷酸(GCA)替换为TCA，得到双链DNA分子8。双链DNA分子8编码的蛋白命名为蛋白8。
与蛋白质CGTase1相比，蛋白8的唯一不同在于将第248位的丙氨酸替换为丝氨酸。
(9)将SEQ ID NO：2自5’末端起第742-744位核苷酸(GCA)替换为ACA，得到双链DNA分子9。双链DNA分子9编码的蛋白命名为蛋白9。
与蛋白质CGTase1相比，蛋白9的唯一不同在于将第248位的丙氨酸替换为苏氨酸。
(10)将SEQ ID NO：2自5’末端起第742-744位核苷酸(GCA)替换为GGA，得到双链DNA分子10。双链DNA分子10编码的蛋白命名为蛋白10。
与蛋白质CGTase1相比，蛋白10的唯一不同在于将第248位的丙氨酸替换为甘氨酸。
(11)将SEQ ID NO：2自5’末端起第742-744位核苷酸(GCA)替换为GAA，得到双链DNA分子11。双链DNA分子11编码的蛋白命名为蛋白11。
与蛋白质CGTase1相比，蛋白11的唯一不同在于将第248位的丙氨酸替换为谷氨酸。
(12)将SEQ ID NO：2自5’末端起第742-744位核苷酸(GCA)替换为ATG，得到双链DNA分子12。双链DNA分子12编码的蛋白命名为蛋白12。
与蛋白质CGTase1相比，蛋白12的唯一不同在于将第248位的丙氨酸替换为甲硫氨酸。
(13)将SEQ ID NO：2自5’末端起第742-744位核苷酸(GCA)替换为GAC，得到双链DNA分子13。双链DNA分子13编码的蛋白命名为蛋白13。
与蛋白质CGTase1相比，蛋白13的唯一不同在于将第248位的丙氨酸替换为天冬氨酸。
(14)将SEQ ID NO：2自5’末端起第742-744位核苷酸(GCA)替换为CCC，得到双链DNA分子14。双链DNA分子14编码的蛋白命名为蛋白14。
与蛋白质CGTase1相比，蛋白14的唯一不同在于将第248位的丙氨酸替换为脯氨酸。
(15)将SEQ ID NO：2自5’末端起第742-744位核苷酸(GCA)替换为CAA，得到双链DNA分子15。双链DNA分子15编码的蛋白命名为蛋白15。
与蛋白质CGTase1相比，蛋白15的唯一不同在于将第248位的丙氨酸替换为谷氨酰胺。
实施例2、蛋白质CGTase1及其突变蛋白作为环糊精糖基转移酶在生成α-CD、β-CD和γ-CD中的应用
一、重组质粒1—重组质粒16的构建
1、人工合成实施例1中步骤二的双链DNA分子1—双链DNA分子15和SEQ ID NO：2所示的双链DNA分子(命名为双链DNA分子16)。
2、以双链DNA分子1为模板，采用引物S2：5’-CGCGGATCCATGATTCGAAGGCTTTC-3’(下划线为限制性内切酶BamHI的识别序列)和引物A3：5'-CGGCTCGAGTTGATTGTAATTCACTTC-3’(下划线为限制性内切酶XhoI的识别序列)组成的引物对进行PCR扩增，得到约2000bp的PCR扩增产物。
3、用限制性内切酶BamHI和XhoI酶切步骤2得到的PCR扩增产物，得到酶切产物。
4、用限制性内切酶BamHI和XhoI酶切载体pET-32a(+)，回收约5800bp载体骨架。
5、将步骤3得到的酶切产物和步骤4得到的载体骨架进行连接，得到重组质粒1。
将重组质粒1进行测序。测序结果表明，重组质粒1为将载体pET-32a(+)的限制性内切酶BamHI和XhoI之间的DNA小片段替换为双链DNA分子1，得到的重组质粒。
按照上述步骤2-5，将双链DNA分子1分别替换为双链DNA分子2、双链DNA分子3、双链DNA分子4、双链DNA分子5、双链DNA分子6、双链DNA分子7、双链DNA分子8、双链DNA分子9、双链DNA分子10、双链DNA分子11、双链DNA分子12、双链DNA分子13、双链DNA分子14、双链DNA分子15和双链DNA分子16，其他步骤均不变，依次得到重组质粒2—重组质粒16。
将重组质粒2—重组质粒16分别进行测序。测序结果表明，重组质粒2为将载体pET-32a(+)的限制性内切酶BamHI和XhoI之间的DNA小片段替换为双链DNA分子2，得到的重组质粒；重组质粒3为将载体pET-32a(+)的限制性内切酶BamHI和XhoI之间的DNA小片段替换为双链DNA分子3，得到的重组质粒；重组质粒4为将载体pET-32a(+)的限制性内切酶BamHI和XhoI之间的DNA小片段替换为双链DNA分子4，得到的重组质粒；重组质粒5为将载体pET-32a(+)的限制性内切酶BamHI和XhoI之间的DNA小片段替换为双链DNA分子5，得到的重组质粒；重组质粒6为将载体pET-32a(+)的限制性内切酶BamHI和XhoI之间的DNA小片段替换为双链DNA分子6，得到的重组质粒；重组质粒7为将载体pET-32a(+)的限制性内切酶BamHI和XhoI之间的DNA小片段替换为双链DNA分子7，得到的重组质粒；重组质粒8为将载体pET-32a(+)的限制性内切酶BamHI和XhoI之间的DNA小片段替换为双链DNA分子8，得到的重组质粒；重组质粒9为将载体pET-32a(+)的限制性内切酶BamHI和XhoI之间的DNA小片段替换为双链DNA分子9，得到的重组质粒；重组质粒10为将载体pET-32a(+)的限制性内切酶BamHI和XhoI之间的DNA小片段替换为双链DNA分子10，得到的重组质粒；重组质粒11为将载体pET-32a(+)的限制性内切酶BamHI和XhoI之间的DNA小片段替换为双链DNA分子11，得到的重组质粒；重组质粒12为将载体pET-32a(+)的限制性内切酶BamHI和XhoI之间的DNA小片段替换为双链DNA分子12，得到的重组质粒；重组质粒13为将载体pET-32a(+)的限制性内切酶BamHI和XhoI之间的DNA小片段替换为双链DNA分子13，得到的重组质粒；重组质粒14为将载体pET-32a(+)的限制性内切酶BamHI和XhoI之间的DNA小片段替换为双链DNA分子14，得到的重组质粒；重组质粒15为将载体pET-32a(+)的限制性内切酶BamHI和XhoI之间的DNA小片段替换为双链DNA分子15，得到的重组质粒；重组质粒16为将载体pET-32a(+)的限制性内切酶BamHI和XhoI之间的DNA小片段替换为双链DNA分子16，得到的重组质粒。
重组质粒1表达蛋白1。重组质粒2表达蛋白2。重组质粒3表达蛋白3。重组质粒4表达蛋白4。重组质粒5表达蛋白5。重组质粒6表达蛋白6。重组质粒7表达蛋白7。重组质粒8表达蛋白8。重组质粒9表达蛋白9。重组质粒10表达蛋白10。重组质粒11表达蛋白11。重组质粒12表达蛋白12。重组质粒13表达蛋白13。重组质粒14表达蛋白14。重组质粒15表达蛋白15。重组质粒16表达蛋白16。
二、蛋白的表达
1、将重组质粒1导入大肠杆菌BL21(DE3)，得到重组大肠杆菌1。
2、完成步骤1后，将重组大肠杆菌1接种至TB培养基，37℃、220rpm振荡培养，得到OD600nm值为0.6-0.8的培养菌液1。
3、完成步骤2后，向培养菌液1中加入IPTG，得到培养体系；该培养体系中，IPTG的浓度为0.01mM。
4、完成步骤3后，取培养体系，16℃、220rpm振荡培养96h，得到培养菌液2。
5、完成步骤3后，取培养菌液2，4℃、8000rpm离心15min，收集上清液1。
按照上述步骤，将重组质粒1分别替换为重组质粒2、重组质粒3、重组质粒4、重组质粒5、重组质粒6、重组质粒7、重组质粒8、重组质粒9、重组质粒10、重组质粒11、重组质粒12、重组质粒13、重组质粒14、重组质粒15和重组质粒16，其他步骤均不变，依次得到上清液2—上清液16。
上清液1—上清液16中依次含有蛋白1—蛋白16。
三、酶活鉴定及产物分析
环状糊精葡糖基转移酶活力定义为：环状糊精葡糖基转移酶在40℃条件下，每分钟催化淀粉减少10％吸光度所需要的酶量为1U。
1、酶活测定
待测酶液分别为上清液1—上清液16。
(1)取试管，加入0.4mL浓度为0.25g/100mL的可溶性淀粉水溶液，40℃水浴15min；之后加入0.1mL待测酶液，混匀后，40℃水浴10min；最后加入1.5mL 0.1mol/L HCl水溶液。
(2)完成步骤(1)后，加入3mL 0.1mol/L I2液(溶剂为水)和5mL蒸馏水，混匀，检测在700nm处的吸光值，即获得实验组的吸光值b。
(3)取试管，加入0.4mL浓度为0.25g/100mL的可溶性淀粉水溶液，40℃水浴15min；之后加入1.5mL 0.1mol/L HCl水溶液，再加入0.1mL待测酶液，混匀后，40℃水浴10min。
(4)完成步骤(3)后，加入3mL 0.1mol/L I2液(溶剂为水)和5mL蒸馏水，混匀，检测在700nm处的吸光值，即获得对照组的吸光值a。
(5)按下述公式计算待测酶液的环状糊精葡糖基转移酶活力：
待测酶液的环状糊精葡糖基转移酶活力(U/mL)＝(对照组的吸光值a-实验组的吸光值b)/对照组的吸光值a×100×稀释倍数
2、产物分析
HPLC分析的参数如下：Waters600 HPLC色谱仪，Waters手动进样器，色谱柱Lichrosorb NH2(4.6mm×150mm)，Waters2414示差检测器，流动相由73体积份乙腈和27体积份水组成，流速1mL/min，柱温40℃。
(1)取不同浓度α-CD标准品、β-CD标准品和γ-CD标准品的混合溶液，进行HPLC分析。
以α-CD百分含量为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制α-CD标准曲线。α-CD的百分含量＝α-CD的浓度÷(α-CD的浓度+β-CD的浓度+γ-CD的浓度)×100％。
以β-CD百分含量为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制β-CD标准曲线。β-CD的百分含量＝β-CD的浓度÷(α-CD的含量+β-CD的浓度+γ-CD的浓度)×100％。
以γ-CD百分含量为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制γ-CD标准曲线。γ-CD的百分含量＝γ-CD的浓度÷(α-CD的含量+β-CD的浓度+γ-CD的浓度)×100％。
结果如下：
α-CD标准品的出峰时间为7.5min。α-CD标准曲线见图1，标准曲线方程为y＝55797x-24716，R2＝0.996，x代表α-CD的百分含量(g/100ml)，y代表峰面积。
β-CD标准品的出峰时间为8.6min。β-CD标准曲线见图2，标准曲线方程为y＝53669x-16163，R2＝0.993，x代表β-CD的百分含量(g/100ml)，y代表峰面积。
γ-CD标准品的出峰时间为10.0min。γ-CD标准曲线见图3，标准曲线方程为y＝48919x-20061，R2＝0.996，x代表γ-CD的百分含量(g/100ml)，y代表峰面积。
(2)取浓度为2g/100mL的可溶性淀粉水溶液，煮沸10min，自然冷却，得到处理的可溶性淀粉水溶液。
(3)完成步骤(2)后，取EP管，加入2mL处理的可溶性淀粉水溶液和待测酶液，之后用蒸馏水定容至4mL，得到反应体系。待测酶液的加入量为400U/g可溶性淀粉。
待测酶液分别为上清液1—上清液16。
(4)完成步骤(3)后，取反应体系，40℃水浴静置24h；之后煮沸10min，12000rpm离心10min，收集上清液；最后用0.45μm超滤膜过滤，获得滤液。
(5)取20μL滤液，进行HPLC分析。之后根据步骤(1)获得的α-CD标准曲线、β-CD标准曲线和γ-CD标准曲线，获得滤液中α-CD的百分含量、β-CD的百分含量和γ-CD的百分含量。
结果如下：
待测酶液为上清液1时，没有检测到α-CD、β-CD和γ-CD的生成；
待测酶液为上清液2时，滤液中α-CD的百分含量为1.95％，β-CD的百分含量为37.9％，γ-CD的百分含量为60.15％；
待测酶液为上清液3时，滤液中α-CD的百分含量为3.09％，β-CD的百分含量为42.95％，γ-CD的百分含量为53.95％；
待测酶液为上清液4时，滤液中α-CD的百分含量为12.2％，β-CD的百分含量为43.4％，γ-CD的百分含量为44.3％；
待测酶液为上清液5时，滤液中α-CD的百分含量为6.52％，β-CD的百分含量为45.2％，γ-CD的百分含量为48.3％；
待测酶液为上清液6时，滤液中α-CD的百分含量为2.2％，β-CD的百分含量为50.3％，γ-CD的百分含量为47.5％；
待测酶液为上清液7时，滤液中α-CD的百分含量为11.1％，β-CD的百分含量为18.7％，γ-CD的百分含量为70.2％；
待测酶液为上清液8时，滤液中α-CD的百分含量为25.1％，β-CD的百分含量为35.8％，γ-CD的百分含量为39.1％；
待测酶液为上清液9时，滤液中α-CD的百分含量为28.4％，β-CD的百分含量为36.7％，γ-CD的百分含量为34.9％；
待测酶液为上清液10时，滤液中α-CD的百分含量为6.7％，β-CD的百分含量为28.8％，γ-CD的百分含量为64.5％；
待测酶液为上清液11时，滤液中α-CD的百分含量为2.2％，β-CD的百分含量为23.4％，γ-CD的百分含量为75.4％；
待测酶液为上清液12时，滤液中α-CD的百分含量为4.2％，β-CD的百分含量为33.2％，γ-CD的百分含量为62.6％；
待测酶液为上清液13时，滤液中α-CD的百分含量为10.1％，β-CD的百分含量为47.2％，γ-CD的百分含量为42.7％；
待测酶液为上清液14时，滤液中α-CD的百分含量为2.7％，β-CD的百分含量为25.6％，γ-CD的百分含量为71.7％；
待测酶液为上清液15时，滤液中α-CD的百分含量为2.8％，β-CD的百分含量为42.0％，γ-CD的百分含量为55.2％；
待测酶液为上清液16时，滤液中α-CD的百分含量为2.2％，β-CD的百分含量为38.6％，γ-CD的百分含量为59.2％。
由此可见，蛋白2—蛋白16均可以将可溶性淀粉降解为α-CD、β-CD和γ-CD。
<110>中国科学院微生物研究所
<120>蛋白质CGTase作为环糊精糖基转移酶的应用
<160> 2
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 699
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<400> 1
Met Ile Arg Arg Leu Ser Phe Ser Leu Val Val Leu Phe Leu Ile Ser
1 5 10 15
Phe Leu Val Ile Val Asn Pro Glu Tyr Thr Glu Ala Asn Glu Asn Leu
20 25 30
Asp Asn Val Asn Tyr Ala Glu Glu Ile Ile Tyr Gln Ile Val Thr Asp
35 40 45
Arg Phe Tyr Asp Gly Asp Pro Thr Asn Asn Pro Glu Gly Ala Leu Phe
50 55 60
Ser Thr Gly Cys Leu Asp Leu Thr Lys Tyr Cys Gly Gly Asp Trp Gln
65 70 75 80
Gly Ile Ile Glu Lys Ile Glu Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Met Gly Ile
85 90 95
Thr Ala Ile Trp Ile Ser Pro Pro Ile Glu Asn Val Met Glu Leu His
100 105 110
Pro Gly Gly Phe Ala Ser Tyr His Gly Tyr Trp Gly Arg Asp Phe Lys
115 120 125
Arg Thr Asn Pro Ala Phe Gly Ser Leu Ala Asp Phe Ser Arg Leu Ile
130 135 140
Glu Thr Ala His Asn Tyr Asp Ile Lys Val Ile Ile Asp Phe Val Pro
145 150 155 160
Asn His Thr Ser Pro Val Asp Ile Glu Asp Gly Ala Leu Tyr Asp Asn
165 170 175
Gly Arg Leu Val Gly His Tyr Ser Asn Asp Asn Glu Asp Tyr Phe Tyr
180 185 190
Thr Asn Gly Gly Ser Asp Phe Ser Ser Tyr Glu Asp Ser Ile Tyr Arg
195 200 205
Asn Leu Tyr Asp Leu Ala Ser Leu Asn Gln Gln Asn Ser Phe Ile Asp
210 215 220
Arg Tyr Leu Lys Glu Ala Ile Gln Met Trp Leu Asp Leu Gly Ile Asp
225 230 235 240
Gly Ile Arg Val Asp Ala Val Ala His Met Pro Val Gly Trp Gln Lys
245 250 255
Asn Phe Val Ser Ser Ile Tyr Asp Tyr Asn Pro Val Phe Thr Phe Gly
260 265 270
Glu Trp Phe Thr Gly Ala Ser Gly Ser Asp Glu Tyr His Tyr Phe Ile
275 280 285
Asn Asn Ser Gly Met Ser Ala Leu Asp Phe Arg Tyr Ala Gln Val Val
290 295 300
Gln Asp Val Leu Arg Asn Asn Asp Gly Thr Met Tyr Asp Leu Glu Thr
305 310 315 320
Val Leu Arg Glu Thr Glu Ser Val Tyr Asp Lys Pro Gln Asp Gln Val
325 330 335
Thr Phe Ile Asp Asn His Asp Ile Asp Arg Phe Ser Arg Ser Gly His
340 345 350
Ser Thr Arg Ser Thr Asp Leu Gly Leu Ala Leu Leu Leu Thr Ser Arg
355 360 365
Gly Val Pro Thr Ile Tyr Tyr Gly Thr Glu Ile Tyr Met Thr Gly Asp
370 375 380
Gly Asp Pro Asp Asn Arg Lys Met Met Asn Thr Phe Asp Gln Ser Thr
385 390 395 400
Val Ala Tyr Gln Ile Ile Gln Arg Leu Ser Ser Leu Arg Gln Glu Asn
405 410 415
Arg Ala Ile Ala Tyr Gly Asp Thr Thr Glu Arg Trp Ile Asn Glu Asp
420 425 430
Val Phe Ile Tyr Glu Arg Ser Phe Asn Gly Glu Tyr Ala Leu Ile Ala
435 440 445
Val Asn Arg Asn Leu Asn Arg Ser Tyr Gln Ile Ser Ser Leu Val Thr
450 455 460
Asp Met Pro Ser Gln Leu Tyr Glu Asp Glu Leu Ser Gly Leu Leu Asp
465 470 475 480
Gly Gln Ser Ile Thr Val Ala Gln Asp Gly Ser Val Gln Pro Phe Leu
485 490 495
Leu Ala Pro Gly Glu Val Ser Val Trp Gln Tyr Ser Asn Gly Gln Asn
500 505 510
Val Ala Pro Glu Ile Gly Gln Ile Gly Pro Pro Ile Gly Lys Pro Gly
515 520 525
Asp Glu Val Arg Ile Asp Gly Ser Gly Phe Gly Asn Ser Met Gly Asn
530 535 540
Val Ser Phe Ala Gly Ser Thr Met Asn Val Leu Ser Trp Asn Asp Glu
545 550 555 560
Thr Ile Ile Ala Glu Leu Pro Val His Asn Gly Gly Lys Asn Ser Ile
565 570 575
Thr Val Thr Thr Asn Ser Gly Glu Ser Ser Asn Gly Tyr Pro Phe Glu
580 585 590
Leu Leu Thr Gly Ser Gln Thr Ser Val Arg Phe Val Val Asn Gln Ala
595 600 605
Glu Thr Ser Val Gly Glu Asn Leu Tyr Leu Val Gly Asn Val Pro Glu
610 615 620
Leu Gly Ser Trp Asp Pro Asp Lys Ala Ile Gly Pro Met Phe Asn Gln
625 630 635 640
Val Leu Tyr Ser Tyr Pro Thr Trp Tyr Tyr Asp Val Ser Val Pro Ala
645 650 655
Asn Gln Asp Ile Glu Tyr Lys Tyr Ile Met Lys Asp Gln Asn Gly Asn
660 665 670
Val Ser Trp Glu Ser Gly Gly Asn His Ile Tyr Arg Thr Pro Glu Asn
675 680 685
Ser Thr Gly Ile Val Glu Val Asn Tyr Asn Gln
690 695
<210> 2
<211> 2097
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<400> 2
atgattcgaa ggctttcttt ttcacttgtg gttttatttt tgattagctt tctagttatc 60
gttaacccag agtacacaga ggcaaatgaa aacttagaca atgttaatta tgcagaagag 120
attatttatc aaattgttac agatcgtttt tatgatggtg acccaactaa taatcctgag 180
ggagctttgt ttagtacagg ttgtctggat ttaaccaaat attgtggtgg ggactggcaa 240
gggattatcg aaaagatcga ggacgggtat ttaccggata tgggcataac ggctatttgg 300
atttcgccac caattgaaaa cgtaatggag cttcatccag gaggttttgc ttcttatcat 360
ggttattggg gcagagattt taaacgaaca aatcctgctt ttggtagttt ggcagatttt 420
tcgagattaa ttgaaacagc ccataactat gatataaaag taatcatcga ttttgttcct 480
aaccatacat ctcctgtcga tattgaggat ggagcgttat atgataatgg ccgtttagtt 540
ggtcattatt ccaatgataa tgaggattat ttttatacaa atggtggttc ggatttctcc 600
agttatgaag acagtattta tcgaaatctt tatgatttag ctagtctaaa ccagcaaaat 660
tcatttattg atcggtattt aaaagaagcg attcaaatgt ggttagattt aggaattgat 720
ggaattcgag tagatgcggt agcacatatg ccagtagggt ggcaaaagaa ttttgttagc 780
tcgatctatg attataatcc tgtctttaca tttggagaat ggtttacagg tgccagtgga 840
agtgatgagt atcattattt tattaataat agcgggatga gtgcactaga ttttcgttac 900
gcacaagtcg tccaagatgt gttaagaaat aacgatggaa cgatgtatga tttggaaaca 960
gtgttgcgag aaactgaaag cgtttacgat aaaccgcaag atcaagttac ctttatcgat 1020
aatcatgata ttgatcgttt ttctagaagt ggtcactcaa cgcgttcaac agatttaggg 1080
ttagcccttt tgttaacatc tcgaggagtc ccaacgattt attatggtac ggaaatttat 1140
atgacaggtg atggggaccc agataatcgg aaaatgatga atacatttga tcaatcgaca 1200
gttgcctatc aaatcattca acgcctttca tcactgcggc aagaaaatag ggcgattgct 1260
tatggggata cgacggaacg atggataaat gaagatgtat tcatttatga acgttcattt 1320
aatggagaat atgcacttat tgctgtgaac cgaaacttaa accgctctta tcagattagt 1380
agtttggtaa cggatatgcc ttctcaatta tatgaagatg agctgtcagg tcttttagac 1440
gggcaatcga taaccgtcgc acaagatggg tctgttcagc cctttttgtt agccccaggt 1500
gaagtaagtg tttggcaata ctcaaatggt cagaatgtag caccggaaat tggtcaaatt 1560
ggtcctccta ttgggaaacc aggagatgaa gtgaggatcg atggttcagg ttttggaaat 1620
agtatgggga atgtttcttt tgcgggttca actatgaatg tattgtcttg gaatgacgag 1680
acaattatag ccgaactacc tgtgcataat ggtggaaaaa atagtataac tgtaacgact 1740
aactcaggtg aaagcagtaa tggttatccg tttgaattat taactggttc acaaacatct 1800
gtaagatttg tcgtgaatca agccgaaacg tctgttggtg aaaatctgta cttagttggt 1860
aatgtacctg aattagggag ctgggatcct gataaagcaa ttggtcctat gtttaatcaa 1920
gttttatact catatcccac ttggtattat gatgtgagtg tacctgctaa tcaagatata 1980
gagtacaaat atattatgaa agatcaaaat ggaaatgtaa gctgggaaag tggaggcaac 2040
catatctata gaacaccaga aaattctact ggaatcgtag aagtgaatta caatcaa 2097
Claims (10)
1.蛋白质，为如下a1)或a2)：
a1)从N端至C端依次包括区段1-区段3；
区段1的氨基酸序列如SEQ ID NO：1自N端起第1至247位所示；
区段2为1个氨基酸残基；
区段3的氨基酸序列如SEQ ID NO：1自N端起第249至699位所示；
a2)在a1)所示的蛋白质的N端或/和C端连接标签得到的融合蛋白质。
2.如权利要求1所述的蛋白质，其特征在于：所述区段2中，氨基酸为脯氨酸、谷氨酸、甘氨酸、天冬酰胺、甲硫氨酸、丙氨酸、精氨酸、赖氨酸、亮氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、丝氨酸、苏氨酸、天冬氨酸或谷氨酰胺。
3.编码权利要求1或2所述蛋白质的核酸分子。
4.如权利要求3所述的核酸分子，其特征在于：所述核酸分子为c1)-c15)中的任一种：
c1)编码区或核苷酸序列是SEQ ID NO：2所示的DNA分子；
c2)编码区或核苷酸序列是DNA分子2；DNA分子2是将SEQ ID NO：2自5’末端起第742-744位核苷酸替换为CGA得到的；
c3)编码区或核苷酸序列是DNA分子3；DNA分子3是将SEQ ID NO：2自5’末端起第742-744位核苷酸替换为AAA得到的；
c4)编码区或核苷酸序列是DNA分子4；DNA分子4是将SEQ ID NO：2自5’末端起第742-744位核苷酸替换为CTT得到的；
c5)编码区或核苷酸序列是DNA分子5；DNA分子5是将SEQ ID NO：2自5’末端起第742-744位核苷酸替换为GTG得到的；
c6)编码区或核苷酸序列是DNA分子6；DNA分子6是将SEQ ID NO：2自5’末端起第742-744位核苷酸替换为ATT得到的；
c7)编码区或核苷酸序列是DNA分子7；DNA分子7是将SEQ ID NO：2自5’末端起第742-744位核苷酸替换为AAT得到的；
c8)编码区或核苷酸序列是DNA分子8；DNA分子8是将SEQ ID NO：2自5’末端起第742-744位核苷酸替换为TCA得到的；
c9)编码区或核苷酸序列是DNA分子9；DNA分子9是将SEQ ID NO：2自5’末端起第742-744位核苷酸替换为ACA得到的；
c10)编码区或核苷酸序列是DNA分子10；DNA分子10是将SEQ ID NO：2自5’末端起第742-744位核苷酸替换为GGA得到的；
c11)编码区或核苷酸序列是DNA分子11；DNA分子11是将SEQ ID NO：2自5’末端起第742-744位核苷酸替换为GAA得到的；
c12)编码区或核苷酸序列是DNA分子12；DNA分子12是将SEQ ID NO：2自5’末端起第742-744位核苷酸替换为ATG得到的；
c13)编码区或核苷酸序列是DNA分子13；DNA分子13是将SEQ ID NO：2自5’末端起第742-744位核苷酸替换为GAC得到的；
c14)编码区或核苷酸序列是DNA分子14；DNA分子14是将SEQ ID NO：2自5’末端起第742-744位核苷酸替换为CCC得到的；
c15)编码区或核苷酸序列是DNA分子15；DNA分子15是将SEQ ID NO：2自5’末端起第742-744位核苷酸替换为CAA得到的。
5.含有权利要求3或4所述核酸分子的表达盒、重组载体或重组微生物。
6.权利要求1或2所述蛋白质、或、权利要求3或4所述核酸分子的应用，为d1)-d6)中的至少一种：
d1)作为环糊精糖基转移酶的应用；
d2)制备环糊精糖基转移酶中的应用；
d3)生产环糊精中的应用；
d4)制备用于生产环糊精的产品中的应用；
d5)降解淀粉；
d6)制备用于降解淀粉的产品中的应用。
7.如权利要求6所述的应用，其特征在于：所述d1)或d2)中，环糊精糖基转移酶为α-CGTase、β-CGTase和/或γ-CGTase。
8.如权利要求6所述的应用，其特征在于：所述d3)或d4)中，环糊精为α-CD、β-CD和/或γ-CD。
9.一种生产环糊精的方法，为采用权利要求1或2所述蛋白质降解淀粉，从而获得环糊精。
10.一种制备环糊精糖基转移酶的方法，包括如下步骤：
(1)发酵培养权利要求5所述重组微生物，得到发酵液；
(2)从所述发酵液中分离环糊精糖基转移酶。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202010547407.1A CN113801860A (zh) | 2020-06-16 | 2020-06-16 | 蛋白质CGTase作为环糊精糖基转移酶的应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202010547407.1A CN113801860A (zh) | 2020-06-16 | 2020-06-16 | 蛋白质CGTase作为环糊精糖基转移酶的应用 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN113801860A true CN113801860A (zh) | 2021-12-17 |
Family
ID=78892538
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202010547407.1A Pending CN113801860A (zh) | 2020-06-16 | 2020-06-16 | 蛋白质CGTase作为环糊精糖基转移酶的应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN113801860A (zh) |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102827815A (zh) * | 2012-08-23 | 2012-12-19 | 中国科学院微生物研究所 | 一组环状糊精葡糖基转移酶及其编码基因和应用 |
| CN103232981A (zh) * | 2013-05-06 | 2013-08-07 | 中国科学院微生物研究所 | 一组环状糊精葡糖基转移酶及其编码基因和应用 |
-
2020
- 2020-06-16 CN CN202010547407.1A patent/CN113801860A/zh active Pending
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102827815A (zh) * | 2012-08-23 | 2012-12-19 | 中国科学院微生物研究所 | 一组环状糊精葡糖基转移酶及其编码基因和应用 |
| CN103232981A (zh) * | 2013-05-06 | 2013-08-07 | 中国科学院微生物研究所 | 一组环状糊精葡糖基转移酶及其编码基因和应用 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| HIRANO,K. ET AL.: "Bacillus sp. G-825-6 tpsS, cgtS genes for transposes, gammer-cyclomaltdextrin glucanotransferase, complete cds", 《GENBANK: AB201304.1》 * |
| SUSANNE MELZER ET AL.: "Stepwise error-prone PCR and DNA shuffling changed the pH activity range and product specificity of the cyclodextrin glucanotransferase from an alkaliphilic Bacillus sp.", 《FEBS OPEN BIO》 * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP7405742B2 (ja) | 遺伝子操作されたグルコシルトランスフェラーゼ | |
| CN107922958A (zh) | 用于产生线性聚α‑1，3‑葡聚糖的葡糖基转移酶氨基酸序列基序 | |
| CN106755209A (zh) | 一种酶法制备β‑烟酰胺单核苷酸的方法 | |
| AU2013323686A1 (en) | Glucosyltransferase enzymes for production of glucan polymers | |
| CN108588061B (zh) | 一种比酶活及热稳定性提高的低温碱性果胶酶突变体 | |
| KR101262705B1 (ko) | 생물중합체 생성 조절자의 사용 방법 및 조성물 | |
| CN110885809B (zh) | α-L-岩藻糖苷酶及其相关生物材料与应用 | |
| CN110777140B (zh) | 硫酸软骨素酶ac突变体及其制备方法 | |
| CN110904072B (zh) | 一种新型磷脂酶d及其制备功能性磷脂的方法 | |
| CN110684751B (zh) | 一种催化能力提高的淀粉分支酶突变体 | |
| CN110511917B (zh) | 一种脱乙酰酶及其编码基因与应用 | |
| CN111748535B (zh) | 一种丙氨酸脱氢酶突变体及其在发酵生产l-丙氨酸中的应用 | |
| CN113337495B (zh) | 一种提高唾液酸产量的方法与应用 | |
| Herbaud et al. | Escherichia coli is able to produce heterologous tetraheme cytochrome c3 when the ccm genes are co-expressed | |
| CN106754851B (zh) | TaGPI1mS543A蛋白及其编码基因和应用 | |
| CN113801860A (zh) | 蛋白质CGTase作为环糊精糖基转移酶的应用 | |
| CN114107326A (zh) | 两个麦角硫因合成蛋白质及其在麦角硫因合成中的应用 | |
| CN106754848B (zh) | 一种热稳定性提高的碱性果胶酶突变体 | |
| CN111304186A (zh) | 一种肝素c5异构酶高催化活性菌株的构建方法 | |
| CN109652396A (zh) | 一种类芽孢杆菌甲壳素酶及其制备方法和应用 | |
| CN113373135B (zh) | 一种d-阿洛酮糖3-差向异构酶的突变体及其应用 | |
| CN114457062A (zh) | 用于制备褐藻寡糖的褐藻胶裂解酶及其用途 | |
| CN113817704A (zh) | 一种有机溶剂耐受性提高的环糊精葡萄糖基转移酶及其制备方法 | |
| CN109971803B (zh) | 一种l-赤藓酮糖和赤藓糖醇生产方法 | |
| CN114540318A (zh) | 具有催化乙醇醛合成乙醇酸功能的酶及其应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20211217 |